EP2727988A2

EP2727988A2 - Verfahren zur Verbesserung der Reinigungsleistung eines Wasch- oder Reinigungsmittels

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Publication number: EP2727988A2
Application number: EP14152968.5A
Authority: EP
Inventors: Timothy O'connell; Petra Siegert; Stefan Evers; Johannes Bongaerts; Thomas Weber; Karl-Heinz Maurer; Cornelius Besseler
Original assignee: Henkel AG and Co KGaA
Current assignee: Henkel AG and Co KGaA
Priority date: 2008-08-20
Filing date: 2009-07-10
Publication date: 2014-05-07
Anticipated expiration: 2029-07-10
Also published as: EP2727988B1; EP2727989B2; EP2313483B1; US20110201536A1; ES2744829T5; WO2010020475A3; EP2727990A2; US20110136720A1; EP2313482A2; EP2727989A2; ES2744829T3; DE102008038479A1; WO2010020475A2; EP2313482B1; EP2727988A3; EP2727989A3; EP2313483A2; WO2010020476A2; PL2727988T3; PL2313482T3

Abstract

Die Reinigungsleistung eines Wasch- oder Reinigungsmittels wird verbessert, wenn das Mittel mindestens ein hydrolytisches Enzym und mindestens eine Substanz umfasst, die im Zusammenwirken mit dem hydrolytischen Enzym bei Anwendung des Mittels eine synergistische Reinigungsleistung bewirkt, und die ausgewählt ist aus i. Aminosäure oder Polyaminosäure oder deren Derivat und/oder ii. Biotensid und/oder iii. mikrobieller Metabolit und/oder iv. Präparat eines mikrobiellen Kulturüberstandes, das mindestens 2,5 Gew.-% einer der Substanzen i) bis iii) enthält.

Description

Die vorliegende Anmeldung richtet sich auf Verfahren zur Verbesserung der Reinigungsleistung eines Wasch- oder Reinigungsmittels, das ein hydrolytisches Enzym enthält.
Der Einsatz von Enzymen in Wasch- und Reinigungsmitteln ist im Stand der Technik etabliert. Sie dienen dazu, das Leistungsspektrum der betreffenden Mittel entsprechend ihren speziellen Aktivitäten zu erweitern. Hierzu gehören insbesondere hydrolytische Enzyme wie Proteasen, Amylasen, Lipasen und Cellulasen. Die ersten drei genannten hydrolysieren Proteine, Stärke und Fette und tragen somit unmittelbar zur Schmutzentfernung bei. Cellulasen werden insbesondere wegen ihrer Gewebewirkung eingesetzt. Eine weitere Gruppe von Wasch- und Reinigungsmittelenzymen sind oxidative Enzyme, insbesondere Oxidasen, die ggf. im Zusammenspiel mit anderen Komponenten vorzugsweise dazu dienen, Anschmutzungen zu bleichen oder die bleichenden Agentien in situ zu erzeugen. Neben diesen Enzymen, die einer fortwährenden Optimierung unterworfen werden, werden laufend weitere Enzyme für den Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln bereitgestellt, um insbesondere spezielle Anschmutzungen optimal angehen zu können, wie beispielsweise Pektinasen, β-Glucanasen, Mannanasen oder weitere Hemicellulasen zur Hydrolyse insbesondere spezieller pflanzlicher Polymere.
Die am längsten etablierten und in praktisch allen modernen, leistungsfähigen Wasch- und Reinigungsmitteln enthaltenen Enzyme sind Proteasen und hierunter insbesondere Serin-Proteasen, zu denen auch die Subtilasen zählen. Sie bewirken den Abbau proteinhaltiger Anschmutzungen auf dem Reinigungsgut. Hierunter sind wiederum Proteasen vom Subtilisin-Typ (Subtilasen, Subtilopeptidasen, EC 3.4.21.62) besonders wichtig, welche aufgrund der katalytisch wirksamen Aminosäuren den Serin-Proteasen zugerechnet werden. Sie wirken als unspezifische Endopeptidasen, das heißt, sie hydrolysieren beliebige Säureamidbindungen, die im Inneren von Peptiden oder Proteinen liegen. Ihr pH-Optimum liegt meist im deutlich alkalischen Bereich. Einen Überblick über diese Familie bietet beispielsweise der Artikel "Subtilases: Subtilisin-like Proteases" von R. Siezen, Seite 75-95 in "Subtilisin enzymes", herausgegegeben von R. Bott und C. Betzel, New York, 1996. Subtilasen werden natürlicherweise von Mikroorganismen gebildet; hierunter sind insbesondere die von Bacillus-Spezies gebildeten und sekretierten Subtilisine als bedeutendste Gruppe innerhalb der Subtilasen zu erwähnen.
Beispiele für die in Wasch- und Reinigungsmitteln bevorzugt eingesetzten Proteasen vom Subtilisin-Typ sind die Subtilisine BPN' und Carlsberg, die Protease PB92, die Subtilisine 147 und 309, die alkalische Protease aus Bacillus lentus, insbesonder aus Bacillus lentus DSM 5483, Subtilisin DY und die den Subtilasen, nicht mehr jedoch den Subtilisinen im engeren Sinne zuzuordnenden Enzyme Thermitase, Proteinase K und die Proteasen TW3 und TW7. Weitere verwendbare Proteasen sind beispielsweise die unter den Handelsnamen Durazym®, Relase®, Everlase®, Nafizym, Natalase®, Kannase® und Ovozyme® von der Firma Novozymes, die unter den Handelsnamen, Purafect®, Purafect® OxP, Purafect® Prime und Properase® von der Firma Genencor, das unter dem Handelsnamen Protosol® von der Firma Advanced Biochemicals Ltd., Thane, Indien, das unter dem Handelsnamen Wuxi® von der Firma Wuxi Snyder Bioproducts Ltd., China, die unter den Handelsnamen Proleather® und Protease P® von der Firma Amano Pharmaceuticals Ltd., Nagoya, Japan, und das unter der Bezeichnung Proteinase K-16 von der Firma Kao Corp., Tokyo, Japan, erhältlichen Enzyme.
Günstigenfalls ergeben sich Synergieeffekte zwischen den Enzymen und den übrigen Bestandteilen der jeweiligen Wasch- oder Reinigungsmittel.
Ein Nachteil dieser bevorzugt in Wasch- und Reinigungsmitteln eingesetzten Enzyme, insbesondere Proteasen, aus dem Stand der Technik ist, dass sie insbesondere bei niedrigen Temperaturen, beispielsweise zwischen 10°C und 40°C, insbesondere zwischen 10°C und 30°C oder gar zwischen 10°C und 25°C, keine zufrieden stellende hydrolytische Aktivität, insbesondere proteolytische Aktivität, aufweisen und daher insbesondere in Waschmitteln und Geschirrspülmitteln in diesem Temperaturbereich keine optimale Reinigungsleistung zeigen.
Überraschenderweise wurde festgestellt, dass der Zusatz bestimmter Substanzen die Reinigungsleistung von Wasch- und Reinigungsmitteln, welche hydrolytische Enzyme, insbesondere Proteasen, enthalten, erheblich verbessert, insbesondere bei vergleichsweise niedrigen Temperaturen, insbesondere zwischen 10°C und 50°C, zwischen 10°C und 40°C und bevorzugt zwischen 10°C und 30°C bzw. 10°C und 25°C.
Der vorliegenden Erfindung liegt daher die Aufgabe zugrunde, die Reinigungsleistung (Waschkraft) von Wasch- oder Reinigungsmitteln zu verbessern, insbesondere hinsichtlich Anschmutzungen, die sensitiv sind für den Abbau durch hydrolytische Enzyme, insbesondere durch Proteasen. Eine weitere Aufgabe der Erfindung ist es, die Reinigungsleistung von hydrolytischen Enzymen, insbesondere Proteasen, in Wasch- oder Reinigungsmitteln bzw. der durch die Wasch- bzw. Reinigungsmittel gebildeten Waschflotte zu verbessern, insbesondere hinsichtlich Anschmutzungen, die sensitiv sind für den Abbau durch hydrolytische Enzyme, insbesondere durch Proteasen, und insbesondere in einem Temperaturbereich zwischen 10°C und 50°C, zwischen 10°C und 40°C und bevorzugt zwischen 10°C und 30°C bzw. 10°C und 25°C. Gegenstand der Erfindung ist somit ein Verfahren zur Verbesserung der Reinigungsleistung eines Wasch- oder Reinigungsmittels, das ein hydrolytisches Enzym, insbesondere eine Protease, Amylase, Cellulase, Hemicellulase, Mannanase, Tannase, Xylanase, Xanthanase, ß-Glucosidase, Carrageenase oder eine Lipase, besonders bevorzugt eine Protease, umfasst, dadurch gekennzeichnet, dass dem Wasch- oder Reinigungsmittel eine Komponente zugesetzt wird, die im Zusammenwirken mit dem hydrolytischen Enzym bei Anwendung des Mittels eine synergistische Reinigungsleistung bewirkt und die ausgewählt ist aus

i. Aminosäure oder Polyaminosäure oder deren Derivat und/oder
ii. Biotensid und/oder
iii. mikrobieller Metabolit
iv. Präparat eines mikrobiellen Kulturüberstandes, das mindestens 2,5 Gew.-% einer der Substanzen i) bis iii) enthält.

Erfindungsgemäß wurde festgestellt, dass die Reinigungsleistung von Wasch- oder Reinigungsmitteln, insbesondere hinsichtlich ihrer enzymatischen, insbesondere proteolytischen Reinigungsleistung signifikant verbessert wird, wenn in diesen Mitteln mindestens ein hydrolytisches Enzym (hierin auch bezeichnet als Komponente (a)) mit einer oder mehreren der vorstehend unter i. bis iv. angeführten Substanzen bzw. Substanzklassen (hierin auch bezeichnet als Komponente (b)) kombiniert wird. Unter Reinigungsleistung wird im Rahmen der Erfindung die Aufhellungsleistung an einer oder mehreren Anschmutzungen, insbesondere Wäscheanschmutzungen, verstanden, die sensitiv sind für den Abbau durch das jeweilige hydrolytische Enzym, insbesondere für den Abbau durch Proteasen. Beispiele für solche Anschmutzungen sind Blut-Milch/Tusche auf Baumwolle, Voll-Ei/Pigment auf Baumwolle, Schokolade-Milch/Tusche auf Baumwolle, Erdnuss Öl-Pigment/Tusche auf Polyester/Baumwolle, Gras auf Baumwolle oder Kakao auf Baumwolle, insbesondere derart wie weiter unten angegeben. Im Rahmen der Erfindung weist sowohl das Wasch- oder Reinigungsmittel, welches das hydrolytische Enzym umfasst, bzw. die durch dieses Mittel gebildete Wasch- bzw. Reinigungsflotte, als auch das hydrolytische Enzym selbst eine jeweilige Reinigungsleistung auf. Die Reinigungsleistung des hydrolytischen Enzyms trägt somit zur Reinigungsleistung des Mittels bzw. der durch das Mittel gebildeten Wasch- bzw. Reinigungsflotte bei.
Die Reinigungsleistung von Wasch- und Reinigungsmitteln bezogen auf die eingesetzte enzymatische Aktivität, insbesonders auf die proteolytische Aktivität, wird durch den Zusatz der Komponente (b) verbessert. Hinsichtlich des Zusammenwirkens von diesen Komponenten (a) und (b) ergibt sich eine synergistische Wirkung, d.h. eine bessere Leistung im Vergleich mit den Einzelleistungen der jeweiligen Komponente in Ein-Komponenten-Systemen (d.h. Wasch- oder Reinigungsmittel, die nur jeweils das hydrolytische, insbesondere proteolytische Enzym, bzw. die Komponente (b) enthalten) und auch gegenüber der Summe der Einzelleistungen der Komponenten (a) und (b), d.h. der Summe von zwei Ein-Komponenten-Systemen mit jeweils der Komponente (a) und (b) alleine. Somit stellt die ausgewählte Kombination von hydrolytischem Enzym (a), insbesondere Protease, mit einer erfindungsgemäßen Komponente (b) eine weitere Möglichkeit dar, um die Leistungsfähigkeit von Wasch- oder Reinigungsmitteln hinsichtlich ihrer Reinigungsleistung, insbesondere ihrer enzymbasierten Reinigungsleistung, ganz besonders hinsichtlich ihrer Reinigungsleistung, die durch eine enthaltene Protease bewirkt wird, zu verbessern.
Die Vorteilhaftigkeit der Kombination der Komponenten (a) und (b) liegt bei Anwendung des Mittels vor, d.h. in der Wasch- bzw. Reinigungsflotte. Unter Wasch- bzw. Reinigungsflotte wird diejenige das Wasch- oder Reinigungsmittel enthaltende Gebrauchslösung verstanden, die auf Textilien oder Gewebe (Waschflotte) bzw. harte Oberflächen (Reinigungsflotte) einwirkt und damit mit den auf Textilien bzw. Geweben oder harten Oberflächen vorhandenen Anschmutzungen in Kontakt kommt. Üblicherweise entsteht die Wasch- bzw. Reinigungsflotte, wenn der Wasch- oder Reinigungsvorgang beginnt und das Wasch- oder Reinigungsmittel beispielsweise in einer Waschmaschine oder in einem anderen geeigneten Behältnis in Wasser gelöst bzw. mit Wasser verdünnt wird.
Bevorzugte hydrolytische Enzyme im Sinne der Komponente (a) umfassen insbesondere Proteasen, Amylasen, insbesondere α-Amylasen, Cellulasen, Lipasen, Hemicellulasen, insbesondere Pectinasen, Mannanasen, ß-Glucanasen, sowie deren Gemische. Besonders bevorzugt sind Proteasen, Amylasen und/oder Lipasen sowie deren Gemische und ganz besonders bevorzugt sind Proteasen. Diese Enzyme sind im Prinzip natürlichen Ursprungs; ausgehend von den natürlichen Molekülen stehen für den Einsatz in Wasch- oder Reinigungsmitteln verbesserte Varianten zur Verfügung, die entsprechend bevorzugt eingesetzt werden.
Unter den Proteasen sind solche vom Subtilisin-Typ bevorzugt. Beispiele hierfür sind die Subtilisine BPN' und Carlsberg, die Protease PB92, die Subtilisine 147 und 309, die Alkalische Protease aus Bacillus lentus, Subtilisin DY und die den Subtilasen, nicht mehr jedoch den Subtilisinen im engeren Sinne zuzuordnenden Enzyme Thermitase, Proteinase K und die Proteasen TW3 und TW7. Subtilisin Carlsberg ist in weiterentwickelter Form unter dem Handelsnamen Alcalase® von der Firma Novozymes A/S, Bagsværd, Dänemark, erhältlich. Die Subtilisine 147 und 309 werden unter den Handelsnamen Esperase®, beziehungsweise Savinase® von der Firma Novozymes vertrieben. Von der Protease aus Bacillus lentus DSM 5483 leiten sich die unter der Bezeichnung BLAP® geführten Protease-Varianten ab. Weitere brauchbare Proteasen sind beispielsweise die unter den Handelsnamen Durazym®, Relase®, Everlase®, Nafizym®, Natalase®, Kannase® und Ovozyme® von der Firma Novozymes, die unter den Handelsnamen, Purafect®, Purafect® OxP, Purafect® Prime, Excellase® und Properase® von der Firma Genencor, das unter dem Handelsnamen Protosol® von der Firma Advanced Biochemicals Ltd., Thane, Indien, das unter dem Handelsnamen Wuxi® von der Firma Wuxi Snyder Bioproducts Ltd., China, die unter den Handelsnamen Proleather® und Protease P® von der Firma Amano Pharmaceuticals Ltd., Nagoya, Japan, und das unter der Bezeichnung Proteinase K-16 von der Firma Kao Corp., Tokyo, Japan, erhältlichen Enzyme. Besonders bevorzugt eingesetzt werden auch die Proteasen aus Bacillus gibsonii und Bacillus pumilus, die offenbart sind in den internationalen Patentanmeldungen WO2008/086916 und W02007/131656 .
Beispiele für erfindungsgemäß verwendbare Amylasen sind die α-Amylasen aus Bacillus licheniformis, aus B. amyloliquefaciens oder aus B. stearothermophilus sowie deren für den Einsatz in Wasch- oder Reinigungsmitteln verbesserte Weiterentwicklungen. Das Enzym aus B. licheniformis ist von der Firma Novozymes unter dem Namen Termamyl® und von der Firma Genencor unter dem Namen Purastar®ST erhältlich. Weiterentwicklungsprodukte dieser α-Amylase sind von der Firma Novozymes unter den Handelsnamen Duramyl® und Termamyl®ultra, von der Firma Genencor unter dem Namen Purastar®OxAm und von der Firma Daiwa Seiko Inc., Tokyo, Japan, als Keistase® erhältlich. Die α-Amylase von B. amyloliquefaciens wird von der Firma Novozymes unter dem Namen BAN® vertrieben, und abgeleitete Varianten von der α-Amylase aus B. stearothermophilus unter den Namen BSG® und Novamyl®, ebenfalls von der Firma Novozymes. Desweiteren sind für diesen Zweck die α-Amylase aus Bacillus sp. A 7-7 (DSM 12368) und die Cyclodextrin-Glucanotransferase (CGTase) aus B. agaradherens (DSM 9948) hervorzuheben. Ferner sind die amylolytischen Enzyme einsetzbar, die dem Sequenzraum von α-Amylasen angehören, der in der internationalen Patentanmeldung WO 03/002711 A2 definiert wird, und die, die in der Anmeldung WO 03/054177 A2 beschrieben werden. Ebenso sind Fusionsprodukte der genannten Moleküle einsetzbar. Darüber hinaus sind die unter den Handelsnamen Fungamyl® von der Firma Novozymes erhältlichen Weiterentwicklungen der α-Amylase aus Aspergillus niger und A. oryzae geeignet. Weitere einsetzbare Handelsprodukte sind beispielsweise die Amylase-LT® und Stainzyme® bzw. Stainzyme ultra® oder Stainzyme plus®, letztere ebenfalls von der Firma Novozymes. Auch durch Punktmutationen erhältliche Varianten dieser Enzyme können erfindungsgemäß eingesetzt werden.
Beispiele für erfindungsgemäß verwendbare Lipasen oder Cutinasen, die insbesondere wegen ihrer Triglycerid-spaltenden Aktivitäten enthalten sind, aber auch, um aus geeigneten Vorstufen in situ Persäuren zu erzeugen, sind die ursprünglich aus Humicola lanuginosa (Thermomyces lanuginosus) erhältlichen, beziehungsweise weiterentwickelten Lipasen, insbesondere solche mit dem Aminosäureaustausch D96L. Sie werden beispielsweise von der Firma Novozymes unter den Handelsnamen Lipolase®, Lipolase®Ultra, LipoPrime®, Lipozyme® und Lipex® vertrieben. Desweiteren sind beispielsweise die Cutinasen einsetzbar, die ursprünglich aus Fusarium solani pisi und Humicola insolens isoliert worden sind. Ebenso brauchbare Lipasen sind von der Firma Amano unter den Bezeichnungen Lipase CE®, Lipase P®, Lipase B®, beziehungsweise Lipase CES®, Lipase AKG®, Bacillis sp. Lipase®, Lipase AP®, Lipase M-AP® und Lipase AML® erhältlich. Von der Firma Genencor sind beispielsweise die Lipasen beziehungsweise Cutinasen einsetzbar, deren Ausgangsenzyme ursprünglich aus Pseudomonas mendocina und Fusarium solanii isoliert worden sind. Als weitere wichtige Handelsprodukte sind die ursprünglich von der Firma Gist-Brocades vertriebenen Präparationen M1 Lipase® und Lipomax® und die von der Firma Meito Sangyo KK, Japan, unter den Namen Lipase MY-30®, Lipase OF® und Lipase PL® vertriebenen Enzyme zu erwähnen, ferner das Produkt Lumafast® von der Firma Genencor.
Cellulasen können je nach Zweck als reine Enzyme, als Enzympräparationen oder in Form von Mischungen, in denen sich die einzelnen Komponenten vorteilhafterweise hinsichtlich ihrer verschiedenen Leistungsaspekte ergänzen, vorhanden sein. Zu diesen Leistungsaspekten zählen insbesondere die Beiträge der Cellulase zur Primärwaschleistung des Mittels (Reinigungsleistung), zur Sekundärwaschleistung des Mittels (Antiredepositionswirkung oder Vergrauungsinhibition), zur Avivage (Gewebewirkung) oder zur Ausübung eines "stone washed"-Effekts. Eine brauchbare pilzliche, Endoglucanase(EG)-reiche Cellulase-Präparation, beziehungsweise deren Weiterentwicklungen wird von der Firma Novozymes unter dem Handelsnamen Celluzyme® angeboten. Die ebenfalls von der Firma Novozymes erhältlichen Produkte Endolase® und Carezyme® basieren auf der 50 kD-EG, beziehungsweise der 43 kD-EG aus H. insolens DSM 1800. Weitere einsetzbare Handelsprodukte dieser Firma sind Cellusoft®, Renozyme® und Celluclean®. Weiterhin einsetzbar sind beispielsweise die 20 kD-EG aus Melanocarpus, die von der Firma AB Enzymes, Finnland, unter den Handelsnamen Ecostone® und Biotouch® erhältlich sind. Weitere Handelsprodukte der Firma AB Enzymes sind Econase® und Ecopulp®. Weitere geeignete Cellulasen sind aus Bacillus sp. CBS 670.93 und CBS 669.93, wobei die aus Bacillus sp. CBS 670.93 von der Firma Genencor unter dem Handelsnamen Puradax® erhältlich ist. Weitere Handelsprodukte der Firma Genencor sind "Genencor detergent cellulase L" und IndiAge®Neutra.
Ferner können insbesondere zur Entfernung bestimmter Problemanschmutzungen weitere Enzyme eingesetzt sein, die unter dem Begriff Hemicellulasen zusammengefasst werden. Hierzu gehören beispielsweise Mannanasen, Xanthanlyasen, Pektinlyasen (=Pektinasen), Pektinesterasen, Pektatlyasen, Xyloglucanasen (=Xylanasen), Pullulanasen und ß-Glucanasen. Diesbezüglich geeignete Enzyme sind beispielsweise unter den Namen Gamanase® und Pektinex AR® von der Firma Novozymes, unter dem Namen Rohapec® B1L von der Firma AB Enzymes und unter dem Namen Pyrolase® von der Firma Diversa Corp., San Diego, CA, USA erhältlich. Die aus Bacillus subtilis gewonnene ß-Glucanase ist unter dem Namen Cereflo® von der Firma Novozymes erhältlich. Erfindungsgemäß besonders bevorzugte Hemicellulasen sind Mannanasen, welche beispielsweise unter den Handelsnamen Mannaway(R) von dem Unternehmen Novozymes oder Purabrite® von dem Unternehmen Genencor vertrieben werden.
Ferner können die Enzyme im Rahmen der Erfindung zusammen mit Begleitstoffen, etwa aus der Fermentation oder mit Stabilisatoren, konfektioniert sein.
Unter all diesen Enzymen sind solche besonders bevorzugt, die an sich gegenüber einer Oxidation vergleichsweise stabil oder beispielsweise über Punktmutagenese stabilisiert worden sind. Hierunter sind insbesondere die bereits erwähnten Handelsprodukte Everlase und Purafect® OxP als Beispiele für solche Proteasen und Duramyl als Beispiel für eine solche α-Amylase anzuführen.
In einem erfindungsgemäßen Verfahren eingesetzte Mittel enthalten Enzyme vorzugsweise in Gesamtmengen von 1 x 10^-8 bis 5 Gewichts-Prozent bezogen auf aktives Protein. Bevorzugt sind die Enzyme von 0,001 bis 5 Gew.-%, weiter bevorzugt von 0,01 bis 5 Gew.-%, noch weiter bevorzugt von 0,05 bis 4 Gew.-% und besonders bevorzugt von 0,075 bis 3,5 Gew.-% in diesen Mitteln enthalten, wobei jedes enthaltene Enzym in den genannten Mengen vorliegen kann.
Die Proteinkonzentration kann mit Hilfe bekannter Methoden, zum Beispiel dem BCA-Verfahren (Bicinchoninsäure; 2,2'-Bichinolyl-4,4'-dicarbonsäure) oder dem Biuret-Verfahren (A. G. Gornall, C. S. Bardawill und M.M. David, J. Biol. Chem., 177 (1948), S. 751-766) bestimmt werden.
Das hydrolytische Enzym, von denen mindestens eines in einem Wasch- oder Reinigungsmittel, das in erfindungsgemäßen Verfahren eingesetzt wird, vorhanden ist (nämlich als Komponente (a)), unterstützt die Reinigungsleistung des Mittels hinsichtlich bestimmter Anschmutzungen oder Flecken. Besonders bevorzugt enthält ein in einem erfindungsgemäßen Verfahren eingesetztes Mittel mehrere Enzyme, wobei die Enzyme gleichen oder verschiedenen Enzymklassen angehören können. Besonders bevorzugt zeigen die Enzyme synergistische Effekte hinsichtlich ihrer Wirkung gegenüber bestimmter Anschmutzungen oder Flecken, d.h. die in der Mittelzusammensetzung enthaltenen Enzyme unterstützen sich in ihrer Reinigungsleistung gegenseitig.
Synergistische Effekte können nicht nur zwischen verschiedenen Enzymen vorliegen, sondern treten insbesondere auch zwischen einem oder mehreren Enzymen und weiteren Inhaltsstoffen des Mittels auf, das in erfindungsgemäßen Verfahren eingesetzt wird. Erfindungsgemäß wird hierfür ein hydrolytisches Enzym (a) kombiniert mit einer Komponente (b), d.h. mindestens einer Substanz, die im Zusammenwirken mit dem hydrolytischen Enzym (a) bei Anwendung des Mittels eine synergistische Reinigungsleistung bewirkt und die ausgewählt ist aus i. Aminosäure oder Polyaminosäure oder deren Derivat und/oder

ii. Biotensid und/oder
iii. mikrobieller Metabolit und/oder
iv. Präparat eines mikrobiellen Kulturüberstandes, das mindestens 2,5 Gew.-% einer der Substanzen i) bis iii) enthält.

Bei den unter i. angegebenen Substanzen handelt es sich bevorzugt um Aminosäuren oder Polymere davon oder deren Salze oder deren Derivate, wobei beide Stereoisomere der Aminosäuren eingesetzt werden können, also sowohl D- als auch L-Aminosäuren, auch in Kombination, bzw. entsprechende Polymere oder Derivate. Eine Polyaminosäure umfasst diesbezüglich mindestens zwei Aminosäurereste. Besonders bevorzugt handelt es sich um Glutamat, Polyglutamat, Lysin, Glutamin, Histidin, Phenylalanin, Tyrosin, Alanin, Leucin, Isoleucin, Methionin, Prolin, Valin, Gluramin, Cystein, Trpyptophan, Threonin, Serin, Glycin, Aspartat und Asparagin. Bevorzugt werden geladene Polyaminosäuren eingesetzt und hierunter weiter bevorzugt negativ geladene Polyaminosäuren. Besonders bevorzugt eingesetzt werden Poly-Glutaminsäure, darunter y-D-Polyglutaminsäure, L-Polyglutaminsäure und DL-Polyglutaminsäure, Poly-Asparaginsäure, darunter ß-D-Polyasparaginsäure und L-Polyasparaginsäure, Poly-Glutamin, darunter y-D-Polyglutamin, L-Polyglutamin und DL-Polyglutamin, sowie Poly-Asparagin, darunter ß-D-Polyasparagin und L-Polyasparagin. Ein Beispiel für eine besonders bevorzugte Polyasparaginsäure ist die unter dem Handelsnamen Baypure DS 100 fest G verfügbare Verbindung (Unternehmen Lanxess).
Unter Derivaten werden im Sinne der vorliegenden Anmeldung solche Substanzen verstanden, deren reine Aminosäure oder Aminosäurekette modifiziert worden ist. Solche Derivatisierungen können beispielsweise bereits biologisch im Zusammenhang mit der Biosynthese durch die Wirtszelle erfolgen oder aber auch durch molekularbiologische Methoden erfolgen. Sie können aber auch chemisch durchgeführt werden, etwa durch die chemische Umwandlung einer Seitenkette einer Aminosäure oder durch kovalente Bindung einer anderen Verbindung an die Aminosäure bzw. die Aminosäurekette. Bei solch einer Verbindung kann es sich beispielsweise um niedrigmolekulare Verbindungen wie Lipide oder Mono-, Oligo- oder Polysaccharide oder Amine bzw. Aminverbindungen handeln. Ferner können die Aminosäuren bzw. Aminosäureketten weitere chemische Modifikationen aufweisen, insbesondere können sie glykosyliert, hydrolysiert, oxidiert, N-methyliert, N-formyliert, N-acetyliert sein oder Methyl, Formyl, Ethyl, Acetyl, t-Butyl, Anisyl, Benzyl, Trifluroacetyl, N-hydroxysuccinimide, t-Butyloxycarbonyl, Benzoyl, 4-Methylbenzyl, Thioanizyl, Thiocresyl, Benzyloxymethyl, 4-Nitrophenyl, Benzyloxycarbonyl, 2-Nitrobenzoyl, 2-Nitrophenylsulphenyl, 4-Toluenesulphonyl, Pentafluorophenyl, Diphenylmethyl, 2-Chlorobenzyloxycarbonyl, 2,4,5-trichlorophenyl, 2-bromobenzyloxycarbonyl, 9-Fluorenylmethyloxycarbonyl, Tripheylmethyl, 2,2,5,7,8-pentamethyl-chroman-6-sulphonyl enthalten. Ebenso ist unter Derivatisierung die kovalente oder nichtkovalente Bindung an einen makromolekularen Träger zu verstehen, genauso wie auch ein nichtkovalenter Einschluss in geeignete makromolekulare Käfigstrukturen. Auch Kopplungen mit sonstigen makromolekularen Verbindungen, wie etwa Polyethylenglykol, können vorgenommen sein. Aminosäureketten können weitere chemische Modifikationen aufweisen, wobei die Aminosäuregruppen: -COOH, -OH, =NH, -NH₂ -SH bevorzugt folgende Modifikationen tragen: -COOR, -OR, -NHR, -NR2, -NHR, -NR, -SR; wobei:

R ist-CH=CH-R2, -C≡C-R2, -C(R2)=CH₂, -C(R2)=C(R3), -CH=NR2, -C(R2)=N-R3, ein 4-7 C-Ring System mit oder ohne Substitution, 4-7 Stickstoffheterozyklus mit oder ohne Substitution, oder eine 2 bis 8 Kohlenstoff Kette mit 1 bis 5 Doppel- oder Dreifachbindungen mit Substitutionen selektiert aus R1, R2, oder R3;
-R1 ist H, -R, -NO₂, -CN, -halo, -N₃, -C1-8 alkyl, -(CH₂)nCO₂R2, -C2-8 alkenyl-CO₂R2,-O(CH₂)nCO₂R2, -C(O)NR2R3, -P(O)(OR2)₂, alkyl substitutiertes tetrazol-5-yl, -(CH₂)nO(CH₂)n aryl, -NR2R3, -(CH₂)n OR2, -(CH₂)n SR2, -N(R2)C(O)R3, -S(O₂)NR2R3, -N(R2)S(O₂)R3, -(CHR2)n NR2R3, -C(O)R3, (CH₂)n N(R3)C(O)R3, -N(R2)CR2R3 substitutiertes oder nicht substitutiertes (CH₂)n-cycloalkyl, substitutiertes oder nicht substitutiertes (CH₂)n-phenyl, oder zyklus;
-R2 ist H, -halo, -alkyl, -haloalkyl, -(CH₂)n-phenyl, -(CH₂)1-3-biphenyl, -(CH₂)1-4-Ph-N(SO₂-C1-2-alkyl)₂, -CO(CHR1)n-OR1, -(CHR1)n-Heterozyklus, -(CHR1)n-NH-CO-R1,-(CHR1)n-NH-SO₂R1, -(CHR1)n-Ph-N(SO₂-C1-2-alkyl)₂, -(CHR1)n-C(O)(CHR1)-NHR1,-(CHR1)n-C(S)(CHR1)-NHR1, -(CH₂)nO(CH₂)nCH₃, -CF₃, -C2-5 acyl, -(CHR1)nOH, - (CHR1)nCO₂R1, -(CHR1)n-O-alkyl, -(CHR1)n-O-(CH₂)n-O-alkyl, -(CHR1)n-S-alkyl, - (CHR1)n-S(O)-alkyl, -(CHR1)n-S(O₂)-alkyl, -(CHR1)n-S(O₂)-NHR3, -(CHR3)n-N₃,-(CHR3)nNHR4, 2 bis 8 Kohlenstoffatom Alken-Kette mit 1 bis 5 Doppelbindungen, 2 bis 8 Kohlenstoff Alkyne-Kette mit 1 bis 5 Dreifachbindungen, substitutierter oder nicht substitutierter -(CHR3)n Heterocyclus, oder substitutiertes oder nicht substitutiertes gesättigtes oder nicht gesättigtes -(CHR3)n Cycloalkyl;
-Wobei n größer als 1 ist und R1 und R3 gleich oder unterschiedlich sein kann;
-R3 ist H, -OH, -CN, substitutiertes Alkyl, -C2-8 alkenyl, substitutiertes oder nicht substitutiertes Zykloalkyl, -N(R1)R2, oder 5-6 Kohlenstoff gesättigter oder nicht gesättigter Heterozyklus. -NR2R3 kann bestehen aus einem gesättigten oder nicht gesättigten Heterozyklus oder einem Heterobizyklus von 4 to 7 Atomen;
-n ist 0-4 ;
-R4 und R5 besteht jeweils aus: H, -(CH₂)nOH, -C(O)OR6, -C(O)SR6, -(CH₂)n C(O)NR7R8, -O-C(O)-O-R7, einer Aminosäure oder einem Peptid;
-R6 ist H,
-R7 ist, -C(R7)(R8)-(CH₂)n-O-C(O)-R9, -(CH₂)n-C(R7)(R8)-O-C(O)R9, -(CH₂)n-C(R7)(R8)-O-C(O)-O-R9, or -C(R7)(R8)-(CH₂)n-O-C(O)-O-R9; und
-R7, R8 und R9 bestehen jeweils aus H, Alkyl, substitutiertes Alkyl, Aryl, substitutiertes Aryl, Alkenyl, substitutiertes Alkenyl, Alkynyl, substitutiertes Alkynyl, Heterozyklus, substitutiertes Heterozyklus, Alkylaryl, substitutiertes Alkylaryl, Zykloalkyl, substituiertes Zykloalkyl, oder CH₂CO₂alkyl.

Bei den unter ii. angegebenen Substanzen handelt es sich um Biotenside. Darunter werden im Rahmen der Erfindung Substanzen verstanden, die von Mikroorganismen gebildet und oftmals auch abgeschieden werden. Wie klassische Tenside sind die Biotenside oberflächenaktive Substanzen, die die Oberflächenspannung von Flüssigkeiten verringern und dadurch die Vermischung von wässrigen (hydrophilen) und wasserabstoßenden (hydrophoben) Phasen fördern. Erfindungsgemäß bevorzugte Biotenside gehören vor allem zur Stoffgruppe der Lipide bzw. Lipidderivate, insbesondere Lipopeptide. Sie sind demnach bioaktive, peptidische Substanzen, die von Mikroorganismen gebildet werden. In der Regel werden sie nichtribosomal von den jeweiligen Mikroorganismen synthetisiert, beispielsweise von Gram-positiven Bakterien, insbesondere der Gattungen Bacillus und Streptomyces, Gram-negativen Bakterien, insbesondere der Gattungen Pseudomonas und Myxobakterien, sowie von filamentösen Pilzen. Die Peptidketten bestehen bevorzugt aus zwei bis vierzig Aminosäuren und können linear, zyklisch oder verzweigt sein. Im Gegensatz zu ribosomal synthetisierten Peptidketten weisen sie als monomere Bausteine nicht nur proteinogene L-Aminosäuren auf, sondern auch D-Aminosäuren sowie alpha-Hydroxy- und/oder Carbonsäuren aller Art. Bei den Aminosäuren handelt es sich um L-α- bzw. D-α-Aminosäuren, jedoch können auch ß-, y- oder δ-Aminosäuren vorhanden sein, sowohl in D- als auch in L-Konfiguration. Die Peptidketten können auch weitere chemische Modifikationen aufweisen, insbesondere können sie glykosyliert, hydrolysiert, N-methyliert oder N-formyliert sein. Häufig auftretende Strukturelemente sind ferner Thiazolin- und/oder Oxazolinringe in verschiedenen Oxidationsstufen. Erfindungsgemäß besonders bevorzugte Biotenside sind anionische Lipopeptide und weiter bevorzugt Surfactin-ähnliche oder Lichenysin-ähnliche Substanzen bzw. Surfactin oder Lichenysin selbst. Unter Surfactin-ähnlichen bzw. Lichenysinähnlichen Substanzen werden solche verstanden, die entweder eine gleichartige chemische Struktur wie Surfactin bzw. Lichenysin aufweisen und/oder die eine mit Surfactin bzw. Lichenysin vergleichbare Wirkung aufweisen. Surfactin lässt sich insbesondere durch folgende Formel beschreiben: Fettsäure-cyclo-[Glu-Leu-Leu-Val-Asp-Leu-Leu]. Die Struktur von Surfactin ist ferner in Figur 1 angegeben. Lichenysin lässt sich insbesondere durch folgende Formel beschreiben: Fettsäure-cyclo-[Gln-Leu-Leu-Val-Asp-Leu-Ile]. Da Lichenycin oftmals auch als Lichenisin bezeichnet wird, wird an dieser Stelle ausdrücklich darauf hingewiesen, dass erfindungsgemäß mit der Bezeichnung Lichenysin beide Bezeichnungen umfasst sind.

Weitere Biotenside sowie diese herstellende Mikroorganismen sind in nachfolgender Tabelle 1 angegeben.

Tabelle 1:

Biotensid-Typ	Mikroorganismus
Trehalose Lipide	Arthrobacter paraffineus
	Corynebacterium sp.
	Mycobacterium sp.
	Rhodococcus erythropolis, Norcardia sp.
Rhamnolipide	Pseudomonas aeruginosa
	Pseudomonas sp., Serratia rubidea
Sophorolipide	Candida apicola, Candida bombicola
	Candida lipolytica
	Candida bogoriensis
Glycolipide	Alcanivorax borkumensis
	Arthrobacter sp., Corynebacterium sp.
	R. erythropolis, Serratia marcescens
	Tsukamurella sp.
Cellobiose Lipide	Ustilago maydis
Polyol Lipide	Rhodotorula glutinus
	Rhodotorula graminus
Diglycosyl Diglyceride	Lactobacillus fermentii
Lipopolysaccharide	Acinetocbacter calcoacetius (RAG1)
	Pseudomonas sp., Candida lipolytica
Arthrofactin	Arthrobacter sp.
Lichenysin A. Lichenysin B.	Bacillus licheniformis
Surfactin	Bacillus subtilis, Bacillus pumilus
Viscosin	Pseudomonas fluorescens
Ornithin, Lysin Peptide	Thiobacillus thiooxidans
	Streptomyces sioyaensis
	Gluconobacter cerinus
Phospholipide	Acinetobacter sp.
Sulfonylipide	T. thioosidans
	Corynebacterium alkanolyticum
Fettsäuren	Capnocytophaga sp.
("Corynomy colic adics, spiculisporic acids", usw.)	Penicillium spiculisporum
("Corynomy colic adics, spiculisporic acids", usw.)	Corynebacterium lepus
	Arthrobacter paraffineus
	Talaramyces trachyspermus
	Norcadia erythropolis
Alasan	Acinetrobacter radioesistens
Streptofactin	Streptomyces tendae
"Particulate surfactant" (PM)	Pseudomonas marginalis
Biosur PM	Pseudomonas maltophila

Bei den unter iii. angegebenen Substanzen handelt es sich um mikrobielle Metabolite. Darunter werden Substanzen verstanden, die als Zwischenstufen oder als Abbauprodukte von Stoffwechselvorgängen des Mikroorganismus oder als Abbauprodukte von Nährmedium durch den Mikroorganismus entstehen. Erfindungsgemäß bevorzugte mikrobielle Metabolite sind im Kulturmedium einer Kultur des sie bildenden Mikroorganismus vorhanden. Besonders bevorzugt werden sie daher von dem sie bildenden Mikroorganismus sezerniert. Beispiele für erfindungsgemäß besonders bevorzugte mikrobielle Metabolite sind Diole, insbesondere 2,3-Butandiol, Säuren, insbesondere Acetat, Lactat, Pyruvat, 2-Methylpropionat, 3-Methylbutyrat, α-Ketogluterat, Propionat, Butyrat, Buterat, Zucker, insbesondere Levan, sowie als weiterer besonders bevorzugter mikrobieller Metabolit Acetoin.
Ferner können mikrobielle Metabolite auch Propandiol, Glycol, Glycerin, Citrat, Formiat, Ethanol, Methanol oder Butanol sein.
In einer gesonderten Ausführungsform der Erfindung ist die Komponente (b) ein Präparat eines mikrobiellen Kulturüberstandes, das mindestens 2,5 Gew.-% einer der Substanzen i) bis iii) enthält. Bevorzugterweise enthält das Kulturmedium einer mikrobiellen Kultur eine der vorstehend beschriebenen Substanzen i. und/oder ii. und/oder iii. Der nach möglichst weitgehender Abtrennung der Zellen bzw. Zellbruchstücke erhaltene Kulturüberstand enthaltend mindestens eine dieser Substanzen kann daher verwendet werden, ein Wasch- oder Reinigungsmittel um die Komponente (b) zu bereichern. Hierfür ist es allerdings notwendig, dass dem Wasch- oder Reinigungsmittel ein Präparat eines solchen mikrobiellen Kulturüberstandes zugesetzt wird, das mindestens 2,5 Gew.-% einer der Substanzen i. bis iii. enthält. Alternativ enthält das Präparat mindestens 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 bzw. 90 Gew.-% einer der Substanzen i. bis iii. Die geforderte Menge ist notwendig für die Bereitstellung einer ausreichenden Mindestmenge der jeweiligen Substanz, ohne das Wasch- oder Reinigungsmittel in seiner Waschleistung auf Grund des Vorliegens von zu vielen weiteren Bestandteilen des mikrobiellen Kulturüberstandes zu beeinflussen, insbesondere negativ zu beeinflussen. Schlimmstenfalls würde die Waschleistung den Wasch- oder Reinigungsmittels durch den Zusatz eines zu großen Volumens des mikrobiellen Kulturüberstandes vermindert, was auf Grund der vorstehend angegebenen Mindestmengen der Substanzen i. bis iii. vermieden wird. Demnach ist die Komponente (b) im Überstand einer mikrobiellen Kultur enthalten. Sie kann entweder aktiv von den Mikroorganismen in den Überstand hergestellt oder sezerniert worden sein oder auf Grund von zell-lytischen Ereignissen in der Kultur in den Überstand gelangt sein. Durch fachübliche Routinemaßnahmen, beispielsweise durch Fraktionierung, ist es dann möglich, Präparate dieser Kulturüberstände herzustellen, die die Komponente (b) in ausreichender Menge enthalten, um einen erfindungsgemäßen Einsatz zu ermöglichen. Ein geeignetes Präparat kann daher beispielsweise auch eine oder mehrere Fraktionen eines Kulturüberstandes sein. Sofern der Kulturüberstand bereits die Komponente (b) in ausreichender Menge enthält, kann auch der Kulturüberstand direkt dem Wasch- oder Reinigungsmittel zugesetzt werden. In diesem Fall ist das Präparat der Kulturüberstand selbst.
Erfindungsgemäß ist es weiter möglich, alle möglichen Kombinationen der vorstehend beschriebenen Substanzen i. bis iv. in erfindungsgemäßen Verfahren einzusetzen. Beispielsweise kann auch das mit Hilfe von Kulturen von Bacillus subtilis natto gewonnene Natto bzw. dessen Nicht-Bohnen-Anteil erfindungsgemäß als Komponente (b) verwendet werden.
Bevorzugt wird die Komponente (b) dem Waschmittel- oder Reinigungsmittel als separater Einzelstoff, d.h. nicht als ein Bestandteil eines weiteren Inhaltsstoffes des Wasch- oder Reinigungsmittels, zugefügt. Bevorzugt liegt die Komponente (b) daher frei in dem Wasch- bzw. Reinigungsmittel vor, d.h. sie ist in diesem verteilt und möglichst homogen verteilt. Im Falle von flüssigen oder gelförmigen Wasch- oder Reinigungsmitteln ist die Komponente (b) bevorzugt in diesen gelöst oder dispergiert. Besonders bevorzugt enthält das Wasch- oder Reinigungsmittel die Komponente (b) nicht als Bestandteil der Darreichungsform des hydrolytischen Enzyms (a), insbesondere nicht als Bestandteil eines Enzymgranulates.
Erfindungsgemäß bevorzugt sind flüssige oder gelförmige, d.h. nicht feste Wasch- oder Reinigungsmittel.
Eine synergistische Reinigungsleistung der Komponente (b), die im Zusammenwirken mit dem hydrolytischen Enzym (a) bei Anwendung des Mittels eine synergistische Reinigungsleistung bewirkt, wird in einem Waschsystem bestimmt, das ein Waschmittel in einer Dosierung zwischen 4,5 und 7,0 Gramm pro Liter Waschflotte sowie das hydrolytische Enzym (a) und die Komponente (b) jeweils einzeln oder in Kombination enthält, wobei das Enzym jeweils aktivitätsgleich eingesetzt ist, die Komponente (b) eingesetzt ist in einer Konzentration von 0,00025 bis 0,6 Gew.-%, insbesondere von 0,0003 bis 0,5 Gew.-% (Einsatzkonzentration in der Waschflotte), und die Waschleistung gegenüber einer oder mehrerer der Anschmutzungen Blut-Milch/Tusche auf Baumwolle, Voll-Ei/Pigment auf Baumwolle, Schokolade-Milch/Tusche auf Baumwolle, Erdnuss Öl-Pigment/Tusche auf Polyester/Baumwolle, Gras auf Baumwolle und Kakao auf Baumwolle, insbesondere gegenüber einer oder mehrerer der Anschmutzungen

Blut-Milch/Tusche auf Baumwolle: Produkt Nr. C5 von CFT B.V. Vlaardingen, Holland
Voll-Ei/Pigment auf Baumwolle: Produkt Nr. 10N erhältlich von der Firma wfk Testgewebe GmbH; Brüggen-Bracht, Deutschland, in kleine Stücke geschnitten
Schokolade-Milch/Tusche auf Baumwolle: Produkt Nr. C3 von CFT B.V. Vlaardingen, Holland
Erdnuss Öl-Pigment/Tusche auf Polyester/Baumwolle: Produkt Nr. PC10 von CFT B.V. Vlaardingen, Holland
Gras auf Baumwolle: Produkt Nr. 164 von erhältlich von der Firma Eidgenössische Material- und Prüfanstalt (EMPA) Testmaterialien AG, St. Gallen, Schweiz
Kakao auf Baumwolle: Produkt Nr. 112 von erhältlich von der Firma Eidgenössische Material- und Prüfanstalt (EMPA) Testmaterialien AG, St. Gallen, Schweiz, bestimmt wird durch Messung des Weißheitsgrades der gewaschenen Textilien, der Waschvorgang für mindestens 30 Minuten, optional 60 Minuten, bei einer Temperatur von 40°C erfolgt und das Wasser eine Wasserhärte zwischen 15,5 und 16,5° (deutsche Härte) aufweist.

Ein bevorzugtes flüssiges Waschmittel für ein solches Waschsystem ist wie folgt zusammengesetzt (alle Angaben in Gewichts-Prozent): 0,3- 0,5% Xanthan Gum, 0,2-0,4% Anti-Schaummittel, 6-7% Glycerin, 0,3-0,5% Ethanol, 4-7% FAEOS (Fettalkoholethersulfat), 24-28% nichtionische Tenside, 1% Borsäure, 1-2% Natriumcitrat (Dihydrat), 2-4% Soda, 14-16% Kokosnuss-Fettsäuren, 0,5% HEDP (1-Hydroxyethan-(1,1-di-phosphonsäure)), 0-0,4% PVP (Polyvinylpyrrolidon), 0-0,05% optischer Aufheller, 0-0,001 % Farbstoff, Rest demineralisiertes Wasser. Bevorzugt beträgt die Dosierung des flüssigen Waschmittels zwischen 4,5 und 5,5 Gramm pro Liter Waschflotte, beispielsweise 4,9 Gramm pro Liter Waschflotte. Bevorzugt wird gewaschen in einem pH-Wertebereich zwischen pH 8 und pH 10,5, bevorzugt zwischen pH 8 und pH 9.
Ein bevorzugtes pulverförmiges Waschmittel für ein solches Waschsystem ist wie folgt zusammengesetzt (alle Angaben in Gewichts-Prozent): 10 % lineares Alkylbenzolsulfonat (Natrium-Salz), 1,5 % C12-C18-Fettalkoholsulfat (Natrium-Salz), 2,0 % C12-C18-Fettalkohol mit 7 EO, 20 % Natriumcarbonat, 6,5 % Natriumhydrogencarbonat, 4,0 % amorphes Natriumdisilikat, 17 % Natriumcarbonat-peroxohydrat, 4,0 % TAED, 3,0 % Polyacrylat, 1,0 % Carboxymethylcellulose, 1,0 % Phosphonat, 25 % Natriumsulfat, Rest: optional Schauminhibitoren, optischer Aufheller, Duftstoffe und ggfs. Wasser ad 100%. Bevorzugt beträgt die Dosierung des flüssigen Waschmittels zwischen 6,0 und 7,0 Gramm pro Liter Waschflotte, beispielsweise 6,7 Gramm pro Liter Waschflotte. Bevorzugt wird gewaschen in einem pH-Wertebereich zwischen pH 9 und pH 11.
Bevorzugt wird ein flüssiges Waschmittel verwendet.
Der Weißheitsgrad, d.h. die Aufhellung der Anschmutzungen, wird bevorzugt mit optischen Messverfahren bestimmt, bevorzugt photometrisch. Ein hierfür geeignetes Gerät ist beispielsweise das Spektrometer Minolta CM508d. Üblicherweise werden die für die Messung eingesetzten Geräte zuvor mit einem Weißstandard, bevorzugt einem mitgelieferten Weißstandard, kalibriert.
Durch den aktivitätsgleichen Einsatz wird sichergestellt, dass auch bei einem etwaigen Auseinanderklaffen des Verhältnisses von Aktivsubstanz zu Gesamtprotein (die Werte der spezifischen Aktivität) die jeweiligen enzymatischen Eigenschaften, also beispielsweise die Waschleistung an bestimmten Anschmutzungen, verglichen werden. Generell gilt, dass eine niedrige spezifische Aktivität durch Zugabe einer größeren Proteinmenge ausgeglichen werden kann. Verfahren zur Bestimmung der Enzymaktivitäten sind dem Fachmann auf dem Gebiet der Enzymtechnologie geläufig und werden von ihm routinemäßig angewendet. Beispielsweise sind Verfahren zur Bestimmung der Proteaseaktivität offenbart in Tenside, Band 7 (1970), S. 125-132. Die Proteaseaktivität wird vorzugsweise in PE (Protease-Einheiten) angegeben. Beispielsweise geeignete Proteaseaktivitäten betragen 5 oder 10 PE (Protease-Einheiten) pro ml Waschflotte. Die eingesetzte enzymatische Aktivität ist jedoch nicht gleich Null.
Bevorzugt basiert die synergistische Reinigungsleistung auf einem neuen Wirkmechanismus, d.h. es erfolgt keine Steigerung der Enzymaktivität per se im klassischen Sinne, wie sie - bezogen auf Proteasen - in einem der nachfolgenden Verfahren gemessen werden würde. Ein erfindungsgemäßer Synergismus ist demnach auch insbesondere dann vorhanden, wenn eine verbesserte Reinigungsleistung in Anwesenheit von Komponenten (a) und (b) gegenüber der Summe der Reinigungsleistungen der Komponente (a) alleine und der Komponente (b) alleine festgestellt wird, und die Komponente (b) in mindestens einem den nachfolgenden Testverfahren, bevorzugt in beiden nachfolgenden Testverfahren, keinen Effekt hinsichtlich der Steigerung der hydrolytischen Aktivität der Komponente (a), insbesondere hinsichtlich der Steigerung der hydrolytischen Aktivität einer Protease, über die messbedingte Standardabweichung hinaus zeigt:

Verfahren 1

Die Protease-Aktivität wird quantitativ über die Freisetzung des Chromophors para-Nitroanilin (pNA) aus dem Substrat bestimmt. Bei dem Substrat handelt es sich um: suc-L-Ala-L-Ala-L-Pro-L-Phe-p-Nitroanilid (Substratlösung: 110 mM in DMSO). Die Protease spaltet das Substrat und setzt pNA frei. Die Freisetzung des pNA verursacht eine Zunahme der Extinktion bei 410 nm, deren zeitlicher Verlauf ein Maß für die enzymatische Aktivität ist (vgl. Del Mar et al., 1979).
Die Messung erfolgt bei einer Temperatur von 25°C, bei pH 8,6 und einer Wellenlänge von 410 nm. Die Messzeit beträgt 5 min und das Messintervall 20s bis 60s.
Der Gebrauchspuffer (Tris-HCl pH 8,6] wird als Blank-Probe verwendet. Zu jeder Küvette werden 10 µL der Substratlösung gegeben. Je Probe werden 1000 µL Puffer in eine Küvette gegeben. Es werden 1-300 µl der Puffer bzw. der Komponente (b) (0,1, 0,2, 0,5 oder 1 Gew.-% in Gebrauchspuffer] in die Küvette gegeben. Es werden 1-300 µl der Protease bzw. der Blank-Probe in die Küvette gegeben. Der Start der Messung erfolgt durch Mischen der Probe. Nach dem Mischen werden die Küvetten sofort in das Photometer überführt und die Messung gestartet. Eine Aktivierung oder Stabilisierung der Protease kann mittels der Messdaten quantifiziert werden.

Verfahren 2

Die Protease-Aktivität wird über die Hydrolyse von Casein und anschließende Reaktion von in TCA löslichen Peptiden mit Folin & Ciocalteu's Phenol Reagenz bestimmt. Die Extinktion des resultierenden Komplexes wird bei 660 nm gemessen und mit einem Tyrosin-Standard verglichen. Reaktionsmischungen enthalten 3 ml 0,8 % (w/v) Casein und 0,5 ml einer geeigneten Enzymverdünnung mit oder ohne der zu testenden Komponente (b) (Konzentration 0,1, 0,2, 0,5 oder 1 Gew.-%), beide in Universalpuffer 1 von Britton und Robinson, pH 9,5 (vgl. J. Chem. Soc. 1931, S. 1451). Die Mischungen werden für 30 Minuten bei 25°C inkubiert, dann wird die Reaktion durch Zugabe von Stopreagenz (TCA) abgebrochen. In Kontrollreaktionen wird das Stopreagenz vor Enzymzugabe mit oder ohne der zu testenden Substanz zugegeben. Nach 20 Minuten bei 25°C werden die Reaktionsmischungen durch Whatman-Filterpapier Nr. 42 filtriert oder zentrifugiert.
Zu dem Filtrat wird Wasser, Natriumcarbonat und Folin & Ciocalteu's Phenol Reagenz gegeben. Nach 30 Minuten Inkubation wird die Extinktion bei 660 nm bestimmt. In vergleichbarer Weise wird ein aliquotierter Teil von 200 µl eines Tyrosin-Standards bestimmt. Die Aktivität wird in Protease Einheiten ausgedrückt, wobei 1 PE definiert ist als die Menge an proteolytischem Enzym, die zur Freisetzung von 1 mmol Tyrosin führt, freigesetzt pro Minute unter definierten Bedingungen (vgl. Anson, M.L., (1938) J. Gen. Physiol. 22, 79-89 sowie Folin, O., and Ciocalteu, V., (1929) J. Biol. Chem. 73, 627).
In einer weiteren Ausführungsform der Erfindung ist das Verfahren dadurch gekennzeichnet, dass die Komponente (b) in einem mikrobiellen Kulturüberstand enthalten ist, insbesondere in einem bakteriellen oder pilzlichen Kulturüberstand, insbesondere in einem Kulturüberstand von Bacillus sp. und insbesondere in einem Kulturüberstand von Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus pumilus, Bacillus aeolius oder Bacillus subtilis natto. Es hat sich herausgestellt, dass Kulturüberstände dieser Mikroorganismen mindestens eine, bevorzugt mehrere Substanzen der Komponente (b) umfassen und somit vorteilhaft erfindungsgemäß angewendet werden können. Weitere Mikroorganismen, deren Kulturüberstände diesbezüglich eine erfindungsgemäße Komponente (b) enthalten, sind ausgewählt ist aus der Gruppe der Gattungen von Escherichia, Klebsiella, Bacillus, Staphylococcus, Corynebakterium, Arthrobacter, Streptomyces, Stenotrophomonas und Pseudomonas und insbesondere ausgewählt aus der Gruppe von Escherichia coli, Klebsiella planticola, Bacillus licheniformis, Bacillus lentus, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus subtilis, Bacillus alcalophilus, Bacillus globigii, Bacillus gibsonii, Bacillus pumilus, Staphylococcus carnosus, Corynebacterium glutamicum, Arthrobacter oxidans, Streptomyces lividans, Streptomyces coelicolor und Stenotrophomonas maltophilia.
Vorteilhafte synergistische Reinigungsleistungen ergeben sich ferner dadurch, dass die als Komponente (b) eingesetzten Substanzen bestimmte Molekulargewichte aufweisen. In einer weiteren Ausführungsform der Erfindung ist das Verfahren dadurch gekennzeichnet, dass die Komponente

i. ein Molekulargewicht (MW) aufweist von 150 bis 5x10⁶ Dalton, insbesondere von 200 bis 1x10⁶ Dalton, von 220 bis 0,75x10⁶ Dalton und insbesondere von 400 bis 0,5x10⁶ Dalton,
ii. ein Molekulargewicht (MW) aufweist von 500 bis 3000 Dalton, insbesondere von 600 bis 2500 Dalton, von 700 bis 2250 Dalton und insbesondere von 800 bis 2000 Dalton,
iii. ein Molekulargewicht (MW) aufweist von 150 bis 5x10⁶ Dalton, insbesondere von 200 bis 1x10⁶ Dalton, von 220 bis 0,75x10⁶ Dalton und insbesondere von 400 bis 0,5x10⁶ Dalton.

Vorteilhafte synergistische Reinigungsleistungen ergeben sich weiter auch dadurch, dass die als Komponente (b) eingesetzte Substanz in bestimmten Konzentrationen in dem Wasch- oder Reinigungsmittel vorliegt. In einer weiteren Ausführungsform der Erfindung ist das Verfahren dadurch gekennzeichnet, dass die Komponente

i. in dem Mittel vorliegt von 0,018 bis 0,2 Gew.-%, insbesondere von 0,04 bis 0,1 Gew.-%,
ii. in dem Mittel vorliegt von 0,001 % bis 25 Gew.-%, insbesondere von 0,005 bis 10 Gew.-%,
iii. in dem Mittel vorliegt von 0,018 bis 0,2 Gew.-%, insbesondere von 0,04 bis 0,1 Gew.-%.

Betreffend die Einsatzkonzentration, also die Konzentration in der Wasch- bzw. Reinigungsflotte, ergibt sich eine besonders vorteilhafte synergistische Reinigungsleistung ebenfalls dadurch, dass die als Komponente (b) eingesetzte Substanz in einer bestimmten Konzentration in der Wasch- bzw. Reinigungsflotte vorliegt. In einer weiteren Ausführungsform der Erfindung ist das Verfahren demnach dadurch gekennzeichnet, dass diese Komponente in der Wasch- bzw. Reinigungsflotte vorliegt in einer Konzentration von 0,00025 bis 0,6 Gew.-%, insbesondere von 0,0003 bis 0,5 Gew.-%. Diese vorteilhafte Einsatzkonzentration betrifft die vorstehend beschriebenen Komponenten i. und/oder ii. und/oder iii. und/oder iv.
Zu in erfindungsgemäßen Verfahren einsetzbaren Wasch- und Reinigungsmitteln zählen alle denkbaren Wasch- bzw. Reinigungsmittelarten, sowohl Konzentrate als auch unverdünnt anzuwendende Mittel, zum Einsatz im kommerziellen Maßstab, in der Waschmaschine oder bei der Handwäsche beziehungsweise -reinigung. Dazu gehören beispielsweise Waschmittel für Textilien, Teppiche, oder Naturfasern, für die die Bezeichnung Waschmittel verwendet wird. Dazu gehören beispielsweise auch Geschirrspülmittel für Geschirrspülmaschinen oder manuelle Geschirrspülmittel oder Reiniger für harte Oberflächen wie Metall, Glas, Porzellan, Keramik, Kacheln, Stein, lackierte Oberflächen, Kunststoffe, Holz oder Leder, für die die Bezeichnung Reinigungsmittel verwendet wird, also neben manuellen und maschinellen Geschirrspülmitteln beispielsweise auch Scheuermittel, Glasreiniger, WC-Duftspüler, usw. Zu den Wasch- und Reinigungsmittel im Rahmen der Erfindung zählen ferner Waschhilfsmittel, die bei der manuellen oder maschinellen Textilwäsche zum eigentlichen Waschmittel hinzudosiert werden, um eine weitere Wirkung zu erzielen. Ferner zählen zu Wasch- und Reinigungsmittel im Rahmen der Erfindung auch Textilvor- und Nachbehandlungsmittel, also solche Mittel, mit denen das Wäschestück vor der eigentlichen Wäsche in Kontakt gebracht wird, beispielsweise zum Anlösen hartnäckiger Verschmutzungen, und auch solche Mittel, die in einem der eigentlichen Textilwäsche nachgeschalteten Schritt dem Waschgut weitere wünschenswerte Eigenschaften wie angenehmen Griff, Knitterfreiheit oder geringe statische Aufladung verleihen. Zu letztgenannten Mittel werden u.a. die Weichspüler gerechnet.
Die in erfindungsgemäßen Verfahren einsetzbaren Wasch- oder Reinigungsmittel, die als insbesondere pulverförmige Feststoffe, in nachverdichteter Teilchenform, als homogene Lösungen oder Suspensionen vorliegen können, können außer den erfindungsgemäß eingesetzten Wirkstoffen - den Komponenten (a) und (b) - im Prinzip alle bekannten und in derartigen Mitteln üblichen Inhaltsstoffe enthalten, wobei bevorzugt mindestens ein weiterer Inhaltsstoff in dem Mittel vorhanden ist. Die Mittel können insbesondere Buildersubstanzen, oberflächenaktive Tenside, Bleichmittel auf Basis organischer und/oder anorganischer Persauerstoffverbindungen, Bleichaktivatoren, wassermischbare organische Lösungsmittel, Enzyme, Sequestrierungsmittel, Elektrolyte, pH-Regulatoren und weitere Hilfsstoffe wie optische Aufheller, Vergrauungsinhibitoren, Schaumregulatoren sowie Farb- und Duftstoffe sowie Kombinationen hiervon enthalten. Insbesondere eine weitere Kombination der erfindungsgemäßen Wirkstoffe mit einem oder mehreren weiteren Inhaltsstoff(en) der Mittel erweist sich als vorteilhaft, da dann eine weiter verbesserte Reinigungsleistung durch weitere sich ergebende Synergismen erreicht werden kann. Insbesondere durch die Kombination mit einem Tensid und/oder einer Buildersubstanz und/oder einem Bleichmittel wird ein solcher weiterer Synergismus erreicht. Solche bevorzugten weiteren Inhaltsstoffe des Wasch- oder Reinigungsmittels sind offenbart in der internationalen Offenlegungsschrift WO 2009/021867 , auf deren Offenbarung daher ausdrücklich verwiesen bzw. deren Offenbarung daher ausdrücklich in die vorliegende Anmeldung einbezogen wird.
Die zu wählenden Inhaltsstoffe wie auch die Bedingungen, unter denen das Mittel eingesetzt wird, wie beispielsweise Temperatur, pH-Wert, Ionenstärke, Redox-Verhältnisse oder mechanische Einflüsse, sollten für das jeweilige Reinigungsproblem optimiert sein. So liegen übliche Temperaturen für den Einsatz von Wasch- und Reinigungsmitteln in Bereichen von 10°C über 40°C und 60°C bis hin zu 95° bei maschinellen Mitteln oder bei technischen Anwendungen. Vorzugsweise werden die Inhaltsstoffe der betreffenden Mittel aufeinander abgestimmt, insbesondere derart, dass sich Synergien hinsichtlich der Reinigungsleistung ergeben. Besonders bevorzugt sind Synergien, die in einem Temperaturbereich zwischen 10°C und 60°C vorhanden sind, insbesondere in einem Temperaturbereich von 10°C bis 50°C, von 10°C bis 40°C, von 10°C bis 30°C, von 15°C bis 30°C von 10°C bis 25°C, von 15°C bis 25°C und ganz besonders bevorzugt bei 20°C.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform enthält ein in erfindungsgemäßen Verfahren einsetzbares Mittel ferner das hydrolytische Enzym in einer Menge von 2 µg bis 20 mg, vorzugsweise von 5 µg bis 17,5 mg, besonders bevorzugt von 20 µg bis 15 mg und ganz besonders bevorzugt von 50 µg bis 10 mg pro g des Mittels. Ferner kann das in dem Mittel enthaltene hydrolytische Enzym, insbesondere eine Protease, und/oder weitere Inhaltsstoffe des Mittels mit einer bei Raumtemperatur oder bei Abwesenheit von Wasser für das Enzym undurchlässigen Substanz umhüllt sein, welche unter Anwendungsbedingungen des Mittels durchlässig für das Enzym wird. Eine solche Ausführungsform der Erfindung ist somit dadurch gekennzeichnet, dass das hydrolytische Enzym mit einer bei Raumtemperatur oder bei Abwesenheit von Wasser für das Enzym undurchlässigen Substanz umhüllt ist. Weiterhin kann auch das Wasch- oder Reinigungsmittel selbst in einem Behältnis, vorzugsweise einem luftdurchlässigen Behältnis, verpackt sein, aus dem es kurz vor Gebrauch oder während des Waschvorgangs freigesetzt wird.
In weiteren Ausführungsformen der Erfindung ist das Verfahren dadurch gekennzeichnet, dass das Wasch- oder Reinigungsmittel

(a) in fester Form vorliegt, insbesondere als rieselfähiges Pulver mit einem Schüttgewicht von 300 g/l bis 1200 g/l, insbesondere 500 g/l bis 900 g/l, oder
(b) in pastöser oder in flüssiger Form vorliegt, und/oder
(c) als Einkomponentensystem vorliegt, oder
(d) in mehrere Komponenten aufgeteilt ist.

Diese Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung umfassen ferner alle festen, pulverförmigen, flüssigen, gelförmigen oder pastösen Darreichungsformen der in erfindungsgemäßen Verfahren einsetzbaren Mittel, die gegebenenfalls auch aus mehreren Phasen bestehen können sowie in komprimierter oder nicht komprimierter Form vorliegen können. Das Mittel kann als rieselfähiges Pulver vorliegen, insbesondere mit einem Schüttgewicht von 300 g/l bis 1200 g/l, insbesondere 500 g/l bis 900 g/l oder 600 g/l bis 850 g/l. Zu den festen Darreichungsformen des Mittels zählen ferner Extrudate, Granulate, Tabletten oder Pouches. Alternativ kann das Mittel auch flüssig, gelförmig oder pastös sein, beispielsweise in Form eines nicht-wässrigen Flüssigwaschmittels oder einer nicht-wässrigen Paste oder in Form eines wässrigen Flüssigwaschmittels oder einer wasserhaltigen Paste. Weiterhin kann das Mittel als Einkomponentensystem vorliegen. Solche Mittel bestehen bevorzugt aus einer Phase. Alternativ kann ein Mittel auch aus mehreren Phasen bestehen. Ein solches Mittel ist demnach in mehrere Komponenten aufgeteilt.
In erfindungsgemäßen Verfahren einsetzbare Wasch- oder Reinigungsmittel können ausschließlich ein hydrolytisches Enzym, beispielsweise und insbesondere eine Protease, enthalten. Alternativ können sie aber auch weitere hydrolytische Enzyme oder andere Enzyme in einer für die Wirksamkeit des Mittels zweckmäßigen Konzentration enthalten, wobei prinzipiell alle im Stand der Technik für diese Zwecke etablierten Enzyme einsetzbar sind. Als weitere Enzyme bevorzugt einsetzbar sind alle Enzyme, die in dem Mittel eine katalytische Aktivität entfalten können, insbesondere Proteasen, Amylasen, Cellulasen, Hemicellulasen, Mannanasen, Tannasen, Xylanasen, Xanthanasen, β-Glucosidasen, Carrageenasen, Oxidasen, Perhydrolasen, Oxidoreduktasen oder Lipasen, sowie vorzugsweise deren Gemische. Diese Enzyme sind im Prinzip natürlichen Ursprungs; ausgehend von den natürlichen Molekülen stehen für den Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln verbesserte Varianten zur Verfügung, die entsprechend bevorzugt eingesetzt werden.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Wasch- oder Reinigungsverfahren umfassend die Verfahrensschritte

(a) Bereitstellen einer Wasch- oder Reinigungslösung umfassend ein Wasch- oder Reinigungsmittel, das
1. i. ein hydrolytisches Enzym enthält, insbesondere eine Protease, Amylase, Cellulase, Hemicellulase, Mannanase, Tannase, Xylanase, Xanthanase, β-Glucosidase, Carrageenase oder eine Lipase, besonders bevorzugt eine Protease, und
2. ii. eine Komponente enthält, die im Zusammenwirken mit dem hydrolytischen Enzym bei Anwendung des Mittels eine synergistische Reinigungsleistung bewirkt und die ausgewählt ist aus
  1. 1. Aminosäure oder Polyaminosäure oder deren Derivat und/oder
  2. 2. Biotensid und/oder
  3. 3. mikrobieller Metabolit
  4. 4. Präparat eines mikrobiellen Kulturüberstandes, das mindestens 2,5 Gew.- % einer der Substanzen 1) bis 3);
(b) In Kontakt bringen eines Textils oder einer harten Oberfläche mit der Wasch- oder Reinigungslösung gemäß (a).

Alle Sachverhalte, Gegenstände und Ausführungsformen, die vorstehend für alle erfindungsgemäßen Verfahren beschrieben sind, sind auch auf diesen Erfindungsgegenstand anwendbar. Daher wird an dieser Stelle ausdrücklich auf die Offenbarung an entsprechender Stelle verwiesen mit dem Hinweis, dass diese Offenbarung auch für diesen Gegenstand der Erfindung gilt.
Ein solches Verfahren ist vorteilhaft, da wie vorstehend beschrieben die Reinigungsleistung eines Wasch- oder Reinigungsmittels, das ein entsprechendes hydrolytisches Enzym enthält, verbessert wird durch den Zusatz einer Komponente wie angegeben. Damit ist das Verfahren vorteilhaft, um von Textilien oder von harten Oberflächen entsprechende Verunreinigungen, insbesondere proteinhaltige Verunreinigungen, zu beseitigen. Ausführungsformen dieses Erfindungsgegenstandes stellen beispielsweise die Handwäsche, die manuelle Entfernung von Flecken von Textilien oder von harten Oberflächen oder maschinelle Verfahren dar.
Verfahren zur Reinigung von Textilien zeichnen sich im allgemeinen dadurch aus, dass in mehreren Verfahrensschritten verschiedene reinigungsaktive Substanzen auf das Reinigungsgut aufgebracht und nach der Einwirkzeit abgewaschen werden, oder dass das Reinigungsgut in sonstiger Weise mit einem Waschmittel oder einer Lösung dieses Mittels behandelt wird. Entsprechendes gilt für Verfahren zur Reinigung von harten Oberflächen.
Da ein hydrolytisches Enzym, d.h. Komponente (a), natürlicherweise bereits eine hydrolytische Aktivität besitzt und diese auch in Medien entfaltet, die sonst keine Reinigungskraft besitzen, wie beispielsweise in bloßem Puffer, kann ein solches Verfahren auch lediglich darin bestehen, dass neben der zugesetzten Komponente (b) als einzige weitere Komponente ein hydrolytisches Enzym, d.h. Komponente (a), aufgebracht wird, bevorzugt in einer Pufferlösung oder in Wasser. Dies stellt eine weitere Ausführungsform dieses Erfindungsgegenstandes dar.
Alle erfindungsgemäßen Verfahren werden vorzugsweise in einem Temperaturbereich von 10°C bis 60°C, insbesondere von 10°C bis 50°C, von 10°C bis 40°C, von 10°C bis 30°C, von 15°C bis 30°C von 10°C bis 25°C und von 15°C bis 25°C, durchgeführt. Ein synergistisches Zusammenwirken der Komponenten (a) und (b) hinsichtlich der Reinigungsleistung liegt besonders bei diesen niedrigeren bis mittleren Waschtemperaturen bzw. Reinigungstemperaturen vor.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist die Verwendung einer Komponente, die ausgewählt ist aus

i. Aminosäure oder Polyaminosäure oder deren Derivat und/oder
ii. Biotensid und/oder
iii. mikrobieller Metabolit und/oder
iv. Präparat eines mikrobiellen Kulturüberstandes, das mindestens 2,5 Gew.-% einer der Substanzen i) bis iii) enthält

Die Sachverhalte, Gegenstände und Ausführungsformen, die für erfindungsgemäße Wasch- oder Reinigungsverfahren beschrieben sind, sind auch auf diesen Erfindungsgegenstand anwendbar. Daher wird an dieser Stelle ausdrücklich auf die Offenbarung an entsprechender Stelle verwiesen mit dem Hinweis, dass diese Offenbarung auch für die vorstehende erfindungsgemäße Verwendung gilt.
In einer weiteren Ausführungsform ist die Verwendung demnach dadurch gekennzeichnet, dass die Komponente

Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist die Verwendung einer Komponente, die ausgewählt ist aus

i. Aminosäure oder Polyaminosäure oder deren Derivat und/oder
ii. Biotensid und/oder
iii. mikrobieller Metabolit und/oder
iv. Präparat eines mikrobiellen Kulturüberstandes, das mindestens 2,5 Gew.-% einer der Substanzen i) bis iii) enthält
zur Steigerung der Reinigungsleistung eines hydrolytischen Enzyms in einem Wasch- oder Reinigungsprozess. Wie vorstehend beschrieben wirken diese Komponenten (Komponente (b)) vorteilhaft, insbesondere synergistisch, mit einem hydrolytischen Enzym (Komponente (a)) zusammen, so dass nicht nur die Reinigungsleistung eines Wasch- oder Reinigungsmittels (bzw. der von diesem Mittel gebildeten Waschflotte) verbessert wird, sondern auch die Reinigungsleistung des hydrolytischen Enyzms selbst. Die Sachverhalte, Gegenstände und Ausführungsformen, die für erfindungsgemäße Wasch- oder Reinigungsverfahren beschrieben sind, sind auch auf diesen Erfindungsgegenstand anwendbar. Daher wird an dieser Stelle ausdrücklich auf die Offenbarung an entsprechender Stelle verwiesen mit dem Hinweis, dass diese Offenbarung auch für die vorstehende erfindungsgemäße Verwendung gilt.

Bevorzugte Ausführungsformen erfindungsgemäßer Verwendungen sind ferner dadurch gekennzeichnet, dass die Komponente in einem mikrobiellen Kulturüberstand enthalten ist, insbesondere in einem bakteriellen oder pilzlichen Kulturüberstand, insbesondere in einem Kulturüberstand von Bacillus sp. und insbesondere in einem Kulturüberstand von Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis Bacillus pumilus, Bacillus aeolius oder Bacillus subtilis natto. Es hat sich herausgestellt, dass Kulturüberstände dieser Mikroorganismen mindestens eine, bevorzugt mehrere Komponenten i. bis iv. umfassen und somit vorteilhaft erfindungsgemäß angewendet werden können. Ferner ergeben sich vorteilhafte Reinigungsleistungen insbesondere dadurch, dass die als Komponente (b) eingesetzten Substanzen bestimmte Molekulargewichte aufweisen. Weitere bevorzugte Ausführungsformen erfindungsgemäßer Verwendungen sind demnach dadurch gekennzeichnet, dass die Komponente

Beispiele:

Beispiel 1

Für die Ermittlung der Waschleistung wurde nachfolgend angegebene Rahmenrezeptur für ein Textilwaschmittel verwendet (vgl. Tabelle 2).

Tabelle 2:

Inhaltsstoff	Gew.-% Reinsubstanz
Xanthan	0,3- 0,5
Anti-Schaummittel	0,2-0,4
Glycerin	6-7
Ethanol	0,3-0,5
FAEOS	4-7
Nichtionische Tenside (FAEO, APG, u.a.)	24 - 28
Borsäure	1
Natriumcitrat (Dihydrat)	1-2
Soda	2-4
Kokosnuss-Fettsäuren	14-16
HEDP	0,5
PVP	0-0,4
Optische Aufheller	0-0,05
Farbstoff	0-0,001
Parfüm	0-2
H₂O, demineralisiert	Rest

Die Testansätze wurden in 48-Napf-Platten in jeweils 1 ml Waschlauge wie nachfolgend in Tabelle 3 angegeben zusammengestellt. Die Inkubation erfolgte für 60 Minuten bei 40°C unter Schütteln (ca. 600 Umdrehungen pro Minute (rpm)).

Tabelle 3:

Volumina	Lösung
420 µl	161-966 mg Textilwaschmittel in 42 ml Wasser oder Puffer
30-530 µl	1-100 PE/ml Protease
30-530 µl	Vorbereitete Substanz-Lösung
Rest	H₂O
	Anschmutzung ∅ ca. 1cm

Es wurden runde Stücke von Anschmutzungen (Durchmesser ca. 10 mm) verwendet, die aus folgenden Anschmutzungen ausgewählt wurden:

Blut-Milch/Tusche auf Baumwolle: Produkt Nr. C5 von CFT B.V. Vlaardingen, Holland Voll-Ei/Pigment auf Baumwolle: Produkt Nr. 10N erhältlich von der Firma wfk Testgewebe GmbH; Brüggen-Bracht, Deutschland,
Schokolade-Milch/Tusche auf Baumwolle: Produkt Nr. C3 von CFT B.V. Vlaardingen, Holland Erdnuss Öl-Pigment/Tusche auf Polyester/Baumwolle: Produkt Nr. PC10 von CFT B.V. Vlaardingen, Holland
Gras auf Baumwolle: Produkt Nr. 164 von erhältlich von der Firma Eidgenössische Material- und Prüfanstalt (EMPA) Testmaterialien AG, St. Gallen, Schweiz
Kakao auf Baumwolle: Produkt Nr. 112 von erhältlich von der Firma Eidgenössische Material- und Prüfanstalt (EMPA) Testmaterialien AG, St. Gallen, Schweiz.

Nach der Inkubation wurden die Anschmutzungen dreimal gespült, getrocknet und fixiert und der Weißgrad der gewaschenen Textilien im Vergleich zu einem Weißstandard (d/8, 8mm, SCI/SCE) gemessen, der auf 100% normiert worden war (Bestimmung des L-Werts). Die Messung erfolgte an einem Farbmessgerät (Minolta Cm508d) mit einer Lichtarteinstellung von 10°/D65. Die erhaltenen Ergebnisse sind als Prozent Leistung angegeben, wobei die Differenz der Remissionswerte vom Basiswaschmittel ohne Substanz oder Enzyme zu dem mit Protease auf 100% normiert wurde.
Als Proteasen verwendet wurden die alkalische Protease aus Bacillus lentus DSM 5483 ( WO 92/21760 ), die Protease aus Bacillus pumilus gemäß WO2007/131656 sowie die Protease, die in Figur 2 bzw. SEQ ID NO. 3 der internationalen Offenlegungsschrift WO 03/057713 offenbart ist.

Beispiel 2

Die Waschleistung wurde mit folgenden reinen Substanzen (Komponente (b)) getestet: Polyglutamat (Poly-Glutaminsäure), Lysin, Phenylalanin, Tyrosin, Alanin, Leucin, Prolin, Cystein, Threonin, Serin, Glycin, Aspapartat, Asparagin, 2,3-Butandiol, Pyruvat, Propionat, Butyrat, Levan und Surfactin.
Stammlösungen mit diesen Substanzen wurden angesetzt mit 0,00001-1,5 M Substanz oder 0,0001-55% (Gewicht) in Wasser oder Puffer (Phosphat 0,00001-1,5 M pH 6,5-8,0 oder Tris 0,00001-1,5 M pH 7,5-9,0 oder Soerensen Puffer pH 7,5-9,0 oder Citrat Puffer 0,00001-1,5 M pH 4,5-7,0 oder Acetat Puffer 0,00001-1,5 M pH 2,5-5,5).
Die nachfolgenden Tabellen 4 bis 9 zeigen die erhaltenen Waschleistungen für die jeweils angegebenen Versuchsansätze (die Abkürzung "n.b." steht für "nicht bestimmt"). Die Aminosäuren sind in fachüblicher Kurzschreibweise aufgeführt. Es wird deutlich, dass die eingesetzten Komponenten (b) eine synergistische Steigerung der Waschleistung bei denjenigen Waschmitteln bewirken, die ein hydrolytisches Enzym, nämlich eine Protease, d.h. Komponente (a), enthalten. In Kontrollen, in denen kein hydrolytisches Enzym enthalten ist (bezeichnet als "Blank") bewirken diese Komponenten (b) keine Steigerung der Waschleistung, so dass die gesteigerte Waschleistung auf einem vorteilhaften, synergistischen Zusammenwirken der Komponenten (a) und (b) beruht.

Beispiel 3

Die Waschleistung wurde mit bakteriellen oder pilzlichen Fermenterüberständen und Nährmedien (Kulturüberständen) bzw. Fraktionen aus der Aufreinigung dieser Flüssigkeiten gesteigert, besonders mit Bacillus Fermenterüberstanden und Bacillus Nährmedien (Kulturüberständen) und Fraktionen, die derartige Substanzen beinhalten.
Fermenterkulturen wurden zentrifugiert oder nicht zentrifugiert um Feststoffe abzutrennen und gekocht (15 Min, 97,5-100°C), um die Enzyme zu inaktivieren. Nachdem der Brei abgekocht war, wurde die entstandene Lösung erneut zentrifugiert, um entstandenes Präzipitat abzutrennen (= abgekochter Überstand). Der abgekochte Überstand wurde gegebenenfalls weiter behandelt, indem er mittels einer 10 kDa-Cutoff Membran filtriert wurde, anschliessend über eine 1 kDa-Cutoff Membran. Das Filtrat der 1 kDa-Cutoff Membran wurde weiter fraktioniert mittels einer Bio-Gel P2 Säule (Gelpermeationschromatographie / "size exclusion chromatography").
Eingesetzt als Komponente (b) wurden daher Kulturüberstände bzw. Verdünnungen zweier verschiedener Kulturen von Bacillus sp. (Stamm 1 bzw. Stamm 2) sowie unterschiedlich prozessierte und/oder fraktionierte Präparationen der Überstände wie jeweils angegeben.
Die nachfolgenden Tabellen 10 bis 15 zeigen die erhaltenen Waschleistungen. Es wird deutlich, dass die eingesetzten Komponenten (b) eine synergistische Steigerung der Waschleistung bei Waschmitteln bewirken, die ein hydrolytisches Enzym, nämlich eine Protease, d.h. Komponente (a), enthalten. Ferner wird anhand der unterschiedlichen Wirksamkeit einzelner Fraktionen deutlich, dass der Effekt auf einzelnen, distinkten Bestandteilen der Überstände beruht, die in den jeweiligen Fraktionen, beispielsweise größenbedingt, enthalten sind.

Beispiel 4

Die Waschleistung wurde mit Surfactin oder Lichenycin oder fermentierten Überständen von Mikroorganismen erzielt, die Surfactin, Lichenysin oder ähnliche Moleküle vom Typ Lipopeptid produzieren. In den fermentierten Überstanden wurden mittels Massenspektroskopie Surfactin bzw. Surfactin-ähnliche Moleküle nachgewiesen.
Die nachfolgenden Tabellen 16 bis 19 zeigen die erhaltenen Waschleistungen. Es wird deutlich, dass die eingesetzten Komponenten (b) eine synergistische Steigerung der Waschleistung bei denjenigen Waschmitteln bewirken, die ein hydrolytisches Enzym, nämlich eine Protease, d.h. Komponente (a), enthalten. In Kontrollen, in denen kein hydrolytisches Enzym enthalten ist bewirken diese Komponenten (b) keine Steigerung der Waschleistung, so dass die gesteigerte Waschleistung auf einem vorteilhaften, synergistischen Zusammenwirken der Komponenten (a) und (b) beruht. Ein inaktiviertes hydrolytisches Enzym (vgl. Tabelle 19) führt ebenfalls dazu, dass keine synergistische Reinigungsleistung mehr auftritt, was ein weiterer Beleg ist für das spezifische vorteilhafte Zusammenwirken der Komponenten (a) und (b).

Beschreibung der Figur:

Figur 1:: Struktur von Surfactin

Claims

Verfahren zur Verbesserung der Reinigungsleistung eines Wasch- oder Reinigungsmittels, das ein hydrolytisches Enzym, insbesondere eine Protease, Amylase, Cellulase, Hemicellulase, Mannanase, Tannase, Xylanase, Xanthanase, β-Glucosidase, Carrageenase oder eine Lipase, besonders bevorzugt eine Protease, umfasst, dadurch gekennzeichnet, dass dem Wasch- oder Reinigungsmittel eine Komponente zugesetzt wird, die im Zusammenwirken mit dem hydrolytischen Enzym bei Anwendung des Mittels eine synergistische Reinigungsleistung bewirkt und die ausgewählt ist aus
i. Aminosäure oder Polyaminosäure oder deren Derivat und/oder

ii. Biotensid und/oder

iii. mikrobieller Metabolit

iv. Präparat eines mikrobiellen Kulturüberstandes, das mindestens 2,5 Gew.-% einer der Substanzen i) bis iii) enthält.
Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Komponente in einem mikrobiellen Kulturüberstand enthalten ist, insbesondere in einem bakteriellen oder pilzlichen Kulturüberstand, insbesondere in einem Kulturüberstand von Bacillus sp. und insbesondere in einem Kulturüberstand von Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus pumilus, Bacillus aeolius oder Bacillus subtilis natto, und dem Wasch- oder Reinigungsmittel als Kulturüberstand, bevorzugt als eine Fraktion des Kulturüberstandes, zugesetzt wird.
Verfahren nach einem der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Komponente
i. ein Molekulargewicht (MW) aufweist von 150 bis 5x10⁶ Dalton, insbesondere von 200 bis 1x10⁶ Dalton, von 220 bis 0,75x10⁶ Dalton und insbesondere von 400 bis 0,5x10⁶ Dalton,

ii. ein Molekulargewicht (MW) aufweist von 500 bis 3000 Dalton, insbesondere von 600 bis 2500 Dalton, von 700 bis 2250 Dalton und insbesondere von 800 bis 2000 Dalton,

iii. ein Molekulargewicht (MW) aufweist von 150 bis 5x10⁶ Dalton, insbesondere von 200 bis 1x10⁶ Dalton, von 220 bis 0,75x10⁶ Dalton und insbesondere von 400 bis 0,5x10⁶ Dalton.
Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass die Komponente
i. in dem Mittel vorliegt von 0,018 bis 0,2 Gew.-%, insbesondere von 0,04 bis 0,1 Gew.-%,

ii. in dem Mittel vorliegt von 0,001% bis 25 Gew.-%, insbesondere von 0,005 bis 10 Gew.-%,

iii. in dem Mittel vorliegt von 0,018 bis 0,2 Gew.-%, insbesondere von 0,04 bis 0,1 Gew.-%.
Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass die Komponente in der Wasch- bzw. Reinigungsflotte vorliegt in einer Konzentration von 0,00025 bis 0,6 Gew.- %, insbesondere von 0,0003 bis 0,5 Gew.-%.
Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass das Wasch- oder Reinigungsmittel das hydrolytische Enzym in einer Menge von 2 µg bis 20 mg, vorzugsweise von 5 µg bis 17,5 mg, besonders bevorzugt von 20 µg bis 15 mg und ganz besonders bevorzugt von 50 µg bis 10 mg pro g des Mittels enthält, und/oder
dass das hydrolytische Enzym in dem Wasch- oder Reinigungsmittel mit einer bei Raumtemperatur oder bei Abwesenheit von Wasser für das Enzym undurchlässigen Substanz umhüllt ist.
Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass das Wasch- oder Reinigungsmittel
(a) in fester Form vorliegt, insbesondere als rieselfähiges Pulver mit einem Schüttgewicht von 300 g/l bis 1200 g/l, insbesondere 500 g/l bis 900 g/l, oder

(b) in pastöser oder in flüssiger Form vorliegt, und/oder

(c) als Einkomponentensystem vorliegt, oder

(d) in mehrere Komponenten aufgeteilt ist.
Wasch- oder Reinigungsverfahren umfassend die Verfahrensschritte
(a) Bereitstellen einer Wasch- oder Reinigungslösung umfassend ein Wasch- oder Reinigungsmittel, das
i. ein hydrolytisches Enzym enthält, insbesondere eine Protease, Amylase, Cellulase, Hemicellulase, Mannanase, Tannase, Xylanase, Xanthanase, β-Glucosidase, Carrageenase oder eine Lipase, besonders bevorzugt eine Protease, und

ii. eine Komponente enthält, die im Zusammenwirken mit dem hydrolytischen Enzym bei Anwendung des Mittels eine synergistische Reinigungsleistung bewirkt und die ausgewählt ist aus
1. Aminosäure oder Polyaminosäure oder deren Derivat und/oder

2. Biotensid und/oder

3. mikrobieller Metabolit

4. Präparat eines mikrobiellen Kulturüberstandes, das mindestens 2,5 Gew.-% einer der Substanzen 1) bis 3);

(b) In Kontakt bringen eines Textils oder einer harten Oberfläche mit der Wasch- oder Reinigungslösung gemäß (a).
Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass es in einem Temperaturbereich von 10°C bis 60°C, insbesondere von 10°C bis 50°C, von 10°C bis 40°C, von 10°C bis 30°C, von 15°C bis 30°C von 10°C bis 25°C und von 15°C bis 25°C, durchgeführt wird.
Verwendung einer Komponente, die ausgewählt ist aus
i. Aminosäure oder Polyaminosäure oder deren Derivat und/oder

ii. Biotensid und/oder

iii. mikrobieller Metabolit und/oder

iv. Präparat eines mikrobiellen Kulturüberstandes, das mindestens 2,5 Gew.-% einer der Substanzen i) bis iii) enthält,
zum Erreichen einer synergistischen Reinigungsleistung im Zusammenwirken mit einem hydrolytischen Enzym in einem Wasch- oder Reinigungsmittel bei Anwendung des Wasch-oder Reinigungsmittels, insbesondere im Zusammenwirken mit einer Protease, Amylase, Cellulase, Hemicellulase, Mannanase, Tannase, Xylanase, Xanthanase, β-Glucosidase, Carrageenase oder einer Lipase, besonders bevorzugt im Zusammenwirken mit einer Protease.
Verwendung nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass die Komponente
i. in dem Mittel vorliegt von 0,018 bis 0,2 Gew.-%, insbesondere von 0,04 bis 0,1 Gew.-%,

ii. in dem Mittel vorliegt von 0,001% bis 25 Gew.-%, insbesondere von 0,005 bis 10 Gew.-%,

iii. in dem Mittel vorliegt von 0,018 bis 0,2 Gew.-%, insbesondere von 0,04 bis 0,1 Gew.-%.
Verwendung einer Komponente, die ausgewählt ist aus
i. Aminosäure oder Polyaminosäure oder deren Derivat und/oder

ii. Biotensid und/oder

iii. mikrobieller Metabolit und/oder

iv. Präparat eines mikrobiellen Kulturüberstandes, das mindestens 2,5 Gew.-% einer der Substanzen i) bis iii) enthält,
zur Steigerung der Reinigungsleistung eines hydrolytischen Enzyms in einem Wasch- oder Reinigungsprozess.
Verwendung nach einem der Ansprüche 10 bis 12, dadurch gekennzeichnet, dass die Komponente in einem mikrobiellen Kulturüberstand enthalten ist, insbesondere in einem bakteriellen oder pilzlichen Kulturüberstand, insbesondere in einem Kulturüberstand von Bacillus sp. und insbesondere in einem Kulturüberstand von Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus pumilus, Bacillus aeolius oder Bacillus subtilis natto.
Verwendung nach einem der Ansprüche 9 bis 13, dadurch gekennzeichnet, dass die Komponente
i. ein Molekulargewicht (MW) aufweist von 150 bis 5x10⁶ Dalton, insbesondere von 200 bis 1x10⁶ Dalton, von 220 bis 0,75x10⁶ Dalton und insbesondere von 400 bis 0,5x10⁶ Dalton,

ii. ein Molekulargewicht (MW) aufweist von 500 bis 3000 Dalton, insbesondere von 600 bis 2500 Dalton, von 700 bis 2250 Dalton und insbesondere von 800 bis 2000 Dalton,

iii. ein Molekulargewicht (MW) aufweist von 150 bis 5x10⁶ Dalton, insbesondere von 200 bis 1x10⁶ Dalton, von 220 bis 0,75x10⁶ Dalton und insbesondere von 400 bis 0,5x10⁶ Dalton.