EP2013195A1 - Composes c-glycopeptides gem-difluores, leur preparation et leur utilisation notamment pour la preservation de materiaux biologiques. - Google Patents

Composes c-glycopeptides gem-difluores, leur preparation et leur utilisation notamment pour la preservation de materiaux biologiques.

Info

Publication number
EP2013195A1
EP2013195A1 EP07731371A EP07731371A EP2013195A1 EP 2013195 A1 EP2013195 A1 EP 2013195A1 EP 07731371 A EP07731371 A EP 07731371A EP 07731371 A EP07731371 A EP 07731371A EP 2013195 A1 EP2013195 A1 EP 2013195A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
och
compound
mmol
gem
nmr
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP07731371A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Géraldine CASTELOT DELIENCOURT-GODEFROY
Jean-Charles Quirion
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institut National des Sciences Appliquees de Rouen
Original Assignee
Institut National des Sciences Appliquees de Rouen
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institut National des Sciences Appliquees de Rouen filed Critical Institut National des Sciences Appliquees de Rouen
Publication of EP2013195A1 publication Critical patent/EP2013195A1/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D309/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings
    • C07D309/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D309/08—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D309/10—Oxygen atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/60—Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D307/18—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D307/20—Oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H7/00—Compounds containing non-saccharide radicals linked to saccharide radicals by a carbon-to-carbon bond
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/52—Stabilizers
    • A61K2800/524—Preservatives

Definitions

  • the invention relates to a process for the synthesis of gem-difluorinated C-glycopeptide compounds. It applies more particularly, but not exclusively, to the preparation of compounds or compositions that can be used in particular for the preservation of biological materials such as cells, tissues and organs at different temperatures, but also in the treatment of inflammation.
  • glycoproteins due to the presence of a saccharide bond (bond involving oxygen said to anomeric position), are fragile vis-à-vis several enzyme systems including glycosidase enzymes and are also sensitive to acid-base hydrolyses, which makes their synthesis more difficult.
  • the CF 2 group is particularly resistant to biochemical degradation processes and thus allows the synthesis of non-hydrolyzable structures.
  • the Applicant has developed gem-difluoroglycopeptides which have demonstrated a very high activity of preserving different cell lines at temperatures ranging from -196 ° C to + 37 ° C. Indeed, the structural changes made compared to native compounds and the observation of a true anti-apoptosis effect, that is to say no cell death, at physiological temperatures have led the Applicant to extend the spectrum of activity of the compounds. These compounds have been named AAGP for Anti Aging GlycoProteins.
  • Such compounds would be useful for many applications such as the preservation of cells, platelets, tissues and organs.
  • Preservation is more generally understood to include preservation at different temperatures including cryopreservation up to temperatures of -196 ° C.
  • compounds used as admixtures during storage and having good stability could be useful for preserving biological materials, particularly in the medical field: - to maintain whole human organs such as kidneys, hearts and livers to transplant without time constraint, - to preserve cells or delicate tissues with a minimum of damage and long enough to allow their possibly international distribution, to preserve blood platelets and different cells,
  • the object of the invention is to solve these disadvantages.
  • n is an integer from 3 to 4,
  • R represents a hydrogen atom, a linear or branched alkyl group, benzyl, acetyl, trimethylsilyl, tert-butyldimethylsilyl, tert-butyldiphenylsilyl, R represents OR, NR "R"', N 3 , or a phthalimide,
  • R “and R” which may be identical or different, represent a hydrogen atom or a linear or branched alkyl, aryl, benzyl, benzoyl, acetyl, alkyloxycarbonyl, allyloxycarbonyl or benzyloxycarbonyl group,
  • R 1 represents a hydrogen atom or a linear or branched alkyl group, benzyl, alkylcarbamate, allylcarbamate, benzylcarbamate, acetyl, R 1 may also represent an amino acid, but in this case R 2 represents only OR,
  • R 2 represents an amino acid, but in this case R 1 represents a hydrogen atom or a linear or branched alkyl group, benzyl, alkylcarbamate, allylcarbamate, benzylcarbamate, acetyl, R 2 represents OR when R 1 represents an amino acid, R 3 represents a hydrogen atom or a free or protected alcohol function, as well as its derivatives in the base state, from addition to a mineral or organic acid, hydrate or solvate physiologically or pharmaceutically acceptable.
  • the linear or branched alkyl groups may be groups having 1 to 10 carbon atoms.
  • Said amino acid may be an alanine or a glycine or a proline.
  • physiologically acceptable is meant compatible with the skin, lips, scalp and / or hair.
  • the subject of the invention is also a medicinal product comprising, as active ingredient, at least one gem-difluorinated C-glycopeptide compound of formula I as defined above.
  • the present invention relates to the use of at least one gem-difluorinated C-glycopeptide compound of formula I as defined above for the preparation of medicaments for treating inflammation.
  • the invention also relates to the use of a gem-difluorinated C-glycopeptide compound of formula I for the preparation of compounds or compositions that can be used for preserving or cryopreserving biological materials such as fibroblasts.
  • compositions comprising at least one gem-difluorinated C-glycopeptide compound of formula I as defined above.
  • composition according to the invention may comprise a gem-difluorinated C-glycopeptide compound of formula I alone or as a mixture and in any proportion.
  • composition according to the invention may be intended for a cosmetic or pharmaceutical use, especially a dermatological one.
  • composition may be ingested, injected or applied to the skin, lips, scalp and / or hair.
  • composition according to the invention may be in any of the galenical forms normally used.
  • composition may comprise a medium and / or a physiologically or pharmaceutically acceptable carrier.
  • the active principles may be administered in unit dosage forms, in admixture with conventional pharmaceutically acceptable carriers.
  • suitable unit dosage forms include oral forms such as tablets, capsules, powders, granules and oral solutions or suspensions, topical administration forms, implants, subcutaneous dosage forms, cutaneous, intramuscular, intravenous, intranasal or intraocular and forms of rectal administration.
  • compositions thus obtained may also contain preservatives.
  • compositions may be added in these compositions.
  • amount of compound according to the invention and other possible active principles in such compositions may vary according to the applications, the age and the weight of the patient or the user if appropriate.
  • composition according to the invention may comprise a medium and / or a physiologically acceptable carrier.
  • composition may be in any galenical form normally used for topical application, especially in the form of an aqueous, hydroalcoholic or oily solution, an oil-in-water or water-in-oil or multiple emulsion. , an aqueous or oily gel, an anhydrous liquid, pasty or solid product, an oil dispersion in an aqueous phase using spherules that may be micro / nanocapsules or micro / nanoparticles, dispersions vesicles of ionic and / or nonionic type.
  • This composition may be more or less fluid and have the appearance of a white or colored cream, an ointment, a milk, a lotion, a serum, a paste, a mousse . It may also be in solid form and, for example, in the form of a stick.
  • It can be used as a care product, as a cleaning product, as a makeup product.
  • composition according to the invention may also be a composition for hair care, and in particular a shampoo, a treatment lotion, a cream or a styling gel.
  • composition may also contain adjuvants usual in the cosmetic or dermatological fields.
  • adjuvants usual in the cosmetic or dermatological fields.
  • the amounts of the various adjuvants are those conventionally used in the fields under consideration.
  • adjuvants may be introduced into an aqueous phase, an oily phase, in vesicles and / or in micro / nanoparticles. It is understood that these adjuvants and their concentration should be such that they do not modify the desired property for the composition according to the invention.
  • the invention also relates to a cosmetic treatment method for protecting the skin, the lips and / or the hair, the scalp against oxidative stress and / or the UV of applying to the skin, the lips and / or the skin.
  • hair, the scalp a composition comprising at least one physiologically acceptable medium and at least one gem-difluorinated C-glycopeptide compound of formula I as defined above or one of its derivatives in the form of base, of addition salt a mineral or organic acid, hydrate or solvate physiologically or pharmaceutically acceptable.
  • Figure 1 is a reaction equation for obtaining compound 2;
  • Figure 2 is a reaction equation for obtaining compound 3;
  • Figure 3 is a reaction equation for obtaining compound 4;
  • Figure 4 is a reaction equation for obtaining compound 5;
  • Figure 5 is a reaction equation for obtaining compound 6;
  • Figure 6 is a reaction equation for obtaining compound 9;
  • Figure 7 is a reaction equation for obtaining compound 10;
  • Figure 8 is a reaction equation for obtaining compound H;
  • Fig. 9 is a reaction equation for obtaining compound 12;
  • Fig. 10 is a reaction equation for obtaining compound 14;
  • Figure 11 is a reaction equation for obtaining compound 15;
  • Fig. 12 is a reaction equation for obtaining compound 16;
  • Fig. 13 is a reaction equation for obtaining compound 19;
  • Fig. 14 is a reaction equation for obtaining compound 20;
  • Fig. 15 is a reaction equation for obtaining compound 21;
  • Fig. 16 is a reaction equation for obtaining compound 22;
  • Figure 17 is a reaction equation for obtaining compound 24;
  • Fig. 18 is a reaction equation for obtaining compound 25;
  • Fig. 19 is a reaction equation for obtaining compound 26;
  • Figure 20 is a reaction equation for obtaining compound 28;
  • Fig. 21 is a reaction equation for obtaining compound 29;
  • Fig. 22 is a reaction equation for obtaining compound 30;
  • Fig. 23 is a reaction equation for obtaining compound 32;
  • Fig. 24 is a reaction equation for obtaining compound 33;
  • Fig. 25 is a reaction equation for obtaining compound 34
  • Fig. 26 is a reaction equation for obtaining compound 35;
  • Figure 27 is a reaction equation for obtaining compound 36
  • Figure 28 is a reaction equation to obtain compound 37;
  • Figure 29 is a reaction equation to obtain compound 38
  • Fig. 30 is a reaction equation for obtaining compound 39;
  • Figure 31 is a reaction equation for obtaining compound 4_1;
  • Fig. 32 is a reaction equation for obtaining compound 42
  • Fig. 33 is a reaction equation for obtaining compound 43;
  • Figure 34 is a reaction equation for obtaining compound 44
  • Figure 35 is a representation of the effects of compound ⁇ ⁇ on adult UV-treated skin fibroblasts
  • Figure 36 is a representation of the effects of compound H on adult skin fibroblasts at -3 ° C;
  • Figures 37, 38 and 39 are representations of the effects of the various derivatives on the survival of HELA cells subjected to UVC.
  • the mass spectra were obtained on a Micromass TOF-SPEC, E 20 kV, ⁇ -cyano spectrophotometer.
  • Maldi and JEOL AX500 ionization 3 kV, Canon FAB JEOL, Xe, 4 kV, current limit 10 ⁇ A, GIy-NBA 50:50 for FAB ionization.
  • the separations by column chromatography are carried out under slight pressure using silica chromatography techniques Kieselgel 60 (230-400 Mesh, Merck).
  • the monitoring is provided by thin layer chromatography (TLC) with Kieselgel 60F-254-0.25mm plates.
  • TLC thin layer chromatography
  • the ratio of the migration distance of a compound on a given support to the migration distance of an eluent is called the frontal ratio (Rf).
  • the medium is hydrolyzed with water.
  • the aqueous phase is then extracted three times with ether.
  • the organic phases are then combined, washed several times with water, dried over magnesium sulfate, filtered and evaporated.
  • the product thus obtained is purified by chromatography on a silica column eluting with a cyclohexane / ethyl acetate mixture in proportions of nine to one. After concentrating the collected fractions, the product 2 is in the form of white crystals with a weight yield of 95%.
  • the mixture is extracted four times with 100 mL of toluene.
  • the organic phases are combined and then washed with 100 ml of water, 100 ml of a saturated solution of sodium hydrogencarbonate NaHCO 3 and finally with 100 ml of water.
  • the organic phase is then dried over magnesium sulfate, filtered and concentrated.
  • the product thus obtained is purified by chromatography on a silica column with cyclohexane / ethyl acetate as eluent in proportions of 8.5 to 1.5. After concentrating the collected fractions, the product 3 is in the form of white crystals with a weight yield of 75%.
  • the product is then purified by chromatography on a silica column eluting with cyclohexane / ethyl acetate in proportions of eight to two. After concentrating the collected fractions, the lactone 4 is in the form of a colorless oil with a weight yield of 82%.
  • aqueous and organic phases are separated and the aqueous phase is extracted twice more with dichloromethane.
  • the organic phases are combined, dried over magnesium sulfate, filtered and concentrated.
  • the product is then purified by chromatography on a silica column eluting with cyclohexane / ethyl acetate in proportions of eight to two. After concentrating the collected fractions, the product is in the form of white crystals with a weight yield of 82%.
  • Compound 6 is obtained in the form of a white oil with a quantitative yield.
  • the mixture is then purified by chromatography on a silica column with cyclohexane / ethyl acetate as eluent. After concentrating the collected fractions, the product is in the form of a white solid with a weight yield of 83%.
  • AIa 54.9 (N, H Lys); 67.4 and 67.6 (2OCH 2 Ph); 68.7 (C6); 71, 2 (C5); 73.5 and 73.8 (2OCH 2 Ph); 74.4 (C4); 75.0 (OCH 2 Ph; C2); 75.8 (OCH 2 Ph); 80.9
  • a flask containing the starting material (150 mg, 0.133 mmol) in a mixture of tetrahydrofuran THF (3 ml) and 1N HCl (2 ml) in the presence of a Pd / C palladium on charcoal spatula tip is placed under a hydrogen atmosphere. The mixture is left stirring overnight and then filtered through a Millipore® filter. The mixture is then concentrated to obtain the product ⁇ . in the form of an orange-yellow solid with a yield of 92%.
  • NMR 13 C (D 2 O, 75.5 MHz) 16.2 (CH 3 ); 21.5 (CH 2 ); 28.0 (CH 2 ); 30.7 (CH 2 ); 39.3 (CH 2 N); 49.1 (CH); 53.2 (NCH); 61 (C ( P), 62.6 (C6), 67.0 (C6), 68.9 (C6), 70.6 (C3P), 70.9 (C5), 72.5 (C6), C21), 73.9 (C3), 75.5 (C2), 80.2 (C4), 169.9 and 176.3 (CO).
  • the product is concentrated and then purified on a silica column (eluent cyclohexane / ethyl acetate 9.3 / 0.7) to recover the expected product 36 in the form of a colorless oil.
  • Compound 37 is obtained as a white oil in quantitative yield.
  • the mixture is then purified by chromatography on a silica column with cyclohexane / ethyl acetate as eluent. After concentrating the collected fractions, the product 38 is in the form of a white solid with a weight yield of 53%.
  • NMR 13 C (D 2 O, 75.5 MHz) 16.3 (CH 3 ); 21.5 (CH 2 ); 27.9 (CH 2 ); 30.8 (CH 2 ); 39.4 (CH 2 N); 49.1 (CH (Lys)); 53.2 (NCH (Ala)); 61.3 (C (T), 66.1 (C?) 69.0 (C1)), 74.0 (C1 ou or C1)), 77.3 (t, 24Hz, Cl), 79.6 (C1 ou); C3I or C6) 164.8 (d, 26Hz, CO), 169.9 and 176.3 (2O).
  • the organic phase is collected, dried over magnesium sulfate, filtered and concentrated.
  • the mixture is then purified by chromatography on a silica column with cyclohexane / ethyl acetate as eluent. After concentrating the collected fractions, the product 43 is in the form of a white solid with a weight yield of 43%.
  • the aim is to test the preservative activity of the ⁇ _ AAGP compounds at low temperatures.
  • the cells are thus incubated at -3 ° C. in the presence of compound AAGP ⁇ _.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

L'invention concerne un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I où n est un nombre entier égal à 3 ou 4, R représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle, benzyle, acétyle, triméthylsilyle, tert-butyldiméthylsilyle, tert-butyldiphénylsilyle, R´ représente OR, NR"R'", N<SUB>3</SUB>, ou un phtalimide, R" et R'" représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, aryle, benzyle, benzoyle, acétyle, alkyloxycarbonyle, allyloxycarbonyle, benzyloxycarbonyle, R1 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, benzyle, alkylcarbamate, allylcarbamate, benzylcarbamate, acétyle, R<SUB>1</SUB> peut consister en un acide aminé dans le cas où R<SUB>2</SUB> représente uniquement OR, R<SUB>2</SUB> comprend un acide aminé dans le cas où R<SUB>1 </SUB>représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, benzyle, alkylcarbamate, allylcarbamate, benzylcarbamate, acétyle, R<SUB>2</SUB> représente OR quand R<SUB>1</SUB> représente un acide aminé, R<SUB>3</SUB> représente un atome d'hydrogène ou une fonction alcool libre ou protégé. Elle s'applique à la préparation de composés ou compositions utilisables pour la préservation de matériaux biologiques tels que des cellules, tissus et organes à différentes températures.

Description

COMPOSES C-GLYCOPEPTIDES GEM-DIFLUORES. LEUR PREPARATION ET LEUR UTILISATION NOTAMMENT POUR LA PRESERVATION DE MATERIAUX BIOLOGIQUES.
L'invention concerne un procédé pour la synthèse de composés C- glycopeptides gem-difluorés. Elle s'applique plus particulièrement, mais non exclusivement, à la préparation de composés ou compositions utilisables notamment pour la préservation de matériaux biologiques tels que des cellules, tissus et organes à différentes températures, mais également dans le traitement de l'inflammation.
Une famille de glycoprotéines antigels présentent notamment chez certains poissons et leur permettant de survivre dans un environnement ou les températures sont voisines ou inférieures à 00C, a montré une activité protectrice de matériaux biologiques dans de nombreuses études à basses voire très basses températures (environ +4°C à -196°C).
Depuis de nombreuses années, les scientifiques étudient l'influence de ces composés antigels extraits du milieu naturel (poissons, amphibiens, plantes, insectes...) et s'orientent vers la synthèse de composés analogues suffisamment stables et présentant une activité au moins égale voire supérieure aux molécules naturelles pour des applications commerciales.
En effet ces composés naturels présentent de nombreuses limitations : - une extraction du milieu naturel ou des synthèses difficiles,
- des analyses complexes avec des puretés faibles,
- des produits instables face aux hydrolyses chimiques et enzymatiques. Les glycoprotéines, en raison de la présence d'une liaison osidique (liaison impliquant l'oxygène dit en position anomérique), sont fragiles vis-à-vis de plusieurs systèmes enzymatiques dont les enzymes glycosidases et sont également sensibles aux hydrolyses acido-basiques, ce qui rend leur synthèse plus difficile.
Il est donc intéressant, pour permettre aux composés de conserver leurs propriétés biologiques, de remplacer l'oxygène de la liaison osidique afin que cette liaison ne soit plus dégradée par un processus enzymatique.
Des analogues où l'oxygène est remplacé par un groupement CH2 ont été synthétisés, mais, en dépit d'un accroissement de la stabilité et d'un encombrement stérique semblable à celui de l'oxygène, le groupement CH2 ne s'est pas toujours révélé être un bon mime de l'oxygène osidique. En conséquence, on ne retrouve pas forcément les propriétés biologiques du composé initial.
D'autres classes de composés où l'oxygène est remplacé par un azote ou un soufre et plus récemment par un groupe difluorométhylène sont étudiées afin de conférer aux composés glycoconjugués une stabilité accrue en milieu biologique.
En effet, le groupe CF2 est particulièrement résistant aux processus de dégradations biochimiques et il permet donc la synthèse de structures non hydrolysables.
Cette transposition 0/CF2 semble particulièrement adaptée pour mimer l'oxygène sur le plan électronique ; les deux atomes de fluor jouant le rôle des deux doublets libres de l'oxygène.
Le Demandeur a développé des gem-difluoroglycopeptides qui ont démontré une très forte activité de préservation de différentes lignées cellulaires à des températures variant de -196°C à +37°C. En effet, les modifications structurales apportées par rapport aux composés natifs et l'observation d'un véritable effet anti-apoptose, c'est-à-dire pas de mort cellulaire, à des températures physiologiques ont conduit le Demandeur à étendre le spectre d'activité des composés. Ces composés ont été baptisés AAGP pour Anti Aging GlycoProteins.
Dans un souci de développer de nouveaux analogues toujours plus actifs c'est-à-dire apportant une meilleure préservation des matériaux biologiques et avec en première instance la volonté d'améliorer la préservation de fibroblastes pour des applications en cosmétologie, nous nous sommes orientés vers la synthèse de composés de plus faible poids moléculaire pouvant ainsi avoir une meilleure biodisponibilité tout en simplifiant les étapes de synthèse.
De tels composés seraient utilisables en vue de nombreuses applications telles que la préservation des cellules, plaquettes sanguines, tissus et organes.
Il existe en effet une forte demande afin d'améliorer le stockage et la conservation de matériaux vivants avec beaucoup moins de dommages que par les méthodes couramment utilisées.
On parle plus généralement de préservation en incluant la préservation à des températures différentes y compris la cryopréservation jusqu'à des températures de -196°C.
Ainsi, des composés utilisés comme adjuvants lors de la conservation et présentant une bonne stabilité pourraient être utiles pour préserver des matériaux biologiques notamment dans le domaine médical : . - pour maintenir des organes humains entiers tels que des reins, des cœurs et des foies à transplanter sans contrainte de temps, - pour préserver des cellules ou des tissus délicats avec un minimum de dommages et suffisamment longtemps pour permettre leur distribution éventuellement internationale, - pour conserver des plaquettes sanguines et différentes cellules,
- pour protéger certains organismes, bactéries, virus ou des vaccins, mais également dans le domaine dermatologique et/ou cosmétique pour protéger la peau contre les dégradations causées par le stress oxydant ou les UV ou par le vieillissement par exemple.
L'invention a pour objet de résoudre ces inconvénients.
A cet effet, elle propose un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule
I :
où n est un nombre entier compris entre 3 et 4,
R représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, acétyle, triméthylsilyle, tert-butyldiméthylsilyle, tert- butyldiphénylsilyle, R représente OR, NR"R"', N3, ou un phtalimide,
R"et R'", identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, aryle, benzyle, benzoyle, acétyle, alkyloxycarbonyle, allyloxycarbonyle, benzyloxycarbonyle,
Ri représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, alkylcarbamate, allylcarbamate, benzylcarbamate, acétyle, Ri peut également représenter un acide aminé, mais dans ce cas R2 représente uniquement OR,
R2 représente un acide aminé, mais dans ce cas R1 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, alkylcarbamate, allylcarbamate, benzylcarbamate, acétyle, R2 représente OR quand Ri représente un acide aminé, R3 représente un atome d'hydrogène ou une fonction alcool libre ou protégé, 5 ainsi que ses dérivés à l'état de base, de sel d'addition à un acide minéral ou organique, d'hydrate ou de solvat physiologiquement ou pharmaceutiquement acceptables.
Les groupes alkyles linéaires ou ramifiés pourront être des groupes 10 possédant de 1 à 10 atomes de carbones.
Ledit acide aminé pourra être une alanine ou une glycine ou une proline.
Par physiologiquement acceptable, on entend compatible avec la peau, les 15 lèvres, le cuir chevelu et/ou les cheveux.
L'invention a également pour objet un médicament comprenant en tant que principe actif au moins un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I tel que défini précédemment.
20
Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation d'au moins un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I tel que défini précédemment pour la préparation de médicaments destinés à traiter l'inflammation.
2.5
L'invention concerne également l'utilisation d'un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I pour la préparation de composés ou compositions utilisables pour la préservation ou la cryopréservation de matériaux biologiques tels que des fibroblastes.
30
Un autre objet de l'invention se rapporte à une composition comprenant au moins un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I tel que défini précédemment. Bien entendu, la composition selon l'invention pourra comprendre un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I seul ou en mélange et en toutes proportions.
La composition selon l'invention pourra être destinée à un usage cosmétique ou pharmaceutique notamment dermatologique.
La composition pourra être ingérée, injectée ou appliquée sur la peau, les lèvres, le cuir chevelu et/ou les cheveux.
Selon le mode d'administration, la composition selon l'invention pourra se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées.
La composition pourra comprendre un milieu et/ou un support physiologiquement ou pharmaceutiquement acceptable.
Dans les compositions pharmaceutiques de la présente invention pour l'administration par voir orale, sublinguale, inhalée, sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, transdermique, locale ou rectale, les principes actifs pourront être administrés sous formes unitaires d'administration, en mélange avec des supports pharmaceutiquement acceptables classiques. Les formes unitaires d'administration appropriées comprennent les formes par voie orale telles que les comprimés, les gélules, les poudres, les granules et les solutions ou suspensions orales, les formes d'administration topique, les implants, les formes d'administration sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, intranasale ou intraoculaire et les formes d'administration rectale.
Outre les excipients inertes, non toxiques et pharmaceutiquement acceptables, tels que l'eau distillée, le glucose, le lactose d'amidon, le talc, les huiles végétales, l'éthylène glycol..., les compositions ainsi obtenues pourront également contenir des agents de préservation.
D'autres principes actifs pourront être ajoutés dans ces compositions. La quantité de composé selon l'invention et d'autres éventuels principes actifs dans de telles compositions pourra varier selon les applications, l'âge et le poids du malade ou de l'utilisateur le cas échéant.
Pour une application topique sur la peau, les lèvres, le cuir chevelu et/ou les cheveux, la composition selon l'invention pourra comprendre un milieu et/ou un support physiologiquement acceptable.
De plus, la composition pourra se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées pour une application topique, notamment sous forme d'une solution aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse, d'une émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile ou multiple, d'un gel aqueux ou huileux, d'un produit anhydre liquide, pâteux ou solide, d'une dispersion d'huile dans une phase aqueuse à l'aide de sphérules pouvant être des micro/nanocapsules ou micro/nanoparticules, des dispersions vésiculaires de type ionique et/ou non ionique.
Cette composition pourra être plus ou moins fluide et avoir l'aspect d'une crème blanche ou colorée, d'une pommade, d'un lait, d'une lotion, d'un sérum, d'une pâte, d'une mousse. Elle pourra également se présenter sous forme solide et, par exemple, sous forme de stick.
Elle pourra être utilisée comme produit de soin, comme produit de nettoyage, comme produit de maquillage.
La composition selon l'invention pourra aussi être une composition pour soins capillaires, et notamment un shampooing, une lotion traitante, une crème ou un gel coiffant.
La composition pourra également contenir des adjuvants habituels dans les domaines cosmétiques ou dermatologiques. Les quantités des différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés.
Ces adjuvants, selon leur nature, pourront être introduits dans une phase aqueuse, une phase huileuse, dans des vésicules et/ou dans des micro/nanoparticules. II est entendu que ces adjuvants ainsi que leur concentration devront être tels qu'ils ne modifient pas la propriété recherchée pour la composition selon l'invention.
L'invention a également pour objet un procédé de traitement cosmétique pour protéger la peau, les lèvres et/ou les cheveux, le cuir chevelu contre le stress oxydant et/ou les UV consistant à appliquer sur la peau, les lèvres et/ou les cheveux, le cuir chevelu, une composition comportant au moins un milieu physiologiquement acceptable et au moins un composé C- glycopeptide gem-difluoré de formule I tel que défini précédemment ou un de ses dérivés à l'état de base, de sel d'addition à un acide minéral ou organique, d'hydrate ou de solvat physiologiquement ou pharmaceutiquement acceptables.
Des modes d'exécution de l'invention seront décrits ci-après, à titre d'exemples non limitatifs, avec référence aux dessins annexés dans lesquels :
La figure 1 est une équation de réaction pour obtenir le composé 2 ; La figure 2 est une équation de réaction pour obtenir le composé 3 ; La figure 3 est une équation de réaction pour obtenir le composé 4 ; La figure 4 est une équation de réaction pour obtenir le composé 5 ; La figure 5 est une équation de réaction pour obtenir le composé 6 ; La figure 6 est une équation de réaction pour obtenir le composé 9 ; La figure 7 est une équation de réaction pour obtenir le composé 10 ; La figure 8 est une équation de réaction pour obtenir le composé H ; La figure 9 est une équation de réaction pour obtenir le composé 12_; La figure 10 est une équation de réaction pour obtenir le composé 14;
LLaa figure 11 est une équation de réaction pour obtenir le composé 15_; La figure 12 est une équation de réaction pour obtenir le composé 16_; La figure 13 est une équation de réaction pour obtenir le composé 19 ; La figure 14 est une équation de réaction pour obtenir le composé 20_; La figure 15 est une équation de réaction pour obtenir le composé 21 ; La figure 16 est une équation de réaction pour obtenir le composé 22_; La figure 17 est une équation de réaction pour obtenir Ie composé 24 ;
La figure 18 est une équation de réaction pour obtenir Ie composé 25 ;
La figure 19 est une équation de réaction pour obtenir Ie composé 26 ;
La figure 20 est une équation de réaction pour obtenir Ie composé 28 ; La figure 21 est une équation de réaction pour obtenir Ie composé 29 ;
La figure 22 est une équation de réaction pour obtenir Ie composé 30 ;
La figure 23 est une équation de réaction pour obtenir Ie composé 32 ;
La figure 24 est une équation de réaction pour obtenir Ie composé 33 ;
La figure 25 est une équation de réaction pour obtenir Ie composé 34 ; La figure 26 est une équation de réaction pour obtenir Ie composé 35 ;
La figure 27 est une équation de réaction pour obtenir Ie composé 36 ;
La figure 28 est une équation de réaction pour obtenir Ie composé 37 ;
La figure 29 est une équation de réaction pour obtenir Ie composé 38 ;
La figure 30 est une équation de réaction pour obtenir le composé 39 ; La figure 31 est une équation de réaction pour obtenir le composé 4_1 ;
La figure 32 est une équation de réaction pour obtenir le composé 42 ;
La figure 33 est une équation de réaction pour obtenir le composé 43 ;
La figure 34 est une équation de réaction pour obtenir Ie composé 44 ;
La figure 35 est une représentation des effets du composé Λ± sur des fibroblastes adultes de la peau traités UV ;
La figure 36 est une représentation des effets du composé H sur des fibroblastes adultes de la peau à -3°C ;
Les figures 37, 38 et 39 sont des représentations des effets des différents dérivés sur la survie de cellules HELA soumises à des UVC.
Les abréviations rencontrées sont définies ainsi :
éq. : équivalent g : gramme Hz : Hertz mg : milligramme MHz : mégaHertz min.: minute mL: millilitre mmol: millimole μmol: micromole nmol : nanomole app : apparent
Les caractéristiques des appareils utilisés pour effectuer les analyses de tous les composés décrits dans la présente demande sont indiquées ci-dessous : Les spectres RMN 1H, 13C, 19F ont été enregistrés sur des spectromètres BRUKER DPX 300 et DPX 600. En RMN 1H et 13C, le tétraméthylsilane est utilisé comme référence interne. En RMN 19F, la référence externe est le fluorotrichlorométhane CFCI3. Les déplacements chimiques sont exprimés en partie par million (ppm), les constantes de couplage J en Hertz (Hz).
Les abréviations suivantes ont été utilisées : s pour singulet, bs pour un large singulet, d pour doublet, t pour triplet, q pour quadruplet, m pour multiplet ou massif, dd pour doublet de doublet...
Les spectres de masse ont été obtenus sur un spectrophotomètre de type Micromass TOF-SPEC, E 20 kV, α-cyano. pour l'ionisation Maldi et JEOL AX500, 3 kV, Canon FAB JEOL, Xe, 4 kV, courant limite 10 μA, GIy-NBA 50 : 50 pour l'ionisation FAB.
Les séparations par chromatographie sur colonne sont réalisées sous pression légère en suivant les techniques de chromatographie sur silice Kieselgel 60 (230-400 Mesh, Merck). Le suivi est assuré par chromatographie sur couches minces (CCM) avec des plaques Kieselgel 60F-254-0.25mm. On appelle rapport frontal (Rf) le rapport de la distance de migration d'un composé sur un support donné sur la distance de migration d'un éluant.
Synthèse du composé 2 (Figure 1)
Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le méthyl-D- galactopyranoside 1 (5 g; 26 mmol ;1 éq.) et de l'iodure de tétrabutylammonium nBu4NI (500 mg ; 1 ,3 mmol ; 0,05 éq.) dans le diméthylformaldéhyde DMF (250 mL) est introduit de l'hydrure de sodium NaH (3,7 g ; 0,15 mol ; 6 éq.) par petites portions. Puis du bromure de benzyle BnBr (18 mL ; 0,15 mol ; 6 éq.) est additionné et le mélange est laissé sous agitation pendant au moins 24 heures.
Le milieu est hydrolyse avec de l'eau. Puis la phase aqueuse est extraite trois fois avec de l'éther. Les phases organiques sont ensuite rassemblées, lavées plusieurs fois à l'eau, séchées sur du sulfate de magnésium, filtrées puis évaporées.
Le produit ainsi obtenu est purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de neuf pour un. Après concentration des fractions recueillies, le produit 2 se présente sous la forme de cristaux blancs avec un rendement pondéral de 95%.
C35H38O6 M= 554,67 g.mol 1-1
Rf : 0.38 (cyclohexane/acétate d'éthyle 8/2).
Synthèse du composé 3 (Figure 2)
Dans un ballon contenant le 1-O-Méthyl-2,3,4,6-Tetra-O-Benzyl-D- galactopyranose 2 (5,5g ; 9,92 mmol) dans 80 ml_ d'acide acétique, est additionné 11 mL d'acide sulfurique H2SO4 à une concentration molaire de 3M. Le milieu réactionnel est chauffé à 1000C pendant une heure. La solution est ensuite diluée dans 100 mL d'eau froide.
Le mélange est extrait quatre fois avec 100 mL de toluène. Les phases organiques sont rassemblées, puis lavées avec 100 mL d'eau, 100 mL d'une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium NaHCO3 et enfin avec 100 mL d'eau. La phase organique est ensuite séchée sur sulfate de magnésium, filtrée puis concentrée.
Le produit ainsi obtenu est purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de 8,5 pour 1 ,5. Après concentration des fractions recueillies, le produit 3 se présente sous la forme de cristaux blancs avec un rendement pondéral de 75%.
C34.H36O6 M= 540,65 g.mol 1-1
Rf : 0,65 (cyclohexane/acétate d'éthyle 6/4).
Synthèse du composé 4 (Figure 3)
Dans un ballon sous atmosphère inerte, contenant le 2,3,4,6-Tétra-O-Benzyl- D-Galactopyranose 3 (4 g ; 7,4 mmol) sont introduits le diméthylsulphoxyde DMSO (25,6 mL) et l'anhydride acétique Ac2O (16,8 mL). Le mélange est laissé sous agitation pendant 12 heures. Puis, de l'eau est ajoutée et la phase aqueuse est extraite trois fois avec de l'éther. Les phases organiques sont rassemblées, puis lavées avec une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium NaHCO3 puis de l'eau. La phase organique est ensuite séchée sur sulfate de magnésium, filtrée puis concentrée.
Le produit est ensuite purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de huit pour deux. Après concentration des fractions recueillies, la lactone 4 se présente sous la forme d'une huile incolore avec un rendement pondéral de 82%.
C34H34O6 M= 538,63 g. mol"1
Rf : 0,61 (cyclohexane/acétate d'éthyle 8/2).
RMN 1H (CDCI3, 300 MHz) 3,6 (m, 2H, H6) ; 3,8 (dd, 2,1-9,6, 1 H, HS) ; 4,1 (s, 1 H, H4) ; 4,2 (m, 1 H, H5) ;
4,4-5,1 (m, 9H, H2 ; 4OCH2Ph) ; 7,2 (m, 2OH, H ar.)
RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz)
67,4 (C6) ; 72,4 (CS) ; 72,6 (OCH2Ph) ; 73,5 (OCH2Ph) ; 74,5 (C4) ; 75,1
(OCH2Ph) ; 77,1 (C2) ; 79,9 (C3) ; 127,4 -128,3 (Car.) ; 137,2 ; 137,3 ; 137,6 (Car. quat.) ; 169,8 (CO).
Synthèse du composé 5 (Figure 4)
Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant du zinc Zn (1 ,7 g ; 26 mmol ; 7 éq.) préalablement activé et décapé dans du tétrahydrofurane THF (30 mL) au reflux, un mélange constitué de la lactone 4 (2 g ; 3,7 mmol ; 1 éq.) et de bromodifluoroacétate d'éthyle (1 ,42 ml_ ; 11 mmol ; 3 éq.) dans le THF (30 mL) est additionné goutte à goutte. La réaction est laissée au reflux pendant 3 heures. Après retour à la température ambiante, le zinc est filtré, puis une solution d'acide chlorhydrique HCI 1 N (60 mL) puis du dichlorométhane (6 mL) sont ajoutés au milieu réactionnel.
Les phases aqueuses et organiques sont séparées et la phase aqueuse est extraite à nouveau deux fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées.
Le produit est ensuite purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de huit pour deux. Après concentration des fractions recueillies, le produit 5 se présente sous la forme de cristaux blancs avec un rendement pondéral de 82%.
C38H40F2O8 M= 662,72 g. mol"1
Rf : 0,35 (cyclohexane/acétate d'éthyle 8/2). RMN 19F (CDCI3 ; 282,5 MHz) -118,4 (d, JF-F=256HZ) ; -120,2 (d, JF-F=256Hz). RMN 1H (CDCI3, 300MHz)
1.1 (t; 7,2; 3H; CH3); 3,4-3,5 (m; 2H; Hg) ; 3,7-3,8 (dd; 2,5-9,5; 1 H; H3); 3,8 (d; 2; 1 H; H4) ; 4-4,1 (m; 3H; H5 ; CH2) ; 4,25-4,85 (m; 9H; H2 ; 4OCH2Ph) ;
7.2 (m; 2OH; Har). RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz)
14,2 (CH3) ; 63,6 (CH2) ; 68,6 (Cg) ; 71 ,7 (C5) ; 73,2 (OCH2Ph) ; 73,9 (OCH2Ph) ; 74,1 (C4) ; 74,9 (OCH2Ph) ; 75,1 (C2) ;75,8 (OCH2Ph) ; 81 ,2 (C3) ; 96,9 (t, 27Hz, CI) ; 113 (t , 264Hz, CF2) ; 128,0 -128,9 (Car.) ; 138,2 ; 138,3 ; 138,6 ; 139,1 (Car. quat.) ; 163,3 (t, 31 Hz, CO2Et). αD=+52,6° (c= 1 ; CHCI3) Synthèse du composé 6 (Figure 5)
Dans un ballon contenant l'ester 5 (0,5 g ; 1 ,75 mmol, 1 éq.) dans le THF (5 ml_) est ajoutée une solution aqueuse de lithine LiOH (84 mg ; 3.5 mmol, 2 éq.) solubilisée dans une quantité minimum d'eau. Le mélange est laissé 12 heures sous agitation puis repris dans l'acétate d'éthyle. Le mélange est acidifié avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 1N puis extrait plusieurs fois avec de l'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées
Le composé 6 est obtenu sous la forme d'une huile blanche avec un rendement quantitative.
C36H36 F2OS M= 634,66g.mol"
RMN 19F (CDCI3, 282,5 MHz)
-117,3 (d, JF-F=259Hz) ; -119,0 (d, JF-F=259Hz).
RMN 1H (CDCI3, 300 MHz)
3,2 (dd; 4,5Hz et 9,8Hz ;1 H; H6) ; 3,5 (dd; 7,7Hz et 9,8Hz;1 H; H6) ; 3,7 (d;
2Hz; 1 H; H4) ; 3,8 (dd; 2,6Hz et 9,5Hz; 1 H; H3); 4 (dd; 4,5Hz et 7,7Hz ;1 H,
H5) ; 4,3-4,9 (m; 9H; H2 ; 4OCH2Ph) ; 7,2 (m; 2OH; Har).
RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz)
69,4 (C6) ; 71 ,7 (C5) ; 73,5 (OCH2Ph) ; 74,0 (OCH2Ph) ; 74,1 (C4) ; 75,0
(OCH2Ph) ; 75,1 (C2) ; 75,9 (OCH2Ph) ; 80,8 (C3) ; 95,4 (t, 27Hz, Ci) ; 112,5
(t, 260Hz, CF2) ; 127,8 -129,0 (Car.) ; 137,6 ; 138,0 ; 138,1 (Car. quai) ;
163,1 (t; 30Hz; CO2H). Synthèse du composé 9 (Figure 6)
Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant la 7-Lysine(Boc)-OH 8 (2 g ; 5,26 mmol ; 1 éq.) dans le dichlorométhane (40 mL), le carbonyldiimadozale CDI (878 mg ; 5,42 mmol ; 1 ,03 éq.) est additionné. La réaction est laissée sous agitation pendant une heure. Puis à ce mélange est ajouté une solution préparée sous atmosphère inerte et constituée de CI" +H3N-AlanineOBn 7 (1 ,13g; 5,26 mmol ; 1 éq.), et de diisopropyléthylamine DIEA (1 ,92 mL ; 11 ,04 mmol ; 2, éq.) dans dichlorométhane (40 m L). La réaction est poursuivie pendant 24 heures puis hydrolysée avec de l'eau et extraite trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées. Le mélange est ensuite purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de sept pour trois. Après concentration des fractions recueillies, le produit 9 se présente sous la forme d'un solide jaune pâle avec un rendement pondéral de 66%.
C32H37N3O7 M=544,5 g.mol"1
RMN 1H (CDCI3, 300 MHz)
1 ,3 (m; 16H; CH3; (ÇH3)3C; 2CH2) ;1 ,6-1 ,7 (m; 2H; CH2) ; 3,0 (m; 2H;
NHCH2) ; 4,1 (m; 1 H; CHLys) ; 4,5 (m; 1 H; CHAIa) ; 4,6 (m; 1 H; NH) ; 5,0 (s; 2H; OCH2Ph) ; 5,1 (m; 1H; ZNH); 5,5 (d; 7Hz; 1 H; NH) ; 6,8 (d; 6,5Hz;1 H;
NH) ; 7,3 (m; 5H; Har.).
RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz)
18,4 (CH3) ; 22,6 (CH2) ; 28,8 ((ÇH3)3C) ; 29,8 (CH2) ; 32,6 (CH2) ; 40,1
(NCH2) ; 48,6 (ÇHAla) ; 54,9 (ÇHLys) ; 67,4 et 67,5 (2OCH2Ph) ; 80,2
((CHs)3Q) ; 128,5 -129 (Car.) ; 135,6 et 136,6 (Car. quat.) ; 156,6 (ÇO(Boc) et CO(Z)) ; 171 ,8 et 172,9 (ÇONH et CO2Et).
Synthèse du composé 10 (Figure 7)
Déprotection du peptide
Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le peptide 9 (1 ,8 g ; 3,36 mmol; 1 éq.) dans le dichlorométhane (40 mL) est introduit de l'acide trifluoroacétique TFA (5 mL ; 67,2 mmol ; 20 éq.). Le mélange est laissé à réagir pendant 12 heures puis le milieu réactionnel est concentré. Quatre à cinq co-évaporations au toluène sont effectuées pour obtenir le produit déprotégé avec un rendement quantitatif.
Couplage
Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant l'acide 6 (1 ,38 g ; 2,18 mmol ; 1 ,05 éq.), le peptide précédemment déprotégé (1 ,15 g ; 2,08 mmol ; 1 éq.), le 1-hydroxybenzotriazole HOBT (0,336 g ; 2,5 mmol ; 1 ,2 éq.) et la N-méthylmorpholine NMM (0,57 mL ; 5,2 mmol ; 2,5 éq.) dans le DMF (35 mL), l'EDCI (0,478 g ; 2,49 mmol ; 1 ,2 éq.) est ajouté. La réaction est laissée sous agitation pendant 24 heures, puis le solvant est évaporé et le milieu est repris dans le dichlorométhane. Le milieu est ensuite extrait deux fois avec HCI 1 M (2*100 mL). La phase organique est collectée, séchée sur sulfate de magnésium, filtrée puis concentrée.
Le mélange est ensuite purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane/acétate d'éthyle. Après concentration des fractions recueillies, le produit 10 se présente sous la forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral de 83%.
C60H6SF2N3O12 M=1058, 17 g. mol"1
Rf : 0,48 (Cyclohexane/acétate d'éthyle 5/5).
RMN 19F (CDCI3, 282,5 MHz)
-116,9 (d, JF-F=259HZ) ; -121 ,7 (d, JF-F=259Hz).
RMN 1H (CDCI3, 300 MHz)
1 ,2-1 ,4 (m; 7H; 1CH3 ^CH2); 1 ,5 (m; 1 H; CH2) ; 1 ,6 (m; 1 H; CH2); 3,0 et 3,2 (2m; 2H; NHCH2); 3,4 (m; 2H; H6); 3,8-3,9 (m; 2H; H3 ; H4); 4,0 (m; 2H;
CHNH (Lys); H5); 4,2-4,9 (m; 9H; 4OCH2Ph ; CH (AIa)); 4,2 (d; 9Hz; 1 H; H2);
5,0 (s; 2H; OCH2Ph) ; 5,1 (m; 1 H; ZNH); 5,4 (d; 7,8 ; 1 H; NH); 6,5 (d; 7,2 ;
1 H; NH) ; 6,7 (s; 1 H; NH); 7,2 (m; 3OH; Har).
RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 18,3 (CH3) ; 22,4 (CH2) ; 28,7 (CH2) ; 32,5 (CH2) ; 39,3 (CH2N) ; 48,6 (CH
AIa) ; 54,9 (NÇ_H Lys) ; 67,4 et 67,6 (2OCH2Ph); 68,7 (C6) ; 71 ,2 (C5) ; 73,5 et 73,8 (2OCH2Ph) ; 74,4 (C4) ; 75,0 (OCH2Ph ; C2) ; 75,8 (OCH2Ph) ; 80,9
(C3) ; 97,2 (t, 27Hz, Ci) ; 1 13 (t, CF2); 127,9 -129 (Car.) ; 135,7; 136,7;
138,2 ;138,3 ;138,7 ; 139,0 (Car. quat.) ; 156,0 (CO(Z)) ; 163,7 (t, 28Hz, CF2CONH) ; 172,0 (ÇONH) ; 173,0 (CO2Bn).
Synthèse du composé 11 (Figure 8)
Un ballon contenant le produit de départ 10 (150 mg ; 0,133 mmol ) dans un mélange de tétrahydrofurane THF (3 ml_) et d'HCI 1 N (2 ml_) en présence d'une pointe de spatule de palladium sur charbon Pd/C est placé sous atmosphère d'hydrogène. Le mélange est laissé sous agitation pendant une nuit puis filtré sur un filtre Millipore®. Le mélange est ensuite concentré pour obtenir le produit ΛΛ. sous la forme d'un solide jaune orangé avec un rendement de 92%.
CI7H30CIF2N3O10 M=509,88 g. mol"1
RMN 19F (D2O, 282,5 MHz) -119,4 (d, JF-F=256Hz) ; -120,6 (d, JF-F=256HZ) ; -121 ,0 (d, JF-F=257Hz) ;
-122,0 (d, JF-F=257HZ).
RMN 1H (D2O, 300 MHz)
1 ,4 (d; 7,3Hz; CH3) ; 1 ,4 (m; 2H; CH2); 1 ,5 (m; 2H; CH2) ; 1 ,8 (m; 2H; CH2);
3,2 (m; 2H; NHCH2); 3,5-3,6 (m; 2H61,2H6); 3,7 (m; H4 H5) ;3,8 (dd, 3,4Hz et 9,9Hz, H£) 3,9 (m; CH,H4:,H5:,H2:); 4,0 (t, 8,2Hz, H3); 4,3 (m; CH); 4,36 (d,
8,2Hz,H2).
NMR 13C (D2O, 75,5 MHz) 16,2 (CH3) ; 21 ,5 (CH2) ; 28,0 (CH2) ; 30,7 (CH2) ; 39,3 (CH2N) ; 49,1 (CH) ; 53,2 (NCH) ; 61 ,1 (C(P) ; 62,6 (C6) ; 67,0 (C£) ; 68,9 (C£) ; 70,6 (C3P) ; 70,9 (C5) ; 72,5 (C21) ; 73,9 (C3) ; 75,5 (C2) ; 80,2 (C4) ; 169,9 et 176,3 (CO).
Synthèse du composé 12 (Figure 9)
Dans un ballon, le composé 10 (0.81 mmol) est dissout dans un mélange eau / tétrahydrofurane (1 : 1 ; 20 ml_) et le palladium sur charbon et placé sous une atmosphère d'hydrogène. Le mélange est agité pendant 2 jours à température ambiante. Le mélange réactionnel est filtré, et concentré. Le brut est repris avec du dichlorométhane (20 mL) qui est éliminé, puis avec de l'eau (10 mL) qui est filtrée. La phase aqueuse est ensuite concentrée pour ainsi laisser le produit désiré en tant qu'un solide blanc avec un rendement de 54%.
C18H31 F2NsO-Io M=473,42 g. mol 1-1
RMN 19F (D2O, 282MHz)
-119.3 (1 F, d, 2JF-F 255.5), 120.4 (1F, d, 2JF-F 255.5)
-120.7 (1 F, d, 2JF-F 256.6), 121.8 (1F, d, 2JF-F 255.5)
RMN 1H (D2O, 300MHz)
1.31 (3H, d, 3JHii-H9 7.3, CH3), 1.37-1.45 (2H, m, H CH2), 1.52-1.61 (2H, m,
CH2), 1.74-1.87 (2H, m, CH2), 3.25-3.31 (2H, m, NCH2), 3.57-3.75 (4H, m, 2H£,2H6,H4,H5), 3.82 (dd, 33JH-H 3.2, 3JH-H 9.7, HZJ, 3.95-4.02
(CH,H£,H5:,H2:), 4.08-4.17 (m, CH1 H3), 4.39 (d, 3JH-H 8.3.H2),
RMN 13C (D2O, 75MHz)
17.5 (CH3), 21.9 (CH2), 28.0 (CH2) 31.8 (CH2), 39.5 (NCH2), 51.5 (CH), 53.8
(CH), 61 ,1 (C61) ; 62,6 (C6) ; 67,1 (C£) ; 68,9 (C£) ; 70,6 (CZJ ; 70,9 (C5) ;
72,4 (C2!) ; 74,0 (CZ) ; 75,6 (C2) ; 80,2 (C4) ; 96.1 (d, 2JCI'-F 25.7), 98.9 (t,
2Jcr-F 28.6) (Ci et CV), 114.0 (t, 2JC7'-F 256.5, CF2), 163.9 (t, 2JC8'-F 28.0,
CF2CO), 169,9 et 176,3 (CO).
Spectrométrie de masse :ESI+ : 496 (MH+Na)+, 474 (MH)+.
Synthèse du composé 14 (Figure 10)
Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant la Z-Lysine(NHBoc)-OH 8 (5 g ; 13,14 mmol ; 1 éq.) dans le dichlorométhane (50 m L), le carbonyldiimadozale CDI (2,56 g ; 15,8 mmol ; 1 ,2 éq.) est additionné. La réaction est laissée sous agitation pendant une heure. Puis à ce mélange est ajouté une solution préparée sous atmosphère inerte et constituée de CI" +H3N-AlanineOMe 13 (1 ,84g; 13,14 mmol ; 1 éq.), et de diisopropyléthylamine DIEA (4,8 mL ; 27,6 mmol ; 2,1 éq.) dans dichlorométhane (50 mL). La réaction est poursuivie pendant 24 heures puis une solution d'acide chlorhydrique 1 N (50 mL) est additionnée, puis le mélange est extrait avec du dichlorométhane (3 x 50 mL). Les phases organiques sont lavées avec une solution saturée de NaCI (100 mL), séchées sur MgSO4 et concentrées sous vide pour laisser le composé 14 sous la forme d'un solide blanc qui est utilisé directement dans la suite de la synthèse avec un rendement de 99%.
C23H35N3O7 M=465,5 g.mol"1
Rf = 0.43, éluant : cyclohexane / acétate d'éthyle (1 : 1).
RMN 1H (CDCI3, 300 MHz)
1.30 (d, 3H, 3Jm2-H9 7.4, CH3;), 1.33-1.45 (m, 12H, (ÇH3)3C; CH2), 1.52-1.69
(m, 2H, CH2), 1.76-1.82 (m, 1 H, CH2), 3.00-3.08 (m, 2H, NCH2), 3.66 (s, 3H,
CH3), 4.25 (m, 1 H, (CH), 4.48 (qt, 1 H, 3JH9-H12 7.4, (CH), 5.03 (s, 3H,
OCH2Ph, NH), 6.03 (d, 1 H, 3JNH-H6 7.8, NH), 7.22-7.31 (m, 6H, HW, NH).
RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz)
18,0 (CH3) ; 22,6 (CH2) ; 28,8 ((CHa)3C) ; 29,7 (CH2) ; 32,7 (CH2) ; 40,2
(NCH2) ; 48,4 (CH(AIa)) ; 52,7 (ÇH(Lys)) ; 67,2 (OCH2Ph) ; 79,3 ((CHs)3C) ;
128,3 ; 128,4(2C) ; 128,8 (2C) (Car.) ; 136,6 (Car. quai) ; 156,6 et 156,7
(ÇO(Boc) et CO(Z)) ; 172,4 et 173,6 (ÇONH et CO2Et).
Synthèse du composé 15 (Figure 11)
Déprotection du peptide
Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le peptide 14 (6 g ; 13 mmol; 1 éq.) dans le dichlorométhane (10O mL) est introduit de l'acide trifluoroacétique TFA (20 ml_ ; 263 mmol ; 20 éq.). Le mélange est laissé à réagir pendant 12 heures puis le milieu réactionnel est concentré. Quatre à cinq co-évaporations au toluène sont effectuées pour obtenir le produit déprotégé avec un rendement quantitatif. Couplage
Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant l'acide 6 (2,15 g ; 2,49 mmol ; 1 ,0 éq.), le peptide précédemment déprotégé (1 ,20 g ; 2,49 mmol ; 1 éq.), le 1-hydroxybenzotriazole HOBT (0,37 g ; 2,75 mmol ; 1 ,1 éq.) et la N-méthylmorpholine NMM (0,83g ; 8,22 mmol ; 3,3 éq.) dans le DCM (10O mL), l'EDCI (0,53 g ; 2,75 mmol ; 1 ,1 éq.) est ajouté après 15 minutes. La réaction est laissée sous agitation pendant 24 heures, puis L'eau (100 mL) est ajoutée ainsi que du dichlorométhane, et la phase aqueuse est extraite avec du DCM (3 x 100 mL). Les phases organiques sont lavées avec une solution saturée de NaCI (200 mL), séchées sur MgSO4 et concentrées sous vide pour laisser un solide beige.
Le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice avec un mélange cyclohexane / AcOEt (1 : 1) comme éluant pour donner le produit 1j> pur sous forme d'un solide blanc avec un rendement de 38 %
C54H6IF2N3Oi2 M=982,07g.mol"1
Rf = 0.27, éluant : cyclohexane / acétate d'éthyle (1 : 1).
RMN 19F (CDCI3, 282MHz) -117.0 (1F, d, 2JF-F 258.0), -121.9 (1 F, d, 2JF-F 258.0).
RMN 1H (CDCI3, 300MHz)
1.31 (d, 3H, 3JH12-H9 7.1 , CH3), 1.30-1.78 (m, 6H, 3CH2), 3.05-3.38 (m, 2H,
NCH2), 3.42-3.51 (m, 2H, H6), 3.66 (s, 3H, OCH3), 3.88 (m, 2H), 4.10 (m,
1 H), 4.28 (d, 1 H, J 9.0), 4.39-4.55 (m, 4H), 4.68-4.92 (m, 5H), 5.02-5.06 (m, 2H), 5.40 (d, 1 H, 3J7.9, NH), 6.35 (d, 1 H, 3J7.2, NH), 6.78 (Is, 1 H, NH),
7.22-7.29 (m, 25H, HAr).
Synthèse du composé 16 (Figure 12)
Un ballon contenant le produit de départ 15 (497 mg ; 0,488 mmol ) dans un mélange de tétrahydrofurane THF (10 mL) et d'HCI 1 N (1 ,2eq.) en présence d'une pointe de spatule de palladium sur charbon Pd/C est placé sous atmosphère d'hydrogène. Le mélange est laissé sous agitation pendant une nuit puis filtré sur un filtre Millipore®. Le mélange est ensuite concentré pour obtenir le produit 16 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 87%.
C18H32CIF2N3O10 M=523,5 g. mol 1-1
RMN 19F (D2O, 282MHz) -119.1 (1 F, d, 2JF-F 256.4), -120.5 (1 F, d, 2JF-F 256.4),
-120.3 (1 F, d, 2JF-F 256.4), -121.7 (1 F, d, 2JF-F 256.4).
RMN 1H (D2O, 300MHz)
1.37-1.48 (m, 5H, CH31CH2), 1.54-1.65 (m, 2H, CH2), 1.72-1.91 (m, 2H, CH2),
3.24-3.32 (m, 2H, NCH2), 3.59-3.85 (m), 3.96-4.02 (m), 4.13 (, 1H, 3J 7.9, H2). Synthèse du composé 19 (Figure 13)
Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant la Z-AIa-OH T7 (752 mg ;
3.37 mmol ; 1.0 éq.) dans le dichlorométhane (15 mL), le carbonyldiimadozale CDI (656 g ; 4,05 mmol ; 1 ,2 éq.) est additionné. La réaction est laissée sous agitation pendant une heure. Puis à ce mélange est ajouté une solution préparée sous atmosphère inerte et constituée de Cl" +H3N-Lys(NHBoc)OMe 18 (1g; 3,37 mmol ; 1 éq.), et de diisopropyléthylamine DIEA (1 ,25 ml_ ; 7,1 mmol ; 2,1 éq.) dans dichlorométhane (15 mL). La réaction est poursuivie pendant 24 heures Une solution d'acide chlorhydrique 1 N (20 mL) est additionnée, puis le mélange est extrait avec du dichlorométhane (3 x 20 mL). Les phases organiques sont lavées avec une solution saturée de NaCI (50 mL), séchées sur MgSO4 et concentrées sous vide pour laisser un solide blanc. Le résidu est purifié sur colonne chromatographique sur gel de silice avec un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle (1 : 1) comme éluant afin d'isoler le produit 19 pur sous forme d'un solide blanc avec un rendement de 72%.
C23H35N3O7 M=465,5 g.mol'1
Rf = 0.25, éluant : cyclohexane / acétate d'éthyle (1 : 1). RMN 1H (CDCI3, 300 MHz)
1.38 (d, 3H, 3J 6,8, CH3;), 1.25-1.84 (m, 6H, 3CH2), 1 ,42 (s, 9H, C(CH3)3), 3.02-3.09 (m, 2H, NCH2), 3.72 (s, 3H, OCH3), 4.29 (tapp., 6,8Hz, 1 H, CH), 4.54-4,58 (m, 1 H, CH), 4,77 (Is1 1 H) ; 5.1 (s, 2H, OCH2Ph), 5,56 (s, 1 H, NH), 6.71 (d, 1H, 3J 7.5, NH), 7.33 (m, 5H, HAΓ).
Synthèse du composé 20 (Figure 14)
Déprotection du peptide
Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le peptide 19 (1 éq.) dans le dichlorométhan est introduit de l'acide trifluoroacétique TFA (20 éq.). Le mélange est laissé à réagir pendant 12 heures puis le milieu réactionnel est concentré. Quatre à cinq co-évaporations au toluène sont effectuées pour obtenir le produit déprotégé avec un rendement quantitatif. Couplage Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant l'acide 6 (1 ,26 g ; 2,0 mmol ; 1,0 éq.), le peptide précédemment déprotégé (0,95 g ; 2,0 mmol ; 1 éq.), le 1-hydroxybenzotriazole HOBT (0,29 g ; 2,25 mmol ; 1 ,1 éq.) et la N- méthylmorpholine NMM (0,28g ; 3 mmol ; 1 ,5 éq.) dans le DMF (35 m L), l'EDCI (0,44 g ; 2,0 mmol ; 1 ,1 éq.) est ajouté après 15 minutes. La réaction est laissée sous agitation pendant 24 heures puis concentrée. Une solution d'HCI 1 N (20 mL) est ajoutée ainsi que du dichlorométhane, et la phase aqueuse est extraite avec du DCM (3 x 30 mL). Les phases organiques sont lavées avec une solution saturée de NaCI (50 mL), séchées sur MgSO4 et concentrées sous vide. Le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice avec un mélange cyclohexane / AcOEt (1 : 1) comme éluant pour donner le produit 20 pur sous forme d'un solide blanc avec un rendement de 33 %. 054H6IF2N3O12 M=982,07g.mol"1
Rf = 0.30, éluant : cyclohexane / acétate d'éthyle (1 : 1). RMN 19F (CDCI3, 282MHz)
-117.8 (1 F, d, 2JF-F 259.2), -120.3 (1 F, d, 2JF-F 259.2). RMN 1H (CDCI3, 300MHz)
1.32 (d, 3H, 3J 7.0, CH3), 1.35-1.80 (m, 6H, 3CH2), 2,92-3,18 (m,1 H, NCH2), 3,25-3,36 (m, 1H1 NCH2), 3.51 (d, 6,5Hz, 2H, H6), 3.71 (s, 3H, OCH3), 3.88-3,96 (m, 2H, H3, H4), 4.13 (t, 2,3Hz, 1 H, HS), 4.15-4,26 (m, 1 H1 CH),
4.33 (d, 10Hz, 1H, H2); 4.42 (d, 2H, OCH2Ph), 4.45-4.52 (m, 1 H, CH), 4.58 (d, 1 H, 2J 11.5, OCH2Ph), 4.71 (s, 2H, OCH2Ph), 4.77 (d, 1 H, 2J 10.2,
OCH2Ph), 4.85 (d, 1 H, 2J 10.2, OCH2Ph), 4.95 (d, 1H, 2J 11.5, OCH2Ph), 5.05 (s, 2H, OCH2Ph), 5.32 (d, 1 H, 3J7.6, NH), 5.32 (s, 1 H, OH), 6.67 (d, 1 H, 3J 7.4, NH), 6.93 (Is, 1H, NH), 7.21-7.38 (m, 25H, HA1-). RMN 13C (CDCI3, 75MHz) 18,4 (CH3) ; 21 ,9 (CH2) ; 28,2 (CH2) ; 31 ,2 (CH2) ; 38,6 (CH2N) ; 50,6 (CH) ; 52,1 (CH) ; 52,6 (OCH3); 67,1 (OCH2Ph); 68,6 (C6) ; 70,9 (C5) ; 73,3 et 73,5 (2OCH2Ph) ; 74,1 (C4) ; 74,7 (OCH2Ph) ; 74,8 (C2) ; 75,6 (OCH2Ph) ; 80,7 (C3) ; 96,7 (t, 25,7Hz, CI) ; 127,7; 127,8; 127,9; 128,0; 128,1; 128,2; 128,4 (2C); 128,6; 128,7 (Car.) ; 136,3; 137,9; 138,0 ; 138,4 ; 138,7 (Car. quat.) ; 164 (CF2CONH) ; 172,6 (ÇONH) ; 172,7 (CO2Me).
Synthèse du composé 21 (Figure 15)
Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le composé 20 (575 mg ; 0.586 mmol ; 1 éq.) en solution dans le tétrahydrofurane (8 ml_), une solution aqueuse de lithine (2M ; 2 éq.) est ajoutée et le mélange est agité pendant la nuit à température ambiante. Le milieu est acidifié avec une solution d'HCI 1M (10 ml_) puis extrait avec de l'acétate d'éthyle (3 x 10 ml_), et les phases organiques sont combinées, lavées avec une solution saturée de NaCI (20 mL) et concentrées directement. L'acide 21 est isolé ainsi comme un solide jaune pâle qui peut être utilisée directement pour la prochaine étape sans purifications supplémentaires avec un rendement brut de 81%.
C53H59F2N3O12 M=961g.mol"1
RMN 19F (CDCI3, 282MHz)
-118.1 (1 F, d, 2JF-F 258.6), -119.9 (1 F, d, 2JF-F 258.6).
RMN 1H (CDCI3, 300MHz) 1.29 (tapp., 3H, 3J 9,7, CH3), 1.10-1.41 (m, 4H, 2CH2), 1.50-1.72 (m, 2H,
CH2), 2,88-2,95 (m, 1 H, NCH2), 3,22-3,32 (m,1 H, NCH2), 3.49 (dapp, 6,0Hz,
2H, H6), 3.89-3,92 (m, 2H, H3, H4), 4.13 (t, 6Hz, 1H, H5), 4.22-4,43 (m, 3H,
2CH, H2); 4.38 (d, 2H, OCH2Ph), 4.54 (d, 1 H, 2J 11.5, OCH2Ph), 4.67 (s, 2H,
OCH2Ph), 4.73 (d, 1 H, 2J 10.2, OCH2Ph), 4.81 (d, 1H, 2J 10.2, OCH2Ph), 4.91 (d, 1H, 2J 11.4, OCH2Ph), 4,97 (s, 2H, OCH2Ph), 5.62 (d, 1H, 3J7.7,
NH), 7,07 (Is, 2H, 2NH), 7.18-7.32 (m, 25H, HAΓ).
RMN 13C (CDCI3, 75MHz)
19,0 (CH3) ; 22,4 (CH2) ; 28,8 (CH2) ; 30,9 (CH2) ; 39,0 (CH2N) ; 50,9 (CH) ;
52,9 (CH) ; 67,6 (OCH2Ph); 69,0 (C6) ; 71 ,2 (C5) ; 73,7 et 73,9 (2OCH2Ph) ; 74,6 (C4) ; 75,1 (OCH2Ph) ; 75,3 (C2) ; 75,9 (OCH2Ph) ; 81 ,0 (C3) ; 97,1 (t,
27,4Hz, CI) ; 128,1 ; 128,3; 128,5; 128,7; 128,8; 129,0; 129,1 (Car.) ; 136,7;
138,2; 138,4 ;138,7 ;138,9 (Car. quat.) ; 164,9 (CF2CONH) ; 174,1 (ÇONH) ;
175,1 (CO2H).
Synthèse du composé 22 (Figure 16)
Un ballon contenant Ie produit de départ 2J. (458 mg ; 0,473 mmol ) dans un mélange de tétrahydrofurane THF (15 ml_) et d'HCI 1 N (1 ,2eq.) en présence d'une pointe de spatule de palladium sur charbon Pd/C est placé sous atmosphère d'hydrogène. Le mélange est laissé sous agitation pendant une nuit puis filtré sur un filtre Millipore®. Le mélange est ensuite concentré pour obtenir le produit 16 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 82%.
C17H30CIF2N3O10 M=509 g.mol ι-1
-116.7 (1 F, d, 2JF-F 256.4), -117.8 (1 F, d, 2JF-F 256.4),
-118.2 (1 F, d, 2JF-F 256.4), -119.3 (1F, d, 2JF-F 256.4).
RMN 1H (D2O, 300MHz)
1.51 (3H, d, 3J 7.1 Hz, CH3), 1., 25-1.90 (6H, m, 3CH2), 3.25-3.32 (2H, m,
NCH2), 3.59-3.74 (m, 2H6_1,2H6,H4,H5), 3.81-4,17 (m, H31, CH1H^, H51.H2D, 4.32-4,41 (m, CH,H3,H2),
RMN 13C (D2O, 75MHz)
18,4 (CH3), 24,1 (CH2), 29,5 (CH2) 31.7 (CH2), 41 ,1 (NCH2), 50,8 (ÇH), 54,6
(CH), 62,7 (C6!) ; 64,2 (Cg) ; 68,7 (CSD ; 70,5 (C4D ; 72,2 (C3D ; 72,5 (CS) ;
74,1 (C23 ; 75,6 (C3) ; 77,2 (C2) ; 81 ,9 (C4) ; 172,8 (CO). Synthèse du composé 24 (Figure 17)
Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant la Z-Orn(Boc)-OH 23 (1 ,00 g ; 2,73 mmol; 1éq) dissout dans le dichlorométhane (13 ml_), le carbonyldiimidazole (532 mg; 3,28 mmol; 1 ,2 éq) est ajouté par petites portions. Le milieu est agité pendant une heure. Puis sur ce produit est additionné une solution préparée sous atmosphère inerte et constituée du CI" +H3N-Ala-OBn 7 (589 mg ; 2,73 mmol ; 1éq) et de DIEA (947μl_ ; 5,73 mmol ; 2,1 éq) dans le dichlorométhane (13 ml_). Ce mélange est agité pendant 12 heures. Le milieu est hydrolyse avec une solution d' acide chlorhydrique 1 N, puis la phase acqueuse obtenue est extraite trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur MgSO4, filtrées, puis concentrées. Le brut est chromatographié sur colonne de silice (Eluant Cyclohexane/ Acétate d'éthyle 50/50) pour obtenir le composé 24 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 70%. C28H37N3O7 M=527,62 g.mor1 Rf : 0,44 (Cyclohexane/Acétate d'éthyle 50/50). RMN 1H (CDCk 300 MHz) :
1,4 (m, 12H, C(CH3)3 ,CH3); 1,47-1,53 (m, 2H, CH2) ; 1,80-1,87 (m, 2H, CH2) ; 3,01-3,33 (m, IH, CH2NH) ; 3,31-3,33 (m, IH, CH2NH) ; 4,4 (m, IH5 CH(Om)) ; 4,55-4,62 (m, IH, CH(AIa)) ; 4,73 (m, IH, BocNH) ; 5,08 (s, 2H, OCH2Ph) ; 5,08- 5,11 (m, IH, OCH2Ph) ; 5,18 (d, IH, OCH2Ph 2JH-H=12,2Hz) ; 5,6 (m, H, ZNH) ; 7,0 (m, IH, NH) ; 7,29-7,37 (m, 10H, H31) RMN 13C (CDCk 75,5 MHz) :
17,8 (CH3) ; 26,3 (CH2) ; 28,5 (C(CHs)3) ; 30,5 (CH2) ; 39,2 (CH2NH) ; 48,5 (CH(AIa)) ; 53,6 (CH(Om)) ; 67,3 et 67,5 (2 OCH2Ph) ; 79,4 (Ç_(CH3)3 ; 128,2; 128,3 (2C); 128,5; 128,6; 128,7 (Car) ; 135,5; 136,4 (Çar.quat) ; 156,4 et 156,8 (ZÇO et BocÇO); 171,8 et 172,5 (ÇONH et CO2) M(ES+) :[M+H]+=528,87 ;[M+Na]+=551 ,00 ;[M+K]+=566,73 ;[2M+Na]+=1077,5 et [2M+K]+=1093,13
Synthèse du composé 25 (Figure 18)
Déprotection du peptide
Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le peptide 24 (563 mg ; 0,80 mmol ;1 éq) dissout dans le dichlorométhane (11 ml_), I1 acide trifluoroacétique (1 ,9 ml_ ;25,7 mmol; 20 éq) est ajouté. La solution est agitée pendant 12 heures. Le milieu réactionnel est concentré puis coévaporé 4 à 5 fois au toluène . Le résidu est trituré au tert-butylméthylether et enfin filtré et le peptide déprotégé est obtenu avec un rendement de 72%. Couplage Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant l'acide 6 (508 mg ; 0,80 mmol ; 1éq) le peptide précédemment déprotégé (433 mg ; 0,80 mmol ; 1éq) dans le diméthylformamide (8 mL), sont ajoutés I' HOBT (119 mg ; 0,88 mmol ; 1 ,1 éq) puis la NMM (220 μL ; 2,00 mmol ; 2,5 éq). Puis après 15 minutes, I' EDCI (169 mg; 0,88 mmol; 1 ,1 éq) est introduite. La solution est agitée pendant 48 heures.
Le solvant est évaporé. Le résidu est repris au dichlorométhane puis hydrolyse avec une solution d'acide chlorhydrique 1 N. La phase acqueuse est extraite trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques, une fois rassemblées sont séchées sur MgSO4, filtrées puis concentrées. Le brut ainsi obtenu est chromotographié sur colonne de silice pour conduire au composé 25 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 27%. 059H6SF2N3O12 M=1044,17 g.mol'1 Rf=0,44 (Eluant Cyclohexane/Acétate d' éthyle 50/50) RMN 19F (CDCI3), 282,5MHz : -117,7 (d, 2JF-F=260Hz) ; -120,3 (d, 2JF-F=260Hz) RMN 1H (CDCU. 300 MHz) :
1,33 (d, 3H, CH3, 3JH-H=7,3Hz) ; 1,41-1,49 (m, 2H, CH2) ; 1,73-1,81 (m, 2H, CH2) ; 3,0 (m, IH5 CH2NH) ; 3,47-3,64 (m, 3H, 2H6 et CH2NH) ; 3,93-3,96 (m, 2H, H3 et H4) ; 4,18 (t, IH, H5, 3JH5-H6=6,5Hz) ; 4,36 (d, IH, H2, 3JH2-H3=9,5 Hz) ; 4,39-4,54 (m, 4H, CH(Om), CH(AIa) et OCH2Ph) ; 4,59 (d, IH, OCH2Ph, 2JH-H=I 1,4 Hz) ; 4,75 (s, 2H, OCH2Ph) ; 4,80 (d, IH, OCH2Ph, 2JH-H=IO5S Hz) ; 4,89 (d, IH5 OCH2Ph, 2JH-H=1053 Hz) ; 4,96 (d, IH, OCH2Ph, 2JH-H=I 1,4 Hz) ; 5,07 (s, 2H, OCH2Ph) ; 5,11 (s, 2H, OCH2Ph) ; 5,2 (s, IH, OH) ; 5,53 (d, 8,1Hz, IH, ZNH) ; 6,7 (d, 7,2Hz, IH, NH) ; 7,1 (m, IH, NH) ; 7,27-7,34 (m, 3OH, H31) RMN 13C (CDCk. 75,5 MHz) :
17,6 (CH3) ; 24,8 (CH2) ; 30,0 (CH2) ; 37,9 (CH2N) ; 48,3 (CH(AIa)) ; 52,3 (CH(Om)) ; 67,0 et 67,3 (2 OCH2Ph) ; 68,4 (C6) ; 70,7 (C5) ; 73,2 et 73,4 (2 OCH2Ph) ; 74,0 (C4) ; 74,7 (OCH2Ph) ; 74,7 (C2) ; 75,5 (OCH2Ph) ; 80,7 (C3) ; 96,7 (t, C1 Hz) ; 127,7; 127,8; 128,1 (2C); 128,2; 128,3; 128,4; 128,5; 128,6 (3C); 128,7 (Car) ; 135,4; 136,4; 137,7; 137,9; 138,3; 138,6 (Çquat) ; 156,3 (ZNHÇO) ; 164,3 (t, CF2CO, 2Jc-F=28,2Hz) ; 171,6 et 173,2 (€ONH et CO2) M(ES+) : [MH-H]+ = 1044,33 et [M+Na]+=1066,47 et [M-H2O]+=1026,27 Analyse élémentaire : Théorique %C 67,87 %H 6,08 %N 4,02 Expérimentale %C 67,96 %H 6,39 %N 3,46
Synthèse du composé 26 (Figure 19)
Dans un ballon contenant le composé 25 (104 mg; 0,0996 mmol; 1éq) dissout dans le THF (10 ml_), l'acide chlorhydrique 1N (0,13 ml_ ; 0,129 mmol ; 1,3 éq), puis une pointe de spatule de Pd/C sont ajoutés. Le solution est placée sous atmosphère d' hydrogène et agitée pendant 48 heures. Le milieu est filtré sur millipore puis concentré et le composé 26 est obtenu sous la forme d'un solide jaune pâle avec un rendement de 97%. CI6H28CIF2N3OI0 M=495,86 g. mol"1
RMN 19F (D2O, 282,5 MHz) -119,4 (d, JF-F=256HZ) ; -120,6 (d, JF-F=256Hz) ; -121 ,0 (d, JF-F=257Hz) ; -122,1 (d, JF-F=257Hz). RMN 1H (D2O, 300 MHz)
1 ,43 (d; 6,7Hz; CIH3) ; 1 ,66-1 ,78 (m; 2H; CH2); 1 ,92 (m; 2H; CH2) ; 3,34 (m; 2H; NHCH2); 3,64-3,71 (m; 2H61,2H6); 3,75-3,77 (m; H4 H5) ;3,83-3,86 (m, H31) 3,99-4,03 (m; CH(Om)1H^1HSl1HiD; 4,16 (t, 7,5Hz, H3); 4,4-4,43 (m; CH, H2).
NMR 13C (D2O, 75,5 MHz)
16,2 (CH3) ; 20,8 (CH2) ; 23,8 (CH2) ; 39,0 (CH2N) ; 49,1 (CH(AIa)) ; 53,2 (CH(Om)) ; 61 ,1 (C6D ; 62,5 (C6) ; 67,0 (C5J ; 69,0 (C£) ; 70,6 (C3D ; 71 ,0 (CS) ; 72,5 (C2D ; 74,0 (CZ) ; 75,5 (C2) ; 80,2 (C4) ;96,3 et 98,8 (Ci et CID; 113,9 et 117,4 (CF2) ; 169,6 et 176,3 (CO).
M(ES+) : : [M+H]+ = 461 ,2 et [M+Na]+=483,3 et [M-H2O]+=441 ,3
Synthèse du composé 28 (Figure 20)
Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant la Z-Lys(Boc)-OH 8 (1 ,90 g ; 5,00 mmol; 1éq) dissout dans le dichlorométhane (25 ml_), le carbonyldiimidazole (973 mg; 6,00 mmol; 1 ,2 éq) est ajouté par petites portions. Le milieu est agité pendant une heure. Puis sur ce produit est additionné une solution préparée sous atmosphère inerte et constituée du CI" +H3N-Gly-OBn 27 (1 ,00 mg ; 5,00 mmol ; 1éq) et de DIEA (1 ,7 ml_; 10,50 mmol ; 2,1 éq) dans le dichlorométhane (25 mL). Ce mélange est agité pendant 12 heures. Le milieu est hydrolyse avec une solution d'acide chlorhydrique 1 N, puis la phase aqueuse obtenue est extraite trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur MgSO4, filtrées, puis concentrées.
Le brut est chromatographié sur colonne de silice (Eluant Cyclohexane/Acétate d' éthyle 50/50) pour obtenir le composé 28 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 89%. C28H37N3O7 M=527,62g.mor1 Rf : 0,41 (Acétate d' éthyle). RMN 1H (CDCK 300 MHz) :
1,40 (s, 13H, C(CHs)3, 2CH2); 1,67 (m, IH, CH2) ; 1,82 (m, IH, CH2) ; 3,07 (m, 2H, CH2NH(LyS)) ; 4,04 (m, 2H, CH2(GIy)) ; 4,21-4,23 (m, IH, CH(Lys)) ; 4,71 (m, IH, BocNH) ; 5,08 (s, 2H, OCH2Ph) ; 5,16 (s, 2H, OCH2PIi) ; 5,66 (d, 7,3Hz, IH, ZNH); 6,85 (m, IH, NH) ; 7,30 (m, 10, Har). RMN 13C (CDCk 75,5 MHz) :
22,4 (CH2) ; 28,5 (C(Ç_H3)3) ; 29,7 (CH2) ; 32,0 (CH2) ; 39,8 (£H2NH(Lys)) ; 41,1 (CH2NH(GIy)) ; 54,8 (ÇH(Lys)) ; 67,2 et 67,3 (OCH2Ph) ; 79,3 (Ç_(CH3)3) ; 128,2; 128,3; 128,5; 128,6; 128,7 (3C) (C31 ) ; 135,2; 136,2 (Ç_quat) ; 156,4 (CO); 169,67 et 172,3 (CONH et CO2)
M(ES+) : [M+H]+ = 528,53 et [M+Na]+=550,53 et [M+K]+=566,27 Analyse élémentaire : Théorique %C 63,74 %H 7,07 %N 7,96 Expérimentale %C 63,71 %H 7,03 %N 7,85 Synthèse du composé 29 (Figure 21)
Déprotection du peptide Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le peptide 28 (2,04 g ; 3,87 mmol ; 1éq) dissout dans le dichlorométhane (32 ml_), I1 acide trifluoroacétique (5,7 ml_ ;77,3 mmol; 20 éq) est ajouté. La solution est agitée pendant 12 heures. Le milieu réactionnel est concentré puis co-évaporé 4 à 5 fois au toluène pour conduire au peptide déprotégé avec un rendement quantitatif. Couplage
Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant l'acide 6 (317mg ; 0,50 mmol ; 1éq) le peptide précédemment déprotégé (271 mg ; 0,50 mmol ; 1éq) dans le diméthylformamide (5 mL), sont ajoutés I' HOBT (74 mg ; 0,55 mmol ; 1 ,1 éq) puis la NMM (137 μL ; 1 ,25 mmol ; 2,5 éq). Puis une fois après 15 minutes, I' EDCI (105 mg; 0,55 mmol; 1 ,1 éq) est introduite. La solution est agitée pendant 48 heures. Le solvant est évaporé. Le résidu est repris au dichlorométhane puis hydrolyse avec une solution d'acide chlorhydrique 1 N. La phase aqueuse est extraite trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques, une fois rassemblées sont séchées sur MgSO4, filtrées puis concentrées. Le brut ainsi obtenu est chromotographié sur colonne de silice (Eluant Cyclohexane/Acétate d'éthyle 50/50) pour conduire au composé 29 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 47%. C59H63F2N3Oi2 M=1044, 17 g. mol-1
Rf=0,47 (Eluant Cyclohexane/Acétate d'éthyle 50/50) RMN 1 '9Tc (CDCI3), 282,5MHz : -116,6 (d, 2JF-F=260HZ) ; -122,1 (d, 2JF-F=261 HZ) RMN 1H (CDCl3, 300 MHz) :
1,30-1,81 (m, 6H5 3CH2) ; 3,05-3,11 (m, IH, CH2NH(LyS)) ; 3,31-3,38 (m, IH, CH2NH(LyS)) ; 3,55 (d, 2H, H6, 2J=6,2 Hz) ; 3,86-4,04 (m, 4H, H3, H4 et CH2(GIy)); 4,16-4,20 (m, 2H, H5 et CH(Lys)) ; 4,33 (d, IH, H2, 3JH2-H3=IO3OHz) ; 4,44 (d, IH, OCH2Ph, 2JH-H=12,0 Hz) ; 4,49 (d, IH, OCH2Ph, 2JH-H=12,0 Hz) ; 4,57 (d, IH, OCH2Ph, 2JH-H=I 1,2Hz) ; 4,74 (s, 2H, OCH2Ph) ; 4,79 (d, IH, OCH2Ph, 2JH- H=10,3Hz) ; 4,87 (d, IH, OCH2Ph, 2JH-H=10,3Hz) ; 4,97 (d, IH, OCH2Ph, 2JH. H-11,2Hz) ; 5,12 (s, 2H, OCH2Ph) ; 5,17(s, 2H, OCH2Ph) ; 5,53 (d, IH, NHZ, 3Jn. H=7,4Hz) ; 6,57 (m, IH, NH(GIy)) ; 6,93 (m, IH, NH) ; 7,28-7,35 (m, 3OH, Har) RMN 13C (CDCh, 75,5 MHz) :
21,9 (CH2) ; 28,2 (CH2) ; 31,8 (CH2) ; 38,9 (CH2NH(Ly8)) ; 41,4 (CH2(GIy)) ; 54,4 (CH(LyS)) ; 67,2 et 67,4 (2OCH2Ph) ; 68,3 (C6) ; 70,7 (C5) ; 73,2 et 73,4 (OCH2Ph) ; 74,1 (C4) ; 74,6 (C2) ; 74,8 et 75,5 (OCH2Ph) ; 80,6 (C3) ; 96,9 (t, C1, 1Jc-F=27Hz) ; 127,6; 127,8 (2C); 128,0; 128,1; 128,2; 128,3 (3C); 128,4; 128,5; 128,6 (2C); 128,8 (Car) ; 135,2; 136,3; 137,9 (2C); 138,4; 138,6 (Çquat) ; 156,2 (ZNHÇO) ; 163,9 (t, CF2CO5 2Jc-F=27Hz) ; 169,9 et 172,0 (NHÇO et CO2) M(ES+) : [M+H]+ = 1045,4 et [M+Na]+=1067,53. Analyse élémentaire : Théorique %C 67,87 %H 6,08 %N 4,02 Expérimentale %C 67,80 %H 6,03 %N 3,99
Synthèse du composé 30 (Figure 22)
Dans un ballon contenant le composé 29 (104 mg; 0,0996 mmol; 1éq) dissout dans le THF 3mL, l'acide chlorhydrique 1N (1 ,3 ml_ ; 0,128 mmol ;
1 ,3 éq), puis une pointe de spatule de Pd/C sont ajoutés. Le solution est placée sous atmosphère d'hydrogène et agitée pendant 48 heures. Le milieu est filtré sur millipore puis concentré. Le composé 30 est obtenu sous la forme d'un solide jaune pâle avec un rendement de 98%.
C16H28CIF2N3Oi0 M=495,86 g.mol"1
RMN 19F (D2O, 282,5 MHz)
-119,4 (d, JF-F=256HZ) ; -120,5 (d, JF-F=256HZ) ; -120,9 (d, JF-F=257Hz) ; -122,0 (d, JF-F=257Hz).
RMN 1H (D2O, 300 MHz)
1 ,41-1 ,46 (m; 2H; CH2); 1 ,53-1 ,60 (m; 2H; CH2) ; 1 ,85-1 ,92 (m; 2H; CH2) ;
3,27 (m; 2H; NHCH2(LyS)); 3,57-3,74 (m; 2H61,2H6;H4; H5) ;3,83 (dd, 2,9Hz et 9,3Hz, H£); 3,95-4,04 (m; CH21CH1 H4_:,H5:,H2:); 4,14 (t, 8,3Hz, H3); 4,39 (d , 8Hz1 HZ).
NMR 13C (D2O, 75,5 MHz)
21 ,6 (CH2) ; 28,0 (CH2) ; 30,6 (CH2) ; 39,3(Ç_H2N(Lys)) ; 41 ,4 (CH2(GIy)) ;
53,4 (CH(Lys)) ; 61 ,1 (C£) ; 62,6 (C6) ; 67,1 (C£) ; 68,9 (C£) ; 70,6 (C£) ;
70,9 (C5) ; 72,5 (C2T) ; 73,9 (C3) ; 75,5 (C2) ; 80,2 (C4) ;96,3(t, 26Hz) et 98,8 (t, 29Hz) (CI et CV); 114,0 et 117,4 (CF2) ; 163,9 (t, 28 Hz, CF2CO) ;170,7 et 173,2 (2Ç_O).
M(ES+) : : [M+H]+ = 461 ,2 et [M+Na]+=483,3 et [M-H2O]+=441 ,3
Synthèse du composé 32 (Figure 23)
Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant la Z-Lys(Boc)-OH 8 (760 mg; 2,00 mmol; 1éq) dissout dans le dichlorométhane (20 mL), le carbonyldiimidazole (389 mg; 2,40 mmol; 1 ,2 éq) est ajouté par petites portions. Le milieu est agité pendant une heure. Puis sur ce produit est additionné une solution préparée sous atmosphère inerte et constituée du CI" +HN-Pro-OBn 31 (483 mg ; 2,00 mmol ; 1éq) et de DIEA (690 μl_; 4,20 mmol ; 2,1 éq) dans le dichlorométhane (20 ml_). Ce mélange est agité pendant 12 heures. Le milieu est hydrolyse avec une solution d'acide chlorhydrique 1 N, puis la phase aqueuse obtenue est extraite trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur MgSO4, filtrées, puis concentrées. Le brut est chromatographié sur colonne de silice (Eluant Cyclohexane/Acétate d'éthyle 50/50) pour conduire au composé 32 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 29%. C-31 H4-I N3O7 M=567,69 g.mor1 Rf : 0,51 (Cyclohexane/Acétate d'éthyle 50/50). RMN 1H (CDCI3, 300MHz) : 1 ,3 (s, 9H, (CHs)3) ; 1 ,4-2,2 (m, 10H, 3 CH2 Lys et 2 CH2 Pro); 3,0 (m, 2H, CH2NH(LyS)); 3,5 (m, 1 H, CH2N(PrO)); 3,6 (m, 1H, CH2N(PrO)); 4,4 (m, 1 H, CH(Lys)); 4,5 (m, 1H, CH(Pro)); 4,9 (d, 6,5Hz, NHBoc), 4,97 (s, 2H, OCH2Ph); 4,9 (m, 1H, OCH2Ph); 5,09 (d, 1H, OCH2Ph, 2JH-H=12,3 HZ); 5,8 (d, 7,6Hz, 1H, ZNH); 7,2 (m, 1OH, Har) RMN 13C (CDCI3, 75,5MHz) :
21 ,8 (CH2) ; 24,7 (CH2) ; 28,3 (C(CHa)3) ; 28,7 (CH2) ; 29,2 (CH2) ; 31 ,8 (CH2) ; 39,8 (ÇH2NH(Lys)) ; 46,8 (CH2N(PrO)) ; 52,0 (ÇH(Lys)); 58,7 (ÇH(Pro)) ; 66,6 et 66,7 (OCH2Ph) ; 78,6 (Ç_(CH3)3 ; 127,8; 127,9; 128,0; 128,1; 128,3; 128,4 (Çar) ; 135,4; 136,3 (Ç_quat) ; 155,9 et 156,0 (ÇOZ et CO Boc) ; 170,7 (ÇONH) ; 171 ,6 (CO2Bn)
M(ES+) : [M+H]+=568,33 ; [M+Na]+=590,40 ; [M+K]+=560,27
Synthèse du composé 33 (Figure 24)
Déprotection du peptide
Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le peptide 32 (318 mg ; 0,56 mmol ;1 éq) dissout dans le dichlorométhane (6 mL), I' acide trifluoroacétique (833 μl_; 11 ,22 mmol; 20 éq) est ajouté. La solution est agitée pendant 12 heures. Le milieu réactionnel est concentré puis coévaporé 4 à 5 fois au toluène pour conduire quantitativement au peptide déprotégé. Couplage
Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant I' acide 6 (368mg ; 0,58 mmol ; 1éq) le peptide précédemment déprotégé (339 mg ; 0,58 mmol ; 1éq) dans le diméthylformamide (6 mL), sont ajoutés I' HOBT (87 mg ; 0,64 mmol ; 1 ,1 éq) puis la NMM (192 μL ; 1 ,75 mmol ; 3 éq). Puis après environ 15 minutes, I' EDCI (123 mg; 0,64 mmol; 1 ,1 éq) est introduite. La solution est agitée pendant 48 heures. Le solvant est évaporé. Le résidu est repris au dichlorométhane puis hydrolyse avec une solution d'acide chlorhydrique 1 N. La phase aqueuse est extraite trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques, une fois rassemblées sont séchées sur MgSO4, filtrées puis concentrées. Le brut ainsi obtenu est chromatographié sur colonne de silice (Eluant Cyclohexane/Acétate d'éthyle 50/50) pour obtenir le composé 33 sous forme de solide blanc avec un rendement de 29%. C62H67F2N3O12 M=1083,83 g. mol-1
Rf=0,60 (Eluant Cyclohexane/Acétate d'éthyle 50/50) RMN 19F (CDCk 282,5 MHz) : -116,1 (d, JF-F=259 HZ) ; -122,9 (d, JF-F= 259 Hz) RMN 1H (CDCU. 300 MHz) :
1,2-1,9 (m, 10H, 3CH2(LyS) et 2CH2(PTO)) ; 3,1 (m, IH3 CH2NH(LyS)) ; 3,3 (m, IH, CH2NH(LyS)) ; 3,5 (m, 4H, H6 et CH2N(Pr0)) ; 4,0 (m, 2H, H3 et H4) ; 4,2 (t, IH, H5, 2J=6,4 Hz) ; 4,3 (d, IH, H2, 2JH-H=9,1) ; 4,4-4,5 (m, IH5 CH(Lys)) ; 4,44 (d, IH, OCH2Ph, 2JH-H=12,1 Hz) ; 4,49 (d, IH, OCH2Ph, 2Jn-H=I 1,9 Hz) ; 4,5-4,6 (m, IH, CH(Pr0)) ; 4,55 (d, IH, OCH2Ph, 2JH-H=I 1,3 Hz) ; 4,72 (s, 2H, OCH2Ph) ; 4,76 (d, IH, OCH2Ph, 2JH-H=10,4 Hz) ; 4,84 (d, IH, OCH2Ph, 2JH-H=10,4 Hz) ; 4,93 (d, IH, OCH2Ph, 2JH-H=I 1,3 Hz) ; 5,05 (d, IH, OCH2Ph, 2JH-H=12,3 Hz) ; 5,07 (d, IH, OCH2Ph, 2JH-H=9,3 Hz) ; 5,11 (d, IH, OCH2Ph, 2JH-H=9,3 Hz) ; 5,17 (d, IH, OCH2Ph, 2JH-H=12,4 Hz) ; 5,4 (, IH, OH) ; 5,6 (d, 8,3Hz, IH, ZNH) ; 7,1 (m, IH, CONH) ; 7,3 (m, 3OH, H31) RMN 13C (CDCU. 75,5 MHz) :
21,6 (CH2) ; 24,9 (CH2) ; 27,9 (CH2) ; 28,9 (CH2) ; 32,1 (CH2); 39,5 (CH2NH(Ly8)) ; 47,2 (CH2N(PTO)) ; 52,1 (ÇH(Lys)) ; 59,0 (ÇH(Pro)) ; 66,9 et 67,2 (2OCH2Ph) ; 68,2 (C6) ; 70,7 (C5) ; 73,2 et 73,5 (2OCH2Ph); 74,3 (C4) ; 74,6 (C2) ; 74,9 et 75,4 (2OCH2Ph) ; 80,5 (Ç3); 97,0 (t, C1, ^=27 Hz) ; 127,9 ; 128,0 ; 128,3 ; 128,4 ; 128,5 ; 128,6 ; 128,7 ; 128,8 ; 128,9 (3C) ;129,0 (C91.) ; 135,5 ; 136,5 ; 138,0 ; 138,4 ; 138,8 (Çar.quat) ; 156,0 (CONHZ)- 164,0 (CF2CO); 170,7 et 172,2 (ÇONH et CO2) M(ES+) : [M+H]+ = 1084,6 et [M+Na]+=1106,67 M(ES-) I fM-HT = 1082,27
Analyse élémentaire : Théorique %C 68,68 %H 6,23 %N 3,88 Expérimentale %C 68,53 %H 6,76 %N 3,62
Synthèse du composé 34 (Figure 25)
Dans un ballon contenant le composé 33 (155 mg; 0,14 mmol; 1éq) dissout dans le THF (5mL), L'acide chlorhydrique 1 N (175 μL ; 0,19 mmol ; 1 ,2 éq), puis une pointe de spatule de Pd/C sont ajoutés. Le solution est placée sous atmosphère d'hydrogène et agitée pendant 48 heures. Le milieu est filtré sur millipore puis concentré pour obtenir avec un rendement quantitatif le composé 34 sous la forme d'un solide blanc.
C19H32CIF2N3O10 M=536,01 g.mol"1
RMN 19F (D2O, 282,5 MHz)
-119,4 (d, JF-F=256Hz) ; -120,5 (d, JF-F=256Hz) ; -121 ,0 (d, JF-F=257Hz) ;
-122,0 (d, JF-F=257Hz).
RMN 1H (D2O, 300 MHz)
1 ,45 (m; 2H; CH2); 1 ,60 (m; 2H; CH2) ; 1 ,89-1 ,92 (m; 2H; CH2) ; 2,01 (m; 3H;
CH2) ; 2,33 (m; 1 H; CH2) ; 3,28-3,30 (m; 2H; NHCH2(LyS)); 3,61-3,74 (m;
2H61,2H6;H4; H5, NHCH2(PrO), NChT(LyS)) ;3,83 (dd, 2,9Hz et 9,9Hz, H3_:);
3,94-4,01 (m, H£,H5:,H2:); 4,14 (t, 8,2Hz, H3); 4,31 (t, 5,8Hz, CH(Lys)); 4,39
(d, 8,2Hz, H2); 4,38-4,51 (m, CH).
NMR 13C (D2O, 75,5 MHz)
21 ,3 (CH2) ; 25,0 (CH2) ; 28,1 (CH2) ; 29,0 (CH2); 29,7 (CH2) ;
39,3(CH2N(LyS)) ; 48,0 (CH2(Pm)) ; 52,0 (ÇH(Lys)) ; 53,4 (ÇH'(Lys)) ; 59,9
(ÇH(Pro)) ;61 ,1 (C§:) ; 62,6 (C6) ; 67,1 (C£) ; 68,9 (C41) ; 70,6 (C3_:) ; 70,9
(C5) ; 72,5 (C£) ; 73,9 (C3_) ; 75,5 (C2) ; 80,2 (C4) ;96,3 (t, 26Hz) et 98,8 (t,
29Hz) (Cl et CV); 114 (t, 258Hz, CF2) ; 163,9 ( 2t, 28 Hz, CF2CO) ; 168,8;
170,7 et 173,2 (CO). Synthèse du composé 35 (Figure 26)
Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant difluoroester 5 (989 mg ; 1 ,49 mmol : 1 éq.) en solution dans le dichlorométhane anhydre (7,5 mL) à -300C, on additionne goutte à goutte le SOBr2 (173 μL ; 2,24 mmol ; 1 ,5 éq.). Après 30 minutes, on introduit la pyridine (181 μL ; 2,24 mmol ; 1 ,5 éq.)- et on laisse sous agitation 30 minutes de plus à -300C. Une solution d'HCI 2M est ajoutée et la phase est extraite trois fois avec du dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur MgSO4, filtrées et concentrées sous pression réduite. Le produit 35 brut est obtenu sous forme de cristaux jaunes avec un rendement pondéral quantitatif sans purification supplémentaire. C38H39BrF2O7 M= 725,61 g.mor1
Rf : 0,54 (cyclohexane/acétate d'éthyle 8/2).
RMN 19F (CDCIg, 282.5MHz)
-107,5 (d, 249 Hz, 1F) ; -111 ,9 (d, 249 Hz, 1 F) .
RMN 1H (CDCk 300MHz) 1 ,2 (t, 7,1 Hz, 3H, CH3); 3,7 (dd, 5,7 et 9,4Hz, 1 H, 1 H6) ; 3,8 (dd, 7,5 et 9,4
Hz, 1 H, 1 H6) ; 4,2 (m , 2H, H3 et H4); 4,2-4,3 (m, 2H, CH2) ; 4,3 (m, 1 H,
H5) ; 4,5-5,1 (m, 9H, H2 et 4OCH2Ph) ; 7,2 (m, 2OH, Har)
RMN 13C (CDCI3,75,5MHz)
12,6 (CH3) ; 62,4 (CH2) ; 66,2 (C6) ; 72,0 (OCH2Ph) ; 72,1 (C4) ; 72,4 (OCH2Ph) ; 73,6 (OCH2Ph) ; 73,7 (OCH2Ph) ; 74,4 (C2) ; 74,5 (C5) ; 80,5
(C3) ; 102,4 (dd, 24 et 30 Hz, Ci) ; 110,6 (tapp. , 264 Hz, CF2) ; 126,3 ; 126,4; 126,5; 126,6; 126,7; 126,8; 127,1 ; 127,2; 127,4 (Car.); 136,5; 136,9 ; 137,2 ; 137,3 (Car. quai) ; 160,1 (tapp., 33Hz, CO2Et). Masse (ESI+) : 748,98 (M+Na) ; 774,88 (M+K).
Synthèse du composé 36 (Figure 27)
Dans un ballon contenant l'ester 35 (519mg ; 0,72 mmol ; 1 éq.) en solution dans le toluène anhydre (15 ml_) sous atmosphère d'azote, on additionne goutte à goutte le Bu3SnH préalablement distillé (291 μl_ ; 1,08 mmol ; 1,5 éq.). On chauffe reflux pendant 1 heure.
Le produit est concentré puis purifié sur colonne de silice (éluant cyclohexane/acétate d'éthyle 9,3/0,7) pour récupérer le produit 36 attendu sous la forme d'une huile incolore.
C3SH4OF2O7 M= 646,7 g. mol"1
RMN 19F (CDCk 282,5MHz)
-116,7(CId, 12 et 259 Hz, 1F) ; -118,2 (dd, 10 et 259 Hz, 1F).
RMN 1H (CDCk 300MHz)
1,05 (t, 7,2Hz, 3H, CH3); 3,47-3,53 (m, 3H, 2H6, H5) ; 3,57 (dd, 2,6 et 9,4 Hz,
1H, H3); 3,80-3,94 (m , 4H, Hi, H4, CH2) ; 4,09 (tapp., 9,5Hz, 1H, H2) ;
4,31 (d, 11,8Hz, 1H, OCH2Ph); 4,37 (d, 11,8Hz, 1H, OCH2Ph); 4,51 (d,
11,5Hz, 1H, OCH2Ph) ; 4,54 (d, 10,4Hz, 1H, OCH2Ph) ; 4,56 (d, 11,7Hz, 1H,
OCH2Ph) ; 4,65 (d, 11,7Hz, 1H, OCH2Ph) ; 4,85 (d, 11,7Hz, 1H, OCH2Ph) ;
4,86 (d, 10,4Hz, 1H, OCH2Ph) ;7,20 (m, 2OH, Har)
RMN 13C (CDCI3,75,5MHz)
14,2 (CH3); 63,1 (CH2); 68,9 (Cg); 72,8(OCH2Ph); 73,6 (C4) ; 74,0
(OCH2Ph) ; 74,1 (C2) ; 74,9 (OCH2Ph) ; 75,3 (OCH2Ph) ; 77,9 (tapp., 23Hz,
Ci) ; 78,2 (C5) ; 84,7 (C3) ; 113,9 (tapp. , 256Hz, CF2) ; 128,0-128,9 (Car.) ;
138,2 ; 138,3 ; 138,5 ; 139,0 (Car. quat.) ; 163,2 (tapp., 31Hz, CO2Et). Masse (ESI+) : 647,33 (M+H) ; 669,4 (M+Na).
Synthèse du composé 37 (Figure 28)
Dans un ballon contenant l'ester 36 (0,4 g ; 0,618 mmol, 1 éq.) dans le THF (5 ml_) est ajoutée une solution aqueuse de lithine LiOH (30 mg ; 1 ,25 mmol, 2 ,02éq.) solubilisée dans une quantité minimum d'eau. Le mélange est laissé 12 heures sous agitation puis repris dans l'acétate d'éthyle. Le mélange est acidifié avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 1 N puis extrait plusieurs fois avec de l'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées
Le composé 37 est obtenu sous la forme d'une huile blanche avec un rendement quantitatif.
C36H36 F2O7 M= 618,66g.mol 1-1
RMN 19F (CDCI3, 282,5 MHz)
-117,1 (d, JF-F=260HZ) ; -118,6 (d, JF-F=260Hz).
RMN 1H (CDCI3, 300 MHz)
3,38-3,52 (m, 4H, 2H6, HS) ; 3,57 (dd, 2,6 et 9,4 Hz, 1H, H3) ; 3,79 (d ,
2,4Hz, 1 H, H4); 3,79-3,88 (m, 1 H, Hi); 4,09 (t, 9,6Hz1 1 H, H2) ; 4,32 (d,
11 ,9Hz, 1H, OCH2Ph) ; 4,41 (d, 11 ,9Hz, 1 H, OCH2Ph) ; 4,47-4,64 (m, 4H,
2OCH2Ph) ; 4,81-4,86 (m, 2H, OCH2Ph) ; 7,20 (m, 2OH, Har) Synthèse du composé 38 (Figure 29)
Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant l'acide 37 (383 mg ;
0 ,619 mmol ; 1,0 éq.), le peptide déprotégé (379 mg ; 0,679 mmol ; 1 ,1 éq.), le 1-hydroxybenzotriazole HOBT (92 mg ; 0,681 mmol ; 1 ,1 éq.) et la N- méthylmorpholine NMM (204 μL ; 1 ,8 mmol ; 2,9 éq.) dans le DMF (5 ml_), l'EDCI (130 mg ; 0,678 mmol ; 1 ,1 éq.) est ajouté. La réaction est laissée sous agitation pendant 24 heures, puis le solvant est évaporé et le milieu est repris dans le dichlorométhane. Le milieu est ensuite extrait deux fois avec
HCI 1M (2*15 mL). La phase organique est collectée, séchée sur sulfate de magnésium, filtrée puis concentrée.
Le mélange est ensuite purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane/acétate d'éthyle. Après concentration des fractions recueillies, le produit 38 se présente sous la forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral de 53%.
C60H65F2N3On M=1042,17 g.mor1
RMN 19F (CDCI3, 282,5 MHz) -112,5 (dd, J 7,5Hz et 260Hz) ; -119,6 (d, J14,5 et 260Hz).
RMN 1H (CDCI3, 300 MHz)
1 ,17-1 ,19 (m, 2H, CH2); 1 ,29-1 ,35 (m; 5H; CH3 ; CH2); 1 ,44-1 ,66 (m; 2H;
CH2); 2,90-2,94 (m; 1H; NHCH2); 3,11-3,15 (m; 1H; NHCH2); 3,43-3,54 (m;
4H; H6, H3 ;H5); 3,87 (d, 2,6Hz, 1 H, H4); 3,88-4,02 (m; 2H; CHNH(Lys); Hi); 4,07 (t, 9,6Hz, H2); 4,36 (s, 2H, OCH2Ph); 4,46-4,52 (m; 3H; OCH2Ph ; CH
(AIa)); 4,61-4,66 (m, 2H, OCH2Ph) ; 4,77-4,87 (m, 2H, OCH2Ph); 5,0 (s; 2H;
OCH2Ph) ; 5,01-5,13 (m, 2H, OCH2Ph ) 5,35 (d; 7,5Hz1 1 H; ZNH); 6,38 (d;
7,1 ; 1 H; NH); 6,53 (Is, 1 H; NH) ; 7,2 (m; 3OH; Har).
RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 18,4 (CH3) ; 22,4 (CH2) ; 28,8 (CH2) ; 32,3 (CH2) ; 39,2 (CH2N) ; 48,6 (CH(AIa)) ; 54,9 (NÇH(Lys)) ; 67,4 et 67,6 (2OCH2Ph); 68,5 (C6) ; 73,1 (OCH2Ph) ; 73,7 (C4) ; 73,8 (OCH2Ph) ; 74,3 (C2) ; 75,1 (OCH2Ph) ; 75,4 (OCH2Ph) ; 77,1 (tapp, CI); 77,7 (CS); 84,4 (CZ) ; 127,9 -129 (Car.) ; 135,6; 136,6; 138,1 ;138,5 (2C) ;138,9 (Car. quat.) ; 156,0 (CONH(Z)) ; 171 ,6 (ÇONH) ; 172,9 (CO2Bn).
Synthèse du composé 39 (Figure 30)
Un ballon contenant le produit 38 (400 mg ; 0,384 mmol ) dans un mélange de tétrahydrofurane THF (5 ml_) et d'HCI 1N (576 μl_) et d'eau (1,5mL) en présence d'une pointe de spatule de palladium sur charbon Pd/C est placé sous atmosphère d'hydrogène. Le mélange est laissé sous agitation pendant une nuit puis filtré sur un filtre Millipore®. Le mélange est ensuite concentré pour obtenir le produit 39 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement quantitatif.
Ci7H30CIF2N3O9 M=493,88 g.mor1
RMN 19F (D2O, 282,5 MHz)
-116,7 (ddd, J=257Hz,17,2Hz et 10,7Hz1) ; -119,6 (ddd, J=257Hz et 14Hz).
RMN 1H (D2O, 300 MHz)
1 ,32 (d; 7,3Hz; CH3) ; 1,31-1,34 (m, 2H, CH2); 1 ,43-1,52 (m; 2H; CH2); 1 ,75-
1 ,83 (m; 2H; CH2) ; 3,14-3,18 (m; 2H; NHCH2); 3,42-3,61 (m; 4H, HV, H^,
H31); 3,72-3,79 (m; 2H HV1H^) ;3,82-3,90 (m, 2H, CH(Lys), H£); 4,24-4,32
(m; CH(AIa).
NMR 13C (D2O, 75,5 MHz) 16,3 (CH3) ; 21 ,5 (CH2) ; 27,9 (CH2) ; 30,8 (CH2) ; 39,4 (CH2N) ; 49,1 (CH(Lys)) ; 53,2 (NCH(AIa)) ; 61 ,3 (C(T); 66,1 (C?) ; 69,0 (C£) ; 74,0 (C51 ou C£) ; 77,3 (t, 24Hz, CI); 79,6 (C3I ou C£) ; 164,8 (d, 26Hz, CO); 169,9 et 176,3 (2ÇO).
Synthèse du composé 41 (Figure 31)
Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le zinc (3.34 g ; 51 mmol ; 7 éq.) préalablement activé, le THF (60 mL) est ajouté et le mélange est ainsi chauffé à reflux. La lactone 40 (3.94 g ; 7.3 mmol ; 1 éq.) est lentement additionné avec le bromodifluoroacétate d'éthyle (2.83 mL ; 22 mmol ; 3 éq.) dans le THF (60 mL). La réaction est agitée à reflux pendant 3 heures. Le mélange est refroidi à température ambiante et une solution d'HCI 1M (120 mL) est ajoutée. On filtre le mélange sur Buchner pour éliminer le zinc en excès. On ajoute à la solution du dichlorométhane (4OmL). On sépare les 2 phases et on extrait à nouveau deux fois la phase aqueuse au dichlorométhane. Les phases organiques sont séchées sur MgSO4, filtrées et concentrées sous pression réduite. Le résidu est purifié sur colonne chormatographique sur gel de silice avec un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle (8 : 2) comme éluant afin d'isoler le produit 4J. pur sous forme d'une huile incolore avec un rendement de 75%. C38H4oF2O8 M= 662,72 g. mol"1 Rf = 0.35, éluant : cyclohexane / acétate d'éthyle (8 : 2). RMN 19F (CDCk 282MHz)
-117.7 (d, 1 F, 2JF-F 256.4), -120.1 (d, 1 F, 2JF-F 256.4). RMN 1H (CDCk 300MHz) 1.30 (t, 3H, 3J7.1 , CH3), 3.63-3.81 (m, 3H1 H3, H6), 4.01-4.10 (m, 2H, H4, H5), 4.16 (s , 1 H, H2), 4.29 (q, 2H, 3J 7.1 , CH2), 4.50-4.81 (m, 4H, 2OCH2Ph), 4.85-4.92 (m, 4H, 2OCH2Ph), 7.21-7.38 (m, 2OH, Hy. RMN 13C (CDCI3, 75MHz)
14.3 (CH3), 63.7 (CH2), 68.6 (C6), 73.0 (C2), 73.8 (OCH2Ph), 75.5 (OCH2Ph), 75.7 (OCH2Ph), 76.4 (OCH2Ph), 77.8 (C3), 78.6 (C4), 83.7 (C5), 96.5 (t, 2J0-F 25.5, CI), 128.0 (2C), 128.1 (2C), 128.1 , 128.2, 128.3 (2C), 128.6, 128.7 (2C), 128.8 (2C), 128.8 (2C), 128.9 (2C) (Car.), 137.9, 138.3, 138.7, 138.7 (Car .quat.),163.3 (t, 2J0-F 30.3, CO).
Synthèse du composé 42 (Figure 32)
Dans un ballon contenant l'ester 41 (615 mg ; 0,93 mmol ; 1 eq.) dans le THF (5 ml_) est ajoutée une solution aqueuse de lithine LiOH (2M, 2 éq.) solubilisée dans une quantité minimum d'eau. Le mélange est laissé 12 heures sous agitation puis repris dans l'acétate d'éthyle. Le mélange est acidifié avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 1 N puis extrait plusieurs fois avec de l'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées. Le composé 42 est obtenu sous la forme d'une huile blanche avec un rendement 90%. C36H36 F2O8 M= 634,66g. mol"1 Rf = 0,50; éluant : DCM / methanol (9 : 1). RMN 19F (CDCk 282,5 MHz)
-117,2 (d, 1 F, 2JF-F 259Hz); -119,0 (d, 1 F, 2JF-F259Hz). RMN 1H (CDCk 300 MHz) 3,4-3,5 (m, 2H, H3, 1H6); 3,5-3,6 (m, 1 H, 1H6); 3,9 (m, 2H, H4, H5); 4,0 (m, 1H, H2); 4,4 (m, 8H; 4OCH2Ph); 6,1 (s, 2H, OH, COOH); 7,0-7,3 (m, 2OH,
RMN 13C (CDCk 75.5 MHz) 68,0 (C6) ; 71 ,4 (C2) ; 73,0 ; 74,9 ; 75,1 ; 75,9 ; 77,2 (C3) ; 77,9 (C4) ; 82,1 (C5) ; 94,9 (t, 2JCF 27, CI) ; 126,6 ; 126,7 ; 126,9 ; 127,0 ; 127,0 ; 127,3 ; 127,3 ; 127,4 ; 127,5 (Ç ar.); 135,6 ; 136,2 ; 136,4 ; 137,1 (Çar.quai).
Synthèse du composé 43 (Figure 33)
Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant l'acide 42 (383 mg ; 0,603 mmol ; 1 éq.), le peptide précédemment déprotégé (370 mg ; 0,664 mmol ; 1 ,1 éq.), le 1-hydroxybenzotriazole HOBT (0,090 g ; 0,664 mmol ; 1 ,1 éq.) et la N-méthylmorpholine NMM (0,198 mL ; 1 ,8 mmol ; 3 éq.) dans le DMF (1O mL), l'EDCI (127 mg ; 0,664 mmol ; 1 ,1 éq.) est ajouté. La réaction est laissée sous agitation pendant 24 heures, puis le solvant est évaporé et le milieu est repris dans le dichlorométhane. Le milieu est ensuite extrait deux fois avec HCI 1 M (2*20 mL). La phase organique est collectée, séchée sur sulfate de magnésium, filtrée puis concentrée. Le mélange est ensuite purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane/acétate d'éthyle. Après concentration des fractions recueillies, le produit 43 se présente sous la forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral de 43%.
C60H65F2N3O12 M=1058,17 g.mol 1-1
RMN 19F (CDCI3, 282,5 MHz)
-116,8 (d, JF-F=260HZ) ; -122,3 (d, JF-F=259Hz). RMN 1H (CDCI3, 300 MHz)
1 ,18-1,68 (m; 9H; CH3 ; 3CH2); 3,00-3,05 (m; 1H; NHCH2); 3,21-3,26 (m; 1 H;
NHCH2); 3,54-3,69 (m; 3H; H4, H6); 3,81 (d; 1H; 9,3Hz, H2) ; 3,94 (t, 9,2Hz,
2H, H5, H3); 4,0 (m; 1 H; CHNH(Lys);); 4,34-4,50 (m; 4H; OCH2Ph ; CH
(AIa)); 4,71-5,13 (m; 9H; OCH2Ph) ; 5,2 (s; 1 H, OH); 5,40 (d; 7,8 ; 1H; NH);
6,4 (m ; 1 H; NH) ; 6,9 (s; 1H; NH); 7,2 (m; 3OH; Har).
RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz)
18,1 (CH3) ; 22,4 (CH2) ; 28,4 (CH2) ; 32, (CH2) ; 39, (CH2N) ; 48,7
(CH(AIa)) ; 54,8 (NÇH Lys) ; 67,4 et 67,7 (2OCH2Ph); 68,8 (C6) ; 72,0 (C5) ;
73,8 (OCH2Ph) ; 75,4 (OCH2Ph); 75,7 (OCH2Ph) ; 76,4 (OCH2Ph); 77,8
(C4) ; 78,7 (C2) ; 83,5 (C3_); 128,2 -129,0 (Car.) ; 135,6; 136,6;
138.0 ;138,2 ;138,4 138,7 (Car. quat.) ; 156,5 (CO(Z)) ; 171 ,5 (ÇONH) ;
173.1 (CO2Bn).
Synthèse du composé 44 (Figure 34)
Un ballon contenant le produit 43_(220 mg ; 0,208 mmol ) dans un mélange de tétrahydrofurane THF (3 ml_) , d'HCI 1 N (312μL) et d'eau (environ 1 ,7mL) en présence d'une pointe de spatule de palladium sur charbon Pd/C est placé sous atmosphère d'hydrogène. Le mélange est laissé sous agitation pendant une nuit puis filtré sur un filtre Millipore®. Le mélange est ensuite concentré pour obtenir le produit 44 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 97%.
Ci7H3OCIF2N3O-Io M=509,88 g.mol ι-1 RMN 19F (D2O1 282,5 MHz)
-119,9 (s) ; -119,9 (s)
RMN 1H (D2O, 300 MHz)
1 ,33 (m; 5H; CH2 et CH3) ; 1 ,48 (m; 2H; CH2); 1 ,80 (m; 2H; CH2) ; 3,17 (m;
2H; NHCH2); 3,29-3,63 (m;2H6, H4 H5.CH, H3; H2); 4,3 (m; CH).
Résultats de préservation de cellules
Expérience 1
Introduction:
Les expériences ont été réalisées afin de démontrer l'efficacité du composé H contre les expositions aux UV.
Résultats: (Figures 35)
Dans les expériences suivantes, les études ont été réalisées à 37°C sur des fibroblastes primaires adultes de la peau. Les cellules ont été exposées à une irradiation sous UV-C pendant 2 heures en présence des dérivés d'AAGP.
Lors de ces expériences, nous constatons que le composé AAGP-15 présente d'excellentes propriétés protectrice.
Expérience 2
Introduction:
Dans l'expérience suivante, le but est de tester l'activité préservatrice des composés AAGP λλ_ à basses températures.
Résultats: (Figures 36)
Les cellules sont ainsi incubées à -3°C en présence du composé AAGP λλ_.
De la même façon lors de cette expérience, on observe une très forte activité de préservation d'AAGP-H sur les fibroblastes à basses températures.
Expérience 3
Des études ont été réalisées sur des cellules HELA, soumises à des UVC, en présence des différents composés synthétisés, à faible concentration. On obtient de très bons résultats pour le composé 11 , mais au vue des figures 37, 38 et 39, d'autres dérivés donnent une amélioration de la survie de ces cellules par rapport au contrôle. C'est le cas des composés : 39, 22, 30 et 34.
Par contre, les composés 26, 12 et 44 donnent, quant à eux, de moins bons résultats que le contrôle.

Claims

Revendications
1. Composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I :
où n est un nombre entier égal à 3 ou 4,
R représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, acétyle, triméthylsilyle, tert-butyldiméthylsilyle, tert- butyldiphénylsilyle,
R représente OR, NR"R'", N3, ou un phtalimide,
R"et R'", identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, aryle, benzyle, benzoyle, acétyle, alkyloxycarbonyle, allyloxycarbonyle, benzyloxycarbonyle,
Ri représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, alkylcarbamate, allylcarbamate, benzylcarbamate, acétyle, Ri peut également représenter un acide aminé constitué par un alanine ou une glycine ou une praline, mais dans ce cas R2 représente uniquement OR,
R2 comprend un acide aminé constitué par un alanine ou une glycine, ou une proline, mais dans ce cas Ri représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, alkylcarbamate, allylcarbamate, benzylcarbamate, acétyle, R2 représente OR quand R1 représente un acide aminé,
R3 représente un atome d'hydrogène ou une fonction alcool libre ou protégé, ainsi que ses dérivés à l'état de base, de sel d'addition à un acide minéral ou organique, d'hydrate ou de solvat physiologiquement ou pharmaceutiquement acceptables.
2. Composé selon la revendication 1 , caractérisé en ce que les groupes alkyles linéaires ou ramifiés sont des groupes possédant de 1 à 10 atomes de carbones.
3. Médicament comprenant en tant que principe actif au moins un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I selon la revendication 1.
4. Composition comprenant au moins un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I selon la revendication 1.
5. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce qu'elle comprend un composé C-glycopeptide gem- difluoré de formule I seul ou en mélange et en toutes proportions.
6. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce qu'elle se présente sous une forme galénique la rendant conforme à un usage cosmétique ou pharmaceutique notamment dermatologique.
7. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce qu'elle se présente sous une forme galénique la rendant conforme à être ingérée, injectée ou appliquée sur la peau, les lèvres, le cuir chevelu et/ou les cheveux.
8. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce qu'elle comprend un milieu et/ou un support physiologiquement ou pharmaceutiquement acceptable.
9. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce qu'elle comprend d'autres principes actifs.
10. Composition adaptée à une application topique sur la peau, les lèvres, le cuir chevelu et/ou les cheveux comprenant un milieu et/ou un support physiologiquement acceptable, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I selon la revendication 1.
11. Procédé de traitement cosmétique pour protéger la peau, les lèvres et/ou les cheveux, le cuir chevelu contre le stress oxydant et/ou les UV consistant à appliquer sur Ia peau, les lèvres et/ou les cheveux, le cuir chevelu, une composition comportant au moins un milieu et/ou un support physiologiquement acceptable et au moins un composé C-glycopeptide gem- difluoré de formule I selon la revendication 1 ou un de ses dérivés à l'état de base, de sel d'addition à un acide minéral ou organique, d'hydrate ou de solvat physiologiquement acceptable.
12. Utilisation d'un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I selon la revendication 1 pour la préparation de composés ou compositions utilisables pour la préservation ou la cryopréservation de matériaux biologiques.
13. Utilisation d'un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I selon la revendication 1 pour la préparation de composés ou compositions utilisables pour la préservation de fibroblastes.
14. Utilisation d'au moins un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I selon la revendication 1 pour la préparation de médicaments destinés à traiter l'inflammation.
15. Utilisation d'au moins un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I selon la revendication 1 pour la préparation de composés ou compositions utilisables en cosmétologie et/ou en pharmacie notamment en dermatologie.
EP07731371A 2006-05-03 2007-04-26 Composes c-glycopeptides gem-difluores, leur preparation et leur utilisation notamment pour la preservation de materiaux biologiques. Withdrawn EP2013195A1 (fr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR0603952A FR2900656A1 (fr) 2006-05-03 2006-05-03 Composes c-glycopeptides gem-difluores, leur preparation et leur utilisation notamment pour la preservation de materiaux biologiques
PCT/FR2007/000716 WO2007125203A1 (fr) 2006-05-03 2007-04-26 Composes c-glycopeptides gem-difluores, leur preparation et leur utilisation notamment pour la preservation de materiaux biologiques.

Publications (1)

Publication Number Publication Date
EP2013195A1 true EP2013195A1 (fr) 2009-01-14

Family

ID=37564388

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EP07731371A Withdrawn EP2013195A1 (fr) 2006-05-03 2007-04-26 Composes c-glycopeptides gem-difluores, leur preparation et leur utilisation notamment pour la preservation de materiaux biologiques.

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20090311203A1 (fr)
EP (1) EP2013195A1 (fr)
BR (1) BRPI0711156A2 (fr)
CA (1) CA2649993A1 (fr)
FR (1) FR2900656A1 (fr)
WO (1) WO2007125203A1 (fr)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012016935A1 (fr) 2010-08-02 2012-02-09 Centrum Für Angewandte Nanotechnologie (Can) Gmbh Dérivés de sucres à sept atomes de carbone (c-7) et leur utilisation
EP2655353B9 (fr) * 2010-12-22 2015-08-05 Tfchem Dérivés de glyco-cf2-sérine et de glyco-cf2-thréonine
WO2013021018A1 (fr) 2011-08-08 2013-02-14 Tfchem Dérivés de c-isopropylgalactoside gem-difluorés
CA2942731C (fr) * 2014-03-17 2022-11-22 Tfchem Derives de glycopeptides utilises en vue de la conservation et de la protection de matieres biologiques et de microorganismes
EP3152297A4 (fr) * 2014-06-04 2018-01-31 Protokinetix, Inc. Utilisation de glycopeptides anti-vieillissement pour améliorer la santé des cellules pancréatiques, les chances de survie et améliorer le résultat d'une greffe
CA3011449A1 (fr) 2016-01-27 2017-08-03 Protokinetix Inc. Utilisation de glycoproteine antivieillissement pour ameliorer la survie de cellules precurseurs neurosensorielles
EP3573621B9 (fr) 2017-01-30 2021-08-25 TFChem Dérivés de glycopeptides destinés à être utilisés dans le traitement et/ou la prévention et/ou l'atténuation de maladies de fibrose
WO2019239425A1 (fr) * 2018-06-11 2019-12-19 Aarti Industries Limited Procédé amélioré de préparation de 2,3,4,6-tétra-o-benzyl-d-galactose
WO2021009367A1 (fr) * 2019-07-17 2021-01-21 Tfchem Glycopeptides augmentant la synthèse de lipides
JP2024504135A (ja) 2021-01-20 2024-01-30 テーエフケム 環状糖アミノ酸誘導体

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2842810B1 (fr) * 2002-07-25 2006-01-27 Inst Nat Sciences Appliq Nouveaux composes gem difluores, leur procedes de preparation et leurs applications.
FR2878851B1 (fr) * 2004-12-02 2007-02-09 Inst Nat Sciences Appliq Composes c-glycopeptides gem-difluores, leur preparation et leur utilisation en cryochirurgie et/ou cryopreservation

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See references of WO2007125203A1 *

Also Published As

Publication number Publication date
BRPI0711156A2 (pt) 2011-08-23
CA2649993A1 (fr) 2007-11-08
FR2900656A1 (fr) 2007-11-09
US20090311203A1 (en) 2009-12-17
WO2007125203A1 (fr) 2007-11-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2013195A1 (fr) Composes c-glycopeptides gem-difluores, leur preparation et leur utilisation notamment pour la preservation de materiaux biologiques.
AU2016228304B2 (en) Isoprenyl compounds and methods thereof
WO2000043417A1 (fr) Utilisation cosmetique ou pharmaceutique de peptides pour la regulation des dysfonctionnements immunologiques et dans l&#39;inflammation cutanes
EP3291792B1 (fr) Procede de traitement des matieres keratiniques a partir de derives de c-glycosides amides, acides ou ester, et la composition cosmetique les contenant
US11802107B2 (en) Compounds and methods of use
FR2878851A1 (fr) Composes c-glycopeptides gem-difluores, leur preparation et leur utilisation en cryochirurgie et/ou cryopreservation
JP3457687B2 (ja) 白内障治療用薬剤
EP3535250A1 (fr) Procede de traitement des matieres keratiniques a partir de derives de c-glycosides amides, et la composition cosmetique les contenant
EP1558630A2 (fr) Nouveaux vecteurs moleculaires amphiphiles fluorocarbones a usage biomedical et medical
LU84062A1 (fr) Esters de mercaptoacyl-carnitines,procede pour leur preparation et leurs utilisations therapeutiques,notamment dans le traitement des intoxications et des brulures et en tant qu&#39;agents mucolytiques
CA2758103C (fr) Peptides cycliques a activite antiparasitaire
EP2027138B1 (fr) Mimes stables de sucres de type c-glycosides et c- glycoconjugues, leur procede de preparation et leurs applications notamment dans le domaine de la cosmetique et du medicament.
CA2493827A1 (fr) Derives de produits naturels utilises comme complements alimentaires et produits pharmaceutiques
KR101451401B1 (ko) 비타민 c와 비타민 e의 컨쥬게이트 및 그를 포함하는 항산화제
EP0388308B1 (fr) Esters rétinoiques de D-désosamine, leur procédé de préparation et leur utilisation en médecine humaine ou vétérinaire et en cosmétique
EP0962453A1 (fr) Nouveaux dérivés d&#39;histidine, procédé de préparation et utilisations
KR101491728B1 (ko) 비타민 c와 비타민 b3의 컨쥬게이트 및 그를 포함하는 항산화제

Legal Events

Date Code Title Description
PUAI Public reference made under article 153(3) epc to a published international application that has entered the european phase

Free format text: ORIGINAL CODE: 0009012

17P Request for examination filed

Effective date: 20081025

AK Designated contracting states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HU IE IS IT LI LT LU LV MC MT NL PL PT RO SE SI SK TR

AX Request for extension of the european patent

Extension state: AL BA HR MK RS

17Q First examination report despatched

Effective date: 20090702

DAX Request for extension of the european patent (deleted)
STAA Information on the status of an ep patent application or granted ep patent

Free format text: STATUS: THE APPLICATION IS DEEMED TO BE WITHDRAWN

18D Application deemed to be withdrawn

Effective date: 20121101