ES2203790T3 - 1,4-dihidro-2h-3,1-benzoxacin-2-onas 4,4-disustituidas utiles como inhibidores de la transcriptasa reversa del hiv e intermedios y procedimientos para su preparacion. - Google Patents

1,4-dihidro-2h-3,1-benzoxacin-2-onas 4,4-disustituidas utiles como inhibidores de la transcriptasa reversa del hiv e intermedios y procedimientos para su preparacion.

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ES2203790T3 ES97910726T ES97910726T ES2203790T3 ES 2203790 T3 ES2203790 T3 ES 2203790T3 ES 97910726 T ES97910726 T ES 97910726T ES 97910726 T ES97910726 T ES 97910726T ES 2203790 T3 ES2203790 T3 ES 2203790T3
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Jay Andrew Markwalder
Joseph Marian Fortunak
Soo Sung Ko
Abdul Ezaz Mutlib
Rodney Lawrence Parsons, Jr.
Mona Patel
Steven Paul Seitz
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Abstract

LA PRESENTE INVENCION SE REFIERE A BENZOXAZINONAS DE FORMULA I, O A FORMAS ESTEREOISOMERICAS O MEZCLAS DE LAS MISMAS, O A SALES FARMACEUTICAMENTE ACEPTABLES DE LAS MISMAS. DICHOS COMPUESTOS SON UTILES COMO INHIBIDORES DE LA TRANSCRIPTASA INVERSA DE VIH. LA INVENCION SE REFIERE ASIMISMO A COMPOSICIONES FARMACEUTICAS Y A EQUIPAMIENTOS DE DIAGNOSTICO QUE COMPRENDEN DICHOS COMPUESTOS, A PROCEDIMIENTOS DE UTILIZACION DE LOS MISMOS PARA TRATAR INFECCIONES VIRALES Y A SU UTILIZACION COMO MODELOS O REACTIVOS DE ENSAYO, ASI COMO A INTERMEDIARIOS Y PROCEDIMIENTOS DE FABRICACION CORRESPONDIENTES.

Description

1,4-dihidro-2h-3,1-benzoxacin-2-onas 4,4-disustituidas útiles como inhibidores de la transcriptasa reversa del hiv e intermedios y procedimientos para su preparación.
Campo de la invención
Esta invención se refiere de forma general a 1,4-dihidro-2H-3,1-benzoxacin-2-onas 4,4-disustituidas que son útiles como inhibidores de la transcriptasa reversa del HIV, a las composiciones farmacéuticas y a los equipos de diagnóstico que los comprenden, así como al uso en el tratamiento de la infección vírica o como estándares o reactivos de ensayo, e intermedios y procedimientos para su preparación.
Antecedentes de la invención
Dos retrovirus diferentes, el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) de tipo-1 (HIV-1) o de tipo 2 (HIV-2) han sido relacionados de forma etiológica con la enfermedad inmunosupresiva, el síndrome de la inmunodeficiencia adquirida (AIDS = SIDA). Los individuos seropositivos al HIV son inicialmente asintomáticos pero desarrollan de forma típica el complejo relacionado con el SIDA (ARC) seguido por el SIDA. Los individuos afectados muestran una inmunosupresión severa que los predispone a un debilitamiento y a infecciones oportunísticas de desenlace fatal.
La enfermedad del SIDA es el resultado último de un virus HIV-1 i HIV-2 siguiendo su propio ciclo de vida complejo. El ciclo de vida del virus empieza con el ataque del virus por sí mismo a la célula inmune del limfocito
T-4 humano huésped a través de la unión de una glicoproteína en la superficie de la cubierta protectora del virus con la glicoproteína CD4 en la célula limfocito. Una vez atacado, el virus se despoja de su cubierta de glicoproteína, penetra en la membrana de la célula huésped, y descubre su RNA. La enzima del virus, la transcriptasa reversa, dirige el procedimiento de transcripción del RNA en el DNA de única hélice. El RNA viral es degradado y se crea una segunda hélice de DNA. El nuevo DNA de doble hélice es integrado en los genes de las células humanas y dichos genes son utilizados para la reproducción de los virus.
En este punto, la polimerasa del RNA transcribe el DNA integrado en el RNA viral. El RNA viral es traducido en el precursor gag-pol de la poliproteína de fusión. A continuación la poliproteína es rota por la enzima de la proteasa del HIV para dar lugar a las proteínas virales completas. De este modo, la proteasa del HIV es responsable de la regulación de una cascada de sucesos de rotura que conducen a la maduración de la partícula del virus en un virus que sea capaz de una total infección.
La respuesta del sistema inmune humano típica, matando el virus invasor, se ve grabada debido a que el virus infecta y mata a las células T del sistema inmune. Además, la trasncriptasa reversa vírica, el enzima utilizado en hacer una nueva partícula de virus, no es muy específica, y provoca errores de transcripción que dan lugar a glicoproteínas continuamente cambiadas sobre la superficie de la cubierta protectora del virus. Esta falta de especificidad disminuye la efectividad del sistema inmune debido a que los anticuerpos producidos de forma específica contra una glicoproteína pueden no ser útiles frente a otra, con lo que se reduce el número de anticuerpos disponibles para luchar contra el virus. El virus continúa su reproducción mientras que el sistema de respuesta inmune continua debilitándose. Eventualmente, el HIV tiene en gran parte un dominio libre sobre el sistema inmune del cuerpo, permitiendo que se establezcan infecciones oportunísticas y sin la administración de agentes antivirales, de inmunomoduladores, o de ambos, puede producirse el resultado de muerte.
Hay al menos tres puntos críticos en el ciclo de vida del virus que han sido identificados como posibles objetivos para los fármacos antivíricos: (1) la unión inicial del virus al limfocito T-4 o al sitio del macrófago, (2) la transcripción del RNA viral al DNA viral (transcriptasa reversa, RT), y (3) el procesamiento de la proteína gag-pol por la proteasa del HIV.
La inhibición del virus al segundo punto crítico, el procedimiento de transcripción del DNA viral al RNA viral, ha proporcionado un número de terapias actuales utilizadas en el tratamiento del SIDA. Esta transcripción puede tener lugar para el virus a reproducir porque los genes del virus son codificados en el RNA y la célula huésped lee sólo el DNA. Por introducción de fármacos que bloquean la transcriptasa reversa a partir de que la formación del DNA viral sea completa, puede detenerse la replicación del HIV-1.
Se ha desarrollado un número de compuestos que interfieren con la replicación viral para tratar el SIDA. Por ejemplo, análogos de nucleósidos, tales como la 3'-azido-3'-deoxitimidina (AZT), la 2',3'-dideoxicitidina (ddC), el 2',3'-dideoxitimidineno (d4T), la 2',3'-dideoxiinosina (ddI), y la 2',3'-dideoxi-3'-tiacitidina (3TC) han mostrado ser relativamente efectivos en detener la replicación del HIV en el estadio de transcriptasa reversa (RT).
También se han descubierto inhibidores de la transcriptasa reversa HIV no nucleósidos. Como un ejemplo, se ha encontrado que ciertas benzoxazinonas son útiles en la inhibición de la trascriptasa reversa del HIV, para la prevención o el tratamiento de la infección por HIV y para el tratamiento del SIDA. La patente U. S. número 5.519.021, describe inhibidores de la transcriptasa reversa que son benzoxazinonas de fórmula:
1
en donde X es un halógeno, Z puede ser O. Sin embargo, las benzoxazinonas de este tipo están específicamente excluidas de la presente invención.
En la patente U.S. 5.519.021 se ha encontrado que un compuesto en particular, la (-) 6 cloro-4-ciclopropiletinil-4-trifluorometil-1,4-dihidro-2H- 3,1-benzoxazin-2-ona (NNRTI), que se muestra a continuación,
2
es un potente y específico inhibidor de la transcriptasa reversa del HIV-1 digna de un estudio posterior. El NNRTI está descrito en la Etapa D del Ejemplo 6 de la descripción. Los microsomas de rata, mono, y humano tratados con NNRTI, durante la investigación del metabolismo del citocromo P450 del NNRTI, produjeron un metabolito del que se descubrió que era un inhibidor potente de la trasncriptasa reversa del HIV. Este metabolito, su estereoisómero, mezclas estereoisoméricas, y derivados de los mismos son una realización de la presente invención.
Incluso con el éxito actual de los inhibidores de la transcriptasa reversa, se ha encontrado que los pacientes de HIV pueden hacerse resistentes a un único inhibidor. Por ello, es deseable desarrollar inhibidores adicionales que puedan además combatir la infección por HIV.
Resumen de la invención
De acuerdo con ello, un objeto de la presente invención es el proporcionar nuevos inhibidores de la transcriptasa reversa.
Es otro objeto de la presente invención el proporcionar compuestos para su uso en el tratamiento de la infección por HIV.
Es otro objeto de la presente invención en proporcionar composiciones farmacéuticas con actividad inhibitoria de la transcriptasa reversa que comprenden un soporte farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos uno de los compuestos de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable o profármaco de los mismos.
Estos y otros objetos, se harán aparentes durante la siguiente descripción detallada, han sido conseguidos por el descubrimiento de los inventores de que compuestos de fórmula (I):
3
en donde A, W, X, Y, Z, R^{1} y R^{2} son definidos a continuación, formas estereoisoméricas, mezclas de formas estereoisoméricas, o formas de sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, son inhibidores efectivos de la transcriptasa reversa.
Descripción detallada de las realizaciones preferidas
De este modo, en una primera realización, la presente invención proporciona un nuevo compuesto de fórmula I:
4
o un estereoisómero o forma de sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde:
A es O o S;
W es CR^{3};
X es CR^{4};
Y es CR^{5};
Z es CR^{6};
siempre que al menos uno de los W, Y, y Z sea diferente de CH;
R^{1} está seleccionado entre CF_{3}, CF_{2}H, C_{2}F_{5}, alquilo de C_{1-4}, cicloalquilo de C_{3-5}, alquenilo de C_{2-4}, y alquinilo de C_{2-4};
R^{2} está seleccionado entre -QCHR^{7}R^{8}, -QCHR^{7}C C-R^{8}, -QCHR^{7}C=C-R^{8}, -Q (CH_{2})_{p}CHR^{7}R^{8}, -C\equivC-R^{8}, -CH=CR^{7}
R^{8}, -(CH_{2})_{p}CHR^{7}R^{8}, -CHR^{7} C-R^{8}, ^{-}CHR^{7}CH=CHR^{8}, y CH=CHCHR^{7}R^{8};
siempre que cuando R^{1} es alquilo de C_{1-4}, entonces R^{2} es -C C-R^{8};
R^{3} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I, alcoxi de C_{1-3}, y alquilo de C_{1-3};
R^{4} está seleccionado entre, F, Cl, Br, I,
R^{5} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, y I;
R^{6} está seleccionado entre H, OH, alcoxi de C_{1-3}, -CN, F, Cl, Br, I, NO_{2}, CF_{3}, CHO, alquilo de C_{1-3}, y C (O)NH_{2};
R^{7} está seleccionado entre H y alquilo de C_{1-3};
R^{7a} está seleccionado entre H y alquilo de C_{1-3};
R^{8} está seleccionado entre H, alquilo de C_{1-6} sustituido con 0-3 R^{11}, CH (-OCH_{2}CH_{2}0-), alquenilo de C_{2-6}, cicloalquilo de C_{3-7} sustituido con 0-2 R^{9}, fenilo sustituido con 0-2 R^{10}, y un sistema heterocíclico aromático de 5-6 miembros conteniendo entre 1-4 heteroátomos seleccionados entre el grupo constituido por N, O, y S sustituido con 0-2 R^{10};
R^{9} está seleccionado entre D, OH, alcoxi de C_{1-3}, alquilo de C_{1- 3}, y F;
R^{10} está seleccionado entre OH, alquilo de C_{1-3}, alcoxi de C_{1-3}, F, Cl, Br, I, CN, NR^{7}R^{7a}, y C (O)CH_{3};
R^{11} está seleccionado entre OR^{7}, CN, F, C_{1}, Br, I, NO_{2}, NR^{7}R^{7a}, CHO, C (O)CH_{3}, C (O)NH_{2};
Q está seleccionado entre 0, S y NH; y,
p está seleccionado entre 0, 1, y 2.
En una realización preferida, la presente invención proporciona un nuevo compuesto de fórmula I, en donde:
R^{1} está seleccionado entre CF_{3}, CF_{2}H, C_{2}F_{5}, alquilo de C_{1-3}, cicloalquilo de C_{3-5} ; y,
R^{8} está seleccionado entre H, alquilo de C_{1-6} sustituido con 0-3 R^{11}, CH (-OCH_{2}CH_{2}O-), alquenilo de C_{2-6},
cicloalquilo de C_{3-5} sustituido con 0-1 R^{9}, fenilo sustituido con 0-1 R^{10}, y un sistema heterocíclico aromático de 5-6 miembros conteniendo entre 1-4 heteroátomos seleccionados entre el grupo constituido por N, O, y S sustituido con 0-1 R^{10}.
En una realización más preferida, la presente invención proporciona un nuevo compuesto de fórmula I, en donde:
R^{1} está seleccionado entre CF_{3}, CF_{2}H, C_{2}F_{5}, C_{2}H_{5}, isopropilo, ciclopropilo;
R^{3} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I, OCH_{3}, CH_{3};
R^{5} está seleccionado entre H, F;
R^{6} está seleccionado entre H, OH, OCH_{3}, -CN, F, CF_{3}, CH_{3}, y C (O)NH_{2};
R^{7} está seleccionado entre H y CH_{3};
R^{7a} está seleccionado entre H y CH_{3};
R^{8} está seleccionado entre H, alquilo de C_{1-4} sustituido con 0-3 R^{11}, CH (-OCH_{2}CH_{2}O-), alquenilo de C_{2-4},
cicloalquilo de C_{3-5} sustituido con 0-1 R^{9}, fenilo sustituido con 0-1 R^{10}, y un sistema heterocíclico aromático de 5-6 miembros conteniendo entre 1-4 heteroátomos seleccionados entre el grupo constituido por N, O, y S sustituido con 0-1 R^{10};
R^{9} está seleccionado entre D, OH, OCH_{3}, CH_{3}, y F;
R^{10} está seleccionado entre OH, CH_{3}, OCH_{3}, F, C_{1}, Br, I, CN, NR^{7}R^{7a}, y C (O)CH_{3}; y,
p está seleccionado entre 1 y 2.
En una realización incluso más preferida, la presente invención proporciona un nuevo compuesto de fórmula I, en donde:
A es O;
R^{1} está seleccionado entre CF_{3}, CF_{2}H, C_{2}F_{5};
R está seleccionado entre -OCHR^{7}R^{8}, -OCH_{2}C+C-R^{8}, -OCH_{2}C=R^{8}, -OCH_{2}CHR^{7}R^{8}, -C+C-R^{8}, -CH=CR^{7}R^{8}, -CH_{2}CHR^{7}R^{8}, -CH_{2}C+C-R^{8}, CHR^{7}CH=CHR^{8}, y CH=CHCHR^{7}R^{8};
R^{3} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I; y
R^{11} está seleccionado entre OH, OCH_{3}, CN, F, Cl, NR^{7}R^{7a}, C (O)CH_{3}, y C (O)NH_{2}.
En una realización más preferida, el compuesto de la presente invención está seleccionado entre:
(+/-)-6-Cloro-4-(ciclopropiletinil)-8-hidroxi-4-(trifluorometil) -1,4-dihidro-2H-3,1-benzoxazin-2-ona;
(-)-6-Cloro-4-(ciclopropiletinil)-8-hidroxi-4-(trifluorometil)-1,4 -dihidro-2H-3,1-benzoxazin-2-ona;
(+/-)-6-Cloro-4-(ciclopropiletinil)-8-fluoro-4-(trifluorometil) -1,4-dihidro-2H-3,1-benzoxazin-2-ona;
(+/-)-5,6-Difluoro-4-(3-metil)-l-buten-1-il-4-trifluorometil-1,4 -dihidro-2H-3,1-benzoxazin-2-ona;
(+/-)-4-Isopropiletinil-4-trifluorometil-5,6-difluoro-1,4-dihidro -2H-3,1-benzoxazin-2-ona;
(+/-)-4-Ciclopropiletinil-6-cloro-4-trifluorometil-7-aza-1,4 -dihidro-2H-3,1-benzoxazin-2-ona;
En una segunda realización, la presente invención proporciona un nuevo compuesto de fórmula II:
5
o una sal o estereoisómero del mismo, en donde:
A es O o S;
W es CR^{3};
X es CR^{4};
Y es CR^{5};
Z es CR^{6}; siempre que al menos uno de los W, X, Y, y Z sea diferente de CH;
R^{1a} está seleccionado entre CF_{3}, CF_{2}H, C_{2}F_{5}, alquilo de C_{1-4}, cicloalquilo de C_{3-5}, alquenilo de C_{2-4}, y alquinilo de C_{2-4};
R^{3} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I, alcoxi de C_{1-3}, y alquilo de C_{1-3};
R^{4} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I,
R^{5} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, y I;
R^{6} está seleccionado entre H, OH, alcoxi de C_{1-3}, -CN, F, Cl, Br, I, NO_{2}, CF_{3}, CHO, alquilo de C_{1-3}, y C (O)NH_{2};
R^{7} está seleccionado entre H y alquilo de C_{1-3};
R^{7a} está seleccionado entre H y alquilo de C_{1-3};
R^{10} está seleccionado entre OH, alquilo de C_{1-3}, alcoxi de C_{1-3}, F, Cl, Br, I, CN, NR^{7}R^{7a}, y C (O)CH_{3};
R^{11} está seleccionado entre OR^{7}, CN, F, Cl, Br, I, NO_{2}, NR^{7}R^{7a}, CHO, C (O)CH_{3}, C (O)NH_{2}; p está seleccionado entre 0, 1, y 2.
En otra realización preferida, la presente invención proporciona un nuevo compuesto de fórmula II, en donde:
A es 0; y,
R^{1a} está seleccionado entre CF_{3}, CF_{2}H, C_{2}F_{5}, alquilo de C_{1-3}, cicloalquilo de C_{3-5} .
En una realización más preferida, la presente invención proporciona un nuevo compuesto de fórmula II, en donde:
R^{1a} está seleccionado entre CF_{3}, CF_{2}H, C_{2}F_{5}, C_{2}H_{5}, isopropilo, ciclopropilo;
R^{3} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I, OCH_{3}, CH_{3};
R^{5} está seleccionado entre H, F;
R^{6} está seleccionado entre H, OH, OCH_{3}, -CN, F, CF_{3}, CH_{3}, y C (O)NH_{2};
R^{7} está seleccionado entre H y CH_{3};
R^{7a} está seleccionado entre H y CH_{3};
R^{10} está seleccionado entre OH, CH_{3}, OCH_{3}, F, Cl, Br, I, CN, NR^{7}R^{7a}, y C (O)CH_{3}; y, p está seleccionado entre 1 y 2.
En una realización incluso más preferida, la presente invención proporciona un nuevo compuesto de fórmula II, en donde:
R^{1a} está seleccionado entre CF_{3}, CF_{2}H, C_{2}F_{5};
R^{3} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I; y
R^{11} está seleccionado entre OH, OCH_{3}, CN, F, Cl, NR^{7}R^{7a}, C (O)CH_{3}, y C (O)NH_{2}.
En una tercera realización, la presente invención proporciona un nuevo procedimiento para preparar un compuesto de fórmula II:
6
o una sal o estereoisómero del mismo, que comprende:
(a)
poner en contacto un compuesto de fórmula III:
7
o una forma de sal adecuada del mismo, con un agente de liberación de carbonilo o tiocarbonilo en presencia de un disolvente adecuado, en donde:
A es O o S;
W es CR^{3};
X es CR^{4};
Y es CR^{5};
Z es CR^{6};
siempre que al menos uno de los W, X, Y, y Z sea diferente de CH;
R^{1a} está seleccionado entre CF_{3}, CF_{2}H, C_{2}F_{5}, alquilo de C_{1-4}, cicloalquilo de C_{3-5}, alquenilo de C_{2-4}, y alquinilo C_{2-4};
R^{3} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I, alcoxi de C_{1-3}, y alquilo de C_{1-3};
R^{4} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I;
R^{5} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, y I;
R^{6} está seleccionado entre H, OH, alcoxi de C_{1-3}, -CN, F, Cl, Br, I, NO_{2}, CF_{3}, CHO, alquilo de C_{1-3}, y C (O)NH_{2};
R^{7} está seleccionado entre H y alquilo de C_{1-3};
R^{7a} está seleccionado entre H y alquilo de C_{1-3};
R^{10} está seleccionado entre OH, alquilo de C_{1-3}, alcoxi de C_{1-3}, F, Cl, Br, I, CN, NR^{7}R^{7a}, y C (O)CH_{3};
R^{11} está seleccionado entre OR^{7}, CN, F, Cl, Br, I, NO_{2}, NR^{7}R^{7a}, CHO, C (O)CH_{3}, C(O)NH_{2};
Q está seleccionado entre 0, S y NH; y,
p está seleccionado entre 0, 1, y 2.
En otra realización preferida, en las fórmulas II y III,
A es O;
R^{la} está seleccionado entre CF_{3}, CF_{2}H, C_{2}F_{5};
R^{3} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I;
R^{5} está seleccionado entre H, F;
R^{6} está seleccionado entre H, OH, OCH_{3}, -CN, F, CF_{3}, CH_{3}, y C (O)NH_{2};
R^{7} está seleccionado entre H y CH_{3};
R^{7a} está seleccionado entre H y CH_{3};
R^{10} está seleccionado entre OH, CH_{3}, OCH_{3}, F, Cl, Br, I, CN, NR^{7}R^{7a}, y C (O)CH_{3};
R^{11} está seleccionado entre OH, OCH_{3}, CN, F, Cl, NR^{7}R^{7a}, C (O)CH_{3}, y C (O)NH_{2}; y,
p está seleccionado entre 1 y 2.
En otra realización más preferida, el agente liberador de carbonilo está seleccionado entre fosgeno, carbonildiimidazol, clorometilcarbonato, cloroetilcarbonato, dimetilcarbonato, dietilcarbonato, y di-t-butilcarbonato.
En otra realización aún más preferida, el agente liberador de carbonilo es fosgeno y el disolvente es tolueno.
En otra realización más preferida, en la etapa (a) está presente una base y está seleccionada entre trimetilamina, trietilamina, y N,N disopropiletilamina.
En una cuarta realización, la presente invención proporciona un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula Ia:
8
o un estereoisómero o forma de sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que comprende:
(a)
poner en contacto un nucleófilo, R^{2b}, con un compuesto de fórmula II:
9
o un estereosiómero del mismo en un disolvente adecuado, en donde:
R^{2b} está seleccionado entre R^{8}R^{7}CH-OH, R^{8}R^{7}CH-OM, R^{8}R^{7}CHNH_{2}, R^{8}R^{7}CHNH-M, R^{8}-C+C-M, R^{7}R^{8}C=CH-M, R^{8}R^{7}CH (CH_{2})p-M, R^{8}CH=CHC (H) (R^{7})-M, R^{8}R^{7}CHCH=CH-M;
M está seleccionado entre Na, Li, Mg, Zn, Cu, Pd, Pt, Sn, Al, y B;
A es O o S;
W es CR^{3};
X es CR^{4};
Y es CR^{5};
Z es CR^{6};
siempre que al menos uno de los W, X, Y, y Z es diferente de CH;
R^{1a} está seleccionado entre CF_{3}, CF_{2}H, C_{2}F_{5}, alquilo de C_{1-4}, cicloalquilo C_{3-5}, alquenilo de C_{2-4}, y alquinilo C_{2-4};
R^{2a} está seleccionado entre -QCHR^{7}R^{8}, -OCHR^{7}C+C-R^{8}, -QCHR^{7}C=C-R^{8}, -Q (CH_{2})_{p}CHR^{7}R^{8}, -C+C-R^{8}, -CH=
CR^{7}R^{8}, -(CH_{2})_{p}CHR^{7}R^{8}, -CHR^{7}C+C-R^{8}, -CHR^{7}CH=CHR^{8}, y CH=CHCHR^{7}R^{8};
R^{3} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I, alcoxi de C_{1-3}, y alquilo de C_{1-3};
R^{4} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I, alquilo de C_{1-3} sustituido
R^{5} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, y I;
R^{6} está seleccionado entre H, OH, alcoxi de C_{1-3}, -CN, F, Cl, Br, I, NO_{2}, CF_{3}, CHO, alquilo de C_{1-3}, y C (O)NH_{2};
R^{7} está seleccionado entre H y alquilo de C_{1-3};
R^{7a} está seleccionado entre H y alquilo de C_{1-3};
R^{8} está seleccionado entre H, alquilo de C_{1-6} sustituido con 0-3 R^{11}, CH (-OCH_{2}CH_{2}O-), alquenilo de C_{2-6}, cicloalquilo de C_{3-7} sustituido con 0-2 R^{9}, fenilo sustituido con 0-2 R^{10}, y un sistema heterocíclico aromático de 5-6 miembros conteniendo entre 1-4 heteroátomos seleccionados entre el grupo constituido por N, O, y S sustituido con 0-2 R^{10};
R^{9} está seleccionado entre D, OH, alcoxi de C_{1-3}, alquilo de C_{1- 3}, y F;
R^{10} está seleccionado entre OH, alquilo de C_{1-3}, alcoxi de C_{1-3}, F, Cl, Br, I, CN, NR^{7}R^{7a}, y C (O)CH_{3};
R^{11} está seleccionado entre OR^{7}, ON, F, Cl, Br, I, NO_{2}, NR^{7}R^{7a}, CHO, C (O)CH_{3}, C(O)NH_{2};
Q está seleccionado entre O, S y NH; y,
p está seleccionado entre 0, 1, y 2.
En otra realización preferida, en las fórmulas Ia y II,
A es O;
R^{1a} está seleccionado entre CF_{3}, CF_{2}H, C_{2}F_{5};
R^{2a} está seleccionado entre -OCHR^{7}R^{8}, -OCH_{2}C+C- R^{8}, -OCH_{2}C=C-R^{8}, -OCH_{2}CHR^{7}R^{8}, -C\equivC-R^{8}, -CH=CR^{7}R^{8}, -CH_{2}CHR^{7}R^{8}, -CH_{2}C\equivC-R^{8}, CHR^{7}CH=CHR^{8}, y CH=CHCHR^{7}R^{8};
R^{3} está seleccionado entre H, F, C_{1}, Br, I;
R^{5} está seleccionado entre H, F;
R^{6} está seleccionado entre H, OH, OCH_{3}, -CN, F, CF_{3}, CH_{3}, y C (O)NH_{2};
R^{7} está seleccionado entre H y CH_{3};
R^{7a} está seleccionado entre H y CH_{3};
R^{8} está seleccionado entre H, alquilo de C_{1-4} sustituido con 0-3 R^{11}, CH (-OCH_{2}CH_{2}O-), alquenilo de C_{2-4},
cicloalquilo de C_{3-5} sustituido con 0-1 R^{9}, fenilo sustituido con 0-1 R^{10}, y un sistema heterocíclico aromático de 5-6 miembros conteniendo entre 1-4 heteroátomos seleccionados entre el grupo constituido por N, O, y S sustituido con 0-1 R^{10};
R^{9} está seleccionado entre D, OH, OCH_{3}, CH_{3}, y F;
R^{10} está seleccionado entre OH, CH_{3}, OCH_{3}, F, Cl, Br, I, CN, NR^{7}R^{7a}, y C (O)CH_{3};
R^{11} está seleccionado entre OH, OCH_{3}, CN, F, Cl, NR^{7}R^{7a}, C (O)CH_{3}, y C (O)NH_{2}; y,
p está seleccionado entre 1 y 2.
En otra realización más preferida, en la etapa (a), el compuesto de fórmula II es adicionado a una solución que contiene el nucleófilo.
En otra realización más preferida, en la etapa (a), R^{2}b es R^{8}-C C-M; y M está seleccionado entre Li, Mg, y Zn.
En otra realización aún más preferida, en la etapa (a), R^{8}-C C-M es formado in situ por adición de una base fuerte a una solución conteniendo R^{8}-C C-H.
En otra realización más preferida, en la etapa (a), la base fuerte está seleccionada entre n-butil litio, s-butil litio,
t-butil litio, fenil litio, y metil litio.
En una quinta realización, la presente invención proporciona un nuevo método de preparar un compuesto de fórmula IIIb:
10
o un estereoisómero o una forma de sal del mismo, que comprende:
(a)
poner en contacto un compuesto de fórmula IIIa:
11
con R^{la}-TMS y un anión, en donde:
el anión es a fluoruro o un oxianión y está seleccionado entre fluoruro de tetrabutilamonio, fluoruro de sodio, fluoruro de potasio, fluoruro de litio, fluoruro de cesio, tert-butóxido de potasio, metóxido de sodio, etóxido de sodio y trimetilsilanolato de sodio;
Pg es un grupo protector de amina;
W es CR^{3};
X es CR^{4};
Y es CR^{5};
Z es CR^{6};
siempre que al menos uno de los W, X, Y, y Z sea diferente de CH;
R^{la}está seleccionado entre CF_{3}, CF_{3}CF_{2}, y CF_{3}CF_{2}CF_{2};
R^{3} está seleccionado entre H, F, Cl Br, I, alcoxi de C_{1-3}, y alquilo de C_{1-3};
R^{4} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I,
R^{5} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, y I;
R^{6} está seleccionado entre H, OH, alcoxi de C_{1-3}, -CN, F, Cl, Br, I, NO_{2}, CF_{3}, CHO, alquilo de C_{1-3}, y C (O)NH_{2};
R^{7} está seleccionado entre H y alquilo de C_{1-3};
R^{7a} está seleccionado entre H y alquilo de C_{1-3};
R^{10} está seleccionado entre OH, alquilo de C_{1-3}, alcoxi de C_{1-3}, F, Cl, Br, I, CN, NR^{7}R^{7a}, y C (O)CH_{3};
R^{11} está seleccionado entre OR^{7}, CN, F, Cl, Br, I, NO_{2}, NR^{7}R^{7a}, CHO, C (O)CH_{3}, C(O)NH_{2};
p está seleccionado entre 0, 1, y 2.
En otra realización preferida, en las fórmulas IIIa y IIIb,
el R^{la}-TMS es trifluorometil trimetilsilano;
el anión es fluoruro de tetrabutilamonio;
Pg es tritilo;
R^{1a} es CF_{3};
R^{3} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I;
R^{5} está seleccionado entre H, F;
R^{6} está seleccionado entre H, OH, OCH_{3}, -CN, F, CF_{3}, CH_{3}, y C (O) NH_{2};
R^{7} está seleccionado entre H y CH_{3};
R^{7a} está seleccionado entre H y CH_{3};
R^{10} está seleccionado entre OH, CH_{3}, OCH_{3}, F, Cl, Br, I, CN, NR^{7}R^{7a}, y C (O)CH_{3};
R^{11} está seleccionado entre OH, OCH_{3}, CN, F, Cl, NR^{7}R^{7a}, C (O)CH_{3}, y C (O)NH_{2}; y,
p está seleccionado entre 1 y 2.
En otra realización más preferida, el procedimiento comprende además:
(b)
poner en contacto un compuesto de fórmula IIIb con un agente de oxidación para formar un compuesto de fórmula IIIc:
12
En otra realización incluso más preferida, el agente de oxidación es el MnO_{2}.
En una quinta realización, la presente invención proporciona una nueva composición farmacéutica que comprende un soporte farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula I o forma de sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En una sexta realización, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula I o una forma de sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su suo en el tratamiento de la infección por HIV.
En una séptima realización, la presente invención proporciona un nuevo uso de un compuesto de fórmula I en la preparación de un medicamento que comprende además al menos un compuesto seleccionado entre el grupo constituido por inhibidores de la transcriptasa reversa del HIV e inhibidores de proteasa del HIV para el tratamiento de infección por HIV.
En otra realización preferida, el inhibidor de la transcriptasa reversa es un inhibidor nucleósido de la transcriptasa reversa.
En otra realización más preferida, el inhibidor nucleósido de la transcriptasa reversa está seleccionado entre AZT, 3TC, rescriptor, ddI, ddC, y d4T y el inhibidor de la proteasa está seleccionado entre saquinavir, ritonavir, indinavir, VX-478, nelfinavir, KNI-272, CGP-61755, y U-103017.
En una realización incluso más preferida, el inhibidor nucleósido de la transcriptasa reversa está seleccionado entre AZT, rescriptor, y 3TC y el inhibidor de la proteasa está seleccionado entre saquinavir, ritonavir, indinavir, y nelfinavir.
En una realización aún más preferida, el inhibidor nucleósido de la transcriptasa reversa es el AZ.
En otra realización aún más preferida, el inhibidor de la proteasa es el indinavir.
Definiciones
Tal como se utiliza en el presente documento, los términos y expresiones siguientes tienen los significados indicados. Será apreciado que los compuestos de la presente invención contengan un átomo de carbono asimétricamente sustituido, y pueden ser aislados en formas ópticamente activas o racémicas. Es bien conocido en el estado de la técnica cómo preparar las formas ópticamente activas, tales como por resolución de las formas racémicas o por síntesis, a partir de productos de partida ópticamente activos. Todas las formas quirales, diasteroméricas, racémicas y todas las formas de isómeros geométricos de una estructura dada, a no ser que se indique de forma específica la estereoquímica específica o la forma isomérica específica.
Los procedimientos de la presente invención son contemplados para ser practicados en al menos una escala de multigramos, escala de kilogramos, escala de multikilogramos, o escala industrial. La escala de multigramos, tal como se utiliza en el presente documento, es preferiblemente la escala en la que al menos un producto de partida está presente en 10 gramos o más, más preferiblemente al menos 50 gramos o más, incluso más preferiblemente al menos 100 gramos o más, incluso más preferiblemente al menos 100 gramos o más. La escala de multiquilogramos, tal como se utiliza en el presente documento, pretende significar la escala en la que se utiliza al menos de uno de los productos de partida más de un kilogramo. La escala industrial tal como se utiliza en el presente documento pretende significar una escala diferente de la escala de laboratorio y que sea suficiente para proporcionar producto suficiente tanto para los ensayos clínicos como para la distribución a los clientes.
Las reacciones de los métodos sintéticos reivindicados en el presente documento pueden ser llevadas a cabo, tal como se ha indicado en la presente invención, en presencia de una base adecuada, de modo que dicha base adecuada sea cualquiera entre una variedad de bases, la presencia de las cuales en la reacción facilita la síntesis del producto deseado. Bases adecuadas pueden ser seleccionadas por un experto en la materia de la síntesis orgánica. Bases adecuadas pueden incluir, pero no están limitadas a, bases inorgánicas tales como las de metales alcalinos, metales alcalino térreos, de talio, e hidróxidos de amonio, alcóxidos, fosfatos, y carbonatos, tales como hidróxido sódico, hidróxido potásico, carbonato de sodio, carbonato de potasio, carbonato de cesio, hidróxido de talio, carbonato de talio, carbonato de tetra-n-butilamonio, e hidróxido amónico. Bases adecuadas también incluyen bases orgánicas, incluyendo pero no limitadas a aminas aromáticas y alifáticas, tales como piridina; aminas de trialquilo tales como trietilamina, N,N-diisopropiletilamina, N,N-dietilciclohexilamina, N,N-dimetilciclohexilamina, N,N,N'-trietilenodiamina, N,N-dimetiloctilamina; 1,5-diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno (DBN); 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano (DABCO); 1, 8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU); tetrametiletilenodiamina (TMEDA); y piridinas sustituidas tales como N,N-dimetilaminopiridina (DMAP), 4-pirrolidinopiridina, 4 piperidinopiridina.
Los disolventes halogenados adecuados incluyen: tetracloruro de carbono, bromodiclorometano, dibromoclorometano, bromoformo, cloroformo, bromoclorometano, dibromometano, cloruro de butilo, diclorometano, tetracloroetileno, tricloroetileno, 1,1,1-tricloroetano, 1,1,2tricloroetano, 1,1-dicloroetano, 2-cloropropano, hexafluorobenceno, 1,2,4-triclorobenceno, o-diclorobenceno, clorobenceno, o fluorobenceno.
Disolventes de tipo éter adecuados incluyen, pero se pretende que no estén limitados a, dimetoximetano, tetrahidrofurano, 1,3dioxano, 1,4-dioxano, furano, éter dietílico, etilen glicol dimetil éter, etilen glicol dietil éter, dietilen glicol dimetil éter, dietilen glicol dietil éter, trietilen glicol dimetil éter, o t-butil metil éter.
Disolventes próticos adecuados pueden incluir, por vía del ejemplo y sin limitación, agua, metanol, etanol, 2-nitroetanol, 2-fluoroetanol, 2,2, 2-trifluoroetanol, etilen glicol, l-propanol, 2-propanol, 2-metoxietanol, 1-butanol, 2-butanol, i-butil alcohol, t-butil alcohol, 2-etoxietanol, dietilen glicol, 1-, 2-, o 3- pentanol, neo-pentil alcohol, t-pentil alcohol, dietilen glicol monometil éter, dietilen glicol monoetil éter, ciclohexanol, anisol, alcohol bencílico, fenol, o glicerol.
Disolventes apróticos adecuados pueden incluir, por vía del ejemplo y sin limitación, tetrahidrofurano (THF), dimetilformamida (DMF), dimetilacetamida (DMAC), 1,3dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-2 (1H)-pirimidinona (DMPU), 1,3dimetil-2 -imidazolidinona (DMI), N-metilpirrolidinona (NMP), formamida, N-metilacetamida, N-metilformamida, acetonitrilo, dimetil sulfóxido, propionitrilo, formiato de etilo, acetato de metilo, hexacloroacetona, acetona, etil metil cetona, acetato de etilo, sulfolano, N,N-dimetilpropionamida, tetrametilurea, nitrometano, nitrobenceno, o hexametilfosforamida.
Disolventes hidrocarburos adecuados incluyen, pero no se pretende que estén limitados a, benceno, ciclohexano, pentano, hexano, tolueno, cicloheptano, metilciclohexano, heptano, etilbenceno, m-, o-, o p-xileno, octano, indano, nonano, o naftaleno.
Tal como se utiliza en el presente documento, el término "grupo protector de amina" (o "N-protegido") hace referencia a cualquier grupo conocido en el estado de la técnica de la síntesis de la síntesis orgánica para la protección de grupos amina que pueden hacerse reaccionar con una amina para proporcionar una amina protegida con un grupo protector de amina. Dichos grupos protectores de amina incluyen los listados en Greeno y Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis" John Wiley & Sons, New York (1991) y "The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology", Vol. 3, Academic Press, New York (1981), la descripción de los cuales se incorpora por referencia. Ejemplos de grupos protectores de amina incluyen, pero no están limitados a, los siguientes: 1) tipos acilo tales como formilo, trifluoroacetilo, ftalilo, y p-toluenosulfonilo; 2) tipos carbamatos artomáticos tales como benciloxicarbonilo (Cbz) y benciloxicarbonilos sustituidos, 1-(p-bifenil)-1-metiletoxicarbonilo, y 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (Fmoc); 3) tipos carbamato alifáticos tales como tertbutiloxicarbonilo (Boc), etoxicarbonilo, diisopropilmetoxicarbonilo, y aliloxicarbonilo; 4) tipos alquil carbamato cíclicos tales como ciclopentiloxicarbonilo y adamantiloxicarbonilo; 5) tipos alquilo tales como trifenilmetilo (tritil) y bencilo; 6) trialquilsilano tales como trimetilsilano; y 7) tipos conteniendo el grupo tiol tales como feniltiocarbonilo y ditiasuccinoilo.
Los grupos protectores de amina pueden incluir, pero no están limitados a los siguientes: 2,7-di-t-butil-[9-(10,10-dioxo-10,10,10,10-tetrahidrotio-xantil)] metiloxicarbonilo; 2-trimetilsililetiloxicarbonilo; 2-feniletiloxicarbonilo; 1,1-dimetil-2,2-dibromoetiloxicarbonilo; 1-metil-1-(4 -bifenilil)etiloxicarbonilo; benciloxicarbonilo; p-nitrobenciloxicarbonilo; 2 -(p-toluenosulfonil) etiloxicarbonilo; m-cloro-p-aciloxibenciloxicarbonilo; 5 -benciisoxazolilmetiloxicarbo-
nilo; p-(dihidroxiboril)benciloxicarbonilo; m-nitrofeniloxicarbonilo; o-nitrobenciloxicarbonilo; 3,5-dimetoxibenciloxicarbonilo; 3,4-dimetoxi-6 -nitrobenciloxicarbonilo; N'-p-toluenosulfonilaminocarbonilo; t-amiloxicarbonilo; p-deciloxibenciloxicarbonilo; diisopropilmetiloxicarbonilo; 2,2-dimetoxicarbonilviniloxicarbonilo; di (2 -piridil)metiloxicarbonilo; 2-furanoilmetiloxicarbonilo; ftalimida; ditiasuccinimida; 2,5-dimetilpirrol; bencilo; 5-dibencilsuberilo; trifenilmetilo; bencilideno; difenilmetileno; o metanosulfonamida.
Tal como se utiliza en el presente documento, "alquilo" pretende incluir tanto los grupos hidrocarbonados alifáticos saturados de cadena lineal como ramificada que tengan el número especificado de átomos de carbono. Ejemplos de alquilo incluyen, pero no están limitados a, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, s-butilo, t-butilo, n-pentilo, y s-pentilo. "Haloalquilo" pretende incluir tanto los grupos hidrocarbonados alifáticos saturados de cadena lineal como ramificada que tienen el número especificado de átomos de carbono, sustituidos con 1 o más halógenos (por ejemplo -CVFw en donde v = 1 a 3 y w = 1 a (2v+1)). Ejemplos de haloalquilo incluyen, pero no están limitados a, trifluorometilo, triclorometilo, pentafluoroetilo, y pentacloroetilo. "Alcoxi" representa un grupo alquilo tal como se ha definido anteriormente con el número indicado de átomos de carbono unidos a través de un puente de oxígeno. Ejemplos de grupos alcoxi incluyen, pero no están limitados a, metoxi, etoxi, n-propoxi, i-propoxi, n-butoxi, s-butoxi, t-butoxi, n-pentoxi, y s-pentoxi. "Cicloalquilo" pretende incluir grupos de anillo saturado, tales como ciclopropilo, ciclobutilo, o ciclopentilo. "Alquenilo" pretende incluir cadenas hidrocarbonadas de configuración tanto lineal como ramificada y uno o más enlaces carbono-carbono insaturados que pueden situarse en cualquier punto estable a lo largo de la cadena, tales como etenilo, propenilo y similares. "Alquinilo" pretende incluir cadenas hidrcarbonadas tanto de configuración lineal como ramificada y uno o más triples enlaces carbono-carbono que pueden situarse en cualquier punto estable a lo largo de la cadena, tales como etinilo, propinilo y similares.
"Halo" o "halógeno" tal como se utiliza en el presente documento se refiere a grupos fluoro, cloro, bromo y iodo. "Contraión" se utiliza para representar una especie pequeña, cargada negativamente tal como cloro, bromo, hidróxido, acetato, sulfato y similares.
Tal como se utiliza en el presente documento, "arilo" o "residuo aromático" pretende significar una mitad aromática que contiene el número especificado de átomos de carbono, tales como fenilo o naftilo. Tal como se utiliza en el presente documento, "carbociclo" o "residuo carbocíclico" pretende significar cualquier monocilco o biciclo de 3- a 7- miembros que puede ser saturado, parcialmente insaturado o aromático. Ejemplos de dichos carbociclos incluyen, pero no están limitados a, ciclopropilo, ciclopentilo, ciclohexilo, fenilo, bifenilo, naftilo, indanilo, adamantilo, o tetrahidronaftilo (tetralina).
Tal como se utiliza en el presente documento, el término "heterociclo" o "sistema heterocíclico" pretende significar un anillo heterocíclico monocíclico de 5- a 6- miembros que está saturado, parcialmente insaturado o insaturado (aromático), y que consiste en átomos de carbono y entre 1 y 3 heteroátomos seleccionados de forma independiente entre el grupo constituido por N, 0 y S. Los heteroátomos nitrógeno y azufre opcionalmente pueden estar oxidados. El anillo heterocíclico puede estar unido a su grupo sustituyente por cualquier heteroátomo o átomo de carbono que de lugar a una estructura estable. Los anillos heterocíclicos descritos en el presente documento pueden estar sustituidos sobre un átomo de carbono o sobre un átomo de nitrógeno si el compuesto resultante es estable. Si se señala de forma específica, un átomo de nitrógeno en el heterociclo puede ser opcionalmente cuaternizado. Se prefiere que cuando el número total de átomos de S y O en el heterociclo exceda de 1, entonces dichos heteroátomos no son adyacentes entre sí. Se prefiere que el número total de átomos de S y O en el heterociclo no sea mayor que 1. Tal como se utiliza en el presente documento, el término "sistema heterocíclico aromático" pretende significar un anillo aromático heterocíclico monocíclico estable de 5- a 6- miembros que consiste en átomos de carbono y entre 1 y 3 heteroátomos seleccionados independientemente entre el grupo constituido por N, O y S. Se prefiere que el número total de átomos de S y O en el heterociclo aromático no sea mayor que 1.
Ejemplos de heterociclos incluyen, pero no están limitados a, 2-pirrolidonilo, 2H-pirrolilo, 4-piperidonilo, 6H-1,2,5- tiadiazinilo, 2H,6H -1,5,2-ditiazinilo, furanoilo, furazanilo, imidazolidinilo, imidazolinilo, imidazolilo, isoxazolilo, morfolinilo, oxadiazolilo, 1,2,3-oxadiazolilo, 1,2,4oxadiazolilo, 1,2,5-oxadiazolilo, 1,3,4-oxadiazolilo, oxazolidinil., oxazolilo, piperazinilo, piperidinilo, pteridinilo, piperidonilo, 4-piperidonilo, pteridinilo, purinilo, piranilo, pirazinilo, pirazolidinilo, pirazolinilo, pirazolilo, piridazinilo, piridinilo, piridilo, pirimidinilo, pirrolidinilo, pirrolinilo, pirrolilo, tetrahidrofuranoilo, 6H-1,2,5-tiadiazinilo, 1,2,3-tiadiazolilo, 1,2,4-tiadiazolilo, 1,2,5-tiadiazolilo, 1,3,4-tiadiazolilo, tiazolilo, tienilo, tienotiazolilo, tienooxazolilo, tienoimidazolilo, tiofenilo, triazinilo, 1,2,3 -triazolilo, 1,2,4-triazolilo, 1,2,5-triazolilo, y 1,3,4-triazolilo. Heterociclos preferidos incluyen, pero no están limitados a, piridinilo, furanoilo, tienilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, y oxazolidinilo. También se incluyen los compuestos espiro y de anillo fusionado conteniendo, por ejemplo, los heterociclos anteriores.
Tal como se utiliza en el presente documento, "el inhibidor de la transcriptasa reversa del HIV" pretende hacer referencia tanto a inhibidores nucleósidos como no nucleósidos de la transcriptasa reversa del HIV (RT). Ejemplos de inhibidores RT nucleósidos incluyen, pero no están limitados a, AZT, ddC, ddI, d4T, y 3TC. Ejemplos de inhibidores RT no nucleósidos incluyen, pero no están limitados a, rescriptor (delavirdina, Pharmacia and Upjohn), viviradina (Pharmacia and Upjohn U90152S), derivados TIBO, BI-RG-587, nevirapina, L-697,661, LY 73497, y Ro 18,893 (Roche).
Tal como se utiliza en el presente documento, "inhibidor de la proteasa del HIV" pretende hacer referencia a compuestos que inhiben la proteasa del HIV. Ejemplos de los mismos incluyen, pero no están limitados a, saquinavir (Roche, Ro31-8959), ritonavir (Abbott, ABT-538), indinavir (Merck, MK-639), VX- 478 (Vertex/Glaxo Wellcome), nelfinavir (Agouron, AG-1343), KNI-272 (Japan Energy), CGP-61755 (Ciba-Geigy), y U-103017 (Pharmacia and Upjohn). Ejemplos adicionales incluyen los inhibidores de la proteasa cíclica descritos en las patentes WO 93/07128, WO 94/19329, WO 94/22840, y en la solicitud de patente PCT número US96/03426.
Tal como se utiliza en el presente documento, "sales farmacéuticamente aceptables" hace referencia a derivados de los compuestos descritos en donde el compuesto de referencia es modificado por preparación de las sales ácidas o básicas del mismo. Ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no están limitados a, sales de ácidos minerales o orgánicos de residuos básicos tales como amina; sales alcalinas o orgánicas de residuos ácidos tales como ácidos carboxílicos; y similares. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las sales no tóxicas convencionales o las sales de amonio cuaternario del compuesto de referencia formado, por ejemplo, a partir de ácidos inorgánicos o orgánicos no tóxicos. Por ejemplo, dichas sales no tóxicas convencionales incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos tales como clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, sulfámico, fosfórico, nítrico y similares; y las sales preparadas a partir de ácidos orgánicos tales como acético, propiónico, suscínico, glicólico, esteárico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, pamoico, maleico, hidroximaleico, fenilacético, glutámico, benzoico, saliccílico, sulfanílico, 2-acetoxibenzoico, fumárico, toluenosulfónico, metanosulfónico, etano disulfónico, oxálico, isetiónico, y similares.
Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención pueden ser sintetizadas a partir del compuesto de referencia que contiene una mitad básica o ácida por los métodos químicos convencionales. De forma general, dichas sales pueden ser preparadas por reacción de las formas de ácido o base libre de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base o el ácido apropiado en agua o en un disolvente orgánico, o en una mezcla de los dos; de forma general, son preferidos un medio no acuoso de tipo éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol, o acetonitrilo. Las listas de sales adecuadas se encuentran en Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985, p. 1418, cuya descripción de los mismos se incorpora a la presente invención por referencia.
La frase "farmacéuticamente aceptable" se utiliza en el presente documento para hacer referencia a dichos compuestos, materiales, composiciones, y/o formas de dosificación que se encuentran en el alcance del juicio médico, adecuado para su uso en contacto con los tejidos de los seres humanos o animales sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica, u otro problema o complicación proporcionado con una relación beneficio/riesgo razonable.
"Compuesto estable" y "estructura estable" pretenden indicar un compuesto que sea suficientemente robusto para superar el aislamiento hasta un grado útil de pureza a partir de una mezcla de reacción, y su formulación en un agente terapéutico eficaz. Sólo son contemplados por la presente invención los compuestos estables.
"Sustituido" pretende indicar que uno o más hidrógenos en el átomo indicado en la expresión en que se utiliza el término "sustituido" están reemplazados con una selección entre el grupo(s) indicado, siempre que la valencia normal del átomo indicado no sea excedida, y que la sustitución de lugar a un compuesto estable. Cuando un sustituyente es un grupo ceto (es decir, = O), entonces se sustituyen 2 hidrógenos en el átomo.
"Cantidad terapéuticamente efectiva " pretende incluir una cantidad de un compuesto de la presente invención o una cantidad de la combinación de los compuestos reivindicados como efectivos para inhibir la infección por HIV o tratar los síntomas de la infección por HIV en un huésped. La combinación de los compuestos es preferiblemente una combinación sinérgica. Se produce sinergia, tal como se ha descrito, por ejemplo, por Chou y Talalay, Adv. Enzyme Regul. 22:27-55 (1984), cuando el efecto (en este caso, inhibición de la replicación del HIV) de los compuestos cuando se administran en combinación es mayor que el efecto aditivo de los compuestos cuando se administran solos como simple gente. En general, un efecto sinérgico es más claramente demostrado a concentraciones de los compuestos inferiores a las óptimas. La sinergia puede ser en términos de menor citotoxicidad, efecto antivírico incrementado, o algún otro efecto beneficioso de la combinación en comparación con los componentes individuales.
Síntesis
Los compuestos de la presente invención pueden ser preparados en un número de vías bien conocidas por los expertos en la materia de la síntesis orgánica. Los compuestos de la presente invención pueden ser sintetizados utilizando los métodos que se describen a continuación, junto con los métodos sintéticos conocidos en el estado de la técnica de la química orgánica sintética, o variaciones de los mismos tal como serían apreciadas por los expertos en la materia.
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Esquema 1
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El Esquema 1 ilustra un método de preparar 1,4-dihidro-2H-3,1-benzoxazin-2-onas 4,4-disustituidas a partir de un ácido 2-aminobenzoico sustituido de forma apropiada. El ácido es convertido en su derivado N-metoxi-N-metil amida que a continuación puede ser desplazado para obtener la cetona R^{1} -sustituida. La subsiguiente adición de otras especies metálicas proporcionan el alcohol que es fácilmente ciclado con fosgeno o un equivalente del mismo.
Esquema 2
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El Esquema 2 describe un medio de obtener 4-trifluorometil-1,4-dihidro-2H -3,1-benzoxazin-2-onas a partir de una anilina sustituida de forma apropiada. Después de la reacción con yodo, puede introducirse el grupo trifluorometilo utilizando una base fuerte y trifluoroacetato de etilo. El segundo sustituyente en posición 4 puede ser añadido a continuación por medio del ataque del anión sobre al cetona o utilizando otros medios bien conocidos por los expertos en el estado de la técnica. La ciclación puede ser completada a continuación tal como en el Esquema 1.
Esquema 3
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Debido a que ciertos benzo-sustituyentes son incompatibles con los métodos de los Esquemas 1 y 2, puede ser necesario proteger estos grupos antes de la formación de la benzoxazinona. En el Esquema 3 se muestra un medio de obtener 4, 4-disustituidas-l, 4-dihidro-2H-3, 1-benzoxazin-2-onas sustituidas en el carbonilo. Después de la reacción con yodo de una acetil-anilina, se protege el grupo acetilo por medios bien conocidos por los expertos en la materia, tales como utilizando el 1,3-propanditiol. Se utilizaron los mismos procedimientos que en el Esquema 2 para llegar al producto ciclado. La desprotección de la cetona puede ser conseguida a continuación utilizando HgCl_{2} y HgO u otros medios bien conocidos por los expertos en la materia.
(Esquema pasa a página siguiente)
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Esquema 4
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En el Esquema 4 se describe un método para formar l,4-dihidro-2H-3,1 -benzoxazin-2-onas 4,4-disustituidas, en donde R^{2} es un grupo vinilo o alquinilo. A partir de una cetona sustituida de forma apropiada que puede ser obtenida utilizando el procedimiento del Esquema 1 ó 2, se adiciona una acetilida. El producto puede ser desprotegido y ciclado para obtener el material alquinilo sustituido. De forma alternativa, pueden obtenerse los compuestos vinilo por reducción del alquino con un agente de reducción, tal como LiAlH_{4}, desprotección por los medios estándar, y ciclación.
Esquema 5
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El Esquema 5 describe una ruta alternativa para la obtención de 1, 4 -dihidro-2H-3, 1-benzoxazin-2-onas 4,4-disustituidas a partir de anilinas, en donde la anilina está protegida, la adición del éster se consigue utilizando una base fuerte y se elimina el grupo protector de la amina. El grupo R^{2} puede entonces ser adicionado, por ejemplo, a través de una acetilida, seguida por ciclación.
Esquema 6
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Un intermedio útil en la preparación de los compuestos reivindicados en la presente invención es la 2-trifluoroacetilanilina. La 4-cloro-2-trifluoroacetilanilina de partida puede ser preparada tal como se muestra en el Esquema 2. La reducción y la reoxidación eliminan el grupo cloro conduciendo al intermedio deseado.
Esquema 7A
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El Esquema 7A describe un nuevo método de preparar 2-trifluoroacetilanilinas así como el modo en que estos compuestos pueden ser además modificados para preparar los compuestos reivindicados en la presente invención. El aldehído protegido puede ser preparado a partir de la N-metoxi-N-metil amida del Esquema 1, por adición de un grupo protector, preferiblemente el tritilo, y reducción de la amida al aldehído. Pueden utilizarse otros grupos protectores conocidos para los expertos en la materia en lugar del grupo tritilo mostrado.
Esquema 7B
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El Esquema 7B ilustra las etapas específicas del Esquema 7A. El intermedio IIIb (R^{la}está seleccionado entre CF_{3}, CF_{3}CF_{2}, y CF_{3}CF_{2}CF_{2}) es útil para preparar algunos de los compuestos reivindicados en la presente invención. Pg es un grupo protector de amina tal como se ha definido previamente, preferiblemente tritilo (trifenilmetilo). El aminobenzaldehído protegido o no, preferiblemente protegido, es tratado con un perfluoralquil trimetilsilano, preferiblemente trifluorometil trimetilsilano, seguido por el anión fluoruro, preferiblemente fluoruro de tetrabutilamonio. Del mismo modo, también pueden utilizarse el CF_{3}CF_{2}TMS o el CF_{3}CF_{2}CF_{2}TMS para preparar las cetonas sustituidas de forma apropiada. También pueden utilizarse otras fuentes de anión fluoruro tales como el fluoruro de sodio, fluoruro de potasio, fluoruro de litio, fluoruro de cesio así como especies oxianiónicas tales como el tert- butóxido potásico, el metóxido sódico, el etóxido sódico y el trimetilsilanolato de sodio. También pueden utilizarse disolventes apróticos tales como DMF y THF, preferiblemente THF. La cantidad de perfluoralquil trimetilsilano utilizada puede estar comprendida entre aproximadamente 1 y aproximadamente 3 equivalentes con una cantidad equivalente del anión fluoruro o de especies oxianiónicas. La reacción puede llevarse a cabo de un modo típico a una temperatura comprendida entre aproximadamente -20ºC y aproximadamente 50ºC, preferiblemente entre aproximadamente -10 y aproximadamente l0ºC, más preferiblemente aproximadamente a 0ºC.
La conversión de IIIb en IIIc puede conseguirse utilizando un agente de oxidación bien conocido por un experto en la materia, tal como MnO_{2}, PDC, PCC, K_{2}Cr_{2}O_{7}, CrO_{3}, KMnO_{4}, BaMNO_{4}, Pb (OAc)_{4}, y RuO_{4}. Un oxidante preferido es el MnO_{2}. Dicha conversión puede ser llevada a cabo en un disolvente aprótico del tipo THF, DMF, diclorometano dicloroetano, o tetracloroetano, preferiblemente diclorometano.
Esquema 9
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En el esquema 9 se muestra un medio adicional de preparar las 4-alquinil-1,4-dihidro-2H-3,1-benzoxazin-2-onas. Se adiciona el grupo alquino a la ceto-anilina a través de una adición de tipo Grignard seguida por ciclación. El grupo alquino del producto puede ser modificado a continuación para obtener el compuesto deseado.
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Esquema 10
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Además de los métodos de obtención de ceto-anilinas descritos en los Esquemas 1 y 2, también puede utilizarse la apertura nucleofílica de anhídridos isatóicos tal como se muestra en el Esquema 10. Esta reacción se lleva a cabo mediante la utilización de un nucleófilo aniónico del grupo R^{la}. Ver Mack y col., J. Heterocyclic Chem. 1987, 24, 1733-1739; Coppola y col., J. Org. Chem. 1976, 41 (6), 825831; Takimoto y col., Fukuoka Univ. Sci. Reports 1985, 15 (1), 37-38; Kadin y col., Synthesis 1977, 500- 501; Staiger y col., J. Org. Chem. 1959, 24, 1214-1219.
Se prefiere que la estequiometría del reactivo anhídrido isatoico respecto al nucleófilo sea de aproximadamente entre 1,0 y 2,1 equivalentes molares. Se prefiere el uso de 1,0 eq. o más (por ej., 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, o 2,0) de anión (o del precursor del anión) para forzar la conversión y mejorar el rendimiento aislado. Preferiblemente, la temperatura utilizada está comprendida entre aproximadamente -20 y +35ºC, siendo las temperaturas más preferidas las inferiores a 0ºC y siendo incluso la temperatura de -20ºC la más preferida. Las reacciones se llevan a cabo hasta que sean prácticamente completas siendo dependientes entre otros factores del nucleófilo, del disolvente, y de la temperatura. Preferiblemente esta adición de nucleófilo se lleva a cabo en THF, pero cualquier disolvente aprótico sería adecuado. La reacción con el anión nucleofílico activo es el único criterio para la exclusión de un disolvente.
Esquema 11
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Un intermedio en este nuevo procedimiento es la clorobenzoxazinona (II) que puede ser sintetizada a partir de la correspondiente ceto-anilina tal como se muestra en el Esquema 11. La preparación de compuestos de fórmula II funciona bien tanto con la base libre de la ceto-anilina como con su clorhidrato hidrato, aunque se prefiere la base libre debido a su reactividad inherente. El reactivo de carbonilación o de tiocarbonilación está seleccionado entre el grupo: fosgeno (COCl_{2}), tiofosgeno (CSCl_{2}), carbonildiimidazol (CDI), clorometilcarbonato, cloroetilcarbonato, dimetilcarbonato, dietilcarbonato, y di-t-butilcarbonato. Preferiblemente, se utiliza el fosgeno como reactivo de carbonilación.
Se utilizaron aproximadamente 1, 2, 3, 4, ó 5 equivalentes del reactivo de carbonilación o de tiocarbonilación, preferiblemente entre aproximadamente 1 y aproximadamente 2,5, incluso más preferiblemente entre aproximadamente 1 y 2, y todavía más preferiblemente aproximadamente 1, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, ó 1,5 equivalentes. Con reactivos volátiles del tipo fosgeno, el usar más de un equivalente puede ayudar a la conversión y al rendimiento de la reacción pero no es necesario para efectuar la transformación.
Disolventes tales como el tolueno pueden ser utilizados. También pueden ser utilizados disolventes no reactivos adicionales, tales como éteres (por ej., dimetil éter y éter dietílico), hidrocarburos (por ej., hexano y ciclohexano) u otros disolventes aromáticos (por ej., benceno, anisol, o quinolina). Se prefiere los disolventes con puntos de ebullición próximos a los del tolueno o superior. El uso de dichos disolventes permite la aplicación de calor a la reacción para facilitar la ciclación. Cuando se utiliza el reactivo de carbonilación preferido, el fosgeno, el calor ayuda a eliminar el HCl generado y a favorecer la reacción de ciclación. Cuando se utiliza el tolueno, se prefiere llevar a cabo la reacción a un punto de ebullición próximo al del tolueno. Sin embargo, un experto en la materia medio reconocería que una temperatura de reacción demasiado elevada podría descomponer el producto. Además, una temperatura demasiado baja puede causar una reacción lenta indeseable. El progreso de la reacción puede estar determinado por la decoloración de la mezcla de reacción (indicando consumo del producto de partida) y confirmación de que es completa por RMN de protón. La reacción puede ser catalizada por la adición de un captador de ácido tal como una base de tipo amina (por ej., trietilamina o una base de Hunigs) o por una base inorgánica (por ej., carbonato de sodio o de potasio).
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Esquema 12
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El Esquema 12 describe diferentes rutas para obtener una variedad de compuestos sustituidos en R^{2} de fórmula Ia por reacción de un nucleófilo (R^{2b}) con un compuesto de fórmula II (preferiblemente R^{la}es CF_{3}). Esta reacción de desplazamiento es bastante versátil y pueden utilizarse un amplio rango de nucleófilos. Preferiblemente el nucleófilo es una amina (por ej., R^{8}R^{7}CHNH) o una especie metálica seleccionada entre R^{8}R^{7}CH-OM,R^{8}R^{7}CH-SM, R^{8}R^{7}CHNH- M, R^{8}-C C-M, R^{7}R^{8}C=CH-M, R^{8}R^{7}CH (CH_{2})_{p}-M, R^{8}CH=CHC (H) (R^{7})-M, y R^{8}R^{7}CHCH=CH-M. Además, el R^{8}R^{7}CH-OH y su análogo tiol, R^{8}R^{7}CH-SH,pueden ser utilizados sin formación de sus correspondientes aniones. La mitad metálica,M, está seleccionada entre el grupo Na, Li, Zn, Mg, Cu, Pd, Pt, Sn, Al, y B, preferiblemente Li, Mg, o Zn.
Si se utiliza un nucleófilo metálico, éste puede ser preparado in situ por los métodos conocidos por los expertos en la materia o formado por métodos conocidos por los expertos en la materia y adicionado a continuación sobre una solución. En cada caso, se prefiere que el compuesto de compuesto de fórmula II se adicione a una solución conteniendo el nucleófilo.
Preferiblemente, el nucleófilo es una acetilida (es decir, R^{8}-C C-M) con Li, Mg, o Zn como el contraión. Las acetilidas son bien conocidas en el estado de la técnica. Preferiblemente se forma el R^{8}-C C-M in situ por adición de una base fuerte sobre una solución conteniendo R^{8}-C C-H. Las bases fuertes son bien conocidas por los expertos en la materia e incluyen, pero no están limitadas a, n-butil litio, s-butil litio, t-butil litio, fenilo litio, y metil litio. Preferiblemente, la base fuerte es n-butil litio. La acetilida también puede ser preparada in situ por adición de una base fuerte sobre una dihalo-olefina (por ej., Br^{2}C=CHR^{8}).
En las reacciones de adición nucleofílica la estequiometría es preferiblemente aproximadamente un equivalente de benzoxazinona respecto aaproximadamente entre 1,0 y 2,5 equivalentes del nucleófilo (por ej., 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, ó 2,5). Más preferiblemente se utilizan entre aproximadamente 1,8 y 2,4 equivalentes. De forma aún más preferible, se utilizan 2,1 equivalentes del nucleófilo. Es de señalar que puede utilizarse menos de un equivalente, pero debe tenerse cuidado en que la reacción de desprotonación del N-H puede competir con la adición nucleofílica. Es preferible llevar a cabo las adiciones entre -40 y 0ºC, más preferiblemente aproximadamente a -20ºC. El disolvente utilizado es preferiblemente THF, pero puede ser adecuado cualquier disolvente aprótico, tal como dimetil éter, éter dietílico, benceno, o tolueno. El único criterio para la exclusión de un disolvente es el que no reaccione con el nucleófilo, de formaespecífica con el anión nucleofílico.
Un enantiómero de un compuesto de Fórmula I puede mostrar una actividad superior en comparación con el otro. De este modo, ambas estequiometrías son consideradas como parte de la presente invención.
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En el caso en que se requiera, puede conseguirse la separación del material racémico por HPLC utilizando una columna quiral o por una resolución utilizando un agente de resolución tal como cloruro camfórico como en Steven D. Young, y col., Antimicrobial Agents y Chemotheraphy, 1995, 2602-2605. También puede sintetizarse de forma directa un compuesto quiral de Fórmula I utilizando un catalizador quiral o un ligando quiral, por ej. Andrew S. Thompson, y col., Tet. lett. 1995, 36, 8937-8940.
Otro método de formación de un compuesto en donde Z es C (OH) implica la incubación de NNRTI, o un derivado del mismo, en microsomas obtenidos a partir de ratas machos, monos rhesus machos o humanos, preferiblemente de ratas machos. Además, es preferible dosificar de forma oral a las ratas machos con NNRTI antes de la recogida de sus hígados y del aislamiento de los microsomas. Este procedimiento será descrito en la siguiente sección de Ejemplos.
Otras características de la invención se harán aparentes en el curso de las siguientes descripciones de las realizaciones de los ejemplos que de dan para ilustración de la invención y que no pretenden ser una limitación de la misma.
Ejemplos
Las abreviaciones utilizadas en los Ejemplos se definen a continuación: "ºC" para grados Celsius, "d" para doblete, "dd" para doblete de doblete, "eq" para equivalente o equivalentes, "g" para gramo o gramos, "mg" para miligramo o miligramos, "mL" para mililitro o mililitros, "H" para hidrógeno o hidrógenos, "hr" para hora o horas, "m" para multiplete, "M" para molar, "min" para minuto o minutos, "MHz" para megahertz, "MS" para espectroscopia de masas, "nmr" o "NMR" paraa espectroscopia de resonanci magnética nuclear, "t" para triplete, "TLC" para cromatografía en capa fina, "EDAC" para hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, "DIPEA" para diisopropiletilamina, "TBAF" para floruro de tetrabutilamonio, "LAH" para hidruro de litio aluminio, y "TEA" para trietilamina.
Ejemplo 1
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Preparación de (+/-)-6-cloro-4-(ciclopropiletinil)-8-hidroxi-4-(trifluormetil) -1,4-dihidro-2h-3,1-benzoxazin-2-ona
Parte a
Preparación de 4'-cloro-2'-metoxi-2,2 dimetilpropionanilida
Se calentó una solución sometida a agitación de 22.6 g (100mmol) de cloruro de estaño dihidratado en 40mL de etanol absoluto a reflujo y se trató con 3.75 g (20mmol) de 5-cloro-2-nitroanisolo en 20mL de 1:1 etanol tetrahidrofurano durante 3 min. Se sometió a agitación a reflujo durante 10 minutos adicionales obteniéndose una solución clara que posteriormente se enfrió hasta 0ºC. La mezcla se trató con Na_{2}CO_{3} acuoso hasta conseguir un pH de 8-9. La suspensión coloidal se extrajo dos veces con acetato de etilo, y los extractos orgánicos combinados se lavaron con NaHCO_{3} saturado y después con salmuera. La solución se secó (MgSO_{4}) y se concentró bajo presión reducida. El aceite crudo se disolvió en 40mL de CH_{2}Cl_{2} y se enfrió hasta 0ºC. La solución se trató con 4.2mL (30mmol) de trietilamina seguido por 2.8mL (23mmol) de cloruro de pivaloilo. Después de someter la mezcla a agitación durante 2h a 0ºC, se neutralizó con HCl 0.5 N, y se separaron las fases. La fase acuosa se extrajo con 100mL de 1:1 eter hexanos, y los extractos orgánicos combinados se lavaron secuencialmente con HCl0.1 N, K_{2}CO_{3} diluido, agua, y salmuera. La solución se secó (MgSO_{4}) y se concentró bajo presión reducida obteniéndose 4.68 g (97%) de 4'-cloro-2'metoxi-2, 2-dimetilpropionanilida en forma de un sólido marrón, mp 66-69ºC. ^{1}H NMR (300MHz, CDCl_{3}) \delta 8.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz); 8.03 (br. s, 1H); 6.94 (dd, 1H, J = 8.8, 2.2Hz); 6.86 (d, 1H, J = 2.2Hz); 3.90 (s, 3H); 1.32 (s, 9H). Espectroscopia de masas de alta resolución: calculado para C_{l2}H_{l7}NO_{2}Cl (M + H)+: 242.0948, resultado: 242.0943. Análisis calculado para C_{l2}H_{l6}NO_{2}Cl: C, 59.63; H, 6.67; N, 5.79; Cl, 14.67.Resultado: C, 59.73; H, 6.67; N, 5.57; Cl, 14.42.
Parte b
Preparación de 2'-amino-5'-cloro-3''-metoxi-2,2,2-trifluoroacetofenona
A una solución enfriada (-20ºC) de 12.1 g (50mmol) de 4'-cloro-2'-metoxi-2,2-dimetilpropionanilida en 150mL de THF se añadieron 87mL (115mmol) de 1.3 M s-BuLi en ciclohexano durante 15 min. La solución oscura se calentó hasta 0ºC y se sometió a agitación durante 1.2 h. La solución se volvió a enfriar hasta -20ºC y se trató con 14.3mL (120mmol) de trifluoroacetato de etilo durante 5 min. La reacción se calentó hasta 0ºC, se sometió a agitación 15 minutos y se neutralizó con NaHCO_{3} acuoso saturado. La mezcla se extrajo con hexanos y después con eter, y los extractos orgánicos combinados se lavaron secuencialmente con HCl 0.5 N, agua, y salmuera. La solución se secó (MgSO_{4}) y se concentró bajo presión reducida obteniéndose un aceite espeso. La amida cruda se disolvió en 20mL de 1,2-dimetoxietano y se trató con 100mL de HCl acuoso 6 N. La mezcla se sometió a agitación a reflujo durante 2h, se enfrió hasta 0ºC, y se llevó hasta pH 9 con K_{2}CO_{3}. La mezcla se extrajo dos veces con eter, y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO_{4}), y se concentraron bajo presión reducida obteniéndose un sólido aceitoso. Este producto crudo se recristalizó de los hexanos y una cantidad mínima de acetato de etilo obteniéndose 7.75 g (61%) de 2'-amino-5'-cloro-3'-metoxi-2,2,2trifluoroacetofenona en forma de agujas amarillas, mp 124.5-125.5ºC. ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7.32-7.35 (m, 1H); 6.87 (br. s, 2H); 6.84 (d, 1H, J=1,8 Hz); 3.92 (s, 3H). Espectroscopia de masas de alta resolución: calculado para C_{9}H_{8}NO_{2}ClF_{3} (M + H)^{+}: 254.0196, resultado: 254.0194. Análisis calculado para C_{9}H_{7}NO_{2}ClF_{3}: C, 42.62; H, 2.78; N, 5.52; Cl, 13.98. Resultado: C, 42.52; H, 3.04; N, 5.40; Cl, 13.74.
Parte c
Preparación de 2'-amino-5'-cloro-3'-hidroxi-2,2,2-trifluoroacetofenona
A una solución removida, enfriada (0ºC) de 31.2 g (123mmol) de 2'-amino-5' -cloro-3'-metoxi-2,2,2-trifluoroacetofenona en 150mL de CH_{2}Cl_{2} se añadió 550mL (550mmol) de BBr_{3} 1 M en CH_{2}Cl_{2} durante 20 min. La solución oscura se sometió a agitación durante 17 h a temperatura ambiente, se volvió a enfriar hasta 0ºC, y se colocó con un embudo de adición de goteo de compensador de presión y un adaptador de Claisen conectado con un tubo de goma a un pulverizador de agua grande. La reacción se neutralizó cuidadosamente con la adición gota a gota de Na_{2}CO_{3} acuoso hasta alcanzar un pH de 7-8. Las fases se separaron, y la fase acuosa se extrajo con 1 litro de 1:1 eter hexanos. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua y después con salmuera, se secaron (MgSO_{4}), y se concentraron bajo presión reducida obteniéndose 30.1 g (100%) de 2'-amino5'-cloro-3'-hidroxi-2,2,2-trifluoroacetofenona en forma de un sólido marrón gredoso, mp 120-122ºC. ^{1}H NMR (300MHz, CDCl_{3}) \delta 7.33-7.36 (m, lH); 6.88 (d, 1H, J = 1.8 Hz); 6.75 (br s, 2H); 5.78 (br. s, 1H). Espectroscopia de masas de alta resolución: calculado para C_{8}H_{6}NO_{2}ClF_{3} (M + H)^{+}: 240.0039, resultado: 240.0029.
Parte d
Preparación de 2'-amino-5'-cloro-3'-(t-butildimetilsililoxi)-2,2,2-trifluoroacetofenona
A una solución sometida a agitación, enfriada(0ºC) de 29.3 g (122mmol) de 2'-amino-5'-cloro-3'-hidroxi-2,2,2-trifluoroacetofenona en 280mL de DMF se añadió 23.8g (350mmol) de imidazol seguido por 66 g (250mmol) de trifluorometanosulfonato de t-butildimetilsililo durante 10 min. La reacción se sometió a agitación 5h a 0ºC y se diluyó con 800mL de 1:1 eter hexanos. La solución se lavó dos veces con agua y una con salmuera, se secó (MgSO_{4}) y se concentró bajo presión reducida obteniéndose un aceite oscuro. El producto crudo se pasó rápidamente a través de 800 g un tapón de gel de sílice (elución con hexanos seguido por 6:1 hexanos eter) obteniéndose, después de la evaporación de solvente, 42.5 g (98%) de 2'-amino-5'-cloro3'-(t -butildimetilsililoxi)-2,2,2-trifluoroacetofenona en forma de un aceite amarillo. El producto se solidificó después de una evacuación extensiva a 0.01 torr, obteniéndose un sólido amarillo, mp 45-46.5ºC. ^{1}H NMR (300MHz, CDCl_{3}) \delta 7.34-7.36 (m, 1H); 6.85 (d, 1H, J = 2.2Hz); 6.7-6.8 (br. s, 2H); 1.03 (s, 9H); 0.30 (s, 6H). Espectroscopia de masas de alta resolución: calculado para C_{l4}H_{20}NO_{2}ClF_{3}Si (M + H)^{+}: 354.0904, resultado: 354.0900. Análisis calculado para C_{l4}H_{19}NO_{2}ClF_{3}Si: C, 47.52; H, 5.41; N, 3.97; Cl, 10.02. Resultado: C, 47.71; H, 5.36; N, 3.87; Cl, 10.02.
\newpage
Parte e
Preparación de (+/-)-2-(2-amino-5-cloro-3-(t-butildimetilsililoxi)fenil)-4-ciclopropil-1,1,1-trifluoro-3-butin-2-ol
A una solución sometida a agitación, enfriada (0ºC) de 31.8mL (300mmol) de 5-cloro-1-pentino en 250mL de THF se añadió 252mL (630mmol) de n-BuLi 2.5 M en hexanos durante 20 min. Durante el curso de la adición la temperatura interna se calentó a temperatura ambiente, y la mezcla se sometió a agitación a esta temperatura durante 40 min. La reacción se enfrió hasta -20ºC y se trató con una solución de 32.7 g (97.4mmol) de 21-amino-5'- cloro-3'-(t-butildimetilsililoxi)-2,2,2trifluoroacetofenona en 50mL de THF durante 10 min. La solución oscura se sometió a agitación 30 minutos adicionales y el baño de enfriamiento se eliminó. La reacción se sometió a agitación 5min y se vertió sobre 800mL de ácido cítrico 1 N a 0ºC removiendo rápidamente. La mezcla se extrajo dos veces con eter, y los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y después con salmuera, se secó (MgSO_{4}), y se concentró bajo presión reducida. Cromatografía sobre gel de sílice (elución con hexanos y después hexanos eter 3:1) obteniéndose 28.8 g (70%) de (+/-)-2-(2-amino-5cloro-3-(t-butildimetilsililoxi)fenil)-4 -ciclopropill,1,1-trifluoro-3-butin-2-ol en forma de un sólido blanquecino, mp 125-126ºC. ^{1}H NMR (300MHz, CDCl_{3}) \delta 7.22 (d, 1H, J = 2.2Hz); 6.76 (d, 1H, J = 2.2Hz); 4.86 (br. s, lH); 4.39 (br. s, 2H); 1.32-1.43 (m, lH); 1.02(s, 9H); 0.79-0.92 (m, 4H); 0.27 (s, 3H); 0.26 (s, 3H). Espectroscopia de masas de alta resolución: calculado para C_{19}H_{26}NO_{2}ClF_{3}Si (M + H)^{+}: 420.1373, resultado: 420.1363.
Parte f
Preparación de (+/-)-6-cloro-4-(ciclopropiletinil)-8-hidroxi-4-(trifluorometil)-1,4-dihidro-2h-3,1-benzoxazin-2 -ona
A una solución removida, enfriada (-25ºC) de 28.8 g (68.6mmol) (+/-)-2-(2-amino-5-cloro-3-(t-butildimetilsililoxi)fenil)-4-ciclopropil-1,1,1- trifluoro3-butin-2-ol en 600mL de tolueno se añadió 36mL (206mmol) de N, N-diisopropiletilamina seguido por 38.9mL (75mmol) de una solución 1.93 M de fosgeno en tolueno durante 20 min. La solución se sometió a agitación 20 min. adicionales a -25ºC, después de este tiempo se calentó hasta -5ºC y se neutralizó con agua. La mezcla se lavó con 100mL de HCl acuoso 1 N y después con salmuera, se secó (MgSO_{4}), y se concentró bajo presión reducida obteniéndose un sólido canela. El producto crudo se disolvió en 200mL de THF, se enfrió hasta 0ºC, y se trató con 40mL de fluoruro de tetra (n- butil)amonio 1M en THF durante 5 min. La solución se diluyó con 200mL de eter y se lavó secuencialmente con ácido cítrico acuoso 1 M, agua, y salmuera. La solución se secó (MgSO_{4}), se concentró bajo presión reducida y se cromatografió sobre gel de sílice. Después de la concentración bajo presión reducida, se eluyó con eter hexanos 1:3 y después con eter hexanos 1:1 obteniéndose 21.4 g (94%) de (+/-)-6-cloro-4 (ciclopropiletinil)-8-hidroxi-4-(trifluorometil)-1,4dihidro-2H-3,1-benzoxazin-2-ona en forma de un sólido blancuzco. ^{1}H NMR (300MHz, CDCl_{3}) \delta 8.46 (br s, 1H); 7.01-7.07 (m, 2H); 1.331.43 (m, lH); 0.81-0.97 (m, 4H). Espectroscopia de masas de alta resolución: calculado para C_{14}H_{10}NO_{3}ClF_{3} (M + H)^{+}: 332.0301, resultado: 332.0283.
Ejemplo 2
27
Preparación de (-)-6-cloro-4-(ciclopropiletinil)-8-hidroxi 4-(trifluorometil)-1,4-dihidro-2h-3,1-ben2oxazin-2-ona
La cromatografía de 22 g de 6-cloro-4 (ciclopropiletinil)-8-hidroxi-4 -(trifluorometil)-1,4dihidro-2H-3,1-benzoxazin-2-ona (I) racémica en una columna Quiralpak AD-7.5 cm I.D. x 30gm usando metanol al 20% - dióxido de carbono al 80% como fase móvil a un caudal de 120mL/min. dio como resultado dos fracciones. La fracción de elución más rápida se concentró y se recristalizó de los hexanos y una cantidad mínima de acetato de etilo, obteniéndose 5 g del compuesto del título en forma de un sólido blanco, mp 170-172ºC. ^{1}H NMR (300MHz, CDCl_{3}) \delta 8.46 (br s, 1H); 7.01-7.07 (m, 2H); 1.33-1.43 (m, 1H); 0.81-0.97 (m, 4H). [a]Nad (250C) = -320, c = 0.28. Análisis calculado para C_{14}H_{9}NO_{3}ClF_{3}: C, 50.70; H, 2.75; N, 4.22; Cl, 10.69. Resultado: C, 50.74; H, 2.86; N, 4.26; C_{1}, 10.77.
Ejemplo 3 Preparación de (-) 6-cloro-4-(ciclopropiletinil)-8-hidroxi-4-(trifluorometil)-1,4-dihidro-2h-3,1-benzoxazin-2-ona por fracciones microsomales hepáticas de rata
La incubación de (-)6-cloro-4-ciclopropiletinil-4trifluorometil-1,4-dihidro-2H-3,1-benzoxazin-2-ona (NNRTI) con microsomas hepáticos de ratas se trató previamente con NNRTI y cofactores necesarios para favorecer el metabolismo oxidativo de los citocromos P450, resultó en la formación de un metabolito principal separable de NNRTI por cromatografía líquida de alta resolución de fase reversa (HPLC). Las incubaciones se llevaron a cabo durante 2 horas a 37ºC en un tampón fisiológico. Después de la precipitación de la proteína con acetonitrilo, los sobrenadantes se secaron bajo nitrógeno y se reconstituyeron en una mezcla de acetonitrilo (v/v): ácido fórmico acuoso 0.01% 55:45 (pH 3.5) y se inyectaron en el sistema HPLC. El efluente de la columna se observó a 247nm. El único pico observado eluído a 4 minutos aproximadamente se reunió y se combinó por inyección múltiple. La purificación final se llevó a cabo usando el mismo sistema de HPLC y un gradiente lineal desarrollado durante 15 minutos empezando con el solvente A ( (v/v) metanol: ácido fórmico acuoso al 0.01% 50:50, pH 3.5), aumentado la proporción de solvente B (v/v metanol: ácido fórmico acuoso al 0.01% 80:20 pH 3.5) y después manteniendo el solvente B constante durante 5 minutos antes de re-equilibrar con el solvente A. El único pico puntiagudo eluído a 16.5 minutos aproximadamente se recogió y se secó al vacío. El metabolito purificado descrito anteriormente se disolvió en 0.2 mL de metanol-d4 y se colocó en un tubo de 3 mm de NMR. El espectro ce NMR de protón se consiguió usando un pulso de 30 grados, un tiempo de adquisición de 4 segundos y un tiempo de 2 segundos de retraso de relajación durante el cual la señal de agua residual se suprimió por irradiación selectiva. El espectro se referenció al solvente un 3.30 ppm.
Ejemplo 4
28
Preparación de (+/-)-6-cloro-4-(ciclopropiletinil)-8-fluoro-4-(trifluorometil)-1,4,-dihidro-2h-3,1-benzoxazin-2-ona
Parte a
Preparación de 2'-(trimetilacetamido)-4'-cloro-2'-fluoro-2,2,-dimetilpropioanilida
A una solución removida y enfriada (0ºC) de 3.64 g (25.0 mol) de 4-cloro-2-fluoroanilina y 4.2ml (30mmol) de trietilamina en 50mL de THF se añadió 4.18mL (26mmol) de cloruro de pivaloilo. Después de remover durante 10 min. a 0ºC la mezcla se calentó hasta temperatura ambiente y se vertió sobre HCl 0.5N. La mezcla se extrajo con 100mL de eter, y el extracto orgánico se lavó secuencialmente con NaHCO_{3} y salmuera. La solución se secó (MgSO_{4}), se concentró bajo presión reducida, y se cromatografió sobre gel de sílice (elución con hexanos eter 3:1) obteniéndose, después de eliminar el solvente, 5.2 g (92%) de 4'-cloro-2'-fluoro-2,2-dimetilpropionanilida en forma de un sólido de color rosa pálido (IX), mp 70.5-71ºC. ^{1}H NMR (300MHz, CDCl_{3}) \delta 8.36 (t, 1H, J = 8.4 Hz); 7.57 (br. s, lH); 7.10-7.17 (m, 2H); 1.30 (s, 9H).^{19}F NMR (282MHz, CDCl_{3}) \delta -129.8. Espectroscopia de masas de alta resolución: calculado para C_{11}H_{l4}NOClF (M + H)^{+}: 230.0748, resultado: 230.0760.
Parte b
Preparación de 2'-(trimetilacetamido)-5'-cloro-3'-fluoro-2,2,2-trifluoroacetofenona
A una solución sometida a agitación y enfriada (-50ºC) de 0.92 g (4.0 mmol) de 4'-cloro-2'-fluoro-2,2-dimetilpropionanilida en 10 mL de THF se añadió 2.5 mL (4.2mmol) de 1.7 M t-BuLi en pentano durante 5 min. La solución se sometió a agitación durante 5 min. y se trató con 1.0 mL (8.4 mmol) de trifluoroacetato de etilo durante 2min. La reacción se calentó hasta temperatura ambiente, se sometió a agitación 15 min., y se neutralizó con ácido cítrico acuoso 1N. La mezcla se extrajo con eter, y el extracto orgánico se lavó secuencialmente con agua y después con salmuera. La solución se secó (MgSO_{4}) y se concentró bajo presión reducida obteniéndose un aceite. La amida cruda se cromatografió sobre gel de sílice (elución con hexanos eter 3:1 seguido por hexanos eter 1:1) obteniéndose 570 mg (43%) de 2'-(trimetilacetamido)-5'-cloro-3'-fluoro-2,2,2-trifluoroacetofenona en forma de un sólido blancuzco. ^{1}H NMR (300MHz, CDCl_{3}) \delta 8.68 (s, lH); 7.45-7.47 (m, lH); 7.08 (dd, 1H, J = 9.5, 2.6 Hz); 1.3 (s, 9H). Espectroscopia de masas de alta resolución: calculado para C_{13}H_{l3}NO_{2}ClF_{4} (M + H)^{+}: 326.0571, resultado: 326.0579.
Parte c
Preparación de 2'-amino-5'-cloro-3''-fluoro-2,2,2-trifluoroacetofenona
Una solución removida de 0.35 g (1.07mmol) de 2'-(trimetilacetamido)-5'-cloro-3'-fluoro-2,2,2- trifluoroacetofenona en 3mL de 1,2-dimetoxietano y se trató con 24mL de HCl 6N aq.. La mezcla se sometió a agitación a reflujo durante 2h, se enfrió hasta temperatura ambiente, y se llevó a pH 9 con K_{2}CO_{3}. La mezcla se extrajo dos veces con eter y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secó (MgSO_{4}), y se concentró bajo presión reducida obteniéndose 240 mg (92%) de 2'-amino-5'-cloro-3'-fluoro-2,2,2 trifluoroacetofenona en forma de un sólido naranja oleoso. ^{1}H NMR (300MHz, CDCl_{3}) \delta 7.54 (m, lH); 7.25 (dd, 1H, J = 10.6, 2.2 Hz); 6.40-6.60 (br. s, 2H).Espectroscopia de masas de alta resolución: calculado para C_{8}H_{4}NOClF_{4} (M^{+}): 240.9918, resultado: 240.9914. ^{19}F NMR (282 MHz, CDCl_{3}) \delta -132.7 (s, 1F), - 70.6 (s, 3F).
Parte d
Preparación de alcohol (+/-)-2-amino-5-cloro-3-fluoro-\alpha-(ciclopropiletinil)-\alpha-(trifluorometil)benzílico
A una solución removida y enfriada (0ºC) de 2.0mL (7.0mmol) de ciclopropilacetileno 3.5 M en tolueno se añadió 2mL de THF seguido por 2.8mL (7.0mmol) de 2.5 M n-BuLi en hexanos durante 2 min. La solución se sometió a agitación 5min. a 0ºC, se calentó hasta temperatura ambiente, y se sometió a agitación durante más de 20 min. La reacción se enfrió hasta 0ºC y se trató con una solución de 300mg (1.24mmol) de 2'-amino-5'-cloro-3'-fluoro-2,2,2-trifluoroacetofenona en 3mL de THF durante 2 min. La solución se sometió a agitación 10 min. adicionales y se eliminó el baño frío. La reacción se sometió a agitación 5 min y se vertió en ácido cítrico 0.5 N. La mezcla se extrajo con eter, y el extracto orgánico se lavó con agua y después con salmuera, se secó (MgSO_{4}), y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía sobre gel de sílice (elución con hexanos y después con 3:1 hexanos eter) obtuvo 185 mg (49%) de alcohol (+/-)-2-amino-5-cloro-3-fluoro-\alpha- (ciclopropiletinil)-\alpha-(trifluorometil)-benzílico en forma de un sólido blancuzco, mp 131-135ºC. ^{1}H NMR (300MHz, CDCl_{3}) \delta 7.34-7.36 (m, 1H); 7.04 (dd, 1H, J = 10.4, 2.4Hz); 4.58 (br. s, 2H); 3.82 (br. s, 1H); 1.35-1.44 (m, lH); 0.80-0.99 (m, 4H). ^{19}F NMR (282MHz,CDCl_{3}) \delta -131.5 (s, 1F), -80.5 (s, 3F). Espectroscopia de masas de alta resolución: calculado para C_{l3}H_{l1}NOClF_{4} (M + H)^{+}: 308.0470, resultado: 308.0465.
Parte e
Preparación de (+/-)-6-cloro-4-(ciclopropiletinil)-8-fluoro-4-(trifluorometil)-1,4 dihidro-2h-3,1-benzoxazin-2-ona
A una solución sometida a agitación y enfriada (-25ºC) de 144 mg (0.47 mmol) de alcohol (+/-)-2-amino-5-cloro-3-fluoro-\alpha-(ciclopropiletinil)-\alpha-(trifluorometil)benzílico en 6mL de tolueno se añadió 0.28mL (2.0mmol) de trietilamina seguido por 0.62mL (1.2mmol) de una solución de fosgeno 1.93 M en tolueno durante 3 min. La solución se sometió a agitación 30 minutos adicionales a -25ºC y después de este tiempo se calentó a temperatura ambiente y se neutralizó con ácido cítrico acuoso 0.5 N. La mezcla se extrajo una vez con eter y una vez con acetato de etilo, y los extractos orgánicos combinados se lavaron secuencialmente con NaHCO_{3} saturado acuoso, agua, y salmuera. La solución se secó (MgSO_{4}), y se concentró bajo presión reducida obteniéndose un sólido marrón. El producto crudo se cromatografió sobre gel de sílice (elución con 3:1 hexanos eter) obteniéndose, después de su concentración, 90 mg (58%) de (+/-)-6-cloro-4-(ciclopropiletinil)-8-fluoro-4-(trifluorometil)-1,4-dihidro-2H-3,1-benzoxazin-2-ona en forma de un sólido blancuzco. ^{1}H NMR (300MHz, CDCl_{3}) \delta 7.65 (br s, 1H); 7.32-7.34 (m, 1H); 7.22 (d, 1H, J = 2.2Hz); 1.36-1.43 (m, 1H); 0.82-0.98 (m, 4H). ^{19}F NMR (282MHz, CDCl_{3}) \delta -132.5 (s, 1F), -81.1 (s, 3F). Espectroscopia de masas de alta resolución: calculado para C_{14}H_{9}NO_{2}ClF_{4} (M + H)^{+}: 334.0258, resultado: 334.0244.
Ejemplo 8 Preparación de (+/-)-5,6-difluoro-4-(3-metil)-1-buten-1-il-4-trifluorometil-1,4-dihidro-2h-3,1-benzoxazin-2-ona
Parte a
Preparación de alcohol 2,3-difluoro-6-trifenilmetilamino-\alpha-1-(3-metil)-1-butinil-\alpha-trifluorometil-benzílico
A una solución de 3-metil-1-butino (0.73 g, 10.7mmol) en THF seco (5 mL) a -20ºC se añadió n-BuLi 1.6M en hexano gota a gota y la mezcla se sometió a agitación durante 15 minutos a la misma temperatura. Después, una solución de 2,3-difluoro-6-trifenilmetilamino-\alpha,\alpha,\alpha trifluoroacetofenona (1 g, 2.14mmol) en 5mL de THF se añadió gota a gota a -20ºC. Después de remover durante 10 minutos, el baño de frío se eliminó y se dejó calentar hasta temperatura ambiente. La mezcla se sometió a agitación durante 45 minutos y se vertió sobre NH_{4}Cl saturado. El producto se extrajo con eter, se lavó con NaHCO_{3} saturado y salmuera y se secó sobre MgSO_{4}. La evaporación del solvente dio como resultado un residuo oleoso, que se cristalizó de una mezcla de metanol, eter y hexano para obtenerse el producto puro (0.432 g, 37.6%).
Parte b
Preparación de alcohol 2,3-difluoro-6-trifenilmetilamino-\alpha-1-(3-metil)-1-butenil-\alpha-trifluorometil-benzílico
A una solución de 2, alcohol 3-difluoro-6-trifenilmetilamino-\alpha-1-(3-metil)-1-butinil-\alpha-trifluorometil-benzílico (0.431 g, 0.8 mmol) en 5 mL de THF seco se añadió hidruroaluminio de litio 1 M en TMF (2.41 mL, 2.41 mmol) a temperatura ambiente y la mezcla se sometió a agitación durante 1 hora. La reacción se neutralizó con varias gotas de NH_{4}Cl saturado y se añadió aproximadamente 20mL de eter. Después de someterla a agitación durante 10 minutos se lavó con NaHCO_{3} saturado y se secó sobre MgSO_{4}. La evaporación del solvente dio como resultado el compuesto transolefínico en un rendimiento cuantitativo cercano.
Parte C
Preparación de alcohol 6-Amino-2,3-Difluoro-\alpha-1-(3-metil)-1-butenil-\alpha-trifluorometil-benzílico
Una solución del producto crudo del paso 2 (0.8mmol) y 1.33mL de c-HCl en metanol (5mL) se sometió a agitación durante 1 hora a temperatura ambiente y se basificó con NaHCO_{3} saturado. Se extrajo con eter y se lavó con salmuera. Después de secarlo sobre MgSO_{4}, el solvente se evaporó totalmente obteniéndose un residuo oleoso. Se cristalizó de hexano obteniéndose alcohol 6-amino-2,3-difluoro-\alpha-1-(3-metil)-1-butenil-\alpha-trifluorometil-benzílico puro (0.184 g, 78%).
Parte d
Preparación de 5,6-difluoro-4-(3-metil)-1-buten-1-il-4-trifluorometil-1,4-dihidro-2h-3,1-benzoxazin-2-ona
A una solución de amino alcohol crudo (0.13 g, 0.44 mmol) en tolueno seco (5 mL) a 0ºC se añadió diisopropiletilamina (0.23 mL, 1.32 mmol) y 0.24 mL de fosgeno 2M en tolueno (0.48 mmol) gota a gota; la mezcla se sometió a agitación durante 5 minutos a 0ºC y durante 30 minutos a temperatura ambiente. Después de la adición de NH_{4}Cl saturado (5mL) se extrajo con eter y la capa orgánica se lavó con salmuera. Se secó sobre MgSO_{4} y se evaporó al vacío obteniéndose un residuo oleoso. Se purificó por cromatografía de columna sobre gel de sílice (1:9 eter hexano) obteniéndose el compuesto del título puro (0.051 g, 36%).
Ejemplo 9 Preparación de (+/-)-4-isopropiletinil-4-trifluorometil-5,6-difluoro-1,4-dihidro-2h-3,1-benzoxazin-2-ona.
Parte a
Preparación de n-trimetilacetil-3,4-difluoroanilida
A una solución de 3,4-difluoroanilina (19mL, 191mmol) en cloruro de metileno (500mL) a 0ºC se añadió trietilamina (32mL, 230mmol) seguido por la adición gota gota de cloruro de trimetilacetilo (24mL, 191mmol) y la mezcla de la reacción resultante se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 3h. La mezcla de la reacción se vertió sobre HCl 3N y se extrajo con cloruro de metileno (3x100mL) y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre NaSO_{4} anhídrico y se concentró al vacío. El residuo se recogió en hexanos (300mL) y se filtró a través de un embudo de vidrio sinterizado. Los sólidos se lavaron a fondo con hexanos (500mL) y se secaron bajo vacío obteniéndose 37.36 g de la amida de pivaloilo en forma de sólido (40.68 g teóricos, rendimiento del 92%).
Parte b
Preparación de n-trimetilacetil 5,6-difluoro-2-trifluoroacetilanilida
A una solución de N-trimetilacetil-3,4-difluoroanilida (4.0 g, 14.6mmol) en THF (60mL) a -78ºC se añadió gota a gota nBuLi 1.6M en hexano (22mL, 35mmol) y la mezcla de reacción resultante se sometió a agitación a -78ºC durante 1h. El trifluoroacetato de etilo (4mL, 33.6mmol) se añadió a la mezcla de reacción y la solución resultante se sometió a agitación calentándola hasta temperatura ambiente (se eliminó el baño de hielo después de la adición del reactivo) durante 0.5h. La mezcla de reacción se vertió sobre NH_{4}Cl saturado y se extrajo con eter (3x50mL). Los extractos de eter combinados se secaron sobre MgSO_{4} anhídrico y se concentraron al vacío obteniéndose un aceite naranja. Este producto se usó en el siguiente paso de la secuencia sintética sin purificación adicional.
Parte c
Preparación de 5,6-difluoro-2 trifluoroacetilanilina
A una solución del aceite naranja en DME (15mL) se añadió HCl 6N (75mL) y la mezcla resultante se dejó a reflujo durante 2h. La mezcla de reacción se enfrió, se basificó con Na_{2}CO_{3} sólido y se extrajo con eter (3x50mL). Los extractos de eter combinados se secaron sobre MgSO_{4} anhídrico y se concentró al vacío. La cromatografía (SiO_{2}, eluyente EtOAc-hexanos 20%) dio como resultado 2110 mg de 5,6-difluoro-2 trifluoroacetilanilina en forma de un sólido amarillo (3285 mg teóricos,rendimiento del 64%).
Parte d
Preparación de alcohol 2-amino-5,6-difluoro-\alpha-isopropiletinil-\alpha-trifluorometil-benzílico
A una solución de 3-metil-1-butino (0.36mL, 3.56mmol) en THF (6mL) a 0ºC se añadió nBuLi 1.6M en hexano (2.2mL, 3.56mmol) y la mezcla de reacción resultante se sometió a agitación a 0ºC durante 0.5h. Una solución de 5,6 -difluoro-2-trifluoroacetilanilina (200 mg, 0.89mmol) en THF (6mL) se añadió a la mezcla de reacción y la mezcla de reacción resultante se sometió a agitación con calor hasta temperatura ambiente (el baño de hielo se eliminó después de la adición del reactivo) durante 0.5h. La mezcla de reacción se vertió sobre NH_{4}Cl saturado y se extrajo con eter (3x50mL). Los extractos de eter combinados se secaron sobre MgSO_{4} anhídrico y se concentraron al vacío obteniéndose un aceite naranja. Este producto se usó en el siguiente paso de la secuencia sintética sin purificación adicional.
Parte e
Preparación de 4-isopropiletini-1-4-trifluoromethil-5,6-difluoro-1,4-dihidro-2H-3,1benzoxazin-2-ona
A una solución de amino alcohol (producto crudo, 1.21mmol) en tolueno (4mL) a 0ºC se añadió N,N-diisopropiletilamina (0.54mL, 3.12mmol) seguido por una solución de fosgeno 1.93M en tolueno (0.6mL, 1.16mmol) y la solución resultante se sometió a agitación a 0ºC durante 0.1h. La mezcla de reacción se vertió sobre agua y se extrajo con eter (3x50mL). Los extractos de eter combinados se secaron sobre MgSO_{4} anhídrico y se concentró al vacío. La cromatografía (SiO_{2}, eluyente EtOAc hexanos al 20%) proporcionó 45 mg del compuesto del título (284 mg teóricos,rendimiento del 16%).
Ejemplo 10 Preparación de 2-trifluoroacetilanilina
Parte a
Preparación de alcohol 2-amino-\alpha-trifluorometil-benzílico
A una solución de amino cetona (155 mg, 0.7mmol) en metanol (2mL) a temperatura ambiente se añadió
Pd(OH)_{2} (20 mg) y se hidrogenó (H_{2}/globo) durante 2h. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite y se concentró al vacío. Los sólidos se trituraron con eter (20mL) y se secaron al vacío obteniéndose 117 mg de alcohol 2-amino-\alpha-trifluorometil-benzílico en forma de un sólido amarillo pálido. (134 mg teóricos,rendimiento del 87%).
Parte b
Preparación de 2-trifluoroacetilanilina
A un líquido de amino alcohol (520 mg, 2.72mmol) en cloruro de metileno (5mL) a temperatura ambiente se añadió MnO_{2} (l0xwt, 5 g) y la mezcla resultante de reacción se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 0.75h. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite y se concentró al vacío obteniéndose un aceite naranja que se usó sin purificación adicional debido a la inestabilidad del compuesto.
Ejemplo 11 Preparación de 3-fluoro-2-trifluoroacetiltrifenilmetilanilina
Parte a
Preparación de 2-amino-6-fluorobenzoil n-metoxi metilamida
A una solución de ácido 2-amino-6-fluorobenzoico (5 g, 32.26mmol) en AcCN (100 mL) a temperatura ambiente se añadió hidrocloruro de N,O-dimetilhidroxilamina (3.8 g, 38.71mmol), EDAC (7.4 g, 38.71mmol) seguido por trietilamina (5.38mL, 38.71mmol) y la mezcla resultante de reacción se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 6h. La mezcla de reacción se vertió sobre NaHCO_{3} saturado y se extrajo con EtOAc (3x100mL). Los extractos de EtOAc combinados se secaron sobre NaSO_{4} anhídrico y se concentró al vacío. La cromatografía (SiO_{2}, eluyente EtOAc hexanos al 25%) proporcionó 4.29 g del compuesto deseado (5.87 g teóricos, rendimiento del 73%).
Parte b
Preparación de 2-trifenilmetilamino-6-fluorobenzoil N-metoxi-metilamida
A una solución de 2-amino-6-fluorobenzoil N-metoximetilamida (300 mg, 2.14 mmol) en cloruro de metileno (10mL) a temperatura ambiente se añadió N,N'-diisopropilamina (1.2mL, 6.4mmol) seguido por bromuro de trifenilmetilo (830 mg, 2.57mmol) y la mezcla resultante de reacción se dejó remover a temperatura ambiente durante 0.5h. La mezcla de reacción se vertió sobre agua y se extrajo con cloruro de metileno (3x50mL) y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre NaSO_{4} anhídrico y se concentró al vacío. La cromatografía (SiO_{2}, 10% EtOAc-hexanos) proporcionó 832 mg del compuesto deseado (942 mg teóricos, rendimiento del 88%).
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Parte c
Preparación de 2-Trifenilmetilamino-6-fluorobenzaldehído
A una solución de 2-trifenilmetilamino-6-fluorobenzoil-N-metoxi-metilamida (300 mg, 0.68mmol) en TMF (4mL) a -78ºC se añadió hidruro de aluminio litio (30 mg, 0.82mmol) y la mezcla resultante de reacción se sometió a agitación con calor hasta temperatura ambiente (se eliminó el baño de hielo seco después de la adición del reactivo) durante lh. La mezcla de reacción se neutralizó con KHSO_{4} al 20% y se extrajo con EtOAc (3x100mL) y los extractos de EtOAc combinados se secaron sobre NaSO_{4} anhídrico y se concentraron al vacío. Cromatografía (SiO_{2}, 5% EtOAc-hexanos)proporcionó 182 mg del compuesto del título (260 mg teóricos, rendimiento del 70%).
Parte d
Preparación de alcohol 2-amino-6-fluoro-\alpha-trifluorometil-benzílico
A una solución de 2-trifenilmetilamino-6-fluorobenzaldehído (100mg, 0.24mmol) en THF (2mL) a 0ºC se añadió trifluorometiltrimetilsilano (0.06mL, 0.36mmol) seguido por una solución de fluoruro de tetrabutilamonio en THF (1M, 0.36mL, 0.36mmol) y la mezcla de reacción resultante se sometió a agitación con calor hasta temperatura ambiente (el baño de hielo se eliminó después de la adición de los reactivos) durante 0.5h. La mezcla de reacción se vertió sobre agua y se extrajo con EtOAc (3x50mL) y los extractos de EtOAc combinados se secaron sobre NaSO_{4} anhídrico y se concentraron al vacío. La cromatografía (SiO_{2}, EtOAc-hexanos al 10%) proporcionó 88 mg del compuesto del título (108 mg teóricos, rendimiento del 82%).
Parte e
Preparación de 3-fluoro-2-trifluoroacetiltrifenilmetilanilina
A una solución de alcohol 2-amino-6-fluoro-\alpha-trifluorometil-benzílico (88 mg, 0.2mmol) en cloruro de metileno (6mL) a temperatura ambiente se añadió óxido manganeso (IV) (900 mg, 10xwt) y la mezcla resultante de reacción se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 5h. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite y se concentró al vacío. La cromatografía (SiO_{2}, EtOAc-hexanos al 5%) proporcionó 52 mg del compuesto del título (90 mg teóricos,rendimiento del 58%).
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TABLA 1
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Aplicaciones
Los compuestos de esta invención poseen actividad inhibidora de la transcriptasa inversa, en particular, poseen eficacia para inhibir el VIH. Los compuestos de fórmula (I) poseen actividad inhibidora de la transcriptasa inversa del VIH y por eso son útiles como agentes antivirales para el tratamiento de la infección del VIH y enfermedades asociadas. Los compuestos de fórmula (I) poseen actividad inhibidora de la transcriptasa inversa del KIV y son efectivos como inhibidores del crecimiento del VIH. La capacidad de los compuestos de la presente invención para inhibir el crecimiento o infecciosidad viral se demuestra en ensayos estándares de crecimiento o infecciosidad viral, por ejemplo, en el ensayo descrito a continuación.
Los compuestos de fórmula (I) de la presente invención son también útiles para la inhibición del VIH en muestras ex vivo que contengan VIH o que se espere que se expongan al VIH. Así, los compuestos de la presente invención pueden utilizarse para inhibir el VIH presente en una muestra de fluido corporal (por ejemplo, una muestra de suero o semen) que contenga, que se sospeche que contenga o que esté expuesta al VIH.
Los compuestos proporcionados por esta invención también son útiles como compuestos estándares o de referencia para usar en pruebas o ensayos para determinar la capacidad de un agente de inhibir la replicación del virus clonado y/o la transcriptasa inversa del VIH, por ejemplo en un programa de investigación farmacéutica. Así, los compuestos de la presente invención se pueden usar como control o compuesto de referencia en los ensayos y como control de calidad estándar. Los compuestos de la presente invención se pueden proporcionar en un kit comercial o en un recipiente para usarse como compuestos estándaro de referencia.
Como los compuestos de la presente invención muestran especificidad para la transcriptasa inversa del VIH, los compuestos de la presente invención pueden ser útiles como reactivos de diagnóstico en ensayos de diagnóstico para detectar la transcriptasa inversa del VIH. Así, la inhibición de la actividad de la transcriptasa inversa en un ensayo (como los ensayos descritos aquí) por uno de los compuestos de la presente invención sería indicativa de la presencia de la transcriptasa inversa del VIH y del virus VIH.
Tal y como se utiliza aquí "\mug" indica microgramo, "mg" indica miligramo, "g" indica gramo, "\muL" indica microlitro, "mL" indica mililitro, "L" indica litro, "nM" indica nanomolar, "\muM" indica micromolar, "mM" indica milimolar, "M" indica molar y "nm" indica nanómetro. "Sigma" indica Sigma-Aldrich Corp. de St. Louis, MO.
Ensayo del RNA del VIH Plásmidos de DNA y transcritos de RNA in vitro
Se preparó el plásmido pDAB 72 que contenía ambas secuencias gag y pol de BH10 (bp113-1816) clonadas/a a PTZ 19R de acuerdo con Erickson-Viitanen et al. AIDS Research and Human Retroviruses 1989, 5, 577. El plásmido se linealizó con Bam HI antes de la formación de los transcritos de RNA in vitro utilizando el kit Ribosonda Gemini system II (Promega) con T7 RNA polimerasa. El RNA se purificó por el tratamiento con RNasa free DNAsa (Promega), la extracción con fenol cloroformo, y la precipitación con etanol. Los transcritos de RNA se disolvieron en agua, y se almacenaron a -70ºC. La concentración de RNA se determinó a partir de A_{260}.
Sondas
Las sondas de captura biotiniladas se purificaron por HPLC después de la síntesis en un sintetizador de DNA de Applied Biosystems (Foster City, CA) por la adición de biotina al terminal 5' del oligonucleótido, utilizando el reactivo de Cocuzza biotin fosforamidita, Tet. Lett. 1989, 30, 6287. La sonda de captura gag biotinilada (5-biotina-CTAGCTCCCTGCTTGCCCATACTA 3') era complementaria a los nucleótidos 889-912 de HXB2 y la sonda de captura pol biotinilada (5'-biotin-CCCTATCATTTTTGGTTTCCAT 3' ) era complementaria a los nucleótidos 2374-2395 de HXB2. Los oligonucleótidos conjugados a la fosfatasa alcalina se usaron como sondas reporteras preparadas por Syngene (San Diego, CA.). La sonda reportera pol (5'CTGTCTTACTTTGATAAAACCTC 3') era complementaria a los nucleótidos 2403-2425 de HXB2. La sonda reportera gag (5' CCCAGTATTTGTCTACAGCCTTCT 3') era complementaria a los nucleótidos 950-973 de HXB2. Todas las posiciones de nucleótidos son del GenBank Genetic Secuencia Data Bank accessibles a través de Genetics Computer Group Secuence Analysis Software Package (Devereau Nucleic Acids Research 1984, 12,387). Las sondas que se presentan se prepararon mediante stocks de 0.5 M en 2 x SSC (NaCl 0.3 M, citrato sódico 0.03 M), Tris 0.05 M pH 8.8, BSA 1 mg/mL. Las sondas de captura biotiniladas se prepararon mediante stocks de 100 \muM en agua.
Placas revestidas de Streptavidin
Las placas revestidas de Streptavidin se obtuvieron de Du Pont Biotechnology Systems (Boston, MA).
Stocks de células y virus
Las células MT-2 y MT-4 se mantuvieron en RPMI 1640 complementadas con suero de becerro fetal (FCS) al 5% para las células MT-2 o FCS al 10% para las células MT-4, L-glutamina 2mM y gentamicina 50 \mug/mL, todos provinientes de Gibco. Se propagó VIH-1 RF en células MT-4 en el mismo medio. Los stocks de virus se prepararon aproximadamente 10 días después de la infección aguda de las células MT-4 y se almacenaron en forma de alicuotas a -70ºC. Los títulos infecciosos de los stocks de VIH-1 (RF) eran de 1-3 x 10^{7} PFU (unidades formadoras de placas)/mL medidas por ensayo de placa sobre células MT-2 (ver a continuación). Cada alicuota del stock de virus utilizada para la infección se descongeló sólo una vez.
Para evaluar la eficacia antiviral, las células que debían infectarse se subcultivaron un día antes de la infección. El día de la infección, las células se resuspendieron a 5 x 10^{5} células/mL en RPMI 1640, FCS al 5% para la mayoría de las infecciones o a 2 x 10^{6}/mL en un medio de Dulbecco's Eagles modificado con FCS al 5% para la infección en placas de microtitulación. Se añadió el virus y se siguió el cultivo durante 3 días a 37ºC.
Ensayo del RNA del VIH
El lisado de la célula o el RNA purificado en GED 3 M o 5 M se mezclaron con GED 5 M y con la sonda de captura hasta una concentración final de isotiocianato de guanidinio 3 M y una concentración final de oligonucleótido biotinilado de 30 nM. Se llevó a cabo la hibridización en placas de cultivo de tejido de 96 pozos de fondo U selladas (Nunc o Costar) durante 16-20 horas a 37ºC. Las reacciones de hibridización de RNA se diluyeron tres veces con agua desionizada hasta una concentración final de isotiocianato de guanidinio 1 M y las alicuotas (150 \muL) se transfirieron a los pozos de las placas de microtitulación recubiertas de Streptavidin. La unión de la sonda de captura y la sonda de captura del RNA híbrido al Streptavidin inmovilizado se dejó durante 2 horas a temperatura ambiente, después de este tiempo las placas se lavaron 6 veces con el tampón de lavado de placa ELISA DuPont (fosfato tamponado en solución salina (PBS), Tween 20 al 0.05%.) Una segunda hibridación de la sonda reportera al complejo de sonda de captura inmovilizado y el RNA objetivo hibridizado se llevó a cabo en el pozo recubierto de Streptavidin lavado por la adición de 120 \mul de un cocktail de hibridación que contenía 4 X SSC, Tritón X 100 al 0.66%, formamida desionizada al 6.66%, BSA 1mg/mL y sonda reportera 5nM. Después de la hibridización durante una hora a 37ºC, la placa se lavó 6 veces de nuevo. La actividad de la fosfatasa alcalina inmovilizada se detectó por la adición de 100\muL de fosfato de 4 -metilumbeliferilo 0.2mM (MUBP, JBL Scientific) en tampón \delta (dietanolamina 2.5 M pH 8.9 (JBL Scientific), MgCl_{2} 10mM, acetato de zinc dihidratado 5mM y ácido N-hidroxietil-etilen-diamin-triacético 5mM). Las placas se incubaron a 37ºC. Se midió la fluorescencia a 450nM usando un fluorómetro de microplaca (Dynateck) excitando a 365nM.
Evaluación del compuesto basada en microplaca en células NT-2 infectadas de VIH-1
Los compuestos que tenían que ser evaluados se disolvieron en DMSO y se diluyó en un medio de cultivo dos veces la concentración más alta que tenía que ser probada y una concentración máxima de DMSO del 2%. Después se llevaron a cabo diluciones seriales de tres veces el compuesto en un medio de cultivo directamente en placas de microtitulación de fondo U (Nunc). Después de la dilución del compuesto, se añadiero las células MT-2 (50\muL) hasta una concentración final de 5 x 10^{5} por mL (1 x 10^{5} por pozo). Se incubaron las células con los compuestos durante 30 minutos a 37ºC en una incubadora de CO_{2}. Para evaluar la potencia antiviral, se añadió una dilución apropiada de virus stock (50 \muL) de VIH-1 (RF) a los pozos de cultivo que contenían células y diluciones de los compuestos de la prueba. El volumen final de cada pozo era de 200\muL. Se dejaron sin infectar ocho pozos por placa con 50\muL de medio añadido en lugar del virus, mientras ocho pozos se infectaban en la ausencia de cualquier compuesto antiviral. Para evaluar la toxicidad del compuesto, se cultivaron placas paralelas sin infección de virus.
Después de 3 días de cultivo a 37ºC en una cámara humidificada dentro de una incubadora de CO_{2}, se eliminó todo lo que había en las placas infectadas de VIH excepto 25\muL de medio/pozo. Se añadió 37\muL de GED 5 M que contenía una sonda de captura biotinilada a las células establecidas y al medio que quedaba en cada pozo hasta una concentración final de GED 3 M y la sonda de captura de hasta 30nM. La hibridización de la sonda de captura a RNA del VIH en el lisado de célula se llevó a cabo en la mismo pozo de microplaca utilizada para el cultivo de virus sellando la placa con un sellador de placa (Costar), y incubando durante 16-20 horas en una incubadora a 37ºC. Después, se añadió agua destilada a cada pozo para diluir la reacción de hibridización tres veces y se transfirió 150\muL de esta mezcla diluida a una placa de microtitulación recubierta de streptavidin. El RNA del VIH se cuantificó tal como se describe más abajo. Una curva estándar, preparada mediante la adición de cantidades conocidas de transcrito de RNA pDAB 72 in vitro a pozos que contenían células no infectadas lisadas, se llevó a cabo en cada placa de microtitulación para determinar la cantidad de RNA viral producido durante la infección.
Para estandarizar el inóculo de virus utilizado en la evaluación de compuestos para la actividad antiviral, se seleccionaron diluciones de virus que resultaron en un valor de IC_{90} (concentración de compuesto requerida para reducir el nivel de RNA del VIH en un 90%) para la dideoxicitidina (ddC) de 0.2\mug/mL. Los valores de IC_{90} de otros compuestos antivirales, ambos más y menos potentes que la ddC, eran reproducibles utilizando varios stocks de VIH-1 (RF) cuando se siguió este procedimiento. Esta concentración de virus correspondió a \sim3 x 10^{5} PFU (medido por ensayo de placa sobre células MT-2) por pozo de ensayo y como era de esperar produjo aproximadamente el 75% del nivel de RNA viral máximo alcanzable a cualquier inóculo de virus. Para el ensayo de RNA del VIH, los valores de IC_{90} se determinaron como la reducción del porcentaje de señal neta (señal de las muestras de célula infectada menos la señal de las muestras de célula no infectada) en el ensayo de RNA relativo a la señal neta de las infectadas, células no tratadas en la misma placa de cultivo (media de ocho pozos). La representación válida de la infección individual y las pruebas de los ensayos de RNA se juzgó de acuerdo con tres criterios. Era obligatorio que la infección del virus tenía que resultar en una señal en el ensayo de RNA igual o mayor que la señal generada por 2ng de pDAB 72 del transcrito de RNA in vitro. La IC_{90} para ddC, determinada en cada serie de ensayo, tenía que encontrarse entre 0.1 y 0.3\mug/mL. Finalmente, el nivel de meseta de RNA viral producido por un inhibidor transcriptasa inversa efectivo tiene que ser menos del 10% del nivel alcanzable en una infección no inhibida. Un compuesto se consideró activo si su IC_{90} era menor de 20\muM.
Para las pruebas de potencia antiviral, todas las manipulaciones en placas de microtitulación, siguiendo la adición inicial de la solución del compuesto concentrada de 2X a una sola fila de pozos, se llevaron a cabo utilizando un Perkin Elmer/Cetus ProPette.
Materiales y Métodos del Ensayo de RT del VIH-1
Este ensayo mide la actividad polimerasa del DNA dependiente de RNA RT del VIH-1 por la incorporación de dTMP 3H sobre la matriz iniciadora Poly (rA) oligo (dT)12-18. La matriz iniciadora que contenía la radioactividad incorporada se separó de la etiqueta no incorporada por uno de los dos métodos:
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Método 1
La matriz iniciadora se precipitó con TCA, se recogió sobre filtros de fibra de vidrio y se midió la radioactividad con un contador de escintilación.
Método 2
El método utilizado en la actualidad es más rápido y cómodo. La matriz iniciadora se recoge en un intercambiador de iones de membrana de etil amino dietilo (DEAE) en el que se mide su radioactividad después de lavar totalmente el nucleótido libre.
Materiales y Reactivos
La matriz iniciadora de Poly (rA) oligo (dT)12-18 y el dTTP se adquirió de Pharmacia Biotech. La matriz iniciadora y el nucleótido se disolvieron en agua de pirocarbonato de dietilo hasta una concentración de 1mg/ml y 5.8mM respectivamente. Los substratos se alicuotaron (matriz iniciadora a 20\mul/alicuota, dTTP a 9\mul/alicuota) y se congelaron a -20ºC.
El dTTP 3H (2.5mCi/ml en Tricina 10mM a pH 7.6; actividad específica de 90-120 Ci/mmol) y la transcriptasa inversa del VIH1 recombinante (HxB2 background; 100 U/10\mul en 100mM fosfato de potasio a pH 7.1, ditiotreitol 1mM y glicerol al 50%) se adquirieron en DuPont NEN. 1 La unidad de enzima se define por DuPont NEN como la cantidad requerida para incorporar 1 nmol de dTTP etiquetado a un material insoluble en ácido en 10 minutos a 37ºC. El dTTP 3H se alicuotó a 23.2\mul/tubo de microfuge (58\muCi) y se congeló a -20ºC. La transcriptasa inversa (RT) del VIH-1 se diluyó 10 veces con tampón RT (KC_{1}80mM, Tris HCl 50mM, MgCl_{2}12mM, DTT 1mM, EGTA 50 M, BSA 5mg/ml, Triton-X 1000.01%, pH 8.2) y se alicuotó a 10\mul/tubo de microfuge (10 unidades/10\mul). Una alicuota (suficiente para 8 ensayos) se diluyó hasta 10 unidades/100 \mu1 y se alicuotó en 8 tubos (1.25 unidades/12.5\mul). Todas las alicuotas se congelaron a -70ºC.
Las bandejas para filtración de 96 pozos de Millipore Multiscreen DE, adaptadores de placa de multiscreen, y la película selladora adhesiva press -on de microplaca se adquirieron de Millipore. La bandeja para filtración que contenía discos de papel de etilo de dietilamino celulosa (DEAE) de medida de poro de anilla de 0.65 se trató previamente con formato de amonio 0.3 M y pirofosfato de sodio 10mM (2 veces 200\mul /pozo) a pH 8.0 antes de ser usada. El recolector de célula de 96 pozos de Skatron y las esteras de filtro de fibra de vidrio se adquirieron de Skatron Instruments. El cocktail de múltiple centelleo 20 de Microscint se adquirió en Packard. El cocktail de múltiple centelleo de Beckman Ready Flow III se adquirió de Beckman.
Ensayo del RT del VIH-1
El enzima y la mezcla de substrato fueron recién preparadas de las soluciones stock de a continuación. 1.25 Se diluyeron las unidades de enzima con tampón RT (que contenía BSA 5g/ml) hasta una concentración de 0.05 unidades/10\mul o 0.7nM. La enzima final y las concentraciones de BSA en el ensayo eran de 0.01 unidades o 0.14nM y 1mg/ml respectivamente. El inhibidor y la mezcla de substrato se diluyeron con tampón RT que no contenía BSA. Todos los inhibidores se disolvieron en dimetil sulfóxido (DMSO) a una concentración stock de 3mM y se guardaron a -20ºC después de ser usados. Se usó un robot de Biomek para diluir los inhibidores en una placa de 96 pozos. Los inhibidores se diluyeron inicialmente 96 veces a partir de la solución stock y después se diluyeron en serie dos veces (10 veces/dilución) de 31.25\muM hasta 3125nM y 312.5nM. Dependiendo de la potencia del inhibidor, una de las tres diluciones se diluyó más. Como era de esperar la concentración más alta (31.25\muM) se diluyó en serie tres veces 5 veces/dilución hasta 6.25, 1.25, y 0.25\muM. Las concentraciones finales de inhibidor en el ensayo eran de 12.5, 2.5, 0.5, y 0.1\muM. Para los inhibidores potentes del RT del VIH-1, las concentraciones finales de inhibidor utilizadas eran de 0.1 o de 0.01 de las que se exponen a continuación. La mezcla de substrato contenía 6.25\mug/ml de Poli (rA) oligo (dT)12-18 y 12.5\muM de dTTP (58\muCi 3H dTTP). Las concentraciones finales de substrato eran de 2.5\mug/ml y 5\muM respectivamente.
Usando el robot Beckman Instruments Biomek, 10\mul del RT del VIH-1 se combinó con 20\mul de inhibidor en una placa de fondo U de 96 pozos. El enzima y el inhibidor se preincubaron a temperatura ambiente durante 6 minutos. Se añadió 20\mul de la mezcla de substrato a cada pozo para iniciar la reacción (el volumen total era de 50\mu1). Las reacciones se incubaron a 37ºC y se determinaron después de 45 minutos.
Para el método 1, se añadió 200\mul de una solución enfriada con hielo de ácido tricloroacético (TCA) al 13% y 10mM pirofosfato de sodio a cada uno de los 96 pozos. La placa de 96 pozos se colocó en un baño de agua hielo durante 30 minutos. Usando un recolector de célula de 96 pozos de Skatron, el material precipitable ácido se recogió sobre una estera de filtro de fibra de vidrio que se había puesto en remojo previamente en TCA al 13% y pirofosfato de sodio10mM. Los discos de filtro se lavaron 3 veces (2.0ml/lavado) con HCl 1 N y 10mM pirofosfato de sodio. Los discos de filtro se metieron en viales de centelleo, se añadió 2.0ml de escintilador de Beckman Ready Flow III, y se midió la radioactividad de los viales durante 1 minuto.
Para el método 2, el ensayo se terminó con la adición de 175\mul/pozo de EDTA 50mM a pH 8.0.
Después, se transfirió 180\mu1 de la mezcla a una bandeja para filtración Millipore DE de 96 pozos pretratada . Se aplicó el vacío a la bandeja para filtración para aspirar fuera el líquido y inmovilizar la matriz iniciadora sobre los discos de filtro DEAE. Cada pozo se lavó 3 veces con 200\mul de formato de amonio 0.3 M y pirofosfato de sodio 10mM a pH 8.0. Se añadió 50\mul de 20 de múltiple centelleo de Microscint a cada pozo y se midió la radioactividad de la placa en un Packard Topcount a 1 minuto/pozo.
Los valores de IC_{50} se calculan según la ecuación:
IC_{50} = [Inh]/ (1/actividad fraccional - 1) dónde la actividad fraccional = actividad RT (dpms) en presencia de inhibidor/ actividad RT (dpms) en ausencia de inhibidor. Para un inhibidor, los valores de IC_{50} se calcularon para las concentraciones de inhibidor de valores de actividad fraccional entre 0.1-0.8. Los valores de ICso en este rango (generalmente 2 valores) se promediaron. Un compuesto se consideró activo si su IC_{50} era menor a 12\muM.
Unión a la proteína y Resistencia del mutante
Para caracterizar los análogos de NNRTI en términos de potencial de eficacia clínica, se examinaron el efecto de proteínas del plasma sobre la potencia antiviral y las medidas de la potencia antiviral versus la variante nativa y los mutantes del VIH que tienen cambios en los aminoácidos en el sitio de unión conocido del NNRTIs. La base de esta estrategia de la prueba se basa en dos puntos:
1.
Muchos fármacos se unen en gran parte a proteínas del plasma. A pesar que la afinidad de unión para muchos fármacos para los componentes mayoritarios del plasma humano, concretamente, la albúmina de suero humano (HSA) o la glicoproteína del ácido alfa-l (AAG), es baja, estos componentes mayoritarios se encuentran en una alta concentración en la sangre. Sólo el fármaco libre o no unido puede cruzar la membrana de la célula infectada para interaccionar con el objetivo de unión (i.e., la transcriptasa inversa del VIH-1, RT del VIH-1). Así, el efecto de la HSA+AAG añadida a la potencia antiviral en el cultivo de tejido refleja más la potencia de un compuesto en el ajuste clínico. La concentración de un compuesto requerida para inhibir la replicación del virus en un 90% medida con un método de detección basado en el RNA viral sensible se designa IC_{90}. Después se calculó el aumento de la IC_{90} aparente para los compuestos de la prueba en la presencia o en niveles añadidos de HSA y AAG que refleja las concentraciones in vivo (45mg/ml HSA, 1mg/ml AAG). Como menos aumentaba, el compuesto estaba más dispuesto a interaccionar con el objetivo del sitio de unión.
2.
La combinación de una alta velocidad de replicación del virus en el individuo infectado y la pobre fidelidad de los resultados de RT viral en la producción de casi-especies o mezclas de especies de VIH en el individuo infectado. Estas especies incluirán una mayoría de especies nativas, pero también variantes mutantes del VIH y la proporción de un mutante dado reflejará su capacidad relativa y su velocidad de replicación. Como las variantes mutantes incluyendo mutantes con cambios en su secuencia aminoacídica de la RT viral probablemente preexisten en las casi-especies de individuos infectados, la potencia observada en general en los ajustes clínicos reflejará la capacidad de un fármaco para inhibir no sólo el VIH-1 nativo, sino también la variantes mutantes. Así pues se han construido, con un fondo genético conocido, variantes mutantes del VIH-1 que tienen substituciones aminoacídicas en posiciones que se piensa que están implicadas en la unión del NNRTI, y se han medido la capacidad de los compuestos de la prueba para inhibir la replicación de estos mutantes de virus. La concentración de compuesto requerida para la inhibición del 90% de la replicación de virus medida con un método de detección basado en RNA viral sensible se designa It90. Es preferible tener un compuesto que tenga una actividad alta respeto la variedad de mutantes.
Dosificación y Formulación
Los compuestos antivirales de esta invención se pueden administrar como tratamiento para las infecciones virales por cualquier vía que produzca contacto del agente activo con el sitio de acción del agente, i.e., la transcriptasa inversa viral, en el cuerpo de un mamífero. Se pueden administrar de cualquier modo convencional disponible para usar en conjunción farmacéutica, como agente terapéutico individual o en combinación de agentes terapéuticos. Se pueden administrar solos, pero preferiblemente se administran con un transportador farmacéutico seleccionado sobre la base de la ruta escogida de administración y a la práctica farmacéutica estándar.
La dosis administrada, obviamente, variará dependiendo de los factores ya conocidos, como las características farmacodinámicas de un agente particular y su modo y ruta de administración; la edad, estado de salud y el peso del receptor; la naturaleza y extensión de los síntomas; la clase de tratamiento concurrente; la frecuencia de tratamiento; y el efecto deseado. Una dosis diaria de ingrediente activo pude esperar ser de alrededor de 0.001 a alrededor 1000 miligramos por kilogramo de peso corporal, con la dosis preferida de alrededor de 0.1 a 30mg/kg.
La forma de dosificación de las composiciones adecuadas para la administración contiene desde alrededor de 1 mg a alrededor de 100 mg de ingrediente activo por unidad. En estas composiciones farmacéuticas el ingrediente activo se presentará generalmente en una cantidad de alrededor 0.5-95% por peso basado en el peso total de la composición. El ingrediente activo se puede administrar oralmente en forma de dosificación sólida, como cápsulas, comprimidos y polvos, o en forma de dosificación líquida, como elixires, jarabes y suspensiones. También se puede administrar parenteralmente, en forma de dosificación de líquido estéril.
Las cápsulas de gelatina contienen el ingrediente activo y transportadores de los polvos, como la lactosa, el almidón, derivados de celulosa, estereato de magnesio, ácido esteárico, y semejantes. Se pueden usar diluentes similares para hacer comprimidos comprimidos. Los comprimidos y las cápsulas se pueden fabricar como productos de liberación prolongada para proporcionar la liberación continuada de la medicación durante un periodo de horas. Los comprimidos comprimidos pueden estar recubiertos de azúcar o pueden estar recubiertos de una película para disimular el gusto no placentero y proteger el comprimido de la atmósfera, o puede estar recubierto totalmente para la disintegración selectiva en la zona gastrointestinal. Las formas de dosificación líquidas para la administración oral pueden contener colorantes y aromas para aumentar la aceptación del paciente.
En general, el agua, un aceite adecuado, una solución salina, la dextrosa acuosa (glucosa), y las soluciones de azúcares relacionados y glicoles como el propilen glicol o polietilen glcoles son transportadores adecuados para las soluciones parenterales. las soluciones para la administración parenteral preferiblemente contienen una sal soluble en agua del ingrediente activo, agentes estabilizadores adecuados, y si es necesario, sustancias tampón. los agentes antioxidantesa como el bisulfito sódico, sulfito sódico, o ácido ascórbico, solos o combinados, son agentes estabilizadores adecuados. también se usan ácido cítrico y sus sales, y edta de sodio. además, las soluciones parenterales pueden contener conservantes, como el de cloruro de benzalconio, metilo propil-paraben y clorobutanol. los transportadores farmacéuticos adecuados se describen en remington's farmacéutico sciences, supra, un texto de referencia básico en este campo.
Las formas de dosificación farmacéuticas para la administración de los compuestos de esta invención se ilustran a continuación:
Cápsulas
Un gran número de unidades de cápsulas pueden prepararse llenando cada una de las cápsulas de gelatina de dos partes estándar con 100 mg de ingrediente activo polvorizado, 150 mg de lactosa, 50 mg de celulosa, y 6 mg de esteárico de magnesio.
Cápsulas de gelatina suaves
Se puede preparar una mezcla de ingrediente activo en un aceite digestible como el aceite de soja, aceite de semilla de algodón o aceite de oliva y se puede inyectar mediante una bomba de desplazamiento positivo a la gelatina para formar cápsulas de gelatina suaves que contengan 100 mg del ingrediente activo. Las cápsulas se deben lavar y secar.
Comprimidos
Un gran número de comprimidos se pueden preparar por procedimientos convencionales para que la unidad de dosificación sea 100 mg de ingrediente activo, 0.2 mg de dióxido de silicio coloidal, 5 miligramos de estearato magnesio, 275 mg de celulosa microcristalina, 11 mg de almidón y 98.8 mg de lactosa. Los revestimientos apropiados deben aplicarse para aumentar la apatetitosidad o para impedir la absorción.
Suspensión
Se puede administrar una suspensión acuosa para la administración oral para que cada 5mL contenga 25 mg de ingrediente activo dividido finamente, 200 mg de celulosa de carboximetilo sódico, 5 mg de benzoato de sodio, 1.0 g de solución de sorbitol, U.S.P., y 0.025 mg de vainilla.
Inyectable
Una composición parenteral adecuada para la administración vía inyección se puede preparar removiendo 1.5% del peso del ingrediente activo en el 10% de volumen de propilenglicol y agua. La solución se esteriliza mediante técnicas usadas comúnmente.
Combinación de los componentes (a) y (b)
Cada componente del agente terapéutico de esta invención puede ser independientemente cualquier forma de dosificación, como las descritas anteriormente, y se pueden administrar de varias formas, tal como se describe anteriormente. En las siguientes descripciones el componente (b) se entiende que representa uno o más agentes tal y como se has descrito anteriormente. Así, si los componentes (a) y (b) se tienen que tratar juntos o independientemente, cada agente del componente (b) se puede tratar juntos o independientemente.
Los componentes (a) y (b) de la presente invención se pueden formular juntos, en una única unidad de dosificación (juntos combinados en una cápsula, comprimido, polvo, o líquido, etc.) como un producto de combinación. Cuando el componente (a) y (b) no se formulan juntos o en una única unidad de dosificación, el componente (a) se puede administrar al mismo tiempo que el componente (b) o en cualquier orden; por ejemplo el componente (a) de esta invención se puede administrar primero, seguido por la administración del componente (b), o se pueden administraren en el orden inverso. Si el componente (b) contiene más de un agente, e.g., un inhibidor de RT y un inhibidor de proteasa, estos agentes se pueden administrar juntos o en cualquier orden. Cuando no se administran al mismo tiempo, es preferible que la administración del componente (a) y (b) ocurra en menos de una hora. Preferiblemente, la vía de administración del componente (a) y (b) es oral. Los términos agente oral, inhibidor oral, compuesto oral, o similares, tal y como se usan aquí , indica compuestos que se pueden administrar oralmente. A pesar que es preferible que el componente (a) y el componente (b) se administren por la misma vía, por ejemplo, ambos oralmente o en forma de dosificación, si se desea, cada uno se puede administrar por vías diferentes (por ejemplo, un componente del producto de combinación se puede administrar oralmente, y otro componente se puede administrar por vía intravenosa) o formas de dosificación.
Tal como se puede apreciar por un practicante experto en la materia, la dosificación de la terapia de combinación de la invención puede variar dependiendo de varios factores como las característica farmacodinámicas del agente particular y su modo y vía de administración, la edad , estado de salud y peso del receptor, la naturaleza y extensión de los síntomas, el tipo de tratamiento concurrente, la frecuencia de tratamiento, y el efecto deseado, tal y como se describe anteriormente.
La dosificación adecuada de los componentes (a) y (b) de la presente invención serán fácilmente establecidos por un practicante médico experto en la materia, basado en la presente explicación. Una indicación general, una dosificación diaria puede ser de aproximadamente 100 miligramos hasta aproximadamente 1.5 gramos de cada componente. Si el componente (b) representa más de un compuesto, entonces como era de esperar una dosificación diaria puede ser de alrededor 100 miligramos hasta alrededor 1.5 gramos de cada agente de componente (b).Una indicación general, cuando los compuestos de los componente (a) y el componente (b) se administran en combinación, la cantidad de dosificación de cada componente se puede reducir hasta aproximadamente el 70-80% relativo a la dosificación normal del componente cuando se administra sólo como un agente único para el tratamiento de la infección del VIH, en vista de los efectos sinergísticos de la combinación.
Los productos de la combinación de esta invención se pueden formular de tal forma que, a pesar que los ingredientes activos se combinen en una única unidad de dosificación, el contacto físico entre los ingredientes activos se minimiza. Para minimizar el contacto, por ejemplo, dónde el producto se administra oralmente, un ingrediente activo de puede recubrir entéricamente. Por revestimiento entérico de uno de los ingredientes activos, se puede no sólo minimizar el contacto entre los ingredientes activos combinados, sino que es posible controlar la liberación de uno de estos componentes en la zona gastrointestinal de tal forma que uno de estos componentes no se libere en el estómago pero sí se libere en los intestinos. Otro forma de esta invención donde se prefiere la administración oral proporciona para un producto de combinación dónde uno de los ingredientes activos se recubre con un material que sostiene la liberación del material que afecta una liberación sostenida a través de la zona gastrointestinal y que sirve además para minimizar el contacto físico entre los ingredientes activos combinados. Además, la liberación sostenida de un componente se pude revestir adicionalmente para que la liberación de este componente ocurra sólo en el intestino. Otra aproximación todavía implicaría la formulación de un producto de combinación en el que un componente se recubre con un polímero sostenido y/o una liberación entérica, y el otro componente se recubra con un polímero como el hidroxipropilo de metilcelulosa de grado de viscosidad bajo u otro material apropiado tal y como se conoce en el estado de la técnica para separar más los componentes activo. El revestimiento del polímero sirve para formar una barrera adicional para la interacción con el otro componente. En cada formulación dónde el contacto se previene entre los componentes (a) y (b) por medio de un revestimiento o con otro material, el contacto se puede prevenir entre los componentes del agente individual (b).
Las formas de dosificación de los productos de combinación de la presente invención dónde un ingrediente activo es revestido entéricamente pueden encontarrse en forma de comprimidos para que el componente del revestimiento entérico y el otro ingrediente activo se fundan juntos y después sean comprimidos a un comprimido o para que el componente del revestimiento entérico sea comprimido a una capa de comprimido y el otro ingrediente activo sea comprimido a una capa adicional. Opcionalmente, para separar más las dos capas, una o más capas de placebo pueden presentarse de tal forma que la capa de placebo se encuentre entre las dos capas de los ingredientes activos. Además, las formas de dosificación de la presente invención puede encontrarse en la forma de cápsulas dónde un ingrediente activo se comprima a un comprimido o la forma de una pluralidad de microcomprimidos, partículas, gránulos sin riesgo, que son después revestidas entéricamente. Estos microcomprimidos revestidos entéricamente, partículas, gránulos o sin riesgo se colocan en una cápsula o se comprimen a una cápsula solas con una granulación de otro ingrediente activo.
Éstas, como otras formas de minimizar el contacto entre los componentes de los productos de combinación de la presente invención, administrados en una única forma de dosificación o administrados de forma separada pero al mismo tiempo o de la misma forma concurrentemente, serán muy claras para aquellos expertos en la materia, basado en la presente explicación.
Los kits farmacéuticos útiles para el tratamiento de la infección del VIH, que comprende una cantidad efectiva terapéuticamente de una composición farmacéutica que comprende un compuesto de componente (a) y uno o más compuestos de componente (b), en uno o más recipientes estériles, están también en el ámbito de la presente invención. La esterilización de los recipientes se puede llevar a cabo mediante una metodología de esterilización convencional bien conocido para aquellos expertos en la materia. El componente (a) y el componente (b) pueden estar en el mismo recipiente estéril o en recipientes estériles separados. Los recipientes estériles de los materiales pueden comprender recipientes separados, o uno o más recipientes multi-partes, como se desee. El componente (a) y el componente (b), se pueden separar, o se pueden combinar físicamente a una sola forma de dosificación o a una sola unidad tal y como se describe anteriormente. Estos kits pueden incluir además, si se desea, uno o más componentes de kit farmacéutico convencionales, como por ejemplo, uno o más transportadores aceptables farmacéuticamente, viales adicionales para mezclar los componentes, etc., que serán muy claros para aquellos expertos en la materia. Las instrucciones, como injertos o como etiquetas, indicando las cantidades de los componentes para ser administrados, la guía para la administración, y/o la guía para mezclar los componentes, pueden incluirse en el kit.

Claims (29)

1. Un compuesto de fórmula (I):
47
o un estereoisómero o forma de sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde:
A es O o S;
W es CR^{3};
X es CR^{4};
Y es CR^{5};
Z es CR^{6};
siempre que al menos uno de los W, Y, y Z sea diferente de CH;
R^{1} está seleccionado entre CF_{3}, CF_{2}H, C_{2}F_{5}, alquilo de C_{1-4}, cicloalquilo de C_{3-5}, alquenilo de C_{2-4}, y alquinilo de C_{2-4};
R^{2} está seleccionado entre -QCHR^{7}R^{8}, -QCHR^{7}C C-R^{8}, -QCHR^{7}C=C-R^{8}, -Q (CH_{2})_{p}CHR^{7}R^{8}, -C\equivC-R^{8}, -CH=CR^{7}
R^{8}, -(CH_{2})_{p}CHR^{7}R^{8}, -CHR^{7} C-R^{8}, -CHR^{7}CH=CHR^{8}, y CH=CHCHR^{7}R^{8};
siempre que cuando R^{1} es alquilo de C_{1-4}, entonces R^{2} es -C C-R^{8};
R^{3} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I, alcoxi de C_{1-3}, y alquilo de C_{1-3};
R^{4} está seleccionado entre, F, Cl, Br, I,
R^{5} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, y I;
R^{6} está seleccionado entre H, OH, alcoxi de C_{1-3}, -CN, F, Cl, Br, I, NO_{2}, CF_{3}, CHO, alquilo de C_{1-3}, y C (O)NH_{2};
R^{7} está seleccionado entre H y alquilo de C_{1-3};
R^{7a} está seleccionado entre H y alquilo de C_{1-3};
R^{8} está seleccionado entre H, alquilo de C_{1-6} sustituido con 0-3 R^{11}, CH (-OCH_{2}CH_{2}0-), alquenilo de C_{2-6}, cicloalquilo de C_{3-7} sustituido con 0-2 R^{9}, fenilo sustituido con 0-2 R^{10}, y un sistema heterocíclico aromático de 5-6 miembros conteniendo entre 1-4 heteroátomos seleccionados entre el grupo constituido por N, O, y S sustituido con 0-2 R^{10};
R^{9} está seleccionado entre D, OH, alcoxi de C_{1-3}, alquilo de C_{1- 3}, y F;
R^{10} está seleccionado entre OH, alquilo de C_{1-3}, alcoxi de C_{1-3}, F, Cl, Br, I, CN, NR^{7}R^{7a}, y C (O)CH_{3};
R^{11} está seleccionado entre OR^{7}, CN, F, Cl, Br, I, NO_{2}, NR^{7}R^{7a}, CHO, C (O)CH_{3}, C(O)NH_{2};
Q está seleccionado entre 0, S y NH; y,
p está seleccionado entre 0, 1, y 2.
2. Un nuevo compuesto de acuerdo con la Reivindicación 1, en donde:
R^{1} está seleccionado entre CF_{3}, CF_{2}H, C_{2}F_{5}, alquilo de C_{1-3}, cicloalquilo de C_{3-5} ; y,
R^{8} está seleccionado entre H, alquilo de C_{1-6} sustituido con 0-3 R^{11}, CH (-OCH_{2}CH_{2}O-), alquenilo de C_{2-6}, cicloalquilo de C_{3-5} sustituido con 0-1 R^{9}, fenilo sustituido con 0-1 R^{10}, y un sistema heterocíclico aromático de 5-6 miembros conteniendo entre 1-4 heteroátomos seleccionados entre el grupo constituido por N, O, y S sustituido con 0-1 R^{10}.
3. Un compuesto de acuerdo con la Reivindicación 2, en donde:
R^{1} está seleccionado entre CF_{3}, CF_{2}H, C_{2}F_{5}, C_{2}H_{5}, isopropilo, ciclopropilo;
R^{3} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I, OCH_{3}, CH_{3};
R^{5} está seleccionado entre H, F;
R^{6} está seleccionado entre H, OH, OCH_{3}, -CN, F, CF_{3}, CH_{3}, y C (O)NH_{2};
R^{7} está seleccionado entre H y CH_{3};
R^{7a} está seleccionado entre H y CH_{3};
R^{8} está seleccionado entre H, alquilo de C_{1-4} sustituido con 0-3 R^{11}, CH (-OCH_{2}CH_{2}O-), alquenilo de C_{2-4}, cicloalquilo de C_{3-5} sustituido con 0-1 R^{9}, fenilo sustituido con 0-1 R^{10}, y un sistema heterocíclico aromático de 5-6 miembros conteniendo entre 1-4 heteroátomos seleccionados entre el grupo constituido por N, O, y S sustituido con 0-1 R^{10};
R^{9} está seleccionado entre D, OH, OCH_{3}, CH_{3}, y F;
R^{10} está seleccionado entre OH, CH_{3}, OCH_{3}, F, Cl, Br, I, CN, NR^{7}R^{7a}, y C (O)CH_{3}; y,
p está seleccionado entre 1 y 2.
4. Un compuesto de acuerdo con la Reivindicación 3, en donde:
A es O; y,
R^{1} está seleccionado entre CF_{3}, CF_{2}H, C_{2}F_{5};
R está seleccionado entre -OCHR^{7}R^{8}, -OCH_{2}C+C-R^{8}, -OCH_{2}C=R^{8}, -OCH_{2}CHR^{7}R^{8}, -C+C-R^{8}, -CH=CR^{7}R^{8},
-CH_{2}CHR^{7}R^{8}, -CH_{2}C+C-R^{8}, CHR^{7}CH=CHR^{8}, y CH=CHCHR^{7}R^{8};
R^{3} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I; y
R^{11} está seleccionado entre OH, OCH_{3}, CN, F, Cl, NR^{7}R^{7a}, C (O)CH_{3}, y C (O)NH_{2}.
5. Un compuesto de acuerdo con la Reivindicación 4, en donde el compuesto está seleccionado entre:
(+/-)-6-Cloro-4-(ciclopropiletinil)-8-hidroxi-4-(trifluorometil)-1,4-dihidro -2H-3,1-benzoxazin-2-ona;
(-)-6-Cloro-4-(ciclopropiletinil)-8-hidroxi-4-(trifluorometil)-1,4-dihidro-2H -3,1-benzoxazin-2-ona;
(+/-)-6-Cloro-4-(ciclopropiletinil)-8-fluoro-4-(trifluorometil)-1,4-dihidro-2H -3,1-benzoxazin-2-ona;
(+/-)-5,6-Difluoro-4-(3-metil)-1-buten-1-il-4-trifluorometil-1,4-dihidro-2H -3,1-benzoxazin-2-ona;
(+/-)-4-Isopropiletinil-4-trifluorometil-5,6-difluoro-1,4-dihidro-2H-3,1 -benzoxazin-2-ona;
(+/-)-4-Ciclopropiletinil-6-cloro-4-trifluorometil-7-aza-1,4-dihidro-2H-3,1 -benzoxazin-2-ona;
6. Un compuesto de fórmula II:
48
o una sal o estereoisómero del mismo, en donde:
A es O o S;
W es CR^{3};
X es CR^{4};
Y es CR^{5};
Z es CR^{6};
siempre que al menos uno de los W, X, Y, y Z sea diferente de CH;
R^{1a} está seleccionado entre CF_{3}, CF_{2}H, C_{2}F_{5}, alquilo de C_{1-4}, cicloalquilo de C_{3-5}, alquenilo de C_{2-4}, y alquinilo de C_{2-4};
R^{3} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I, alcoxi de C_{1-3}, y alquilo de C_{1-3};
R^{4} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I,
R^{5} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, y I;
R^{6} está seleccionado entre H, OH, alcoxi de C_{1-3}, -CN, F, Cl, Br, I, NO_{2}, CF_{3}, CHO, alquilo de C_{1-3}, y C (O)NH_{2};
R^{7} está seleccionado entre H y alquilo de C_{1-3};
R^{7a} está seleccionado entre H y alquilo de C_{1-3};
R^{10} está seleccionado entre OH, alquilo de C_{1-3}, alcoxi de C_{1-3}, F, Cl, Br, I, CN, NR^{7}R^{7a}, y C(O)CH_{3};
R^{11} está seleccionado entre OR^{7}, CN, F, Cl, Br, I, NO_{2}, NR^{7}R^{7a}, CHO, C (O)CH_{3}, C (O)NH_{2};
está seleccionado entre 0, 1, y 2.
7. Un compuesto de acuerdo con la Reivindicación 6, en donde:
A es O; y,
R^{1a} está seleccionado entre CF_{3}, CF_{2}H, C_{2}F_{5}, alquilo de C_{1-3}, cicloalquilo de C_{3-5} .
8. Un compuesto de acuerdo con la Reivindicación 7, en donde:
R^{1a} está seleccionado entre CF_{3}, CF_{2}H, C_{2}F_{5}, C_{2}H_{5}, isopropilo, ciclopropilo;
R^{3} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I, OCH_{3}, CH_{3};
R^{5} está seleccionado entre H, F;
R^{6} está seleccionado entre H, OH, OCH_{3}, -CN, F, CF_{3}, CH_{3}, y C (O)NH_{2};
R^{7} está seleccionado entre H y CH_{3};
R^{7a} está seleccionado entre H y CH_{3};
R^{10} está seleccionado entre OH, CH_{3}, OCH_{3}, F, Cl, Br, I, CN, NR^{7}R^{7a}, y C (O)CH_{3}; y,
p está seleccionado entre 1 y 2.
9. Un compuesto de acuerdo con la Reivindicación 8, en donde:
R^{1a} está seleccionado entre CF_{3}, CF_{2}H, C_{2}F_{5};
R^{3} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I; y
R^{11} está seleccionado entre OH, OCH_{3}, CN, F, Cl, NR^{7}R^{7a}, C (O)CH_{3}, y C (O)NH_{2}.
\newpage
10. Un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula II:
49
una sal o estereoisómero del mismo, que comprende:
(a)
poner en contacto un compuesto de fórmula III:
50
o una forma de sal adecuada del mismo, con un agente de liberación de carbonilo o tiocarbonilo en presencia de un disolvente adecuado, en donde:
A es O o S;
W es CR^{3};
X es CR^{4};
Y es CR^{5};
Z es CR^{6};
siempre que al menos uno de los W, X, Y, y Z sea diferente de CH;
R^{1a} está seleccionado entre CF_{3}, CF_{2}H, C_{2}F_{5}, alquilo de C_{1-4}, cicloalquilo de C_{3-5}, alquenilo de C_{2-4}, y alquinilo C_{2-4};
R^{3} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I, alcoxi de C_{1-3}, y alquilo de C_{1-3};
R^{4} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I;
R^{5} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, y I;
R^{6} está seleccionado entre H, OH, alcoxi de C_{1-3}, -CN, F, Cl, Br, I, NO_{2}, CF_{3}, CHO, alquilo de C_{1-3}, y C (O)NH_{2};
R^{7} está seleccionado entre H y alquilo de C_{1-3};
R^{7a} está seleccionado entre H y alquilo de C_{1-3};
R^{10} está seleccionado entre OH, alquilo de C_{1-3}, alcoxi de C_{1-3}, F, Cl, Br, I, CN, NR^{7}R^{7a}, y C (O)CH_{3};
R^{11} está seleccionado entre OR^{7}, CN, F, Cl, Br, I, NO_{2}, NR^{7}R^{7a}, CHO, C (O)CH_{3}, C(O)NH_{2};
Q está seleccionado entre 0, S y NH; y,
p está seleccionado entre 0, 1, y 2.
11. El procedimiento de acuerdo con la Reivindicación 10, en donde:
A es O;
R^{la}está seleccionado entre CF_{3}, CF_{2}H, C_{2}F_{5};
R^{3} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I;
R^{5} está seleccionado entre H, F;
R^{6} está seleccionado entre H, OH, OCH_{3}, -CN, F, CF_{3}, CH_{3}, y C (O)NH_{2};
R^{7} está seleccionado entre H y CH_{3};
R^{7a} está seleccionado entre H y CH_{3};
R^{10} está seleccionado entre OH, CH_{3}, OCH_{3}, F, Cl, Br, I, CN, NR^{7}R^{7a}, y C (O)CH_{3};
R^{11} está seleccionado entre OH, OCH_{3}, CN, F, Cl, NR^{7}R^{7a}, C (O)CH_{3}, y C (O)NH_{2}; y,
p está seleccionado entre 1 y 2.
12. El procedimiento de acuerdo con la Reivindicación 11, en donde el agente liberador de carbonilo está seleccionado entre fosgeno, carbonildiimidazol, clorometilcarbonato, cloroetilcarbonato, dimetilcarbonato, dietilcarbonato, y di-t-butilcarbonato.
13. El procedimiento de acuerdo con la Reivindicación 13, en donde el agente liberador de carbonilo es fosgeno y el disolvente es tolueno.
14. El procedimiento de acuerdo con la Reivindicación 13, en donde en la etapa (a) está presente una base y está seleccionada entre trimetilamina, trietilamina, y N,N-disopropiletilamina.
15. Un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula Ia:
51
o un estereoisómero o forma de sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que comprende:
(a) poner en contacto un nucleófilo, R^{2b}, con un compuesto de fórmula II:
52
o un estereosiómero del mismo en un disolvente adecuado, en donde:
R^{2b} está seleccionado entre R^{8}R^{7}CH-OH, R^{8}R^{7}CH-OM, R^{8}R^{7}CHNH_{2}, R^{8}R^{7}CHNH-M, R^{8} -C+C-M, R^{7}R^{8}C=CH-M, R^{8}R^{7}CH (CH_{2})_{p}-M, R^{8}CH=CHC (H) (R^{7})-M, R^{8}R^{7}CHCH=CH-M;
M está seleccionado entre Na, Li, Mg, Zn, Cu, Pd, Pt, Sn, Al, y B;
A es O o S;
W es CR^{3};
X es CR^{4};
Y es CR^{5};
Z es CR^{6};
siempre que al menos uno de los W, X, Y, y Z es diferente de CH;
R^{1a} está seleccionado entre CF_{3}, CF_{2}H, C_{2}F_{5}, alquilo de C_{1-4}, cicloalquilo C_{3-5}, alquenilo de C_{2-4}, y alquinilo C_{2-4};
R^{2a} está seleccionado entre -QCHR^{7}R^{8}, -OCHR^{7}C+C-R^{8}, -QCHR^{7}C=C-R^{8}, -Q (CH_{2})_{p}CHR^{7}R^{8}, -C+C-R^{8}, -CH=
CR^{7}R^{8}, -(CH_{2})_{p}CHR^{7}R^{8}, -CHR^{7}C+C-R^{8}, -CHR^{7}CH=CHR^{8}, y CH=CHCHR^{7}R^{8};
R^{3} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I, alcoxi de C_{1-3}, y alquilo de C_{1-3};
R^{4} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I, alquilo de C_{1-3} sustituido
R^{5} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, y I;
R^{6} está seleccionado entre H, OH, alcoxi de C_{1-3}, -CN, F, Cl, Br, I, NO_{2}, CF_{3}, CHO, alquilo de C_{1-3}, y C (O)NH_{2};
R^{7} está seleccionado entre H y alquilo de C_{1-3};
R^{7a} está seleccionado entre H y alquilo de C_{1-3};
R^{8} está seleccionado entre H, alquilo de C_{1-6} sustituido con 0-3 R^{11}, CH (-OCH_{2}CH_{2}O-), alquenilo de C_{2-6}, cicloalquilo de C_{3-7} sustituido con 0-2 R^{9}, fenilo sustituido con 0-2 R^{10}, y un sistema heterocíclico aromático de 5-6 miembros conteniendo entre 1-4 heteroátomos seleccionados entre el grupo constituido por N, O, y S sustituido con 0-2 R^{10};
R^{9} está seleccionado entre D, OH, alcoxi de C_{1-3}, alquilo de C_{1-3}, y F;
R^{10} está seleccionado entre OH, alquilo de C_{1-3}, alcoxi de C_{1-3}, F, Cl, Br, I, CN, NR^{7}R^{7a}, y C(O)CH_{3};
R^{11} está seleccionado entre OR^{7}, ON, F, Cl, Br, I, NO_{2}, NR^{7}R^{7a}, CHO, C (O)CH_{3}, C(O)NH_{2};
Q está seleccionado entre O, S y NH; y,
p está seleccionado entre 0, 1, y 2.
16. El procedimiento de acuerdo con la Reivindicación 15, en donde:
A es O;
R^{1}a está seleccionado entre CF_{3}, CF_{2}H, C_{2}F_{5};
R^{2a} está seleccionado entre -OCHR^{7}R^{8}, -OCH_{2}C+C-R^{8}, -OCH_{2}C=C-R^{8}, -OCH_{2}CHR^{7}R^{8}, -C\equivC-R^{8}, -CH=CR^{7}R^{8}, -CH_{2}CHR^{7}R^{8}, -CH_{2}C\equivC-R^{8}, CHR^{7}CH=CHR^{8}, y CH=CHCHR^{7}R^{8};
R^{3} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I;
R^{5} está seleccionado entre H, F;
R^{6} está seleccionado entre H, OH, OCH_{3}, -CN, F, CF_{3}, CH_{3}, y C (O)NH_{2};
R^{7} está seleccionado entre H y CH_{3};
R^{7a} está seleccionado entre H y CH_{3};
R^{8} está seleccionado entre H, alquilo de C_{1-4} sustituido con 0-3 R^{11}, CH (-OCH_{2}CH_{2}O-), alquenilo de C_{2-4}, cicloalquilo de C_{3-5} sustituido con 0-1 R^{9}, fenilo sustituido con 0-1 R^{10}, y un sistema heterocíclico aromático de 5-6 miembros conteniendo entre 1-4 heteroátomos seleccionados entre el grupo constituido por N, O, y S sustituido con 0-1 R^{10};
R^{9} está seleccionado entre D, OH, OCH_{3}, CH_{3}, y F;
R^{10} está seleccionado entre OH, CH_{3}, OCH_{3}, F, Cl, Br, I, CN, NR^{7}R^{7a}, y C (O)CH_{3};
R^{11} está seleccionado entre OH, OCH_{3}, CN, F, Cl, NR^{7}R^{7a}, C (O)CH_{3}, y C (O)NH_{2}; y,
p está seleccionado entre 1 y 2.
17. El procedimiento de acuerdo con la Reivindicación 16, en donde en la etapa (a), e compuesto de fórmula II es adicionado a una solución que contiene el nucleófilo.
18. El procedimiento de acuerdo con la Reivindicación 17, en donde en la etapa (a), R^{2}b es R^{8}-C=C-M; y M está seleccionado entre Li, Mg, y Zn.
19. El procedimiento de acuerdo con la Reivindicación 18, en donde en la etapa (a), R^{8}-C=C-M es formado in situ por adición de una base fuerte a una solución conteniendo R^{8}-C=C-H.
20. El procedimiento de acuerdo con la Reivindicación 19, en donde en la etapa (a), la base fuerte está seleccionada entre n-butil litio, s-butil litio, t-butil litio, fenil litio, y metil litio.
21. Un procedimiento de preparar un compuesto de fórmula IIIb:
53
o un estereoisómero o una forma de sal del mismo, que comprende:
(a) poner en contacto un compuesto de fórmula IIIa:
54
con R^{la}-TMS y un anión, en donde:
el anión es a fluoruro o un oxianión y está seleccionado entre fluoruro de tetrabutilamonio, fluoruro de sodio, fluoruro de potasio, fluoruro de litio, fluoruro de cesio, tert-butóxido de potasio, metóxido de sodio, etóxido de sodio y trimetilsilanolato de sodio;
g es un grupo protector de amina;
W es CR^{3};
X es CR^{4};
Y es CR^{5};
Z es CR^{6};
siempre que al menos uno de los W, X, Y, y Z sea diferente de CH;
R^{la}está seleccionado entre CF_{3}, CF_{3}CF_{2}, y CF_{3}CF_{2}CF_{2};
R^{3} está seleccionado entre H, F, Cl Br, I, alcoxi de C_{1-3}, y alquilo de C_{1-3};
R^{4} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I,
R^{5} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, y I;
R^{6} está seleccionado entre H, OH, alcoxi de C_{1-3}, -CN, F, Cl, Br, I, NO_{2}, CF_{3}, CHO, alquilo de C_{1-3}, y C (O)NH_{2};
R^{7} está seleccionado entre H y alquilo de C_{1-3};
R^{7a} está seleccionado entre H y alquilo de C_{1-3};
R^{10} está seleccionado entre OH, alquilo de C_{1-3}, alcoxi de C_{1-3}, F, Cl, Br, I, CN, NR^{7}R^{7a}, y C(O)CH_{3};
R^{11} está seleccionado entre OR^{7}, CN, F, Cl, Br, I, NO_{2}, NR^{7}R^{7a}, CHO, C (O)CH_{3}, C(O)NH_{2};
p está seleccionado entre 0, 1, y 2.
22. El procedimiento de acuerdo con la Reivindicación 21, en donde:
el R^{la}-TMS es trifluorometil trimetilsilano;
el anión es fluoruro de tetrabutilamonio;
Pg es tritilo;
R^{1a} es CF_{3};
R^{3} está seleccionado entre H, F, Cl, Br, I;
R^{5} está seleccionado entre H, F;
R^{6} está seleccionado entre H, OH, OCH_{3}, -CN, F, CF_{3}, CH_{3}, y C (O) NH_{2};
R^{7} está seleccionado entre H y CH_{3};
R^{7a} está seleccionado entre H y CH_{3};
R^{10} está seleccionado entre OH, CH_{3}, OCH_{3}, F, Cl, Br, I, CN, NR^{7}R^{7a}, y C (O)CH_{3};
R^{11} está seleccionado entre OH, OCH_{3}, CN, F, Cl, NR^{7}R^{7a}, C (O)CH_{3}, y C (O)NH_{2}; y,
p está seleccionado entre 1 y 2.
23. El procedimiento de acuerdo con la Reivindicación 22, en donde el procedimiento comprende además:
(b) poner en contacto un compuesto de fórmula IIIb con un agente de oxidación para formar un compuesto de fórmula IIIc:
55
24. El procedimiento de acuerdo con la Reivindicación 23, en donde el agente de oxidación es el MnO_{2}.
25. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 9 para uso en terapia.
26. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 9 para uso para el tratamiento de la infección por HIV.
27. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 9 o a forma de sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un soporte farmacéuticamente aceptable.
28. Uso de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 9 o a forma de sal farmacéuticamente aceptable del mismo en la preparación de un medicamento para el tratamiento de la infección por HIV.
29. Uso de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 9 en la preparación e un medicamento que comprende además al menos un compuesto seleccionado entre el grupo que comprende inhibidores de transcriptasa reversa del HIV e inhibidores de la proteasa del HIV para el tratamiento de la infección por HIV.
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Families Citing this family (68)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5965729A (en) 1997-02-05 1999-10-12 Merck & Co., Inc. Process for the crystallization of a reverse transcriptase inhibitor using an anti-solvent
BR9814933A (pt) * 1997-09-02 2001-01-30 Du Pont Pharm Co Composto, composicao farmaceutica e metodo de tratamento de infeccao por hiv.
ZA99981B (en) * 1998-02-17 2000-08-08 Du Pont Pharm Co Oral liquid formulations of benzoxazinones HIV reverse transcriptase inhibitors.
US6673372B1 (en) 1998-06-11 2004-01-06 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Crystalline Efavirenz
HRP990182A2 (en) * 1998-06-11 2000-02-29 Du Pont Pharm Co Crystalline efavirenz
US6498154B1 (en) 1999-05-04 2002-12-24 Wyeth Cyclic regimens using quinazolinone and benzoxazine derivatives
US6509334B1 (en) 1999-05-04 2003-01-21 American Home Products Corporation Cyclocarbamate derivatives as progesterone receptor modulators
US6306851B1 (en) 1999-05-04 2001-10-23 American Home Products Corporation Cyclocarbamate and cyclic amide derivatives
US6462032B1 (en) 1999-05-04 2002-10-08 Wyeth Cyclic regimens utilizing indoline derivatives
US6391907B1 (en) 1999-05-04 2002-05-21 American Home Products Corporation Indoline derivatives
US6380235B1 (en) 1999-05-04 2002-04-30 American Home Products Corporation Benzimidazolones and analogues
US6444668B1 (en) 1999-05-04 2002-09-03 Wyeth Combination regimens using progesterone receptor modulators
US6355648B1 (en) 1999-05-04 2002-03-12 American Home Products Corporation Thio-oxindole derivatives
US6369056B1 (en) 1999-05-04 2002-04-09 American Home Products Corporation Cyclic urea and cyclic amide derivatives
ATE386729T1 (de) * 1999-05-04 2008-03-15 Wyeth Corp Cyclothiocarbamatderivate als progesteron- rezeptormodulatoren
US6339098B1 (en) 1999-05-04 2002-01-15 American Home Products Corporation 2,1-benzisothiazoline 2,2-dioxides
US6319912B1 (en) 1999-05-04 2001-11-20 American Home Products Corporation Cyclic regimens using 2,1-benzisothiazoline 2,2-dioxides
US6407101B1 (en) 1999-05-04 2002-06-18 American Home Products Corporation Cyanopyrroles
US6358947B1 (en) 1999-05-04 2002-03-19 American Home Products Corporation Tetracyclic progesterone receptor modulator compounds and methods
US6358948B1 (en) 1999-05-04 2002-03-19 American Home Products Corporation Quinazolinone and benzoxazine derivatives as progesterone receptor modulators
US6417214B1 (en) 1999-05-04 2002-07-09 Wyeth 3,3-substituted indoline derivatives
US6423699B1 (en) 1999-05-04 2002-07-23 American Home Products Corporation Combination therapies using benzimidazolones
CN1145618C (zh) * 1999-05-04 2004-04-14 美国家庭用品有限公司 作为黄体酮受体调节剂的环氨基甲酸酯衍生物
US6329416B1 (en) 1999-05-04 2001-12-11 American Home Products Corporation Combination regimens using 3,3-substituted indoline derivatives
US6380178B1 (en) 1999-05-04 2002-04-30 American Home Products Corporation Cyclic regimens using cyclocarbamate and cyclic amide derivatives
US6399593B1 (en) 1999-05-04 2002-06-04 Wyeth Cyclic regimens using cyclic urea and cyclic amide derivatives
UA73119C2 (en) 2000-04-19 2005-06-15 American Home Products Corpoir Derivatives of cyclic thiocarbamates, pharmaceutical composition including noted derivatives of cyclic thiocarbamates and active ingredients of medicines as modulators of progesterone receptors
US6596729B2 (en) 2000-07-20 2003-07-22 Bristol-Myers Squibb Company Tricyclic-2-pyridone compounds useful as HIV reverse transcriptase inhibitors
ZA200300255B (en) 2000-07-20 2004-09-28 Bristol Myers Squibb Pharma Co Tricyclic 2-pyridone compounds useful as HIV reverse transcriptase inhibitors.
US8641644B2 (en) 2000-11-21 2014-02-04 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Blood testing apparatus having a rotatable cartridge with multiple lancing elements and testing means
US9427532B2 (en) 2001-06-12 2016-08-30 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Tissue penetration device
US7041068B2 (en) 2001-06-12 2006-05-09 Pelikan Technologies, Inc. Sampling module device and method
US9795747B2 (en) 2010-06-02 2017-10-24 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Methods and apparatus for lancet actuation
US9226699B2 (en) 2002-04-19 2016-01-05 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Body fluid sampling module with a continuous compression tissue interface surface
US9795334B2 (en) 2002-04-19 2017-10-24 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Method and apparatus for penetrating tissue
US8702624B2 (en) 2006-09-29 2014-04-22 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Analyte measurement device with a single shot actuator
US9314194B2 (en) 2002-04-19 2016-04-19 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Tissue penetration device
US8784335B2 (en) 2002-04-19 2014-07-22 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Body fluid sampling device with a capacitive sensor
US7226461B2 (en) 2002-04-19 2007-06-05 Pelikan Technologies, Inc. Method and apparatus for a multi-use body fluid sampling device with sterility barrier release
US9248267B2 (en) 2002-04-19 2016-02-02 Sanofi-Aventis Deustchland Gmbh Tissue penetration device
US8579831B2 (en) 2002-04-19 2013-11-12 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Method and apparatus for penetrating tissue
US7547287B2 (en) 2002-04-19 2009-06-16 Pelikan Technologies, Inc. Method and apparatus for penetrating tissue
US8574895B2 (en) 2002-12-30 2013-11-05 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Method and apparatus using optical techniques to measure analyte levels
WO2006001797A1 (en) 2004-06-14 2006-01-05 Pelikan Technologies, Inc. Low pain penetrating
EP1671096A4 (en) 2003-09-29 2009-09-16 Pelikan Technologies Inc METHOD AND APPARATUS FOR PROVIDING IMPROVED SAMPLE CAPTURING DEVICE
US9351680B2 (en) 2003-10-14 2016-05-31 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Method and apparatus for a variable user interface
UA89035C2 (ru) * 2003-12-03 2009-12-25 Лео Фарма А/С Эфиры гидроксамовых кислот и их фармацевтическое применение
EP1706026B1 (en) 2003-12-31 2017-03-01 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH Method and apparatus for improving fluidic flow and sample capture
AR048650A1 (es) * 2004-05-04 2006-05-10 Tibotec Pharm Ltd Derivados de (1,10b-dihidro-2-(aminocarbonil-fenil)-5h-pirazolo[1,5 c][1,3]benzoxazin-5-il)fenil metanona como inhibidores de la replicacion viral del vih
WO2006011062A2 (en) 2004-05-20 2006-02-02 Albatros Technologies Gmbh & Co. Kg Printable hydrogel for biosensors
US9775553B2 (en) 2004-06-03 2017-10-03 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Method and apparatus for a fluid sampling device
WO2005120365A1 (en) 2004-06-03 2005-12-22 Pelikan Technologies, Inc. Method and apparatus for a fluid sampling device
WO2006023158A2 (en) 2004-07-14 2006-03-02 Ligand Pharmaceuticals, Inc. Mineralocorticoid receptor modulator compounds and methods, and pharmaceutical compositions containing these compounds
WO2006010142A2 (en) * 2004-07-14 2006-01-26 Ligand Pharmaceuticals, Inc. Mineralocorticoid receptor modulator compounds, processes for their preparation, and their use
TW200710091A (en) * 2005-04-11 2007-03-16 Tibotec Pharm Ltd (1,10B-dihydro-2-(aminoalkyl-phenyl)-5H-pyrazolo [1,5-c][1,3]benzoxazin-5-yl)phenyl methanone derivatives as HIV viral replication inhibitors
KR20110089463A (ko) 2006-07-24 2011-08-08 한국화학연구원 신규 ｈｉｖ 역전사 효소 억제제
CA2697368C (en) * 2007-08-24 2016-06-21 Lexicon Pharmaceutical Inc. Methods of preparing 4-phenyl-6-(2,2,2-trifluoro-1-phenylethoxy)pyrimidine-based compounds
US8119800B2 (en) 2007-12-21 2012-02-21 Korea Research Institute Of Chemical Technology Processes for preparing HIV reverse transcriptase inhibitors
WO2009126900A1 (en) 2008-04-11 2009-10-15 Pelikan Technologies, Inc. Method and apparatus for analyte detecting device
US9375169B2 (en) 2009-01-30 2016-06-28 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Cam drive for managing disposable penetrating member actions with a single motor and motor and control system
US8965476B2 (en) 2010-04-16 2015-02-24 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Tissue penetration device
JP6124012B2 (ja) * 2011-05-26 2017-05-10 日産化学工業株式会社 １−（２−アミノ−置換フェニル）−２−ハロ−２，２−ジフルオロエタノン化合物及び１−（置換フェニル）−２−ハロ−２，２−ジフルオロエタノン化合物の製造方法
DE202015104551U1 (de) 2015-08-27 2015-12-03 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Reaktoren für die Herstellung von Efavirenz sowie Zwischenprodukte
US9676735B2 (en) 2015-08-27 2017-06-13 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Process for the preparation of efavirenz and devices suitable therefore
CN107162923B (zh) * 2017-06-12 2019-04-23 浙江新三和医药化工股份有限公司 一种邻氨基苯乙酮的制备方法
BR112020018094A2 (pt) 2018-03-08 2020-12-22 Incyte Corporation Compostos de aminopirazina diol como inibidores de pi3k-¿
US11046658B2 (en) 2018-07-02 2021-06-29 Incyte Corporation Aminopyrazine derivatives as PI3K-γ inhibitors
CN110372625B (zh) * 2019-08-06 2022-11-01 常州大学 蓝光照射制备4-烷甲基-4-芳基-1,3-苯并噁嗪-2(4h)-酮的方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3526621A (en) * 1966-08-03 1970-09-01 Farmaceutical Italia Soc Substituted 3,1-benzoxazin-2-one
US5665720A (en) * 1992-08-07 1997-09-09 Merck & Co., Inc. Benzoxazinones as inhibitors of HIV reverse transcriptase

Also Published As

Publication number Publication date
AU4802797A (en) 1998-04-24
CA2268953A1 (en) 1998-04-09
EP1359147A1 (en) 2003-11-05
DE69724630T2 (de) 2004-07-29
DE69724630D1 (de) 2003-10-09
ATE248826T1 (de) 2003-09-15
EP0929533A1 (en) 1999-07-21
JP2001505873A (ja) 2001-05-08
WO1998014436A1 (en) 1998-04-09
JP4212650B2 (ja) 2009-01-21
EP0929533B1 (en) 2003-09-03

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