DK175458B1

DK175458B1 - Antibiotikum CC 1065-analoge

Info

Publication number: DK175458B1
Application number: DK41791A
Authority: DK
Inventors: Robert C Kelly; Paul A Aristoff
Original assignee: Upjohn Co
Priority date: 1988-09-12
Filing date: 1991-03-08
Publication date: 2004-11-01
Also published as: JP3380237B2; LV12806B; CA1340215C; DK41791A; WO1990002746A1; DE68929275D1; DK41791D0; KR900701801A; ATE198335T1; TW217383B; NO910958L; KR0137959B1; DE68929275T2; FI103668B; AU4192289A; JPH04500664A; GR3035589T3; LV12806A; US5541339A; NO910958D0

Description

I DK 175458 B1

Den foreliggende opfindelse angår antibiotikum CC I

B 1065-analoge som angivet i krav 1, især sådanne forbindelser I

B som angivet i krav 2-10. I

B Antibiotiket CC-1065, (7bR,8aS)-7-[[1,6-dihydro-4-

B 5 hydroxy-5-methoxy-7-[ (4,5, 8,8a-tetrahydro-7-methyl-4-oxocyc- I

B lopropa [c] pyrrolo [3,2-e] indol-2 (IH) -yl) carbonyl]benzo[1,2- I

B b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yl]carbonyl] -1,6-dihydro-4-hydroxy- I

B 5-methoxy-benzo[1,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-carboxamid, er I

B beskrevet i US patentskrift nr. 4.169.888 sammen med en I

B 10 fremgangsmåde til fremstilling af antibiotiket CC-1065 ved I

B aerobe dyrkningsmetoder og udvinding af antibiotiket CC- I

B 1065 derved. I

B I The Journal of Antibiotics, 1985, 38, 746, angiver I

B D.G. Martin et al, at eddikesyre bindes over spirocyclo- I

B 15 propylcyclohexadienylsystemet {SCPCH} for CC-1065 til frem- I

B stilling af det phenoliske eddikesyreprodukt (AAP), 7-[[7- I

[ [1-[ (acetyloxy) methyl]-1,6-dihydro-5-hydroxy-8-methylben- I

I zo [ 1,2-b: 4,3-b'] dipyrrol-3 (2H)-yl] carbonyl]-1,6-dihydro-4- I

I hydroxy-5-methoxybenzo[1,2-b:4,3-b1]-dipyrrol-3(2H)-yl]car- I

I 20 bonyl]-1,6-dihydro-4-hydroxy-5-methoxy-benzo[l,2-b:4,3-b']di- I

I pyrrol-3(2H)-carboxamid. AAP blev afprøvet in vitro og in I

I vivo og fundet mindre effektivt end CC-1065 med en faktor I

på 10^ til 104 afhængigt af det særlige prøvesystem og var I

derfor tilbøjelig til af aflede opmærksomheden fra additions- I

I 25 forbindelser af SCPCH-systemet som anvendelige antitumor- I

I midler eller som prolægemidler for CC-1065-analoge. I

I I J. Am. Chem. Soc., 103, nr. 18, 1981, er der af I

I W. Wierenga publiceret en "Synthesis of the Left-Hand Segment I

I of the Antitumor Agent CC-1065". I

I 30 EP-ansøgning 0.154.445 (offentliggjort 11.09.85) I

I omhandler forskellige analoge af antibiotiket CC-1065, her- I

I under forbindelser med formlen EP-I og EP-II (jfr. det almene I

I formelskema vedr. EP 0.154.445), hvori R]_ i formel EP-II I

I betyder CH3-, -CH2Ph, CH=CHCH2-, -CH2SCH3, -CH2OCH3, I 35 -CH2OCH2CH2OCH3, -CH2CCl3, -CH2CH2Si(R2)3 eller H, hvori Ph

I er phenyl, R betyder alkyl(C1-C5), phenyl eller H, R21 bety- I

DK 175458 B1 I

2 I

der C^-Cg-alkyl, phenyl eller hydrogen og har ikke nødvendig- I

vis samme betydning som R i én forbindelse, R3 betyder alkyl- I

{C2-C5) , phenyl eller H, og X er Cl, Br, I eller OSO2R40* I

hvori R4q betyder -alkyl, phenyl, tolyl, bromphenyl, I

5 nitrophenyl eller trifluormethyl. De O-beskyttede forbindel- I

ser med formlen EP-II er kemisk stabile og kan kun fjernes I

under særlige kemiske betingelser. Når forbindelserne med I

formlen EP-11 imidlertid er 0-af beskyttede, kan de cycliseres I

til opnåelse af forbindelserne med formlen EP-X. I

10 EP-ansøgning 0.154.445 omhandler også CPI-dimere, I

der er forbundet med -CO- (CH2)ni-CO-, hvori ni er 1-12, og I

CPI-dimere, der er forbundet med tetheren, -C(O) - (-R^-) - I

C (0)-X7-(-CH2CH2-X7)n4-C(0) - (-R11-)-C{0)-, hvori R1X = I

CH2CH2, CH=CH, og X7 = O, NH, og n4 « 1-4, og HCl- og Mel- I

15 salte for X7 = NH. I

Yderligere dimere af CPI-prolægemidler, der er for- I

bundet med -CO-(CH2)n^-C0-, hvori ni er 1-12, og CPI-dimere, I

der er forbundet med tetheren -C(O)-(-Rjj-)-C(0)-X7-(-CH2CH- I

X7)n4-C(0)-(-Rlr)-C{0)hvori R1X - CH2CH2, CH=CH, og 20 X7 * O, NH, og n4 = 1-4, og HCl- og Mel-salte for X7 = NH, I

er omhandlet i US-patentansøgning nr. 944.633, indleveret I

I 19. december 1986, nu opgivet, og PCT/US-ansøgning 87/03227, I indleveret 11. december 1987, offentliggjort 14. juli 1988.

Med den foreliggende opfindelse tilvejebringes der 25 et antal hidtil ukendte, syntetisk opnåede forbindelser med I formlen I (defineret i det følgende), der kan anvendes som UV-lysabsorberingsstoffer eller som kemiske mellemprodukter.

Repræsentative forbindelser med formlen I har også vist sig at være nytttige i forbindelse med antitumoraktivitet ved 30 standarddyreforsøg i laboratorier. Forbindelserne ifølge opfindelsen opnås ved kemiske fremgangsmåder, der er vist i skema 1-6 og forklaret detaljeret i eksemplerne.

Med den foreliggende opfindelse tilvejebringes der

således hidtil ukendte forbindelser med den almene formel I

CPIi - R5 - T - R'5 - CPI2 I

DK 175458 B1 Η

i hvilken CPI^ og CPI2, der er ens eller forskellige, betyder formel A eller B

I ' & I 10

I

i hvilke W betyder Ci-Cg-alkyl, phenyl eller hydrogen, 20 X betyder azido, et halogenatom, cyanat, thiocyanat, isocyanat, thioisocyanat, phosphatdiester (-PO(OR)2), phos- phonyl (-0-P02R), thiophosphonyl (-O-PSOR), sulfinyl (-O-SOR) I eller sulfonyl (-0-S02R), I Y betyder hydrogen, -C(0)R, -C(S)R, -C(0)0Ri, 25 -S(O)2^1, -C(0)NR2R3, -C(S)NR2R3 eller -C(O)NHS02R4, Z betyder C1-C5-alkyl, phenyl eller hydrogén, I hvor R betyder C1-C2o-alkyl, C2~Cg_alkenyl, C2-Cg- alkynyl, phenyl, eventuelt substitueret med 1, 2 eller 3 Ci-C4-alkylgrupper, Ci-C3-alkoxy, halogen, Ci-C3-alkylthio, 30 trifluormethyl, C2-Cg-dialkylamino eller nitro, naphthyl, eventuelt substitueret med 1 eller 2 Ci-C4-alkylgrupper, Ci-C3-alk°xy, halogen, trifluormethyl, C2-Cg-dialkylamino,

Ci-C3-alkylthio eller nitro,

Ri betyder Ci-C2g-alkyl eller phenyl, eventuelt sub-35 stitueret med 1, 2 eller 3 Ci-C4-alkylgrupper, C1-C3-alkoxy, halogen, Ci-C3-alkylthio, trifluormethyl, C2-Cg-dialkylamino

DK 175458 B1 I

4 I

eller nitro, J I

R2 og R3, der er ens eller forskellige, betyder hydro- I

gen, C1-C2o_alkyl eller phenyl, eventuelt substitueret med I

1, 2 eller 3 Ci~C4-alkylgrupper, C1-C3~alkoxy, halogen, I

5 C1-C3-alkylthio, trifluormethyl, C2-Cg-dialkylanu.n0 eller

nitro, med det forbehold, at R2 og R3 ikke begge kan betyde I

phenyl eller substitueret phenyl, I

R4 betyder C^-C^g-alkyl, phenyl, eventuelt substitu- I

eret med 1, 2 eller 3 C1-C4-alkylgrupper, Ci-C3~alkoxy, halo- I

10 gen, C1-C3-alkylthio, trifluormethyl, C2-Cg-dialkylamino I

eller nitro, naphthyl, eventuelt substitueret med 1 eller 2 I

Οχ-C4-alkylgrupper, C^Cg-alkoxy, halogen, trifluormethyl, I

C2-Cg-dialkylamino, Ci-C3~alkylthio eller nitro, I

hvor R5 og R'g, som er ens eller forskellige, betyder 15 en direkte binding eller en carbonylacylgruppe fra gruppen bestående af (ii> 11 — o N—' 20 i hvilken Xx betyder H, CH3, OH, 0CH3, N02, NH2, NHNHC(0)CH3, NHC(O)CgHg eller halogen, i hvilken X3 betyder H, OH eller OCH3, 30 0 M ^ I \ (viii) I p:8 I 35 I i hvilken Rg betyder H, CH3 eller C2H5, I DK 175458 B1

fTt \__-OH

I w _ II K \ 5 OH OCH3 I R' I /===/ I 10 I 0 H XOCH3 i hvilken R* betyder H eller CH3S-, I 15

i vClcT

o I

I 20

I i hvilken X8 betyder -O-, -S- eller NH, og X9 betyder -CH= I

eller -N=, I

I 25 I

I <xviiai

I 0 I

I 30 i

I i hvilken Xg og Xg har de ovenfor angivne betydninger, og I

I Yi betyder H, halogen, C^-C^-alkyl, (^-Cg-alkoxy, C2-C6- I

I 35 dialkylamino, nitro, aminocarbonylalkyl-(C^-C^g) , hydroxy, I

I amino (-NH2), -NHCONH2, -NHAc (NHCOCH3) eller -NHBz (NHC(O)- I

DK 175458 B1

γΟ@- I

i hvilken X8 og Yj_ har de ovenfor angivne betydninger,

<xviii) I

15 /X10 ^io}- o 20 i hvilken X^q betyder -CH= eller -N=, 25 0 y4?J©~ I 30 0 I i hvilken X10 har de ovenfor angivne betydninger,

I C

I “li (XXii)

I 35 o I

*8 H DK 175458 B1 i hvilken Rg har de ovenfor angivne betydninger, I 5 oodiu H i hvilken Y1( Y2 og X8 har de ovenfor angivne betydninger, I -nfetv I 15 x® I Y2 i hvilken Y1( Y2, Xg og Xg har de ovenfor angivne betyd- H ninger, I 20 v Y1 25 Y2 I i hvilken X10 betyder -CH= eller -N=, og Υχ og Y2 har de

I ovenfor angivne betydninger, eller I

I 30 71 I Y] 35 i

i hvilken Y^ ^ar de ovenfor I

DK 175458 B1 I

8 I

T betyder en tetherbinding fra gruppen beståendé af: I

a) aminocarbonyl (-NHC(O)-), I

b) carbonylamino (-C{o)NH-), I

c) carbonyloxy (-(C(O)O-), I

5 d) oxycarbonyl (-OC(O)-), I

e) amino-tether-amino med formlen -NR^-, I

hvor R]_3 og R14, som er ens eller forskellige, I

betyder hydrogen eller C^-Cø-alkyl eller tilsammen I

betyder -(CH2)n-, hvor n er 2 eller 3, hvor Τ' I

10 betyder carbonyl (-C(O)-), dicarbonyl (-C(O)C(O) I

-),{-C{0) (CH2)nC(0)~), hvor n er 1-5, (-C(O)PhC- I

(O)-), hvor Ph betyder 1,3- eller 1,4-phenylen, I

eller en gruppe med formlen -C(O)-het-C(O)-, hvor I

het betyder I

15 I

ty- ·“" /λ. · 20 eventuelt substitueret med 1 eller 2 C(l-4)-alkyl-, C(1-3)alkoxy-, halogen-, C(1-3)alkylthio-, tri-I fluormethyl-, C(2-6)dialkylamino- eller nitrosub I 25 stituenter, og I f) -C (O)-het-C (O) -, når R5 og Ri 5 begge er en direkte binding, hvor -het- har den ovenfor angivne betyd I ning.

I De her omhandlede forbindelser er generelt mere poten- I 30 te end de ikke-dimere forbindelser ifølge EP-A1-154.445, og I hertil kommer , at de her omhandlede forbindelser har vist I sig at bis-alkylere DNA på en måde, der ikke er mulig for forbindelserne kendt fra EP 154.445 (jf. Lee, Seaman, Sun, I Xiong, Kelly og Hurley, JACS 119. 3434 (1997) og heri anførte I 35 referencer). Mange af de her omhandlede forbindelser viser fortrinlig aktivitet i L-1210-musemodeller, og PHA-77779 gav I DK 175458 B1 langtidoverleveIse i denne model (R.C. Kelly og N. Wicnien- ski, TR 7252/88/003, 19. februar 1988). Der er ved forsøg vist fremragende IDgø-værdier for en række repræsentative forbindelser ifølge opfindelsen.

5 CPl! og CPI2< som er ens eller forskellige, er for- trinsvis 1-(chlormethyl)-1,6-dihydro-8-methyl-5-hydroxy- I benzo [1,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yl eller 4,5,8,8a-tetra- hydro-7-methyl-4-oxocyclopropa[c]pyrrolo(3,2-e)indol-2(IH)- I yi.

10 W er fortrinsvis, methyl.

X er fortrinsvis halogen, især chlor eller brom. I

I Y er fortrinsvis -COR, hvori R betyder C^-C^ø-alkyl, I

phenyl,eventuelt substitueret med 1, 2 eller 3 C^-C^-alkyl- I

I grupper, C1-C3~alkoxy, halogen, C2-C3-alkylthio, trifluor- I

I 15 methyl, C2-Cg-dialkylamino eller nitro, -C(0)NHS02R4 eller I

I -C(O)NR2R3- I

Z er fortrinsvis hydrogen. I

T er fortrinsvis et amid (aminocarbonyl), carbonyl- I

H amino (-C(O)NH-) eller en amino-tether-amino med formlen I

I 20 -NR23-T'-NR24-, hvor Rj3 og R24 betyder hydrogen, og Τ' bety- I

I der carbonyl (-C(O)-) eller en gruppe med formlen -C(O)- I

I het-C(O)-, hvor -het- har den ovenfor angivne betydning. I

I R5 og R'g er fortrinsvis 2-carbonylindol-5-yl, 2-car- I

bonyl - 6-hydroxy-7-methoxyindol-5-yl, 2-carbonyl-l, 2,3,6- I

25 tetrahydrobenzo[1,2-b:4,3-b1]dipyrrol-7-yl eller 2-carbonyl- I

I 4-hydroxy-5-methoxy-1,2,3,6-tetrahydrobenzo [1,2-b:4,3b')di- I

pyrrol-7-yl. I

I Halogenatom (halo) refererer til et brom-, chlor-, I

iod- eller fluoratom. I

I 30 Eksempler på C2-C2o_alkyl er methyl, ethyl, propyl I

og butyl, herunder isomere former deraf. Eksempler på C2-C3- I

alkoxy er methoxy, ethoxy, propoxy og isomere former deraf. I

Eksempler på C2-Cg-dialkylamino er dimethylamino, diethyl- I

amino, methylethylamino, dipropylamino og ethylpropylamino. I

35 Eksempler på aminocarbonylalkyl-(C^-C^o) er aminocarbonyl- I

pentyl (-NHCOC5H22) og aminocarbonylmethyl (-NHCOOCH3). I

10 DK 175458 B1

Forbindelserne med formlen B kan omtales som derivater af nummeringssystemet (formel B') 5 .tø 10 Sådanne forbindelser vil indeholde 1,2,3,6-tetrahydro-8-W-5-Y-benzo[1,2-b:4,3-b']dipyrrol-1-[Z-CH(X)]-strukturen.

Forbindelserne med formlen I er vist som den racemi-15 ske blanding og omfatter den naturlige isomer med formlen I'a, som kan opløses fra den racemiske blanding og/eller fremstilles ud fra udgangsmaterialer af den naturlige, dvs.

1(S)-konf igurat ionen.

Eksempler på forbindelser ifølge den foreliggende 20 opfindelse med formlen I er følgende: [S- (R*,R*)]-6,6'-[carbonylbis(imino-lH-indol-5,2-dicarbonyl)]bis[8-chlormethyl)-3,6,7,8-tetrahydro-l-methyl-benzo [l,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-ol: 25

Η H

Forbindelse 1 35

I DK 175458 B1 I

I 11 I

I [7bR- [2 (7 'bR*,8'aS*) ,7bR*,8aS*]) -2,2' - [carbonylbis- I

I {imino-IH-indol-5,2-dicarbonyl])bis[1,2,8,8a-tetrahydro-7- I

I methyl-cyclopropa(c)pyrrolo[3,2-e]indol-4(5H)-on: I

' αΟ- Ί

" Η 0 I

I Forbindelse 2 I

I (R* , S*) -N, N1-bis[2-([1-(chlormethyl)-1,6-dihydro-5- I

I 15 hydroxy-8-methylbenzo [1,2-b:4,3-b1 ] dipyrrol-3 (2H) -yl]car- I

I bonyl]-lH-indol-5-yl]-ethandiamid: I

I hn \ I

I h h I

I HcrVrtiH

I Η Η o I

I 25 I

I Forbindelse 3 I

I [S-(R*, R*)]-6,61 -(lH-pyrrol-2,5-diyldicarbonyl)bis [8- - I

I (chlormethyl)-3,6,7,8-tetrahydro-l-methyl-bénzo(i,2-b:4,3- I

I 30 b1]dipyrrol-4-ol: I 2 2

° H 0 I

I Forbindelse 4 I

DK 175458 B1 I

[S-(R*,R*)]-6,6'-(2,5 - furandiyldicarbonyl)bis[8- I

(chl orme t hyl)-3,6,7,8-tetrahydro-l-methyl-benzo[1,2-b:4,3- I

b']dipyrrol-4-ol: I

MK "

Forbindelse 5 I 15 [S-(R*,R*) ]-N,N’-bis [2-[ [1-(chlormethyl)-1,6-dihydro- I 5-hydroxy-8-methylbenzo[1,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yl)car- I bonyl)-lH-indol-5-yl]-2,5-furandicarboxamid: I 20 I "" "

Η H

I 25 I Forbindelse 6 1 I 35 [S- (R*,R*)) -N,N' -bis [2- [ [1- (chl orme t hyl) -1,6-dihydro- I 5-hydroxy-8-methylbenzo[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yljcar- I 30 bonyl]-lH-indol-5-yl]-lH-pyrrol-2,5-dicarboxamid: I DK 175458 B1 H H ° 10 Forbindelse 7 [R- (R* , S*) ] -N,N' -bis [2- [ [1- (chlormethyl) -1,6-dihydro- I 5-hydroxy-8-methylbenzo[1,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yl]car- bonyl]-lH-indol-5-yl]-propandiamid: I 15

I 20 Η H

I „Hcf’rvtiH

I K H °

Forbindelse 8 I 25 I [S-(R*,R*)]-6,6'-[carbonylbis{imino-lH-indol-5,2- diylcarbonyl)-bis[8-(chlormethyl)-3,6,7,8-tetrahydro-1- I methyl-benzo[1,2-b:4,3-b’ ] dipyrrol-4-ol-diacetat: 1 35 DK 175458 B1 I 14 I 5 h h .Λ Λ.

I Forbindelse 9 I 10 I [S-(R*,R*)3-6,6’-(lH-indol-2,5-diyldicarbonyl)bis[8- I (chlormethyl)-3,6,7,8-tetrahydro-1-methyl-benzo[1,2-b:4,3- b']dipyrrol-4-ol: I 15 I Cl C "ΛνΙ/ΝΠ

I 20 N^N^^oH

I J~ecr{

H

Forbindelse 10 I (S- (R*,R*) ] -N,N' -bis [2- [.[1- (chlormethyl) -1,6-dihydro- H 5-hydroxy-8-methylben2o[1,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yl]car- bonyl]-lH-indol-5-yl]-lH-indol-2,5-dicarboxamid: I 30 DK 175458 B1 10 Forbindelse 11 [S - (R* , R*) ] -2- [ [1- (chlormethyl) -1,6-dihydro-5-hydroxy- S-methyl-benzoU^-b^/S-b'ldipyrrol-S (2H) -yl]carbonyl] -N- H [3- {[1- (chlormethyl) -1, 6-dihydro-5-hydroxy-8-methylbenzo[l,2- 15 b: 4,3-b' ] dipyrrol-3 (2H) -yl] carbonyl] -lH-indol-6-yl] -lH-indol- H 5-carboxamid:

Η H O

I konoH

Η Η h

Forbindelse 12 1 35 [S- (R*; R*) ] -5- [ [1~ (chlormethyl) -1,6-dihydro-5-hydroxy- I 8-methylbenzo[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3 (2H) -yl] -carbonyl) -N- I 30 [2- ({1- (chlormethyl) -l,6~dihydro-5-hydroxy-8-methylbenzo[l,2~ I b:4,3-b']dipyrrol-3 (2H) -yl]carbonyl) -lH-indol-5-yl] -lH-indol- 2-carboxamid:

16 I

DK 175458 B1 I

H H I

10 I

Forbindelse 13 I

I [S- (R*, R*) ]-carbonylbis[imino-lH-indol-5,2-diylcar- I

I bonyl [1-(chl orme thyl)-1,6-dihydro-8-methylbenzo [1,2-b:4,3- I

I 15 b1]dipyrrol-3,5(2H)-diyl]]ester-2,2-dimethylpropansyre: I

H h ° <r C{M·), I

I 25 Forbindelse 14 I

I [S-(R* , R* )]-carbonylbis [imino-lH-indol-5,2-diylcar- I bonyl [1 - (chlormethyl) -1,6-dihydro-8-methylbenzo [1,2-b:4,3- I b']dipyrrol-3,5(2H)-diyl]]ester-decansyre: I 30 H DK 175458 B1

I m.(ch,),-^o Ύ" X

H H O

Forbindelse 15 [S-(R ,R )) -6,6' - [carbonylbis [.(7,8-dihydrobenzo [1,2-b:4,3-b ' Jdipyrrol-6, 2 (3H) -diyl)carbonyl] ]bis [8-chlormethyl) -H 15 3,6,7,8- tetrahydro-1 -methyl -benzo [l,2-b:4,3-b'] dipyrrol-4-ol: I " I Forbindelse 16 25 1

Forbindelserne med formlen I fremstilles let ved I omsætning af den egnede 4,5,8,8a-tetrahydro-4-oxocyclopropan- (c)pyrrolo(3,2-e)-indolanaloge (formel B) med biscarboxyl- I 30 syre-, bisisocyanat-, bis-amino-carboxylat- eller -oxycarb- I oxylatreagenset og derefter med den anden egnede 4,5,8,8a- I tetrahydro-4 -oxocyclopropan(c)pyrrolo(3,2-e) - indolanaloge I (formel B), som illustreret i skema 1, 2, 2a, 3, 4, 5 og 6, I under anvendelse af de følgende reaktionsbetingelser: I 35 Trin 1 og 4: Udføres i opløsning af 1 mg til 100 mg/ml I i opløsningsmidler, f.eks. ethylacetat, methylenchlorid 18 DK 175458 B1 eller 1,2-dichlorethan, med en gasformig syre ved 1-5 M, f.eks. HCl eller HBr, eller en stærk organisk syre såsom CF3CO3H. Reaktionen forløber ved 0-50°C. Produktet i form af et aminsalt isoleres ved inddampning af opløsningsmiddel 5 og syre. Reaktionstiden kan ligge fra 10 min. til 48 timer.

Trin 2: Reaktionen udføres i polært opløsningsmiddel, f.eks. DMF, DMA eller THF, ved fra -10°C til 50°C. Forholdet for CPI-andelen:biscarboxylsyre:dehydratiseringsmiddel er I fortrinsvis 2:1:2. Dehydratiserings- eller koblingsreagenset I 10 kan være et carbodiimid, f.eks. dicyclohexylcarbodiimid I (DCC) eller ethyldimethylaminopropylcarbodiimid (EDC) , eller I andre fra teknikken kendte amiddehydratiseringsmidler. Reak- I tionstiden kan ligge fra 10 min. til 72 timer.

I Trin 5 og 7: Samme forløb som i trin 2, men forholdet I 15 for CPI-andelen:syre:dehydratiseringsreagens er fortrinsvis

1:1:1. I

I Trin 3, 8. 9. 11. 14. 15 og 17: Reaktionen udføres i en vandig organisk base. De foretrukne betingelser er aceto- I nitril:vand:triethylamin i forholdet 1:1:1. Forholdet mellem 20 disse reagenser kan ændres til fra 1:2:2 til 5:1:1. Ligeledes H kan opløsningsmidlerne ændres, således at der i stedet for

acetonitril kan anvendes DMF, DMA, N-methylpyrrolidon, THF

etc. Den organiske base kan også varieres til andre tertiære organiske aminer såsom 1,5-diaza-bicyclo[3.3.3) octan (DABCO) 25 eller ethyldiisopropylamin. Temperaturen ligger sædvanligvis fra 0°C til 50°C, og reaktionstiden ligger fra 5 min. til 10 timer.

H Trin 6: Afbeskytteisen afhænger af den beskyttende gruppe R. Såfremt den er t-butyl, kan gruppen fjernes ved 30 syrebehandling på samme måde som i trin 1. Såfremt R = ben- zyl, kan den fjernes ved hydrogenolyse med Pd-katalyse i f.eks. ethylacetat eller THF eller med ammoniumformiat, methanol, vand og Pd/C. Såfremt R = S1R3, kan den fjernes H med syre eller fluoridioner. Disse metoder er alle velkendte H 35 i teknikken.

Trin 5a 00 7a.· Reaktionerne kan udføres i aprotiske I DK 175458 B1 Η polære opløsningsmidler. Herved er pyridin, DMF, DMA, THF eller methylenchlorid foretrukne. Når opløsningsmidlet er et andet end pyridin, kan der tilsættes en base, f.eks. triethylamin. Reaktionen forløber i et forhold for CPI-an-5 delen til aktiveret carbonyl forbindelse på ca. 1:1. Reak-tionen kan forløbe ved fra -50°C til 100 °C i fra 5 min. til 72 timer.

Trin 10 og 16: Reagenserne kombineres i et forhold for CPI-andelen til aktivt carbonyl på ca. 2:1. Reaktionen 10 kan udføres i polære aprotiske opløsningsmidler, f.eks.

THF, DMF, DMA, pyridin, acetonitril etc. Reaktionen kan udføres ved fra -50°C til 100°C i fra 10 min. til flere H uger.

Trin 12. 13. 18 og 19: Forholdet for CPI-andelen til 15 den aktive carbonylandel er ca. 1:1. I øvrigt samme forløb H som i trin 10.

DK 175458 B1

Skema 1 H

^ opløsningsmiddel I

I Trin 2 I

'LJC^'2 Dehydr.tlserlniWl«·! I

I SH Opløsningsmiddel s

H

Tr^n * γ0 ^—(T*th*0—^

.N O

λ— (Tether)—λ θ' O

I DK 175458 B1

Skema 2

Trin 4 r W, Zl Tri" 5 HN^A. / *’ ί Π (Tether)—Ji— Qff MM^f 1 t-χ, Trin 6 vAJ Afbeskyttelse , 0JUs/ 2’

Y,0 N 0B

y^-—(Tether)—^ 5 w, 2, T“n 7 yVv \ _ .OH Dehydratiserings- Λ—a»lh·,)—^ reagens o 'o

DK 175458 B1 I

Skema 2 (forts.) I

W, 2, 2a I

i Trin 8 I

rrV*. ζ=ηπγjl toY'°Yi°M- i

Y,o-^5^~“ »-^s^Soy, I

X—-(Tether)—A O O

7 Z1 ''λ ^ A—(Tether)—/

O O

S

/_.*< t_Xt ζ\,χΓ=\ I Trin 9 HN\^ns^-\ tor Y, * H. Yj = H 1 0Γ /~Zl Z2“( 1 1 I X—(Tether)—/

O O

I DK 175458 B1 H Skema 2a H Trin 5a I O o W1 Zi I x3-Jl —(Tathcr)· ^ —X4 I 2· -► T iTVz, υ,ο'λ^~ν x< I ^r— (Tether)—/

o o I

I Trin 7a Wn Z, Za Wa>

i 2 «ΟνΤ x‘~y^wNH

I hcA^n

I ^—(Tether)—^ I

I O O I

I I

I Når X^=X^ og er gode fraspaltelige grupper såsom: I

-*-CI , Br , -«-N^N -«-O-n'^N I

w w‘ 5

DK 175458 B1 I

Skema 3 H

Trin 10 I

w z

X 0=C=N—(Tether)—N=C=:0 I

Y0 / nh O O

H li II I

2 X—U—N—(Tether)—N—11—X

R R I

W Z χ I

Yo *1 /

A-N—(tether)—N-A

* £ R 0 I 10

I Trin 11 w W

jft" I i 0 I DK 175458 B1 I 25

Skema 4 H Trin 12 O o I /5/W’ V X,JLn—(teth*0—N-fi—X4

I -IT 1 R R

I ’ H H r-/*2 \2

I / Xi I

Trin 13 I

I I—-X. Y?0^SvX^N +

I Η\ί^ν^\ 2" h H I

I Υ,Ο'^^Ν X* i

I ^“N—(tether)—I

I 0 R RO I

I

I w, z, z2 W2v I

%£ 3£-.s-

I Υ,Ο^^Ν N-JS^0Ya I

i rv“{tethør)~iH^ I

I 0 R R O I

I 13 I

I 'W' 2 7 W2. I

"SK-" K&"

V—«Ν——(Tether)—N—Å I

o I l 'o I

R R I 1

DK 175458 B1 I

Skema 4 (forts.) H

w, znw’V=\ I

Trin 15 /1 / .NH I

H Y2 = H Yify-z, ζ*·-θΙ il _______ /νΛ/ ν·^Α0

A—·Ν—(Tether)-N—'A

#1 B 0 15 Η I DK 175458 B1 I 27

Skema 5

Trin 16 I W 2

I * H-0—<T»1h.r)—O-U-X

I yo4ANfz --

I H H

i i

I , ,w Z 2 w I

I yo'C'O” I

I Λ“0—(tether)—O—A I

I O 'o I

I I

I Trin 17 · I

I y =H /^n'W yz 2 I

— % -a&

^“—O—— (Tether)—O—/ I

O X0 I

17 I

DK 175458 B1 I

Skema 6 I

o Trin 18 ' I

Xj-H—O—(Tether)—O—ϋ—x4 I

Y0 I

Yi02x^“ ’ X.

I A-O—(tether)—O—Λ I o o I 18 /^Wl L J2 Wiv=\ Trin 20 I Xl x’>^Cnh γι=γ2=Η

I Λ--0—(tether)—O—A

I o o I 19 I /==ί'ν1/^ I 0ίΚί?^Ν ’ ’ N-WAq

I Λ—0—(Tether)—Ό—A

I Of 0 I 20 I r-t**' |—x z* w’y-\

I Yi ¥ Η Y, = H YjTy_Zl Z2-\JL

I 1* -^ ’ 2 ;^0 I A—*0—(Tether)—0—^

I o' O

I 21 I DK 175458 B1 I 29 I de følgende eksempler er NMR-spektraldata opført .

i DMSO-de, medmindre andet er angivet. IR-spektre registre- H res fra Nujol-væsker. Opløsninger for UV-spektre fremstilles ved opløsning af det faste stof i få dråber DMF af dimethyl- 5 acetamid (DMA) og fortynding med 95% ethanol eller methanol, H medmindre andet er angivet. TLC-data er angivet for Analtech

Uniplates af silicagel GF.

Eksempel 1

Fremstilling af [S- (R* ,R*))-6,6 1 - [carbonylbis (imino-lH-indol- 5,2- dicarbonyl) ] bis [8 -chlormethyl) -3,6,7,8-tetrahydro-l- methyl-benzo[1,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-ol (forbindelse 1).

H 15 Del A - Fremstilling af 5,5'-(carbonyldiimino)bis- H IH-indol-2-carboxylsyrediethylester.

En opløsning af 6,82 g (33,4 mmol) 5-aminoindol-2- carboxylsyreethylester og 19 mg (0,15 mmol) 4-dimethylamino- pyridin, opløst i 80 ml THF, afkøles til -98°C i et frossent 20 methanolbad. Hertil sættes der 7 ml (40,2 mmol) diisopropyl- ethylamin, efterfulgt af 1,93 M phosgen i 8,5 ml (16,4 mmol) I toluen. Reaktionsblandingen omrøres ved -98°C i l time, I derefter ved -78°C i 1 time, hvorefter den henstilles ved I -13°C natten over. Reaktionen standses derefter med vand I 25 og fortyndes med vand og ethylacetat. Det vandige lag fra- I skilles og genekstraheres to gange med ethylacetat. De kom- I binerede ethylacetatlag vaskes med 1 N HCl, hvorved der fås en blanding, som fraskilles ved filtrering. Det filtrerede, I faste stof foreligger som rent produkt, 6,28 g (88%) 5,5'- 30 (carbonyldiimino) bis-lH-indol-2-carboxylsyrediethylester.

I Filtratet tørres og koncentreres, og der fås 1,49 g af et I mørkt, fast stof. Dette materiale chromatograferes over 100 g I silicagel og elueres med 10%'s DMF i toluen. Der opsamles I 20 ml fraktioner. Produktet fremkommer ved TLC i fraktion I 35 23-50. Ved koncentration af disse fraktioner i højvakuum

DK 175458 B1 I

30 I

fås der en remanens, som krystalliseres fra en blanding af I

DMF og methanol. Dér opnås således yderligere 0,80 g af I

produktet. I

NMR: δ = 1,36 (t, 6H) ; 4,35 (q, 4H) ; 7,10 (s, 2H) ; I

5 7,26 (d, 2H, J=9 Hz); 7,39 (d, 2H, J=9 Hz); 7,88 (s, 2H) ; I

8,52 (s, 2H); 11,77 (bs, 2H). I

IR: 3330, 3260, 1705, 1695, 1545, 1250 cm-1. I

UV: Xmax (THF)=338 nm (e=7000); 301 nra (e=28000) ; I

292 nm (6=26000); 250 nm (6=31000). I

10 MS (FAB) m/z 435 (M+H), 406, 362, 253, 204, 159, 132. I

TLC: Rf = 0,30 i (10-90) DMF-toluen. I

Del B - Fremstilling af 5,5'-(carbonyldiimino)bis- I

lH-indol-2-carboxylsyre. I

15 7,16 g (16,5 mmol) af indoldimerdiesteren, 5,5'-(car- I

bonyldiimino)bis-lH-indol-2-carboxylsyrediethylester, be- I

handles med 300 ml pyridin og 60 ml 1 N NaOH. Den fremkomne I

blanding omrøres i 24 timer ved 25°C, i 7 timer ved 50-60°C I

I og yderligere i 48 timer ved 25°C, på hvilket punkt reak- I

I 20 tionen ifølge TLC er tilendebragt. Reaktionsblandingen kon- I

centreres ved 25°C i højvakuum til omtrent tørhed. Rema- I

I nensen gøres sur med 3 N HC1, og det fremkomne faste stof I

I opsamles ved filtrering. Det frafiltrerede faste stof opløses I

i 100 ml DMF ved ca. 100°C. Derpå fortyndes opløsningen med I 25 400 ml methanol og 10 ml vand. Opløsningen afkøles, og det krystallinske produkt, 5,11 g (82%) 5,5'-(carbonyldiimino)- I bis-lH-indol-2-carboxylsyre, opsamles ved filtrering.

I NMR: δ = 7,07 (d, 2H, J=2 Hz); 7,28 (dd, 2H, J=l,8 Hz, I . J=9 Hz); 7,40 (d, 2H, J=9 Hz); 7,89 (d, 2H, J=l,8 Hz); 8,59 I 30 (bs, 2HO); 11,65 (d, 2H,J=1,5 Hz).

I IR: 3400-2300, 1680, 1530, 1225 cm-1.

I UV: Xmax = 294 nm (e = 23000).

MS (FAB): m/z 379 (M+H), 362, 331, 253, 176, 158, 132.

I TLC: Rf = 0,33 i (40-60-2) DMF-toluen-eddikesyre.

I 35 I DK 175458 B1

Del C - Omsætning af (S)-l-(chlormethyl)-1,6-dihydro- H 5-hydroxy-8-methyl-benzo[1,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-carb- H oxylsyre-l,l-dimethylester [ (Boc)CPI-phenolchlorid] med H hydrogenchlorid efterfulgt af koncensation med 5,5'-(car- H 5 bonyldiimino)bis-lH-indol-2-carboxylsyre.

128 mg (0,38 mmol) (S)-1-(chlormethyl)-1,6-dihydro- 5-hydroxy-8-methyl-benzotl,2-b:4,3-b']dipyrrolo-3(2H)-carb- H oxylsyre-l,l-dimethylester ((Boc)CPI-phenolchlorid] opløses H i 6 ml ethylacetat, og opløsningen behandles med en frisk.

10 fremstillet opløsning af mættet HC1 i 6 ml ethylacetat.

H Reaktionsblandingen omrøres i 1 time, på hvilket tidspunkt H TLC viser, at udgangsmaterialet er fuldstændig forsvundet.

H Reaktionsopløsningen koncentreres i vakuum og føres tilbage H til atmosfærisk tryk under nitrogen. Den fremkomne remanens H 15 geninddampes to gange fra methylenchlorid, hvorved der fås (S) -1 - (chlormethyl)-5-hydroxy-8-methyl-1,2,3,6-tetrahydro- benzo[l, 2-b:4,3-b'] dipyrrol-hydrochlorid (CPI-phenolchlorid- hydrochloridsalt). Dette materiale behandles med en opløsning af 78 mg (0,21 mmol) af disyren, 5,5'-(carbonyldiimino)bis- 20 lH-indol-2-carboxylsyre, i 4 ml tørt dimethylacetamid. Der- I efter tilsættes der 68 mg (0,08 mmol) 1-ethyl-3-(3-dimethyl- aminopropyl)carbodiimid-hydrochlorid (EDC) som et fast stof.

Efter 45 minutter tilsættes der endnu en portion EDC (68 mg) . Omrøringen fortsættes i 50 minutter. Reaktionsblandingen I 25 udfældes med vand, og det faste stof centrifugeres. Dette I vaskes med 0,1 N HC1, 0,5% NaHCOj og vand, idet den vandige I væske centrifugeres og fjernes hver gang. Remanensen inddam- pes i vakuum ved mindre end 20 mm Hg i to dage. Det rå pro- I dukt adsorberes fra DMF over på celite og chromtaograferes I 30 på en silicagelsøjle (15 g) under eluering med 30% DMF i I toluen. Der opsamles fraktioner på 10 ml. [S-(R*,R*)]-6,6'- I [carbonylbis (imino-lH-indol-5,2-dicarbonyl) ]bis [8-chlor- I methyl) -3,6,7,8-tetrahydro-l-methyl-benzo(l,2-b:4,3-b')dipyr- I rol-4-ol foreligger i fraktion 4-16 (115,1 mg fast stof, 35 74%'s udbytte baseret på BocCPI). NMR, IR, UV, FAB.

32 DK 175458 B1

NMR: δ = 2,356 (S, 6H) ; 3,582 (in, 2H) ; 3,92 (m, 2H) ; I

4,03 (m, 2H); 4,548 (m, 2H); 4,67 (m, 2H); 7,044 (s, 4H); 7,26 (d, 2H); 7,42 (d, 2H); 7,64 (bs, 2H); 7,849 (s, 2H); 8,466 (bs, 2H) ; 9,767 (bs, 2H) ; 10,704 (bs, 2H) ; 11,531 5 (bs, 2H).

IR: 3260, 1580, 1195 CttT1.

UV *max * 349 nm (e = 25000); 295 nm (e = 31000).

MS (FAB): m/z 815 (M+H), 779, 579, 236, 201, 187, 159. I

DNA-BINDING: 10 24 t Δ [Φ] “0 λ TLC: Rf = 0,44 i (30-70) DMF-toluen.

15

Eksempel 2 I Fremstilling af [7bR-[2(7'bR*,8'aS*),7bR*,8aS*]]-2,2'-[car- I bonylbis(imino-lH-indol-5,2-dicarbonyl])bis[1,2,8,8a-tetrafl 20 hydro-7-methyl-cyclopropa (c)pyrrolo (3,2-e]indol-4 (5H) -on (forbindelse 2) 80 mg (0,1 mmol) [S-(R*,R*)]-6,6'-[carbonylbis(imino- I lH-indol-5,2-dicarbonyl) ]bis [8-chlormethyl)-3,6,7,8-tetra- H 25 hydro-l-methyl-benzo[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-ol behandles med 10 ml acetonitril, 3 ml vand og 3 ml triethylamin. Reak- tionsblandingen omrøres under nitrogen ved stuetemperatur.

Efter 40 minutter opsamles produktet, som er udfældet, ved filtrering. Filtratet fortyndes med vand og ethylacetat, og 30 der opsamles endnu en portion af produktet ved filtrering.

De faste stoffer kombineres, hvorved der fås .38 mg (52%) I [ 7bR- [2(7' bR* , 8 ' aS* ) , 7bR*, 8aS*] ] -2,2 1 - [carbonylbis (imino- IH-indol -5,2-dicarbonyl))bis[1,2,8,8a-tetrahydro-7-methyl- cyclopropa(c)pyrrolo[3,2-e)indol-4(5H)-on.

35 NMR: δ = 1,394 (m, 2H) ; 2,008 (s+m, 8H) ; 3,169 (m, 2H>; 4,44 (m, 2H); 4,522 (m, 2H); 6,693 (s, 2H); 6,881 (s, I DK 175458 B1 2H) ; 7,120 (s, 2H); 7,266 (d, 2H); 7,402 (d, 2H) ; 7,872 (s, 2H) ; 8,512 (bs, 2H) ; 11,536 {bs, 2H) ; 11,675 (bs, 2H) .

H IR: 3250, 1560, 1375, 1255 cm-1.

UV: ^max = 365 nm (e = 36000); 316 nm (ε = 31000).

5 MS (FAB): Beregnet for C43H35N8O5:743,2730; fundet 743,2737. Ioner ved m/z 543, 368, 201.

H DNA-BINDING:

H

& [Φ] ~0 10 TLC: Rf = 0,43 i (30-70) DMF-toluen.

Eksempel 3 I Fremstilling af (R*,S*)-N,N'-bis[2-[[1-(chlormethyl)-1,6- dihydro-5 - hydroxy-8-methyIbenzo [1,2-b: 4,3-b* ] dipyrrol-3 (2H) - yl]carbonyl]-IH-indol-5-yl]-ethandiamid (forbindelse 3) 20 Del A - Fremstilling af 5,5 ' - [ (1,2-dioxo-l, 2-ethandiyl)diimi- no]bis-lH-indol-2-carboxylsyre-diethylester.

190,4 mg (0,93 mmol) 5-aminoindol-2-carboxylsyre- ethylester opløses i 15 ml destilleret THF under nitrogen- I atmosfære, og opløsningen afkøles til -78°C. Der tilsættes 25 ved hjælp af en sprøjte 175 μΐ (1,00 mmol) diisopropylethyl- amin efterfulgt af 41 μΐ (0,47 mmol) oxalylchlorid. Reak- tionsblandingen omrøres ved -78°C i 1 time. Reaktionsblan- I dingen inddampes i vakuum til det halve rumfang og behandles I derefter med vand. Produktet, 5,51 -[(1,2-dioxo-l,2-ethan- I 30 diyl)diimino]bis-lH-indol-2-carboxylsyre-diethylester, udfæl- I des som et hvidt, fast stof, der opsamles ved centrifugering I og tørres i 72 timer ved mindre end 20 mm Hg (232 mg).

NMR: δ = 1,348 (t, 6H); 4,35 (q, 4H) ; 7,16 (s, 2H) ; 7,45 (d, 2H); 7,68 (d, 2H); 8,224 (s, 2H); 10,732 (bs, 2H); 35 11,92 (bs, 2H).

IR: 3360, 3320, 1690, 1670, 1525, 1255, 1215'1.

DK 175458 B1 I

34 I

UV: Xmax 330 nm (e = 5000); 299 nm (e = 10000). I

MS (El): m/z 462 (M+), 417, 230, 204, 158. I

Del B - Fremstilling af 5,5'-[(1,2-dioxo-l,2-ethan- I

5 diyl)diimino]bis-lH-indol-2-carboxylsyre. I

220 mg (0,48 mmol) 5,5'-[(1,2-dioxo-l,2-ethandiyl)di- I

imino]bis-lH-indol-2-carboxylsyre-diethylester suspenderes I

i 9 ml pyridin og behandles med 1,5 ml 1 N NaOH. Den uklare I

blanding opvarmes til 60°C under nitrogen. Efter 24 timer I

10 tilsættes der på ny 1 ml 1 N NaOH, og reaktionsblandingen I

opvarmes yderligere 3 timer. Derefter neutraliseres reak- I

tionsblandingen ved tilsætning af 2,5 ml 1 N HCl og kon- I

centreres til det halve rumfang ved mindre end 20 mm Hg. I

Remanensen behandles derpå med 50 ml 1 N HCl og centrifuge- I

15 res, hvorved der fås en remanens i form af et svagt lyserødt I

fast stof. Dette vaskes med vand, centrifugeres og tørres i I

vakuumovn, og der fås 148 mg af produktet 5,5'-[(1,2-dioxo- I

1,2-ethandiyl)diimino]bis-IH-indol-2-carboxylsyre. I

NMR: δ = 7,098 (s, 2H); 7,42 (d, 2H, J=9 Hz); 7,66 I

20 (d, 2H, J=9 HZ); 8,201 (s, 2H); 10,709 (bs, 2H) ; 11,80 (bs, I

2H) . I

IR: 3420, 3310, 1660, 1510, 1220 cm”1. I

MS (FAB): m/z 407 (M+H), 385, 331, 253, 177. I

TLC: Rf = 0,31 i (40-60-2) DMF-toluen-eddikesyre.

25

Del C - Omsætning af 5,5'-[(1/2-dioxo-l,2-ethandiyl) -diimino]bis-IH-indol-2-carboxylsyre med (S)-1-(chlormethyl) - 1,6-dihydro-5-hydroxy-8-methyl-benzo[1,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-carboxylsyre-1,1-dimethylester [(Boc)CPI-phenolchlo-I 30 rid].

I 42,5 mg (0,13 mmol) (S)-l-(chlormethyl)-1,6-dihydro- I 5-hydroxy-8-methyl-benzo(l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3 (2H) -carb- I oxylsyre-1,1-dimethylester [(Boc)CPI-phenolchlorid] opløses I i 1 ml ethylacetat under nitrogenatmosfære i mørke. Reak- I 35 tionsblandingen behandles med 3 ml ethylacetat mættet med I HCl. Blandingen omrøres i 1 time og inddampes i vakuum.

I DK 175458 B1

Nitrogen ledes ind, når vakuum fjernes. Ved geninddampning 2 gange med CH2CI2 fås der (S)-1-(chlormethyl)-5-hydroxy-8- methyl-1,2,3,6-tetrahydro-benzo [1,2-b: 4,3 -b1 ] dipyrrol-hydro- H chlorid (CPI-phenolchlorid-hydrochlorid) som et fast stof.

Η 5 En suspension af 28,4 mg (0,06 mmol) 5,5'- [ (1,2-dioxo-1,2- ethandiyl)diimino]bis-lH-indol-2-carboxylsyre i 2 ml dime- 1 thylacetamid sættes til reaktionsblandingen. Der tilsættes 43,4 mg (0,23 mmol) EDO som et fast stof. Reaktionsblandingen omrøres i mørke under nitrogen og ved stuetemperatur i 10 100 minutter. Der tilsættes vand til udfældning af produktet.

Det faste stof, isoleret ved centrifugering, vaskes to gange med 5% NaHC03 og derefter med 0,1 N HC1 og vand. Det faste

H stof tørres i vakuum. Det faste stof adsorberes fra DMF

over på silicagel og chromatograferes på en silicagelsøjle 15 (3 g) i 20-30% DMF i toluen. Der opsamles fraktioner på 1-2 ml. (R*,S*)-N,N'-bis[2-[[1-(chlormethyl)-1,6-dihydro-5- hydroxy-8-methylbenzo [1,2-b:4,3-b' Jdipyrrol-3 (2H) -yl]car- H bonyl]-lH-indol-5-yl]-ethandiamid foreligger i fraktionerne I 15-22 (24,6 mg, 45%'s udbytte).

20 NMR: (DMF-d7) δ = 2,216 (s, 6H); 3,47 (m, 2H); 3,77 (m, 2H) ; 3,918 (m, 2H) ; 4,51 (m, 4H) ; 6,95 (s, 2H) ; 7,03 I (s, 2H); 7,40 (d, 2H); 7,62 (d, 2H); 8,22 (s, 2H).

UV: Xmax = 341 nm (e = 38000); 293 nm (e *.52000).' I TLC: Rf = 0,58 i (30-70) DMF-toluen.

25 I Eksempel 4 I Fremstilling af [S-(R*,R*)]-6,6'-(lH-pyrrol-2,5-diyldicar- bonyl)bis[8-(chlormethyl)-3,6,7,8-tetrahydro-l-methyl- I 30 benzotl,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-ol (forbindelse 4) 40 mg (0,12 mmol) (S)-1-(chlormethyl)-1,6-dihydro-5- I hydroxy-8-methyl-benzo[1,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H) -carboxyl- I syre-1,1-dimethylester [(Boc)CPI-phenolchlorid] opløses i I 35 1 ml ethylacetat under nitrogenatmosfære. Reaktionsblandingen I behandles med 3 ml ethylacetat frisk mættet med HC1, og den I fremkomne opløsning omrøres ved stuetemperatur i 1 time.

DK 175458 B1 I 36 I Opløsningsmidlet fjernes i vakuum, og det let blåligrøde I resterende faste stof (S)-1-(chlormethyl)-5-hydroxy-8-methyl- I 1,2,3,6-tetrahydro-benzo[1,2-b:4,3-b')dipyrrol-hydrochlorid I (CPI-phenolchlorid-hydrochlorid) geninddampes 2 gange med I 5 CH2CI2/ idet der skylles med nitrogen mellem inddampningeme.

I Dette faste stof behandles med 8,9 mg (0,057 mmol) pyrrolo- I 2,5-dicarboxylsyre i 1 ml tørt dimethylacetamid og 24 mg I (0,125 mmol) EDC, og den fremkomne opløsning omrøres ved I 25°C. Efter 50 minutter tilsættes der yderligere en portion I 10 på 24. mg (0,125 mmol) EDC. Efter yderligere 55 minutter I fortyndes reaktionsblandingen med 5 ml vand og 5 ml af en I mættet vandig natriumchloridopløsning og ekstraheres 4 gange I med ethylacetat. De kombinerede organiske lag tørres (Na2S04)

I og inddampes. Den rå remanens adsorberes fra ethylacetat- I

I 15 acetone på 0,5 g silicagel og chromatograferes på en sili- I

I cagelsøjle på 6 g i en 10%'s blanding af DMF og toluen, I efterfulgt af en 15%'s blanding af DMF og toluen. Der opsam- I les fraktioner på 3-4 ml. [S-(R*,R*) ] -6,6'-(lH-pyrrol-2,5- I diyldicarbonyl) bis [8 - (chlormethyl)-3,6,7,8-tetrahydro-l- I 20 methyl-benzo[1,2-b:4,3-b1]dipyrrol-4-ol foreligger i fraktion I 23-37 (25 mg).

I NMR: δ =2,349 (s, 6H) ; 3,59 (m, 2H) ; 3,90 (m, 2H) ; 4,01 (m, 2H) ; 4,40 (m, 2H) ; 4,55 (m, 2H) ; 6,850 (s, 2H) ; I 7,039 (m, 2H) ; 7,60 (m, 2H); 9,77 (s, 2H) ; 10,71 (bs, 2H); I 25 11,36 (bs, IH).

I UV: Xmax = 356 nm (e = 16000); 290 nm (e = 21000).

TLC: Rf = 0,47 i (20-80) DMF-toluen.

Eksempel 5 I Fremstilling af [S-(R*,R*)]-6,6'-(2,5-furandiyldicarbonyl)- I bis [8- (chlormethyl) -3,6,7,8-tetrahydro-l-methyl-benzo [1,2- b:4,3-b']dipyrrol-4-ol (forbindelse 5) 35 40,6 mg (0,12 mmol) (S)-1-(chlormethyl)-1,6-dihydro- 5-hydroxy - 8- methyl-benzo [1,2-b:4,3-b' ] dipyrrol-3 (2H) -carb- oxylsyre-1,1-dimethylester [ (Boc)CPI-phenolchlorid] opløses I DK 175458 B1 i 1 ml ethylacetat, sættes under nitrogen og behandles med 3 ml HCl-mættet ethylacetat. Efter 50 minutter inddampes reaktionsblandingen i vakuum, idet den ledes tilbage til atmosfærisk tryk under nitrogen. Efter geninddampning 2 5 gange fra CH2CI2 fås der som et fast stof (S)-1-(chlorme- thyl)-5-hydroxy-8-methyl-1,2,3,β-tetrahydro-benzo [1,2-b:4,3- b']dipyrrol-hydrochlorid (CPI-phenolchlorid-hydrochlorid).

Det faste stof behandles med en opløsning af 9,7 mg (0,062 mmol) furan-2,5-dicarboxylsyre i 1 ml tørt dimethyl- 10 acetamid. Der tilsættes 43,1 mg (0,22 mmol) EDC som et fast stof i 2 lige store portioner med 45 minutters mellemrum. 1

Omsætningen standses 170 minutter efter den anden tilsætning ved tilsætning af ethylacetat og vand. Vandet genekstraheres

med ethylacetat. De forenede organiske lag vaskes med 0,5 N

15 HCl, 1% NaHC03 og vand. Ved tørring (Na2S04) og koncentrering fås der 55,2 mg af et gult, fast stof. Det faste stof adsor- beres fra en blanding af DMF og acetone over på 0,7 g silica- gel. Denne anbringes på en silicagelsøjle på 7 g under elu- I ering med 10-15% DMF i toluen. Der opsamles fraktioner på 20 3-4 ml. Ved koncentrering af fraktioner 23-31 isoleres der I 22,3 mg [S-(R*, R*)]-6,6'-(2,5-furandiyldicarbonyl)bis[8- I (chlormethyl)-3,6,7,8-tetrahydro-1-methyl-benzo [1,2-b:4,3- b']dipyrrol-4-ol som et lysegult, fast stof i et udbytte på I 63%'.

I 25 NMR: 6 = 2,344 (s, 6H); 3,63 (m, 2H); 3,89 (m, 2H); 4,029 (m, 2H); 4,51 (m, 2H); 4,60 (m, 2H); 7,048 (s, 2H) ; I 7,37 (s, 2H); 7,64 (m, 2H); 9,82 (s, 2H); 10,75 (bs, 2H).

UV: Xmax = 360 nm (e = 20000); 295 nm (e = 24000). I

I TLC: Rf = 0,47 i (20-80) DMF-toluen. I

I 30 I

DK 175458 B1 I

38 I

Eksempel β I

Fremstilling af [S- (R*,R*)]-N,N'-bis[2-[[1-(chlormethyl)- I

1,6-dihydro -5-hydroxy-8-methylbenzo[1,2-b:4,3-b1]dipyrrol- I

5 3(2H)-yl]carbonyl]-lH-indol-5-yl]-2,5-furandicarboxamid I

(forbindelse 6) I

Del A - Fremstilling af 5,5'-[2,5-furandiylbis(car- I

bonylimino)3-bis-lH-indol-2-carboxylsyre-diethylester. I

10 50 mg (0,32 mmol) furan-2,5-dicarboxylsyre (A. Sohst I

and B. Tollens, Justig Liebigs Ann. Chem., 245, 1 (1888)) I

og 130 mg (0,64 mmol) 5-aminoindol-2-carboxylsyreethylester I

opløses i 2 ml dimethylacetamid, og opløsningen behandles I

I med 132 mg (0,69 mmol) EDC. Efter 20 timer fortyndes reak- I

I 15 t ionsbi andingen med 2 0 ml vand og ekstraheres to gange med I

I ethylacetat. De kombinerede ethylacetatopløsninger vaskes I

I med 1 N HCl og 1 N NaOH og tørres (MgS04) . Ved koncentrering I

af ethylacetatet i vakuum fås der en remanens (154 mg) . Denne I chromatograferes over 10 g silicagel under eluering med I 20 50-60% ethylacetat i hexan, efterfulgt af 50% ethylacetat i toluen. Der opsamles fraktioner på 4 ml. Ved inddampning af I fraktion 22-50 fås der 107 mg 5,5'-[2,5-furandiylbis(car- I bonylimino)]bis-lH-2-carboxylsyrediethylester.

I NMR: δ = 1,413 (t, 6H); 4,38 (g, 4H); 7,137 (s, 2H); I 25 7,51 (d, 2H) ; 7,58 (d, 2H) ; 8,021 (s, 2H) ; 8,097 (bs, 2H) ; I 10,146 (bs, 2H); 11,742 (bs, 2H).

I TLC: Rf = 0,38 i (60-40) ethylacetat-hexan.

Del B - Fremstilling af 5,5'-[2,5-furandiylbis(car- I 30 bonylimino))bis-IH-indol-2-carboxylsyre.

60 mg (0,11 mmol) 5,5'- [2,5-furandiylbis(carbonyl- I imino)]bis-lH-indol-2-carboxylsyre-diethylester suspenderes I i 0,4 ml methanol og behandles med 0,25 ml 1 N NaOH. Efter H 5 dage inddampes reaktionsblandingen i vakuum, remanensen 35 opløses i vand, og opløsningen gøres sur med 1 N HCl til pH=2. Denne opløsning frysetørres, og der fås 22 mg 5,5’- (2,5-furandiylbis (carbonylimino) ]bis-lH-indol-2-carboxylsyre.

I DK 175458 B1

Del C - Omsætning af 5,5'(2,5-furandiylbis(carbonyl-imino))bis-lH-indol-2-carboxylsyre med (Boc)CPI-phenolchlo-rid.

33 mg (0,098 mmol) (S)-1-(chlormethyl)-1,6-dihydro-5-5 hydroxy-8-methyl-benzo[1,2-b:4,3-b' ] dipyrrol-3 (2H) -carboxyl-syre-1,1-dimethylester [(Boc)CPI-phenolchlorid] opløses i 1 ml ethylacetat, og den fremkomne opløsning omrøres under Ar-atmosfære og behandles med 3 ml af en frisk fremstillet HCl-opløsning i ethylacetat. Efter 45 minutter inddampes 10 blandingen i vakuum, og det fremkomne (S)-1-(chlormethyl)-5-hydroxy-8-methyl-1,2,3,6-tetrahydro-benzo[1,2-b:4,3-b' ]di-H pyrrol-hydrochlorid (CPI-phenolchlorid-hydrochlorid) be- H handles to gange med CH2CI2 og geninddampes. Dette produkt H behandles med 1 ml dimethylacetamid indeholdende 22 mg (0,047 15 mmol) 5,5'-[2,5-furandiylbis(carbonylimino]bis-IH-indol-2- H carboxylsyre. Den fremkomne opløsning behandles i 2 portioner H med ca. 50 minutters mellemrum med 40 mg (0,21 mmol) EDC.

Efter 50 minutter fortyndes reaktionsblandingen med vand, og blandingen ekstraheres med en blanding af THF og ethyl- 20 acetat. De kombinerede organiske lag tørres med MgS04 og koncentreres i vakuum, hvorved der fås 15 mg af et fast stof.

Dette materiale chromatograferes med 5 g silicagel elueret I med 20-30% DMF i toluen. Der opsamles fraktioner på 3 ml.

Efter inddampning af fraktion 16-28 fås der 5 mg [S- I 25 (R* , R*) ]-N,Ν'-bis [2-[ [1-(chlormethyl)-1,6-dihydro-5-hydroxy- I 8 - met hyl benzo [1,2-b: 4,3 -b' ] dipyrrol-3 (2H) -yl] carbonyl] -1H- indol-5-yl]-2,5-furandicarboxamid.

I NMR: δ = 2,363 (s, 6H); 3,60 (m, 2H); 3,90 (m, 2H); I 4,03 (m, 2H) ; 4,56 (m, 2H) ; 4,68 (m, 2H) ; 6,616 (s, IH) ; I 30 7,05 (S, 2H) ; 7,16 (m, 2H) ; 7,41 (s, 2H) ; 7,53 (s, 4H) ; I 7,64 (m, IH); 8,16 (s, 2H) ; 9,79 (s, 2H) ; 10,29 (bs, 2H) ; I 10,73 (bs, 2H); 11,73 (bs, 2H) .

I UV: ^max (meOH) = 350 nm (e = 41000) ; 283 nm (e = 50500) .

DK 175458 B1 I

40 I

MS (FAB) : m/z 911 (M+H) , 909 (M+H), 412, 395, 335, I

I 300, 253, 210. I

I TLC: Rf = 0,217 i (20-80) DMF-toluen. I

I 5 Eksempel 7 I

I Fremstilling af [S-(R*,R*)]-N,N'-bis [2-I [1-(chlormethyl)- I

I 1,6 -dihydro- 5-hydroxy-8-methylbenzo [1,2-b:4,3-b' ] dipyrrol- I

I 3 (2H) -yl] carbonyl]-lH-indol-5-yl]-lH-pyrrol-2,5-dicarboxamid I

I 10 (forbindelse 7) I

I Del A - Kobling af pyrrol-2,5-dicarboxylsyre til 5- I

I aminoindol-2-carboxylsyreethylester. I

I 50 mg (0,32 mmol) pyrrol-2,5-dica4rboxylsyre (Kuhn, I

I 15 R., og Dury, K., Justus Liebigs Ann. Chem., 571. 44 (1951)) I

I og 130 mg (0,64 mmol) 5-aminoindol-2-carboxylsyreethylester I

I opløses i 2 ml dimethylacetamid, og opløsningen behandles I

I med 129 mg (0,67 mmol) EDC. Efter 22 timer behandles bian- I

I dingen med 20 ml isvand, og det udfældede faste stof fraskil- I

I 20 les ved filtrering. Dette materiale chromatograferes på I

I 10 g silicagel og elueres med 10-15% DMF i toluen. Der opsam- I

I les fraktioner på 4 ml. Efter inddampning af fraktion 22-42 I

I fås der en remanens indeholdende 72 mg af produktet. Denne I

I remanens behandles med ethylacetat og tørres, hvorved der I

I 25 fås 42 mg 5,5’- [lH-pyrrol-2,5-diylbis(carbonylimino)-bis- I

I lH-indol-2-carboxylsyrediethylester. I

I NMR: δ = 1,413 (t, 6H); 4,38 (q, 4H); 7,137 (s, 2H); I 7,51 (d, 2H); 7,58 (d, 2H); 8,021 (s, 2H); 8,097 (bs, 2H); I . 10,146 (bs, 2H); 11,742 (bs, 2H).

I 30 TLC: Rf = 0,38 i (60-40) ethylacetat-hexan.

I Del B - Fremstilling af 5,5'-[lH-pyrrol-2,5-diylbis(car- bonylimino)-bis-lH-indol-2-carboxylsyre.

I 42 mg (0,8 mmol) 5,5'-[lH-pyrrol-2,5-diylbis(car- I 35 bonylimino)-bis-IH-indol-2-carboxylsyrediethylester opløses I i 1 ml pyridin, og opløsningen behandles med 0,2 ml IN NaOH.

I Efter 24 timer behandles reaktionsblandingen med yderligere I DK 175458 B1 I 41 0,4 ml 1 N NaOH. Efter yderligere 96 timer inddampes reak- tionsblandingen i vakuum, og remanensen opløses i 5 ml vand.

Den vandige opløsning gøres sur med 1 N HC1 til pH=2 og frysetørres derpå, hvorved der fås 5,5'-[lH-pyrrol-2,5-diyl- 5 bis{carbonylimino)-bis-IH-indol-2-carboxylsyre.

Del C - Kobling af 5,5'-[lH-pyrrol-2,5-diylbis(car- bonylimino)-bis-IH-indol-2-carboxylsyre med (S)-1-(chlor- H methyl) -1,6-dihydro-5-hydroxy-8-methyl-benzo[l,2-b:4,3-b']di- 10 pyrrol-3 (2H) - carboxylsyre-1,1-dimethy lester [ (Boc)CPI-phenol- chlorid).

40 mg (0,12 mmol) (S)-1-(chlormethyl)-1,6-dihydro-5- hydroxy-8-methyl-benzoll, 2-b:4,3-b']dipyrrol-3 (2H) -carboxyl- syre-1,1-dimethylester [(Boc)CPI-phenolchlorid] opløses i 15 1 ml ethylacetat under nitrogenatmosfære. Reaktionsblandingen behandles med 3 ml ethylacetat frisk mættet med HC1, og den fremkomne opløsning omrøres ved stuetemperatur i 45 minutter.

I Opløsningsmidlet fjernes i vakuum, og remanensen ledes til- bage til atmosfærisk tryk med nitrogen. Remanensen genind- 20 dampes to gange med CH2Cl2, hvorved der fås (S)-1-(chlor- I methyl)-5-hydroxy-8-methyl-1,2,3,6-tetrahydro-benzo[1,2- I b: 4,3 -b * ] dipyrrol -hydrochlorid (CPI-phenolchlorid-hydrochlo- I rid). Dette materiale opløses i 1 ml dimethylacetamid, og opløsningen behandles med 28 mg 5,5'[lH-pyrrol-2,5-diyl- 25 bis (carbonylimino) -bis-IH-indol-2-carboxylsyre og med 25 mg I (0,13 mmol) EDC. Efter yderligere 50 minutter fortyndes I reaktionsblandingen med vand, og de udfældede faste stoffer I fordeles mellem THP og ethylacetat. De forenede organiske I lag tørres (MgSO^) og koncentreres i vakuum, hvorved der 30 fås 80 mg af et fast stof. Dette materiale chromatograferes på 10 g silicagel og elueres med 20% DMF i toluen. Der opsam- I les fraktioner på 3 ml. Efter inddampning af fraktion 26-45 I fås der 11 mg [S-(R*,R*))-N,Ν’-bis[2[[1-(chlormethyl)-1,6- I dihydro-5-hydroxy-8-methylbenzo [1,2-b:4,3-b' ] dipyrrol-3 (2H) - I 35 yl]carbonyl]-lH-indol-5-yl]-lH-pyrrol-2,5-dicarboxamid.

42 I

DK 175458 B1 I

NMR: δ = 2,363 (s, 6H); 3,60 (m, 2H); 3,91 (m, 2H); I

4,032 (m, 2H) ; 4,54 (m, 2H) ; 4,68 (m, 2H) ; 6,625 (s, IH); I

7,05 (s, 2H) ; 7,09 (s, 2H) ; 7,13 (s, 2H) ; 7,49 (m, 4H) ; I

I 7,64 (m, IH); 8,18 (s, 2H) ; 9,78 (s, 2H) ; 10,09 (bs, 2H) ; I

I ' 5 10,72 (bs, 2H); 11,67 (bs, 2H); 12,22 (bs, IH). I

I UV: ^max (methanol) = 344 nm (e = 58600; 296 nm (e * I

I 68000). I

I MS (FAB): Beregnet for C48H39cl2N9°6; 908,2478; I

I Fundet: 908,2496. Ioner ved m/z 543, 368, 201. I

I 10 TLC: Rf = 0,21 i (20-80) DMF-toluen. I

I Eksempel 8 I

I Fremstilling af [R-(R*,S*)]-N,N*-bis[2-([1-(chlormethyl)- I

I 15 1, 6-dihydro-5-hydroxy-8-methylbenzo[l,2-b:4,3-b' Jdipyrrol- I

I 3(2H)-yl]carbonyl]-lH-indol-5-yl)-propandiamid (forbindel- I

I se S) I 1

Del A - Omsætning af 5-aminoindol-2-carboxylsyreethyl- I

I 20 ester med malonyldichlorid.

I En opløsning af 196 g (0,96 mmol) 5-aminoindol-2- I carboxylsyreethylester i 15 ml tør destilleret THF afkøles I i et isbad under nitrogen. Der tilsættes med en sprøjte I 350 μΐ (2,01 mmol) N,N-diisopropylethylamin og 80 μΐ I 25 (0,82 mmol) malonyldichlorid. Efter 1 times forløb fjernes I opløsningsmidlet delvist, og der udfældes 5,5'-[(1,3-dioxo- I 1,3-propandiyl)-diimino]bis-lH-indol-2-carboxylsyrediethyl- ester med vand. Blandingen centrifugeres, og det flydende lag fjernes. Det faste stof tørres i vakuum. Remanensen I 30 chromatograferes over 2 g silicagel og elueres med 25% ace- tone i toluen, 40% acetone i toluen, 60% acetone i toluen, I 80% acetone i toluen og acetone. Der opsamles fraktioner på 15 ml. Produktet 5,5'-[(l,3-dioxo-l,3-propandiyl)-diimino]- I bis-iH-indol-2-carboxylsyrediethylester foreligger i frak- 35 tion 9-13 (77 mg).

NMR: (Acetone-d6) δ = 1,37 (t, 6H) ; 3,571 (s, 2H) ; I 4,36 (q, 4H); 7,16 (s, 2H) ; 7,48 (m, 4H) ; 8,17 (s, 2H) ; I DK 175458 B1 9,71 (bs, 2H); 10,92 {bs, 2H).

H IR: 3300, 1650, 1200 cm'1.

UV: ^max = 340 nm (e = 5400); 297 nm (e = 28000).

MS (El): m/z .476 (M+) , 340, 272, 226, 204, 158.

5 TLC: Rf = 0,21 i (40-60) acetone-hexan.

Del B - Fremstilling af 5,51 -[(1,3-dioxo-l,3-propan- diyl)-diimino]bis-IH-indol-2-carboxylsyre.

Diesteren ifølge del A (0,16 mmol) opløses i 3 ml 10 pyridin og 0,53 ml 1 N natriumhydroxid. Reaktionsblandingen H omrøres under nitrogen ved 50°C i ca. 2 timer og derefter H ved stuetemperatur i 4 timer. Reaktionsblandingen behandles med 1 N HC1 og inddampes til næsten tørhed. Produktet udfæl- des med vand, isoleres ved centrifugering og vaskes med 15 vand, hvorved der fås 5,5' - f (1,3-dioxo-l, 3-propandiyl) -diimi- no)bis-lH-indol-2-carboxylsyre.

I NMR: δ = 3,47 (s, 2H) ; 7,04 (s, 2H) ; 7,36 (m, 4H) ; 8,03 (S, 2H); 10,09 (bs, 2H); 11,68 (bs, 2H) .

I UV: ^max = 294 nm (e = 13000).

I 20 I Del C - Kobling af 5,5'-[(1,3-dioxo-l,3-propandiyl)- diimino]bls-lH-indol-2-carboxylsyre og (S)-1-(chlormethyl)- I 1,6-dihydro-5-hydroxy-8-methyl-benzo(1,2-b:4, 3-b']dipyrrol- I 3(2H)-carboxylsyre-1,1-dimethylester I(Boc)CPI-phenolchlo- 25 rid].

I 37,8 mg (0,11 mmol) (S)-1-(chlormethyl)-1,6-dihydro- 5- hydroxy -8 - methyl-benzo [1,2-b:4,3-b' ] dipyrrol-3 (2H) -carb- I oxylsyre-1,1-dimethylester [(Boc)CPI-phenolchlorid] opløses I i 0,5 ml diethylacetat under nitrogenatmosfære. Opløsningen 30 behandles med 3 ml HCl-mættet ethylacetat i 1 time. Reak- tionsbiandingen inddampes, og vakuum erstattes med nitrogen.

I Det fremkomne (S)-1-(chlormethyl)-5-hydroxy-8-methyl-l,2,3,6- tetrahydro-benzo [1,2-b:4,3-b' ] dipyrrol-hydrochlorid (CPI- I phenolchlorid-hydrochlorid) geninddampes 2 gange med CH2CI2· I 35 Dette materiale behandles med 24,3 mg (0,058 mmol) 5,5'- I [(1,3-dioxo-l,3-propandiyl)diimino] bis-lH-indol-2-carboxyl- DK 175458 B1

44 I

syre i 1 ml tørt dimethylacetamid. 49 mg (0,156 mmol) EDC I

udvejes, og ca. halvdelen sættes til reaktionsblandingen. I

Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 45 minutter. Derefter I

tilsættes resten af EDC, og omrøringen fortsættes i 40 minut- I

5 ter. Reaktionsblandingen fortyndes med ethylacetat og vand. I

De uopløselige materialer fjernes ved filtrering og gemmes. I

Filtratet adskilles i lag, og de vandige genekstraheres med I

ethylacetat. De kombinerede organiske lag tørres (Na2SC>4) I

og koncentreres i vakuum. Remanensen kombineres med de oven- I

10 for frafiltrerede faste stoffer og adsorberes over på 0,4 g I

silicagel og sættes til toppen af en silicagelsøjle på 5 g. I

Søjlen elueres med 22-28% DMF i toluen, idet der opsamles I

fraktioner på 2 ml. Produktet 5,5'-[(1,3-dioxo-l,3-propan- I

diyl)diimino]bis-IH-indol-2-carboxylsyre isoleres i fraktion I

15 14-28 (36 mg). I

NMR: δ = 2,354 (s, 6H); 3,51 (m, 2H); 3,60 (m, 2H); 3,91 (m, 2H) ; 4,03 (m, 2H) ; 4,52 (m, 2H) ,· 4,67 (m, 2H) ; 7,05 (S, 2H) ; 7,10 (s, 2H) ; 7,38 (d, 2H) ; 7,46 (d, 2H) ; 7,64 (m, 2H) ; 8,10 (s, 2H) ; 9,78 (s, 2H) ; 10,13 (bs, 2H) ; 20 10,72 (bs, 2H) ; 11,64 (bs, 2H) .

UV: ^max = 336 nm (e = 35000); 294 nm (e = 44000).

TLC: Rf = 0,46 i (30-70) DMF-toluen.

Eksempel 9 25 I Fremstilling af [S-(R*, R*) ]-6,6 ' - [carbonylbis (imino-IH-indol- 5,2-diylcarbonyl)-bis[8-(chlormethyl)-3,6,7,8-tetrahydro-1- I methyl-benzo[l,2-b:4,3-b' ] dipyrrol-4-ol-diacetat (forbin- I delse 9).

30 - I 5 mg (0,007 mmol) [7bR-[2-(7'bR*,8'aS*),7bR*,8aS*] ] - 2,2'- [carbonylbis ( imino-IH-indol-5,2 -di car bony 1) [bis- I [1,2,8,8a- tetrahydro-7-methyl-cyclopropa (c)pyrrol [3,2-e] - I indol-4 (5H) -on opløses i 200 μΐ DMF og 0,5 ml acetone, og I 35 opløsningen behandles med 8,3 mg (0,07 mmol) pyridinhydro- I chlorid. Reaktionsblandingen omrøres ved stuetemperatur i I mørke i 110 minutter, hvorefter den koncentreres til et I DK 175458 B1 I 45

lille rumfang og behandles med vand. Blandingen centrifuge- I

H res, og væskerne fjernes, hvorved der fås [S-(R*,R*)]-6,6'- I

[carbonylbis (imino-lH-indol-5,2-dicarbonyl))bis [8-chlor- I

H methyl)-3,6,7,8-tetrahydro-l-methyl-benzo[l,2-b:4,3-b']dipyr- I

5 rol-4-ol som et fast stof. Det faste stof opløses i 100 μΐ . I

H pyridin og behandles med 6 μΐ (0,06 mmol) eddikesyreanhydrid. I

H Reaktionsblandingen omrøres i mørke ved stuetemperatur i I

85 minutter, tilsættes vand og koncentreres til tørhed. I

Remanensen behandles med vand og centrifugeres. Væsken fjer- I

H 10 nes, og det faste stof tørres under vakuum. Det faste stof I

adsorberes fra DMF over på 0,07 g silicagel. Silicagelen med I

den absorberede forbindelse anbringes på en silicagelsøjle I

på 1 g, og der elueres med 10-40% DMF i toluen. Der udtages I

I fraktioner på ml. [S- (R* , R*) ] -6,6' - [carbonylbis (imino-lH- I

I 15 indol-5,2-diylcarbonyl)Jbis[8-(chlormethyl)-3,6,7,8-tetra- I

I hydro-1 -methyl-benzo [ 1,2-b: 4,3-b' ] dipyrrol-4-ol-diacetat I

elueres i fraktion 38-47 (3,4 mg). I

NMR (DMSO-d6, TMS) : δ = 2,37 (s, 6H) ; 2,40 (s, 6H) ; I 3,72 (m, 2H) ; 3,99 (m, 2H) ; 4,19 (m, 2H) ; 4,61 (m, 2H) ; 20 4,74 (m, 2H) ; 7,09 (s, 2H) ; 7,24 (m, 4H) ; 7,43 (m, 2H) ; I 7,83 (bs, 2H); 7,87 (m, 2H); 8,50 (bs, 2H); 11,12 (bs, 2H); I 11,56 (bs, 2H).

I UV (DMA+MeOH) : Xmax = 325 nm (e = 43,800); 294 nm I (e = 43,800).

I 25

I Eksempel 10 I

I Fremstilling af (S- (R*,R*)]-6,6'-(IH-indol-2,5-diyldicar- I

I bonyl) bis[8-(chlormethyl)-3,6,7,8-tetrahydro-l-methyl- I

I 30 benzo(1,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-ol (forbindelse 10). I

I 49 mg (0,146 mmol) (S)-1-(chlormethyl)-1,6-dihydro- I

I 5 - hydroxy-8 - methyl-benzo [ 1,2-b: 4,3-b'] dipyrrol-3 (2H) -carb- I

I oxylsyre-1,1-dimethylester [(Boc)CPI-phenolchlorid] omrøres I 35 ved stuetemperatur under nitrogen i 0,6 ml ethylacetat. Der I tilsættes 3 ml ethylacetat mættet med HCl-gas, og reaktionen I følges ved TLC og er fuldstændig i løbet af ca. 45 minutter.

46 I

DK 175458 B1 I

Reaktionsblandingen inddampes, og vakuum erstattes med nitro- I

gen. Det fremkomne (S)-1-(chlormethyl)-5-hydroxy-8-methyl- I

1,2,3,6-tetrahydro-benzo[1,2-b:4,3-b']dipyrrol-hydrochlorid I

(CPI-phenolchlorid-hydrochlorid) geninddampes 2 gange med I

5 CH2CI2. Det resterende CPI-phenolchlorid-hydrochloridsalt I

opløses i 1 ml tørt dimethylacetamid og omrøres ved stue- I

temperatur under nitrogen. Der tilsættes 15 mg (0,073 mmol) I

indol-2,5-dicarboxylsyre, efterfulgt af 40 mg (0,21 mmol) I

EDC. Efter 45 minutter sættes der yderligere 23 mg I

10 (0,12 mmol) EDC til reaktionsblandingen, som derefter hen- I

stilles i 1 time for at reagere. Reaktionsblandingen over- I

føres til et centrifugerer, skylles med 0,5 ml DMF og for- I

tyndes med vand til udfældning af produktet, som centri- I

fugeres og dekanteres. Det rå produkt overføres til en I

15 rundbundet kolbe med acetone, og den fremkomne opløsning I

inddampes under vakuum. Det rå produkt overtrækkes på 0,5 g I

silicagel og chromatograferes over en silicagelsøjle på 6 g I

fremstillet i 20% DMF i toluen og elueres med samme opløs- I

ningsmiddel under opsamling af fraktioner på 1 ml. [S- I

I 20 (R* , R* ) ] - 6 , 6 ' - (IH-indol-2,5-diyldicarbonyl) bis [8-(chlor- I

I methyl)-3 , 6,7,8-tetrahydro-l-methyl-benzo[l,2-b:4,3-b']di- I

I pyrrol-4-ol opsamles i fraktion 22-47, og der fås 31 mg efter I

I inddampning til tørhed. I

NMR (d6-DMSO, TMS) : δ = 2,33 (s, 3H) ; 2,36 (s, 3H) ; I

I 25 3,54-3,68 (t, 2H) ; 3,79-3,96 (m, 3H) ; 3,98-4,11 (t, 2H) ; I 4,23-4,44 (bs, IH); 4,50-4,60 (d, IH); 4,62-4,75 (t, IH) ; I 7,02 (S, IH); 7,05 (s, IH); 7,22 (s, IH); 7,44-7,53 (d, I IH); 7,53-7,62 (d, IH) ; -7,62-7,73 (bs, IH); 7,95 (s, IH); I ' 7,98 (S, IH); 9,60-9,75 (bs, IH); 9,80 (s, IH); 10,66 (s, I 30 IH); 10,73 (s, IH); 11,93 (s, IH).

DK 175458 B1

Eksempel 11

Fremstilling af [S-(R*,R*)]-N,N'-bis[2-[[1-(chlormethyl)- Η 1,6-dihydro-5-hydroxy-8-methylbenzo[l,2-b:4,3-b']dipyrrol- 5 3(2H)-yl]carbonyl]~lH-indol-5-yl]-lH-indol-2,5-dicarboxamid (forbindelse 11)

Del A - Fremstilling af 5,5’-[lH-indol-2,5-diylbis-H (carbonylimino)bi s-IH-indol-2 -carboxylsyre-diethylester.

10 200 mg (0,49 mmol) indol-2,5-dicarboxylsyre omrøres H ved stuetemperatur under nitrogen i 4 ml tør DMF. Hertil H sættes der 400 mg (1,96 mmol) 5-amino-indol-2-carboxylsyre- ethylester og 200 mg (1,05 mmol) EDC. Efter 3 dage overføres reaktionsblandingen til et centrifugerør og fortyndes med H 15 vand. Det udfældede faste stof centrifugeres, og den oven- stående væske dekanteres. Remanensen vaskes med acetone, hvorved der fås 78 mg 5,51 -[IH-indol-2,5-diylbis(carbonyl- imino) bis-lH-indol-2-carboxylsyre-diethylester. Der fås yderligere 5,5'-[IH-indol-2,5-diylbis(carbonylimino)bis-1H- 20 indol-2-carboxylsyre-diethylester fra de ovenævnte acetone- vaskninger ved koncentrering til tørhed og chromatografering I over 40 g silicagel under eluering med 10-20% DMF i toluen.

Der opsamles fraktioner på 15 ml, og der fås 83 mg af 5,5'- (lH-indol-2,5-diylbis(carbonylimino)bis-IH-indol-2-carboxyl - I 25 syre-diethylesteren efter inddampning til tørhed af fraktion 35-40.

Del B - Fremstilling af 5,5'- [lH-indol-2,5-diylbis- I (carbonylimino)]bis-lH-indol-2-carboxylsyre.

I 30 161 mg (0,28 mol) 5,5'-[lH-indol-2,5-diylbis(car- I bonylimino)]bis-lH-indol-2-carboxylsyre-diethylester opløses I under omrøring under nitrogen ved stuetemperatur i 5 ml I pyridin og 5 ml absolut ethanol. Til den fremkomne opløsning I sættes der 1 ml 1 N NaOH, som får lov til at henstå i 5 I 35 timer. Opløsningsmidlet inddampes derefter hovedsageligt under vakuum, der tilsættes vand, og reaktionsblandingen frysetørres. Det fremkomne rå produkt overtrækkes på 1,5 g

48 I

DK 175458 B1 I

celite og sættes til toppen af en C-18 silicagelsøjle på 15 I

g i omvendt fase. Søjlen elueres med følgende: 50% DMF i vand I

(200 ml); 60% DMF i vand (100 ml); 70% DMF og 30% vand (100 I

ml) ; 80% DMF og 20% vand (300 ml). Der opsamles fraktioner I

5 på 5 ml, som analyseres ved TLC. 5,5'-[lH-indol-2,5-diyl- I

bis (carbonylimino)]bis-IH-indol-2-carboxylsyre (46 mg) fore- I

ligger i fraktion 7-21. I

Del C - Omsætning af 5,5’-[lH-indol-2,5-diylbis(car- I

10 bonyl imino)) bis-IH-indol- 2-carboxylsyre med (Boc) CPI-^phenol- I

chlorid. I

59 mg (0,176 mmol) (S)-1- (chiormethyl)-1,6-dihydro- I

5-hydroxy-8-methyl-benzo[1,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-carb- I

oxylsyre-1,1-dimethylester [(Boc)CPI-phenolchlorid] omrøres I

15 ved stuetemperatur under nitrogen i mørke i 45 minutter i I

1 ml ethylacetat og 4 ml ethylacetat mættet med HCl-gas. I

TLC viser efter 30 minutter, at omsætningen er fuldstændig. I

Reaktionsblandingen inddampes i vakuum og geninddampes 2 I

gange med CH2CI2, idet der ved tilførsel af nitrogen hver I

20 gang fås (S)-1-(chlormethyl)-5-hydroxy-8-methyl-1,2,3,6- I

tetrahydro-benzo [1,2-b:4,3-b' ] dipyrrol-hydrochlorid (CPI-I phenolchlorid-hydrochlorid). CPI-phenolchlorid-hydrochlorid- I saltet opløses under omrøring under nitrogen i mørke i 1 ml I tør DMA. Opløsningen behandles med 46 mg (0,088 mmol) 5,5'- 25 [lH-indol-2,5-diylbis (carbonylimino) ]bis-IH-indol-2-carboxyl- I syre og 50 mg (0,26 mmol) EDC. Efter 30 minutter tilsættes I der yderligere 26 mg (0,13 mmol) EDC. Reaktionsblandingen I får lov til at henstå i yderligere 1 time, hvorefter den I overføres til et centrifugerør og vaskes ind med 1 ml DMF'.

I 30 Der tilsættes vand til udfældning af produktet, som derpå I opsamles ved centrifugering. Det faste stof vaskes ind i en I RB-kolbe med acetone og inddampes i vakuum. Remanensen over- I trækkes på 1 g silicagel og chromatograferes på en silicagel- søjle på 9 g. Søjlen elueres med 25% DMF i toluen efterfulgt I 35 af 30% og 40% DMF i toluen. Der opsamles fraktioner på 2 I ml, som analyseres ved TLC. [S-(R*,R*)]-N,N'-bis[2-[[1- I DK 175458 B1 Η (chlormethyl) -1,6-dihydro-5-hydroxy-8-methylbenzotl,2-b:4,3-H b ' ] dipyrrol-3 (2H)-yl]carbonyl]-lH-indol-5-yl]lH-indol-2,5- H dicarboxamid foreligger i fraktion 31-80. Urent produkt konstateres i fraktion 8-30. Disse genchromatograferes over H 5 en silicagelsøjle på 4,5 g elueret med 20-30% DMF i toluen.

Der opsamles fraktioner på 1 ml. [S-(R*,R*)]-N,N'-bis[2- [[1-(chlormethyl)-1,6-dihydro-5-hydroxy-8-methylbenzo[1,2- b: 4,3-b' ] dipyrrol-3 (2H) -yl] carbonyl] -lH-indol-5-yl] -lH-indol- 2,5-dicarboxamid foreligger i fraktion 25-75. Ved kombinering 10 af materialet fra de to chromatografier fås der 47 mg [S-H (R*,R*)J-N,N'-bis[2-[[l- (chlormethyl) -1,6-dihydro-5-hydroxy- 8-methylbenzo[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yl]carbonyl]-1H- H indol-5-yl]-IH-indol-2,5-dicarboxamid.

I NMR (dg-DMSO, TMS): δ = 2,37 (s, 6H); 3,55-3,68 (t, 15 2H) ; 3,87-3,97 (d, 2H) ; 3,97-4,10 (t, 2H) ; 4,51-4,61 (d, 2H) ; 4,61-4,77 (t, 2H) ; 7,07 (s, 2H) ; 7,14 (s, IH); 7,17 (S, IH); 7,45-7,75 (τη, 8H) ; 7,96 (s, IH); 8,23 (s, 2H) ; 8,26 (s, IH); 8,46 (s, IH); 9,82 (s, 2H) ; 10,18 (s, IH); 10,33 (s, IH); 10,75 (s, 2H); 11,66 (s, IH); 11,71 (s, IH) ; I 20 12,09 (S, IH).

UV (DMA+MeOH) : ^max = 328 nm (e = 33,560); 281 nm I (e = 38,350).

Eksempel 12 I 25 Fremstilling af [S-(R*,R*)]-2-[[l-(chlormethyl)-1,6-dihydro- I 5-hydroxy-8-methyl-benzo [1,2-b: 4,3-b' ] dipyrrol-3 (2H) -yl] car- bonyl] -N- [3- [ [1- (chlormethyl) -l, 6-dihydro-5-hydroxy-8-methyl- I benzo [l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yl]carbonyl]-IH-indol-6- yl]-lH-indol-5-carboxamid (forbindelse 12) 30 - I Del A - Fremstilling af 5-[[(2-carboxy-lH-indol-5- yl)amino]carbonyl]-IH-indol-2-carboxylsyre.

98 mg (0,42 mmol) indol-2,5-dicarboxylsyre og 86 mg I (0,42 mmol) 5-aminoindol-2-carboxylsuyre-ethylester omrøres I 35 ved stuetemperatur under nitrogen i 2 ml tørt DMF. Der til- I sættes 90 mg (0,47 mmol) EDC, og blandingen henstilles i I 25 timer for at reagere. Reaktionsblandingen fortyndes med

50 I

DK 175458 B1 I

vand og centrifugeres, og den ovenstående væske dekanteres. I

Det resterende faste stof opløses i acetone og geninddampes, I

hvorefter det chromatograferes over 20 g silicagel og elueres I

med 50% ethylacet-at i hexan, efterfulgt af 30% acetone i I

5 hexan. Der opsamles fraktioner på 15 ml og analyseres med I

TLC. 137 mg 5- [[(2-carboxy-lH-indol-5-yl)amino]carbonyl]- I

lH-indol-2-carboxylsyre-diethylester foreligger i fraktion I

8-86 i et udbytte på 78%. I

10 Del B - Fremstilling af 5-[[(2-carboxy-lH-indol-5- I

yl)amino]carbonyl]-IH-indol-2-carboxylsyre. I

I 137 mg (0,33 mmol) 5-[[(2-carboxy-lH-indol-5-yl)ami- I

I no] carbonyl]-lH-indol-2-carboxylsyre-diethylester opløses I

I under omrøring ved stuetemperatur under nitrogen i 3 ml I

I 15 pyridin og 3 ml absolut ethanol. Der tilsættes 1 ml 1 N

NaOH, og reaktionsblandingen henstår i 29 timer for at rea- I gere, i hvilket tidsrum der fremkommer en fældning. Der I tilsættes 1 ml 1 N HC1, og reaktionsblandingen koncentreres I på en rotationsfordamper. Der sættes vand til remanensen, I 20 hvorved der fremkommer en uklar opløsning. Opløsningen fryse- I tørres. Remanensen overtrækkes på 1 g celite, som derefter I sættes til toppen af en C-18 silicagelsøjle på 10 g i omvendt I fase. Søjlen elueres med 40% DMF i vand til 80% DMF i vand I med 10%'s forøgelser (hver 100 ml). Der opsamles fraktioner I 25 på 5 ml. 5-[ [ (2-carboxy-lH-indol-5-yl)amino]carbonyl]-1H- indol-2-carboxylsyre foreligger i fraktion 30-70 (40 mg).

I Del C - Omsætning af 5-[[(2-carboxy-lH-indol-5-yl)- I amino]carbonyl]-IH-indol-2-carboxylsyre med (Boc)CPI -phenol - I 30 chlorid.

I 74 mg (0,22 mmol) (S)-1-(chlormethyl)-1,6-dihydro-5- I hydroxy-8-methyl-benzo[l,2-b:4,3-b'] dipyrrol-3 (2H) -carboxyl- I syre-1,1-dimethylester [(Boc)CPI-phenolchlorid] omrøres ved H stuetemperatur under nitrogen i mørke i 45 minutter i 1 ml I 35 ethylacetat, og ethylacetatet mættes med 5 ml HCl-gas. Reak- tionsbiandingen inddampes under vakuum og geninddampes I DK 175458 B1 2 gange med CH2CI2, og der indføres nitrogen hver gang, hvorved der fås (S) -1- (chlormethyl) -5-hydroxy-8-methyl- Η 1,2,3,6-tetrahydro-benzo[l,2-b:4,3-b' ]dipyrrol-hydrochlorid H (CPI-phenolchlorid-hydrochlorid). CPI-phenolchlorid-hydro- H 5 chloridsaltet opløses under omrøring og under nitrogen i mørke i 1 ml tør DMA. Der sættes 40 mg (0,11 mmol) 5-[[(2- carboxy-lH-indol-5-yl) amino] carbonyl] -IH-indol-2-carboxylsyre og 75 mg (0,39 mmol) EDO til reaktionsblandingen, som henstår H i 30 minutter for at reagere, hvorefter der tilsættes yder- 10 ligere 20 mg (0,10 mmol) EDC, som henstår i yderligere 1 H time for at reagere. Opløsningen overføres til et centrifu- H gerør og vaskes ind med 1 ml DMF, fortyndes med vand til H udfældning af produktet og centrifugeres. Den ovenstående H væske dekanteres. Det faste stof vaskes ind i en RB-kolbe 15 med acetone og geninddampes i vakuum.

Det rå produkt overtrækkes på 1 g silicagel og anbrin- ges i toppen af en silicagelsøjle på 9 g fremstillet med 20% DMF og 80% toluen. Søjlen elueres med 20% DMF i toluen og derefter med 30% DMF i toluen. Der opsamles fraktioner 20 på 2 ml. Fraktionerne 21-78 opsamles og inddampes, og rema- nensen genchromatograferes over en silicagelsøjle på 5 g og elueres med 20% DMF i toluen. Der opsamles fraktioner på 1 I ml. [S-(R*,R*)]-2-[[1-(chlormethyl)-1,6-dihydro-5-hydroxy- 8-methyl-benzo[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3 (2H) -yl]carbonyl] -N- I 25 [3-[[l- (chlormethyl)-1,6-dihydro-5-hydroxy-8-methylbenzo[l,2- b: 4,3-b' ]dipyrrol-3 (2H) -yl]carbonyl] -lH-indol-6-yl] -lH-indol- I 5-carboxamid (49 mg) foreligger i fraktion 20-45 i 56%'s I udbytte.

I NMR (dg-DMSO, TMS) : 5 = 2,37 (s, 6H) ; 3,54-3,68 (t, I 30 2H) ; 3,87-3,97 (d, 2H) ; 3,98-4,10 (t, 2H) ; 4,50-4,60 (d, I 2H) ; 4,61-4,77 (q, 2H) ; 7,07 (s, 2H) ; 7,13 (s, IH); 7,29 I (S, IH); 7,45-7,52 (d, IH); 7,55-7,73 (m, 4H) ; 7,91 (s, I IH); 8,23 (s, IH); 8,45 (s, IH); 9,82 (s, IH); 9,84 (s, I IH); 10,18 (s, IH); 10,75 (s, IH); 10,76 (s, IH); 11,65 (s, I 35 IH); 12,00 (s, IH).

DK 175458 B1 52

UV (DMA+MeOH) : Xmax = 328 nm (e = 36,830); 292 nm I

(€ = 43,800) .

Eksempel 13 I

5

Fremstilling af IS-(R*,R*)]-5-[[1-(chlormethyl)-1,6-dihydro- I

5-hydroxy-8-methylbenzo [1,2-b:4,3-b' ]dipyrrol-3 (2H) -yl] - I

carbonyl)-N- [2-[ [1-(chlormethyl) -1,6-dihydro-5-hydroxy-8- I

I methylbenzo (1,2-b: 4,3-b ' ] dipyrrol-3 (2H)-yl] carbonyl)-IH- I

I 10 indol-5-yl]-lH-indol-2-carboxamid (forbindelse 13) I

I - Del A - Fremstilling af 5-[[(5-carboxy-lH-indol-2- I

I yl)carbonyl]amino]-lH-indol-2-carboxylsyre-diethylester.

I 65 mg (0,28 mmol) indol-2,5-dicarboxylsyre-5-ethyl- I 15 ester omrøres ved stuetemperatur under nitrogen i 1 ml tørt DMF. Der tilsættes 57 mg (0,28 mmol) 5-amino-indol-2-carb- I oxylsyre og 60 mg (31 mmol) EDC. Efter 24 timer fortyndes I reaktionsblandingen med vand, og de faste stoffer opsamles I ved filtrering. Det resterende faste stof opløses i acetone I 20 og inddampes over på 2 g silicagel. Dette materiale sættes I til toppen af en silicagelsøjle på 18 g og elueres med 10% I DMF i toluen. 5-[I(5-carboxy-lH-indol-2-yl)carbonyl]amino]- Η lH-indol-2-carboxylsyre-diethylester (75 mg) foreligger i fraktioner i et udbytte på 64%.

I 25

Del B -Fremstilling af 5-[[(5-carboxy-IH-indol-2- yl)carbonyl]amino]-IH-indol-2-carboxylsyre.

75 mg (0,18 mmol) 5-[{(5-carboxy-lH-indol-2-yl)car- bonyl] amino]-lH-indol-2-carboxylsyre-diethylester omrøres 30 ved stuetemperatur under nitrogen i 2 ml pyridin, 2 ml ab- H solut ethanol og 600 /fl 1 N NaOH i 120 timer ved 25°C. Derpå tilsættes der yderligere 1 ml 1 N NaOH, og reaktionsblandin- gen opvarmes i 20 timer ved 50°C. Der tilsættes derefter 1,6 ml 1 N HC1, og reaktionsblandingen inddampes i vakuum.

35 Remanensen overtrækkes på 1 g celite og anbringes i en C-18 silicagelsøjle på 18 g. Søjlen elueres med 50% DMF i vand til 80% DMF i vand (hver 100 ml med 10%'s forøgelse). Der op- DK 175458 B1 samles fraktioner på 5 ml og analyseres ved TLC. 5- [ [ (5-carboxy-lH-indol-2-yl) carbonyl] amino] -lH-indol-2-carboxylsyre foreligger i fraktion 5-77.

5 Del C - Omsætning af 5- {[ (5-carboxy-lH-indol-2-yl)car- bonyl]amino]-IH-indol-2-carboxylsyre med (Boc)CPI-phenol-chlorid.

121 mg (0,36 mmol) (S) -1- (chlormethyl) -1,6-dihydro-5-hydroxy-8-methyl-benzo (1,2-b:4,3-b' ] dipyrrol-3 (2H) -carboxyl-10 syre-1,1-dimethylester [ (Boc)CPI-phenolchlorid] omrøres ved stuetemperatur under nitrogen i mørke i 30 minutter i 2 ml H ethylacetat og 8 ml ethylacetat mættet med HCl-gas. Efter H 30 minutter viser TLC, at omsætningen er fuldstændig. Reak- H tionsblandingen inddampes i vakuum og geninddampes 2 gange 15 med CH2Cl2, hvorved der ved indførsel af nitrogen hver gang fås (S)-1 (chlormethyl)-5-hydroxy-8-methyl-1,2,3,6-tetrahydro- benzo [1,2-b:4,3-b'] dipyrrol-hydrochlorid (CPI-phenolchlorid- -hydrochlorid). CPI-phenol chlorid-hydrochloridsaltet opløses under omrøring under nitrogen i mørke i 1,5 mol tør DMA.

20 Til den fremkomne opløsning sættes der 65 mg (0,18 mmol) 5- [ [ (5-carboxy-lH-indol-2-yl)carbonyl]amino] -lH-indol-2-carb- oxylsyre og 110 mg (0,57 mmol) EDC. Efter 30 minutter be- handles reaktionsblandingen med yderligere 45 mg (0,23 mmol) I EDC og henstilles i yderligere 1,5 time for at reagere.

I 25 Reaktionsopløsningen overføres til et centrifugerør og vaskes ind med 1 ml DMF, fortyndes med vand til udfældning af pro- I duktet og centrifugeres. Den ovenstående opløsning dekante- res. Det faste stof vaskes ind i en RB-kolbe med acetone og geninddampes i vakuum. Det rå produkt overtrækkes på 1 g I 30 silicagel og anbringes på toppen af en silicagelsøjle på 10 g fremstillet i 20% DMF og 80% toluen. Søjlen elueres med I 20% DMF i toluen og derefter med 35% DMF i toluen. Der op- I samles fraktioner på 2 ml. 43 mg [S-(R*,R*)]-5-[ [l-(chlor- I methyl)-1,6-dihydro-5-hydroxy-8-methylbenzo[1,2-b:4,3-b13 di - 35 pyrrol-3 (2H) -yl] carbonyl) -N- [2- [ [1- (chlormethyl) -1,6-dihydro-5-hydroxy-8-methylbenzo[1,2-b:4,3-b'] dipyrrol-3(2H)-yl]car-

DK 175458 B1 I

bonyl)-lH-indol-5-yl]-lH-indol-2-carboxamid isoleres fra H

fraktion 25-47. I

NMR (dg-DMSO,TMS ): δ = 2,33 (s, 3H); 2,37 (s, 3H) ; I

3,50-3,70 (t, 2H); 3,78-3,97 (m, 3H) ; 3,97-4,14 (t, 2H) ; I

5 4,24-4,43 (bs, IH); 4,48-4,62 (d, IH); 4,62-4,75 (t, IH); I

7,04 (S, IH); 7,06 (s, IH); 7,16 (s, IH); 7,40-7,72 (m, I

7H) ; 8,00 (s, IH); 8,25 (s, IH) ; 9,64-9,80 (bs, IH); 9,81 I

(s, IH); 10,30 (s, IH); 10,68 (s, IH); 10,75 (s, IH); 11,70 I

(S, IH); 12,03 (s, IH); I

10 UV (DMA+MeOH): W = 326 nm sh (e = 36,830); 295 nra I

(6 = 40,030).

Eksempel 14 I 15 Fremstilling af [S-(R*,R*)]-carbonylbis[imino-lH-indol-5,2- I diylcarbonyl[1-(chlormethyl)-1,6-dihydro-8-methylbenzo[1,2- I b: 4,3-b1 ] dipyrrol-3,5 <2H) -diyl] ] ester-2,2-dimethylpropansyre I (forbindelse 14).

I DK 175458 B1 I 55 H [imino-lH-indol-5,2-diylcarbonyl [1-(chlormethyl)-1,6-dihydro- H 8-methylbenzo [1,2-b: 4,3-b' ] dipyrrol-3,5 (2H)-diyl] ] ester- 2,2-dimethylpropansyre.

I NMR (dg-DMSO,TMS): δ = 1,39 (s, 18H); 2,41 (s, 6H) ; 5 3,73 (m, 2H) ; 4,00 (m, 2H) ; 4,21 (m, 2H) ; 4,60 (m, 2H) ; 4,73 (τη, 2H) ; 7,09 (s, 2H) ; 7,25 (m, 4H) ; 7,42 (m, 2H) ; I 7,80 (bs, 2H); 7,88 (s, 2H); 8,55 {bs, 2H); 10,87 (bs, 2H) ; I 11,54 (bs, 2H) .

UV (DMA+MeOH) : λπιax = 324 nm (e = 40,000); 294 nm 10(6= 40,000).

Eksempel 15

Fremstilling af [S-(R*,R*)]-carbonylbis[imino-lH-indol-5,2- 15 diylcarbonyl[1-(chlormethyl)-1,6-dihydro-8-methylbenzo[1,2- b: 4,3 -b ’ ] di pyrrol -3,5 (2H) -diyl] ] ester-decansyre (forbin- delse 15). 1 10 mg (0,012 mmol) [S-(R*,R*)J-6,6'-[carbonylbis(imi- I 20 no-lH-indol-5,2-dicarbonyl) ] bis [ 8 - chlormethyl) -3,6,7,8-tetra- I hydro-l-methyl-benzo[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-ol opløses i | I 0,2 ml pyridin og 0,01 ml DMF. Opløsningen behandles med I 75 mg (0,23 mmol) decansyreanhydrid, og reaktionsblandingen I omrøres i mørke i 24 timer. Reaktionsblandingen tilsættes 25 derpå 0,05 ml vand og inddampes til tørhed. Remanensen vaskes H med vand og med toluen, og hvert af de uopløste materialer I opsamles ved centrifugering. Den fremkomne remanens chroma- I tograferes over en silicagelsøjle på 1,2 g elueret med 5%, I 6%, 7% og 10% DMF i toluen. Der opsamles fraktioner på 0,3 I 30 ml. Efter inddampning af fraktionerne 18-60 fås der 1,3 mg [S-(R* , R*)]-carbonylbis [imino-lH-indol-5,2-diylcarbonyl [1- I (chlormethyl)-1,6-dihydro-8-methylbenzo[I, 2-b:4,3-b1]dipyr- I rol-3,5 (2H)-diyl]]ester-decansyre.

I NMR (d6-DMSO,TMS) : δ = 0,86 (t) ; 1,24 (m) ; 1,45 (m); I 35 2,18 (t); 2,40 (s); 3,70 (m) ; 3,98 (m) ; 4,15 (m) ; 4,59 (m) ; I 4,71 (m) ; 7,08 (s); 7,27 (m) ; 7,42 (m) ; 7,80 (m) ; 7,88 (s) ? I 8,59 (bs); 11,05 (bs); 11,53 (bs).

56 DK 175458 B1 UV (DMA+MeOH) : Xmax = 324 nm (e = 40,000); 294 nm (€ = 40,000) .

Eksempel 16 5

Fremstilling af [S-(R*,R*))-6,61 -[carbonylbis((7,8-dihydro- benzo [1,2 -b: 4,3 -b') dipyrrol-6,2 (3H) -diyl) carbonyl) )bis (8- chlormethyl) -3,6,7,8- tetrahydro-l-methyl-benzo[1,2-b:4,3- b']dipyrrol-4-ol (forbindelse 16) 10 -

Del A - Fremstillingen af 6,6'-carbonylbis[3,6,7,8-tetrahydrobenzo[1,2-b:4,3-b']dipyrrol-2-carboxylsyre-ethyl-ester er beskrevet i M.A. Warpehoski, V.S. Bradford, Tetrahedron Lett., 1986, 22, 2735.

15 NMR: δ = 1,35 (t, 6H); 3,285 (t, 4H) ; 4,123 (t, 4H); 4,34 (q, 4H) ; 7,06 (s, 2H) ; 7,22 (d, 2H) ; 7,32 (d, 2H) ; 11,845 (S, 2H).

MS (El): m/z 586 (M+), 257, 230, 184, 156.

TLC: Rf = 0,14 i (25-75) acetone-hexan.

20

Del B - Fremstilling af 6,6 'carbonylbis [3,6,7,8-tetra-hydrobenzo [1,2-b: 4,3 -b1 ] dipyrrol-2-carboxylsyre-diethylester.

30 mg (0,13 mmol) 6,6 '-carbonylbis [3,6,7,8-tetrahydro-benzo [ 1,2 -b: 4,3 -b1 ] dipyrrol - 2 - carboxyl syre-ethylest er opløses 25 i 0,5 ml tør THF, og opløsningen behandles med 1 mg 4-dime-thylaminopyridin. Denne opløsning afkøles til -98eC i et flydende nitrogen-frossent methanolbad under nitrogen. De tilsættes 25 μΐ (0,14 mmol) diisopropylethylamin og derefter 35 μΐ (0,067 mmol) 1,93 M phosgen i toluen. Reaktionsblan-30 dingen omrøres ved ca. -98°C i 3 timer, ' hvorefter den opbevares i fryser ved -65°C natten over. Reaktionsblandingen omrøres ved stuetemperatur i 90 minutter. Den fortyndes med vand og ethylacetat. Ethylacetatlaget vaskes med saltopløsning, tørres og inddampes. Den rå remanens (47,9 mg) adsor-35 beres over på 0,5 g silicagel fra destilleret THF. Det fremkomne faste stof sættes til toppen af en silicagelsøjle på 5 g og elueres med 5-15% acetone i toluen. Der opsamles frak-

I DK 175458 B1 I

I 57 I

tioner på 3 ml. 6,6 ' -Carbonylbis [3,6,7,8-tetrahydrobenzo [1,2- I

I b:4,3-b']dipyrrol-2-carboxylsyre-diethylester (5,6 mg) fore- I

I ligger i fraktion 5-9. I

I 5 Del C - 7 mg (0,014 mmol) 6,6'-carbonylbis(3,6,7,8- I

I tetrahydrobenzo [1,2-b:4,3-b'] dipyrrol-2-carboxylsyre-diethyl- I

ester opløses i pyridin, og opløsningen behandles med 0,05 ml I

I IN NaOH. Reaktionsblandingen opvarmes derefter til 50°C i I

6 timer. Reaktionsblandingen gøres sur med 0,2 ml 1 N HC1, I

10 og den som et fast stof udfældede 6,61-carbonylbis[3,6,7,8- I

I tetrahydrobenzo[1,2-b:4,3-b'] dipyrrol-2-carboxylsyre-diethyl- I

ester opsamles ved centrifugering og tørres under vakuum. I

I Del D - Fremstilling af [S-(R*,R*)]-6,6'-[carbonyl- I

I 15 bis [ (7,8-dihydrobenzo [1,2-b:4,3-b'] dipyrrol-6,2 (3H)-diyDcar- I

bonyl] ] bis [8-(chlormethyl)-3,6,7,8-tetrahydro-l-methyl-benzo- I

I [1,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-ol (forbindelse 16). I

I 11 mg (0,033 mmol) (S)-1-(chlormethyl)-1,6-dihydro-5- I

I hydroxy-8-methyl-benzo [1,2-b:4,3-b' ]dipyrrol-3 (2H) -carboxyl- I

I 20 syre-1,1-dimethylester [ (Boc)CPI-phenolchlorid] opløses i I

0,2 ml ethylacetat og 0,7 ml HCl-mættet ethylacetat. Bian- I

I dingen omrøres ved stuetemperatur under nitrogen i 1 time, I

I hvorefter den inddampes under en nitrogenstrøm. Der tilsættes I

I CH2Cl2, og det resterende (S)-1-(chlormethyl)-5-hydroxy-8- I

25 methyl-1,2,3,6-tetrahydro-benzo[1,2-b:4,3-b']dipyrrol-hydro- I

.chlorid (CPI-phenolchlorid-hydrochloridsalt) geninddampes I

I to gange under en nitrogenstrøm. 6 mg (0,014 mmol) 6,6'- I

I carbonylbis [3,6,7,8-tetrahydrobenzo[1,2-b:4,3-b']dipyrrol- I

I 2-carboxylsyre-diethylester opløses i 0,3 ml DMA og sættes I

I 30 til CPI-phenolchlorid-hydrochloridsaltet. Derpå behandles I

I blandingen med 6,4 mg (0,034 mmol) EDC. Reaktionsblandingen I

omrøres under nitrogen ved stuetemperatur i 50 minutter. I

I Der tilsættes yderligere 6,4 mg (0,034 mmol) EDC, og omrørin- I

I gen fortsættes i 65 minutter. Produktet udfældes ved gradvis I

I 35 tilsætning af vand. De faste stoffer (28 mg) opsamles ved I

I centrifugering og tørres under vakuum. Dette rå produkt I

58 DK 175458 B1 adsorberes fra DMF over på 0,3 g silicagel. Produktet sættes til en silicagelsøjle på 3 g under eluering med 10%, 12%, 14%, 16% og 20% DMF i toluen. Der opsamles fraktioner på 1 ml. Efter koncentrering af fraktion 40-62 fås der 6 mg [S-5 (R*,R*) ]-6,6'-[carbonylbis[(7,8-dihydrobenzo[l,2-b:4,3-b']- dipyrrol-6,2(3H)-diyl)carbonyl))bis[8-(chlormethyl) -3,6,7,8-tetrahydro-1-methyl-benzo[1,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-ol.

NMR: δ = 2,36 (s, 6H) ; 3,3 (t, 4H) ; 3,61 (m, 2H) ; 3,92 (m, 2H) ; 4,03 (m, 2H) ; 4,16 (t, 4H) ; 4,55 {m, 2H) ; 10 4,69 (m, 2H) ; 7,01 (S, 2H) ; 7,05 (s, 2H) ; 7,27 (m, 4H) ; 7,66 (m, 2H) ; 9,79 (s, 2H) ; 10,74 (bs, 2H) ; 11,62 (bs, 2H) .

UV: *max = 353 nm (e = 28000); 286 nm (e = 45000).

TLC: Rf * 0,29 i (20-80) DMF-toluen.

15 Udgangsforbindelserne er kendte forbindelser eller kan let fremstilles ved kendte metoder, jfr. M.A. Warpehoski,

Tet. Lett., 27, 4103 (1986), W. w. Wierenga, J. Am. Chem.

Soc., 103. No. 18, 1981, D.G. Martin, J. Antibiotics 1985, 38, 746 og M.A. Warpehoski, I. Gebhart, R.C. Kelly, W.C.

20 Krueger, L.H. Li, J.P. McGovren, M.D. Prairie, N. Wicnienski og W. Wierenga, J. Med. Chem., 1988, 31, pp. 590-603.

Fremstillingen af CPI (Boc) HCl er beskrevet af R.C. Kelly, I. Gebhard, N. Wicnienski, P.A. Aristoff, P.D. John-I son, D.G. Martin, i J. Am. Chem. Soc., 1987, 109. 6837.

I 25 Spirocyclopropylcyclohexadienylforbindelserne med I formlen A og 1-(halomethyl)-1,6-hydro-5-hydroxy-8-methyl- I benzo(1,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yl-5-esterne eller uretha- I nerne (formel B) kan også fremstilles ved de fremgangsmåder I og metoder, der er omhandlet i US patentansøgning nr.

I 30 894.314, indleveret 7. august 1986 (nu opgivet), og patent- I ansøgning PCT/87/03227, indleveret 11. december 1987. Der I henvises til begge ansøgninger i den foreliggende beskri - I velse; jfr. også EP ansøgning 0.154.445 (offentliggjort I 9. november 1985).

I 35 Alle de her omhandlede forbindelser har UV-absorption I i området fra 200 nm til 380 nm. Således kan de hidtil I DK 175458 B1

I 59 I

I ukendte forbindelser ifølge opfindelsen (formel I) anvendes I

I som UV-adsorptionsmidier på tekniske og industrielle områder I

H som følger: I

I (a) tekstilmaterialer, f.eks. uld, silke, bomuld, I

5 hamp, hør, lærred og lignende; I

I (b) naturlige og syntetiske harpikser. I

Afhængigt af arten af det materiale, der skal be- I

handles, og kravene med hensyn til aktivitets- og holdbar- I

hedsgraden og andre faktorer kan forholdet af det lysfiltre- I

10 ringsmiddel, der skal inkorporeres i materialet, variere I

inden for forholdsvis vide grænser, f.eks. fra ca. 0,01% I

I til ca. 10%, fortrinsvis fra 0,1% til 2% af vægten af det I

materiale, der skal beskyttes direkte mod virkningen af UV- I

H stråler. I

15 Forbindelserne med formlen I kan især anvendes som I

I antitumormidler. Eksempler på forbindelser med formlen I I

udviser antitumoraktivitet hos P388-leukæmiske mus og viser I

også signifikant aktivitet i L1210-leukæmi- og B16 melanom- I

I . forsøgssystemerne for mus. Disse forsøgssystemer for mus I

20 kan anvendes ved forudsigelse af klinisk anvendelighed af I

I antitumormidler til mennesker (jfr. f.eks. A. Geldin et I

I al., European J. Cancer, Vol. 17, pp. 129-142, 1981; J.M. I

I Vendette, Cancer Treatment Reports, Vol. 67, pp. 767-772, I

I 1983 og J.M. Vendetti et al., Advances in Pharmacology and I

I 25 Chemotherapy, Vol. 20, pp. 1-20, 1984), og de her omhandlede I

I forbindelser (formel I) vil derfor være anvendelige ved I

kontrollen og behandlingen af påvirkelige neoplastiske (can- I

I cer) sygdomme, herunder påvirkelig leukæmi, hos mennesker, I

når de nævnte forbindelser f.eks. indgives intravenøst i I

30 doser fra 0,001 ^g/kg til ca. 10 mg/kg legemsvægt pr. dag, I

idet den nøjagtige dosis afhænger af patientens alder, vægt I

og tilstand samt indgivelsens hyppighed. I

Forbindelserne med formlen I er virksomme, når de I

indgives intravenøst (IV) i flydende opløsninger, ved bolus- I

35 injektion eller ved infusion. De foretrukne doser ligger I

fra 0,01 mikrogram/kg til 1000 mikrogram/ka ved bolus-injek- I

DK 175458 B1 I

tion og fra 0,0002 til 20 mikrogram/kg/min. ved infusion. I

Den nøjagtige dosis vil variere afhængigt af den bestemte I

forbindelse såvel som patientens alder, vægt og fysiske I

tilstand, den måde, på hvilken patienten indtager midlet I

5 samt indgivelsernes hyppighed. I

Illustrative in vivo og in vitro L1210-forsøgsdata I

for forbindelserne med formlen I er vist i tabel 1 og 2. I

Tabel 3 viser data for sammenligning af [S-(R*,R*)]-6,6'- I

[carbonylbi s (imino- lH-indol-5,2-dicarbonyl) ] bis [8- (chlor- I

10 methyl)-3,6,7,8-tetrahydro-l-methylbenzo[1,2-b:4,3-b' )dipyr- I

rol-4-ol (forbindelse 1) med (7bR)-N-[2- [(4,5,8,8a-tetra- I

hydro-7-methyl-4-oxocyclopropa- [c]pyrrolo [3,2-e] indol-2 (IH) - I

oyl) carbonyl]-IH-indol-5-yl]-2-benzofurancarboxamid I

(U-73,975) i de øvrige musesystemer, hvor der er foretaget I

15 forsøg med begge forbindelserne. Forbindelse 1 er mindst I

lige så aktiv som forbindelse U-73,975 i et hvilket som I

helst system, og i nogle, f.eks. den subkutane L1210-ana- I

lyse, viser den en overlegen virkning over adskillige dosis- I

områder. Endvidere har det vist sig, at forbindelse 1 såsom I

20 U-73,975 ikke bevirker en forhaling af døden. I

I Ifølge biologiske data for in vivo L1210 har det I vist sig, at [S-(R*,R*)]-6,6'-[carbonylbis(imino-lH-indol- I 5,2-dicarbonyl) ] bis [8- (chlormethyl) -3,6,7,8-tetrahydro-l- I methylbenzo[1,2-b:4,3-b1]dipyrrol-4-ol (forbindelse 1) er I 25 den mest aktive analog, som har en stærkt helbredende virk- I ning ved 15 Mg/kg. De i tabel 1 og 4 angivne resultater er I opnået ved anvendelse af velkendte standardmetoder (In Vivo I Cancer, Models, NIH Publication No. 84-2635, 1984).

I T/C refererer til den gennemsnitlige levetid for I 30 behandlede mus divideret med den gennemsnitlige levetid for I kontrolmus gange 100.

I Forbindelserne med formlen I kan anvendes som antibak- I terielle midler. Forbindelserne kan anvendes til kontrol af I den hastige formering af modtagelige mikrober i forskel- I 35 lige omgivelser ved anvendelse af mikrobiologiske standard- I teknikker. Sådanne omgivelser omfatter f.eks. dentalredska- I DK 175458 B1

I 61 I

I ber, der er forurenet med S. aureus. og laboratoriebænke i I

I et mikrobiologisk laboratorium, som kan renses med et præ- I

I parat indeholdende ca. 1-10% (efter vægt pr. rumfang) af en I

forbindelse med formlen I. I

DK 175458 B1 I

62 I

Tabel 1 I

li-1210 leukæmi in vivo I

IV lægemiddel vs. IP tumor doseret på 1. dag I

5 L1210 In vivo I

Forbindelse nr. Dosis (^g/kg) Bedste T/C*3 I

14 20 156 10 9 BO 165 10 6 213 (l helbredelse) 11 13 188 12 2 181 I 13 13 188 I 15 U-73,975 100 213 I 1 15 4/6 helbredelser I 3 6 106 I 8 50 194 I 2 10 169 I 20 6 5 178 (1 helbredelse) I 7 1 156 I 5 600 156 I 4 50 156 I 15 13 243 (1 helbredelse) I 2 5 16 12 243 (1/6 helbredelse) I a BDF-l -hanmus I k T/C = behandlet/kontrol x 100, idet "behandlet" er den I 30 gennemsnitlige overlevelsestid for den behandlede gruppe, I og "kontrol" er den gennemsnitlige overlevelsestid for den I ubehandlede kontrolgruppe. Dyr, som overlever i 30 dage, I betragtes som helbredte.

I DK 175458 B1 I 63

Tabel 2

In vitro biologiske data

I 5 Forbindelse nr. ID50b I

.1 0,000001 I

I 3 0,000009 I

8 0,000006 I

I 10 2 0,000001 I

I 6 0,000012 I

7 0,000004 I

I 5 0,00001 I

I 4 0,000004 I

I 15 15 0,000001 I

I 15 0,000002 I

I a Lægemidler afprøves over for L1210 leukæmiceller. I

^ Koncentrationen af lægemiddel i μg/ml, som hæmmer celle- I

20 vækst 50%, rapporteres. I

DK 175458 B1 I

Tabel 3 I

U- 73975 Forb. 1 I

5 0Db I

L-1210 i.p.a Mg/kg ioo 10-15 I

i.v. dosis

på 1- dag bedste T/C

(helbredelse)c 213 (4/6)

iO-------— -- I

OD I

L-1210 i.p.a Mg/kg 20 4 I

i.p. dosis

på 1., 5. og I

15 9. dag T/C I

(helbredelser) (4/6) (3/β) I

OD I

L-1210 sc pg/kg 100 10-25 20 i.p. dosis

på 1. dag bedste T/C

(helbredelser) (4/6) (6/6)

OD

25 B-16 i.p. Z^g/kg 15 I i.v. dosis

I . på 1. dag T/C

160 167

I 3 0 OD

I Lewis Lung i.v. Mg/kg 25 4 I i.v. dosis I på 1., 5. og

I 9. dag T/C

’ 35 147 168 I Ingen tumor Døden ikke Døden ikke I forhalet forhalet I 40 I a. i.p. = intraperitonealt og i.v. = intravenøst I b. OD optimal dosis I c. Dyr, som i disse forsøg overlever i 30 dage, betragtes I som helbredte

Claims

1. Forbindelse med formlen I I 5 CPIi - R5 - T - R’s - CPI2 I i hvilken CPI^ og CPI2, der er ens eller forskellige, betyder formel A eller B 10 I 15 1 I Υ0/\^Λν^Ν'^Λν'Ζ B I I II 25. hvilke W betyder C^-Cg-alkyl, phenyl eller hydrogen, I I X betyder azido, et halogenatom, cyanat, thiocyanat, I I isocyanat, thioisocyanat, phosphatdiester (-PO(OR)2), phos- I I phonyl (-O-PO2R), thiophosphonyl (-O-PSOR), sulfinyl (-O-SOR) I I eller sulfonyl (-0-S02R), I I 30 Y betyder hydrogen, -C{0)R, -C(S)R, -C(0)0R^, I I -S(0)2R1, -C(0)NR2R3, -C(S)NR2R3 eller -C (0)NHS02R4, I I Z betyder C^-Cg-alkyl, phenyl eller hydrogen, I I hvor R betyder Ci-C2o-alkyl, C2-Cg-alkenyl, C2-Cg- I alkynyl, phenyl, eventuelt substitueret med 1, 2 eller 3 C^- I

35 C4-alkylgrupper, ^-€3-alkoxy, halogen, Ci-C3-alkylthio, I trifluormethyl, C2-Cg-dialkylamino eller nitro, naphthyl, I DK 175458 B1 I

66 I eventuelt substitueret med i eller 2 Ci-C4-alkylgrupper, I cl'c3"a^^ox7' halogen, trifluormethyl, C2-Cg-dialkylamino, I 0^-03-alkylthio eller nitro, I betyder C1-C2o'al^yl eller phenyl, eventuelt sub- I 5 stitueret med 1, 2 eller 3 Ci-C4-alkylgrupper, C1-C3-alkoxy, halogen, C1-C3~alkylthio, trifluormethyl, C2-Cg-dialkylamino I eller nitro, I R2 og R3, der er ens eller forskellige, betyder hydro- I gen, Ci-C2o-alkyl eller phenyl, eventuelt substitueret med 10 1, 2 eller 3 C1-C4-alkylgrupper, C1-C3~alkoxy, halogen, I Ci-03-alkylthio, trifluormethyl, C2-Cg-dialkylamino eller I nitro, med det forbehold, at R2 og R3 ikke begge kan betyde I phenyl eller substitueret phenyl, I R4 betyder C^-C^-alkyl, phenyl, eventuelt substitu- I 15 eret med 1, 2 eller 3 C^-C^-alkylgrupper, C2-C3-alkoxy, halogen, C1-C2-alkylthio, trifluormethyl, C2-Cg-dialkylamino eller nitro, naphthyl, eventuelt substitueret med 1 eller 2 Ci-C4-alkylgrupper, C1-C3-alkoxy, halogen, trifluormethyl, I C2-Cg-dialkylamino, C2-C3-alkylthio eller nitro, I 20 hvor R5 og R'5, som er ens eller forskellige, betyder I en direkte binding eller en carbonylacylgruppe fra gruppen I bestående af I 1 (ii) I 25 0 I i hvilken betyder H, CH3, OH, OCH3, N02, NH2, NHNHC(0)013, I NHC(O)CgHg eller halogen, I i hvilken X3 betyder H, OH eller OCH3, I 35 I DK 175458 B1 I 67 I o xn"/ (viii) I I 5 \ l I h I i hvilken R8 betyder H, CH3 eller C2H5l I I 10 ,-( \/°H , , I I ,il/ (x) I -ii n \ I OH 0CH3 I I 15 I I m I I rO-« 'γΛ^/ f (xi) I

0 I i hvilken X8 betyder -O-, -S- eller NH, og X9 betyder -CH= I eller -N=, I

2. Forbindelse ifølge krav 1, hvori W betyder methyl.

3. Forbindelse ifølge krav 1, hvori X betyder halogen.

3. Y1 I «*.

0 I 3. i hvilken X9 og Xg har de ovenfor angivne betydninger, og I Y1 betyder H, halogen, Cx-C4-alkyl, C^-C^-alkoxy, C2-C6- I DK 175458 B1 I dialkylami.no, nitro, aminocarbonylalkyl-(Ci~C]_ø), hydroxy, I amino (-NH2>, -NHCONH2, -NHAc {NHCOCH3) eller -NHBz (NHC(O)- I -C6H5), I y, (xviib) I i hvilken X8 og har de ovenfor angivne betydninger, I

10 I γΟ^~ (χνϋί) I y®- - I 0 I I 20 i hvilken X18 betyder -CH= eller -N=, I I I (xx) I I I I 25 I V» . 11 (xxi) I 30 o I i hvilken X^q har <^e ovenfor angivne betydninger, I -c-O' H 35 II N (xxii) H DK 175458 B1 H i hvilken Rg har de ovenfor angivne betydninger, I 5 (xxiii) i hvilken Y-^ og Xg har de ovenfor angivne betydninger, I -norV 0 (xxiv) H i hvilken Y^, Xg og Xg har de ovenfor angivne betydninger, I " Άδχ I i hvilken Χχο betyder -CH= eller -N=, og Y^ har de ovenfor angivne betydninger, eller I 10 i^g6- Y1 1 i hvilken Y^ har de ovenfor angivne betydninger, DK 175458 B1 I

70 I T betyder en tetherbinding fra gruppen bestående af: I a) aminocarbonyl (-NHC(O)-), I b) carbonylamino (-C(O)NH-), I c) carbonyloxy (-0(0)0-), I 5 d) oxycarbonyl (-OC(O)-), I e) amino-tether-amino med formlen -NR^-T' -NR14-, I hvor R13 og R14, som er ens eller forskellige, I betyder hydrogen eller C^-Cg-alkyl eller tilsammen I betyder “(CH2)n_/ hvor n er 2 eller 3, hvor Τ' I 10 betyder carbonyl (-C(O)-), dicarbonyl (-C(O)C(O)-), I (-C(O) (CH2)nC(0)-) , hvor n er 1-5, (-C(O) PhC(O) -), I hvor Ph betyder 1,3- eller 1,4-phenylen, eller en I gruppe med formlen -C(O)-het-C(0)-, hvor het be- I tyder I ΛΑ — , eventuelt substitueret med 1 eller 2 C(1-4) alkyl-, I I 20 C(1-3) alkoxy-, halogen-, C(1-3)alkylthio-, tri- I I fluormethyl-, C(2-6)dialkylamino- eller nitrosub- I I stituenter, og I I f) -C (0)-het-C (O) - , når R5 og R's begge er en direkte I I binding, hvor -het- har den ovenfor angivne betyd- I 25 ning.

4. Forbindelse ifølge krav 1, hvori Y betyder hydrogen I eller er valgt fra gruppen bestående af -COR,' hvori R betyder I 30 C1-C10-alkyl.

5. Forbindelse ifølge krav 1, hvori Z betyder hydro- I gen.

6. Forbindelse ifølge krav 1, hvori T betyder gruppen I bestående af et amid (aminocarbonyl) , carbonylamino I 35 (-C(O)NH-) eller en amino-tether-amino med formlen -NR^- I T'-NR14, hvor R^3 og R14 betyder hydrogen, og Τ' betyder I DK 175458 B1 I 71 carbonyl (-C(O)-) eller en gruppe med formlen -C(0)-het-C(O) .

7. Forbindelse ifølge krav 1, hvori T betyder gruppen bestående af en amino-tether-amino med formlen -NR13-T'- NR14-, hvor R13 og R14 betyder hydrogen, og Τ' betyder car- 5 bonyl (-C(0)-) eller en gruppe med formlen -C(0)-het-C(0)-, hvor -het- er valgt fra pyrrol-2,5-diyl og fur-2,5-diyl.

8. Forbindelse ifølge krav 1, hvori R5 og R*5 er valgt fra gruppen bestående af 2-carbonylindol-5-yl, 2-car- bonyl - 6-hydroxy-7-methoxyindol-5-yl, 2-carbonyl-l,2,3,6- 10 tetrahydrobenzo[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-7-yl og 2-carbonyl-4- hydr.oxy-5-methoxy-l,2,3,6-tetrahydrobenzo[l,2-b:4,3-b' ]di- I pyrrol-7-yl. I

9. Forbindelse ifølge krav l, hvori CPI^ og CPI2, I som er ens eller forskellige, fortrinsvis betyder 1-(chlor- I I 15 methyl)-1,6-dihydro-8-methyl-5-hydroxy-benzo[1,2-b:4,3-b']- I dipyrrol-3 (2H) -yl og 4,5,8, 8a-tetrahydro-7-methyl-4-oxocyclo- I I propa[c]pyrrol(3,2-e)indol-2(IH)-yl. I

10. Forbindelse ifølge krav 1 valgt fra gruppen be- I I stående af: I I 20 [S-(R*,R*)]-6,6'-[carbonylbis(imino-lH-indol-5,2- I I dicarbonyl)]bis[8-chlormethyl)-3,6,7,8-tetrahydro-1-methyl- I I benzo[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-ol (forbindelse 1); I I [7bR-[2 (7'bR*,8’aS*),7bR*,8aS*]]-2,2'-[carbonylbis- I I (imino-lH-indol - 5,2-dicarbonyl) ) bis [1,2,8,8a-tetrahydro- I I 25 7-methyl-cyclopropa(c)pyrrolo[3,2-e]indol-4(5H)-on (forbin- I delse 2); I I (R* , S*)-N, Ν'-bis [2-[ [1-(chlormethyl)-1,6-dihydro-5- I I hydroxy-8-methylbenzo [1,2-b:4,3-b'] dipyrrol-3 (2H)-yl] car- I I bonyl]-lH-indol-5-yl]-ethandiamid (forbindelse 3); I I 30 [S- (R*,R*) ] -6,6 ' - (lH-pyrrol-2,5-diyldicarbonyl)bis[8- I I (chlormethyl)-3,6,7,8-tetrahydro-l-methyl-benzo[1,2-b:4,3- I I b']dipyrrol-4-ol (forbindelse 4); I I [S-(R*,R*)]-6,6'-(2,5-furandiyldicarbonyl)bis[8- I I (chlormethyl)-3,6, 7,8-tetrahydro-l-methyl-benzo [1,2-b:4,3- I I 35 b']dipyrrol-4-ol (forbindelse 5); I I [S- (R*,R*) ] -N,N' -bis [2-[ [1-(chlormethyl) -1,6-dihydro- I 72 DK 175458 B1 5-hydroxy-8-methylbenzo [1,2-b:4,3-b' ] dipyrrol-3 (2H) -yl] carbonyl] -lH-indol-5-yl] -2,5-furandicarboxamid (forbindelse 6); [S- (R*,R*) ] -N,N' -bis [2- [ [1- (chlormethyl) -1,6-dihydro-5-hydroxy-8-methylbenzo [1,2-b:4,3-b' ]dipyrrol-3 (2H) -yl] car-5 bonyl] - IH-indoI-5-yl]-iH-pyrrol-2,5-dicarboxamid (forbin-t delse 7) [R- (R*, S*) ] -N, N1 -bis [2- [ (1- (chlormethyl) -1,6-dihydro-5-hydroxy-8-methylbenzo [1,2-b.-4,3-b1] dipyrrol-3 (2H) -yl] carbonyl] -IH-indol-5-yl]-propandiamid (forbindelse 8); 10 (S-(R*fR*)3-6,6'-[carbonylbis(imino-lH-indol-5;2- diylcarbonyl)-bis[8-(chlormethyl)-3,6,7,8-tetrahydro-l-methyl-benzoll^-b^^-b' ] dipyrrol-4-ol-diacetat (forbin delse 9) ; [S-(R*,R*)]-6,61 -(lH-indol-2,5-diyldicarbonyl)bis[8-15 (chlormethyl)-3,6,7,8-tetrahydro-l-methyl-benzo [1,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-ol (forbindelse 10); [S- (R*,R*) ] -N,N' -bis [2- t ti- (chlormethyl) -1,6-dihydro-5-hydroxy-8-methylbenzo [1,2-b:4,3-b' ]dipyrrol-3 (2H) -yl] carbonyl]-1H-indol-5-yl]-lH-indol-2,5-dicarboxamid (forbin-20 delse 11); I [S- (R*,R*) ]-2- t [1- (chlormethyl) -1, 6-dihydro-5-hydroxy- I 8-methyl-benzo[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3 (2H) -yl] carbonyl] -N- I [3- [ (1- (chlormethyl) -1,6-dihydro-5-hydroxy-8-methylbenzo (1,2- I b:4,3-b’ ] dipyrrol-3 (2H) -yl] carbonyl] -lH-indol-6-yl] -IH-indol- , 25 5-carboxamid (forbindelse 12); I [S- (R*,R*) ] -5- [ [1- (chlormethyl)-1,6-dihydro-5-hydroxy- I · 8-methylbenzo [1,2-b:4,3-b1 ] dipyrrol-3 (2H) -yl] -carbonyl) -N- H (2- [ [1-(chlormethyl)-1,6-dihydro-5-hydroxy-8-methylbenzo[1,2- b:4,3-b' ] dipyrrol-3 (2H) -yl] carbonyl) -lH-indol-5-yl] -lH-indol- 30 2-carboxamid (forbindelse 13) ; (S- (R* , R*) ] -carbonylbis [imino-lH-indol-5,2-diylcar- H bonyl [1- (chlormethyl) -1,6-dihydro-8-methylbenzo [1,2-b:4,3- H b1 ]dipyrrol-3,5 (2H) -diyl] ] ester-2,2-dimethylpropansyre (for- bindel se 14) 35 (S-(R* ,R*) ]-carbonylbis (imino-lH-indol-5,2-diylcar- bonyl [1 - (chlormethyl) -1,6-dihydro-8-methylbenzo [1,2-b:4,3- I DK 175458 B1 b']dipyrrol-3,5(2H)-diyl]]ester-decansyre (forbindelse 15) H [S-(R*,R*)]-6,6'-[carbonylbis[(7,8-dihydrobenzo[1,2- b:4,3-b' ] dipyrrol- 6,2 (3H) -diyl) carbonyl] ] bis [8-chlormethyl) - H 5 3 , 6,7 , 8 -1etrahydro-1-methyl-benzo [ 1,2-b:4,3-b1 ] dipyrrol- 4-ol (forbindelse 16) .