DK2427486T3

DK2427486T3 - FREMGANGSMÅDE TIL OPRENSNING af ALBUMIN

Info

Publication number: DK2427486T3
Application number: DK10718977.1T
Authority: DK
Inventors: Lee Edward Blackwell; Jason Cameron; Phillip Harvey Morton; Steven James Burton; Richard Anthony Dodd; Mark Jonathan Burton
Original assignee: Novozymes Biopharma Dk As
Priority date: 2009-05-07
Filing date: 2010-05-07
Publication date: 2015-05-26
Also published as: EP2427489A1; EP2427486A1; WO2010128142A1; EP2427489B1; CN102549012B; US9403898B2; EP2427486B1; US20120149873A1; WO2010128143A1; CN102549012A

Claims

1. Fremgangsmåde til oprensning af albumin, en variant eller et fragment deraf, et fusionsprotein, som omfatter albumin, en variant eller et fragment deraf, eller et konjugat, som omfatter albumin, en variant eller et fragment deraf, hvilken fremgangsmåde omfatter: (i) fyldning afen fast matrix, som omfatter 2-chlor-4,6-di(2’-sulfoanilino)-S-triazin bundet til en fast bærer, med en vandig opløsning, som omfatter albumin, en variant eller et fragment deraf, et fusionsprotein, som omfatter albumin, en variant eller et fragment deraf, eller et konjugat, som omfatter albumin, en variant eller et fragment deraf; (ii) vask af matrixen for at fjerne mindst nogle urenheder; og (iii) eluering af albuminet, et albumin, en variant eller et fragment deraf, et fusionsprotein, som omfatter albumin, en variant eller et fragment deraf, eller et konjugat, som omfatter albumin, en variant eller et fragment deraf, fra matrixen for at tilvejebringe et oprenset albumin, en variant eller et fragment deraf, et fusionsprotein, som omfatter albumin, en variant eller et fragment deraf, eller et konjugat, som omfatter albumin, en variant eller et fragment deraf; hvor: fragmentet er valgt blandt domæne I, domæne II og domæne III samt kombinationer af to af disse; og varianten omfatter en sekvens, som udviser mindst 60% sekvensidentitet med sekvensen for HSA (SEQ ID NO: 1).

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, hvor albuminet stammer fra et pattedyr, såsom et menneske, en kanin, en mus, en ged, et får, en ko; eller fra fugle, såsom høns.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, hvor albuminet, en variant eller et fragment deraf, et fusionsprotein, som omfatter albumin, en variant eller et fragment deraf, eller et konjugat, som omfatter albumin, en variant eller et fragment deraf, omfatter en sekvens, som udviser mindst 70% sekvensidentitet med sekvensen for HSA (SEQ ID NO: 1), fortrinsvis mindst 80%, fortrinsvis mindst 85% identitet, mere foretrukkent mindst 90% identitet, endnu mere foretrukkent mindst 95% identitet, endnu mere foretrukkent mindst 97% sekvensidentitet og mest foretrukkent mindst 99% sekvensidentitet.

4. Fremgangsmåde ifølge krav 3, hvor sekvensen, som udviser mindst 80% sekvensidentitet med HSA, omfatter mindst 10 på hinanden følgende aminosyrer, mere foretrukkent mindst 25 aminosyrer, mere foretrukkent mindst 50 aminosyrer og mest foretrukkent mindst 100 aminosyrer.

5. Fremgangsmåde ifølge krav 1, hvor den vandige opløsning, som omfatter albumin, en variant eller et fragment deraf, et fusionsprotein, som omfatter albumin, en variant eller et fragment deraf, eller et konjugat, som omfatter albumin, en variant eller et fragment deraf, er valgt blandt en fermenteringssupernatant, en delvist oprenset fermenteringssupernatant, serum, en serumfraktion eller et delvist oprenset serum eller en delvist oprenset serumfraktion, mælk fra transgene husdyr eller ekstrakt fra transgene planter.

6. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller krav 5, hvor den vandige opløsning, som omfatter albumin, en variant eller et fragment deraf, et fusionsprotein, som omfatter albumin, en variant eller et fragment deraf, eller et konjugat, som omfatter albumin, en variant eller et fragment deraf, som fyldes på matrixen, har en pH i intervallet 4-9,5, mere foretrukkent 4-9, endnu mere foretrukkent 4-8 og mest foretrukkent 4-7.

7. Fremgangsmåde ifølge krav 1, hvor albuminet, en variant eller et fragment deraf, et fusionsprotein, som omfatter albumin, en variant eller et fragment deraf, eller et konjugat, som omfatter albumin, en variant eller et fragment deraf, elueres fra matrixen ved anvendelse af en vandig opløsning, som omfatter et salt af en fedtsyre eller thiocyanatsalt, eller elueres ved pH 10 eller derover.

8. Fremgangsmåde ifølge krav 7, hvor saltet af fedtsyren har en opløselighed i vand på mere end 10 mM.

9. Fremgangsmåde ifølge krav 8, hvor fedtsyresaltet er valgt blandt salte af butyrat, pentanoat, hexanoat, heptanoat, octanoat, nonanoat og decanoat.

10. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 7-9, hvor koncentrationen af fedtsyresaltet i elueringsbufferen ligger i intervallet fra 5 mM til 0,5M, fortrinsvis i intervallet fra 10 mM til 100 mM.

11. Fremgangsmåde ifølge krav 7, hvor thiocyanatsaltet er valgt blandt natrium-, kalium-, ammonium-, bariumsalte og salte med andre alkalimetaller fra Gruppe 1 eller 2.

12. Fremgangsmåde ifølge krav 7 eller 11, hvor thiocyanatsaltet anvendes i en koncentration i intervallet fra 5 mM til 1M, fortrinsvis i intervallet fra 10 mM til 500 mM.