DK170897B1 - Apparat, apparatdel og fremgangsmåde til amplificering af nukleinsyrer - Google Patents
Apparat, apparatdel og fremgangsmåde til amplificering af nukleinsyrer Download PDFInfo
- Publication number
- DK170897B1 DK170897B1 DK696388A DK696388A DK170897B1 DK 170897 B1 DK170897 B1 DK 170897B1 DK 696388 A DK696388 A DK 696388A DK 696388 A DK696388 A DK 696388A DK 170897 B1 DK170897 B1 DK 170897B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- vessel
- container
- nucleic acids
- polymerization
- polymerase
- Prior art date
Links
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 31
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 31
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 claims abstract description 24
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims abstract description 24
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 16
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 claims abstract description 14
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 claims abstract description 14
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 15
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 claims description 5
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 claims description 5
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 claims description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 abstract description 16
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 abstract description 16
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 abstract description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 abstract description 2
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 abstract description 2
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 abstract description 2
- 125000002264 triphosphate group Chemical class [H]OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O* 0.000 abstract description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 19
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012080 ambient air Substances 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J19/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
- B01J19/0046—Sequential or parallel reactions, e.g. for the synthesis of polypeptides or polynucleotides; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making molecular arrays
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L7/00—Heating or cooling apparatus; Heat insulating devices
- B01L7/52—Heating or cooling apparatus; Heat insulating devices with provision for submitting samples to a predetermined sequence of different temperatures, e.g. for treating nucleic acid samples
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
- B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
- B01J2219/00718—Type of compounds synthesised
- B01J2219/0072—Organic compounds
- B01J2219/00722—Nucleotides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
- C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
- C40B40/00—Libraries per se, e.g. arrays, mixtures
- C40B40/04—Libraries containing only organic compounds
- C40B40/06—Libraries containing nucleotides or polynucleotides, or derivatives thereof
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Amplifiers (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Glass Compositions (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Silver Salt Photography Or Processing Solution Therefor (AREA)
Description
i DK 170897 B1
Den foreliggende opfindelse angår et apparat og en fremgangsmåde til en automatiseret amplificering af nukleinsyrer under standardiserede betingelser. Opfindelsen angår tillige en del til engangsbrug til det ved fremgangsmåden 5 anvendte apparat.
Amplificering af nukleinsyrer er omtalt i beskrivelserne til USA-patenterne nr. 4.683.194, 4.683.195 og til patentansøgningerne EP 200 362, EP 229 701, EP 237 362 og US 024.604. Ved amplificering inkuberes først en reaktionsblan-10 ding, der indeholder målnukleinsyren, d.v.s. den nukleinsyre, der ønskes amplificeret, mindst to passende primere, fire forskellige deoxynukleosidtrifosfater og DNA-polymerase i en passende bufferopløsning, ved en passende temperatur for at polymerisere DNAet. Derefter denatureres den ved polyme-15 riseringen dannede dobbeltstrengede DNA ved opvarmning, og reaktionsblandingen køles til en temperatur, ved hvilken primerne er i stand til at hybridisere med mål-DNAet. Om nødvendigt justeres reaktionsblandingens temperatur til en temperatur, der er optimal for DNA-polymerasens aktivitet, 20 og DNA-polymerase tilsættes. De ovenfor beskrevne trin gentages så mange gange, som er det nødvendigt for at opnå de ønskede resultater.
Amplificering er almindeligvis blevet udført manuelt ved at overflytte reagensglas fra et sted til et andet dusin-25 vis af gange. Fremgangsmåden er langsom og omstændelig at udføre. Hvis termolabil polymerase er blevet benyttet, har det været nødevendigt at åbne og lukke rørene med mellemrum, yderligere har det været nødvendigt for at opnå en homogen reaktionsvæske at centrifugere den under afkølingstrinnet 30 kondenserede reaktionsvæske fra væggene for reagensglassene. Således har det ikke været muligt at automatisere processen. Det har været en yderligere ulempe, at reaktionsbetingelserne ikke nødvendigvis er forblevet helt de samme under gentagelserne. Dette har udgjort et problem, især hvis termosta-35 bilt enzym er blevet benyttet, da polymerase på trods af dets termostabilitet let ødelægges, hvis det holdes ved en denatureringstemperatur i for lang tid.
Patentansøgning EP 236 069 beskriver et apparat, i DK 170897 Bl 2 hvilket amplificering af nukleinsyrer udføres under compu-terkontrol ved at opvarme og afkøle reaktionsblandingen i den samme beholder. I dette apparat kan kun benyttes en ter-mostabil polymerase. I praksis er en termostabil polymerase 5 kun aktiv i varigheden af nogle få reaktionscykler. Det er vanskeligt at opvarme og afkøle en reaktionsblanding med præcision og tilstrækkelig hastighed, da ud over temperaturen af reaktoren og reaktionsblandingen også temperaturen af det omgivende apparat må justeres. Varmekapaciteten af det 10 omgivende apparat er for sin del uundgåeligt anseelig i forhold til varmekapaciteten af det lille volumen (cirka 100 mikroliter) reaktionsblanding. Af denne grund sker det let, at reaktionsblandingen vil være for lang tid under ufordelagtige betingelser for amplificeringen. Problemer opstår 15 især i forbindelse med kontrol af denatureringstemperatur og -tid. Hvis temperaturen er for lav, vil denaturering ikke skride frem på den ønskede måde med henblik på amplificering. På den anden side vil polymerasen, hvis den bibeholdes på denatureringstemperaturen i for lang tid, blive ødelagt. 20 Formålet med opfindelsen er at tilvejebringe et appa rat og en fremgangsmåde, der eliminerer ovennævnte ulemper.
Apparatet til amplificering af nukleinsyrer ifølge opfindelsen er særegent ved at det indeholder et eller flere beholderpar (1, 2) indbyrdes forbundne med en eller 25 flere rørledninger (3), hvilke beholderpar består af en polymerisationsbeholder (1) til polymerisationsfasen og af en denatureringsbeholder (2) til denatureringsfasen, såvel som en termoregulator (11), som regulerer temperaturen af polymerisationsbeholderen eller -beholderne (1), 30 ved hjælp af hvilken man kan holde polymerisationsbeholderen eller -beholderne ved optimal temperatur for polymerisering af nukleinsyrer, og en termoregulator (12), som regulerer temperaturen af denatureringsbeholderen eller -beholderne (2) til optimal temperatur for 35 denaturering af nukleinsyrer, såvel som et væskeoverførselssystem, ved hjælp af hvilket det er muligt at overføre væske fra en beholder (1, 2) til den anden ad en DK 170897 B1 3 eller flere rørledninger.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til amplificering af nukleinsyrer under anvendelse af det ovenfor angivne apparat er særegen ved at følgende trin udføres: 5 a) en reaktionsblanding indeholdende de nødvendige reagenser i polymeriseringsreaktionen og en enkeltstrenget målnukleinsyre inkuberes b) enhver dobbeltstrenget nukleinsyre tilstede i reaktionsblandingen denatureres ved opvarmning 10 c) reaktionsblandingen afkøles d) DNA-polymerase tilsættes om nødvendigt e) den samme cyklus gentages et i det givne tilfælde passende antal gange, idet trinnene a) og b) udføres i hver sin beholder, hvis temperaturer vedligeholdes til 15 stadighed på passende niveauer for de givne trin.
Ved at anvende apparatet ifølge opfindelsen, er det muligt fuldautomatisk, uden særlige trin, der kræver medvirken af en operatør, at udføre amplificering af nukleinsyrer i en eller flere prøver samtidigt under standardiserede betingel-20 ser. I apparatet ifølge opfindelsen kan den korrekte denatureringstemperatur og -tid justeres med tilstrækkelig præcision og hastighed. Fremgangsmåden og apparatet ifølge opfindelsen kan anvendes til amplificering af nukleinsyrer uanset om den anvendte polymerase er termostabil eller ej.
25 Fremgangsmåden og apparatet ifølge opfindelsen skal i det følgende beskrives nærmere under henvisning til tegningen, på hvilken:
Fig. 1 illustrerer polymeriseringstrinnet og det overordnede princip af apparatet ifølge opfindelsen, 30 Fig. 2 illustrerer trinnet, hvori overførslen af væ sken til den beholder, hvori denatureringen af DNA foregår, finder sted,
Fig. 3 illustrerer trinnet, hvor DNA denatureres,
Fig. 4 illustrerer overførslen af væske tilbage til 35 beholderen, hvori polymeriseringsreaktionen foregår.
Apparatdelen til engangsbrug, hvilken del er en genstand for opfindelsen, inkluderer ud over til beholderparret og ledninger, der forbinder dem, gasledninger, der leder til DK 170897 B1 4 beholderne, hvilke gasledninger, der benyttes i den foretrukne udformning af apparatet ifølge opfindelsen, er beskrevet mere detaljeret i det følgende.
Fig. 1 illustrerer en foretrukken udførelsesform, i 5 hvilken reaktionsblandingen er i beholderen 1, hvori polymeriseringsreaktionen foregår. En ledning 3 leder fra beholder 1 til beholder 2. Ledningen 3 er med fordel et teflonrør med en indre diameter på 0,3-0,5 mm. I forbindelse med ledningen 3 kan der være en særskilt varmeveksler 4. Varmeveksleren 4 10 kan også erstattes ved simpelthen at øge længden af ledningen. Beholderne er fuldstændigt lufttætte. Enden af ledningen 3 bør i hver beholder nå et punkt tæt ved beholderens bund for at i det væsentlige hele væskevolumenet kan overføres gennem ledningen til den anden beholder. Af denne grund 15 vil det være en fordel at give beholderbunden en nedad konvergerende form, således at væsken strømmer mod den konvergerende fordybning. Det er selvfølgelig fordelagtigt at placere enden af ledningen 3 i denne fordybning. Der er også gasledninger 5, 6, der leder til hver af beholderne 1, 2.
20 Disse gasledninger er forbundne til et ventilsystem, der er udgøres af mikroprocessorstyrede ventiler, f.eks. magnetiske trevejsventiler 7 og 8. Det er muligt, når det ønskes, at forbinde gasstrømmen til en af beholderne, på hvilken ventilen til gasledningen, der leder til den anden beholder, må 25 inaktiveres, således at overskydende gas kan strømme ud i den omgivende luft, og strømningen af væske fra den ene beholder til den anden muliggøres. Eksempler på anvendelige gasser er inerte gasser, f.eks. nitrogen og argon. Gennem en doseringsindretning 13 og et rør 9 er det muligt om nødven-30 digt at tilsætte polymerase eller andre reagenser i beholder 1. Hvis flere parallelle prøver amplificeres, kan lignende beholderpar udgjort af beholdere 1 og 2 forbindes via gasledninger 5 og 6 til gasfordelere 10, som styres af ventiler 7 og 8. I fig. 1 er polymeriseringsreaktionen i fremskriden, 35 og de magnetiske ventiler 7 og 8 er inaktiverede, d.v.s. åbne til omgivende luft. Ved hjælp af en termoregulator (11) holdes beholder 1 på en temperatur optimal for polymerise-ringen.
DK 170897 B1 5 I fig. 2 overføres reaktionsblandingen efter polymeriseringsreaktionen gennem rør 3 fra beholder 1 til beholder 2 ved hjælp af gastrykket, der kommer ind i beholder 1 gennem ledningen 5. Ventilen 7 er således aktiveret og tillader 5 gas fra ledningen 14 at strømme ind i beholderen 1. Ventilen 8 er for sin del inaktiveret og tillader overskydende gas at strømme ud. Et passende gastryk er 0,1-1,0 atm.
I fig. 3 foregår denaturering i beholder 2, hvis temperatur er blevet justeret ved hjælp af en varmeveksler 12. 10 Begge ventiler 7 og 8 er inaktiverede, og overførsel af væske fra en beholder til den anden er således ikke mulig.
I fig. 4 overføres reaktionsblandingen fra beholder 2 tilbage til beholder 1. Ventilen 8 er aktiveret og tillader gas at strømme ind i beholderen 2. Under trykket af gas 25 strømmer væske ind i beholderen 1. Overførslen udføres med fordel med en sådan hastighed, at der er tilstrækkelig tid til at hybridiseringsreaktionen kan foregå i varmeveksleren. Ventilen 7 er inaktiveret, således at overskydende gas kan strømme ud for at gøre plads til væsken, der strømmer ind i 20 beholder 1. Om nødvendigt tilsættes polymerase gennem røret 9.
De i fig. 1-4 beskrevne trin kan gentages flere, selv tifold af gange under mikroprocessorkontrol, og således foregår amplificeringen automatisk fra begyndelse til ende.
25 Opfindelsen er ikke på nogen måde begrænset til de ovenfor og i fig. 1-4 beskrevne foretrukne udformninger; mange variationer er mulige indenfor opfindelsens rammer. I det ovenfor beskrevne apparat er det muligt for eksempel at benytte vakuum i stedet for forhøjet tryk.
30 Et amplificeringsapparat, i hvilket overførslen af væske sker ved hjælp af forhøjet tryk eller vakuum, gør det muligt bekvemt at behandle adskillige målnukleinsyrerblan-dinger samtidigt, eftersom en og samme ventil kan anvendes til at kontrollere overførslen af reaktionblanding fra en 35 beholder til den anden i samtlige beholderpar. Reaktionsblandingen kan også overføres fra en beholder til den anden ved hjælp af en væskepumpe, i hvilket tilfælde gasledningerne 5 og 6 ikke er nødvendige. I sådant et tilfælde er det DK 170897 B1 6 muligt at anvende en pumpe med reversibel strømningsretning, i hvilket tilfælde der kun fordres en ledning 3 mellem beholderne 1 og 2. Den ovennævnte amplificering af nukleinsyrer kan også udføres på komplementært DNA fremskaffet fra 5 ribonukleinsyre ved at anvende revers transkriptase.
Serien af amplificeringsreaktionerne startes bedst med trinnet ifølge fig. 1, d.v.s. at de for amplificeringen nødvendige reagenser og enkeltstrenget målnukleinsyre inkuberes ved optimal temperatur i optimal tid for at udføre po-10 lymerasereaktionen. Hvis målnukleinsyren oprindeligt er dobbeltstrenget, gøres den enkeltstrenget inden det første trin. Det er naturligvis muligt at anvende amplificeringsap-paratet til denatureringen af målnukleinsyren, i hvilket tilfælde hele reaktionsserien states med det i fig. 3 be-15 skrevne trin. I dette tilfælde er det almindeligvis en fordel at anvende en længere denatureringsperiode end under selve amplificeringen.
De optimale temperaturer og tider, der skal anvendes i reaktionsserien, bestemmes på grundlag af målnukleinsyren 20 såvel som af den anvendte primer og polymerase. En ekspert på området vil selv være i stand til indstille apparatet og vælge passende betingelser til de amplificeringsreaktioner, der på et givent tidspunkt ønskes udført.
Et antal forskellige procedurer er mulige med henblik 25 på tilsætning af polymerasen. Enzymet kan indføres enten kontinuerligt eller intermitterende i beholderen, hvori polymeriseringsreaktionen finder sted. Hvis enzymet er termo-stabilt, tilføjes det til reaktionsblandingen ved begyndelsen af reaktionsserien og tilsættes derefter kun, når det 30 behøves. Intet enzym behøves tilsat, hvis det er blevet indført i reaktionsbeholderen enten i immobiliseret form eller i en passende langsomt frigørende doseringsform. Hvis enzymet er immobiliseret, fjernes det selvfølgelig ikke fra reaktionsbeholderen. Hvis en langsomt frigørende doseringsform 35 anvendes, er det vigtigt af frigørelsen af polymerase er således reguleret, at dens koncentration forbliver passende for varigheden af så mange reaktionscykler som påkrævet.
7 DK 170897 B1
Varmevekslerens temperatur bestemmes på grundlag af den anvendte primers længde og nukleotidsekvens. Hvis prime-rens hybridiseringstemperatur er væsentlig forskellig fra polymeriseringsenzymets optimale temperatur, reguleres reak-5 tionsblandingens temperaturprofil med fordel således, at primeren har tid til at hybridisere så tidligt som i varmeveksleren. Polymeraseenzymets termolabilitet kan man også tage hensyn til ved reguleringen af varmeveksleren, idet man sikrer sig, at reaktionsblandingen er tilstrækkelig afkølet, 10 inden den kommer i kontakt med enzymet. Tiden, hvori opløsningen, der indeholder den denaturede nukleinsyre, bibeholdes i varmeveksleren, kan reguleres ved hjælp af rørlængden og det i denatureringsbeholderen indførte gastryk eller respektivt kan vakuumet eller væskepumpens effektivitet regu-15 leres.
20 25 30 35
Claims (18)
1. Apparat til amplificering af nukleinsyrer, 5 kendetegnet ved, at det indeholder et eller flere beholderpar (1, 2) indbyrdes forbundne med en eller flere rørledninger (3), hvilke beholderpar består af en polymerisationsbeholder (1) til polymerisationsfasen og af en denatureringsbeholder (2) til denatureringsfasen, såvel som en termoregulator (11), som regulerer temperaturen af polymerisationsbeholderen eller -beholderne (1), ved hjælp af hvilken man kan holde polymerisationsbeholderen eller -beholderne ved optimal temperatur for polymerisering af nukleinsyrer, og en termoregulator (12) , som regulerer temperaturen af denatureringsbeholderen eller -beholderne (2) til optimal temperatur for denaturering af nukleinsyrer, såvel som et væskeoverførselssystem, ved hjælp af hvilket det er muligt at overføre væske fra en beholder (l, 2) til den anden ad en eller flere rørledninger (3) . « v
2. Apparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at væskeoverførselssystemet inkluderer gasledninger (5, 6), der fører til beholderne (1, 2. i beholderparret eller beholderparrene, og ventiler (7, 25 8), som regulerer gasstrømmen.
3. Apparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at ledningen (3) løber via en særskilt varmeveksler (4).
4. Apparat ifølge krav 1, 30 kendetegnet ved, at det yderligere indeholder en doseringsindretning og et rør (9) til tilsætning af reagenser og/eller prøve.
5. Apparat ifølge krav 2, kendetegnet ved, at betjeningen af ventilerne (7, 35 8) er mikroprocessorstyret.
6. Apparat ifølge krav 2, kendetegnet ved, at gasledningerne (5, 6) er for- DK 170897 B1 9 bundet til gasfordelere (10), som er kontrolleret af ventiler (7, 8).
7. Apparat ifølge krav 1, 5 kendetegnet ved, at ledningen, der indbyrdes forbinder beholderne (1, 2) er ført ned til bunden af beholderne.
8. Apparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at bunden af hver af beholderne 1Q (1, 2) konvergerer nedad.
9. Apparat ifølge krav 4, kendetegnet ved, at reagensdoseringsindretningen arbejder kontinuerligt.
10. Apparat ifølge krav 4, 15 kendetegnet ved, at reagensdoseringsindretningen arbejder intermitterende.
11. Del af et apparat ifølge krav 1 og 2, bestående af et beholderpar (1, 2) sammenføjet ved hjælp af en rørledning (3) samt til beholderne (1, 2) ledende gasledninger 20 (5, 6), kendetegnet ved, at apparatdelen er tiltænkt til engangsbrug.
12. Fremgangsmåde til amplificering af nukleinsyrer under anvendelse af apparatet ifølge krav 1, kendetegnet ved, at de følgende trin udføres: 25 a) en reaktionsblanding indeholdende de nødvendige reagenser i polymeriseringsreaktionen og en enkeltstrenget målnukleinsyre inkuberes b) enhver dobbeltstrenget nukleinsyre tilstede i ^ reaktionsblandingen denatureres ved opvarmning c) reaktionsblandingen afkøles d) DNA-polymerase tilsættes om nødvendigt e) den samme cyklus gentages et i det givne tilfælde passende antal gange, idet trinnene a) og b) udføres i hver sin beholder (1, 2), hvis temperaturer vedligeholdes til stadighed på passende niveauer for de givne trin. —
13. Fremgangsmåde ifølge krav 12, kendetegnet ved, at den denaturerede nukleinsyre DK 170897 B1 10 afkøles, inden den overføres til beholderen, hvori polymeri-seringen finder sted.
14. Fremgangsmåde ifølge krav 12, kendetegnet ved, at overførslen af reaktionsvæske 5 fra en beholder til den anden udføres ved anvendelse af gastryk.
15. Fremgangsmåde ifølge krav 12, kendetegnet ved, at polymerasen tilsættes kontinuerligt . 10
16- Fremgangsmåde ifølge krav 12, kendetegnet ved, at polymerasen tilsættes intermitterende .
17· Fremgangsmåde ifølge krav 12, kendetegnet ved, at polymerasen er i immobilise-15 ret form i reaktionsbeholderen.
18. Fremgangsmåde ifølge krav 12, kendetegnet ved, at polymerasen er i en langsomt frigørende doseringsform i reaktionsbeholderen.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI875696A FI79342C (fi) | 1987-12-23 | 1987-12-23 | Apparat, del av en apparat och foerfarande foer maongfaldigande av nukleinsyror. |
| FI875696 | 1987-12-23 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK696388D0 DK696388D0 (da) | 1988-12-15 |
| DK696388A DK696388A (da) | 1989-06-24 |
| DK170897B1 true DK170897B1 (da) | 1996-03-04 |
Family
ID=8525619
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK696388A DK170897B1 (da) | 1987-12-23 | 1988-12-15 | Apparat, apparatdel og fremgangsmåde til amplificering af nukleinsyrer |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5133940A (da) |
| EP (1) | EP0325763B1 (da) |
| JP (1) | JP2685260B2 (da) |
| AT (1) | ATE77838T1 (da) |
| AU (1) | AU610660B2 (da) |
| CA (1) | CA1307219C (da) |
| DE (1) | DE3872506T2 (da) |
| DK (1) | DK170897B1 (da) |
| ES (1) | ES2033407T3 (da) |
| FI (1) | FI79342C (da) |
| HU (1) | HU204080B (da) |
| IE (1) | IE63085B1 (da) |
| NO (1) | NO177231C (da) |
| ZA (1) | ZA889494B (da) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5333675C1 (en) * | 1986-02-25 | 2001-05-01 | Perkin Elmer Corp | Apparatus and method for performing automated amplification of nucleic acid sequences and assays using heating and cooling steps |
| US5656493A (en) * | 1985-03-28 | 1997-08-12 | The Perkin-Elmer Corporation | System for automated performance of the polymerase chain reaction |
| US5188963A (en) * | 1989-11-17 | 1993-02-23 | Gene Tec Corporation | Device for processing biological specimens for analysis of nucleic acids |
| GB8917963D0 (en) * | 1989-08-05 | 1989-09-20 | Scras | Apparatus for repeated automatic execution of a thermal cycle for treatment of biological samples |
| NL9000481A (nl) * | 1990-02-28 | 1991-09-16 | Kreatech Biotech Bv | Inrichting voor het automatisch uitvoeren van een biotechnologisch proces bij verschillende gewenste temperaturen. |
| RU2017821C1 (ru) * | 1990-10-10 | 1994-08-15 | Анатолий Михайлович Онищенко | Способ амплификации днк и устройство для его осуществления |
| KR100236506B1 (ko) * | 1990-11-29 | 2000-01-15 | 퍼킨-엘머시터스인스트루먼츠 | 폴리머라제 연쇄 반응 수행 장치 |
| US5525300A (en) * | 1993-10-20 | 1996-06-11 | Stratagene | Thermal cycler including a temperature gradient block |
| US5466603A (en) * | 1994-02-15 | 1995-11-14 | Meehan; Brian W. | Temperature regulated hybridization chamber |
| DE4409436A1 (de) * | 1994-03-19 | 1995-09-21 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur Bearbeitung von Nukleinsäuren |
| DE4412286A1 (de) * | 1994-04-09 | 1995-10-12 | Boehringer Mannheim Gmbh | System zur kontaminationsfreien Bearbeitung von Reaktionsabläufen |
| DE4420732A1 (de) * | 1994-06-15 | 1995-12-21 | Boehringer Mannheim Gmbh | Vorrichtung zur Behandlung von Nukleinsäuren aus einer Probe |
| AUPO931797A0 (en) * | 1997-09-22 | 1997-10-09 | Diatech Pty Ltd | Apparatus for amplification and determination of nucleic acids |
| US5912129A (en) * | 1998-03-05 | 1999-06-15 | Vinayagamoorthy; Thuraiayah | Multi-zone polymerase/ligase chain reaction |
| DE10050943B4 (de) * | 2000-10-10 | 2005-08-25 | Epigenomics Ag | Vorrichtung zur Hybridisierung von Proben an Arrays biologischer Stoffe |
| CA2754884C (en) | 2007-06-21 | 2013-04-30 | Gen-Probe Incorporated | Methods of concentrating an analyte |
| CN118638623B (zh) * | 2024-06-14 | 2025-07-22 | 苏州欧利生物医药科技有限公司 | 一种核酸扩增反应装置 |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4171427A (en) * | 1975-05-16 | 1979-10-16 | Hoechst Aktiengesellschaft | Process for continuously removing monomers from an aqueous dispersion of a polymer |
| US4478814A (en) * | 1982-09-30 | 1984-10-23 | United Technologies Corporation | Gas transporting system |
| EP0134622A3 (en) * | 1983-05-25 | 1986-10-08 | Georgetown University | Apparatus and method for separating polynucleotides and detecting specific polynucleotide sequences |
| US4683194A (en) * | 1984-05-29 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Method for detection of polymorphic restriction sites and nucleic acid sequences |
| US4683195A (en) * | 1986-01-30 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences |
| US4683202A (en) * | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
| AU606043B2 (en) * | 1985-03-28 | 1991-01-31 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Detection of viruses by amplification and hybridization |
| ES8706823A1 (es) * | 1985-03-28 | 1987-06-16 | Cetus Corp | Un procedimiento para detectar la presencia o ausencia de al menos una secuencia especifica de acidos nucleicos en una muestra |
| US4863849A (en) * | 1985-07-18 | 1989-09-05 | New York Medical College | Automatable process for sequencing nucleotide |
| CA1339653C (en) * | 1986-02-25 | 1998-02-03 | Larry J. Johnson | Appartus and method for performing automated amplification of nucleic acid sequences and assays using heating and cooling steps |
| CA1284931C (en) * | 1986-03-13 | 1991-06-18 | Henry A. Erlich | Process for detecting specific nucleotide variations and genetic polymorphisms present in nucleic acids |
| US4889812A (en) * | 1986-05-12 | 1989-12-26 | C. D. Medical, Inc. | Bioreactor apparatus |
| US4753787A (en) * | 1986-07-18 | 1988-06-28 | Pieter Krijgsman | Method and structure for forming a reaction product |
-
1987
- 1987-12-23 FI FI875696A patent/FI79342C/fi not_active IP Right Cessation
-
1988
- 1988-11-25 AU AU25951/88A patent/AU610660B2/en not_active Ceased
- 1988-12-15 DK DK696388A patent/DK170897B1/da not_active IP Right Cessation
- 1988-12-16 ES ES198888121108T patent/ES2033407T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-12-16 DE DE8888121108T patent/DE3872506T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1988-12-16 EP EP88121108A patent/EP0325763B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-12-16 US US07/285,804 patent/US5133940A/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-12-16 AT AT88121108T patent/ATE77838T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-12-20 ZA ZA889494A patent/ZA889494B/xx unknown
- 1988-12-21 NO NO885685A patent/NO177231C/no unknown
- 1988-12-21 IE IE381788A patent/IE63085B1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-12-22 HU HU886580A patent/HU204080B/hu not_active IP Right Cessation
- 1988-12-22 CA CA000586737A patent/CA1307219C/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-12-23 JP JP63327516A patent/JP2685260B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5133940A (en) | 1992-07-28 |
| NO885685L (no) | 1989-06-26 |
| NO177231B (no) | 1995-05-02 |
| FI79342B (fi) | 1989-08-31 |
| CA1307219C (en) | 1992-09-08 |
| JPH01197498A (ja) | 1989-08-09 |
| ZA889494B (en) | 1989-10-25 |
| HU204080B (en) | 1991-11-28 |
| FI875696L (fi) | 1989-06-24 |
| HUT50208A (en) | 1989-12-28 |
| IE883817L (en) | 1989-06-23 |
| EP0325763A1 (en) | 1989-08-02 |
| NO177231C (no) | 1995-08-09 |
| EP0325763B1 (en) | 1992-07-01 |
| NO885685D0 (no) | 1988-12-21 |
| ATE77838T1 (de) | 1992-07-15 |
| IE63085B1 (en) | 1995-03-22 |
| DE3872506T2 (de) | 1993-02-11 |
| DK696388D0 (da) | 1988-12-15 |
| DK696388A (da) | 1989-06-24 |
| AU610660B2 (en) | 1991-05-23 |
| JP2685260B2 (ja) | 1997-12-03 |
| ES2033407T3 (es) | 1993-03-16 |
| AU2595188A (en) | 1989-07-06 |
| FI79342C (fi) | 1989-12-11 |
| DE3872506D1 (de) | 1992-08-06 |
| FI875696A0 (fi) | 1987-12-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK170897B1 (da) | Apparat, apparatdel og fremgangsmåde til amplificering af nukleinsyrer | |
| JP7542834B2 (ja) | 核酸増幅装置、核酸増幅方法及び核酸増幅用チップ | |
| US6214555B1 (en) | Method compositions and kit for detection | |
| JP2613877B2 (ja) | 少なくとも１つの核酸配列を増幅する方法及び装置 | |
| US5888736A (en) | Method, compositions and kit for detection and identification of microorganisms | |
| EP0896632A1 (en) | Method, compositions and kit for detection and identification of microorganisms | |
| JP2013505010A (ja) | 簡易核酸増幅装置及び簡易核酸増幅装置の使用方法 | |
| JP2003024063A (ja) | Ｄｎａの連続増幅方法とその装置 | |
| JP5178149B2 (ja) | 標的核酸のリアルタイムｐｃｒ方法及びその装置 | |
| WO1994021780A1 (en) | Apparatus for the quantitative determination of particulate analytes | |
| WO1999015622A1 (en) | Improved thermal cycling apparatus and method | |
| TWI868862B (zh) | 自動化分子操作系統 | |
| EP1329505A1 (en) | Method of gene amplification |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| B1 | Patent granted (law 1993) | ||
| PUP | Patent expired |