DK2984175T3 - Dna-guidet dna-interferens ved en prokaryotisk argonaute - Google Patents

Claims (16)

1. Fremgangsmåde til spaltning af en dobbeltstrenget nucleinsyre-målsekvens der har en første streng og en anden streng, i en værtscelle, hvilken fremgangsmåde omfatter: at kontakte den dobbeltstrengede nucleinsyre-målsekvens med et første kompleks, der omfatter et første prokaryotisk argonaute-protein og en første guide-nucleinsyre, hvor den første guide-nucleinsyre hybridiserer med den første streng af den dobbeltstrengede nucleinsyre-målsekvens i værtscellen, og det første kompleks spalter den første streng af den dobbeltstrengede nucleinsyre-målsekvens; og et andet kompleks der omfatter et andet prokaryot argonaute-protein og en anden guide-nucleinsyre, hvor den anden guide-nucleinsyre hybridiserer med den anden streng af den dobbeltstrengede nucleinsyre-målsekvens i værtscellen, og det andet kompleks spalter den anden streng af den dobbeltstrengede nucleinsyre målsekvens; hvilken fremgangsmåden ikke er en fremgangsmåde til terapeutisk behandling af et menneske eller dyr krop, og hvor det første og det andet prokaryote argonaute-protein er valgt fra gruppen, der består af et Thermus termophilus argonaute-(TtAgo)-protein eller et Synechococcus elongatus argonaute-(SeAgo)-protein.

2. Fremgangsmåden ifølge krav 1, hvor spaltningen af den dobbeltstrengede nucleinsyre-målsekvens resulterer i et snit med blunt-ende.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, hvor spaltningen af den dobbeltstrengede nucleinsyre-målsekvens resulterer i et snit med staggeret ende.

4. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 3, hvor den dobbeltstrengede nucleinsyre-målsekvens omfatter DNA.

5. Fremgangsmåde ifølge krav 4, hvor et genomisk DNA i en eukaryot celle omfatter den dobbeltstrengede nucleinsyre-målsekvens.

6. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 3, hvor den dobbeltstrengede nucleinsyre-målsekvens omfatter RNA.

7. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 6, hvor den første guide-nucleinsyre og den anden guide-nucleinsyre omfatter DNA.

8. Fremgangsmåden ifølge krav 7, hvor den første guide-nucleinsyre og den anden guide-nucleinsyre yderligere omfatter RNA.

9. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 6, hvor den første guide-nucleinsyre og den anden guide-nucleinsyre omfatter RNA.

10. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, hvor værtscellen er en eukaryot celle.

11. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, hvor det første prokaryote argonaute-protein og det andet prokaryote argonaute-protein udtrykkes fra en eller flere polynucleotider, som koder for det første prokaryote argonaute-protein og det andet prokaryote argonaute-protein.

12. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, hvor den første guide-nucleinsyre, den anden guide-nucleinsyre eller den første og anden guide-nucleinsyre udtrykkes fra en eller flere polynucleotider, der koder for den første guide-nucleinsyre, den anden guide-nucleinsyre, henholdsvis den første og den anden guide-nucleinsyre.

13. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, hvor kontakten resulterer i en deletion i den dobbeltstrengede nucleinsyre-målsekvens.

14. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, hvor kontakten resulterer i en insertion af mindst en del af et polynucleotid i den dobbeltstrengede nucleinsyre-målsekvens.

15. Fremgangsmåden ifølge krav 14, hvor den dobbeltstrengede nucleinsyre-målsekvens omfatter DNA, den første guide-nucleinsyre omfatter DNA, og den anden guide-nucleinsyre omfatter DNA.

16. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, hvor det første prokaryote argonaute-protein og det andet prokaryote argonaute-protein er det samme protein.