ES2170620B1 - Procedimiento de cuantificacion de acidos nucleicos mediante amplificacion por reaccion en cadena de polimerasa hemi-competitiva. - Google Patents

Abstract

Procedimiento de cuantificación de ácidos nucleicos mediante amplificación por reacción en cadena de polimerasa hemi- competitiva, basado en la co-amplificación de un segmento de ácido nucleico analito y un segmento de ácido nucleico patrón intrínsecamente ajeno a la muestra que contiene el analito, siendo dicha coamplificación realizada mediante una reacción en cadena de polimerasa (PCR) en la que intervienen tres oligonuceótidos cebadores, A, B y C, siendo el analito amplificado por la pareja formada por los cebadores A y C, y el patrón amplificado por la pareja B y C, siendo A un cebador específico y exclusivo del analito, B un cebador específico y exclusivo del patrón, y C un cebador especifico de forma común para el analito y el patrón, de forma que durante el proceso de amplificación se establece una competición por la unión del cebador C entre el analito y el patrón, o sus respectivos productos de amplificación. La cuantificación del analito se consigue añadiendo una cantidad conocida del patrón a una alícuota de la muestra que se sospecha que contiene dicho analito, realizando una PCR con los cebadores A, B y C, cuantificando los productos de amplificación del analito y del patrón, y deduciendo la cantidad de analito presente en la muestra inicial a partir de las cantidades relativas de dichos productos de amplificación.