EA045000B1 - Комбинация противовирусных средств, набор и способ лечения на ее основе - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к области медицины и фармацевтической промышленности, а именно к комбинации для лечения ВИЧ-инфекции, содержащей (i) аммониевую соль 5'аминокарбонилфосфонат-3'-азидо-3'-дезокситимидина и (й) аналог цитидина, выбранный из эмтрицитабина и ламивудина, при массовом соотношении агента (i) к агенту (и) от 250:1 до 1:250; к набору, включающему указанную комбинацию и инструкцию по ее применению; а также к способу лечения ВИЧ-инфекции у млекопитающего, в том числе у человека, путем введения млекопитающему, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества предложенной комбинации. Изобретение обеспечивает расширение арсенала комбинированных противовирусных препаратов для лечения ВИЧ-инфекции, а также повышение эффективности такого лечения.

Description

Область техники

Изобретение относится к области медицины и фармацевтической промышленности и предназначено для лечения вирусных инфекций.

Более конкретно, изобретение касается комбинированного противовирусного средства, обладающего активностью против ВИЧ, а именно предложены комбинации аммониевой соли 5'аминокарбонилфосфонат-3'-азидо-3'-дезокситимидина (6НР) с эмтрицитабином (FTC) или с ламивудином (3ТС).

Предшествующий уровень техники

ВИЧ-инфекция - длительно текущая инфекционная болезнь, развивающаяся в результате инфицирования вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ). При ВИЧ-инфекции прогрессирует поражение иммунной системы, приводящее к состоянию, известному под названием синдром приобретенного иммунного дефицита (СПИД), при котором у больного развиваются оппортунистические заболевания: тяжелые формы инфекций, вызванных условно-патогенными возбудителями, и некоторые онкологические заболевания.

Зараженный человек остается источником инфекции пожизненно. ВИЧ-инфекция без лечения прогрессирует в течение 3-10 лет и заканчивается гибелью зараженного лица.

Разнообразие клинических проявлений ВИЧ-инфекции и возникающих на ее фоне оппортунистических заболеваний, длительное течение болезни сделало актуальным разработку лекарственных препаратов для лечения ВИЧ-инфицированных и больных СПИДом. В настоящее время известны следующие группы препаратов: нуклеозидные, нуклеотидные и ненуклеозидные ингибиторы вирусной обратной транскриптазы; протеазные и интегразные ингибиторы; ингибиторы фузии. В разработке находится ряд соединений, активных в отношении других участков жизнедеятельности ВИЧ.

Наиболее широкое применение нашли нуклеозидные ингибиторы вирусной обратной транскриптазы. В их числе: зидовудин (АЗТ), ламивудин (3ТС), эмтрицитабин (FTC), диданозин (DDI), фосфазид, тенофовир (TDF) и другие.

Необходимость длительного, практически пожизненного применения препаратов приводит к токсическим проявлениям и развитию лекарственной устойчивости вируса (резистентности). По некоторым данным резистентность к зидовудину (АЗТ) развивается через 6 инфекционных циклов, к ламивудину (3ТС) - через 4 инфекционных цикла, к фосфазиду - через 10 инфекционных циклов [Machardo J. et al. Antiviral activity and resistance profile of phosphazide, a novel prodrug of AZT/Nucleosides & Nucleotides, 1999, V.18, pp.901-906]. Использование комбинаций противовирусных препаратов позволяет более эффективно подавлять ВИЧ за счет воздействия на разные участки вируса. Так, в некоторых исследованиях [патент RU 2139059 С1, опубл. 10.10.1999; патент RU 2331420 С2, опубл. 20.08.2008, Perez-Olmeda M. et al. In vitro analysis of synergism and antagonism of different nucleoside/nucleotide analogue combinations on the inhibition of human immunodeficiency virus type 1 replication/Journal of Medical Virology, 2009, V.81, pp.211-216] было показано, что ламивудин (3ТС) или его фторированный аналог эмтрицитабин (FTC) в сочетании с зидовудином или фосфазидом, или абакавиром, или тенофовиром либо усиливают действие второго компонента (синергический эффект), либо снижают цитотоксическое действие второго компонента, либо обладают и тем и другим из указанных свойств. Однако каждая из применяемых комбинаций имеет свои недостатки. К недостаткам комбинации ламивудина с абакавиром можно отнести:

развитие реакции гиперчувствительности замедленного типа на абакавир [Покровский В.В. и др. Протоколы диспансерного наблюдения и лечения больных ВИЧ-инфекцией / Эпидемиология и инфекционные болезни, 2014, № 6, 43 с.];

отсутствие синергического эффекта [Perez-Olmeda M. et al. In vitro analysis of synergism and antagonism of different nucleoside/nucleotide analogue combinations on the inhibition of human immunodeficiency virus type 1 replication /Journal of Medical Virology, 2009, V. 81, pp. 211-216].

К недостаткам комбинации эмтрицитабина с тенофовиром можно отнести:

высокую нефротоксичность и нарушение минерализации костных тканей [Покровский В.В. и др. Протоколы диспансерного наблюдения и лечения больных ВИЧ-инфекцией / Эпидемиология и инфекционные болезни, 2014, № 6, 43 с].

Недостатками комбинации ламивудина с зидовудином являются [Покровский В.В. и др. Протоколы диспансерного наблюдения и лечения больных ВИЧ-инфекцией / Эпидемиология и инфекционные болезни, 2014, № 6, 43 с.]:

токсичность, проявляющаяся в основном в развитии анемии, нейтропении и лейкопении;

мутагенный эффект, проявляющийся в способности индуцировать генные мутации у индикаторных микроорганизмов в системе метаболической активации in vitro;

недостаточная эффективность лечения.

К недостаткам комбинации ламивудина с фосфазидом можно отнести:

двукратный прием препаратов, что приводит к недостаточной приверженности к терапии у пациентов и, как следствие, к не очень высокой эффективности лечения [Покровский В.В. и др. Протоколы диспансерного наблюдения и лечения больных ВИЧ-инфекцией / Эпидемиология и инфекционные болезни, 2014, № 6, 43 с.];

- 1 045000 недостаточно высокий индекс селективности [Khandazhinskaya A.L. et al. 5'-Aminocarbonyl Phosphonates as New Zidovudine Depot Forms: Antiviral Properties, Intracellular Transformations, and Pharmacokinetic Parameters / Drug Metabolism and Disposition, 2009, V.37, N3, pp. 494-501].

Авторами настоящего изобретения было установлено, что замена зидовудина, или абакавира, или тенофовира на аммониевую соль 5'-аминокарбонилфосфонат-3'-азидо-3'-дезокситимидина (6НР) в известных комбинациях с ламивудином или с эмтрицитабином приводит к существенному снижению токсических проявлений, характерных для этих препаратов.

Результаты доклинических испытаний показали, что такой препарат как аммониевая соль 3'аминокарбонилфосфонат-3'-азидо-3'-дезокситимидина (6НР), в отличие от абакавира, имеет отрицательную реакцию гиперчувствительности замедленного типа [Хандажинская А.Л. и др. 5'-Фосфонаты AZT: достижения и перспективы в лечении и профилактике ВИЧ-инфекции / Acta Naturae, 2013, V.5, N3, рр. 57-65].

Результаты доклинических испытаний острой токсичности на мышах линии BALB и крысах Вистар показали, что 6НР является малотоксичным препаратом [Хандажинская А.Л. и др. 5'-Фосфонаты AZT: достижения и перспективы в лечении и профилактике ВИЧ-инфекции / Acta Naturae, 2013, V. 5, N.3, pp.57-65; Galegov G.A. Nikavir (phosphazide), an antiretroviral agent: anti-hiv activity, toxicology, pharmacokinetics and some perspectives of its clinical use /Антибиотики и Химиотерапия, 2004, Т. 49, № 7, с. 3-8]. Средняя летальная доза (LD₅₀) при внутрибрюшинном введении мышам составила для 6НР >5 г/кг, для фосфазида 2,3 г/кг, при внутрижелудочном введении крысам - более 40 г/кг для 6НР и 13 г/кг для фосфазида.

Препарат 6НР, в отличие от зидовудина, не проявил мутагенного эффекта, проявляющегося в способности индуцировать генные мутации у индикаторных микроорганизмов в системе метаболической активации in vitro (тест Эймса) [Хандажинская А.Л. и др. 5'-Фосфонаты AZT: достижения и перспективы в лечении и профилактике ВИЧ-инфекции/Acta Naturae, 2013, V.5, N.3, рр. 57-65].

Также препарат 6НР не проявлял токсичности характерной для тенофовира (нефротоксичность и снижения плотности костных тканей) [Кравченко А.В. и др. Безопасность и переносимость препарата 6НР у взрослых ВИЧ-инфицированных больных, ранее не получавших АРВТ/ВИЧ-инфекция и иммуносупрессия, 2015, Т. 7, № 4, с.64-73].

На основании результатов определения активности обратной транскриптазы ВИЧ в МТ-4 клетках проведена оценка противовирусного действия 6НР. Было обнаружено, что индекс селективности у 6НР значительно выше, чем у азидотимидина и фосфазида [Khandazhinskaya A.L. et al. 5'-Aminocarbonyl Phosphonates as New Zidovudine Depot Forms: Antiviral Properties, Intracellular Transformations, and Pharmacokinetic Parameters/Drug Metabolism and Disposition, 2009, V.37, N.3, pp. 494-501].

Препарат 6НР в организме медленно генерирует зидовудин, следовательно, увеличивается время действия 6НР и появляется возможность для однократного суточного приема препарата [Сизова Н.В. и др. Высокоэффективная жидкостная хроматография для подбора оптимальных дозировок и курса лечения лекарственным препаратом 6НР группы ингибиторов обратной транскриптазы / Медицинский академический журнал, 2015, Т.15, № 4, с. 76-81].

Таким образом, низкая токсичность и однократный суточный прием комбинации, дают возможность повысить приверженность пациентов к лечению и, в конечном счете, улучшить эффективность химиотерапии ВИЧ-инфекции.

Наиболее близким к настоящему изобретению (прототипом) является комбинация фосфазида с ламивудином [патент RU2331420 С2, опубл. 20.08.2008].

Однако, как уже отмечалось выше, недостатками данной комбинации является двукратный суточный прием, невысокая эффективность лечения и недостаточно высокий индекс селективности.

Раскрытие изобретения

Задача настоящего изобретения состояла в разработке комбинированного средства, обладающего активностью в отношении ВИЧ-инфекции, лишенного указанных в прототипе недостатков.

Технический результат, достигаемый настоящим изобретением, заключается в расширении арсенала комбинированных противовирусных препаратов для лечения ВИЧ-инфекции, а также в повышении эффективности такого лечения.

В рамках настоящей заявки было установлено, что замена фосфазида на 6НР в известной комбинации с ламивудином приводит к достоверному росту эффективности лечения. В связи с тем, что 6НР, как и фосфазид, в организме млекопитающего генерирует зидовудин [Skoblov Y. et al. Intracellular metabolism and pharmacokinetics of 5'-hydrogenphosphonate of 3'-azido-2',3'-dideoxythymidine, a prodrug of 3'-azido-2', 3'-dideoxythymidine /Antiviral Research, 2004, V.63, N.2, pp.107-113; Khandazhinskaya A.L. et al. 5'Aminocarbonyl Phosphonates as New Zidovudine Depot Forms: Antiviral Properties, Intracellular Transformations, and Pharmacokinetic Parameters/Drug Metabolism and Disposition, 2009, V.37, N.3, pp.494-501; Сизова Н.В. и др. Высокоэффективная жидкостная хроматография для подбора оптимальных дозировок и курса лечения лекарственным препаратом 6НР группы ингибиторов обратной транскриптазы / Медицинский академический журнал, 2015, Т.15, № 4, с.76-81], его использование в комбинации с ламивудином вместо фосфазида не должно было приводить к указанному преимуществу (повышение эффективности лече

- 2 045000 ния). В клеточных экспериментах 6НР показал меньшую эффективность, чем фосфазид [Хандажинская А.Л. и др. 5'-Фосфонаты AZT: достижения и перспективы в лечении и профилактике ВИЧинфекции/Acta Naturae, 2013, V.5, N3, рр. 57-65], однако в клинических исследованиях эффективность 6НР оказалась выше, чем у фосфазида.

Таким образом, полученные результаты могут быть отнесены к неожиданным, предсказать которые заранее было невозможно.

Указанный технический результат достигается комбинацией для лечения ВИЧ-инфекции, которая содержит (i) аммониевую соль 5'-аминокарбонилфосфонат-3'-азидо-3'-дезокситимидина (6НР) и (ii) аналог цитидина, выбранный из эмтрицитабина (FTC) и ламивудина (3ТС), при массовом соотношении агента (i) к агенту (ii) от 250:1 до 1:250.

В одном из предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения массовое соотношение (i) аммониевой соли 5'-аминокарбонилфосфонат-3'-азидо-3'-дезокситимидина и (ii) эмтрицитабина или ламивудина составляет от 1:50 до 50:1, еще более предпочтительно - от 1:10 до 10:1.

Предлагаемая комбинация противовирусных средств может дополнительно содержать фармацевтически приемлемый носитель, и предпочтительно предназначена для перорального введения, например, может быть выполнена в виде таблетки или в виде капсулы, в том числе для размещения в блистерной упаковке.

Комбинация 6НР и эмтрицитабина или комбинация 6НР и ламивудина может быть предназначена для одновременного или раздельного, например, последовательного введения. Как и в прототипе, при последовательном введении промежуток времени между введением ингибиторов не должен быть слишком большим. Он может составлять от нескольких минут до 3 ч. Предпочтительным является одновременное введение. Количество 6НР, необходимое для лечения, а также выбор между эмтрицитабином и ламивудином может варьироваться в зависимости от способа введения, особенностей протекания ВИЧинфекции, возраста и состояния пациента, и может быть определено в каждом конкретном случае лечащим врачом. При этом используемые дозы находятся в пределах от 1 до 250 мг на кг веса в день, предпочтительно в пределах 2-100 мг/кг/день, а наиболее предпочтительно 5-50 мг/кг/день каждого ингибитора.

Технический результат также достигается набором для лечения ВИЧ-инфекции, включающим предложенную комбинацию (i) аммониевой соли 5'-аминокарбонилфосфонат-3'-азидо-3'дезокситимидина (6НР) и (ii) аналога цитидина, выбранного из эмтрицитабина (FTC) и ламивудина (3ТС), и инструкцию по применению указанной комбинации.

Технический результат, в том числе, достигается способом лечения ВИЧ-инфекции у млекопитающего, в том числе у человека, путем введения млекопитающему, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества комбинации 6НР с эмтрицитабином или комбинации 6НР с ламивудином.

Используемый в рамках настоящего изобретения термин лечение относится к облегчению симптомов конкретного расстройства у пациента или к улучшению определяемого параметра, связанного с конкретным расстройством, и может включать супрессию рецидива симптомов у бессимптомного пациента, например у такого пациента, у которого вирусная инфекция стала латентной. Лечение может включать профилактику, которая относится к предотвращению заболевания или состояния или к предупреждению появления симптомов такого заболевания или состояния у пациента.

Термин терапевтически эффективное означает количество агентов (i) и (ii), требующееся для облегчения состояния пациента, как это понимают практикующие врачи в области лечения СПИД и ВИЧинфекции. Предпочтительно, цели лечения состоят в подавлении вирусной нагрузки, восстановлении и сохранении иммунологической функции, улучшении качества жизни и уменьшении заболеваемости и смертности, связанных с ВИЧ-инфекцией.

6НР с эмтрицитабином или ламивудином могут быть использованы в терапевтических целях в виде субстанций. Однако предпочтительно введение указанных ингибиторов совместно с фармацевтически приемлемыми носителями.

В качестве фармацевтически приемлемых носителей могут быть использованы различные добавки, используемые при производстве готовых лекарственных форм (таблетки, капсулы, свечи, инфузионные растворы и др.) совместимые с другими ингредиентами препарата и не оказывающие неблагоприятное воздействие на пациента.

В силу свойств молекул 6НР, эмтрицитабина и ламивудина, особенностей механизма их воздействия на ВИЧ внутри клеток наибольший интерес представляют препараты для перорального, парентерального и ректального введения. Также препараты могут быть изготовлены любым из известных в фармацевтике способов, которые концептуально включают в себя ряд этапов: смешение и гранулирование ингибиторов с твердыми или жидкими носителями; формирование продукта в виде дискретных унифицированных лекарственных форм.

Для перорального введения могут использоваться таблетки, капсулы, растворы для приема внутрь и другие известные в фармацевтике стандартные лекарственные формы. Таблетки и капсулы могут содержать стандартные наполнители, необходимые как для технологии их изготовления, так и для достижения необходимых качественных и количественных показателей, отвечающих требованиям соответствующей

- 3 045000 фармакопеи. Примерами наполнителей могут быть лактоза, маннит, крахмалы, модифицированные крахмалы, целлюлоза и ее производные, желатин, стеариновая кислота или ее соли, увлажнители, отдушки, красители.

Пероральные жидкие препараты могут быть изготовлены либо в виде растворов (водные или масляные суспензии, растворы, эмульсии, сиропы и др.), либо в виде сухих продуктов, которые перед непосредственным применением подлежат разведению водой или другими растворителями.

Препараты для парентерального введения (например, для инфузий) могут быть изготовлены в виде стандартных флаконов, ампул, заполненных шприцев и др. Также лекарства должны изготавливаться в условиях стерильности и могут содержать различные консерванты, буферирующие агенты, стабилизаторы, изотонические агенты. Лиофилизованные формы перед использованием должны смешиваться с апирогенным стерильным растворителем.

Готовые лекарственные формы для ректального введения могут изготавливаться в виде суппозиториев в унифицированных формах. Также твердые формы изготавливаются, как правило, с использованием подходящего носителя путем смешения ингибитора с твердым или расплавленным носителем с последующим формованием из расплава при охлаждении.

Помимо вышеотмеченного, фармацевтические композиции могут быть изготовлены с использованием модифицированных соединений, приводящих к пролонгированному высвобождению ингибиторов внутри организма.

Лучшие варианты осуществления изобретения.

Настоящее изобретение иллюстрируется, но не ограничивается, приводимыми далее примерами.

Пример 1. Комбинированное противовирусное средство в форме таблетки.

Вариант 1. __________________________________________

6НР	600 мг
Эмтрицитабин	200 мг
Кальция карбонат	200 мг
Стеарат магния	6 мг
Аэросил	3 мг

Вариант 2.

6НР	600 мг
Ламивудин	300 мг
Кальция карбонат	200 мг
Стеарат магния	6 мг
Аэросил	3 мг

Пример 2. Набор в виде блистерной упаковки, содержащей два ряда таблеток по 10 штук разного цвета.

Вариант 1. _________________________________________

1 ряд - таблетки желтого цвета следующего состава:
6НР	600 мг
Кальция карбонат	200 мг
Стеарат магния	6 мг
Аэросил	3 мг
Хинолиновый желтый Е104	2 мг
2 ряд - таблетки белого цвета следующего состава:
Эмтрицитабин	200 мг
Крахмал прежелатинизированный	12 мг
Аэросил	2 мг
Кроскармелоза натрия	12 мг
Лактоза	118 мг
Целлюлоза микрокристаллическая	40 мг
Стеарат магния	4 мг

Вариант 2.

1 ряд - таблетки желтого цвета следующего состава:
6НР	600 мг
Кальция карбонат	55 мг
Целлюлоза микрокристаллическая	18 мг
Аэросил	6 мг
Магния стеарат	6 мг
Хинолиновый желтый Е104	2 мг
2 ряд - таблетки белого цвета следующего состава:
Ламивудин	300 мг
Лактоза	21 мг
Г идроксипропилметилцеллюлоза	45 мг
Повидон	12 мг
Стеарат магния	2 мг

- 4 045000

Пример 3. Набор в виде блистерной упаковки, содержащей два ряда капсул по 10 штук разного цвета.

Вариант 1.

1 ряд - капсулы желтого цвета следующего состава:
6НР	200 мг
Кальция карбонат	170 мг
Целлюлоза микрокристаллическая	55 мг
Аэросил	20 мг
2 ряд - капсулы белого цвета следующего состава:
Эмтрицитабин	200 мг
Целлюлоза микрокристаллическая	137,75 мг
Кросповидон	7 мг
Повидон	3,5 мг
Лактоза	85 мг
Стеарат магния	1,75 мг

Вариант 2.

1 ряд - капсулы желтого цвета следующего состава:
6НР	200 мг
Кальция карбонат	170 мг
Целлюлоза микрокристаллическая	55 мг
Аэросил	20 мг
2 ряд - капсулы белого цвета следующего состава:
Ламивудин	150 мг
Лактоза	85 мг
Аэросил	20 мг

Пример 4. Комбинированное противовирусное средство в форме раствора для инъекций.

Вариант 1. _______________________________

6НР	20 мг
Эмтрицитабин	200 мг
Бензиловый спирт	100 мг
Глюкофурол 75	1000 мг
Вода для инъекций	до 3 мл

Вариант 2.

6НР	20 мг
Ламивудин	200 мг
Бензиловый спирт	100 мг
Глюкофурол 75	1000 мг
Вода для инъекций	до 3 мл

Пример 5. Комбинированное противовирусное средство в форме свечей.

Вариант 1. ________________________________

6НР	500 мг
Эмтрицитабин	2 мг
Витепсол	1498 мг

Вариант 2.

6НР	500 мг
Ламивудин	2 мг
Витепсол	1498 мг

Пример 6. Клиническое изучение схем, содержащих 6НР и ламивудин (II фаза).

Было проведено многоцентровое, рандомизированное, частично слепое клиническое исследование II фазы по эффективности и безопасности препарата 6НР в сравнении с препаратом фосфазид на фоне стандартной терапии, состоящей из ламивудина и эфавиренза, у ВИЧ-инфицированных больных, ранее не получавших антиретровирусной терапии.

ВИЧ-инфицированные пациенты (125 человек) были рандомизированы в соотношении 1:1:1:1:1 в одну из групп приема препарата 6НР (с дозами в 600, 800, 1000 и 1200 мг один раз в день) или в группу сравнения, принимающую Фосфазид (Ф-АЗТ) (400 мг два раза в день). Стандартная терапия была одинаковой у всех пяти групп и включала в себя 150 мг ламивудина 2 раза в сутки и 600 мг эфавиренза один раз в день.

Период исследуемой терапии длился 24 недели. Были предусмотрены визиты на 1-й, 2-й, 4-й, 8-й, 12-й, 16-й и 24-й неделе от начала исследования для оценки параметров безопасности и эффективности проводимой терапии.

В единственном случае у пациента было отмечено нежелательное явление, связанное с применением 6НР или ламивудина и потребовавшее вывод из исследования - у пациента в группе с максимальной дозой 6НР (1200 мг) наблюдалось снижение уровня гемоглобина в крови до 75 г/л. Пациент был выведен из исследования, назначено соответствующее лечение. Тем не менее, это не оказало существенного влияния на оценку эффективности 6НР в целом. Эффективность лечения суммарно у всех групп с 6НР ока

- 5 045000 залась сопоставимой с эффективностью в группе сравнения и составила 85 и 84%, соответственно, считая на всех пациентов, или 89,5 и 87,5%, соответственно, на пациентов, закончивших терапию.

У групп с наименьшими дозами 6НР (600 мг и 800 мг в сутки) эффективность лечения оказалась значимо выше, чем у группы сравнения.

Результаты динамики лабораторных маркеров эффективности антиретровирусной терапии (количества в крови РНК ВИЧ) в группах с наименьшими дозами препарата 6НР (1 и 2 группы) приведены в табл. 1.

Таблица 1

Уровень РНК ВИЧ (вирусная нагрузка) коп/мл.
	1 группа 600 мг 6НР	2 группа 800 мг 6НР	Фосфазид 800 мг
До начала лечения
медиана	23 400	50 754	36 000
максимум	2 000 000	4 700 000	3 100 000
минимум	1 600	3 000	7 600
Кол-во пациентов с РНК ВИЧ > 100000 коп/мл	5	9	5
Через 24 недели
Пациенты, завершившие исследование	23	24	24
Пациенты с РНК/ВИЧ < 50 коп/мл, (%)*	88/95,7	92/95,8	84/87,5

* с учетом всех пациентов/с учетом пациентов, завершивших исследование. Из приведенных данных следует, что:

для всех пациентов, завершивших исследование, значимое снижение вирусной нагрузки до уровня менее 50 коп/мл к 24 неделе лечения наблюдалось у 95,7% больных в 1 группе, 95,8% во 2 группе и 87,5% пациентов группы сравнения;

количество больных с высоким уровнем РНК ВИЧ (>100000 коп/мл) до лечения составило: 5 пациентов в 1 группе и в группе сравнения и 9 пациентов во 2 группе. Через 24 недели лечения вирусная нагрузка у данных пациентов снизилась до неопределяемого уровня (менее 50 коп/мл) в 100% случаев в 1 группе и в группе сравнения и в 89% случаев во 2 группе.

Таким образом, во всех группах пациентов к 24 неделе лечения отмечалось статистически достоверное снижение вирусной нагрузки. В целом по 4 группам эффективность не уступала эффективности в группе сравнения. Для групп с низкими дозами 6НР (600 и 800 мг) эффективность лечения была выше, чем у группы сравнения.

Через 24 недели терапии максимальные значения среднего содержания и медианы количества CD₄+T-лимфоцитов зарегистрированы у больных 1 группы. У пациентов 2-4 групп также отмечено дос товерное увеличение количества CD₄+Т-лимфоцитов спустя 24 недели исследования, однако прирост клеток (по сравнению с пациентами 1 группы) был менее значимым (Р<0,05-0,01).

Результаты динамики количества CD₄+T-лимфоцитов в процессе лечения и изменение их числа по сравнению с исходными значениями в группах с наименьшими дозами препарата 6НР (1 и 2 группы) и группы сравнения приведены в табл. 2.

Таблица 2

Количество СО4+Т-ли
	1 группа 600 мг 6НР
До начал
M+SD минимум-максимум Медиана	416,7+173,1 170-959 383
24-я ι
M+SD минимум-максимум Медиана	589,4+190,8 268-1039 592
Изменение количества CDd
M+SD минимум-максимум Медиана	186,2+174,0 -204-+500 164

[мфоцитов (клеток/мкл)
2 группа 800 мг 6НР	Фосфазид 800 мг
га лечения
348,9+137,8	398,7+169,8
179-734	143-967
333	355
неделя
488,9+150,0	510,3+196,8
230-754	74-1050
495,5	490
+Т-лимфоцитов к 24-й неделе
134,0+122,9	103,2+181,4
-44-+390	-287-+429
106,5	135

Приведенные данные свидетельствуют об иммунологической эффективности терапевтических ре

- 6 045000 жимов, содержащих 6НР и ламивудин. Увеличение медианы количества CD₄+Т-лимфоцитов через 24 недели лечения наблюдалось у пациентов всех групп. Максимальный результат увеличения медианы количества CD₄+Т-лимфоцитов (164 клетки/мкл) был отмечен у пациентов 1 группы (600 мг/сутки препарата 6НР).

Пример 7. Изучение анти-ВИЧ активности исследуемой комбинации in vitro.

Анти-ВИЧ-1 активность исследуемой комбинации изучали на высокочувствительной к вирусу иммунодефицита человека культуре клеток МТ-4. В качестве источника вируса использовали штамм ВИЧ1_899A, из коллекции вирусов ФГБУ НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского Минздрава России. Перевиваемые лимфобластоидные клетки человека МТ-4 из коллекции культур клеток ФГБУ НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского Минздрава России культивировали в среде RPMI-1640 (производства ФГБУ НИИ Полиомиелита и вирусных энцефалитов РАМН) с 10% сыворотки эмбрионов коров (производства ФГБУ НИИ Полиомиелита и вирусных энцефалитов РАМН) и 100 мкг/мл гентамицина.

К клеткам добавляли исследуемое средство и инфицировали вирусом в дозе 0,01 ТЦИД₅₀/клетка.

Инкубировали культуры клеток при 37°С в атмосфере с 5% CO2 и 98% влажностью в течении 3-6 дней.

Учет результатов проводили окрашиванием клеток с помощью тетразолиевого красителя (метод МТТ) со спектрофотометрией и световой микроскопией, по давлению накопления антигена ВИЧ р24 в культуральной жидкости инфицированных клеток, определяемого с помощью метода иммуноферментного анализа как описано в документе [Федюк Н.В. и др. Выявление и количественное определение антигенов вируса иммунодефицита человека типов 1 и 2 / Вопросы вирусологии, 1992, № 3, с. 135-138].

Полученные экспериментальные данные приведены в табл. 3-6.

Таблица 3

Анти-ВИЧ-1 активность комбинации 6НР и эмтрицитабина в отношении штамма ВИЧ-1 в культуре клеток МТ-4
Препарат	Концентрация препарата, мкг/мл	Оптическая плотность (μ+s)	Ингибирование р24, %
6НР	0,05	0,420+0,03	57,2+4,2
0,1	0,313+0,002	72,7+0,4
эмтрицитабин	0,005	0,745+0,12	14,5+5,9
0,01	0,620+0,09	41,0+7,1
0,05	0,283+0,05	85,4+3,5
0,1	0,217+0,009	89,6+1,2
6НРэмтрицитабин	0,05+0,01	0,278+0,06	80,5+5,4
0,05+0,05	0,185+0,03	91,4+3,2
0,05+0,1	0,179+0,05	92,8+1,9
0,1+0,005	0,269+0,08	83,6+2,2
0,1+0,01	0,203+0,04	88,5+3,7
0,1+0,05	0,177+0,02	90,3+4,0
0,1+0,1	0,214+0,03	92,7+6,1
Таблица 4 Анти-ВИЧ-1 активность комбинации 6НР и ламивудина в отношении штамма ВИЧ-1 в культуре клеток МТ-4 Концентрация Оптическая Препарат Ингибирование р24, % препарата, мкг/мл плотность (μ+s) _________0,05__0,420+0,03__57,2+4,2_________ 0,1 0,313+0,002 72,7+0,4 0,005__0,719+0,1__13,7+6,3__________ _________0,01__0,551+0,06 38,2+9,1 ламивудин ________ppg__0,241+0,07__83,2+12_________ 0,1 0,230+0,001 84,7+0,2 0,05+0,01__0,241+0,04__83,2+6,6_________ 0,05+0,05__0,176+0,02__92,6+2,5_________ 6НР. 0,05+0,1__0,173+0,02__93,1+2,7_________ 0,1+0,005__0,228+0,02__85,1+2,8_________ ламивудин 0,1+0,01__0,194+0,03__90,0+4,9_________ 0,1+0,05__0,179+0,02__92,2+3,8_________ 0,1+0,1________ 0,2+0,01 94,1+8,5_________

Таблица 5

Количественные характеристики ингибирования ВИЧ-1 _________комбинацией 6НР и эмтрицитабина________

Препарат	Ю5о, мкг/мл	FIC
индивидуальная	в смеси	0,73
6НР	0,2	0,1
эмтрицитабин	0,22	0,051

-

Claims (12)

1. Таблица 6

   Количественные характеристики ингибирования ВИЧ-1 комбинацией 6НР и ламивудина

   Препарат ID₅o, мкг/мл FIC индивидуальная в смеси 0,6

   6НР 0,2 од ламивудин ОД 0,01

   Таким образом, в результате изучения анти-ВИЧ активности нуклеозидных ингибиторов 6НР, эмтрицитабина (FTC), ламивудина (ЗТС) и комбинаций 6НР с FTC и 6НР с ЗТСв отношении штамма ВИЧ1 на культуре клеток МТ-4 установлено, что сочетания 6НР и эмтрицитабина, а также 6НР и ламивудина проявляют синергизм в отношении ингибирования репродукции ВИЧ-1.

   При пассировании вируса в описанных условиях установлено, что падение действующей концентрации 6НР в присутствии ламивудина или эмтрицитабина наступает на 60-70 дней позже по сравнению с использованием одного лишь 6НР. Концентрации 6НР в сравнительных опытах были идентичны.

   ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Комбинация для лечения ВИЧ-инфекции, содержащая (i) аммониевую соль 5'аминокарбонилфосфонат-3'-азидо-3'-дезокситимидина и (й) аналог цитидина, выбранный из эмтрицитабина и ламивудина, при массовом соотношении агента (i) к агенту (й) от 250:1 до 1:250.
2. 2. Комбинация по п.1, характеризующаяся тем, что дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель.
3. 3. Комбинация по п.1 или 2, характеризующаяся тем, что массовое соотношение агента (i) к агенту (й) составляет от 1:50 до 50:1.
4. 4. Комбинация по п.1 или 2, характеризующаяся тем, что массовое соотношение агента (i) к агенту (й) составляет от 1:10 до 10:1.
5. 5. Комбинация по п.1 или 2, характеризующаяся тем, что предназначена для перорального введения.
6. 6. Комбинация по п.5, характеризующаяся тем, что выполнена в виде таблетки, в том числе для размещения в блистерной упаковке.
7. 7. Комбинация по п.5, характеризующаяся тем, что выполнена в виде капсулы, в том числе для размещения в блистерной упаковке.
8. 8. Комбинация по п.1 или 2, характеризующаяся тем, что предназначена для одновременного введения агентов (i) и (й).
9. 9. Комбинация по п.1 или 2, характеризующаяся тем, что предназначена для последовательного введения агентов (i) и (й).
10. 10. Набор для лечения ВИЧ-инфекции, включающий комбинацию по любому из пп.1-9 и инструкцию по применению указанной комбинации.
11. 11. Способ лечения ВИЧ-инфекции у млекопитающего, характеризующийся тем, что включает введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества комбинации по любому из пп.1-9.
12. 12. Способ по п.11, характеризующийся тем, что млекопитающим является человек.

    Евразийская патентная организация, ЕАПВ

    Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2