DK2201121T3 - Fremgangsmåder til styring af plantefrø- og -organstørrelse - Google Patents

Claims (14)

1. Fremgangsmåde til øgning af levetiden, organstørrelsen og/eller frøstørrelsen af en plante, omfattende: at eksprimere en nukleinsyre, der koder for et dominant-negativt DA-polypeptid i plantens celler, hvor det dominant-negative DA-polypeptid omfatter en aminosyresekvens med mindst 50 % sekvensidentitet med SEQ ID NO: 1, hvilken aminosyresekvens omfatter et UIM1-domæne, et UIM2-domæne, et LIM-domæne og en mutation af R til K ved en position, der svarer til position 358 i SEQ ID NO: 1.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, yderligere omfattende at reducere eller ophæve eksprimering af et Big Brother (BB)-polypeptid i plantens celler, hvor Big Brother (BB)-polypeptidet omfatter en aminosyresekvens med mindst 50 % sekvensidentitet med SEQ ID NO: 9 og har E3 ubiquitinligase-aktivitet.

3. Fremgangsmåde til fremstilling af en plante med øget levetid, organstørrelse og/eller frøstørrelse, omfattende: at inkorporere en heterolog nukleinsyre, der koder for et dominant-negativt DA-polypeptid i en plantecelle ved hjælp af transformation, og eventuelt at inkorporere en heterolog nukleinsyre, der eksprimerer en suppressor-nukleinsyre, der reducerer ekspression af et Big Brother (BB)-polypeptid i plantecellen ved hjælp af transformation, og at regenerere planten fra en eller flere transformerede celler, hvor det dominant-negative DA-polypeptid omfatter en aminosyresekvens med mindst 50 % sekvensidentitet med SEQ ID NO: 1, hvilken aminosyresekvens omfatter et UIM1-domæne, et UIM2-domæne, et LIM-domæne og en mutation af R til K ved en position, der svarer til position 358 i SEQ ID NO: 1, og hvor Big Brother (BB)-polypeptidet omfatter en aminosyresekvens med mindst 50 % sekvensidentitet med SEQ ID NO: 9 og har E3 ubiquitinligase-aktivitet.

4. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 3, hvor planten er en højere plante.

5. Plante, der eksprimerer en heterolog nukleinsyre, der koder for et dominant-negativt DA-polypeptid, i sine celler og eventuelt har reduceret eller ophævet ekspression af et BB-polypeptid, hvor det dominant-negative DA-polypeptid omfatter en aminosyresekvens med mindst 50 % sekvensidentitet med SEQ ID NO: 1, hvilken aminosyresekvens omfatter et UIM1-domæne, et UIM2-domæne, et LIM-domæne og en mutation af R til K ved en position, der svarer til position 358 i SEQ ID NO: 1, og hvor BB-polypeptidet omfatter en aminosyresekvens med mindst 50 % sekvensidentitet med SEQ ID NO: 9.

6. Plante ifølge krav 5, som er fremstillet ved en fremgangsmåde ifølge krav 3.

7. Fremgangsmåde til ændring af levetiden, organstørrelsen og/eller frøstørrelsen af en plante, omfattende at reducere eller ophæve ekspressionen af to eller flere nukleinsyrer, der koder for DA-polypeptider, i en eller flere af plantens celler; eller fremgangsmåde til fremstilling af en plante med en ændret levetid, organstørrelse og/eller frøstørrelse, omfattende: at reducere eller ophæve ekspressionen af to eller flere nukleinsyrer, der koder for DA-polypeptider i en plantecelle, og at regenerere planten fra plantecellen, hvor DA-polypeptiderne omfatter en aminosyresekvens med mindst 50 % sekvensidentitet med SEQ ID NO: 1, hvilken aminosyresekvens omfatter et UIM1 -domæne, et UIM2-domæne og et LIM-domæne.

8. Fremgangsmåde til ændring af fænotypen af en plante, omfattende: at eksprimere en nukleinsyre, der koder for et DA-polypeptid, i plantens celler i forhold til kontrolplanter, hvor den ændrede fænotype er kendetegnet ved normal fertilitet og en eller flere blandt reduceret levetid, reduceret organstørrelse og reduceret frøstørrelse i forhold til kontrolplanter, og hvor DA-polypeptidet omfatter en aminosyresekvens med mindst 50 % sekvensidentitet med SEQ ID NO: 1, hvilken aminosyresekvens omfatter et UIM1 -domæne, et UIM2-domæne, et LIM-domæne og en R-rest ved en position, der svarer til position 358 i SEQ ID NO: 1.

9. Isoleret DA-polypeptid omfattende: en aminosyresekvens med mindst 50 % sekvensidentitet med SEQ ID NO: 1, hvilken aminosyresekvens omfatter et UIM1-domæne, et UIM2-domæne, et LIM-domæne og en mutation af R til K ved en position, der svarer til position 358 i SEQ ID NO:1.

10. Plante omfattende det isolerede DA-polypeptid ifølge krav 9, eller en isoleret nukleinsyre, der koder for et DA-polypeptid ifølge krav 9, eller en vektor omfattende den isolerede nukleinsyre, der er funktionelt forbundet med en promoter, hvor vektoren eventuelt yderligere omfatter nukleinsyresekvenser, der koder for mindst en eod-sekvens, hvor eoc/-sekvensen omfatter en aminosyresekvens med mindst 50 % sekvensidentitet med SEQ ID NO: 9 med en mutation ved en position svarende til position 44 i SEQ ID NO:9.

11. Fremgangsmåde til forlængelse af vækstperioden hos en plante, som omfatter at eksprimere DA 1R358K \ planten, hvor DA1R358K omfatter en aminosyresekvens med mindst 50% sekvensidentitet med SEQ ID NO: 1, hvilken aminosyresekvens omfatter et UIM1-domæne, et UIM2-domæne, et LIM-domæne og en R til K-mutation ved en position, der svarer til position 358 i SEQ ID NO: 1.

12. Plante omfattende: et knockout i mindst et første gen, der koder for DA1, og i mindst et andet gen, der koder for en DAR, eller et transgen, der eksprimerer et RNA interferens-konstrukt(er), der reducerer ekspressionen af DA1 eller DAR, hvor varianten interfererer med begrænsningen i varighed af proliferativ vækst og øger frø- og/eller organstørrelse, hvor planten eventuelt yderligere omfatter genetiske kombinationer med mutationer, der forstyrrer funktionerne af BB-gener, hvor BB-generne omfatter en nukleotidsekvens med mindst 50 % sekvensidentitet med SEQ ID NO: 10, og hvor DA1 eller DAR omfatter en aminosyresekvens med mindst 50 % sekvensidentitet med SEQ ID NO: 1, hvilken aminosyresekvens omfatter et UIM1-domæne, et UIIVI2-domæne og et LIM-domæne.

13. Fremgangsmåde eller plante ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 12, hvor det dominant-negative DA-protein, DA-polypeptid, DA1, DAR eller DA1R358K omfatter øn aminosyresekvens med mindst 80 % identitet med en eller flere blandt SEQ ID NOS: 1 og 301 til 330.

14. Fremgangsmåde eller plante ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 13, hvor det dominant-negative DA-protein, DA-polypeptid, DA1, DAR eller Dair358k omfatter aminosyresekvensen ifølge en blandt SEQ ID NOS: 1 og 301 til 330.