ES2197345T3 - Anticuerpos monoclonales humanos contra el antigeno de superficie del virus de la hepatitis b2 (hbvsag). - Google Patents
Anticuerpos monoclonales humanos contra el antigeno de superficie del virus de la hepatitis b2 (hbvsag).Info
- Publication number
- ES2197345T3 ES2197345T3 ES97925252T ES97925252T ES2197345T3 ES 2197345 T3 ES2197345 T3 ES 2197345T3 ES 97925252 T ES97925252 T ES 97925252T ES 97925252 T ES97925252 T ES 97925252T ES 2197345 T3 ES2197345 T3 ES 2197345T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- antibody
- hbv
- chain
- antibodies
- monoclonal
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/081—DNA viruses
- C07K16/082—Hepadnaviridae (F), e.g. hepatitis B virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
SE REVELA UNA LINEA CELULAR DE HIBRIDOMA QUE PRODUCE ANTICUERPOS HUMANOS CAPACES DE UNIRSE AL ANTIGENO DE SUPERFICIE DEL VIRUS DE LA HEPATITIS B (AGSVHB), ASI COMO ANTICUERPOS PRODUCIDOS POR LA LINEA CELULAR. TAMBIEN SE REVELAN VARIOS USOS DE DICHOS ANTICUERPOS EN LA PREVENCION Y TRATAMIENTO DE LA INFECCION POR VHB. SE ACTIVAN IN VITRO LINFOCITOS DE SANGRE PERIFERICA OBTENIDOS DE DONANTES HUMANOS QUE TIENEN UN ALTO TITULO DE ANTICUERPOS ANTIAGSVHB CON MITOGENO DE FITOLACA Y SE FUSIONAN DESPUES CON CELULAS DE MIELOMA HETEROLOGO PARA GENERAR HIBRIDOMAS QUE SEGREGAN ANTICUERPOS HUMANOS QUE TIENEN UNA ALTA AFINIDAD Y ESPECIFICIDAD POR EL AGSVHB.
Description
Anticuerpos monoclonales humanos contra el
antígeno de superficie del virus de la hepatitis B2 (HBVSAG).
La presente invención se refiere a una línea
celular de hibridoma que produce anticuerpos humanos capaces de
unirse al antígeno de superficie del virus de la hepatitis B, a los
anticuerpos producidos por las líneas celulares y a diferentes
empleos de los mismos.
La infección por el virus de la hepatitis B (HBV)
es un importante problema sanitario mundial. Aproximadamente un 5%
de la población mundial está infectada por el HBV y los pacientes
infectados crónicamente corren un alto riesgo de desarrollar una
cirrosis y un carcinoma hepatocelular. (Progressive Hepatitis
Research: Hepatitis B virus (HBV), Hepatitis C virus (HCV) and
Hepatitis Delta Virus (HDV) (``Progresiva investigación de la
hepatitis: virus de la hepatitis B (HBV), virus de la hepatitis C
(HCV) y virus de la hepatitis delta (HDV)'') Ed. O.Crivelli, Sorina
Biomedica, 1991).
La respuesta inmunológica a los antígenos
codificados por el HBV, incluye tanto una respuesta inmunológica
celular la cual es activa en la eliminación de las células
infectadas por el HBV, como también una respuesta humoral de
anticuerpos a los antígenos de la envoltura vírica, los cuales
contribuyen al aclaramiento de las partículas víricas circulantes.
La causa dominante de la persistencia vírica durante la infección
por HBV es el desarrollo de una débil respuesta inmunológica
antivírica.
Las vacunas de HBV recombinantes proporcionan un
medio seguro y eficaz para la inmunización activa contra el HBV,
aunque no siempre induce una suficiente y rápida respuesta de
anticuerpos.
El interferón \alpha ha sido empleado en la
terapia de la infección por hepatitis B, habiendo mostrado una
eficacia de solamente 30-40% en pacientes altamente
seleccionados.
Además, la inmunización pasiva con antisuero anti
hepatitis B policlonal humano, se ha mostrado que es efectiva en
retrasar e incluso prevenir la infección por HBV recurrente (Wright,
T. L. y Lau, J.Y.N. The Lancet 342:
1340-1344, (1993)). Dichos antisueros policlonales
humanos se preparan de plasma reunido de dadores inmunizados. Estas
preparaciones son muy caras y disponibles en cantidades
relativamente pequeñas. Además, el plasma reunido puede contener
muestras de sangre contaminada y así el tratamiento con dichos
antisueros aumenta el riesgo del paciente de contraer otras
infecciones víricas tales como la hepatitis C o el HIV.
Un método alternativo para el tratamiento de
infecciones por HBV se refiere al empleo de anticuerpos monoclonales
(MoAb).
La solicitud PCT de la patente PCT/NL94/00102
describe los anticuerpos monoclonales humanos directamente contra el
antígeno de superficie de la hepatitis B, el cual está secretado por
las líneas celulares de hibridoma Mab 4-7B y Mab
9H9. El anticuerpo monoclonal secretado por la línea celular Mab
4-7B reconoce un epitopo lineal del HBVsAg y es
diferente del anticuerpo monoclonal Mab 9H9 el cual reconoce un
epitopo conformacional. Los anticuerpos se reivindican para el
empleo simultáneo en el tratamiento de las infecciones crónicas por
hepatitis B.
La solicitud PCT de la patente PCT/US92/09749
describe anticuerpos monoclonales humanos contra el HBVsAg los
cuales son segregados por la línea celular de hibridoma
PEI-1, ZM1-1, ZM1-2,
MD3-4 y LO3-3. Los anticuerpos se
unen a diferentes epitopos del HBV y se emplean para reducir el
nivel de HVBsAg circulante.
La solicitud de patente japonesa JP 93066104
describe un hibridoma de una cepa celular de linfocitos humanos
TAW-925 y un linfocito humano transformado mediante
el virus Epstein-Barr. El hibridoma produce un
anticuerpo monoclonal humano contra el HBVsAg.
La solicitud de patente U.S. nº 4.883.752
describe la preparación del anticuerpo monoclonal derivado de
humanos, contra el HBVsAg mediante la administración de la vacuna
HBVsAg a humanos, recuperando sus linfocitos, estimulando los
linfocitos in vitro mediante un estimulador no específico,
fusionando dichas células con una célula de mieloma, y seleccionando
para detectar los hibridomas que segregan anticuerpos anti
HBVsAg.
Ichimori y col., Biochem and Biophysic.
Research Communications (``Comunicaciones de Investigación
Bioquím. y Biofís.'') 129 (1): 26-33, 1985
describe un hibridoma que segrega anticuerpos monoclonales anti
HBVsAg humanos que reconocen el determinante a del HBVsAg. Más
adelante Ichimori y col., supra 142 (3):
805-812, 1987 describió otro hibridoma que segrega
establemente un anticuerpo monoclonal humano contra el HBsAg.
De acuerdo con la presente invención, se
proporciona una línea celular de hibridoma la cual segrega
anticuerpos humanos capaces de unirse con el antígeno de superficie
de la hepatitis B (HBVsAg).
Los linfocitos de la sangre periférica (PBL) se
obtuvieron de individuos humanos con un alto título de anticuerpos
anti HBVsAg. Estos individuos pueden haber sido infectados
previamente con HBV, activamente inmunizados con antígenos HBV o
mostrando espontáneamente un alto nivel de dichos anticuerpos. Un
dador humano preferido al máximo es un individuo que dio negativo en
el ensayo sobre la presencia de HBV pero que muestra un alto título
de anticuerpos contra HBVsAg. Los PBLs del dador humano pueden
obtenerse bien mediante donación de toda la sangre o bien mediante
leucoforesis.
Los PBLs humanos son activados a continuación
in vitro mediante su incubación con mitógeno de pokeweed
(PWM). Después de la activación, los PBLs se fusionan in
vitro de preferencia con un auxiliar de fusión
humano-ratón tal como un heteromieloma mediante
técnicas ya conocidas en la especialidad (p. ej., Kohler &
Milstein, Nature, 256: 495-497,
1975). Las líneas celulares de hibridoma generadas son o bien
cultivadas in vitro en un medio adecuado en donde el
anticuerpo monoclonal deseado se recupera del sobrenadante o,
alternativamente, las líneas celulares de hibridoma pueden ser
inyectadas intraperitonealmente en ratones y los anticuerpos pueden
recogerse de los ascitis malignos o del suero de estos ratones. El
sobrenadante de las líneas celulares de hibridoma son primeramente
seleccionados para la producción de anticuerpos de la IgG humana
mediante uno de los métodos ya conocidos en la especialidad tales
como el ensayo inmunoenzimático (ELISA) o el ensayo radioinmuno
(RIA). Los hibridomas que dan ensayo positivo para la IgG humana son
a continuación seleccionados de nuevo para la producción de
anticuerpos anti HBVsAg mediante su capacidad para unirse a
HBVsAg.
La presente invención proporciona una línea
celular de hibridoma designada aquí como ``17.1.41'' la cual se
registró en 22 de Mayo de 1996 en la European Collection of Cell
Cultures (``Colección Europea de Cultivos Celulares'') (ECACC, CAMR,
Salisbury, Wiltshire, SP40JG, U.K.), con el nº de registro 96052169.
Se proporcionan también los anticuerpos monoclonales humanos anti
HBVsAg secretados por la línea celular de hibridoma citada más
arriba, designados aquí como ``Ab17.1.41'' así como fragmentos de
los mismos reteniendo las características de unión al antígeno de
los anticuerpos.
Estos fragmentos pueden ser por ejemplo,
fragmentos Fab ó F(ab)_{2} obtenidos por digestión
del anticuerpo completo con varias enzimas como es conocido y
descrito extensamente en la especialidad. Las características
antigénicas de un anticuerpo se determinan ensayando la unión de un
anticuerpo a un cierto determinante antigénico empleando ensayos
estándar tales como los análisis RIA, ELISA o FACS.
Los anticuerpos de la invención tienen una
afinidad relativamente alta a los HBVsAg, a saber, en el margen de
aproximadamente 10^{-9} M a aproximadamente 10^{-10} M, según se
determina mediante un ensayo ELISA competitivo.
La invención proporciona además un polipéptido
que es la cadena ligera de la región variable del anticuerpo
monoclonal Ab17.1.41 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID
NO: 3, o una porción del mismo manteniendo la unión específica al
HBV del anticuerpo monoclonal Ab17.1.41 cuando se combina con la
otra cadena de dicho anticuerpo o con un fragmento de dicha otra
cadena de dicho anticuerpo.
La invención proporciona además un polipéptido
que es la cadena pesada de la región variable del anticuerpo
monoclonal Ab17.1.41 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID
NO: 4, o una porción del mismo manteniendo la especificidad de unión
al HBV del anticuerpo monoclonal Ab17.1.41 cuando se combina con la
otra cadena de dicho anticuerpo o con un fragmento de dicha otra
cadena de dicho anticuerpo.
La invención proporciona además un polinucleótido
que codifica una cadena de un anticuerpo que tiene la especificidad
de unión del anticuerpo monoclonal Ab17.1.41, siendo dicho
polinucleótido seleccionado del grupo formado por un polinucleótido
que codifica una cadena del anticuerpo monoclonal Ab17.1.41 el cual
es secretado por la línea celular de hibridoma depositada en la
Colección Europea de Cultivos Celulares (ECACC) con el nº de
registro 96 05 21 69; y un polinucleótido que codifica un fragmento
de dicha cadena, siendo dicho fragmento capaz de retener
substancialmente las características de unión al antígeno del
anticuerpo completo cuando se combina con la otra cadena de dicho
anticuerpo o con un fragmento de dicha otra cadena de dicho
anticuerpo.
Otros aspectos de la presente invención son
varios empleos diagnósticos, profilácticos y terapéuticos de los
anticuerpos monoclonales Ab17.1.41. De acuerdo con este aspecto de
la invención, la invención se refiere a composiciones farmacéuticas
que comprenden un anticuerpo monoclonal humano seleccionado del
grupo formado por el anticuerpo monoclonal Ab17.1.41 y un fragmento
del anticuerpo que retiene substancialmente las características de
unión al antígeno del anticuerpo completo, y un soporte
farmacéuticamente aceptable. Estos anticuerpos y fragmentos de
anticuerpos pueden emplearse para la preparación de una composición
farmacéutica para el tratamiento y/o prevención de infecciones por
el virus de la hepatitis B (HBV), por ejemplo para el tratamiento de
pacientes crónicos de la hepatitis B, mediante la administración a
tales pacientes de una cantidad terapéuticamente efectiva de los
anticuerpos o fragmentos de los mismos capaces de unirse a los
HBVsAg, siendo ésta una cantidad efectiva para aliviar los síntomas
de la infección por HBV o para reducir el número de partículas
víricas en circulación en un individuo.
Además de los anticuerpos de la invención, las
composiciones farmacéuticas pueden opcionalmente comprender también
un soporte seleccionado de uno cualquiera de los soportes conocidos
en la especialidad. Un ejemplo de dicho soporte es un liposoma. Las
composiciones farmacéuticas de la invención pueden comprender
también varios diluyentes y adyuvantes ya conocidos per
se.
Las composiciones de la invención pueden
administrarse mediante una variedad de modos de administración,
incluyendo parenteralmente, oralmente, etc.
Composiciones, incluyendo composiciones
farmacéuticas que comprenden los anticuerpos de la invención como se
han descrito más arriba, pueden administrarse en combinación con
otros agentes antivíricos. Estos agentes pueden incluir como un
ejemplo no limitante: interferones, anticuerpos monoclonales anti
HB, anticuerpos policlonales anti HB, análogos de nucleósidos e
inhibidores de ADN polimerasa. En el caso de una de estas terapias
de combinación, los anticuerpos pueden ser dados simultáneamente con
el agente antivírico o secuencialmente, bien antes o bien después
del tratamiento con el agente antivírico.
En una versión preferida, el anticuerpo o
fragmento de anticuerpo de la presente invención, se emplea en
combinación con un agente antivírico para la preparación de una
composición farmacéutica para el tratamiento de infecciones HBV. De
preferencia, dicho agente se selecciona de los agentes mencionados
más arriba.
Estas composiciones farmacéuticas pueden también
emplearse por ejemplo, para la inmunización de bebés recién nacidos
contra infecciones de la HBV o para la inmunización de pacientes con
trasplante de hígado para eliminar posibles infecciones HBV
recurrentes en dichos pacientes.
Mediante otra versión, los anticuerpos de la
invención pueden también emplearse en un método para el diagnóstico
de infecciones HBV en un individuo, mediante la puesta en contacto
de una muestra de un fluido corporal del individuo investigado, que
puede ser una muestra de sangre, una muestra de linfa o cualquier
otra muestra de fluido corporal con un anticuerpo humano anti HBVsAg
de la invención en condiciones que permitan la formación de
complejos anticuerpo-antígeno. El nivel de dichos
complejos se determina a continuación mediante métodos conocidos en
la especialidad, un nivel significativamente más alto que el formado
en una muestra de control indicando una infección HBV en el
individuo investigado.
La presente invención proporciona además un kit
que contiene un anticuerpo o fragmento de anticuerpo de la presente
invención.
La figura 1 es una fotografía que muestra
secciones de hígado infectados por hepatitis B, pintadas con
anticuerpos anti HBVs de la invención. Todas las secciones fueron
pintadas con un anticuerpo ``secundario'', es decir, un Ig de
cabra anti humano o anti ratón, conjugado con biotina.
- A
- - control negativo. Ningún primer anticuerpo.
- B
- - control positivo. Un primer anticuerpo – anticuerpo de ratón anti HB, y un Ig anti-ratón secundario.
- C
- - pintado con anti HBVsAg Ab17.1.41.
Debemos referirnos a los siguientes ejemplos, los
cuales se proporcionan a título de ilustración y no se pretende que
sean limitativos de la presente invención.
La figura 2 es una representación esquemática de
la unión del Ab17.1.41 a un conjunto de 15 pocillos de tipos HBsAg
caracterizados. El eje de las ``y'' representa unidades de densidad
ópticas. El eje de las ``x'' representa diferentes tipos de
HBsAg.
La figura 3 es una representación gráfica de la
puntuación de viremia de la hepatitis B, como se define en el
ejemplo 3. Cada punto del gráfico representa un animal.
La figura 4 es una representación gráfica del
porcentaje de animales infectados por HBV en los días 18 y 25 en el
grupo sin tratar y en el grupo tratado con Ab17.1.41 (en el modelo
de tratamiento).
La figura 5 es una representación gráfica del
porcentaje de animales infectados por HBV en los días 10 y 17 en el
grupo sin tratar y en el grupo tratado con Ab17.1.41 (en el modelo
combinado de profilaxis/inhibición).
La figura 6 es una representación gráfica del
porcentaje de animales infectados por HBV en los días 11 y 18 en el
grupo sin tratar y en el grupo tratado con Ab17.1.41 (en el modelo
combinado de inhibición/tratamiento).
La figura 7 es una representación gráfica del
porcentaje de animales infectados por HBV en los días 21 y 27 en el
grupo sin tratar (control), el grupo tratado con un fármaco
antivírico, el grupo tratado con Ab17.1.41 y el grupo tratado con
los dos, el fármaco antivírico y el Ab17.1.41 (Mab + fármaco).
La figura 8 es una secuencia de ácidos nucleicos
y la correspondiente secuencia de aminoácidos de la cadena ligera
del dominio variable del Ab17.1.41.
La figura 9 es una secuencia de ácidos nucleicos
y la correspondiente secuencia de aminoácidos de la cadena pesada
del dominio variable del Ab17.1.41.
Se obtuvieron linfocitos de la sangre periférica
(PBL) después del consentimiento informado mediante leucoforesis a
partir del positivo de los dadores para los anticuerpos HBs y
negativos para HBV. Los PBLs se trataron dos veces, contados y
resuspendidos en PBS a la concentración celular deseada. El PBL se
separó de los granulocitos y eritrocitos sobre un gradiente
Ficoll-``hypaque'' (UNI-SEP maxi; Eldan Tech.,
Jerusalén, Israel) y subsiguientemente estimulados durante
3-4 días con el mitógeno ``pokeweed'' (PWM; Gibco
BRL. Life Technologies Inc., Grand Island, NY) diluidos 1:100 y con
antígeno a 200 ng/ml en medio RPMI-1640 con el 10%
(v/v) de suero bovino fetal (FCS) suplementado con 10 U/ml de
penicilina, 10 \mug/ml de estreptomicina, 2 mM de
L-glutamina, 1 mM de piruvato de sodio, 1% (v/v) de
aminoácidos no esenciales (Biological Industries, Beit Haemek,
Israel) y 10^{-4} M de 2-mercaptoetanol (Sigma,
San Luis) (medio completo).
Las células se mezclaron con el heteromieloma
humano-ratón HMMA2.11TG/0 (Posner y col.) a un
ratio de 3:1. La fusión se llevó a cabo con el 50% (p/v) de PEG 1500
(Boehringer Manheim GmbH) en un procedimiento estándar. Las células
fusionadas se sembraron a una concentración de 30000 células/pocillo
en placas de microtitulación de 96 pocillos con el fondo en forma de
U (Nunc, Dinamarca) en un medio completo conteniendo el suplemento
HAT (1x) (Biological Industries, Beit Haemek, Israel). Las células
fueron alimentadas con medio fresco HAT una semana más tarde. Dos
semanas después de la fusión se recogieron los sobrenadantes para
efectuar el análisis ELISA y el medio se reemplazó con medio HT
fresco.
Los cultivos de hibridoma que segregan
anti-HBs Ig específico, se clonaron a 0,5
células/pocillo en placas de microtitulación de 96 pocillos con el
fondo en U.
Los sueros fueron analizados para detectar los
antígenos específicos y la Ig humana total. La Ig humana total se
cuantificó mediante ELISA sandwich empleando IgG+IgM+IgA antihumana
de cabra purificada con F(ab)2 (Zymed Laboratories,
San Francisco, CA) como agente de captura, y antihumana de cabra
purificada conjugada con peroxidasa (Zymed Laboratories) como
reactivo de detección. El suero humano con una concentración
conocida de inmunoglobulina, se empleó como estándar (Sigma,
Rehovot, Israel). Se incubaron durante la noche, microplacas (Nunc,
Roskilde, Dinamarca) revestidas previamente con el reactivo de
captura (2,5 \mug/ml, 50 \mul/pocillo) y se bloquearon con 1% de
BSA a 4ºC con diluciones de plasma de 1:20000 a 1.640000, o el
estándar, de 0,2 a
\hbox{0,06 \mu g/ml}, a continuación
se lavaron 5 veces con solución de PBS-Tween. Se
añadió el reactivo de detección y las placas se incubaron durante 1
hora a 37ºC, a continuación se lavaron de nuevo 3 veces. Se añadió
solución de substrato fresco (TMB, Sigma) y después del desarrollo
del color catalizado por la peroxidasa, se interrumpió la reacción
añadiendo 10% de ácido sulfúrico. Se cuantificó la absorbancia a 450
nm con un lector de ELISA (Dynatech, Port Guernsey, Channel Islands,
UK).
La concentración de antígenos - anticuerpos
humanos específicos en el suero del ratón se determinó mediante un
kit HBsAb EIA (ZER, Jerusalén, Israel).
Los anticuerpos humanos en los sobrenadantes de
los hibridomas se determinaron mediante incubación durante la noche,
de los sobrenadantes en placas revestidas con IgG+A+M antihumano de
cabra (Zymed), con conjugado de IgG antihumano de cabra -
peroxidasa, como reactivo secundario.
Los anticuerpos específicos del antígeno en los
sobrenadantes de los hibridomas, se determinaron como más arriba,
empleando placas revestidas del antígeno Hbs.
Las subclases de la IgG humana se determinaron
mediante ELISA sandwich empleando placas revestidas de IgG+IgM+IgA
antihumana de cabra purificada con F(ab)2 (Zymed
Laboratories, San Francisco, CA), y placas revestidas del antígeno
Hbs. Las subclases de IgG antihumana de ratón (Sigma) se emplearon
como segundo anticuerpo, y la antihumana de cabra purificada
conjugada con peroxidasa (Zymed Laboratories), como reactivo de
detección.
El análisis estadístico se efectuó empleando el
programa Stat View II (Abacus Concepts, Inc., Berkeley, CA) en un
Mackintosh Quadra 605 o Microsoft Excel 5,0 (Microsoft) en un 486
DX2 PC compatible. Se utilizaron el test t de Student, la
correlación Anova y el análisis de la regresión para calcular la
probabilidad (p) y los valores del coeficiente de correlación (r).
Los resultados se presentan como media \pm error estándar.
La determinación de las constantes de afinidad
(K\eta) de los diferentes anticuerpos anti-HBs a
un antígeno (Chemicon Cat. No. AG 850) en solución, se realizó de
acuerdo con Friguet y col. (Journal of Immunological Methods,
77: 305-319, 1985). El antígeno a varias
concentraciones (3,5 x 10^{-10} M a 1,4 x 10^{-9} M) se incubó
en primer lugar en solución con una cantidad constante de anticuerpo
(3,4 x 10^{-11} M), en tampón de fosfato de sodio 0,1 M
conteniendo 2 mM de EDTA y 10 mg/ml de BSA, pH 7,8 (medio tampón).
Después de una incubación a 20ºC se determinó la concentración del
anticuerpo libre mediante un análisis ELISA indirecto. Un volumen de
300 \mul de cada mezcla se transfirió e incubó durante 2 horas a
20ºC en los pocillos de una placa de microtitulación (Nunc)
previamente revestidos con Ad (50 \mul/pocillo a 1 \mug/ml en
tampón de NaHCO_{3} 0,1 M, pH 9,6 durante 2 horas a 37ºC). Después
de lavar con PBS conteniendo 0,04% de Tween 20, los anticuerpos
unidos se detectaron mediante la adición de IgG anti humana de cabra
HRP-F(ab')_{2} (Zymed) diluida 1:3000 con
medio tampón, 50 \mul/pocillo 2 horas a 20ºC. La placa se
desarrolló con cromógeno TMB (comprimidos Sigma
T-3405), 50 \mul/pocillo, la reacción se
interrumpió con H_{2}SO_{4} 10%, 50 \mul/pocillo, y se efectuó
la lectura de la placa en un lector de ELISA a 450 nm. Las
condiciones se escogieron de forma que los valores resultantes f
(ver Friguet y col.) fueron aproximadamente de 0,1. La concentración
de anticuerpos empleada se dedujo de un calibrado con ELISA
efectuado en la misma placa. La constante de afinidad K_{D} se
calculó a partir de la gráfica principal de Scatchard.
El ensayo de inhibición se efectuó en placas de
microtitulación revestidas con partículas de HBs (2 \mug/ml en
PBS). La placa se bloqueó con 3% de BSA en PBS. Los sobrenadantes
del hibridoma que contenían los anticuerpos anti HBs fueron diluidos
en serie. Se añadieron 50 \mul de cada dilución a los pocillos de
microtitulación revestidos. Seguidamente, se añadieron 50 \mul de
partículas de HBs (ad/ay, 0,5 \mul/ml en PBS) o PBS solo, a cada
pocillo. Las placas se incubaron durante la noche a temperatura
ambiente en una cámara húmeda y se lavaron 5 veces con
PBS-Tween. A continuación, se añadieron 50 \mul de
IgG antihumana de cabra a HRP (diluido 1:5000 en PBS) a cada
pocillo. Después de 4 horas de incubación a temperatura ambiente en
una cámara húmeda se lavaron las placas 5 veces con
PBS-Tween, y se añadió TMB a cada pocillo. Los
resultados se leyeron empleando un lector de ELISA en una longitud
de onda de 450 nm.
Un fragmento de hígado HBV positivo se fijó en
formaldehído al 4% tamponado neutro durante 24 horas y a
continuación se incrustó en parafina empleando procedimientos de
rutina. Se cortó una sección de 4 \mum de grueso de los bloques de
parafina y se montaron en portaobjetos revestidos de polilisina.
Después de efectuar la desparafinización y la inactivación de la
peroxidasa, se realizó la tinción empleando nuestros anticuerpos
monoclonales humanos purificados con proteína A
anti-HBs, seguido de IgG anti-humana
de cabra, biotinilada (Zymed, San Francisco, CA) empleando el kit
Histostain-SPTM (Zymed) de acuerdo con las
instrucciones del fabricante. Se tintaron en paralelo, portaobjetos
de control, sin emplear el primer anticuerpo
anti-HBs humano.
Se aisló el ARN total de 10 x 10^{6} células de
hibridoma, con reactivo ARNsol B (TEL-TEX, Inc.
Friendswood, Texas). El ADNc se preparó a partir de 10 \mug del
ARN total con transcriptasa inversa y oligo dT (Promega, Madison,
WI), de acuerdo con procedimientos estándar. Se efectuó la PCR en un
1/50 de la mezcla de reacción a temperatura ambiente, con cebadores
conductores 5' V_{H}, V_{\lambda} o V_{K} y cebadores 3'
correspondientes a la región constante humana. Los fragmentos de la
PCR se clonaron en un vector pGEM-T (Promega). Los
insertos se secuenciaron empleando la máquina de secuenciar ABI 377.
Las secuencias se analizaron por comparación con el banco de genes y
mediante alineación a las secuencias Kabat (Kabat y col., 1991,
Sequences of proteins of immunological interest (``Secuencias de
proteínas de interés inmunológico'') (5ª ed.) U.S. Dept. of Health
and Human Services, National Institutes of Health, Bethesda, MD)
(``Departamento de los E.E.U.U. de la Salud y Servicios Humanos,
Institutos Nacionales de la Salud, Bethesda, MD'').
Se obtuvieron linfocitos humanos de sangre
periférica (PBL) de donantes positivos para anticuerpos anti HBVs, y
se activaron in vitro con PWM como se ha descrito más arriba.
Las células se fusionaron a continuación con un heteromielo humano
de ratón para formar líneas celulares de hibridoma. Se caracterizó
un clon estable de hibridoma que segregaba el anti HBVsAg humano
específico, denominado 17.1.41. Los anticuerpos segregados por el
clon de más arriba se purificaron sobre una columna de proteína A
así como sobre una columna de Ig anti humana - agarosa, y se
encontró que eran del tipo IgG1 V_{K}. La constante de afinidad de
dichos anticuerpos al HBVsAg fue de 1,34 x 10^{-9}. La
especificidad se determinó mediante un ensayo de inhibición
competitivo empleando el antígeno de superficie de HBV del
ad-ay (1:1).
Los anticuerpos 17.1.41 se emplearon para la
tintura de fragmentos de hígado humano como se ha descrito más
arriba. Como se ve en la figura 1, los anticuerpos 17.1.41 fueron
capaces de detectar partículas de HBV presentes en los fragmentos de
hígado infectados.
Se aisló el gen que codifica la región variable
del Ab 17.1.41, se secuenció completamente, y se determinaron sus
subgrupos y CDRs.
Dicho anticuerpo tiene una secuencia génica
completa de Ig humana según se determina mediante alineación con
secuencias del banco de genes y secuencias Kabat de proteínas. La
figura 8 muestra la secuencia de nucleótidos del ADNc que codifica
la cadena ligera de la región variable del Ab 17.1.41 y su
correspondiente secuencia de aminoácidos (identificación de
secuencias n^{os} 1 y 3). La figura 9 muestra la secuencia de
nucleótidos del ADNc que codifica la cadena pesada de la región
variable del Ab 17.1.41 y su correspondiente secuencia de
aminoácidos (identificación de secuencias n^{os} 2 y 4).
Los datos de secuenciación revelaron que la
región variable del Ab 17.1.41 consta de los subgrupos V_{H3},
J_{H6}, V_{K2} y J_{K2}.
Los genomas del HBV se clasifican en seis grupos
A a F, basados en el grado de similitud de sus secuencias de
nucleótidos. La variabilidad genética del HBV queda además reflejada
en la presencia de diferentes serotipos de HBsAg. El determinante
común ``a'' y dos pares de determinantes ``d/y'' y
``w/r'' mutuamente exclusivos, permiten la distinción de
cuatro subtipos principales de HBsAg: adw, adr, ayw y
ayr. Determinantes adicionales denominados subdeterminantes
de w (w1 a w4) han permitido la definición de
cuatro serotipos de ayw (ayw1 - 4) y dos serotipos de
adw, a saber, adw2 y adw4. Una variación
adicional de subtipos se añade en el caso del determinante q,
el cual está presente en casi todos los subtipos. Su ausencia está
marcada con el signo ``q-''. El tipo de serotipos HBV
reconocidos por el Ab 17.1.41 se examinó empleando un juego de 15
diferentes tipos de HBsAg (Norder y col., 1992, Journal of General
Virology (``Revista de Virología General''), 73, 3141; Magnius y
Norder, 1995, Intervirology (``Intervirología''), 38,
24-34). Como puede verse en la figura 2, el Ab
17.1.41 tiene una amplia reactividad hacia todos los subtipos y
genotipos ensayados, excepto para el C adw2.
La actividad biológica del Ab 17.1.41 se
caracterizó empleando el siguiente modelo animal de HBV: se trató un
ratón de forma que permitiera el injerto estable de fragmentos de
hígado humano. Este tratamiento incluía una irradiación intensiva
seguida del trasplante de médula ósea de ratones scid (severe
combined immunodeficient) (``inmunodeficientes intensamente
combinados''). La infección vírica de los fragmentos de hígado
humano se realizó ex-vivo empleando
suero humano HBV positivo (EP 699 235).
El modelo animal se empleó en tres diferentes
modos que representaban varios empleos potenciales de anticuerpos:
el modo de tratamiento, el modo combinado de profilaxis/inhibición,
y el modo combinado de inhibición/tratamiento.
Este modelo demuestra la capacidad de emplear el
anticuerpo para tratar la infección crónica por HBV. Los ratones
fueron trasplantados con fragmentos de hígado humano infectado por
HBV. Los ratones se trataron con Ab 17.1.41 los días 16 y 17 después
del trasplante de hígado. El ADN del HBV se analizó los días 18 y
25. El número de copias de ADN del HBV (carga vírica) en el suero
del ratón se determinó empleando la PCR. Empleamos la expresión
``puntuación de la viremia'' como una representación matemática de
la carga vírica. La puntuación de la viremia se determinó como
sigue:
\dotable{\tabskip6pt\hfil#\hfil\+#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
Puntuación \+ Carga vírica = Copias del ADN \cr
de la viremia \+ del HBV/ml de suero \cr 0 \+ carga
vírica < 5 x 10 ^{3} \cr 1 \+ 5 x 10 ^{3} < carga vírica
< 5 x 10 ^{4} \cr 2 \+ 5 x 10 ^{4} < carga vírica < 5 x
10 ^{5} \cr 3 \+ carga vírica > 5 x
10 ^{5} \cr}
Como puede verse en la figura 3, hay una
reducción significativa en la puntuación de la viremia en el grupo
tratado con el anticuerpo. Además, como puede verse en la figura 4,
el tanto por ciento de animales infectados en el grupo tratado es
significativamente menor (valores muy bajos de p) comparado con el
grupo sin tratar.
Este modelo representa el trasplante de hígado.
En este modelo los ratones se tratan con Ab 17.1.41 (10 U.I./ratón)
tres días antes del trasplante de hígado seguido del trasplante de
fragmentos de hígado humano que fueron infectados ex vivo con
HBV en presencia de Ab 17.1.41 (100 U.I.). Se analizó el ADN del HBV
en el suero de los ratones, 10 y 17 días después del trasplante.
Como puede verse en la figura 5, hubo una reducción significativa en
el tanto por ciento de animales infectados en el grupo tratado
comparado con el grupo de control.
a) Se preincubó suero humano HBV positivo, con Ab
17.1.41 seguido de una infección estándar ex vivo del hígado.
b) Se trataron los ratones con Ab 17.1.41 en los día 0 y 7 después
del trasplante. Se analizó el ADN del HBV del suero de ratones en
los días 11 y 18. Como puede verse en la figura 6, el tanto por
ciento de animales infectados en el grupo tratado con Ab 17.1.41,
fue reducido significativamente aunque volvió a aumentar
aproximadamente dos semanas después de interrumpir el
tratamiento.
En el siguiente experimento analizamos la
posibilidad de emplear el 17.1.41 en combinación con otro agente
antivírico en el modelo de HBV descrito más arriba. Los ratones
fueron tratados con el fármaco antivírico (un nucleósido análogo,
0,5 mg/ratón/día) en los días 17-20 después del
trasplante. Además, se trató un grupo de ratones con Ab 17.1.41 en
los día 19 y 20. La presencia de ADN del HBV en el suero de ratones
se analizó en los días 21 y 27. Como puede verse en la figura 7,
inmediatamente después del tratamiento bien con el fármaco
antivírico o con el anticuerpo monoclonal hubo una marcada reducción
en el número de animales infectados. Sin embargo, la carga viral
volvió a aumentar en cada grupo tratado con un fármaco individual.
Solamente el grupo que fue tratado con la combinación del fármaco
antivírico y el Ab 17.1.41 no mostró un aumento en el número de
animales infectados.
Claims (11)
1. Un anticuerpo monoclonal humano, seleccionado
del grupo formado por:
- a)
- el anticuerpo monoclonal Ab17.1.41, el cual es segregado por la línea celular de hibridoma depositada en la European Collection of Cell Cultures (ECACC) (``Colección Europea de Cultivos Celulares'') con el nº de registro 96052169; y
- b)
- un fragmento del anticuerpo (a) que conserva substancialmente las mismas características de unión al antígeno, que el anticuerpo completo.
2. La línea celular de hibridoma depositada en la
ECACC el 22 de Mayo de 1996 con el nº de registro 96052169.
3. Una composición farmacéutica que comprende una
cantidad terapéuticamente efectiva del anticuerpo de la
reivindicación 1 y un soporte farmacéuticamente aceptable.
4. Empleo del anticuerpo de la reivindicación 1,
para la preparación de una composición farmacéutica para el
tratamiento y/o prevención de infecciones por el virus de la
hepatitis B (HBV).
5. Un método para el diagnóstico de infecciones
por HBV que comprende los pasos de:
- a)
- puesta en contacto de la muestra de fluido corporal con el anticuerpo de la reivindicación 1 en condiciones que permiten la formación del complejo anticuerpo-antígeno;
- b)
- determinación del nivel de complejos anticuerpo-antígeno formados, un nivel significativamente mayor que el formado en una muestra de control que indica la infección por HBV en la muestra de fluido corporal analizado.
6. Un kit que contiene el anticuerpo de la
reivindicación 1.
7. La composición farmacéutica de la
reivindicación 3, en la cual el anticuerpo de la reivindicación 1,
se combina con por lo menos otro ingrediente activo que es un agente
antivírico, el cual agente está de preferencia seleccionado del
grupo formado por interferones, anticuerpos monoclonales
anti-HB, anticuerpos policlonales
anti-HB, análogos de nucleósidos, e inhibidores de
ADN polimerasas.
8. El empleo de la reivindicación 4, en el cual
dicho anticuerpo de la reivindicación 1, se emplea en combinación
con un agente antivírico para la preparación de una composición
farmacéutica para el tratamiento de infecciones por HBV, estando
seleccionado de preferencia dicho agente, del grupo formado por
interferones, anticuerpos monoclonales anti-HB,
anticuerpos policlonales anti-HB, análogos de
nucleósidos, e inhibidores de ADN polimerasas.
9. Un polipéptido que es la cadena ligera de la
región variable del anticuerpo monoclonal Ab17.1.41, que tiene la
secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 3, o una porción del mismo que
conserva la misma especificidad de unión al HBV del anticuerpo
monoclonal Ab17.1.41 cuando se combina con la otra cadena de dicho
anticuerpo o con un fragmento de dicha otra cadena de dicho
anticuerpo.
10. Un polipéptido que es la cadena pesada de la
región variable del anticuerpo monoclonal Ab17.1.41 que tiene la
secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 4, o una porción de la misma que
conserva la especificidad de unión al HBV del anticuerpo monoclonal
Ab17.1.41 cuando se combina con la otra cadena de dicho anticuerpo o
con un fragmento de dicha otra cadena de dicho anticuerpo.
11. Un polinucleótido que codifica una cadena de
un anticuerpo que tiene la especificidad de unión del anticuerpo
monoclonal Ab17.1.41, estando seleccionado dicho polinucleótido del
grupo formado por:
- (a)
- un polinucleótido que codifica una cadena del anti-cuerpo monoclonal Ab17.1.41 que es segregado por la línea celular de hibridoma depositada en la European Collection of Cell Cultures (ECACC) (``Colección Europea de Cultivos Celulares'') con el número de registro 96 05 21 69; y
- (b)
- un polinucleótido que codifica un fragmento de la cadena definida en (a), siendo dicho fragmento capaz de conservar substancialmente las mismas características de unión al antígeno que el anticuerpo completo, cuando se combina con la otra cadena de dicho anticuerpo o con un fragmento de dicha otra cadena de dicho anticuerpo.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IL11862696 | 1996-06-11 | ||
| IL11862696A IL118626A0 (en) | 1996-06-11 | 1996-06-11 | Anti HBV antibody |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2197345T3 true ES2197345T3 (es) | 2004-01-01 |
Family
ID=11068956
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES97925252T Expired - Lifetime ES2197345T3 (es) | 1996-06-11 | 1997-06-10 | Anticuerpos monoclonales humanos contra el antigeno de superficie del virus de la hepatitis b2 (hbvsag). |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6146629A (es) |
| EP (1) | EP0853633B1 (es) |
| JP (1) | JP3574664B2 (es) |
| AT (1) | ATE239756T1 (es) |
| AU (1) | AU3045497A (es) |
| CA (1) | CA2227548C (es) |
| DE (1) | DE69721713T2 (es) |
| DK (1) | DK0853633T3 (es) |
| ES (1) | ES2197345T3 (es) |
| IL (3) | IL118626A0 (es) |
| PT (1) | PT853633E (es) |
| WO (1) | WO1997047653A1 (es) |
Families Citing this family (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030180284A1 (en) * | 1998-11-05 | 2003-09-25 | Board Of Trustees Of Leland Stanford Junior University | Prevention and treatment of HCV infection employing antibodies directed against conformational and linear epitopes |
| DE19939653A1 (de) * | 1999-08-13 | 2001-02-22 | Thomas Huenig | Verwendung CD28 spezifischer monoklonaler Antikörper zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung |
| KR100419555B1 (ko) * | 2000-05-29 | 2004-02-19 | 주식회사유한양행 | 비형간염바이러스의 에스-표면항원을 인식하는단일클론항체의 가변영역 및 이를 코딩하는 유전자 |
| ME00502B (me) | 2001-01-05 | 2011-10-10 | Amgen Fremont Inc | Antitjela za insulinu sličan receptor faktora i rasta |
| CA2441228A1 (en) * | 2001-03-23 | 2002-10-03 | Aphton Corporation | Combination treatment of pancreatic cancer |
| US20090191232A1 (en) * | 2001-05-04 | 2009-07-30 | Gevas Philip C | Combination therapy for the treatment of tumors |
| US20030021786A1 (en) * | 2001-07-09 | 2003-01-30 | Gevas Philip C. | Treatment and prevention of cancerous and pre-cancerous conditions of the liver, lung and esophagus |
| SG153666A1 (en) * | 2001-10-04 | 2009-07-29 | Yeda Res & Dev | Treatment of hepatitis b virus infection with human monoclonal antibodies |
| CN1558763A (zh) * | 2001-10-04 | 2004-12-29 | XTL������ҩ����˾ | 用人单克隆抗体治疗乙型肝炎病毒感染 |
| US7658924B2 (en) * | 2001-10-11 | 2010-02-09 | Amgen Inc. | Angiopoietin-2 specific binding agents |
| US7521053B2 (en) * | 2001-10-11 | 2009-04-21 | Amgen Inc. | Angiopoietin-2 specific binding agents |
| KR100467706B1 (ko) * | 2002-01-15 | 2005-01-24 | 주식회사 녹십자홀딩스 | Ｂ형 간염 바이러스의 표면 항원에 대한 인간항체 |
| FR2844455B1 (fr) * | 2002-09-13 | 2007-12-14 | Lab Francais Du Fractionnement | Traitement des pathologies echappant a la reponse immune par des anticorps optimises |
| PL378812A1 (pl) * | 2003-02-13 | 2006-05-29 | Pfizer Products Inc. | Zastosowania przeciwciał przeciw receptorowi insulinopodobnego czynnika wzrostowego I |
| DE602004029581D1 (de) * | 2003-08-13 | 2010-11-25 | Pfizer Prod Inc | Modifizierte humane igf-1r antikörper |
| KR20080019733A (ko) * | 2004-07-16 | 2008-03-04 | 화이자 프로덕츠 인코포레이티드 | 항-아이지에프-1알 항체를 사용하는 비-혈액학적악성종양에 대한 조합 치료 |
| US20060052414A1 (en) * | 2004-08-13 | 2006-03-09 | Migenix, Inc. | Compositions and methods for treating or preventing Hepadnaviridae infection |
| DK1794586T3 (da) * | 2004-09-22 | 2013-05-13 | Cancer Advances Inc | Monoklonale antistoffer til progastrin |
| CA2594922A1 (en) * | 2005-01-14 | 2006-07-20 | The Government Of The United States Of America, As Represented By The Se Cretary, Department Of Health And Human Services | Monoclonal antibodies that bind or neutralize hepatitis b virus |
| EP1871803B1 (en) | 2005-04-18 | 2013-02-20 | Yeda Research And Development Company Limited | Stabilized anti-hepatitis b (hbv) antibody formulations |
| JO2913B1 (en) | 2008-02-20 | 2015-09-15 | امجين إنك, | Antibodies directed towards angiopoietin-1 and angiopoietin-2 proteins and their uses |
| US20100150942A1 (en) * | 2008-12-03 | 2010-06-17 | Cantor Thomas L | Affinity purified human polyclonal antibodies and methods of making and using them |
| KR20150070181A (ko) | 2012-09-27 | 2015-06-24 | 크루셀 홀란드 비.브이. | B형 간염 바이러스에 결합하고 이를 중화시킬 수 있는 인간 결합 분자 및 그의 용도 |
| EP3624841A4 (en) | 2017-06-15 | 2021-01-27 | Cancer Advances, Inc., | COMPOSITIONS AND METHODS OF INDUCING HUMORAL AND CELLULAR IMMUNITIES AGAINST TUMORS AND CANCER |
| US12150978B2 (en) | 2017-06-15 | 2024-11-26 | Cancer Advances Inc. | Compositions and methods for preventing tumors and cancer |
| EP3801766A1 (en) * | 2018-05-31 | 2021-04-14 | Novartis AG | Hepatitis b antibodies |
| TWI868379B (zh) * | 2020-07-09 | 2025-01-01 | 大陸商北京凱因科技股份有限公司 | 結合ｂ型肝炎病毒表面抗原的抗體及其應用 |
| CN114671947B (zh) * | 2022-02-28 | 2024-04-09 | 中国科学院生物物理研究所 | 乙肝病毒不同亚型表面s蛋白高亲和力纳米抗体及其应用 |
| WO2025240246A1 (en) | 2024-05-13 | 2025-11-20 | Gilead Sciences, Inc. | Combination therapies with ribavirin |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5931799A (ja) * | 1982-08-16 | 1984-02-20 | Science & Tech Agency | Ｂ型肝炎ウイルス遺伝子を組込んだ組換えプラスミド |
| US4714613A (en) * | 1982-09-30 | 1987-12-22 | The Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Method of suppressing cell growth by immunotherapy |
| US4624918A (en) * | 1984-07-09 | 1986-11-25 | Genentech, Inc. | Purification process for hepatitis surface antigen and product thereof |
| JPS61104796A (ja) * | 1984-10-26 | 1986-05-23 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | モノクロ−ナル抗体の製造方法 |
| JPS61179483A (ja) * | 1985-02-04 | 1986-08-12 | Sharp Corp | 感光体疲労防止装置 |
| US5223263A (en) * | 1988-07-07 | 1993-06-29 | Vical, Inc. | Liponucleotide-containing liposomes |
| US5565354A (en) * | 1986-09-05 | 1996-10-15 | Sandoz Ltd. | Production of human monoclonal antibodies specific for hepatitis B surface antigen |
| EP0468119A1 (en) | 1990-07-24 | 1992-01-29 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Novel carbocyclic analogs of certain nucleosides |
| GB9202796D0 (en) * | 1992-02-11 | 1992-03-25 | Wellcome Found | Antiviral antibody |
| AU684455B2 (en) * | 1992-11-06 | 1997-12-18 | Sandoz Ltd. | Production of human monoclonal antibodies active against hepatitis B surface antigen |
| WO1994026784A1 (en) * | 1993-05-10 | 1994-11-24 | Stichting Centraal Laboratorium Van De Bloedtransfusiedienst Van Het Nederlandse Rode Kruis | Composition of antibodies against hepatitis b surface antigen |
| GB9608626D0 (en) | 1996-04-25 | 1996-07-03 | Univ College Of London | Hepatitis b monoclonal antibodies |
| IL118625A0 (en) * | 1996-06-11 | 1996-10-16 | Xtl Biopharmaceuticals Limited | Anti HBV antibodies |
-
1996
- 1996-06-11 IL IL11862696A patent/IL118626A0/xx unknown
-
1997
- 1997-06-10 PT PT97925252T patent/PT853633E/pt unknown
- 1997-06-10 ES ES97925252T patent/ES2197345T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-10 IL IL12302597A patent/IL123025A0/xx active IP Right Grant
- 1997-06-10 CA CA002227548A patent/CA2227548C/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-06-10 DE DE69721713T patent/DE69721713T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-10 AU AU30454/97A patent/AU3045497A/en not_active Abandoned
- 1997-06-10 DK DK97925252T patent/DK0853633T3/da active
- 1997-06-10 AT AT97925252T patent/ATE239756T1/de active
- 1997-06-10 EP EP97925252A patent/EP0853633B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-10 US US09/000,088 patent/US6146629A/en not_active Ceased
- 1997-06-10 US US10/465,633 patent/USRE39586E1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-10 JP JP50140698A patent/JP3574664B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1997-06-10 WO PCT/IL1997/000183 patent/WO1997047653A1/en not_active Ceased
-
1998
- 1998-01-22 IL IL123025A patent/IL123025A/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0853633A1 (en) | 1998-07-22 |
| IL123025A0 (en) | 1998-09-24 |
| PT853633E (pt) | 2003-09-30 |
| WO1997047653A1 (en) | 1997-12-18 |
| CA2227548A1 (en) | 1997-12-18 |
| US6146629A (en) | 2000-11-14 |
| EP0853633B1 (en) | 2003-05-07 |
| CA2227548C (en) | 2004-07-20 |
| USRE39586E1 (en) | 2007-04-24 |
| DE69721713D1 (de) | 2003-06-12 |
| JP3574664B2 (ja) | 2004-10-06 |
| DE69721713T2 (de) | 2004-03-11 |
| JP2000506741A (ja) | 2000-06-06 |
| IL123025A (en) | 2006-09-05 |
| AU3045497A (en) | 1998-01-07 |
| DK0853633T3 (da) | 2003-08-04 |
| IL118626A0 (en) | 1996-10-16 |
| ATE239756T1 (de) | 2003-05-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2197345T3 (es) | Anticuerpos monoclonales humanos contra el antigeno de superficie del virus de la hepatitis b2 (hbvsag). | |
| ES2210527T3 (es) | Anticuerpos monoclonales humanos para el antigeno de superficie de hepatitis b. | |
| Eren et al. | Preclinical evaluation of two human anti–hepatitis B virus (HBV) monoclonal antibodies in the HBV‐trimera mouse model and in HBV chronic carrier chimpanzees | |
| EP1097172A1 (en) | Anti hepatitis c virus antibody and uses thereof | |
| Pohl et al. | A human monoclonal antibody that recognizes viral polypeptides and in vitro translation products of the genome of the hepatitis D virus | |
| US7241445B2 (en) | Human monoclonal antibody against hepatitis C virus E2 glycoprotein | |
| AU2001282425A1 (en) | Human monoclonal antibody against hepatitis C virus E2 glycoprotein | |
| Quinti et al. | Hepatitis C virus-specific B cell activation: IgG and IgM detection in acute and chronic hepatitis C | |
| JP3292728B2 (ja) | Ｃ型肝炎ウイルスに対するモノクローナル抗体およびその使用法 | |
| CA2254931C (en) | Human monoclonal antibodies to the hepatitis b surface antigen | |
| IL127249A (en) | Human monoclonal antibodies to the hepatitis b surface antigen | |
| KOBAYASHI et al. | Anti-idiotypic antibodies directed against anti-HBs among the patients with chronic hepatitis B | |
| Dustin | Reexamining the role of the humoral immune response in control of hepatitis C virus infection | |
| Yu et al. | Induction of a protective immune response to murine coronavirus with non-internal image anti-idiotypic antibodies | |
| Nara | STUDIES ON MURINE LIPOPROTEIN ASSOCIATED ONCORNAVIRUS INACTIVATING FACTOR: SPECIES DISTRIBUTION, DEVELOPMENTAL BIOLOGY, MECHANISMS OF VIRAL INACTIVATION, AND IDENTIFICATION OF RESPONSIBLE PROTEINS (RETROVIROLOGY, SERUM FACTOR) | |
| JPS61500611A (ja) | 抗イデイオタイプ抗体によって誘発される、腫瘍およびウイルスに対する免疫応答 |