ES2197242T3 - Uso de glicosidos de calendula para el tratamiento de la psoriasis. - Google Patents
Uso de glicosidos de calendula para el tratamiento de la psoriasis.Info
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Abstract
SE PRESENTA EL USO DE COMPUESTOS GLUCOSIDICOS COMO AGENTES FARMACEUTICOS CONTRA EL PSORIASIS, LOS COMPUESTOS Y LA FORMULACIONES FARMACEUTICAS.
Description
Uso de glicósidos de caléndula para el
tratamiento de la psoriasis.
La presente invención se refiere a compuestos, y
a extractos de plantas que contienen dichos compuestos, de los que
se ha indicado que tienen un efecto inhibitorio de la proliferación
de células. De forma más específica, la invención hace referencia a
compuestos glicosídicos derivados de especies de especies de
Caléndula, a los glicósidos de la planta que tienen un efecto
citostático sobre las células, y a su uso como agentes citostáticos,
enn particular en el tratamiento de la psoriasis.
Los extractos de la planta de la Caléndula en
crudo han sido utilizados en la medicina tradicional durante
siglos. Dichos extractos han sido utilizados, por ejemplo, como o
en medicamentos anti-inflamatorios y similares.
La solicitud de patente internacional WO 91/15218
describe una composición terapéutica contra la psoriasis que
comprende como ingrediente activo un extracto con disolvente de al
menos seis hierbas diferentes. Esta solicitud describe que las
decocciones de caléndula pueden ser utilizadas de forma externa
contra las úlceras gástricas e intestinales así como para el
llenado lento en la cicatrización de heridas y úlceras. En ningún
sitio se ha establecido que el extracto de caléndula se utilice de
hecho por sí mismo como el componente activo en una composición
terapéutica frente a la psoriasis.
Pizza C., y de Tommasi N., Phytochemistry, Vol.
27, número 7, págs. 2205-2208 (1988) describen el
aislamiento y la estructura del glicósido sesquiterpeno de la
Caléndula Arvensis. Se establece que la Caléndula Arvensis
L. (Compositae) es una planta herbácea utilizada en la
medicina tradicional italiana como un remedio
anti-inflamatorio y anti-pirético.
No hay ninguna sugerencia de que los glicósidos sesquiterpénicos
obtenidos tengan actividad citostática o puedan ser utilizados en
el tratamiento de la psoriasis.
Mascolo N. y col., Phytotherapy Research, Vol. 1,
págs. 28-31 (1987) describen que el extracto de
caléndula es conocido por la actividad
anti-inflamatoria. No hay ninguna mención a que el
extracto de caléndula sea utilizado como un agente
anti-psoriático.
Gracza L. Planta Medica 53, página 227 (1987)
describen varios derivados de terpeno que contienen oxígeno de la
Caléndula Officinalis. Los usos de éstos están indicados
para la leucorrea y la actividad tricomonacida. No se hace ninguna
mención al uso de los derivados de terpeno como agentes
anti-psoriáticos.
Fazakas B. y Rácz, G. Farmacia Vol. XIII, número
2, página 91 (1965) también describen que extractos de las flores
de la Caléndula Officinalis son utilizados en la medicina
herbal tradicional para la leucorrea (albus de flúor excesivo) y
mostraron una buena actividad tricomonacida.
Gracza L. y Szász K. Acta Pharm. Hung. 38, págs.
118-125 (1968) describen un análisis químico de los
pétalos de caléndula (Caléndula Officinalis) con el objetivo
de separar e identificar la solución o las soluciones que son
responsables del efecto tricomonacida descrito por Fazakas y Rácz
(cita anterior). Los compuestos líquidos más activos aislados fueron
descritos como alcoholes terpénicos y lactonas terpénicas de
acuerdo con los datos espectroscópicos.
Jakupovic y col. Planta Medica 54 (3) págs.
254-256 (1988) describen la extracción y
aislamiento de cinco glicósidos sesquiterpénicos de la Caléndula
persica. No hay ninguna mención de los usos potenciales o
actuales para las moléculas extraídas e aisladas.
Ahmed A Ahmed y col., Journal of Natural Products
Vol. 56, número 10, págs. 1821-1824 (1993) hacen
referencia a la extracción de productos a partir de la Caléndula
arvensis. Los productos son descritos como cuatro nuevos
glicósidos sesquiterpénicos y tres ya conocidos. No hay ninguna
referencia a posibles usos de los mismos.
La patente EP 364442 B1 describe una composición
terapéutica contra la psoriasis que comprende un extracto de aceite
de al menos tres hierbas seleccionadas entre el grupo de hierbas en
el que se incluye la Caléndula. Sin embargo, se establece que las
extracciones de las hierbas separadas no proporcionan un efecto
curativo frente a la psoriasis cuando se utilizan individualmente.
Además, se ha establecido que decocciones de Caléndula per se son
utilizadas entre otras aplicaciones para el tratamiento de la úlcera
gástrica e intestinal. Las decocciones de Caléndula no están
descritas que sean beneficiosas para el tratamiento de las
enfermedades de la piel que implican proporciones anormales de
proliferación de células de la piel (por ej. hiperproliferación),
en enfermedades tales como la psoriasis.
La patente DE 3836519 C2 alega que una
preparación farmacéutica conteniendo inflorescencias compuestas
recién cortadas de Caléndula officinalis con grasa de
ordeño como base de ungüento es útil en el tratamiento de la
psoriasis. Sin embargo, la composición está descrita como capaz de
producir un aumento de la alergia que conduce a la discontinuación
del tratamiento, y no hay ninguna indicación de, o identificación
de, el compuesto activo de la composición. No hay ninguna
indicación de actividad citostática y por consiguiente no es
aparente qué componente o mezcla de componentes en la preparación
farmacéutica alegada basada en la Caléndula officinalis es/son el
componente(s) activo. Además, no aparece que haya ninguna
evidencia actual que demuestre que la composición fuera utilizada
en el tratamiento de la psoriasis.
Existe una necesidad para el desarrollo de nuevos
fármacos citostáticos que sea efectiva en combatir el inicio,
mantenimiento y/o el desarrollo de la enfermedad que suponga la
hiperproliferación de las células de la dermis, en particular para
el tratamiento de la psoriasis.
Constituye un objeto de la presente invención el
proporcionar el uso de compuestos activos o de extractos de plantas
purificadas que comprende al menos un compuesto activo en la
preparación de un medicamento para el tratamiento de la enfermedad
que supone la hiperproliferación de células de la dermis, en
particular en el tratamiento de la psoriasis.
Un segundo objeto de la invención es el
proporcionar compuestos activos aislados y/o purificados de
Caléndula para uso en el tratamiento de la enfermedad que supone la
hiperproliferación de células de la dermis, en particular en el
tratamiento de la psoriasis.
Un tercer objeto de la invención es el
proporcionar compuestos aislados para uso en el tratamiento de la
enfermedad que supone la hiperproliferación de células de la
dermis, en particular en el tratamiento de la psoriasis.
Estos y otros objetos de la invención se harán
aparentes a partir de la siguiente descripción y ejemplos.
De acuerdo con un aspecto de la presente
invención se proporciona el uso de un compuesto de fórmula general
(I):
en
donde
R^{1} y R^{2} están seleccionados de forma
independiente entre H, OH,
y ésteres relacionados del
mismo;
R^{3} está seleccionado entre OH,
y ésteres relacionados del
mismo;
R^{4} está seleccionado entre sistemas de
anillo alifático monocíclico o policíclico saturado o insaturado
de C_{6}-C_{12} opcionalmente sustituidos por
alquilo de C_{1}-C_{6}, H, OH, =CH_{2} o
alquil carboniloxi de C_{1}-C_{4} o R^{1}
representa un grupo alcaleno de cadena lineal o ramificada de
C_{1}-C_{6} sustituido con un sistema de anillo
de dicho tipo;
R^{5} está seleccionado entre alquilo de
C_{1}-C_{4},-CHO,-COOH y -CH_{2} OH y ésteres
y éteres relacionados derivados de los mismos;
R^{6} está seleccionado entre -OH,
4
en la preparación de un medicamento para el
tratamiento de una enfermedad que implique la hiperproliferación de
células de la
dermis.
Para los objetivos de la presente invención
``ésteres y éteres relacionados'' hace referencia a todos los
ésteres definidos de grupos R mencionados en el presente documento y
en general a todos los ácidos esterificantes con carboxi alquilo
de C_{1}-C_{20} de cadena lineal o ramificada.
Ejemplos adecuados incluyen ácidos esterificantes que comprenden
grupos alquil metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo,
isobutilo, sec-butilo, y todos los isómeros de
pentanilo, pentenilo, hexanilo y hexenilo. También se incluyen en el
término ``ésteres relacionados'' los ácidos aromáticos tales como
el ácido benzoico y el ácido cinámico. Los alquil éteres de
C_{1}-C_{20} que comprenden grupos alquilo de
cadena lineal o ramificada tal como se han definido por ``ésteres
relacionados'' anteriormente también se encuentran comprendidos en
el presente documento.
Así pues se proporciona, en un enunciado, el uso
de un compuesto de fórmula general (I) en donde
R^{1} y R^{2} están seleccionados de forma
independiente entre H, -OH
R^{3} está seleccionado entre -OH,
\newpage
R^{4} está seleccionado entre el grupo
R^{5} está seleccionado entre el grupo
CH_{3},-CHO,-COOH y -CH_{2} OH; y
R^{6} está seleccionado entre OH,
9
En un enunciado adicional se proporciona el uso
de un compuesto extraible de Especies de Caléndula de fórmula
general (I) en donde
R^{1} y R^{2} están seleccionados de forma
independiente entre H y OH (\betaOH o \alphaOH);
R^{3} está seleccionado entre OH,
11
R^{4} está seleccionado entre
R^{5} es CH_{3}; y
R^{6} está seleccionado entre OH,
Más preferiblemente, se proporciona el uso de un
compuesto de fórmula (I) extraible de una Especie de Caléndula en
donde
R^{1} y R^{2} están seleccionados de forma
independiente entre H y OH (\betaOH o \alphaOH);
R^{3} está seleccionado entre OH y
(E)-3-metilpent-2-enoato,
es decir
R^{4} está seleccionado entre
R^{5} es CH_{3}; y
R^{6} es OH.
El experto en la materia al que se dirige la
invención también apreciará que los grupos R^{1}, R^{2},
R^{6} y R^{3} pueden estar localizados tanto en la posición
axial como en la ecuatorial.
Naturalmente, el experto en la materia al que se
dirige la invención apreciará que los isómeros funcionales
fisiológicamente de fórmula (I) se encuentran ambos en especies de
Caléndula y los isómeros derivados sintéticamente de los mismos
incluyendo isómeros conformacionales y constitucionales así como
las formas D y L de fórmula (I) se encuentran incluidos en la
presente invención. Ejemplos de isómeros conformacionales de la
invención están comprendidos en las Fórmulas (1a) y (1b) que se
muestran a continuación:
en donde R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4},
R^{5} y R^{6} son tal como se han definido en la Fórmula (1).
Naturalmente, el experto en la materia al que se dirige la invención
apreciará que otras variantes isoméricas constitucionales que hacen
referencia a las formas ``silla'' (Fórmula (Ia)) y ``bote''
(Fórmula (Ib)) poseyendo funcionalidad fisiológica son permisibles
dentro del ámbito de la invención. Los compuestos de fórmula (I)
pueden ser aislados de especies de Caléndula utilizando tecnología
de extracción con disolvente orgánico. De forma general, los
compuestos de fórmula (I) pueden ser extraidos de cualquier tejido
de plantas tal como hojas, tallos, partes de las flores, raíces,
retoños y
similares.
En una realización adicional de la invención se
proporcionan nuevos compuestos de la invención de acuerdo con la
Fórmula general (I) tal como se ha presentado anteriormente en
donde
\newpage
R^{1} y R^{2} están seleccionados de forma
independiente entre -OH, H,
R^{3} está seleccionado entre
(E)-3-metilpent-2-enoato,
y
R^{4} está seleccionado entre sistemas de
anillo alifático monocíclico o policíclico saturado o insaturado de
C_{6}-C_{12} opcionalmente sustituidos por
alquilo de C_{1}-C_{6}, H, -OH, =CH_{2} o
alquil carboxiloxi de C_{1}-C_{4};
R^{5} está seleccionado entre alquilo de
C_{1}-C_{4},-CHO,-COOH y - CH_{2} OH;
R^{6} está seleccionado entre
e
isómeros fisiológicamente funcionales de los
mismos.
En un enunciado se proporcionan nuevos compuestos
de acuerdo con la Fórmula (I) en donde
R^{1} y R^{2} están seleccionados de forma
independiente entre -OH, H
R^{3} está seleccionado entre
(E)-3-metilpent-2-enoato
y
R^{4} está seleccionado entre
R^{5} está seleccionado
entre-CH_{3},-CHO,-CH_{2} OH y -COOH;
R^{6} está seleccionado entre
e isómeros fisiológicamente funcionales de los
mismos.
En un enunciado adicional se proporcionan
compuestos de fórmula (I) en donde
R^{1} y R^{2} están seleccionados de forma
independiente entre H y -OH;
R^{3} es
(E)-3-metilpent-2-enoato;
R^{4} está seleccionado entre
R^{5} es CH_{3}; y
R^{6} es OH;
e isómeros fisiológicamente funcionales de los
mismos.
El experto en la materia al que se dirige la
invención también apreciará que los grupos R^{1}, R^{2},
R^{6} y R^{3} pueden estar localizados tanto en la posición
axial como en la ecuatorial.
``Isómeros funcionales fisiológicamente'' para
los objetivos de la presente invención significan aquellos isómeros
que son capaces de disminuir de forma sustancial o frenar la
hiperproliferación de células de la dermis. De este modo, debe
indicarse que tales isómeros tienen un efecto sustancialmente
citostático sobre las células de la dermis y por tanto están
indicados como útiles en el tratamiento de enfermedades de la piel
tal como la psoriasis.
Ejemplos de nuevos compuestos de acuerdo con la
invención incluyen:
(i) (rel)-1a\alpha, 4a\xi,
7a\beta,
7b\alpha-Decahidro-1,1,4\xi,
7\alpha-tetrametil-1H-cicloprop[e]azulen-4\xi
-O-(2-E-{3-metilpent-2-
enoil}-\beta-quinovopiranósido
(Van-10-3).
(ii) (rel)-5\xi, 7\xi,
14\xi-eudesm-4(15)-en-11
-O-(2-E}-{3-metil}pent-2-enoil)-\beta-fucopiranósido
(Van-10-2).
(iii) (rel)-1a\alpha,
4a\xi, 7a\beta,
b\alpha-Decahidro-1,1,4\xi,7\alpha-tetrametil-1H-cicloprop[e]azulen-
4\xi
-O-(2-E}-{3-metil}pent-2-
enoil)- \beta-fucopiranósido
(Van-10-4).
Los nuevos compuestos preferidos de la invención
sobre la base de su actividad biológica son los anteriores (ii) y
(iii), y derivados funcionales fisiológicamente y análogos de los
mismos. El compuesto más preferido en base a su actividad biológica
es el anterior compuesto (iii).
Se incluye como una realización de la invención
el uso de compuestos de fórmula (I) en una composición para el
tratamiento de la enfermedad que implica la hiperproliferación de
células de la dermis, en particular para el tratamiento de la
psoriasis. Naturalmente, el experto al que se dirige la invención
apreciará que dicho uso puede incluir el uso de compuestos
conocidos aislados de las especies de Caléndula tales como,
(iv) (rel)-1a\alpha,
4a\xi, 7a\beta,
7b\alpha-Decahidro-1,1,4\xi,
7\alpha-tetrametil-1H-cicloprop[e]azulen-4\xi
-O-\beta-fucopiranósido (Van
15A).
Un compuesto preferido utilizado en la
preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno
de la piel tal como la psoriasis, es el anterior compuesto
(iii).
El experto en la materia al que se dirige la
invención apreciará que análogos de los anteriores compuestos (i) a
(iv) pueden ser sintetizados in situ. Por ejemplo cuando los grupos
R^{1} y R^{6} son ambos OH, o R^{2} y R^{6} son ambos -OH,
éstos pueden ser esterificados al angelato, tiglato u otro éster
por reacción del cloruro de ácido apropiado o anhídrido de ácido
con un compuesto de partida apropiado, por ejemplo el compuesto
(iii), en presencia de una base adecuada tal como piridina. Ambas
funciones alcohol serán esterificadas por esta técnica. Los
derivados con diferentes grupos éster sobre R^{1} y R^{6} por
ej. tiglato y angelato también pueden ser preparados por reacción
de los compuestos adecuados tales como el compuesto (iii) con una
mezcla de dos cloruros de ácido o dos anhídridos. Esto producirá los
cuatro posibles isómeros que a continuación pueden ser separados
utilizando técnicas estándar tales como cromatografía sobre gel de
sílice o similares.
La ramificación del crotonato (R^{3}) en los
compuestos (i) a (iii) puede ser sustituida por otros ésteres de
ácido carboxílico utilizando el siguiente procedimiento general.
Las funciones hidroxilo R^{1} y R^{6} pueden ser protegidas por
la formación del acetónido por reacción del compuesto con acetona
en presencia de ácido tolueno sulfónico o por técnicas similares
conocidas en el estado de la técnica como las descritas en
Protective Groups in Organic Synthesis, Second Edition, T W Greene,
P G M Wuts (ISBN 0 471 62301 6) (por ej. Capítulo 2 págs.
123-127) que se incorpora por referencia al
presente documento, produciendo por ejemplo, un compuesto tal como
el compuesto A que se muestra a continuación o compuestos
similares.
La ramificación del crotonato de etilo puede ser
eliminada por hidrólisis ácida o básica de por ejemplo, el
compuesto (iii), para dar lugar al producto con R^{3} = OH. A
continuación el compuesto resultante puede hacerse reaccionar con un
cloruro de ácido o anhídrido de ácido apropiado en presencia de una
base tal como piridina para producir un éster tal como tiglato o
angelato sobre R^{3}. De forma alternativa, dicho éster puede ser
formado por transesterificación del compuesto A (anterior) con un
exceso de ácido orgánico tal como ácidos tíglico o angélico en
presencia de un catalizador ácido o básico adecuado. Finalmente, el
grupo acetónido protector, puede ser hidrolizado por reactivos de
hidrólisis adecuados tal como yodo o metanol tal como se ha
descrito en Greene T.W. (citado anteriormente).
Como una realización preferida de la invención se
proporciona el uso de al menos un compuesto aislado de especies de
Caléndula, tal como la Caléndula officinalis, para la fabricación
de un medicamento para el tratamiento de la psoriasis. De forma
típica, el compuesto es un glicósido de planta, tal como un
glicósido sesquiterpénico. También se incluye en el ámbito de la
invención una composición terapéutica contra la psoriasis
caracterizada porque ésta contienen al menos un glicósido de planta
aislado de especies de Caléndula, tal como la Caléndula
officinalis. De forma general, la composición terapéutica contiene
al menos un glicósido de planta purificado, tal como un glicósido
sesquiterpénico de fórmula (I). Naturalmente, el experto en la
materia al que se dirige la invención apreciará que dichas
composiciones puedan comprender dos o más glicósidos de plantas a
cualquier concentración que sea capaz de producir un aumento hasta
un efecto citostático terapéutico. De este modo, las composiciones
terapéuticas pueden comprender extractos de plantas de Caléndula
sustancialmente faltas de compuestos contaminantes indeseables. Los
extractos de plantas pueden haber sufrido, por ejemplo, un número de
etapas de extracción con disolvente sustancialmente para separar
los componentes indeseables de los componentes deseables tales como
los que se incluyen en la Fórmula (I). Naturalmente, los extractos
de plantas que han sufrido dichas etapas de extracción con
disolvente pueden contener más de un glicósido de planta y pueden
contener varios glicósidos de planta. Dichos extractos de planta
pueden ser sometidos a continuación a procedimientos adicionales de
extracción con disolvente para aislar los compuestos glicósidos
individuales de plantas activos de fórmula (I).
A continuación se encuentra una descripción de un
método general de obtención de extractos purificados de especies de
Caléndula que contienen componentes capaces de producir un efecto
citostático en células de la dermis, la purificación de dichos
extractos, y el aislamiento de los componentes activos de los
extractos y/o la subsiguiente purificación de los mismos.
Se pulverizan las flores de una especie de
Caléndula en un triturados y el polvo resultante es extraído en un
soxhlet con éter de petróleo hasta el agotamiento. A continuación
se concentró el extracto, por ejemplo, bajo presión reducida
utilizando un evaporador, tal como un evaporador rotatorio para
proporcionar un residuo del extracto, el extracto en forma de
crudo. A continuación el extracto en forma de crudo puede ser
fraccionado vía, por ejemplo, cromatografía líquida a vacío (VLC)
utilizando disolventes adecuados y sistemas de disolventes de
polaridad incrementada. Los disolventes adecuados incluyen
disolventes tales como disolventes orgánicos no polares y mezclas
de los mismos. Ejemplos de disolventes que pueden ser utilizados en
un método de extracción adecuado para los objetivos de la presente
invención incluyen los siguientes (relación de volúmenes):
Petrol-EtOAc
(EtOAc 0-10%)
Petrol-EtOAc
(EtOAc 12-18%)
Petrol EtOAc
(EtOAc 20-24%)
Petrol-EtOAc
(EtOAc 24-30%)
Petrol-EtOAc
(EtOAc 35-40%)
Petrol-EtOAc
(EtOAc 45%)
Petrol-EtOAc
(EtOAc 50-55%)
Petrol-EtOAc
(EtOAc 60%)
Petrol-EtOAc
(EtOAc 65-75%)
Petrol-EtOAc
(EtOAc 80-85%)
Petrol-EtOAc
(EtOAc 90-95%)
Petrol-EtOAc
(EtOAc 95%)
EtOAc-MeOH
(MeOH 0-5%)
EtOAc-MeOH
(MeOH 10-100%)
hexano, mezclas de hexano: cloroformo en
relaciones de volúmenes tales como:
\nobreak\vskip.5\baselineskip\centering\begin{tabular}{|c|c|}\hline
Hexano \+ Cloroformo \\\hline 100 \+ 0 \\\hline 95 \+ 5
\\\hline 9 \+ 1 \\\hline 8 \+ 2 \\\hline 6 \+ 4 \\\hline 4
\+ 6 \\\hline 0 \+ 100
\\\hline\end{tabular}\par\vskip.5\baselineskip
cloroformo, y mezclas de cloroformo: metanol (por
ej. 5:1; 1:1) y similares. De este modo, el extracto del crudo
puede sufrir fraccionamiento varias veces utilizando diferentes
mezclas de disolventes orgánicos en relaciones preseleccionadas de,
por ejemplo, polaridad incrementada.
Bajo VLC, el gel de sílice (Merck 7749) colocado
de forma típica en un receptáculo, por ejemplo un embudo
sinterizado bajo vacío aplicado, para dar una columna. El extracto
en forma de crudo puede estar disponible para la introducción en la
columna de VLC mediante, por ejemplo, absorción sobre sílice (por
ejemplo, 1:1 peso/peso) y situado en la parte superior de la
columna tal como se ha descrito anteriormente, y eluido al menos una
vez con un disolvente o un sistema de disolventes de polaridad
incrementada, tal como los mencionados en el presente documento en
las relaciones pre-especificadas. Los eluyentes
obtenidos de la columna VLC son recogidos y pueden ser sometidos a
etapas de fraccionamiento adicional mediante la cromatografía de
columna u otro medio cromatográfico adecuado. Después del
fraccionamiento del extracto en forma de crudo, los eluidos
recogidos pueden ser sometidos a cromatografía de capa fina
preparativa (CCF) para el análisis de los constituyentes activos
contenidos en el mismo. Por ejemplo, en un método se somete una
fracción de eluyente, designada como
Van-5-10, obtenida de una
cromatografía de columna utilizando una mezcla de cloroformo:
metanol en una relación de 95:5, a análisis por CCF utilizando un
sistema de disolvente inicial de una mezcla de hexano: cloroformo:
acetato de etilo en una relación de volúmenes de 3:6:6, obteniéndose
cinco fracciones, denominadas
Van-9-1,
Van-9-2,
Van-9-3,
Van-9-4 y
Van-9-5. Dichas fracciones pueden
ser contempladas como las que comprenden las mezcla purificadas de
diferentes moléculas glicosídicas incluidas por la Fórmula (I) y
por consiguiente son capaces de ser consideradas como mezclas
sustancialmente libres de componentes contaminantes tales como
proteínas de las plantas, hormonas de las plantas y similares.
Dichas fracciones de eluyente poseen una actividad citostática a
partir de una realización de la presente invención.
En una etapa adicional, las fracciones
Van-9-1 a
Van-9-5, tal como han sido
mencionadas anteriormente en el presente documento, pueden ser
sometidas a un análisis por cromatografía de capa fina preparativa
adicional (CCF prep.) sobre gel de sílice utilizando preparaciones
de disolventes orgánicos adicionales. Por ejemplo, la fracción de
eluyente Van-9-2 puede ser sometida
a CCF prep. utilizando como disolvente una preparación de hexano:
cloroformo: acetato de etilo en una relación de 3:6:4, dando
subfracciones de Van-9-2, designadas
como Van-9-2B y
Van-9-2C. Las
sub-fracciones resultantes de la etapa de CCF prep.
pueden ser sometidas a etapas cromatográficas adicionales tales
como cromatografía líquida de alta presión (HPLC). Por ejemplo, las
fracciones aisladas por CCF de
Van-9-2-B y
Van-9-2-C están
sometidas a HPLC utilizando una columna (analítica) de
octadecil-silanol (ODS) con un disolvente de
acetonitrilo al 75% en agua conteniendo el 0,1% de ácido trifluoro
acético (TFA). Las fracciones individuales obtenidas por técnicas
de HPLC pueden ser valoradas a continuación para ambos componentes
activos utilizando técnicas de RMN y por análisis de dichas
fracciones para determinar la actividad citostática in
vitro.
Para lotes mayores de producto de partida, tales
como pétalos secos de Caléndula Officinalis, puede ser utilizado el
siguiente método general de extracción.
El material de las plantas seco, por ejemplo,
pétalos de Caléndula Officinalis puede ser molido a un polvo grueso
y extraído en un disolvente orgánico. De forma general, el método
de extracción puede ser cualquier método de extracción adecuado
conocido en el estado de la técnica, tal como extracción con
soxhlet, extracción por lotes, y extracción en continuo. De este
modo, como un aspecto adicional de la invención se proporcionan
compuestos anti- psoriáticos de fórmula (I) obtenibles a partir de
especies de Caléndula de forma particular por medio de un soxhlet,
procedimiento de extracción por lotes o en continuo. Dichos
procedimientos de extracción son conocidos en el estado de la
técnica. La especie de Caléndula preferible es la Caléndula
officinalis y el método de extracción preferido es un método de
extracción en continuo. Los disolventes orgánicos adecuados para
uso en un método de extracción en continuo incluyen disolventes
orgánicos polares y no polares tales como metanol, etanol,
diclorometano, tolueno, hexano, acetato de etilo, de tipo
isopropilo. Preferiblemente, el disolvente es un disolvente
orgánico no polar del tipo heptano. El extracto resultante es
concentrado a vacío hasta que se obtiene una relación apropiada, en
porcentaje (% peso/v), entre el peso del extracto / volumen total
de la solución. Una relación adecuada en % peso/v de la solución se
sitúa en el intervalo comprendido entre el 10% peso/v y el 60%
peso/v, más preferiblemente entre el 15% peso/v y el 30% peso/v y
más preferiblemente alrededor del 20% peso/v. El concentrado
resultante es extraído de forma adicional en una solución
disolvente polar/agua a una relación adecuada de partes en peso:
partes es peso tal como entre 10:0 y 7:3. Preferiblemente la
relación está comprendida entre 10:0 y 8:2. Más preferiblemente la
relación es 9:1. Un disolvente orgánico polar adecuado puede estar
seleccionado entre acetonitrilo, metanol, etanol, acetato de etilo y
similares. Un disolvente orgánico polar preferido es el
acetonitrilo. Se separó la fracción de heptano y a continuación se
combinaron las fracciones de disolvente orgánico conteniendo VAN
(tal como las fracciones de acetonitrilo) y se eliminó el
disolvente orgánico polar a vacío. A continuación el sólido
resultante puede ser redisuelto en un disolvente orgánico adecuado
polar o no polar tal como acetato de etilo, metanol, acetonitrilo,
dietil éter, diclorometano, tolueno y similares, y a continuación
lavado sucesivamente con una base tal como bicarbonato sódico en una
relación 10: 30% peso/v, agua, ácido inorgánico diluido tal como
ácido clorhídrico a una concentración comprendida entre 0,05 y 0,1
M o ácido orgánico diluido tal como ácido cítrico a una
concentración comprendida entre 0,2 M y 1,0 M, y finalmente agua. A
continuación la solución de disolvente orgánico puede ser evaporada
a vacío.
La preparación de crudo resultante puede ser
adicionalmente purificada para obtener un compuesto
VAN-10 apropiado, tal como el
VAN-10- 4. La preparación del crudo puede ser
redisuelta en un volumen adecuado de disolvente orgánico tal como un
disolvente orgánico polar o un volumen adecuado de una mezcla de al
menos un disolvente orgánico polar: al menos un disolvente orgánico
no polar. Preferiblemente, el disolvente orgánico consiste en un
disolvente orgánico polar mezclado con un disolvente orgánico no
polar. En los casos en que se utilice una mezcla de disolventes
orgánicos, éstos deben ser miscibles entre sí. El porcentaje en %
(v/v) del disolvente orgánico polar: disolvente orgánico no polar
puede oscilar entre 80: 20 y 20: 80% (v/v) preferiblemente entre
30: 70 y 70: 30% (v/v). Por ejemplo, puede redisolverse una
cantidad del extracto en forma de crudo en un volumen adecuado de
disolvente orgánico polar:disolvente orgánico no polar en una
relación porcentual del 50% de disolvente orgánico polar: 50% de
disolvente orgánico no polar. Una mezcla de disolventes preferida es
50% de acetato de etilo: 50 % hexano. Puede seleccionarse un
disolvente adecuado adicional entre los disolventes polares y los
no polares descritos anteriormente. El material disuelto puede ser
cargado en un sistema de cromatografía flash, tal como una columna
flash 75 y eluido a una velocidad de flujo adecuada utilizando una
mezcla de disolventes adecuados como fase móvil, por ejemplo, 50%
acetato de etilo: 50% hexano. Una velocidad de flujo adecuada para
la columna de cromatografía flash puede ser entre
50-500 mls/min dependiendo del tamaño de la columna
utilizada, preferiblemente entre 100-250 mls/min,
más preferiblemente aproximadamente 250 mls/min utilizando, por
ejemplo, una mezcla de 50% acetato de etilo: 50% hexano como fase
móvil. La relación entre el disolvente polar: disolvente no polar
para la fase móvil puede oscilar entre los intervalos utilizados
para redisolver el extracto en forma de crudo señalado
anteriormente. La relación actual dependerá de las mezclas de
disolventes utilizadas. Utilizando el sistema flash descrito puede
ser aislada la mezcla VAN en un número de fracciones. Estas
fracciones pueden ser combinadas a continuación y evaporadas a
sequedad. Después de la evaporación, las fracciones combinadas (es
decir, el material semi crudo) pueden ser redisueltas en un
disolvente orgánico polar adecuado, tal como los disolventes
polares mencionados anteriormente y muestras de las fracciones
disueltas purificadas, por ejemplo, por HPLC utilizando una columna
de fase reversa tal como una columna Spherisorb o similar. Puede
redisolverse una solución de reserva del material combinado
resultante (semi-crudo) obtenido después de la
cromatografía flash pero antes de la HPLC en un disolvente similar
al utilizado como fase móvil y dividido en alícuotas. A continuación
las alícuotas pueden ser procesadas por técnicas de HPLC estándar
conocidas en el estado de la técnica, tales como separación
isocrática o por elución por gradiente. Naturalmente, el experto en
la materia apreciará que la concentración máxima de semi crudo
redisuelta en la fase móvil puede ser dependiente del disolvente
utilizado. Por ejemplo, hasta 25 mg/ml de extracto combinado (semi-
crudo) puede ser redisuelto en acetonitrilo que a continuación puede
ser dividido en volúmenes adecuados para el funcionamiento de la
columna de HPLC. Cada muestra se eluye durante un periodo de tiempo
que depende de la fase móvil utilizada y los compuestos
VAN-10 pueden ser eluidos a intervalos de tiempo
apropiados. Los intervalos de tiempo adecuados pueden ser
encontrados haciendo eluciones preliminares por HPLC en una columna
analítica utilizando diferentes sistemas de disolventes como fase
móvil y seleccionando un sistema de disolvente que de lugar a una
velocidad de elución óptima y a una buena resolución de la muestra.
En la fase móvil el % de disolvente orgánico polar : % de
disolvente orgánico no polar puede oscilar en el intervalo
comprendido entre 90: 10 y 10:90, preferiblemente entre
70-80: 30:20, más preferiblemente entre
75-80: 25-20. De este modo, para la
purificación por HPLC, puede utilizarse una fase móvil que consiste
en acetonitrilo: agua pudiendo ser 75% de acetonitrilo: 25% de agua
y la velocidad de flujo puede establecerse de acuerdo con el tamaño
de la columna utilizada, tal como 5 ml/por min. adecuada para
disolventes orgánicos polares incluidos los anteriormente
mencionados. Disolvente orgánicos preferidos son el acetonitrilo o
el metanol.
Se hará aparente para los expertos en la materia
que la selección del disolvente, o mezcla de disolventes para cada
etapa en el aislamiento de los principios activos puede ser guiada
por resultados de los análisis de bioensayo de fracciones separadas,
y finalmente, la identificación de los componentes activos
encontrado en las fracciones separadas, en las diferentes etapas
del procedimiento de extracción.
Se ha encontrado que los compuestos de la
presente invención poseen actividad citostática en células de
fibroblastos embriónicas de rata in vitro. De este modo, se
ha demostrado la actividad citostática de los compuestos de fórmula
general (I) en un número de ensayos para determinar la citostasis
in vitro. Además, se ha demostrado in vivo la
actividad citostática de compuestos de compuestos de fórmula
general (I).
La cantidad del compuesto de fórmula (I)
requerido para ser efectivo como un agente citostático variará,
naturalmente, y en última instancia será discrecional del médico o
veterinario que lo aplique. Los factores a considerar incluyen la
condición a tratar, la ruta de administración, y la naturaleza de
la formulación, el peso de cuerpo del mamífero, el área de la
superficie, la edad y la condición general y el compuesto en
particular a administrar. Una dosis efectiva adecuada de los
compuestos citostáticos de la invención estará situada de forma
general en el intervalo comprendido entre aproximadamente 0,01 y
aproximadamente 120 mg/kg de peso del cuerpo, por ejemplo entre 0,1
y aproximadamente 120 mg/kg de peso del cuerpo, preferiblemente en
el intervalo de aproximadamente 0,1 a 50 mg/kg, por ejemplo entre
0,3 y 50 mg/kg. La dosis diaria total puede ser administrada en una
dosis única, múltiples dosis, por ej. aplicaciones de dos a seis
veces por día. Por ejemplo, para un mamífero de 75 kg (por ej. un
humano) el intervalo de dosis estará entre 8 y 9000 mg por día, y
una dosis típica podrá ser de aproximadamente 50 mg por día. Si se
indican dosis múltiples separadas el tratamiento puede ser, de forma
típica, 15 mg de un compuesto de fórmula (I) administrado 4 veces
al día.
Aunque es posible que el compuesto activo se
administre sólo, es preferible presentar el compuesto activo en una
formulación farmacéutica. Las formulaciones de la presente
invención, para uso médico, comprenden un compuesto de fórmula (I)
junto con uno o más soportes farmacéuticamente aceptables y
opcionalmente otros ingredientes terapéuticos. El soporte(s)
debe ser farmacéuticamente aceptable en el sentido de ser compatible
con los demás ingredientes de la formulación y sustancialmente no
perjudicial para el propio recipiente.
Por consiguiente, la presente invención,
proporciona además una formulación farmacéutica que comprende un
compuesto de fórmula (I) o un derivado fisiológicamente funcional
del mismo junto con un soporte farmacéuticamente aceptable del
mismo.
Naturalmente, el experto en la materia al que se
dirige la invención apreciará que cualquier formulación
farmacéutica que comprende un compuesto activo de fórmula (I) puede
incluir al menos un compuesto activo aislado y/o purificado de un
extracto derivado de una especie de Caléndula. Preferiblemente, la
especie de Caléndula está seleccionada entre al menos una de las
especies Caléndula officinalis, Caléndula arvensis, y Caléndula
persica. Más preferiblemente el compuesto activo aislado de la
especie de Caléndula está aislado y/o purificado de la Caléndula
officinalis. De este modo una formulación farmacéutica puede
contener un compuesto activo aislado y/o purificado de dos o más
especies de Caléndula, cuyo componente activo puede tener hasta dos
o más compuestos activos incluidos en la anterior Fórmula (I).
En una realización adicional, una formulación
farmacéutica puede comprender una mezcla de al menos un compuesto
activo aislado y/o purificado de un extracto derivado de la
Caléndula officinalis, y al menos un compuesto activo aislado y/o
purificado de la Caléndula arvensis o de la Caléndula persica de
fórmula (I).
También se proporciona un método para la
preparación de una formulación farmacéutica que comprende poner en
asociación un compuesto de fórmula (I) o un derivado
fisiológicamente funcional del mismo, y un soporte farmacéuticamente
aceptable del mismo.
Las formulaciones de acuerdo con la presente
invención incluyen aquellos soportes que son adecuados para la
administración oral o tópica. Las formulaciones preferidas son
aquellas adecuadas para la administración tópica, tales como para la
piel. Para infecciones de tejidos externos, por ej. piel, las
formulaciones son aplicadas de forma preferible como un ungüento
tópico o una crema que contiene el ingrediente activo en una
cantidad de, por ejemplo, entre el 0,075 y el 20% peso/peso,
preferiblemente entre el 0,2 y el 15% peso/peso y más
preferiblemente entre el 0,5 y el 10% peso/peso. Cuando se formula
como un ungüento, los ingredientes activos pueden utilizarse tanto
con una base parafínica como con un ungüento miscible en agua. De
forma alternativa, los ingredientes activos pueden ser formulados en
una crema con una base de la crema de aceite en agua.
En el caso de que se desee, la fase acuosa de la
crema puede incluir, por ejemplo, al menos el 30% peso/peso de un
alcohol polihídrico, es decir un alcohol que tenga dos o más grupos
hidroxilo tal como el propilen glicol,
butan-1,3-diol, manitol, sorbitol,
gliercol y polietilen glicol y mezclas de los mismos. Las
formulaciones tópicas pueden incluir de forma deseable un compuesto
que mejora la absorción y la penetración del ingrediente activo a
través de la piel u otras áreas afectadas. Ejemplos de dichos
incrementadores de la penetración dérmica incluyen dimetilsulfóxido
y análogos relacionados.
La fase de aceite de las emulsiones de esta
invención puede estar constituida por ingredientes conocidos en un
modo conocido. Mientras que la fase puede comprender únicamente un
emulsionante (también conocido como emulgente), es deseable que
comprenda una mezcla de al menos un emulsionante con una grasa o
aceite o con tanto una grasa como un aceite. Preferiblemente, se
incluye un emulsionante hidrofílico junto con un emulsionante
lipofílico que actúa como un estabilizante. También se prefiere
incluir tanto un aceite como una grasa. Juntos, el
emulsionante(s) con o sin estabilizante(s) dan lugar a
la llamada cera emulsionante, y la cera junto con el aceite y/o la
grasa da lugar a la llamada base de ungüento emulsionante que forma
la fase dispersada de aceite de las formulaciones de crema.
Emulgentes y estabilizantes de emulsión adecuados
para el uso en la formulación de la presente invención incluyen el
Tween 60, Span 80, cetostearil alcohol, miristil alcohol,
mono-estearato de glicerol y lauril sulfato
sódico.
La selección de aceites y grasas adecuadas para
la formulación está basada en conseguir las propiedades cosméticas
deseadas, ya que la solubilidad del compuesto activo en la mayoría
de los aceites que posiblemente vayan a ser utilizados en las
formulaciones de la emulsión farmacéutica es muy baja. De este modo
la crema debe ser preferiblemente un producto no graso, que no
manche y lavable con una consistencia adecuada para evitar pérdidas
de los tubos u otros contenedores. Pueden utilizarse ésteres de
alquilo de cadena lineal o ramificada mono o dibásicos tales como
el di-isoadipato, isocetil estearato, diéster del
propilen glicol de aceites grasos de coco, miristato de isopropilo,
oleato de decilo, palmitato de isopropilo, estearato de butilo,
palmitato de 2-etilhexilo o una mezcla de ésteres de
cadena ramificada conocida como Crodamol CAP, siendo los ésteres
preferidos los tres últimos. Estos pueden ser utilizados solos o en
combinación dependiendo de las propiedades requeridas. De forma
alternativa, pueden utilizarse los lípidos de alto punto de
ebullición tales como la parafina blanda blanca y/o la parafina
líquida u otros aceites minerales.
Las formulaciones pueden ser presentadas de forma
conveniente en una forma de dosis unitaria y pueden ser preparadas
por cualquiera de los métodos bien conocidos en el estado de la
técnica de la farmacia. Todos los métodos incluyen la etapa de poner
el compuesto(s) activo en asociación con un soporte que
constituye uno o más de los ingredientes accesorios. En general,
las formulaciones son preparadas poniendo el compuesto(s)
activo de forma uniforme e íntima en asociación con un soporte
líquido o un soporte sólido finamente dividido o ambos y a
continuación, en el caso en que sea necesario, dar forma al producto
en las formulaciones deseadas.
Las formulaciones de la presente invención
adecuadas para la administración oral pueden ser presentadas como
unidades discretas tales como cápsulas, obleas, comprimidos,
grageas, que comprenden el ingrediente activo en una base
aromatizada, normalmente sacarosa y acacia o tragacanto; pastillas
que comprenden el ingrediente activo en una base inerte tal como
gelatina y glicerina, o sacarosa y acacia; y enjuagues que
comprenden el ingrediente activo en un soporte líquido adecuado.
Cada formulación contiene de forma general una cantidad
predeterminada del compuesto activo; como un polvo o gránulos; o una
solución o suspensión en un líquido acuoso o no acuoso tal como un
jarabe, un elixir, una emulsión o brebaje y similares.
Un comprimido puede estar preparado por
compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes
accesorios. Las tabletas comprimidas pueden ser preparadas por la
compresión en una máquina adecuada del compuesto activo en una forma
de libre fluido tal como un polvo o gránulos, mezclados de forma
opcional con un aglutinante (por ej. povidona, gelatina,
hidroxipropilmetil celulosa), un lubricante, un diluyente inerte,
preservativo, disintegrante (por ej. glicolato de almidón de sodio,
povidona reticulada, carboximetil celulosa de sodio reticulada),
un agente de superficie activa o agente dispersante. Los comprimidos
moldeados pueden ser preparados por moldeo en una máquina adecuada
de una mezcla del compuesto en polvo humedecido con un diluyente
líquido inerte. Los comprimidos pueden ser recubiertos de forma
opcional o marcado y pueden ser formulados de modo que proporciones
una liberación lenta o controlada del ingrediente activo
utilizando, por ejemplo, hidroxipropilmetilcelulosa en proporciones
variables para proporcionar el perfil de liberación deseado.
Puede prepararse un jarabe por adición del
compuesto activo a una solución acuosa concentrada de un azúcar,
por ejemplo sacarosa, a la cual también puede añadirse cualesquiera
ingredientes necesarios. Dicho ingrediente(s) accesorio puede
incluir aromatizantes, un agente para retardar la cristalización
del azúcar o un agente para incrementar la solubilidad de
cualesquiera otros ingredientes, tal como un alcohol polihídrico,
por ejemplo glicerol o sorbitol.
Además de los ingredientes anteriormente
mencionados, las formulaciones de esta invención pueden incluir
además uno o más ingrediente(s) accesorios seleccionados
entre diluyentes, tampones, agentes aromatizantes, aglutinantes,
agentes de superficie activa, espesantes, lubricantes, conservantes
(incluyendo antioxidantes) y similares.
En un aspecto adicional la presente invención
proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I) o de un derivado
fisiológicamente funcional del mismo para la fabricación de un
medicamento para el tratamiento de la psoriasis.
Figura 1: Diagrama esquemático que muestra las
etapas de extracción para el aislamiento de los compuestos
citostáticos a partir de flores de Caléndula officinalis;
Figura 2: Resultados del tratamiento de pacientes
que padecen psoriasis con extracto de Caléndula officinalis.
La invención se ilustra a continuación con los
siguientes Ejemplos no limitativos.
Se hace referencia a la Figura 1.
400 g de material vegetal en polvo fueron
sometidos a extracción en extractor de Soxhlet con éter de petróleo
(60-80º) hasta el agotamiento. El extracto fue
entonces concentrado bajo presión reducida usando un evaporador
rotativo, habiendo sido así obtenidos 49 g de residuo de extracto.
El material vegetal fue adicionalmente sometido a extracción con
cloroformo bajo condiciones similares a las anteriormente descritas,
habiendo sido así obtenido un extracto adicional. Estos extractos
brutos fueron entonces fraccionados utilizando cromatografía de
líquidos al vacío (VLC). Gel de sílice (Merk 7749) fue cargada en un
embudo sinterizado bajo vacío aplicado formando una columna de
aproximadamente 10 cm de diámetro y 5 cm de altura. El extracto (20
g cada vez) absorbido en sílice (1:1, en peso) fue entonces puesto
sobre la columna y fue eluido con disolventes de polaridad
creciente, es decir con hexano, hexano que contenía concentraciones
crecientes de cloroformo, cloroformo y cloroformo que contenía
cantidades crecientes de metanol. Los eluyentes de VLC fueron
recogidos y las fracciones fueron analizadas por TLC (TLC =
cromatografía en capa delgada) para determinar sus constituyentes.
Sobre la base de los análisis por TLC, los eluyentes de VLC fueron
agrupados dando trece fracciones (Tabla 1). Éstas fueron analizadas
para determinar su actividad inhibitoria del crecimiento celular,
siguiendo el procedimiento de bioanálisis 3T3 (ejemplo 5).
Se comprobó que el más activo era un eluyente
llamado Van-2-36 (extraído usando
una mezcla 1:1 de cloroformo y metanol).
\dotable{\tabskip6pt\hfil#\hfil\+\hfil#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
Fracción \qquad \+ \qquad Sistema Disolvente\cr
Van - 2 - 1 \qquad \+ \qquad Hexano\cr
Van - 2 - 2 \qquad \+ \qquad Hexano\cr
Van - 2 - 6 \qquad \+ \qquad
Hexano:Cloroformo (95:5)\cr
Van - 2 - 12 \qquad \+ \qquad
Hexano:Cloroformo (8:2)\cr Van - 2 - 15
\qquad \+ \qquad Hexano:Cloroformo (6:4)\cr
Van - 2 - 21 \qquad \+ \qquad
Hexano:Cloroformo (6:4)\cr Van - 2 - 23
\qquad \+ \qquad Hexano:Cloroformo (6:4)\cr
Van - 2 - 25 \qquad \+ \qquad
Hexano:Cloroformo (4:6)\cr Van - 2 - 27
\qquad \+ \qquad Hexano:Cloroformo (4:6)\cr
Van - 2 - 31 \qquad \+ \qquad
Cloroformo\cr Van - 2 - 35 \qquad \+
\qquad Cloroformo:Metanol (5:1)\cr
Van - 2 - 36 \qquad \+ \qquad
Cloroformo:Metanol (1:1)\cr
Van - 2 - 37 \qquad \+ \qquad
Cloroformo:Metanol
(1:1)\cr}
El eluyente
Van-2-36 fue sometido a
cromatografía en columna sobre gel de sílice con mezclas de
hexano:cloroformo y cloroformo:metanol de polaridad creciente. Las
fracciones eluidas con cloroformo al 10-60% (en
hexano) dieron Van-5-4, mientras que
las fracciones eluidas con metanol al 5% (en cloroformo (en hexano)
dieron Van-5-4, mientras que las
fracciones eluidas con metanol al 5% (en cloroformo) dieron
Van-5-9. Todas estas fracciones
parecían ser mezclas de ácidos grasos (según los espectros de
cromatografía de gases y de resonancia magnética nuclear) y no
presentaban inhibición del crecimiento celular. En un eluido
obtenido con metanol al 5% fue localizado
Van-5-10, mientras que las de
Van-5-11,
Van-5-12 y
Van-5-15 fueron fracciones
obtenidas de los eluidos obtenidos con metanol al 10%.
Se intentó adicionalmente purificar
Van-5-12 utilizando TLC preparativa
(gel de sílice, disolvente cloroformo:metanol; 95.5). Con esto se
obtuvo Van-6-1, del que se comprobó
que era muy activo usando el bioanálisis de crecimiento celular
(ejemplo 5).
Se siguió el procedimiento del (anterior) ejemplo
1 hasta e inclusive el análisis por VLC y TLC.
El Van-5-10 fue
sometido a TLC preparativa (gel de sílice; disolvente:
hexano:cloroformo:acetato de etilo, 3:6:6), habiendo sido así
obtenidas cinco fracciones, Van-9-1
a Van-9-5, de las cuales se comprobó
que el Van-9-2 era biológicamente
activo utilizando el bioanálisis celular 3T3 (ejemplo 5).
Se siguieron los protocolos de los ejemplos 1 y 2
para llegar a Van-9-2.
El Van-9-2 fue
separado en Van-9-2B y
Van-9-2C mediante TLC preparativa
(disolvente: hexano:cloroformo:acetato de etilo, 3:6:4).
El Van-9-2B y el
Van-9-2C fueron separados por HPLC
(HPLC = cromatografía de líquidos de alta resolución) en una
columna analítica ODS usando acetonitrilo al 75% en agua (más ácido
trifluoroacético al 0,1%). Con esto fueron obtenidas cuatro
fracciones que fueron las Van-10-1,
Van-10-2,
Van-10-3 y
Van-10-4. Se dan a continuación los
datos de RMN (RMN = resonancia magnética nuclear) para
Van-10-2,
Van-10-3 y
Van-10-4.
Se cree que la estereoquímica de los compuestos
Van en la mitad de aromadendranol presenta la estructura
siguiente:
Sin embargo, el experto en la materia comprenderá
también que quedan asimismo dentro del ámbito de la presente
invención adicionales variantes estereoisoméricas de la mitad de
aromadendranol que tienen las estructuras siguientes:
\nobreak\vskip.5\baselineskip\centering\begin{tabular}{|c|c|}\hline
Protón \+ \delta_{H} ( J en Hz) \\\hline 10 \+ 0.75
s \\ 11 \+ 1.26 s \\ 12 \+ 1.39 s \\ 13a
\+ 4.6 br s \\ 13b \+ 4.8 br s \\ 1' \+ 4.9 d
(7.9) \\ 2' \+ 5.85 d (7.8) \\ 3' \+ 4.25 dd (7.8,
3.1) \\ 4' \+ 4.10 d (3.1) \\ 5' \+ 3.85 br d
(6.5) \\ 6' \+ 1.55 d (6.5) \\ 1'' \+ \\ 2'' \+ 5.90
br s \\ 3'' \+ \\ 4'' \+ 2.10 m \\ 5'' \+ 1.9
t (7) \\\hline 6'' \+ 2.15 br s
\\\hline\end{tabular}\par\vskip.5\baselineskip
Datos de desplazamiento químico de RMN de
H^{1}(piridina-D_{5}) para
Van-10-2
\nobreak\vskip.5\baselineskip\centering\begin{tabular}{|cc|cc|}\hline\multicolumn{2}{|c|}{ ^{1} H
}\+\multicolumn{2}{|c|}{ ^{13} C}\\\hline Carbono/Protón \+
\delta_{H} ( J en Hz) \+ Multiplicidades* \+ \delta_{C}
\\\hline 1 \+ \+ C \+ 19.4 \\ 1a \+ 0.65 m \+ CH \+
29.7 \\ 2 \+ \+ CH _{2} \+ 19.4 \\ 3 \+ \+ CH _{2} \+ 39.3
\\ 4 \+ \+ C \+ 81.7 \\ 4a \+ \+ CH \+ 55.2 \\ 5 \+ \+
CH _{2} \+ 26.2 \\ 6 \+ \+ CH _{2} \+ 29.7 \\ 7 \+ \+ CH
\+ 39.1 \\ 7a \+ 1.85 m \+ CH \+ 40.4 \\ 7b \+ 0.10
t (9.4) \+ CH \+ 23.1 \\ 8 \+ 0.95 s \+ Me \+
17.1 \\ 9 \+ 1.00 s \+ Me \+ 29.3 \\ 10 \+ 1.35
s \+ Me \+ 27.0 \\ 11 \+ 0.90 s \+ Me \+ 17.2 \\
1' \+ 5.0 oculto \+ CH \+ 96.0
\\\hline\end{tabular}\par\vskip.5\baselineskip
(continuación)
\nobreak\vskip.5\baselineskip\centering\begin{tabular}{|cc|cc|}\hline\multicolumn{2}{|c|}{ ^{1} H
}\+\multicolumn{2}{|c|}{ ^{13} C}\\\hline Carbono/Protón \+
\delta_{H} ( J en Hz) \+ Multiplicidades* \+ \delta_{C}
\\\hline 2' \+ 5.55 t (8.3) \+ CH \+ 77.6 \\ 3' \+ 4.25
dd (8.3) \+ CH \+ 77.1 \\ 4' \+ 3.7 t (8) \+ CH
\+ 75.0 \\ 5' \+ 3.75 t (8) \+ CH \+ 73.0 \\ 6' \+ 1.56
d (7) \+ Me \+ 19.4 \\ 1'' \+ \+ C \+ 166.4 \\ 2'' \+
5.85 br s \+ CH \+ 115.8 \\ 3'' \+ \+ C \+ 162.0 \\
4'' \+ 2.05 m \+ CH _{2} \+ 34.3 \\ 5'' \+ 0.95
t (7) \+ Me \+ 12.2 \\ 6'' \+ 2.25 br s \+ Me \+
17.0
\\\hline\end{tabular}\par\vskip.5\baselineskip
*Obtenidas del experimento
J-mod
Datos de desplazamiento químico de RMN de H^{1}
y de C ^{13} (piridina-D_{5}) para
Van-10-3
\nobreak\vskip.5\baselineskip\centering\begin{tabular}{|cc|cc|}\hline\multicolumn{2}{|c|}{ ^{1} H
}\+\multicolumn{2}{|c|}{ ^{13} C}\\\hline Carbono/Protón \+
\delta_{H} ( J en Hz) \+ Multiplicidades* \+ \delta_{C}
\\\hline 1 \+ \+ C \+ 19.4 \\ 1a \+ 0.62 m \+ CH \+
29.7 \\ 2 \+ 1.55, 1.8 m \+ CH _{2} \+ 19.2 \\ 3 \+
\+ CH _{2} \+ 39.3 \\ 4 \+ \+ C \+ 81.5 \\ 4a \+ \+ CH \+
55.2 \\ 5 \+ \+ CH _{2} \+ 26.3 \\ 6 \+ \+ CH _{2} \+ 29.7
\\ 7 \+ \+ CH \+ 39.3 \\ 7a \+ 1.85 m \+ CH \+ 40.4
\\ 7b \+ 0.10 t (9.4) \+ CH \+ 23.1 \\ 8 \+ 1.10
s \+ Me \+ 17.1 \\ 9 \+ 1.15 s \+ Me \+ 29.8 \\
10 \+ 1.35 s \+ Me \+ 27.1 \\ 11 \+ 0.95 d (7)
\+ Me \+ 17.2 \\ 1' \+ 4.9 d (7.9) \+ CH \+ 96.3 \\ 2'
\+ 5.85 t (7.9) \+ CH \+ 74.4 \\ 3' \+ 4.15 dd
(7.9, 3.5) \+ CH \+ 73.5 \\ 4' \+ 4.05 d (3.5) \+ CH \+
73.3 \\ 5' \+ 3.85 m \+ CH \+ 71.4 \\ 6' \+ 1.60
d (6) \+ Me \+ 17.9 \\ 1'' \+ \+ C \+ 166.6 \\ 2'' \+
5.85 br s \+ CH \+ 115.9 \\ 3'' \+ \+ C \+ 161.7 \\
4'' \+ 2.05 m \+ CH _{2} \+ 34.3 \\ 5'' \+ 0.95
t (7) \+ Me \+ 12.2 \\ 6'' \+ 2.22 br s \+ Me \+
19.3
\\\hline\end{tabular}\par\vskip.5\baselineskip
*Obtenidas de los experimentos
J-mod.
HC-COEI.
Datos de desplazamiento químico de RMN de H^{1}
y de C^{13} (piridina-D_{5}) para
Van-10-4
Se hace referencia a la Figura 1.
Se siguieron los protocolos de los ejemplos 1 y 2
para llegar a Van-6-1.
El Van-6-1 fue
fraccionado por cromatografía en columna (Sephadex LH20:
disolvente: cloroformo:metanol, 1:1) en dos fracciones:
Van-15-1 (fracción más pesada que
contenía ácidos grasos) y Van-15-2
(fracción más liviana que contenía terpenos).
El Van-15-2 fue
sometido a TLC preparativa (gel de sílice; disolvente:
cloroformo:metanol 95:5), habiendo sido así obtenidos
Van-15A y un componente secundario,
Van-15B. Se dan a continuación los datos de RMN
para el componente activo, Van-15A.
\nobreak\vskip.5\baselineskip\centering\begin{tabular}{|cc|cc|}\hline\multicolumn{2}{|c|}{ ^{1} H
}\+\multicolumn{2}{|c|}{ ^{13} C}\\\hline Carbono/Protón \+
\delta_{H} ( J en Hz) \+ Multiplicidades* \+ \delta_{C}
\\\hline 1 \+ \+ C \+ 19.4 \\ 1a \+ 0.6 br q (9) \+ CH \+
29.7 \\ 2 \+ \+ CH _{2} \+ 19.2 \\ 3 \+ \+ CH _{2} \+ 39.3
\\ 4 \+ \+ C \+ 81.5 \\ 4a \+ \+ CH \+ 55.2 \\ 5 \+ \+
CH _{2} \+ 26.3 \\ 6 \+ \+ CH _{2} \+ 29.7 \\ 7 \+ \+ CH
\+ 39.3 \\ 7a \+ 1.85 m \+ CH \+ 40.4 \\ 7b \+ 0.10
t (9.4) \+ CH \+ 23.1 \\ 8 \+ 0.95 s \+ Me \+
17.1 \\ 9 \+ 1.00 s \+ Me \+ 29.8 \\ 10 \+ 1.35
s \+ Me \+ 27.1 \\ 11 \+ 0.90 d (7) \+ Me \+
17.2 \\ 1' \+ 4.4 d (7.3) \+ CH \+ 96.3 \\ 2' \+ 3,56
\+ CH \+ 74.4 \\ 3' \+ 3.56 \+ CH \+ 73.5 \\ 4' \+ 3,69
d (2.6) \+ CH \+ 73.3 \\ 5' \+ 3.56 m \+ CH \+
71.4 \\ 6' \+ 1.25 d (6.0) \+ Me \+ 17.9
\\\hline\end{tabular}\par\vskip.5\baselineskip
*Obtenidas de los experimentos
J-mod.
HC-COEI.
Datos de desplazamiento químico de RMN de H^{1}
y de C^{13} (CDCl_{3}) para
Van-15A.
Fueron cultivadas en una placa de cultivo tisular
de 96 cavidades células fibroblásticas embriónicas de ratón (3T3,
suministradas por Flow). Las células fueron puestas en suspensión
en Medio (Modificación de Dulbeco del Medio de Eagle (DMEM), Gibco)
que contenía un 10% de Suero de Ternero Fetal (Gibco); un 1% de
Glutamina (Gibco); un 1% de Penicilina/Estreptomicina (Gibco) y un
1% de aminoácidos no esenciales (Gibco), a una concentración de
50.000 células por ml. 100 \mul de la suspensión celular fueron
pipetados al interior de cada cavidad para tener una concentración
de 5000 células por cavidad. Las células fueron incubadas por
espacio de 24 horas a 37ºC en atmósfera de CO_{2} al 5%. El medio
fue retirado de la placa de cultivo, y disolviendo los compuestos
en DMSO (DMSO = dimetilsulfóxido) al 100% (Sigma) fueron preparadas
diluciones variables (de 0, 30, 45, 60 y 100 \mug/ml) de los
compuestos a los que se había dado internamente las designaciones
de Van-10-4,
Van-10-2,
Van-10-3 y Van-15A.
Esto fue entonces diluido con DMEM (DMEM = Medio de Eagle
modificado por Dulbeco) para tener una concentración de DMSO de un
0,5%. Los compuestos fueron entonces diluidos hasta las
concentraciones (anteriormente) indicadas con DMEM que contenía un
0,5% de DMSO (Sigma), y fueron añadidos a la placa de cultivo (100
\mul/cavidad). Cada dilución fue hecha por triplicado; y el
control era DMEM que contenía un 0,5% de DMSO. Fueron añadidos a
cada cavidad 50 \mul de DMEM que contenía
timidina-^{3}H de 0,5 \muCi. Fueron a
continuación añadidos a cada cavidad 50 \mul de DMEM que contenía
un 40% de suero de ternero fetal (Gibco), un 4% de
penicilina/estreptomicina (Gibco), un 4% de glutamina (Gibco) y un
4% de aminoácidos no esenciales (Gibco). Las placas de cultivo
fueron incubadas por espacio de 24 horas a 37ºC en una atmósfera de
CO_{2} al 5%. El medio que incluía los compuestos que se sometían
a ensayo fue entonces retirado, y las placas de cultivo fueron
lavadas dos veces (2x) con salina tamponada con fosfato (PBS) (pH
7,3). Fueron añadidos a cada cavidad 100 \mul de tripsina al 5%
(Gibco) en Versene (un agente quelante de EDTA suministrado por
Gibco) (EDTA = ácido etilendiaminotetraacético). La placa de cultivo
fue incubada adicionalmente por espacio de 15 minutos a 37ºC en una
atmósfera de CO_{2} al 5%, y las células fueron entonces
recolectadas de la cavidad usando un recolector de células
semiautomático (Skatron). Las células recolectadas fueron puestas
en un vial de centelleo que contenía
\hbox{4 ml} de
Optiphase ``safe'' (LKB), y fue contada la radiactividad usando un
contador de centelleo (LKB WALLAC 1217 Rack beta). Los resultados
están indicados en la Tabla 2.
\nobreak\vskip.5\baselineskip\centering\begin{tabular}{|c|c|c|c|c|c|c|c|c|c|c|c|}\hline
\+ \+ 0 \mu g/ml \+ DC \+ 15 \mu g/ml \+ DC
\+\multicolumn{2}{|c|}{22 5 \mu g/ml }\+ 30 \mu g/ml \+ DC
\+\multicolumn{2}{|c|}{50 \mu g/ml}\\ \+ \+ Media \+ \+ Media
\+ \+\multicolumn{2}{|c|}{Media DC }\+ Media \+
\+\multicolumn{2}{|c|}{Media DC}\\\hline VAN \+
6 - 1 \+ 5537.1 \+ 186.1 \+ 3947.6 \+ 454.6 \+
3370.5 \+ 772.8 \+ 2667.5 \+ 475.4 \+ 614.1 \+ 122.2 \\\hline
VAN \+ 9 - 25 \+ 4512.1 \+ 125 \+ 859.5 \+ 168
\+ 254.5 \+ 134 \+ 84.5 \+ 8 \+ 40.0 \+ B \\\hline VAN \+
9 - 2C \+ 4579.5 \+ 155 \+ 2759.8 \+ 301.9 \+
1475.6 \+ 24 \+ 687.5 \+ 39 \+ 188.6 \+ 27 \\\hline VAN \+
10 - 4 \+ 4475.1 \+ 393 \+ 633.6 \+ 45 \+ 311.1
\+ 19.2 \+ 88.6 \+ 17 \+ 34.5 \+ 16 \\\hline VAN \+
10 - 2 \+ 2939.1 \+ 444 \+ 925.3 \+ 651 \+ 247.0
\+ 19 \+ 60.6 \+ 11 \+ 21.8 \+ 10 \\\hline VAN \+
10 - 3 \+ 2742.6 \+ 175 \+ 1887.3 \+ 432 \+ 388.1
\+ 354 \+ 405.5 \+ 228 \+ 37.5 \+ 12 \\\hline VAN \+
15 - A \+ 13052.0 \+ 274 \+ 11773.3 \+ 182 \+
1154.8 \+ 73 \+ 1145.0 \+ 226.6 \+ 364.8 \+ 59
\\\hline\end{tabular}\par\vskip.5\baselineskip
500 g de polvo fueron sometidos a extracción
usando éter de petróleo (60-80) o cloroformo. El
período de extracción era habitualmente de unos 5 días
independientemente del disolvente usado. El volumen de disolvente
era de unos 3 litros, y la producción bruta era de \sim 60 g
(éter de petróleo) o de \sim 80 g (cloroformo). El producto bruto
fue combinado con una cantidad igual de sílice y se le dejó secarse
hasta quedar en forma de polvo a lo largo de otro período de 5
días. El polvo total obtenido para cada lote fue por consiguiente de
\sim 120 g (éter de petróleo) o de 160 g (cloroformo).
Fue puesta una capa de 30 g del producto
bruto/sílice en polvo sobre una columna de VLC en (60Hgel) de
sílice de una profundidad de aproximadamente 5 cm x 10 cm de
anchura. Esto fue cubierto con una capa de arena fina, y fue
efectuado fraccionamiento usando el siguiente sistema
disolvente.
5 x 200 ml de éter de petróleo
(60-80):cloroformo al 50%
5 x 200 ml de éter de petróleo:cloroformo al
70%
5 x 200 ml de cloroformo al 100%
5 x 200 ml de cloroformo:metanol al 10%
Este último paso produce las fracciones que
contienen Van-10-4. La TLC ha
confirmado que en esta fase ha sido retirado de la columna de VLC
todo el Van-10-4.
Las fracciones relevantes fueron evaporadas en el
aparador rotativo hasta la sequedad. El peso de la mezcla obtenida
es de aproximadamente 2-3 gramos.
La inclusión de la columna de Sephadex en esta
fase ha permitido disponer de un método mucho más rápido para
purificar la muestra de VLC. La muestra fue disuelta de nuevo en
cloroformo y fue cargada en la columna. La columna usada era de 20
cm de altura x 2 cm de anchura y contenía 13 g de Sephadex
(LH-20-100 lipofílico). La muestra
fue eluida usando cloroformo:éter de petróleo al 10% usando un
caudal de 2-3 ml/min., y fueron recogidas muestras a
intervalos de 1 min. La presencia de
Van-10-4 fue confirmada por TLC, y
las fracciones relevantes fueron reunidas y evaporadas en
evaporador rotativo. El peso de la muestra obtenida es de 500 mg
aproximadamente.
Fue usada una pequeña columna de sílice. Una
bureta de 50 ml fue llenada con 20 g de sílice preparada en forma
de una lechada en éter de petróleo (60-80). La
muestra fue disuelta nuevamente en cloroformo y cargada en la
columna. La columna era de 40 cm de altura x 10 cm de anchura. La
muestra fue eluida usando el siguiente sistema disolvente:
Usados volúmenes de 10 ml: caudal 1 ml/min.:
fracciones recogidas a intervalos de 1 min.
Éter de petróleo (60-80)
Éter:cloroformo al 10%
Éter:cloroformo al 20%
Éter:cloroformo al 40%
Éter:cloroformo al 50% (la muestra empieza a
separarse)
Éter:cloroformo al 60%
Éter:cloroformo al 70%
Éter:cloroformo al 80%
Éter:cloroformo al 90%
Cloroformo al 100%
Cloroformo:acetato de etilo al 10%
Cloroformo:acetato de etilo al 20%
Cloroformo:acetato de etilo al 30%
Cloroformo:acetato de etilo al 40% (muestra en
elución)
Cloroformo:acetato de etilo al 50%
Cloroformo:acetato de etilo al 50% continuando
hasta que se eluyó de la columna todo el
Van-10-4. Esto fue confirmado
mediante TLC.
Este método produce muestras que contienen
Van-10-4 + varias impurezas
(muestras semipurificadas).
1. Extracción del material vegetal. La
preparación constaba de un extracto del material vegetal con
espíritu de cloroformo (5% volumétrico de cloroformo en etanol
absoluto) en la proporción de 20 g de material vegetal secado
extraído con 100 ml de disolvente.
2. Preparación de crema. El extracto
preparado como se ha indicado anteriormente fue evaporado hasta la
sequedad y pesado. El peso de extracto "seco" fue mezclado con
Crema Acuosa B.P. suficiente para hacer 100 g de crema que tiene un
color naranja amarillento.
3. Preparación de la Crema de Placebo. La
crema de placebo fue preparada añadiendo a Crema Acuosa B.P. una
cantidad de betacaroteno suficiente para producir un producto de un
color aproximadamente igual al del que contenía la droga
natural.
Se ha comprobado que resulta clínicamente útil
para tratar casos de psoriasis un extracto de material vegetal
obtenido de Calendula officinalis (SSSB).
A continuación de un prolongado período de
observaciones empíricas en pacientes, fue llevado a cabo con un
grupo de siete pacientes con psoriasis un ensayo clínico doble
ciego. Los pacientes (4 masculinos, 3 femeninos) tenían de 53 a 63
años de edad, exceptuando uno que tenía 26 años. Estos pacientes
habían tenido la enfermedad durante períodos de tiempo que iban de
los 8,5 a los 25 años. El tratamiento fue supervisado mediante una
serie de fotografías tomadas antes y después de la prueba y usando
una ``puntuación de síntomas de psoriasis'' antes y después del
tratamiento. El tratamiento fue aplicado dos veces al día en forma
de una crema por espacio de cuatro semanas, y hubo tres
tratamientos: SSSB, Betnovate y placebo.
Los resultados del ensayo están indicados en la
Figura 2. La puntuación de promedio antes del tratamiento era de
11,1, y la misma se vio reducida hasta 3,5 después del tratamiento
con SSSB, mientras que fue de 5,5 y 7,4 tras el tratamiento con
Betnovate y con placebo, respectivamente.
De 15 a 30 g de producto bruto extraído en
extractor de Soxhlet como en el ejemplo 6 fueron disueltos de nuevo
en 15 ml de un 50% de acetato de etilo:50% de hexano. Este material
fue cargado en una columna Flash 75 (Biotage Limited) y fue eluido a
razón de un caudal de 150-200 ml/min. usando un 50%
de acetato de etilo:50% de hexano como fase móvil. El tiempo para
la elución de los compuestos VAN a partir de la columna Flash fue
estimado por TLC. Una solución diluida de la mezcla de producto
bruto (disuelto de nuevo en acetato de etilo) fue sometida a ensayo
al toque sobre una placa de TLC (gel de sílice 60). La mezcla de
compuestos Van fue visualizada usando un desarrollador estándar de
vainillina:ácido sulfúrico concentrado (1 gramo de vainillina:100
ml de ácido sulfúrico concentrado), y fue calculado el valor Rf. La
fase móvil de TLC fue ajustada manipulando la relación de
disolvente polar:disolvente apolar hasta que el valor Rf era de 3,0
aproximadamente. El volumen de columna equivalente se deduce del
valor Rf según las instrucciones del fabricante (Biotage Limited).
El volumen de columna para el sistema Flash 75 es de
aproximadamente 1 litro, y la fase móvil que da adecuados valores Rf
era de un 50% de acetato de etilo:50% de hexano.
Cuando este método fue probado usando la columna
Flash 75, los compuestos VAN fueron eluidos en las fracciones
15-19 (equivalentes a 4-5 volúmenes
de columna). Cada fracción recogida era de 250 ml. En un ciclo
repetido bajo condiciones similares, los compuestos VAN fueron
eluidos en las fracciones 14-18. Estas fracciones
fueron combinadas y evaporadas hasta la sequedad dando una
producción aproximada de 200-400 mg de material
semibruto. Este material semibruto fue purificado por HPLC usando
una columna Spherisorb de fase invertida. Una solución concentrada
del material semibruto fue preparada a razón de 25 mg/ml en
acetonitrilo, y fueron procesadas isocráticamente partes alícuotas
de 200 \mul). La fase móvil usada fue de un 75% de
acetonitrilo:25% de agua, y el caudal fue de 5 ml/min. Cada ciclo de
muestra fue de 17 minutos, y el
VAN-10-4 fue eluido a los 14 minutos
aproximadamente. La espectroscopia por RMN confirmó que el eluido
era VAN-10-4.
Pétalos secados de Calendula Officinalis
(1 kg) fueron molidos hasta quedar en forma de un polvo grueso, y
fueron sometidos continuamente a extracción con heptano
(1-4 litros), es decir que el heptano era destilado
continuamente del extracto y percolado a través de la masa de
pétalos. El extracto fue concentrado bajo vacío hasta un volumen de
500 ml. El concentrado resultante fue sometido a extracción tres
veces con 500 ml de solución de acetonitrilo/agua 9:1
(volumétrico). Las fracciones de acetonitrilo con contenido de VAN
fueron combinadas, y el acetonitrilo fue retirado por destilación a
vacío. La goma de color naranja resultante fue disuelta de nuevo en
500 ml de acetato de etilo y lavada sucesivamente con 500 ml (0,1M)
de bicarbonato sódico saturado, 500 ml de agua, 500 ml (0,1M) de
ácido clorhídrico y finalmente 500 ml de agua. La solución en
acetato de etilo fue entonces destilada bajo vacío, habiendo sido
así obtenidos 10 g de un aceite de color naranja.
Claims (42)
1. Uso de un compuesto de Fórmula (I):
donde
R^{1} y R^{2} son seleccionados
independientemente de entre los miembros del grupo que consta de H,
OH,
y ésteres de los
mismos;
R^{3} es seleccionado de entre los miembros del
grupo que consta de OH,
ésteres de los
mismos;
R^{4} es seleccionado de entre los miembros del
grupo que consta de sistemas de anillo alifáticos monocíclicos o
policíclicos saturados o insaturados de
C_{6}-C_{12} opcionalmente sustituidos por
alquilo de C_{1}-C_{6}, H, OH, =CH_{2} o
alquilcarboxiloxi de C_{1}-C_{4}, o bien
R^{4} representa un grupo alcaleno de cadena recta o ramificada de
C_{1}-C_{6} sustituido con un sistema de anillo
de este tipo;
R^{5} es seleccionado de entre los miembros del
grupo que consta de alquilo de C_{1}-C_{4},
-CHO, -COOH y -CH_{2}OH y ésteres y éteres derivados de los
mismos;
R^{6} es seleccionado de entre los miembros del
grupo que consta de -OH,
en la preparación de un medicamento para el
tratamiento de enfermedades que supongan una hiperproliferación de
células de la
dermis.
2. Uso según la reivindicación 1 de un compuesto
de Fórmula (I) donde
R^{1} y R^{2} son seleccionados
independientemente de entre los miembros del grupo que consta de H,
-OH
3. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 o la
reivindicación 2 de un compuesto de fórmula (I) en donde
R^{3} está seleccionado entre -OH
4. El uso de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 3 de un compuesto de fórmula (I) en donde
R^{4} está seleccionado entre el grupo
5. El uso de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 4 de un compuesto de fórmula (I) en donde
R^{4} está seleccionado entre el grupo
6. El uso de acuerdo con la reivindicación 5 de
un compuesto de fórmula (I) en donde R^{4} es:
7. El uso de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6 de un compuesto de fórmula (I) en donde
R^{5} está seleccionado entre el grupo CH_{3}, -CHO, -COOH y
-CH_{2} OH.
8. El uso de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 7 de un compuesto de fórmula (I) en donde
R^{6} está seleccionado entre OH,
9. El uso de acuerdo con la reivindicacións 1 a 8
de un compuesto de fórmula (I) en donde
R^{1} y R^{2} están seleccionados de forma
independiente entre H y OH (\betaOH o \alphaOH);
R^{3} está seleccionado entre OH,
44
R^{4} está seleccionado entre
R^{5} es CH_{3}; y
R^{6} está seleccionado entre OH,
10. El uso de acuerdo con la reivindicación 9 de
un compuesto de fórmula I en donde
R^{1} y R^{2} están seleccionados de forma
independiente entre H y OH (\betaOH o \alphaOH);
R^{3} está seleccionado entre OH y
(E)-3-metilpent-2-enoato
R^{4} está seleccionado entre
R^{5} es CH_{3}; y
R^{6} es OH.
11. El uso de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 10 de un compuesto de fórmula (I) en la
preparación de un medicamento para el tratamiento de la
psoriasis.
12. El uso de acuerdo con la reivindicación 11
del compuesto:
13. El uso de acuerdo con la reivindicación 11
del compuesto:
14. El uso de acuerdo con la reivindicación 11
del compuesto:
15. El uso de acuerdo con la reivindicación 11
del compuesto:
16. El uso de acuerdo con la reivindicación 11
del compuesto:
17. Un compuesto de fórmula (I):
en
donde
R^{1} y R^{2} están seleccionados de forma
independiente entre -OH, H,
R^{3} está seleccionado entre
(E)-3-metilpent-2-enoato,
y
R^{4} está seleccionado entre sistemas de
anillo alifático monocíclico o policíclico saturado o insaturado de
C_{6}-C_{12} opcionalmente sustituidos por
alquilo de C_{1}-C_{6}, H, -OH, =CH_{2} o
alquil carboniloxi de C_{1}-C_{4} o R^{4}
representa un grupo alcaleno de cadena lineal o ramificada de
C_{1}-C_{6} sustituido con un sistema de anillo
de dicho tipo;
R^{5} está seleccionado entre alquilo de
C_{1}-C_{4}, -CHO, -COOH y -CH_{2} OH;
R^{6} está seleccionado entre OH,
isómeros fisiológicamente funcionales de los
mismos.
18. Un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la
reivindicación 17 en donde
R^{1} y R^{2} están seleccionados de forma
independiente entre -OH, H
19. Un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la
reivindicación 17 o la reivindicación 18 en donde R^{3} está
seleccionado entre
(E)-3-metilpent-2-enoato
y
20. Un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 17 a 19 en donde R^{4} está
seleccionado entre
21. Un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 17 a 20 en donde R^{4} está
seleccionado entre
22. Un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la
reivindicación 21 en donde R^{4} es:
23. Un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 17 a 21 en donde R^{5} está
seleccionado entre -CH_{3}, CHO, -CH_{2} OH y -COOH.
24. Un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 19 a 21 en donde R^{6} está
seleccionado entre OH,
25. Un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 19 a 24 en donde
R^{1} y R^{2} están seleccionados de forma
independiente entre H y -OH;
R^{3} es
(E)-3-metilpent-2-enoato;
R^{4} está seleccionado entre
R^{5} es CH_{3}; y
R^{6} es OH;
e isómeros fisiológicamente funcionales de los
mismos.
26. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 17 a 25 que es:
27. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 19 a 25 que es:
28. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 19 a 25 que es:
29. El uso de un compuesto aislado de una
especies de Caléndula de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 17 a 27 para la fabricación de un medicamento para
el tratamiento de la psoriasis.
30. El uso de acuerdo con la reivindicación 29 en
donde el compuesto está aislado de la Caléndula officinalis,
la Caléndula arvensis y/o la Caléndula persica.
31. El uso de acuerdo con la reivindicación 29 o
la reivindicación 30 en donde el compuesto está aislado de la
Caléndula officinalis.
32. Una formulación farmacéutica para el
tratamiento de la psoriasis que comprende al menos un compuesto
aislado de al menos una de las especies de Caléndula de acuerdo con
la Fórmula (I) mezclado con un soporte farmacéuticamente
aceptable.
33. Una formulación de acuerdo con la
reivindicación 32 en donde al menos un compuesto de acuerdo con la
Fórmula (I) es aislado y/o purificado a partir de un extracto
derivado de al menos una especies de Caléndula.
34. Una formulación de acuerdo con la
reivindicación 32 o la reivindicación 33 en donde la menos un
compuesto es aislado y/o purificado a partir de un extracto derivado
de al menos una de las especies de Caléndula arvensis,
Caléndula persica y Caléndula officinalis.
35. Una formulación de acuerdo con cualquiera de
las reivindicaciones 32 a 34 en donde al menos un compuesto está
aislado y/o purificado a partir de un extracto de Caléndula
officinalis.
36. Una formulación de acuerdo con cualquiera de
las reivindicaciones 32 a 35 en donde el al menos un compuesto de
acuerdo con la Fórmula (I) es:
37. Una formulación de acuerdo con la
reivindicación 36 en donde el al menos un compuesto es:
38. Una formulación de acuerdo con la
reivindicación 37 en donde el al menos un compuesto es:
39. El compuesto:
para uso como un medicamento para la
psoriasis.
\newpage
40. El compuesto:
para uso como un medicamento para la
psoriasis.
41. El compuesto:
para uso como un medicamento para la
psoriasis.
\newpage
42. El compuesto:
para uso como un medicamento para la
psoriasis.
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