ES2202495T3

ES2202495T3 - Metodo enzimatico para tintar.

Info

Publication number: ES2202495T3
Application number: ES96945033T
Authority: ES
Inventors: Martin Barfoed; Ole Kirk
Original assignee: Novozymes AS; Novozymes North America Inc
Current assignee: Novozymes AS; Novozymes North America Inc
Priority date: 1995-12-22
Filing date: 1996-12-20
Publication date: 2004-04-01
Anticipated expiration: 2016-12-20
Also published as: JP2000502412A; BR9612147A; AU1349397A; ATE243789T1; CN1205754A; EP0870082B1; CN1110598C; DE69628850D1; JP3943133B2; WO1997023684A1; AR014090A1; US5972042A; TR199801128T2; EP0870082A1

Abstract

LA PRESENTE INVENCION ESTA RELACIONADA CON UNOS METODOS DE COLOREADO DE UN MATERIAL, CONSISTENTES EN TRATAR DICHO MATERIAL CON UN SISTEMA DE COLOREAMIENTO COMPUESTO DE (A) UNO O MAS COMPUESTOS AROMATICOS O HETEROAROMATICOS MONO -, DI O POLICICLICOS, Y (B) (I) UNA FUENTE DE PEROXIDO DE HIDROGENO Y UN ENZIMA QUE POSEA ACTIVIDAD PEROXIDASA O (II) UN ENZIMA QUE POSEA ACTIVIDAD OXIDASA SOBRE UNO O MAS COMPUESTOS AROMATICOS O HETEROAROMATICOS; ESTE MATERIAL ES UN TEJIDO, HILO, FIBRA, PRENDA O PELICULA HECHA DE ALGODON, DIACETATO, LINO, ROPA BLANCA, LIOCEL, POLIACRILICO, POLIAMIDA, POLIESTER, RAMIO, RAYON, TENCEL O TRIACETATO.

Description

Método enzimático para tintar.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a métodos para la coloración de una materia, los cuales comprenden el tratamiento de la materia con un sistema de coloración que comprende (a) uno o varios precursores del tinte aplicados seleccionados entre diaminas aromáticas, aminofenoles, fenoles y naftoles, cada uno de los cuales es sustituido opcionalmente por uno o varios grupos funcionales o sustituyentes, donde cada grupo funcional o sustituyente está seleccionado del grupo compuesto por halógeno; sulfo; sulfonato; sulfamino; sulfanilo; amino; amido; nitro; azo; imino; carboxi; ciano; formilo; hidroxi; halocarbonilo; carbamoilo; carbamidoilo; fosfonato; fosfonilo; alquilo C_{1-18}; alquenilo C_{1-18}; alquinilo C_{1-18}; alcoxi C_{1-18}; oxicarbonilo C_{1-18}; oxoalquilo C_{1-18}; sulfanil alquilo C_{1-18}; sulfonil alquilo C_{1-18}; imino o amino alquilo C_{1-18} sustituido con uno, dos o tres grupos alquilo C_{1-18}; donde cada grupo alquilo C_{1-18}, alquenilo C_{1-18} y alquinilo C_{1-18} puede ser mono-, di- o poli-sustituido por cualquiera de los grupos funcionales o sustituyentes precedentes; y (b) una enzima que muestra actividad oxidasa; donde la materia es un tejido, hilo, fibra, prenda o película de algodón, diacetato, lino, liocel, ramio o rayón; y donde los intermedios radicales están formados a partir de uno o más precursores del tinte aplicados.

Antecedentes de la invención

A menudo, la coloración de materias textiles se considera la fase independiente más importante y costosa en la producción de tejidos y prendas textiles. En la industria textil se utilizan habitualmente dos tipos principales de procesos de coloración: los procesos discontinuos y los continuos. En los proceso discontinuos se utilizan, entre otros, los tintes a chorro, de tambor y de tina. En los procesos continuos se utilizan, entre otros, la coloración por impregnación. Ver, p. ej., I.D. Rattee, In C.M. Carr (Ed.), "The Chemistry of the Textiles Industry," Blackie Academic and Professional, Glasgow, 1995, pág. 276.

Las clases de tintes más importantes son los azo (mono-, di-, tri, etc.), carbonilo (antraquinona y derivados del índigo), cianina, di- y trifenilmetano y ftalocianina. Todos estos tintes contienen grupos cromofóricos que provocan la coloración. Existen tres tipos de tintes que implican un mecanismo de oxidación/reducción, es decir, los tintes de tina, de azufre y los azoicos. El propósito de la fase de oxidación/reducción en estos tipos de tintes es cambiar la materia colorante entre una forma insoluble y una soluble.

Las oxidorreductasas, p. ej., las oxidasas y las peroxidasas, son bien conocidas en la técnica.

Un tipo de oxidorreductasas son las lacasas (oxidorreductasas benzenodiol : oxígeno), las cuales son enzimas con un contenido de cobre que catalizan la oxidación de los fenoles y compuestos relacionados. La oxidación por medio de la lacasa da como resultado la producción de intermedios radicales aromáticos a partir de sustratos adecuados; el acoplamiento definitivo de los productos intermedios producidos de este modo proporciona una combinación de productos reactivos diméricos, oligoméricos y poliméricos. Estas reacciones son importantes en la naturaleza en las vías biosintéticas que conducen a la formación de melanina, alcaloides, toxinas, ligninas y ácidos húmicos.

Otra clase de oxidorreductasas son las peroxidasas que oxidan compuestos en presencia de peróxido de hidrógeno.

Se ha descubierto que las lacasas son útiles para tintar el cabello. Ver, p. ej., las solicitudes de PCT serie N°. PCT/US95/06815 y PCT/US95/06816. La Patente Europea N°. 0504005 expone que las lacasas pueden ser usadas para tintar lana con un pH en una gama entre 6.5 y 8.0.

Saunders et al., Peroxidase, London, 1964, pág. 10 y sig. expone que las peroxidasas actúan en varios compuestos amino y fenólicos dando como resultado la producción de un color.

La publicación de la solicitud de patente japonesa N° 6-316874 expone un método para tintar algodón que comprende el tratamiento del algodón con un medio que contiene oxígeno, donde se utiliza una enzima de oxidación- reducción seleccionada a partir del grupo compuesto por ascorbato oxidasa, bilirrubina oxidasa, catalasa, lacasa, peroxidasa y polifenol oxidasa para generar el oxígeno. La patente JP-A-2104773 expone la coloración de p. ej. el algodón mediante un sistema de tintura que comprende un compuesto de indol y una enzima.

La patente WO 91/05839 expone que las oxidasas y las peroxidasas son útiles para inhibir la transferencia de tintes textiles.

Un objetivo de la presente invención es proporcionar un método enzimático para tintar tejidos.

Resumen de la invención

La presente invención se refiere a métodos para tintar una materia, los cuales comprenden el tratamiento de la materia con un sistema de coloración que comprende (a) uno o varios precursores del color aplicados seleccionados entre diaminas aromáticas, aminofenoles, fenoles y naftoles, cada uno de los cuales es sustituido de forma opcional por uno o varios grupos funcionales o sustituyentes, donde cada grupo funcional o sustituyente está seleccionado a partir del grupo compuesto por halógeno; sulfo; sulfonato; sulfamino; sulfanilo; amino; amido; nitro; azo; imino; carboxi; ciano; formilo; hidroxi; halocarbonilo; carbamoilo; carbamidoilo; fosfonato; fosfonilo; alquilo C_{1-18}; alquenilo C_{1-18}; alquinilo C_{1-18}; alcoxi C_{1-18}; oxicarbonilo C_{1-18}; oxoalquilo C_{1-18}; sulfanil alquilo C_{1-18}; sulfonil alquilo C_{1-18}; imino o amino alquilo C_{1-18} sustituido con uno, dos o tres grupos alquilo C_{1-18}; donde cada grupo alquilo C_{1-18}, alquenilo C_{1-18} y alquinilo C_{1-18} puede ser mono-, di- o polisustituido por cualquiera de los grupos funcionales o sustituyentes precedentes; y (b) una enzima que exhibe actividad oxidasa; donde la materia es un tejido, hilo, fibra, prenda o película de algodón, diacetato, lino, liocel, ramio o rayón; y donde los intermedios radicales están formados por uno o más precursores del color aplicados.

Descripción detallada de la invención

La utilización de oxidorreductasas para la coloración de materias tiene varias ventajas significativas. Por ejemplo, el sistema de coloración utilizado en el proceso de la presente invención utiliza unos precursores del color económicos. Además, las condiciones suaves del proceso (p. ej., una temperatura más baja y una duración inferior) producen menos daños en el tejido y un menor consumo de energía.

En los métodos de la presente invención, se tinta una materia con uno o varios precursores del color aplicados seleccionados a partir de diaminas aromáticas, aminofenoles, fenoles y naftoles, cada uno de los cuales es sustituido opcionalmente con uno o varios grupos funcionales o sustituyentes, donde cada grupo funcional o sustituyente está seleccionado a partir del grupo compuesto por halógeno; sulfo; sulfonato; sulfamino; sulfanilo; amino; amido; nitro; azo; imino; carboxi; ciano; formilo; hidroxi; halocarbonilo; carbamoilo; carbamidoilo; fosfonato; fosfonilo; alquilo C_{1-18}; alquenilo C_{1-18}; alquinilo C_{1-18}; alcoxi C_{1-18}; oxicarbonilo C_{1-18}; oxoalquilo C_{1-18}; sulfanil alquilo C_{1-18}; sulfonilo alquilo C_{1-18}; imino o amino alquilo C_{1-18} sustituido con uno, dos o tres grupos alquilo C_{1-18}. Todos los grupos alquilo C_{1-18}, alquenilo C_{1-18} y alquinilo C_{1-18} pueden ser mono-, di o poli-sustituidos por cualquiera de los grupos funcionales o sustituyentes del procedimiento.

Ejemplos de compuestos aromáticos y heteroaromáticos de uso en la presente invención incluyen, pero sin descartar otros:

2-metoxi-p-fenilenodiamina,

1-amino-4-b-metoxietilamino-benceno (N-b-metoxietil p-fenilenodiamina),

1-amino-4-bis-(b-hidroxietiil)-aminobenceno

(N,N-bis-(b-hidroxietil)-p-fenilenodiamina),

2-metil-1,3-diamino-benceno (2,6-diaminotolueno),

2,4-diaminotolueno,

2,6-diaminopiridina,

1-hidroxi-4-metilamino-benceno (p-metilaminofenol),

1-metoxi-2,4-diamino-benceno (2,4-diaminoanisola),

1-etoxi-2,3-diamino-benceno (2,4-diaminofenetola),

1-b-hidroxietiloxi-2,4-diamino-benceno (2,4-diaminofenoxietanol),

4,8-disulfonato-1-naftol,

3-sulfonato-6-amino-I-naftol (ácido J),

6,8-disulfonato-2-naftol,

1,4-Fenilenodiamina

2,5-Diamintolueno

2-Cloro-1,4-fenilenodiamina

2-Aminofenol

3-Aminofenol

4-Aminofenol

1,3-Fenilenodiamina

1-Naftol

2-Naftol

4-Clororesorcinol

1,2,3-bencenotriol (Pirogallol)

1,3-Bencenodiol (Resorcinol)

1,2-Bencenodiol (Pirocatecol)

Ácido 2,3-diaminobenzoico

Ácido 2,4-diaminobenzoico

Ácido 3,4-diaminobenzoico

Ácido 3,5-diaminobenzoico

Metil 2,3-diaminobenzoato

Etil 2,3-diaminobenzoato

Isopropil 2,3-diaminobenzoato

Metil 2,4-diaminobenzoato

Etil 2,4-diaminobenzoato

Isopropil 2,4-diaminobenzoato

Metil 3,4-diaminobenzoato

Etil 3,4-diaminobenzoato

Isopropil 3,4-diaminobenzoato

Metil 3,5-diaminobenzoato

Etil 3, 5-diaminobenzoato

Isopropil 3,5-diaminobenzoato

Amida del ácido N,N-dimetil-3,4-diaminobenzoico

Amida del ácido N,N-dietil-3,4-diaminobenzoico

Amida del ácido N,N-dipropil-3,4-diaminobenzoico

Amida del ácido N,N-dibutil-3,4-diaminobenzoico

4-Cloro-1-naftol

N-Fenil-p-fenilenodiamina

Ácido 2-Amino-8-naftol-6-sulfónico (ácido Gamma)

Ácido 5-Amino-1-naftol-3-sulfónico (ácido M)

Ácido 2-Naftol-3,6-disulfónico (ácido R)

Ácido 1-Amino-8-naftol-2,4-disulfónico (ácido Chicago)

Ácido 1-Naftol-4-sulfónico (ácido de Neville-winther)

Naftol AS

Naftol AS OL

Naftol AS PH

Naftol AS KB

Naftol AS BS

Naftol AS D

Naftol AS B1

2,3-Diaminonaftaleno

1,5-Diaminonaftaleno

1,8-Diaminonaftaleno

4-Aminotiofenol

4-Hidroxitiofenol

Sulfato 4,4'-Diaminodifenilamina

N,N-Dimetil-1,4-fenilenodiamina

N, N-Dietil-1,4-fenilenodiamina

N-Fenil-1,2-fenilenodiamina

6-Amino-2-naftol

3-Amino-2-naftol

5-Amino-1-naftol

1,2-Fenilenodiamina

Negro Azulado de Naftol, Negro Ácido 1, CI 20470 and

p-Bromofenol.

La materia tintada según los métodos de la presente invención es un tejido, hilo, fibra, prenda o película. Preferiblemente, la materia es de algodón, diacetato, lino, liocel, ramio o rayón. La solución del tinte, que incluye la materia, usada en los métodos de la presente invención puede tener una proporción de agua/materia en la gama de aproximadamente 0.5:1 hasta aproximadamente 200:1, preferiblemente de aproximadamente 5:1 hasta aproximadamente 20:1.

Según los métodos de la presente invención, el o los precursores de la coloración aplicados seleccionados a partir de diaminas aromáticas, aminofenoles, fenoles y naftoles pueden ser oxidados por una enzima que muestre actividad oxidasa, p. ej., fenoles y sustancias relacionadas. Las enzimas que muestran actividad oxidasa comprenden bilirrubina oxidasa (EC 1.3.3.5), catecol oxidasa (EC 1.10.3.1), lacasa (EC 1.10.3.2), o-aminofenol oxidasa (EC 1.10.3.4) y polifenol oxidasa (EC 1.10.3.2), aunque no se limitan a éstas. Los ensayos para determinar la actividad de estas enzimas son muy conocidos por los expertos en la técnica.

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Preferiblemente, la enzima es una lacasa obtenida a partir de un género seleccionado del grupo compuesto por Aspergillus, botrytis, Collybia, Fomes, Lentinus, Myceliophthora, Neurospora, Pleurotus, Podospora, Polyporus, Scytalidium, Trametes, y Rhizoctonia. En una forma de realización más preferida, la lacasa se obtiene a partir de especies seleccionadas del grupo compuesto por Humicola brevis var. thermoidea, Humicola brevispora, Humicola grisea var. thermoidea, Humicola insolens y Humicola lanuginosa (también conocida como Thermomyces lanuginosus), Myceliophthora thermophila, Myceliophthora vellerea, Polyporus pinsitus, Scytalidium thermophila, Scytalidium indonesiacum y Torula thermophila. La lacasa puede obtenerse a partir de otras especies de Scytalidium, como Scytalidium acidophilum, Scytalidium album, Scytalidium aurantiacum, Scytalidium circinatum, Scytalidium flaveobrunneum, Scytalidium hyalinum, Scytalidium lignicola y Scytalidium uredinicolum. La lacasa puede obtenerse a partir de otras especies de Polyporus, como Polyporus zonatus, Polyporus alveolaris, Polyporus arcularius, Polyporus australiensis, Polyporus badius, Polyporus biformis, Polyporus brumalis, Polyporus ciliatus, Polyporus colensoi, Polyporus eucalyptorum, Polyporus meridionalis, Polyporus varius, Polyporus palustris, Polyporus rhizophilus, Polyporus rugulosus, Polyporus squamosus, Polyporus tuberaster y Polyporus tumulosus. También se puede obtener la lacasa a partir de especies de Rhizoctonia, p. ej., Rhizoctonia solani. La lacasa puede también ser una lacasa modificada por al menos un residuo aminoácido en un sitio de cobre Tipo I (T1), donde la oxidasa modificada posee un pH alterado y/o una actividad específica relativa a la oxidasa de tipo salvaje. Por ejemplo, la lacasa modificada podría ser modificada en el segmento (a) del sitio de cobre T1.

Los métodos de producción de enzimas para su utilización según la invención están descritos en la técnica, p. ej., FEBS Letters 1625, 173(1), Applied and Environmental Microbiology, Feb. 1985, págs. 273-278, Applied Microbiol. Biotechnol. 26, 1987, págs. 158-163, Biotechnology Letters 9(5), 1987, págs. 357-360, Nature 326, 2 April 1987, FEBS Letters 4270, 209(2), pág. 321, EP 179 486, EP 200 565, GB 2 167 421, EP 171 074 y Agric. Biol. Chem. 50(1), 1986, pág. 247.

Las enzimas particularmente preferidas son las que son activas con un pH en la gama de aproximadamente 2.5 hasta aproximadamente 12.0, preferiblemente en la gama de aproximadamente 4 hasta aproximadamente 10, más preferiblemente en la gama de aproximadamente 4.0 hasta aproximadamente 7.0 y en la gama de aproximadamente 7.0 hasta aproximadamente 10.0. Estas enzimas pueden ser aisladas seleccionando la producción relevante de enzirnas de microorganismos alcalofílicos, p. ej., usando el ensayo ABTS descrito en R.E. Childs y W.G. Bardsley, Biochem. J. 145, 1975, págs. 93-103.

Otras enzimas preferidas son aquellas que muestran una buena termoestabilidad, así como una buena estabilidad frente a los aditivos de tintura usados comúnmente como, por ejemplo, los agentes tensioactivos no-iónicos, catiónicos o aniónicos, los agentes quelantes, las sales, los polímeros, etc.

Las enzimas pueden ser producidas también por un método que comprende el cultivo de una célula huésped transformada por un vector de ADN recombinante con una secuencia de ADN que codifica dicha enzima, así como secuencias de ADN que codifican funciones que permiten la expresión de la secuencia de ADN que codifica la enzima, en un medio de cultivo bajo unas condiciones que permiten la expresión de la enzima y la recuperación de la enzima del cultivo.

Por ejemplo, se puede aislar un fragmento de ADN que codifica la enzima, estableciendo un ADNc o banco genómico de un microorganismo que produce la enzima de interés, como por ejemplo, uno de los organismos anteriormente mencionados, y seleccionando los clones positivos mediante procedimientos convencionales, como por ejemplo, hibridación de sondas oligonucleótidas sintetizadas en base a la secuencia completa o parcial de aminoácidos de la enzima, o bien, seleccionando los clones que expresan una actividad enzimática apropiada, o seleccionando los clones que producen una proteína que es reactiva con un anticuerpo contra la enzima nativa.

Una vez realizada la selección, se puede introducir la secuencia de ADN en un vector de expresión replicable adecuado que incluya secuencias promotoras, operadoras y de terminación apropiadas que permitan que la enzima sea expresada en un organismo huésped particular, así como un origen de replicación que permita la replicación del vector en el organismo huésped en cuestión.

El vector de expresión resultante puede ser transformado posteriormente en una célula huésped adecuada, como una célula micótica, ejemplos preferidos de los mismos son las especies de Aspergillus, más preferiblemente de Aspergillus oryzae o Aspergillus Niger. Las células micóticas pueden ser transformadas mediante un proceso que implica la formación y la transformación de protoplastos seguido de la regeneración de la pared celular según un modo conocido per se. La utilización de Aspergillus como microorganismo huésped se describe en la patente EP 238,023 (de Novo Industri NS), cuyo contenido está incorporado a la presente por referencia.

De forma alternativa, los organismos huésped pueden ser una bacteria, en particular una cepa de Streptomyces, Bacillus, o E. coli. Se puede realizar la transformación de células bacterianas según métodos convencionales, p. ej., según se describe en T. Maniatis et al., Molecular Clonina: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, 1982.

La selección de secuencias de ADN apropiadas y la construcción de vectores puede también llevarse a cabo mediante procedimientos estándares, ver. T. Maniatis et al., op. cit.

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El medio empleado para cultivar las células huésped transformadas puede ser cualquier medio convencional adecuado para el desarrollo de las células huésped en cuestión. La enzima expresada puede ser segregada convenientemente en el medio de cultivo y puede ser recuperada del mismo mediante procedimientos bien conocidos entre los que se incluyen: separación de las células del medio por centrifugado o filtración, precipitación de los componentes proteicos del medio con una sal, como por ejemplo sulfato amónico, seguido de procedimientos cromatográficos como: cromatografía de intercambio iónico, cromatografía de afinidad o similares.

En los métodos de la presente invención, se puede emplear una temperatura en la gama entre aproximadamente 5 y aproximadamente 120 grados Celsius, preferiblemente en la gama entre aproximadamente 5 y aproximadamente 80 grados Celsius, y más preferiblemente en la gama entre aproximadamente 15 y aproximadamente 70 grados Celsius, y un pH en la gama entre aproximadamente 2.5 y aproximadamente 12, preferiblemente entre aproximadamente 4 y aproximadamente 10, más preferiblemente en la gama entre aproximadamente 4.0 y aproximadamente 7.0 o en la gama entre aproximadamente 7.0 y aproximadamente 10.0. Preferiblemente, se utiliza una temperatura y un pH próximos a la temperatura y al pH óptimos de la enzima, respectivamente.

El sistema de coloración empleado en los métodos de la presente invención puede incluir adicionalmente un ión mono- o divalente que incluye, sin descartar otros, iones de sodio, potasio, calcio y magnesio (0-3 M, preferiblemente 25 mM-1 M), un polímero que incluye, sin descartar otros, polivinilpirrolidona, polivinilalcohol, poliaspartato, polivinilamida, óxido de polietileno (0-50 g/l, preferiblemente 1-500 mg/l), y un agente tensioactivo (10 mg-5 g/l).

Algunos ejemplos de tales agentes tensioactivos son los agentes tensioactivos aniónicos como los carboxilatos, por ejemplo, un carboxilato de metal de ácidos grasos de cadena larga; N-acilsarcosinatos; mono o di-ésteres de ácido fosfórico con etoxilados de alcoholes grasos o sales de tales ésteres; sulfatos de alcoholes grasos, como sodio dodecil sulfato, sodio octadecil sulfato o sodio cetil sulfato; sulfatos de alcoholes grasos etoxilados; sulfatos de alquilofenoles etoxilados; sulfonatos de lignina; sulfonatos de petróleo; alquil aril sulfonatos como los alquilbenceno sulfonatos o los alquil naftaleno sulfonatos inferiores, p. ej., butilnaftaleno sulfonato; sales o condensados de naftaleno-formaldehído sulfonados; sales de condensados de fenol-formaldehído sulfonados; o sulfonatos más complejos como los amida sulfonatos, p. ej., el producto de condensación sulfonado del ácido oleico y N-metil taurina o los dialquil sulfosuccinatos, p. ej., el sulfonato de sodio o dioctil succinato. Otros ejemplos de tales agentes tensioactivos son los agentes tensioactivos no iónicos como por ejemplo, los productos de condensación de los ésteres de ácidos grasos, alcoholes grasos, amidas de ácidos grasos o fenoles sustituidos con alquenilo o alquilo grasos con óxido de etileno, copolímeros de bloque de óxido de etileno y óxido de propileno, glicoles acetilénicos como 2,4,7,9-tetraetil-5-decin-4,7-diol, o glicoles acetilénicos etoxilados. Otros ejemplos de tales agentes tensioactivos son los agentes tensioactivos catiónicos como las mono-, di- o poliaminas alifáticas, como los acetatos, naftenatos u oleatos; aminas que contienen oxígeno como el óxido de amina de polioxietileno alquilamina; aminas con enlaces de amida preparadas por la condensación de un ácido carboxílico con una di- o poliamina; o sales amónicas cuaternarias.

En una forma de realización preferida, en primer lugar se empapa la materia en una solución acuosa que incluye el o los precursores del color seleccionados a partir de diaminas aromáticas, aminofenoles, fenoles y naftoles; y luego se trata la materia empapada con la enzima.

En otra forma de realización preferida, el sistema de coloración consta además de un agente que intensifica la actividad de la enzima que exhibe actividad oxidasa. Los intensificadores son muy conocidos en la técnica. Por ejemplo, los compuestos químicos orgánicos descritos en la patente WO 95/01426 son conocidos por intensificar la actividad de una lacasa.

La invención se ilustra posteriormente mediante los siguientes ejemplos que no pretenden ser limitativos.

Ejemplos Ejemplo 1 Determinación de la actividad lacasa

La actividad lacasa se determinó a partir de la oxidación de la siringaldazina en condiciones aeróbicas. El color violeta producido fue medido por espectrofotometría en 530 nm. Las condiciones analíticas fueron 19 microM de siringaldazina, tampón acetato 23.2 mM, pH 5.5, 30 grados Celsius y un tiempo de reacción de 1 minuto. Una unidad de lacasa (LACU) es la cantidad de lacasa que cataliza la conversión de 1 micromol de siringaldazina por minuto en estas condiciones.

Determinación de la actividad peroxidasa

Una unidad de peroxidasa (POXU) es la cantidad de enzima que cataliza la conversión de 1 micromol de peróxido de hidrógeno por minuto con las siguientes condiciones analíticas: peróxido de hidrógeno 0.88 mM, 2,2'-azinobis(3-etilbenzotiazolina-6-sulfonato) 1.67 mM, tampón de fosfato 0.1 M (conteniendo Triton X405 (1.5 g/1000 ml)), pH 7.0, incubado a 30 grados Celsius, seguido fotométricamente a 418 nm (se establece el coeficiente de extinción del ABTS en 3.6 I/mmol*mm)).

Coloración de tejidos

Se disolvieron 5 mg de un primer compuesto (p-fenilenodiamina ("A"), p-toluenodiamina ("B") u o-aminofenol ("C")) y 5 mg de un segundo compuesto (m-fenilenodiamina ("D"), alfa-naftol ("E") o 4-clororesorcinol ("F")) (o 10 mg del primer compuesto en los experimentos sin el segundo compuesto) en 10 ml de un tampón de K_{2}HPO_{4} 0.1 M, pH 7.0. Se diluyó una lacasa de Polyporus pinsitus ("PpL") con una actividad de 71.7 LACU/ml (depositada ante el Centraal Bureau voor Schimmelcultures con número de acceso CBS 678.70) o una lacasa de Myceliophthora thermophila ("MtL") con una actividad de 690 LACU/ml (depositada ante el Centraal Bureau voor Schimmelcultures con número de acceso CBS 117.65)) en el mismo tampón hasta una actividad de 10 LACU/ml.

Se enrollaron unas muestras de multifibra Estilo 10A (4x10 cm) obtenidas de Test Fabrics Inc. (Middlesex, Nueva Jersey) y se colocaron en un tubo de ensayo. Las muestras contenían bandas de diferentes fibras de algodón y de diacetato. Se añadieron 4.5 ml de la solución precursor/agente de acoplamiento y 1 ml de la solución de lacasa a los tubos de ensayo. Se cerraron los tubos de ensayo, se mezclaron, se depositaron en un agitador de tubos de ensayo y se incubaron durante 60 minutos en una cabina oscura. Tras la incubación, se enjuagaron las muestras en agua corriente caliente durante aproximadamente 30 segundos.

Los resultados del experimento se proporcionan en las siguientes tablas:

TABLA 1

Tejido	sólo A	A + D	A + E	A + F
Diacetato	Amarillo/naranja	azul	Púrpura	Naranja
	oscuro		rojo oscuro	oscuro
Algodón	Azul grisáceo	gris	gris	gris

TABLA 2

Tejido	sólo B	B + D	B + E	B + F
Diacetato	Rojo/naranja	Azul	Púrpura	Amarillo/
	oscuro	oscuro	oscuro	naranja
				oscuro
Algodón	Rojo	Azul	Gris	Gris
	grisáceo	grisáceo

TABLA 3

Tejido	sólo C	C + D	C + E	C + F
Diacetato	Amarillo	Amarillo	Naranja	Amarillo/naranja
	oscuro	oscuro	oscuro	oscuro
Algodón	Amarillo	Amarillo	Amarillo	Gris/amarillo
	claro	claro	claro

Los resultados demuestran que el diacetato se tinta con un matiz intenso, mientras que el algodón se tinta con un matiz claro en presencia de un precursor y de una lacasa de Polyporus pinsitus. Se obtienen resultados similares con la lacasa de Myceliophthora thermophila.

Ejemplo 2

Se tintaron varias materias en un "Launder-o-Metro" Atlas ("LOM") a 30 grados Celsius durante 1 hora con un pH en la gama de 4-10. Las materias tintadas (todas obtenidas de Test Fabrics Inc.) fueron Diacetato (Estilo 122, 5 cm x 5 cm), Algodón (Estilo 400, 5 cm x 5 cm) y Algodón Mercerizado (Estilo 400M, 5 cm x 5 cm).

Se preparó una solución de tampón 0.1 M de Britten-Robinson con el pH apropiado mezclando la solución A (H_{3}PO_{4} 0.1 M, CH_{3}COOH 0.1 M, H_{3}BO_{3} 0.1 M) y B (NaOH 0.5 M). Con el objetivo de producir soluciones tampón con pH 4, 5, 6, 7, 8, 9 y 10, se diluyeron 806 ml, 742 ml, 706 ml, 656 ml, 624 ml, 596 ml y 562 ml de la solución A, respectivamente, con la solución B hasta un litro.

A 75 ml de cada solución tampón se añadieron 0.5 mg/ml de un compuesto seleccionado de p-fenilenodiamina, o-aminofenol y m-fenilenodiamina. Se controló el pH y se ajustó, cuando fue necesario. Se combinaron las soluciones de 75 ml de tampón/compuesto para formar 150 ml de cada solución de combinación tampón/compuesto, las cuales fueron añadidas a un tambor del LOM.

A continuación, se empaparon las muestras de las materias en cada solución de la combinación tampón/compuesto. Luego se retiró un volumen correspondiente al volumen de lacasa a añadir. Se diluyó una lacasa de Myceliophthora thermophila ("MtL") con una actividad de 690 LACU/ml en la solución tampón hasta alcanzar una actividad de 300 LACU/ml. Se añadieron 2 LACU/ml para cada pH, excepto para el pH 7.0. Con el pH 7.0, se añadieron 0, 1, 2, 4 LACU/ml para el perfil de dosificación. Los tambores del LOM fueron luego depositados en el LOM. Después de 1 hora a 42 rpm y a 30 grados Celsius, se detuvo el LOM. Se extrajo el líquido y se enjuagaron las muestras en el tambor con agua corriente desionizada durante aproximadamente 15 minutos. Se secaron las muestras y se midieron los valores CIELAB con un ColorEye 7000. Los resultados CIELAB se dan en las tablas 4-7.

TABLA 4 Coloración con los precursores p-fenilenodiamina y m-fenilenodiamina (perfil del pH, 2 LACU/ml)

	pH 4	pH 5	pH 6	pH 7	pH 8	pH 9	pH 10
	L*	31.35	23.99	27.99	34.02	64.16	74.9	42.45
Algodón	a*	10.96	5.95	6.89	6.14	2.01	1.27	4.7
	b*	4.95	7.53	7.01	1.44	-8.62	-6	-5.65
Algodón	L*	29.02	29.11	28.1	35.15	64.63	71.1	44.21
Mercerizado	a*	13.41	12.88	6.64	5.97	1.55	0.9	3.96
	b*	8.03	7.56	7.24	0.55	-7.03	-6.84	-3.11
	L*	39.45	32.05	28.24	25.5	31.02	45.58	22.96
Diacetato	a*	2.52	2.36	2.52	3.38	5.27	4.45	4.06
	b*	-3.07	-3.82	-7.91	-11.1	-14.43	-6.53	-10.58

TABLA 5 Coloración con los precursores p-fenilenodiamina y m-fenilenodiamina (perfil de dosificación - pH 7)

	0 LACU	1 LACU	4 LACU
	L*	78.65	36.72	32.73
Algodón	a*	1.45	6.24	6.38
	b*	1.49	0.48	2.24
Algodón	L*	77.74	37.34	34.15
Mercerizado	a*	1.36	5.89	6.58
	b*	1.79	-0.65	1.6
	L*	57.32	26.21	24.78
Diacetato	a*	2.07	3.62	3.24
	b*	-1.85	-12.44	-10.1

TABLA 6 Coloración con los precursores o-aminofenol y m-fenilenodiamina (perfil del pH, 2 LACU/ml)

	pH 4	pH 5	pH 6	pH 7	pH 8	pH 9	pH 10
	L*	21.6	26.83	36.75	44.64	49.53	79.1	74.84
Algodón	a*	2.56	2.85	3.85	4.22	3.76	4.08	7.45
	b*	5.33	6.89	11.37	13.34	8.74	19.56	25.31
Algodón	L*	27.89	27.22	44.1	45.18	53.4	79.4	75.27
Mercerizado	a*	2.17	2.69	2.1	4.02	4.77	3.69	7.56
	b*	4.79	6.92	8.64	13.38	1.97	19.22	25.27
	L*	35.6	33.59	36.47	37.78	45.78	62.9	57.42
Diacetato	a*	3.6	4.12	8.47	10.47	10.11	6.59	7.06
	b*	10.36	13.65	22.21	27.16	32.99	37.21	37.8

TABLA 7 Coloración con los precursores o-aminofenol y m-fenilenodiamina(perfil de dosificación - pH 7)

	0 LACU	1 LACU	4 LACU
	L*	86.79	46.58	44.66
Algodón	a*	0.08	3.91	4.12
	b*	10.05	13.12	12.31
Algodón	L*	86.25	49.91	49.32
Mercerizado	a*	0.16	2.86	3.08
	b*	8.22	10.94	7.18
	L*	76.33	40.46	37.43
Diacetato	a*	1.76	9.8	11.78
	b*	21.99	28.08	27.66

Los parámetros "L*", "a*" y "b*" usados en las tablas se utilizan para cuantificar el color y son muy conocidos por los expertos en la ciencia del color. Ver por ejemplo, Billmeyer & Saltzman, Principles of Color Technology, Second Edition, John Wiley & Sons, New York, 1981, pág. 59.

Los resultados muestran que el algodón y el algodón mercerizado fueron teñidos por ambas combinaciones de compuestos con un pH bajo con unos colores intensos observados con un pH inferior a 6. El diacetato se tiñó con todos los pH, con la combinación de los colores de los tintes de p-fenilenodiamina y m-fenilenodiamina variando desde un color gris con un pH bajo hasta un color azul marino con un pH elevado, y la combinación de o-aminofenol y m-fenilenodiamina proporciona unos colores que varían desde un color pardo oscuro hasta un color naranja/amarillo.

En todos los experimentos de dosificación, no se observó ninguna diferencia notable entre las dosificaciones de 1, 2 ó 4 LACU/ml. El experimento de control con 0 LACU/ml demuestra claramente que la tintura está catalizada por la lacasa.

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Ejemplo 3

El perfil de tiempo para la coloración fue determinado usando el procedimiento descrito en el Ejemplo 2, a excepción únicamente de los experimentos que fueron realizados a un pH 5.0 y 8.0, a intervalos temporales de 0, 5, 15, 35 y 55 minutos. En cada experimento, se añadieron 2 LACU/ml de lacasa de Myceliophthora thermophila. Los resultados se muestran de las Tablas 8-11.

TABLA 8 Coloración con los precursores p-fenilenodiamina y m-fenilenodiamina. Perfil de tiempo, 2 LACU/ml, pH 5

	0 min	5 min	15 min	35 min	55 min
	L*	54.68	32.54	36.94	27.88	28.91
Algodón	a*	2.16	2.79	2.84	2.75	2.69
	b*	8.26	7.93	8.67	7.06	7.23
Algodón	L*	79.56	56.58	41.97	29.12	27.36
Mercerizado	a*	1.97	7.72	12.06	12.77	11.15
	b*	0.62	10.2	11.02	10.65	9.4
	L*	78.96	50.08	38.79	30.89	30.77
Diacetato	a*	0.1	1.06	1.62	1.87	1.96
	b*	1.69	-6.35	-5.22	-3.71	-3.81

TABLA 9 Coloración con los precursores p-fenilenodiamina y m-fenilenodiamina. Perfil de tiempo, 2 LACU/ml, pH 8

	0 min	5 min	15 min	35 min	55 min
	L*	79.54	57.37	48	46.03	44.07
Algodón	a*	0.39	2.57	3.53	4.18	4.57
	b*	-3.66	-6.57	-6.25	-3.98	-3.18
Algodón	L*	77.4	62.14	52.8	49.77	48.64
Mercerizado	a*	0.43	2.85	3.68	4.68	4.79
	b*	-0.96	-4.16	-4.04	-2.29	0.01
	L*	72.72	31.72	24.53	22.6	22.91
Diacetato	a*	-0.24	4.65	4.71	4.29	3.6
	b*	-8.41	-19.15	-14.73	-11.97	-12.11

TABLA 10 Coloración con los precursores o-aminofenol y m-fenilenodiamina. Perfil de tiempo, 2 LACU/ml, pH 5

	0 min	5 min	15 min	35 min	55 min
	L*	74.17	55.46	38.63	25.68	23.63
Algodón	a*	2.1	7.02	14.76	6.58	5.39
	b*	0.3	7.23	11.76	8.67	7.71
Algodón	L*	86.46	60.02	40.5	34.54	34.19
Mercerizado	a*	0.91	0.89	1.43	1.19	1.56
	b*	6.9	6.56	6.5	4.46	5.15
	L*	80.72	51.54	36.25	33.63	34.33
Diacetato	a*	1.21	6.27	6.56	5.76	4.83
	b*	12.63	21.98	18.26	16.13	14.76

TABLA 11 Coloración con los precursores o-aminofenol y m-fenilenodiamina. Perfil de tiempo, 2 LACU/ml, pH 8

	0 min	5 min	15 min	35 min	55 min
	L*	87.77	75.41	61.59	49.57	48.57
Algodón	a*	-0.44	6.2	5.51	4.26	4.08
	b*	13.54	26.92	15.47	9.83	8.31
Algodón	L*	88	78.8	61.48	50.78	50.5
Mercerizado	a*	-0.4	4.09	6.72	5.07	4.95
	b*	11.59	22.84	15.18	5.37	2.55
	L*	84.64	69.78	51.84	46.03	42.15
Diacetato	a*	0.24	4.78	11.54	1.14	11.87
	b*	14.06	38.86	39.15	34.67	32.58

Los resultados indican que la mayor parte del color se forma en los primeros 15 minutos. El algodón y el algodón mercerizado se tintaron con ambas combinaciones de compuestos a un pH 5 con unos colores intensos después de 35 minutos. El diacetato se tintó con ambos pH, con la mayoría del color formándose después de 15 minutos.

Ejemplo 4

Las materias tintadas (todas obtenidas de Test Fabrics, Inc.) fueron algodón (Estilo 400, 8 cm x 8 cm), diacetato (Estilo 122, 5 cm x 6 cm) en un Launder-o-Metro Atlas ("LOM") a 30 grados Celsius durante una hora con un pH 5.5.

Se preparó una solución de 0.5 mg/ml de un primer compuesto (p-fenilenodiamina, "A") y una solución de 0.5 mg/ml de un segundo compuesto (1-naftol, "B") disolviendo el o los compuestos en la cantidad apropiada de un tampón de CH_{3}C00Na 0.1 M, pH 5.5. Se utilizó un volumen total de 100 ml en cada tambor del LOM. Se añadieron 100 ml de "A" a un tambor y se combinaron 50 ml de "A" y 50 ml de "B" para formar 100 ml en un segundo tambor. Las muestras de las materias anteriormente mencionadas fueron humedecidas en agua desionizada y empapadas en las soluciones del precursor. Se añadió una lacasa de Myceliophthora thermophila ("MtL") con una actividad de 690 LACU/ml (80 LACU/mg) a cada tambor en una concentración de 12.5 mg/l. Los tambores del LOM fueron sellados y depositados en el LOM. Después de 1 hora a 42 rpm y 30 grados Celsius, se detuvo el LOM. Se extrajo el líquido residual y se enjuagaron las muestras en agua corriente fría durante aproximadamente 15 minutos. Se secaron las muestras a temperatura ambiente y se midieron los valores CIELAB para todas las muestras usando un Macbeth ColorEye 7000. Los resultados se dan en las Tablas 12 y 13.

TABLA 12 Coloración con el precursor p-fenilenodiamina

	L*	a*	b*
Algodón	27.10	76.39	11.20
Diacetato	33.38	65.07	19.01

TABLA 13 Coloración con los precursores p-fenilenodiamina y 1-naftol

	L*	a*	b*
Algodón	39.73	70.79	3.34
Diacetato	21.06	66.60	-7.87

Los resultados indican que se pueden tintar varios tipos de fibras usando un precursor y una lacasa de
Myceliophthora thermophila (matices marrones con A y matices púrpura con A/B).

Ejemplo 5

Las materias tintadas (todas obtenidas de Test Fabrics, Inc.) fueron algodón (Estilo 400, 8 cm x 8 cm), diacetato (Estilo 122, 5 cm x 6 cm) en un Launder-o-Metro Atlas ("LOM") a 30 grados Celsius durante una hora a un pH 5.5.

Se preparó una solución de 0.5 mg/ml de un primer compuesto (p-fenilenodiamina, "A") y una solución de 0.5 mg/ml de un segundo compuesto (1-naftol, "B") disolviendo el compuesto en la cantidad apropiada de un tampón de CH_{3}COONa 0.1 M, pH 5.5. Se utilizó un volumen total de 100 ml en cada tambor del LOM. Se añadieron 100 ml de "A" a un tambor y se combinaron 50 ml de "A" y 50 ml de "B" para formar 100 ml en un segundo tambor. Se humedecieron unas muestras de las materias anteriormente mencionadas en agua desionizada y empaparon en las soluciones precursoras. Se añadió una lacasa de Polyporus pinsitus ("PpL") con una actividad de 70 LACU/ml (100 LACU/mg) a cada tambor en una concentración de 12.5 mg/l. Los tambores del LOM fueron sellados y depositados en el LOM. Después de 1 hora a 42 rpm y 30 grados Celsius, se detuvo el LOM. El líquido residual fue extraído y las muestras fueron enjuagadas en agua corriente fría durante aproximadamente 15 minutos. Se secaron las muestras a temperatura ambiente y se midieron los valores CIELAB para todas las vuestras usando un Macbeth ColorEye 7000. Los resultados se dan en las Tablas 14 y 15.

TABLA 14 Coloración con el precursor p-fenilenodiamina

	L*	a*	b*
Algodón	35.03	86.23	9.45
Diacetato	37.60	70.48	22.80

TABLA 15 Coloración con los precursores p-fenilenodiamina y 1-naftol

	L*	a*	b*
Algodón	46.48	74.06	2.93
Diacetato	29.66	68.56	-5.46

Los resultados indican que se pueden teñir distintos tipos de fibras (matices marrones con A, y matices púrpura con A/B) usando un precursor y la lacasa Polyporous pinsitus (PpL).

Ejemplo 6

Se preparó una solución de 0.5 mg/ml de un primer compuesto (p-fenilenodiamina, "A") y una solución de 0.5 mg/ml de un segundo compuesto (1-naftol, "B") disolviendo el compuesto en la cantidad apropiada de un tampón de CH_{3}COONa 0.1 M, pH 5.5. Se utilizó un volumen total de 100 ml en cada tambor del LOM. Se añadieron 100 ml de "A" a un tambor y se combinaron 50 ml de "A" y 50 ml de "B " para formar 100 ml en un segundo tambor. Se humedecieron las muestras de las materias anteriormente mencionadas en agua desionizada y se empaparon en las soluciones precursoras. Se añadió una bilirrubina oxidasa de Myrothecium verrucaria ("BiO") con una actividad de 0.04 LACU/mg (1 mg/ml) a cada tambor en una concentración de 12.5 mg/l. Los tambores del LOM fueron sellados y depositados en el LOM. Después de 1 hora a 42 rpm y 30 grados Celsius, se detuvo el LOM. El líquido residual fue extraído y las muestras fueron enjuagadas en agua corriente fría durante aproximadamente 15 minutos. Se secaron las muestras a temperatura ambiente y se midieron los valores CIELAB para todas las muestras usando un Macbeth ColorEye 7000. Los resultados se dan en las Tablas 16 y 17.

TABLA 16 Coloración con el precursor p-fenilenodiamina

	L*	a*	b*
Algodón	47.48	94.37	9.55
Diacetato	32.39	85.54	8.94

TABLA 17 Coloración con los precursores p-fenilnodiamina y 1-naftol

	L*	a*	b*
Algodón	67.47	95.17	-4.24
Diacetato	25.22	103.98	-23.95

Los resultados indican que se pueden teñir varias materias (matices marrones con A y matices púrpura con A/B) usando un precursor y una bilirrubina oxidasa.

Ejemplo 7

Se preparó una solución de 0.5 mg/ml de un primer compuesto (p-fenilenodiamina, "A") y una solución de 0.5 mg/ml de un segundo compuesto (1-naftol, "B") disolviendo el compuesto en la cantidad apropiada de un tampón de CH_{3}COONa 0.1 M, pH 5.5. Se utilizó un volumen total de 100 ml en cada tambor del LOM. Se añadieron 100 ml de "A" a un tambor y se combinaron 50 ml de "A" y 50 ml "B" para formar 100 ml en un segundo tambor. Se humedecieron las muestras de las materias anteriormente mencionadas en agua desionizada y se empaparon en las soluciones precursoras. Se añadió una lacasa de Rhizoctonia solani ("RsL") con una actividad de 5.2 LACU/Mg (2 mg/ml) a cada tambor en una concentración de 12.5 mg/l. Los tambores del LOM fueron sellados y depositados en el LOM. Después de 1 hora a 42 rpm y 30 grados Celsius, se detuvo el LOM. El líquido residual fue extraído y las muestras fueron enjuagadas en agua corriente fría durante aproximadamente 15 minutos. Las muestras fueron secadas a temperatura ambiente y los valores CIELAB fueron medidos para todas las muestras usando un Macbeth ColorEye 7000. Los resultados se dan en las Tablas 18 y 19.

TABLA 18 Coloración con el precursor p-fenilenodiamina

	L*	a*	b*
Algodón	50.41	58.97	1.59
Diacetato	33.38	71.45	10.27

TABLA 19 Coloración con los precursores p-fenilenodiamina y 1-naftol

	L*	a*	b*
Algodón	29.03	63.94	-3.65
Diacetato	17.78	75.03	-8.45

Los resultados indican que se pueden teñir diferentes tipos de fibras (matices marrones con A y matices púrpura con A/B) usando un precursor y una lacasa de Rhizoctonia solani.

Ejemplo 8

La materia tintada (obtenida de Test Fabrics Inc.) fue Algodón (Estilo 400, 8 cm x 8 cm) en un Launder-o-Metro Atlas ("LOM") a 60 grados Celsius y pH 5.5.

Se preparó una solución de 0.25 mg/ml de un primer compuesto (p-fenilenodiamina, "A") y una solución de 0.25 mg/ml de un segundo compuesto (2-aminofenol, "B") disolviendo el compuesto en la cantidad apropiada de un tampón de 2 g/l de CH_{3}COONa, pH 5.5. Se utilizó un volumen total de 100 ml en cada tambor del LOM. Se combinaron 50 ml de "A" y 50 ml de "B" para formar 100 ml en un tambor del LOM. Se humedecieron muestras de la materia anteriormente mencionada en agua desionizada y se empaparon en las soluciones precursoras. El tambor del LOM fue sellado y depositado en el LOM. Después de un período de incubación de 10 minutos en el LOM (42 rpm), el LOM fue detenido y se añadió una lacasa de Myceliophthora thermophila ("MtL") con una actividad de 690 LACU/ml (80 LACU/mg) al tambor en una concentración de 1 LACU/ml. Después de 20 minutos a 42 rpm y 60 grados Celsius, se detuvo el LOM y se sacó la muestra. Se realizaron dos controles sin preincubación añadiendo la solución precursora, las muestras y la enzima a los tambores del LOM. Los tambores fueron introducidos en el LOM. Después de 15 minutos a 42 rpm y 60 grados Celsius, se sacó un tambor. El otro control fue realizado durante un total de 30 minutos a 42 rpm y 60 grados Celsius y luego se sacó. El líquido residual fue extraído de las muestras y las muestras fueron enjuagadas en agua corriente fría durante aproximadamente 15 minutos. Las muestras fueron secadas a temperatura ambiente y se midieron los valores CIELAB para todas las muestras usando un Macbeth ColorEye 7000. Los resultados se dan en las Tablas 20-22.

TABLA 20 Control con los precursores A y B, 0 m/15 m

	L*	a*	b*
Algodón	51.92	6.35	10.83

TABLA 21 Control con los precursores A y B, 0 m/30 m

	L*	a*	b*
Algodón	51.05	6.17	11.13

TABLA 22 Coloración con los precursores A y B, 10 m/20 m

	L*	a*	b*
Algodón	49.97	5.81	11.76

La solidez del color en los lavados (solidez al lavado) para estas muestras fue valorada usando el método de prueba AATCC (American Association of Textile Chemist and Colorist) 61-1989, 2A. Se precalentó el Launder-o-Metro a 49 grados Celsius y se colocaron 200 ml de un detergente estándar de referencia de AATCC sin luminosidad óptica (WOB) al 0.2% y 50 bolas de acero en cada tambor del LOM. Se sellaron los tambores y se depositaron en el LOM y se accionaron a 42 rpm durante 2 minutos para precalentar los tambores hasta la temperatura de prueba. Se detuvo el rotor y se desengancharon los tambores. Las muestras fueron añadidas a los tambores y el LOM fue accionado durante 45 minutos. Los tambores fueron eliminados y las muestras enjuagadas en agua corriente caliente durante 5 minutos, escurriéndolas ocasionalmente. Las muestras fueron luego secadas a temperatura ambiente y evaluarlas con el Macbeth ColorEye 7000. Se asignó a cada muestra una puntuación en la escala de grises (1-5) usando el Procedimiento 1 de la prueba AATCC, Escala de Grises para Cambio de Color. Los resultados se dan en las Tablas 23-25.

TABLA 23 Resultados de la solidez al lavado para A y B, 0 m/15 m

	L*	a*	b*	Puntuación en la escala de grises
Algodón	53.63	6.15	10.86	4-5

TABLA 24 Resultados de la solidez al lavado para A y B, 0 m/30 m

	L*	a*	b*	Puntuación en la escala de grises
Algodón	52.95	6.04	10.23	4-5

TABLA 25 Resultados de la solidez al lavado para A y B, 10 m/20 m

	L*	a*	b*	Puntuación en la escala de grises
Algodón	50.40	5.71	9.97	5

Los resultados indican que el algodón puede ser tintado usando un precursor y una lacasa de Myceliophthora thermophila (MtL). Ambos a partir de la puntuación de L* y de la escala de grises, resulta evidente que la intensidad del color y la solidez del lavado mejoran mediante la incubación de las muestras en la solución precursora antes de la adición de la enzima.

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Ejemplo 9

Se tintó algodón en un Launder-o-Metro Atlas ("LOM") a 40 grados Celsius durante una hora con un pH 5.5. La materia tintada (obtenida de Test Fabrics Inc.) fue algodón (Estilo 400, 8 cm x 8 cm).

Se evaluaron dos mediadores en este experimento y cada uno de ellos fue disuelto en una solución tampón. Se hicieron tres soluciones tampón: un tampón de 2 g/l de CH_{3}COONa, pH 5.5 ("1"), un tampón de 2 g/l de CH_{3}COONa, pH 5.5 que contenía 100 microM de ácido 10-propinoico-fenotiazina (PPT) ("2"), y un tampón de 2 g/l de CH_{3}COONa, pH 5.5 que contenía 100 microM de metil siringato ("3").

Se prepararon tres soluciones de 0.25 mg/ml de un compuesto (p-fenilenodiamina, "A") disolviendo el compuesto en la cantidad apropiada del tampón (1, 2 ó 3). Se utilizó un volumen total de 120 ml en cada tambor del LOM. Se humedecieron las muestras de la materia anteriormente mencionada en agua desionizada y se empaparon en las soluciones precursoras. Los tambores del LOM fueron sellados y depositados en el LOM. Después de 10 minutos a 42 rpm y a 40 grados Celsius, se detuvo el LOM. Se añadió una lacasa de Myceliophthora thermophila ("MtL") con una actividad de 690 LACU/ml (80 LACU/mg) a cada tambor con una actividad de 0.174 LACU/ml. Los tambores fueron otra vez sellados y depositados en el LOM y accionados (42 rpm) durante 50 minutos a 40 grados Celsius. Los tambores fueron sacados y el líquido residual fue extraído y las muestras fueron enjuagadas en agua corriente fría durante aproximadamente 15 minutos. Las muestras fueron secadas a temperatura ambiente y los valores CIELAB fueron medidos para todas las muestras usando un Macbeth ColorEye 7000. Los resultados se dan en las Tablas 26, 27 y 28.

TABLA 26 Coloración con el precursor A (2 g/l de CH_{3}COONa, pH 5.5, MtL)

	L*	a*	b*
Algodón	47.57	7.39	4.04

TABLA 27 Coloración con el precursor B (2 g/l de CH_{3}COONa, pH 5.5, 100 microM de PPT, MtL)

	L*	a*	b*
Algodón	53.16	6.84	4.01

TABLA 28 Coloración con el precursor A (2 g/l de CH_{3}COONa, pH 5.5, 100 microM de metil siringato, MtL)

	L*	a*	b*
Algodón	54.34	8.19	8.68

La solidez del color en los lavados (solidez al lavado) para estas muestras fue evaluada usando el método de prueba AATCC (American Association of Textile Chemist and Colorist) 61-1989, 2A. El Launder-o-Metro fue precalentado a 49 grados Celsius y se colocaron 200 ml del Detergente Estándar de Referencia de AATCC sin luminosidad óptica (WOB) al 0.2% y 50 bolas de acero en cada tambor del LOM. Los tambores fueron sellados y depositados en el LOM y accionados a 42 rpm durante 2 minutos para precalentar los tambores hasta la temperatura de prueba. El rotor fue detenido y los tambores fueron desenganchados. Se introdujeron las muestras a los tambores y el LOM fue accionado durante 45 minutos. Los tambores fueron sacados y las muestras enjuagadas en agua corriente caliente durante 5 minutos, escurridas ocasionalmente. Las muestras fueron luego secadas a temperatura ambiente y evaluadas con un Macbeth ColorEye 7000. Se asignó una puntuación en la escala de grises (1-5) a cada muestra usando el Procedimiento 1 de evaluación AATCC, Escala grises para Cambio de color. Los resultados se dan en las Tablas 29-31.

TABLA 29 Resultados de la solidez al lavado para el precursor A (2 g/l CH_{3}COONa, pH 5.5, MtL)

	L*	a*	b*	Puntuación en la escala de grises
Algodón	53.08	8.22	5.82	2-3

TABLA 30 Resultados de la solidez al lavado para el precursor A (2 g/l de CH_{3}COONa, pH 5.5, 100 microM de PPT, MtL)

	L*	a*	b*	Puntuación en la escala de grises
Algodón	55.64	7.52	5.58	4

TABLA 31 Resultados de la solidez al lavado para el precursor A (2 g/l de CH_{3}COONa, pH 5.5, 100 microM de metil siringato, MtL)

	L*	a*	b*	Puntuación en la escala de grises
Algodón	57.83	8.47	9.13	3

Se repitió el mismo experimento, con la excepción de que se utilizó un segundo compuesto (2-aminofenol, "B") y un tercer compuesto (m-fenilenodiamina, "C"). La temperatura usada fue de 70 grados Celsius. Los resultados se dan en las Tablas 32-37.

TABLA 32 Coloración con los precursores B y C (2 g/l de CH_{3}COONa, pH 5.5, MtL)

	L*	a*	b*
Algodón	56.32	0.36	-3.80

TABLA 33 Coloración con los precursores B y C (2 g/l de CH_{3}COONa, pH 5.5, 100 microM de PPT, MtL)

	L*	a*	b*
Algodón	56.04	1.01	-1.34

TABLA 34 Coloración con los precursores B y C (2 g/l de CH_{3}COONa, pH 5.5, 100 microM de metil siringato, MtL)

	L*	a*	b*
Algodón	54.09	2.44	4.82

TABLA 35 Resultados de la fuerza del lavado para los precursores B y C (2 g/l de CH_{3}COONa, pH 5.5, MtL)

	L*	a*	b*	Evaluación en escala de grises
Algodón	58.20	0.75	-1.69	4-5

TABLA 36 Resultados de la solidez al lavado para los precursores B y C (2 g/l de CH_{3}COONa, pH 5.5, 100 microM de PPT, MtL)

	L*	a*	b*	Puntuación en la escala de grises
Algodón	58.94	2.38	1.97	3-4

TABLA 37 Resultados de la solidez al lavado para los precursores B y C (2 g/I de CH_{3}COONa, pH 5.5, 100 microM de metil siringato, MtL)

	L*	a*	b*	Puntuación en la escala de grises
Algodón	59.91	3.09	5.13	2-3

Los resultados de estos dos grupos de experimentos indican que se puede utilizar un mediador para la coloración y para obtener una solidez al lavado mejorada. En ambos experimentos, se tiñó el algodón con un pH 5.5 en un tampón de CH_{3}COONa, en un tampón de CH_{3}COONa que contenía PPT y en un tampón de CH_{3}COONa que contenía metil siringato. No obstante, solamente en el primer experimento se obtuvo un mediador con una solidez al lavado mejorada.

Ejemplo 10

Las materias tintadas (todas obtenidas de Test Fabrics, Inc.) fueron algodón (Estilo 400, 6 cm x 6 cm) y Diacetato (Estilo 122, 5 cm x 6 cm) en un Launder-o-Metro Atlas ("LOM") a 30 grados Celsius durante una hora con un pH 5.5.

Se preparó una solución de 0.5 mg/ml de un primer compuesto (p-fenilenodiamina, "A") y una solución de 0.5 mg/ml de un segundo compuesto (1-naftol, "B") disolviendo el compuesto en la cantidad apropiada de un tampón de CH_{3}COONa 0.1 M, pH 5.5. Se utilizó un volumen total de 100 ml en cada tambor del LOM. Se añadieron 100 ml de "A" a un tambor y se combinaron 50 ml de "A" y 50 ml de "B" para formar 100 ml en un segundo tambor. Se humedecieron las muestras de las materias anteriormente mencionadas en agua desionizada y se empaparon en las soluciones precursoras. Se añadió una peroxidasa de Coprinus cinereus ("CiP") con una actividad de 180,000 POXU/ml a cada tambor en una concentración de 0.05 POXU/ml. Se añadieron 200 o 500 microM de peróxido de hidrógeno a cada tambor del LOM. Los tambores del LOM fueron sellados y depositados en el LOM. Después de 1 hora a 42 rpm y 30 grados celcius, el LOM fue detenido. El líquido residual fue extraído y las muestras fueron enjuagadas en agua corriente fría durante aproximadamente 15 minutos. Las muestras fueron secadas a temperatura ambiente y los valores CIELAB fueron medidos para todas las muestras usando un Macbeth ColorEye 7000. Los resultados se dan en las Tablas 38-41.

TABLA 38 Coloración con el precursor A, 200 microM de H_{2}O_{2}

	L*	a*	b*
Algodón	74.57	2.17	-1.83
Diacetato	54.49	6.34	2.10

TABLA 39 Coloración con el precursor A, 500 microM de H_{2}O_{2}

	L*	a*	b*
Algodón	65.49	3.18	-1.94
Diacetato	58.64	3.95	2.49

TABLA 40 Coloración con los precursores A y B, 200 microM de H_{2}O_{2}

	L*	a*	b*
Algodón	76.58	4.86	-1.45
Diacetato	44.06	21.67	-20.13

TABLA 41 Coloración con los precursores A y B, 500 microM de H_{2}O_{2}

	L*	a*	b*
Algodón	75.02	4.99	-2.11
Diacetato	35.16	23.70	-22.26

Los resultados indican que se pueden teñir varios tipos de fibras (matices púrpura con A y A/B) usando un precursor, un peróxido y una peroxidasa de Coprinus cinereus (CiP).

Ejemplo 11

Se puede aplicar un compuesto mono-, di- o policíclico aromático o heteroaromático a la materia mediante impregnación. Por ejemplo, se disuelven 0.5 mg/ml de p-fenilenodiamina en 500 ml de un tampón de K_{2}PO_{4} 0.1 M, pH 7. Se diluye una lacasa en el mismo tampón. La solución de p-fenilenodiamina es impregnada en la materia con un tampón estándar de laboratorio a 60 grados CelsiusC. Se vaporiza el tejido durante 10 minutos. La materia vaporizada puede luego ser impregnada de nuevo con la solución enzimática. El colorante puede desarrollarse mediante la incubación de las muestras a 40 grados Celsius. Tras la incubación, las muestras son enjuagadas en agua corriente caliente durante aproximadamente 30 segundos.

Claims

1. Método para tintar una materia, que incluye el tratamiento de la materia con un sistema de coloración que comprende:

(a): uno o más precursores del color aplicados seleccionados entre diaminas aromáticas, aminofenoles, fenoles, y naftoles, cada uno de los cuales es opcionalmente sustituido con uno o más grupos funcionales o sustituyentes, donde cada grupo funcional o sustituyente está seleccionado a partir del grupo constituido por halógeno; sulfo; sulfonato; sulfamino; sulfanilo; amino; amido; nitro; azo; imino; carboxi; ciano; formilo; hidroxi; halocarbonilo; carbamoilo; carbamidoilo; fosfonato; fosfonilo; alquilo C_{1-18}; alquenilo C_{1-18}; alquinilo C_{1-18}; alcoxi C_{1-18}; oxicarbonilo C_{1-18}; oxoalquilo C_{1-18}; sulfanil alquilo C_{1-18}; sulfonil alquilo C_{1-18}; imino o amino alquilo C_{1-18} sustituido con uno, dos o tres grupos alquilo C_{1-18}; donde cada grupo alquilo C_{1-18}, alquenilo C_{1-18} y alquinilo C_{1-18} puede ser mono-, di- o poli-sustituido por cualquiera de los grupos funcionales o sustituyentes precedentes; y

(b): una enzima que exhibe actividad oxidasa;

: donde la materia es un tejido, hilo, fibra, prenda o película de algodón, diacetato, lino, liocel, ramio o rayón; y donde los intermedios radicales están formados por el o los precursores de la coloración aplicados y la materia está teñida.

2. Método según la reivindicación 1, donde la materia es algodón.

3. Método según la reivindicación 1, donde la materia es diacetato.

4. Método según la reivindicación 1, donde la materia es lino.

5. Método según la reivindicación 1, donde la materia es liocel.

6. Método según la reivindicación 1, donde la materia es ramio.

7. Método según la reivindicación 1, donde la materia es rayón.

8. Método según la reivindicación 7, donde la materia es viscosa.

9. Método según la reivindicación 1, donde la materia es tratada con el sistema de coloración a una temperatura en la gama entre aproximadamente 5 y aproximadamente 120°C.

10. Método según la reivindicación 1, donde la materia está tratada con el sistema de coloración con un pH en la gama entre aproximadamente 4 y aproximadamente 10.

11. Método según la reivindicación 1, donde el sistema de coloración consta además de un ión mono o divalente seleccionado a partir del grupo compuesto por iones de sodio, potasio, calcio y magnesio.

12. Método según la reivindicación 1, donde el sistema de coloración consta además de un polímero seleccionado a partir del grupo compuesto por polivinilpirrolidona, polivinilalcohol, poliaspartato, polivinilamida y óxido de polietileno.

13. Método según la reivindicación 1, donde el sistema de coloración consta además de un agente tensioactivo aniónico, no iónico o catiónico.

14. Método según la reivindicación 1, donde el sistema enzimático consta además de un agente que intensifica la actividad de la enzima.