ES2201306T3 - Formulaciones peptidicas proticas no acuosas. - Google Patents

Formulaciones peptidicas proticas no acuosas.

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ES2201306T3
ES2201306T3 ES97930181T ES97930181T ES2201306T3 ES 2201306 T3 ES2201306 T3 ES 2201306T3 ES 97930181 T ES97930181 T ES 97930181T ES 97930181 T ES97930181 T ES 97930181T ES 2201306 T3 ES2201306 T3 ES 2201306T3
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James B. Eckenhoff
Cynthia L. Stevenson
Sally A. Tao
Steven J. Prestrelski
Jeremy C. Wright
Joe Leonard
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Abstract

LA PRESENTE INVENCION SE REFIERE A FORMULACIONES PROTICAS, NO ACUOSAS Y ESTABLES, DE COMPUESTOS PEPTIDICOS. ESTAS FORMULACIONES ESTABLES COMPRENDEN PEPTIDOS EN DISOLVENTE PROTICO NO ACUOSO. PUEDEN ALMACENARSE A TEMPERATURAS ELEVADAS DURANTE LARGOS PERIODOS DE TIEMPO Y SON ESPECIALMENTE UTILES EN DISPOSITIVOS IMPLANTABLES DE ADMINISTRACION PARA LA ADMINISTRACION DE UN FARMACO DURANTE PERIODOS PROLONGADOS.

Description

Formulaciones peptídicas próticas no acuosas.
Referencia a solicitudes relacionadas
Esta solicitud reivindica la prioridad bajo 35 U.S.C 119(e) de la solicitud de Nº de serie 60/021.129, presentada el 3 de julio de 1996, cuya descripción se incorpora aquí mediante referencia.
Campo de la invención
Esta invención se refiere a formulaciones próticas, no acuosas, estables, de compuestos peptídicos. En particular, se proporcionan formulaciones con concentraciones elevadas de compuestos peptídicos.
Antecedentes de la invención Referencias:
Se remite a las siguientes referencias mediante números entre corchetes ([]) en la parte relevante de la memoria descriptiva.
1. Zoladex (implante de acetato de goserelina), Physician's Desk Reference, edición 50, páginas 2858-2861 (1996).
2. Patente de EE.UU. Nº 3.914.412, concedida el 21 de octubre de 1975.
3. Patente de EE.UU Nº 4.547.370, concedida el 15 de octubre de 1985.
4. Patente de EE.UU. Nº 4.661.472, concedida el 28 de abril de 1987.
5. Patente de EE.UU. Nº 4.689.396, concedida el 25 de agosto de 1987.
6. Patente de EE.UU. Nº 4.851.385, concedida el 25 de julio de 1989.
7. Patente de EE.UU. Nº 5.198.533, concedida el 30 de marzo de 1993.
8. Patente de EE.UU. Nº 5.480.868, concedida el 2 de enero de 1996.
9. Documento WO92/20711, publicado el 26 de noviembre de 1992.
10. Documento WO95/00168, publicado el 5 de enero de 1995.
11. Documento WO95/04540, publicado el 16 de febrero de 1995.
12. "Stability of Gonadorelin and Triptorelin in Aqueous Solution", V.J. Helm, B.W. Muller, Pharmaceutical Research, 7/12, páginas 1253-1256 (1990).
13. "New Degradation Product of Des-Gly^{10}-NH_{2}-LH-RH-etilamida (Fertirelin) in Aqueous Solution", J. Okada, T. Seo, F. Kasahara, K. Takeda, S. Kondo, J. of Pharmaceutical Sciences, 80/2, páginas 167-170 (1991).
14. "Characterization of the Solution Degradation Product of Histrelin, a Gonadotropin Releasing Hormone (LHRH) Agonist", A.R. Oyler, R.E. Naldi, J.R. Lloyd, D.A. Graden, C.J. Shaw, M.L. Cotter, J. of Pharmaceutical Sciences, 80/3, páginas 271-275 (1991).
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16. "Degradation of the LHRH Analog Nafarelin Acetate in Aqueous Solution", D.M. Johnson, R.A. Pritchard, W.F. Taylor, D. Conley, G. Zuniga, K.G. McGreevy, Intl. J. of Pharmaceutics, 31, páginas 125-129 (1986).
17. "Percutaneous Absorption Enhancement of Leuprolide", M.Y. Fu Lu, D. Lee, G.S. Rao, Pharmaceutical Research, 9/12, páginas 1575-1576 (1992).
18. Lutrepulse (gonadorelin acetate for IV injection), Physician's Desk Reference, Edición 50, páginas 980-982 (1996).
19. Factrel (gonadorelin HCl for subcutaneous or IV injection), Physician's Desk Reference, Edición 50, páginas 2877-2878 (1996).
20. Lupron (leuprolide acetate for subcutaneous injection), Physician's Desk Reference, Edición 50, páginas 2555-2556 (1996).
21. Lupron depot (leuprolide acetate for depot suspension), Physician's Desk Reference, Edición 50, páginas 2556-2562 (1996).
22. "Pharmaceutical Manipulation of Leuprorelin Acetate to Improve Clinical Performance", H. Toguchi, J. of Intl. Medical Research, 18, páginas 35-41 (1990).
23. "Long-Term Stability of Aqueous Solutions of Luteinizing Hormone-Releasing Hormone Assessed by an In-Vitro Bioassay and Liquid Chromatography", Y.F. Shi, R.J. Sherins, D. Brightwell, J.F. Gallelli, D. C. Chatterji, J. of Pharmaceutical Sciences, 73/6, páginas 819-821 (1984).
24. "Peptide Liquid Crystals: Inverse Correlation of Kinetic Formation and Thermodynamic Stability in Aqueous Solution", M.F. Powell, J. Fleitman, L.M. Sanders, V.C. Si, Pharmaceutical Research, 11/9, páginas 1352-1354 (1994).
25. "Solution Behavior of Leuprolide Acetate, an LHRH Agonist, as Determined by Circular Dichroism Spectroscopy", M.E. Powers, A. Adejei, M.Y. Fu Lu, M.C. Manning, Intl. J. of Pharmaceutics, 108, páginas 49-55 (1994).
26. "Preparation of Three-Month Depot Injectable Microspheres of Leuprorelin Acetate Using Biodegradable Polymers", Pharmaceutical Research, 11/8, páginas 1143-1147 (1994).
La hormona liberadora de la hormona luteinizante (LHRH), también conocida como hormona liberadora de gonadotropina (GnRH), es un decapéptido con la estructura:
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH_{2}.
Se secreta por el hipotálamo y se une receptores sobre la glándula pituitaria, liberando hormona luteinizante (LH) y hormona estimuladora de los folículos (FSH). La LH y la FSH estimulan las gónadas para sintetizar hormonas esteroides. Se conocen numerosos análogos de LHRH, incluyendo péptidos relacionados con LHRH, que actúan como agonistas y aquellos que actúan como antagonistas. [1-15] Se sabe que los análogos de LHRH son útiles para tratar enfermedades dependientes de hormonas, como el cáncer de próstata, prostatomegalia benigna, endometriosis, histeromioma, metrofibroma, pubertad precoz, o cáncer de mama, y como anticonceptivos. [8] Se prefiere la administración prolongada tanto para compuestos agonistas relacionados con LHRH, que reducen el número de receptores disponibles tras su administración repetida de forma que se suprime la producción de hormonas esteroides, como de compuestos antagonistas relacionados con LHRH, que se tienen que administrar continuamente para la inhibición persistente de la LHRH endógena. [8]
El suministro parenteral prolongado de fármacos, especialmente de fármacos peptídicos, proporciona muchas ventajas. El uso de dispositivos implantables para el suministro prolongado de una amplia variedad de fármacos u otros agentes beneficiosos, es bien conocido en la técnica. Se describen dispositivos típicos, por ejemplo, en las patentes de EE.UU. N^{os} 5.034.229; 5.057.318; y 5.110.596. La descripción de cada una de estas patentes se incorpora aquí mediante referencia.
En general, la biodisponibilidad oral de los péptidos, incluyendo los compuestos relacionados con LHRH, es baja. [16-17]
Las formulaciones de LHRH comercializadas actualmente, sus análogos y compuestos relacionados que se usan para inyección parenteral, son soluciones acuosas que contienen concentraciones relativamente bajas de compuestos relacionados con LHRH (de 0,05 a 5 mg/ml) y pueden contener también excipientes como manitol o lactosa. [18-20] Tales formulaciones de compuestos relacionados con LHRH se tienen que almacenar refrigeradas o se pueden almacenar a temperatura ambiente durante períodos de tiempo cortos.
Las formulaciones de absorción retardada de compuestos relacionados con LHRH, administradas para su liberación prolongada durante un período de 1-3 meses, incluyen una formulación compuesta por 15% de compuesto relacionado con LHRH, disperso en una matriz de un copolímero de ácidos D,L-láctico y glicólico, presentada como un cilindro para inyectarse subcutáneamente [1], y una formulación compuesta por micropartículas que comprenden un núcleo de compuesto relacionado con LHRH y gelatina, rodeado por una cubierta de copolímero de ácidos
D,L-láctico y glicólico. Estas micropartículas se ponen en suspensión en un diluyente para inyección, bien subcutánea o bien intramuscularmente. [21,26] Estos productos se tienen que almacenar a temperatura ambiente o inferior. Es sabido que las formulaciones acuosas de compuestos relacionados con LHRH presentan tanto inestabilidad química como física, así como degradación tras irradiación. [12-16, 22-25]
El documento WO94/06452, describe suspensiones de proteína, el documento EP-A-0510731, describe aerosoles en suspensión de análogos de LHRH y el documento WO94/19020, describe soluciones de polipéptido acuosas.
Las formulaciones que se ha demostrado que son estables (t_{90} aproximadamente cinco años), han sido soluciones tamponadas (10 mM, fuerza iónica de 0,15), acuosas, de concentración muy baja (25 \mug/ml), almacenadas a temperaturas no superiores a la temperatura ambiente (25ºC).[15]
Se necesitan formulaciones estables de péptidos.
Sumario de la invención
La presente invención proporciona formulaciones no acuosas, estables, que son soluciones de compuestos peptídicos en disolventes próticos, no acuosos. En particular, se proporcionan formulaciones con concentraciones de al menos aproximadamente 10% de péptido. Estas formulaciones estables se pueden almacenar a temperaturas elevadas (p.ej., 37ºC) durante largos períodos de tiempo y son especialmente útiles en dispositivos de suministro implantables para suministro del fármaco a largo plazo (p.ej, 1-12 meses o mayor).
En un aspecto, la invención proporciona una formulación estable, no acuosa según la reivindicación 1, para administrarla a un paciente, que comprende:
a)
al menos un compuesto peptídico; y
b)
un disolvente para el compuesto peptídico, consistiendo dicho disolvente en al menos un disolvente prótico no acuoso, en el que dicho compuesto peptídico tiene una solubilidad de al menos 10% (p/p), y en el que se disuelve dicho compuesto peptídico,
en la que dicha formulación es estable a 37ºC durante al menos 2 meses, de forma que queda al menos 65% de compuesto peptídico química y físicamente estable después de dos meses a 37ºC.
En otro aspecto, la invención proporciona un método para preparar la formulación estable, no acuosa, de la reivindicación 1, que comprende proporcionar al menos un compuesto peptídico y seleccionar un disolvente para el compuesto peptídico, consistiendo dicho disolvente en al menos un disolvente prótico no acuoso, en el que dicho compuesto peptídico tiene una solubilidad de al menos 10% (p/p), y disolver dicho compuesto peptídico en el disolvente prótico no acuoso.
En otro aspecto adicional, la invención se puede usar para tratar a un sujeto que padece un estado que se puede aliviar mediante la administración de un compuesto peptídico, administrando a dicho sujeto una cantidad efectiva de una formulación estable, no acuosa, que comprende al menos un compuesto peptídico en al menos un disolvente prótico no acuoso.
Breve descripción de los dibujos
La Figura 1 ilustra la estabilidad de una solución de acetato de leuprolida al 40% en propilenglicol (PG) tras dos meses a 80ºC, medida mediante HPLC de fase inversa (RP-HPLC).
La Figura 2 muestra la RP-HPLC de la misma muestra que en la Figura 1, inyectada sobre cromatografía de exclusión por tamaños (SEC), representado la formación de 3% de dímero y trímero, no detectándose agregados de orden superior.
La Figura 3 presenta el gráfico de Arrhenius que muestra la pérdida de leuprolida a partir de soluciones de acetato de leuprolida al 40% en propilenglicol (PG).
La Figura 4 ilustra la pérdida de leuprolida a partir de una solución de leuprolida al 40% en PG, durante un período de cuatro a seis meses a 37ºC, 50ºC, 65ºC u 80ºC.
La Figura 5 ilustra la estabilidad física y química de una solución de leuprolida al 40% en PG, tras cuatro meses a 80ºC.
La Figura 6 ilustra la estabilidad química de una solución de acetato de leuprolida al 40% en PG, tras nueve meses a 37ºC.
La Figura 7 ilustra la estabilidad química de una solución de acetato de leuprolida al 40% en PG/tampón de acetato (30:70), tras un año a 37ºC.
La Figura 8 ilustra la estabilidad física de una solución de acetato de leuprolida al 40% en PG/tampón de acetato (30:70), tras un año a 37ºC.
La Figura 9 ilustra la estabilidad de una solución de acetato de leuprolida al 40% en PG/agua con conservantes (30:70), tras seis meses a 60ºC, tras irradiación.
\newpage
La Figura 10 ilustra la estabilidad a largo plazo de una solución de acetato de leuprolida al 40% en PG/agua (30:70), durante un período de seis meses a 37ºC, tras irradiación.
La Figura 11 ilustra la estabilidad de una solución de goserelina al 30% en PEG 600/tampón de acetato (30:70), tras 14 días a 80ºC.
Descripción detallada de la invención
La presente invención se dirige al descubrimiento inesperado de que la disolución de compuestos peptídicos en disolventes próticos no acuosos produce formulaciones estables. Las formulaciones de compuestos peptídicos conocidas previamente, que son soluciones acuosas tamponadas diluidas que contienen excipientes como EDTA o ácido ascórbico, que se tienen que almacenar a temperaturas bajas (4-25ºC), forman productos de degradación usando vías de degradación como hidrólisis catalizada por ácido/base, desamidación, racemización y oxidación. Por contraste, las formulaciones reivindicadas luego, estabilizan los compuestos peptídicos a temperaturas elevadas (p.ej. de 37ºC a 80ºC) y en concentraciones elevadas (es decir, al menos aproximadamente 10%).
Las formulaciones estándar de péptidos y proteínas consisten en soluciones acuosas diluidas. Dos aspectos críticos de la formulación de péptidos incluyen la solubilización y estabilización de la molécula de fármaco.
La solubilización de péptidos bajo condiciones acuosas es estándar, porque mimetiza a la naturaleza. Sin embargo, la solubilización bajo condiciones no acuosas no es conocida. En la presente invención, se ha descubierto que es posible la formulación peptídica en disolventes próticos, no acuosos.
La estabilidad de los péptidos se logra usualmente variando uno o más de los siguientes parámetros: pH, tipo de tampón, fuerza iónica, excipientes (EDTA, ácido ascórbico, etc.). Para estas formulaciones las vías de degradación que requieren agua (hidrólisis, desamidación, racemización), no se pueden estabilizar totalmente. Por contraste, en la presente invención, se mostró que péptidos altamente concentrados, formulados en soluciones no acuosas como propilenglicol y polietilenglicol eran química y físicamente estables. Tales disolventes se consideran disolventes próticos, no acuosos. Algunos disolventes próticos, no acuosos, pueden funcionar reduciendo la velocidad de degradación, porque no tienen los grandes momentos dipolares requeridos para la estabilización de etapas determinantes de la velocidad.
La invención consiste en usar disolventes próticos, no acuosos, como propilenglicol y polietilenglicol, para estabilizar formulaciones de péptidos y proteínas altamente concentradas, tanto frente a la degradación química como física. El descubrimiento consiste en la comprensión de que el uso de propilenglicol o polietilenglicoles mejora la solubilidad y estabilidad total de los péptidos en un amplio intervalo de condiciones de formulación, incluyendo altas concentraciones y elevadas temperaturas, haciendo posible por tanto el suministro de péptidos en dispositivos de suministro implantables que no serían, de lo contrario, viables.
A. Definiciones
Según se usan aquí, los siguientes términos tienen los siguientes significados:
El término "estabilidad química" significa que se forma un porcentaje aceptable de productos de degradación, producidos por vías químicas, como oxidación o hidrólisis. En particular, una formulación se considera químicamente estable si se forman no más de 20% de productos de descomposición, tras dos meses a 37ºC.
El término "estabilidad física" significa que se forma un porcentaje aceptable de agregados (p.ej., dímeros, trímeros y formas mayores). En particular, una formulación se considera físicamente estable si se forman no más de aproximadamente 15% de agregados, tras dos meses a 37ºC.
El término "formulación estable" significa que queda al menos aproximadamente 65% de compuesto peptídico química y físicamente estable, tras dos meses a 37ºC (o en condiciones equivalentes a temperatura elevada). Las formulaciones particularmente preferidas son aquellas que conservan al menos aproximadamente 80% de compuesto química y físicamente estable, bajo estas condiciones. Las formulaciones estables especialmente preferidas son aquellas que no muestran degradación tras irradiación esterilizante (p.ej., gamma, beta o haz de electrones).
Los términos "péptido" y/o "compuesto peptídico", significan polímeros de hasta aproximadamente 50 residuos de aminoácidos unidos entre sí mediante uniones amida (CONH). Se incluyen en esos términos análogos, derivados, agonistas, antagonistas y sales farmacéuticamente aceptables de cualquiera de éstos. Los términos incluyen también péptidos y/o compuestos peptídicos que tienen como parte de su estructura D-aminoácidos, aminoácidos modificados, derivatizados o que no existen en la naturaleza en la configuración D- o -L y/o unidades miméticas de péptidos.
El término "compuesto relacionado con LHRH" significa la hormona liberadora de hormona luteinizante (LHRH) y sus análogos y sales farmacéuticamente aceptables. Se incluyen en el término "compuestos relacionados con LHRH" los agonistas y antagonistas de LHRH octa-, nona- y decapeptídicos, así como la LHRH nativa. Los compuestos relacionados con LHRH especialmente preferidos incluyen la LHRH, leuprolida, goserelina, nafarelina y otros agonistas y antagonistas activos conocidos. [1-21].
El término "alta concentración" significa al menos aproximadamente 10% (p/p) y hasta la solubilidad máxima del compuesto particular.
El término "excipiente" significa una sustancia más o menos inerte en una formulación, que se añade como diluyente o vehículo o para proporcionar forma o consistencia. Los excipientes se distinguen de los disolventes como EtOH, que se usan para disolver fármacos en formulaciones, de los tensioactivos no iónicos como el Tween-20, que se usan para disolver fármacos en formulaciones, y de los conservantes como alcoholes bencílicos y metil- o propil-parabenes, que se usan para evitar o inhibir el crecimiento microbiano.
El término "disolvente prótico no acuoso" significa un disolvente no acuoso que contiene hidrógeno unido a oxígeno o nitrógeno, de forma que es capaz de formar puentes de hidrógeno o de donar un protón. Ejemplos de disolventes próticos, no acuosos son polietilenglicoles (PEGs), propilenglicol (PG), polivinilpirrolidona (PVP), metoxi-propilenglicol (MPEG), glicerol y glicofurol.
El término "disolvente aprótico, polar" significa un disolvente polar que no contiene hidrógeno ácido y no actúa como dador de puentes de hidrógeno. Ejemplos de disolventes apróticos polares son el dimetil-sulfóxido (DMSO), la dimetil-formamida (DMF), la hexametil-fósforo-triamida (HMPT) y la n-metil-pirrolidona.
B. Preparación de Formulaciones
La presente invención se dirige a formulaciones no acuosas de compuestos peptídicos en disolvente prótico no acuoso, que son estables durante períodos prolongados de tiempo a temperaturas elevadas. Las formulaciones estándar acuosas, diluidas, de péptidos y proteínas, requieren la manipulación del tipo de tampón, fuerza iónica, pH y excipientes (p.ej., EDTA y ácido ascórbico) para lograr la estabilidad. Por contraste, las formulaciones reivindicadas logran la estabilización de los compuestos peptídicos mediante el uso de disolventes próticos, no acuosos. En particular, la formulación de la presente invención ha proporcionado la estabilidad de altas concentraciones de compuesto (al menos aproximadamente 10% p/p).
Ejemplos de péptidos y compuestos peptídicos que se pueden formular usando la presente invención, incluyen aquellos péptidos que tienen actividad biológica o que se pueden usar para tratar una enfermedad u otro estado patológico. Éstos incluyen, pero no están limitados a la hormona adrenocorticotrópica, angiotensina I y II, péptido natriurético atrial, bombesina, bradiquinina, calcitonina, cerebelina, dinorfina A, endorfina alfa y beta, endotelina, encefalina, factor de crecimiento epidérmico, fertirelina, péptido liberador de gonadotropina folicular, galanina, glucagón, gonadorelina, gonadotropina, goserelina, péptido liberador de la hormona de crecimiento, histrelina, insulina, leuprolida, LHRH, motilina, nafarelina, neurotensina, oxitocina, somatostatina, sustancia P, factor de necrosis tumoral, triptorelina y vasopresina. También se pueden usar análogos, derivados, antagonistas, agonistas y sales farmacéuticamente aceptables de los anteriores.
Los compuestos peptídicos útiles en las formulaciones y métodos de la presente invención se pueden usar en forma de sal, preferiblemente una sal farmacéuticamente aceptable. Las sales útiles son conocidas para los expertos en la técnica, e incluyen sales de ácidos inorgánicos, ácidos orgánicos, bases inorgánicas y bases orgánicas. Las sales preferidas son las sales de acetato.
Se prefieren, para su uso en la presente invención, los péptidos y compuestos peptídicos que son fácilmente solubles en disolventes próticos, no acuosos. Un experto en la técnica puede determinar fácilmente qué compuestos serán útiles basándose en su solubilidad, es decir, el compuesto tiene que ser soluble en el disolvente prótico no acuoso, hasta al menos una cantidad aceptable, que puede ser una cantidad farmacéuticamente eficaz. Las solubilidades preferidas son al menos aproximadamente 10% (p/p). Los compuestos peptídicos particularmente preferidos son compuestos relacionados con LHRH, incluyendo la leuprolida y el acetato de leuprolida.
La proporción de péptido puede variar dependiendo del compuesto, el estado a tratar, la solubilidad del compuesto, la dosis esperada y la duración de la administración. (Véanse, por ejemplo, The Pharmacological Basis of
Therapeutics, Gilman et al, 7ª edición (1985) y Pharmaceutical Sciences, Remington, edición 18 (1990), cuyas descripciones se incorporan aquí mediante referencia). La concentración de péptido en formulaciones de concentración alta puede variar desde al menos aproximadamente 10% (p/p) y la solubilidad máxima del compuesto. Un intervalo preferido es de aproximadamente 20 a aproximadamente 60% (p/p). El intervalo de mayor preferencia actualmente es de aproximadamente 30 a aproximadamente 50% (p/p) y el intervalo de máxima preferencia es de aproximadamente 35 a aproximadamente 45% (p/p).
Generalmente, las formulaciones estables de la presente invención se pueden preparar disolviendo simplemente la cantidad deseada del péptido deseado en el disolvente prótico no acuoso. Se ha descubierto que, para disolventes polímeros como PEG, la solubilidad tiende a ser inversamente proporcional al peso molecular del disolvente. Disolventes próticos, no acuosos, preferidos incluyen el propilenglicol (PG), polietilenglicol (PEG), metoxi-propilenglicol (MPEG), glicerol y polivinilpirrolidona (PVP).
Es conocido para los expertos en la técnica que se pueden añadir beneficiosamente a formulaciones peptídicas farmacéuticas agua, tampones, solubilizantes como tensioactivos no iónicos, excipientes como EDTA y conservantes como alcoholes bencílicos, metil- o propil-parabenes. (Véase, por ejemplo, Pharmaceutical Sciences, Remington, edición 18 (1990). Tales agentes se pueden añadir opcionalmente a las formulaciones reivindicadas.
C. Metodología
Se ha descubierto que se pueden preparar formulaciones no acuosas estables de compuestos peptídicos, disolviendo el compuesto peptídico a formular en disolventes próticos no acuosos.
Se han ensayado dichas formulaciones de compuestos peptídicos, específicamente formulaciones del compuesto leuprolida, relacionado con LHRH, para la estabilidad, sometiéndolas a envejecimiento acelerado a temperatura elevada y midiendo la estabilidad química y física de las formulaciones. Los resultados de estos estudios (mostrados, por ejemplo, en la Tabla III y las Figuras 1, 2, 6 y 7), demuestran que estas formulaciones eran estables en condiciones que se aproximan o superan el almacenamiento durante un año a 37ºC.
También se han ensayado formulaciones de compuestos peptídicos preparadas como se describe aquí, para estabilidad tras irradiación gamma de 2,5 megarad. Los resultados, mostrados en la Tabla IV, muestran que estas formulaciones permanecían química y físicamente estables tras tal irradiación. Se encontró que las formulaciones sometidas a irradiación mediante haz de electrones también eran estables.
Como se muestra en la Tabla I, se ha ensayado una amplia variedad de formulaciones peptídicas, especialmente leuprolida, goserelina, LHRH, bradiquinina, insulina y tripsinógeno, para estabilidad, disolviéndolas (o intentando disolverlas) en agua, y sometiéndolas luego a envejecimiento acelerado a temperaturas elevadas. Se midió la estabilidad de las formulaciones. Los resultados se presentan en la Tabla I, como semivida a 37ºC, asumiendo una E_{a} = 22,2 kcal/mol. Una amplia variedad de los péptidos ensayados eran solubles en los disolventes próticos no acuosos y permanecieron estables bajo las condiciones de ensayo. La solubilidad de un péptido particular en agua y la estabilidad de la solución resultante se determinan fácilmente usando procedimientos de rutina conocidos por los técnicos medios en la materia.
TABLA I Estabilidad de péptidos en disolventes próticos no acuosos
Formulación Semivida*
(Temperatura)
Leuprolida al 40% en PG 5,2 años (37ºC)
Goserelina al 40% en PG 6,2 años (80ºC)
LHRH al 20% en PG 1,2 años (65ºC)
Bradiquinina al 20% en PG 3,2 meses (65ºC)
Insulina al 20% en PG peso degradado en 24 horas (65ºC)
Tripsinógeno al 40% en PG insoluble
Tripsinógeno al 40% en PEG insoluble
Tripsinógeno al 20% en PEG 7,7 meses (65ºC)
*Semivida a 37ºC, asumiendo que
E_{a} = 22,2 kcal/mol.
Las formulaciones de leuprolida al 40% en propilenglicol, almacenadas durante seis meses a 37ºC, mostraban una degradación lineal medida mediante la pérdida total de péptido a partir de la solución. El análisis de estos datos proporcionó una energía de activación (E_{a}) de 16,6 kcal/mol y una t_{90} de 9,6 meses, mostrando la estabilidad de estas formulaciones a temperaturas elevadas.
También se ha descubierto inesperadamente que ciertas formulaciones peptídicas de la presente invención son bacteriostáticas (es decir, inhiben el crecimiento bacteriano), bactericidas (es decir, producen la muerte de las bacterias) y esporicidas (es decir, matan las esporas). En particular, las formulaciones de leuprolida de 50- 400 mg/ml presentaban actividad bacteriostática, bactericida y esporicida. La estabilidad de las muestras no quedaba afectada al sembrar con bacterias, indicando que las enzimas liberadas a partir de las bacterias muertas y lisadas no afectaban negativamente a la estabilidad del producto. Esto demuestra que esas formulaciones no eran propicias para la actividad enzimática.
Es conocido que algunos péptidos, por ejemplo la calcitonina y la leuprolida, son físicamente inestables, presentando agregación, gelificación y fibrilación cuando se formulan en solución en disolventes próticos no acuosos, así como en solución acuosa. Por ejemplo, se puede inducir la gelificación de leuprolida incrementando la concentración de péptido, introduciendo sales o agitando suavemente. La mejora de la estabilidad física puede permitir una administración parenteral más fácil, incluyendo la administración usando sistemas implantables de suministro de fármacos.
Se ha descubierto inesperadamente que la adición de disolventes apróticos polares, como DMSO, a formulaciones de ciertos péptidos en disolventes próticos no acuosos, como leuprolida, goserelina y calcitonina evita la gelificación de la formulación. Esto sucede aparentemente porque los disolventes apróticos polares no acuosos hacen que los péptidos formen una conformación aleatoria en espiral/hélice alfa, que no se repliega en una estructura de lámina beta y, por tanto, no gelifica. Por tanto, estos disolventes tienen un efecto antigelificante.
Adicionalmente, la estabilidad de las formulaciones de leuprolida líquidas y gelificadas (mediante agitación) en el disolvente prótico no acuoso PG (370 mg/ml), se estudió in vitro a 37ºC e in vivo en ratas, respectivamente. Los resultados se presentan en la Tabla II, y muestran que tanto las formulaciones gelificadas como líquidas permanecen estables durante un período de 12 semanas.
TABLA II Estudios de estabilidad de formulaciones de leuprolida líquidas y gelificadas en PG
Estudio Tiempo Líquido Gelificado
(semanas) (% restante) (% restante)
Estabilidad a largo plazo 6 98,50
Estabilidad a largo plazo 12 98,00
Rata 6 97,40
Rata 12 95,90
Un aspecto principal de la invención es que las soluciones no acuosas que contienen compuestos peptídicos en disolventes próticos no acuosos, son estables a altas temperaturas durante largos períodos de tiempo. Tales formulaciones son estables incluso cuando se usan concentraciones altas. Por tanto, estas formulaciones son ventajosas porque pueden almacenarse durante largos períodos de tiempo a temperatura ambiente o superior. También son adecuadas para su uso en dispositivos de suministro implantables.
Descripción de los ejemplos de la invención
Los siguientes métodos se usaron para realizar los estudios contenidos en los Ejemplos siguientes.
1. Preparación de soluciones de acetato de leuprolida
Se pesó y disolvió acetato de leuprolida (obtenido, por ejemplo, de Mallinckrodt, St. Louis, Missouri), usando calor (80ºC), turbulencias, agitación y/o centrifugación, según se precisó, en un vehículo (PG, PEG, MPEG, PG/H_{2}O, PEG/H_{2}O, PEG/PG, MPEG/H_{2}O o PG con EDTA), a la concentración apropiada (p/p). Si no se indica otra cosa, el término PEG significa PEG 300. El término PG seco se refiere a formulaciones de PG preparadas en un medio de humedad baja (es decir, en atmósfera de N_{2} seco).
Si no se indica otra cosa, el contenido base de leuprolida libre se calculó que era 37% de base libre, a partir del certificado de análisis de valores de actividad. Esto representaba 40% de acetato de leuprolida, si no se indica otra cosa.
2. Preparación de recipientes
Los recipientes de dispositivos implantables de suministro de fármacos (según se describen en la solicitud de patente de EE.UU. Nº de serie 08/595.761, incorporada aquí mediante referencia) se llenaron con la solución de acetato de leuprolida apropiada. Los dispositivos llenos se sometieron luego a un ensayo de estabilidad. La formulación se introdujo en recipientes de titanio o polímero que tenían un tapón polímero bloqueando cada extremo. El recipiente lleno se cerró herméticamente a continuación en una bolsa de múltiples capas y se colocó en un horno de ensayo de estabilidad.
Se debería destacar que las formulaciones en el interior de los recipientes de estos dispositivos, están completamente aisladas del medio externo.
3. HPLC de fase inversa (RP-HPLC)
Todas las muestras de estabilidad se analizaron para la concentración de leuprolida y el % de área del pico, usando un ensayo de HPLC de fase inversa de gradiente de elución con un automático, refrigerado (4ºC), para minimizar la degradación de las muestras. Las condiciones cromatográficas usadas se enumeran debajo.
Condiciones cromatográficas de RP-HPLC
Descripción Parámetro
Columna HaiSil C18, 4,6 x 250 mm, S/N 5103051
Velocidad de flujo 0,8 ml \cdot min^{-1}
Volumen inyectado 20 \mul
Detección 210 nm
Tiempo de retención de leuprolida Entre 25-30 minutos
Fase móvil A = fosfato sódico 100 mM, pH 3,0
B= acetonitrilo al 90%/agua
Gradiente Minutos 0 5 25 40 41 46 46,1 50
% B 15 26,5 26,5 65 85 85 15 15
Los estándares de leuprolida (en agua) desde 4 hasta 6 niveles de concentración diferentes, típicamente entre
0,1-1,2 mg/ml, se realizaron a lo largo de las muestras de estabilidad. Las muestras de estabilidad se delimitaron mediante los grupos estándar, con no más de 40 muestras entre los grupos estándar. Se integraron todos los picos entre el volumen vacío y 45 minutos de la realización. Las áreas de picos integradas para los estándares de leuprolida se representaron en función de la concentración. A continuación, se calcularon las concentraciones de leuprolida para las muestras de estabilidad, usando regresión lineal. Se registraron también el % de áreas de pico para el pico de leuprolida, la suma de todos los picos que eluían antes que la leuprolida (denominados "otros"), y la suma de todos los picos que eluían después de la leuprolida (denominados "agregados"), y se representaron en función de los puntos de tiempo de la muestra.
4. Cromatografía de exclusión por tamaños (SEC)
Se analizaron muestras de estabilidad seleccionadas para el % de área de pico y los pesos moleculares, usando un ensayo de SEC de solución isocrática con un muestreador automático refrigerado (4ºC). Las condiciones cromatográficas utilizadas se enumeran debajo.
Condiciones cromatográficas SEC
Descripción Parámetro
Columna Péptido de Pharmacia, HR 10/30, 10 x 300 mm
Velocidad de flujo 0,5 ml \cdot min^{-1}
Volumen de inyección 20 \mul
Detección 210 nm
Tiempo de retención de leuprolida Aproximadamente 25 min
Fase móvil Fosfato amónico 100 mM, pH 2,0, cloruro sódico
200 mM, acetonitrilo al 30%
Se necesitaba el volumen vacío y el volumen total de la columna de exclusión por tamaños para el cálculo de los pesos moleculares. Se usaron el estándar de peso molecular elevado de Bio-Rad y acetona al 0,1% para determinar el volumen vacío y el volumen total, respectivamente. Se registraron los tiempos de retención para el primer pico en el estándar de Bio-Rad y para el pico de acetona, y se convirtieron a unidades de volumen, usando las ecuaciones indicadas más adelante. Debido a que estos valores son constantes para una columna SEC y un sistema HPLC particulares, se volvieron a determinar los volúmenes vacío y total cuando se realizaron cambios en la columna SEC o en el sistema HPLC. A continuación se realizó un análisis estándar, seguido por las muestras de estabilidad. La mezcla estándar contenía aproximadamente 0,2 mg/ml de los siguientes péptidos: bursina (peso molecular = 449), péptido WLFR (peso molecular = 619), angiotensina (peso molecular = 1181), GRF (peso molecular = 5108) y citocromo C (peso molecular = 12394). Estos estándares se eligieron porque incluían el peso molecular de la leuprolida y todos tenían pH básico (9,8-11,0), similar al de la leuprolida.
Se registraron los % de área de pico para todos los picos. Se calcularon los pesos moleculares para las especies separadas, usando las ecuaciones a continuación:
V_{s} = velocidad de flujo (ml/min) x tiempo de retención del pico de muestra (min)
V_{o} = velocidad de flujo (ml/min) x tiempo de retención del pico de volumen vacío (min)
V_{t} = velocidad de flujo (ml/min) x tiempo de retención del pico de volumen total (min)
Kd=\frac{V_{s} - V_{o}}{V_{t} - V_{o}}
en la que:
V_{s}
= volumen estándar o de la muestra
V_{o}
= volumen vacío
V_{t}
= volumen total
V_{s} se calculó para cada pico estándar de péptido. A continuación, se calculó Kd para cada péptido estándar, usando los valores para V_{t} y V_{o} determinados anteriormente. La línea de regresión lineal del gráfico de logPM frente a Kd^{-1}, se usó para determinar los pesos moleculares para cada pico en la muestra de estabilidad. Se registraron también los % de área de los picos para las muestras de estabilidad.
5. Instrumentación y materiales
La instrumentación y materiales usados para RP-HPLC y SEC fueron los siguientes:
Sistema HPLC Waters Millenium consistente en muestreador automático 717, bomba 626, controlador 6000S, detector de agrupamiento de fotodiodos 900, y detector de índice de refracción 414 (Waters Chromatography, Milford, MA)
Viales HPLC, para posición 48 y posición 96 (Waters Chromatography, Milford, MA)
Columna de HPLC HaiSil C18, 120 A, 5ìm, de 4,6 x 250 mm (Higgins Analytical, Mountain View, CA)
Péptido de Pharmacia, columna SEC HR 10/30 (Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ).
6. Pureza
Se analizaron las muestras de estabilidad usando RP-HPLC. El área bajo la curva para el pico de leuprolida, dividida por la suma de las áreas bajo la curva de todos los picos, proporcionó el % de pureza. [Se debería de destacar que los datos para % de concentración presentados con los datos de % de pureza (Ejemplos 6, 8, 9 y 10) no son concluyentes. Los métodos de análisis usados para determinar el % de concentración en estos experimentos no fueron fiables].
Los siguientes ejemplos se proporcionan para ilustrar esta invención, y no se pretende que se interpreten de ningún modo como limitativos del alcance de esta invención.
Ejemplo 1 Estudios de estabilidad acelerados de formulaciones de acetato de leuprolida
Se prepararon formulaciones de acetato de leuprolida al 40% (p/p) (equivalentes a base libre de leuprolida al 37%) en un vehículo, como se describió anteriormente, y se usaron para llenar los recipientes de dispositivos de suministro de fármaco implantables, también como se describió anteriormente. Algunos recipientes se fabricaron de materiales polímeros, mientras que algunos se fabricaron de titanio.
Los dispositivos llenos se sometieron a envejecimiento acelerado, almacenándolos a temperaturas elevadas (80-88ºC) durante siete días en una incubadora (de Precision Scientific o Thelco). Esto es equivalente a aproximadamente seis meses a 37ºC o aproximadamente un año a temperatura ambiente (25ºC), asumiendo una energía de activación (E_{a}) de 16 kcal/mol.
Las muestras se analizaron usando RP-HPLC y SEC, según se describió anteriormente, para determinar la estabilidad química y física de las formulaciones envejecidas.
Los resultados, presentados en la Tabla III, demuestran que estas formulaciones eran capaces de mantener la estabilidad del compuesto leuprolida, relacionado con LHRH. En cada caso, se retuvo al menos 65% de leuprolida.
TABLA III Estabilidad de formulaciones próticas no acuosas de acetato de leuprolida tras 7 días a temperaturas elevadas
Temperatura (ºC) Material del recipiente Formulación % de leuprolida en el día 7
88 Polímero al 40% en PG 70
88 Polímero al 40% en PG/H_{2}O 73
(70/30)
88 Polímero al 40% en PG/H_{2}O 77
(90/10)
88 Titanio al 40% en PG 87
88 Polímero al 20% en PEG/PG 74
(50/50)
88 Polímero al 20% en PEG/H_{2}O 68
(88/12)
80 Polímero al 40% en PG 74
80 Titanio al 40% en PG 80
80 Titanio al 40% en PEG/H_{2}O 86
(90/10)
80 Titanio al 40% en PG 87
80 Titanio al 40% en PG 80
80 Titanio al 40% en EDTA al 80
1% en PG
80 Polímero al 40% en MPEG 83
350/H_{2}O (50/50)
80 Titanio al 40% en PG seco 76
Ejemplo 2 Estudios de estabilidad de formulaciones de acetato de leuprolida irradiadas
Se prepararon formulaciones de acetato de leuprolida al 40% (p/p) tal como se recibió, (equivalentes a base libre de leuprolida al 37%) en PG, como se describió anteriormente, y se usaron para llenar los recipientes de los dispositivos de suministro de fármaco, también descritos anteriormente. Todos los recipientes se fabricaron de materiales polímeros.
Los dispositivos llenos se sometieron a irradiación gamma de 2,5 megarad. Las muestras se enviaron a Sterigenics (Tustin, California) y se irradiaron con radiación gamma (Cobalto 60) por lotes. Las muestras marcadas como "frías" se enviaron e irradiaron sobre hielo seco. A continuación, las muestras se sometieron a envejecimiento acelerado, como en el Ejemplo 1. Las muestras se tomaron en el día 0 y en el día 7, y se analizaron usando RP-HPLC y SEC, como se describió anteriormente, para determinar la estabilidad química y física de las formulaciones irradiadas.
Los resultados, presentados en la Tabla IV, demuestran que estas formulaciones de acetato de leuprolida eran estables tras la irradiación. En cada caso, quedaba retenido al menos 65% de leuprolida, con niveles bajos de formación de agregados.
TABLA IV Estabilidad de formulaciones próticas de acetato de leuprolida al 40% (p/p), tras irradiación gamma de 2,5 megarad. en recipientes polímeros
Formulación Irradiación % de leuprolida SEC
en el día 7
(RP-HPLC)
Día 0 Día 7
% de % de % de % de
monómero dímero/trímero monómero dímero/trímero
al 40% en PG Si 88 97,4 0,9 94,5 3,7
al 40% en PG No 75 98,8 0,03 91,9 5,9
al 40% en PG Frío 75 98,3 0,2 92,2 5,6
Ejemplo 3 Estudios de solubilidad de acetato de leuprolida en PG
Se prepararon formulaciones de acetato de leuprolida en PG, como se describió anteriormente. Las formulaciones se calentaron a 80ºC para acelerar la disolución de la leuprolida en PG. Los datos se presentan en la Tabla V debajo.
TABLA V % de Leuprolida en PG
Peso de acetato de Peso de PG (mg) Peso total % de Acetato de
leuprolida (mg) leuprolida
148,6 225,7 374,3 39,70
154 183,7 337,7 45,60
146,8 147,2 294 49,93
Ejemplo 4 Estudios de estabilidad acelerada a largo plazo de acetato de leuprolida en PG
Se prepararon soluciones de acetato de leuprolida al 40% (p/p) en PG, se cargaron en recipientes, se almacenaron durante dos meses a 80ºC y se analizaron como se describió anteriormente. Los resultados, mostrados en las Figuras 1 (RP-HPLC) y 2 (SEC), muestran que se recuperó 55,9% de leuprolida, con sólo 37,2% de degradación química y 15,2% de agregación física, tras el período de dos meses. Estas formulaciones eran estables (como se definió anteriormente), tras siete días a 80ºC, lo cual corresponde a dos meses a 37ºC.
Las soluciones de acetato de leuprolida al 40% (p/p) en PG se prepararon, se cargaron en recipientes, se almacenaron a 80ºC durante cuatro meses y se analizaron usando RP-HPLC, como se describió anteriormente. La Figura 5 es un gráfico de leuprolida, y sus productos de degradación química y física recuperados durante el período de tiempo de cuatro meses. La suma de estos tres elementos se presenta también como equilibrio de masa. Los resultados muestran que podemos contar con todo el material peptídico, bien como leuprolida intacta, o como una especie de degradación, indicando que a los estudios de estabilidad no les falta un procedimiento o producto de degradación desconocidos.
Se prepararon soluciones de acetato de leuprolida al 40% (p/p) en PG, se cargaron en recipientes, se almacenaron a 37ºC, 50ºC, 65ºC u 80ºC durante cuatro a seis meses y se analizaron usando RP-HPLC, como se describió anteriormente. Los resultados, presentados en la Figura 4, muestran que la degradación de leuprolida se ajusta a una cinética de pseudo-primer orden. Adicionalmente, como se argumenta más adelante, la Figura 3 indica que la degradación de leuprolida en PG, se ajusta a una cinética de Arrhenius lineal. Por tanto, los estudios de estabilidad acelerada son una técnica válida para valorar la estabilidad de la leuprolida y para extrapolar nuevamente hasta 37ºC.
Se prepararon soluciones de acetato de leuprolida al 40% (p/p) en PG, se cargaron en recipientes, se almacenaron a 37ºC, 50ºC, 65ºC u 80ºC, y se analizaron usando RP-HPLC, como se describió anteriormente. Los resultados se calcularon según se describe en Physical Pharmacy: Physical Chemical Principles in the Pharmaceutical Sciences, 3ª edición, Martin et al, capítulo 14 (1983), y mostraban que la E_{a} de estas soluciones era 16,6 kcal/mol, con una t_{90} de 9,6 meses a 37ºC. Los datos se muestran debajo y el gráfico de Arrhenius de los datos se representa en la Figura 3.
PG
ºC Kobs (meses^{-1}) t_{1/2} (meses)
37 1,12 x 10^{-2} 61,6
50 3,13 x 10^{-2} 22,2
65 8,64 x 10^{-2} 8,0
80 0,322 2,4
E^{a} = 16,6 kcal/mol
Ejemplo 5 Estudios de estabilidad a largo plazo de acetato de leuprolida en PG
En la Figura 6 se representa la estabilidad química de soluciones de acetato de leuprolida al 40% preparadas y analizadas como se describió anteriormente. Tras nueve meses a 37ºC, estaba presente más del 90% (90,1%) de leuprolida, formándose menos de 5% (3,1%) de productos de degradación química (mostrados como "tempranos") y menos de 10% (5,6%) de agregación física (mostrada como "tardíos"), basándose en datos de RP-HPLC, pero de acuerdo con los datos de SEC.
Ejemplo 6 Estudios de estabilidad a largo plazo de acetato de leuprolida en PG/tampón de acetato
Se prepararon soluciones de acetato de leuprolida al 30% (p/p) en PG/tampón de acetato (pH 5,0, 0,0282 M) (30:70) como se describió anteriormente, luego se cargaron en ampollas de vidrio, se irradiaron como se describió anteriormente y se almacenaron a 37ºC durante un año. El análisis (como se describió anteriormente) mediante RP- HPLC (Figura 7) y SEC (Figura 8), mostró que estas formulaciones eran estables. Tras nueve meses, la RP-HPLC mostraba que más de 70% de leuprolida químicamente activa estaba presente en las formulaciones. Los resultados de SEC mostraban que 90% de leuprolida físicamente estable estaba presente, tras 9 meses a 37ºC.
Ejemplo 7 Estudios de estabilidad acelerada a largo plazo de acetato de leuprolida en PG/agua
Se prepararon formulaciones de acetato de leuprolida al 40% (p/p) en PG/agua con conservantes (30:70), mezclando metil-paraben al 0,18% y propil-paraben al 0,025% con agua, preparando PG/agua 30:70 con solución conservante y disolviendo el acetato de leuprolida en esta solución, como se describió anteriormente. Las formulaciones se cargaron en ampollas de vidrio, luego se irradiaron y se almacenaron a 60ºC, como se describió anteriormente.
La pureza se ensayó durante un período de seis meses, como se describió anteriormente. Los resultados se presentan en la Figura 9. Estos datos muestran que estas formulaciones tenían una pureza superior a 90% a 45 días y aproximadamente 65% a los seis meses. El punto de datos del día 90 mostraba una desviación estándar muy elevada.
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Ejemplo 8 Estudios de estabilidad a largo plazo de acetato de leuprolida en PG/agua
Se prepararon formulaciones de acetato de leuprolida al 40% (p/p) en PG/agua (30:70) como se describió anteriormente, se cargaron en ampollas de vidrio, se irradiaron y se almacenaron a 37ºC durante seis meses como se describió anteriormente, a continuación se ensayaron usando HPLC.
Los resultados, presentados en la Figura 10, mostraron que quedaba más de 70% de leuprolida tras seis meses.
Ejemplo 9 Estudios de estabilidad acelerada de goserelina en PEG 600/tampón de acetato
Se almacenaron formulaciones de goserelina al 30% (p/p) en PEG 600/tampón de acetato (30:70), preparadas como se describió anteriormente para el acetato de leuprolida, en ampollas de vidrio durante 14 días a 80ºC y se analizaron para pureza, como se describió anteriormente.
Los resultados de la Figura 11 muestran que tras nueve días, quedaba más de 65% de goserelina.
Ejemplo 10 Estudios de estabilidad de formulaciones de goserelina
Se prepararon formulaciones de goserelina al 40-45% (p/p), bien en PEG 600 o en PG/tampón de acetato (30:70) como se describió anteriormente, y se colocaron en recipientes polímeros. Los recipientes se almacenaron a 37ºC durante un mes en una incubadora. Las muestras se analizaron usando RP-HPLC para determinar la estabilidad química de las formulaciones envejecidas.
Los resultados, presentados debajo, demuestran que estas formulaciones eran capaces de mantener la estabilidad de la goserelina, compuesto relacionado con LHRH. En cada caso, se retenía al menos 98% de goserelina, como se indica por los datos de pureza.
Fármaco Vehículo % De pureza % De concentración
goserelina PEG 600 99,3 23,6
goserelina PG/tampón de acetato 98,2 49,7
(30:70)
Ejemplo 11 Estudios de estabilidad de formulaciones de nafarelina
Se prepararon formulaciones de nafarelina al 15% (p/p), bien en PEG 600 o propilenglicol, como se describió anteriormente para la leuprolida, y se colocaron en recipientes polímeros.
Los recipientes se almacenaron a 37ºC durante un mes en una incubadora.
Las muestras se analizaron usando RP-HPLC para determinar la estabilidad química de las formulaciones envejecidas.
Los resultados, presentados debajo, demuestran que estas formulaciones fueron susceptibles de mantener la estabilidad de la nafarelina, compuesto relacionado con LHRH. En cada caso, se retenía al menos 99% de nafarelina, como se indica mediante los datos de pureza.
Fármaco Vehículo % De pureza % De concentración
goserelina PEG 600 99,4 15,8
goserelina PG 99,4 12,9
La modificación de los distintos modos de realización de esta invención descritos anteriormente será evidente para los expertos en la técnica siguiendo las indicaciones de esta invención según se han expuesto en la misma. Los ejemplos descritos anteriormente no son limitativos, sino meramente ejemplares de esta invención, cuyo alcance se define mediante las siguientes reivindicaciones.

Claims (19)

1. Una formulación no acuosa estable para administrar a un paciente, que comprende:
a)
al menos un compuesto peptídico; y
b)
un disolvente para el compuesto peptídico, el cual consiste en al menos un disolvente prótico no acuoso en el cual dicho compuesto peptídico tiene una solubilidad de al menos 10% (p/p) y en el cual está disuelto el compuesto peptídico,
en la que dicha formulación es estable a 37ºC durante al menos 2 meses, de forma que queda al menos 65% de compuesto peptídico física y químicamente estable, tras dos meses a 37ºC.
2. Un método para preparar la formulación estable no acuosa de la reivindicación 1, que comprende proporcionar al menos un compuesto peptídico y seleccionar un disolvente para el compuesto peptídico, consistiendo el disolvente en al menos un disolvente prótico no acuoso en el que dicho compuesto peptídico tiene una solubilidad de al menos 10% (p/p), y disolver dicho compuesto peptídico en el disolvente prótico no acuoso.
3. La formulación de la reivindicación 1 o el método de la reivindicación 2, en los que hay al menos 10% (p/p) del compuesto peptídico.
4. La formulación de la reivindicación 1 o el método de la reivindicación 2, en los que hay al menos 30% (p/p) del compuesto peptídico.
5. La formulación o método de cualquier reivindicación precedente, en los que dicho compuesto peptídico es un compuesto relacionado con LHRH.
6. La formulación o método de la reivindicación 5, en los que dicho compuesto peptídico se selecciona del grupo formado por leuprolida, LHRH, nafarelina y goserelina.
7. La formulación o método de cualquier reivindicación precedente, en los que la formulación está adaptada para uso en un dispositivo implantable de suministro de fármacos.
8. La formulación o método de cualquier reivindicación precedente, en los que dicho o dichos disolventes próticos no acuosos se seleccionan del grupo formado por PG, PEG y glicerol.
9. La formulación o método de cualquier reivindicación precedente, en los que la formulación forma un gel.
10. La formulación o método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en los que la formulación está provista además de al menos un disolvente aprótico polar, no acuoso.
11. La formulación o método de la reivindicación 10, en los que dicho disolvente aprótico polar es DMSO o DMF.
12. La formulación o método de cualquier reivindicación precedente, en los que la formulación está provista además de al menos un componente seleccionado del grupo formado por un excipiente, un tensioactivo, un solubilizante y un conservante.
13. La formulación o método de la reivindicación 1 o de la reivindicación 2, que consisten esencialmente en 30% a 50% (p/p) de acetato de leuprolida, compuesto relacionado con LHRH, en PG o PEG o una de sus mezclas.
14. El método de la reivindicación 2, para producir una formulación que es estable tras irradiación.
15. El método de la reivindicación 2, para producir una formulación que es estable a 37ºC durante al menos un año.
16. El método de la reivindicación 2, para producir una formulación no acuosa estable, que presenta actividad bacteriostática, bactericida o esporicida.
17. El método de la reivindicación 16, en el que el péptido es leuprolida, presente en la formulación en una concentración de 50 a 400 mg/ml.
\newpage
18. El método de la reivindicación 10 o de la reivindicación 11, para formar una formulación que no gelifica.
19. El método de la reivindicación 18, en el que el péptido se selecciona de leuprolida, goserelina y calcitonina.
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