ES2205342T3 - Liquido de lavado para celulas de la sangre. - Google Patents
Liquido de lavado para celulas de la sangre.Info
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Abstract
UNA SOLUCION ACUOSA DE GELATINA SE EMPLEA COMO LIQUIDO DE LAVADO PARA CELULAS SANGUINEAS, EN ESPECIAL ERITROCITOS, PARA NO PROVOCAR ALTERACIONES DE LAS CELULAS SANGUINEAS QUE EMPEOREN LA CALIDAD DE LAS MISMAS O EN TODO CASO PARA MANTENERLAS LO MAS REDUCIDAS POSIBLE.
Description
Líquido de lavado para células de la sangre.
El invento se refiere al sector de los líquidos
de lavado de células de la sangre, en especial de líquidos para el
lavado de eritrocitos.
Los líquidos de lavado de células de la sangre,
en especial de eritrocitos, se necesitan en diferentes
procedimientos. Por ejemplo, en la autotransfusión mecánica, es
decir en la obtención y preparación de eritrocitos conseguidos por
vía interoperativa, éstos se lavan con un líquido de lavado para la
subsiguiente retransfusión. En la preparación mecánica de
componentes sanguíneos tales como eritrocitos, leucocitos o
trombocitos, las células se separan en los denominados separadores
de células con un líquido de lavado para poder almacenarlas por
separado durante un corto intervalo de tiempo. En este caso, las
células de la sangre tales como eritrocitos, no deben sufrir ninguna
o la menor modificación posible por el contacto con un líquido de
este tipo.
Hoy en día, el lavado de eritrocitos tiene lugar
habitualmente con solución fisiológica de sal común. Es conocido
también, para prolongar el tiempo de almacenamiento, añadir a los
concentrados de eritrocitos unas denominadas soluciones con aditivos
tales como, por ejemplo, manitol, en forma del denominado
SAG-manitol o PAGGS-manitol (véase
Sibrowski, Anästhesiol. Intensivmed. Notfallmed. Schmerzther. 1997,
32 (supl. 1), página 70). Se conocen también soluciones para
infusión que contienen gelatina, pero que no tienen nada que ver con
una utilización como líquido de lavado de células de la sangre.
Al lavar los eritrocitos con solución de NaCl
para la autotransfusión se detectaron perturbaciones en la calidad
de los eritrocitos por el contacto con el líquido de lavado. Estas
mermas de la calidad de los eritrocitos se manifiestan sobre todo
por la perturbación de la capacidad de transporte del O_{2} por
los eritrocitos, caracterizada por la forma y situación de las
llamadas curvas de unión de O_{2}, por la hemólisis espontánea con
la consecuencia de la creciente concentración de hemoglobina y
potasio en el líquido circundante, por contenidos reducidos de
2,3-DPG y ATP en los eritrocitos, y trastorno del
balance ácido-base en los eritrocitos obtenidos.
Este tipo de pérdidas de calidad se describen detalladamente en la
bibliografía (véase R. Karger, V. Kretschmer, Anaesthesist 1996, 45,
páginas 694 - 707; M. von Finck et al., Anaesthesist 1986, 35,
páginas 686 - 692. Según el criterio actual, en el caso de las
pérdidas de calidad de los eritrocitos se encuentran en primer plano
las de sus propiedades mecánicas, con sus consecuencias para la
hemólisis y, con ello, para la pérdida de eritrocitos transfundibles
y el incremento de la hemoglobina y del potasio extracelular libre.
Por consiguiente, se exige que los preparados de eritrocitos
únicamente se deben trasfundir, cuando la hemólisis del preparado no
supera el 0,8% (Council of Europe, Recomendations 1997).
En virtud de las pérdidas de calidad de los
eritrocitos por contacto con líquidos de lavado conocidos,
detectadas, se planteó el problema en el que se basa el invento de
obtener líquidos de lavado de células de la sangre, en especial de
eritrocitos, que no den lugar a ninguna o, en todo caso, a pequeñas
variaciones perjudiciales para la calidad de las células de la
sangre, en especial una tasa de hemólisis mecánica lo más baja
posible.
Sorprendentemente, se encontró que este cometido
se resuelve conforme al invento, cuando se emplea como líquido de
lavado de células de la sangre, en especial de eritrocitos, una
solución acuosa de 10 a 100 g/l de gelatina.
Como se sabe, la gelatina es un polipéptido que
se prepara especialmente por hidrólisis del colágeno contenido en
piel y huesos de animales. En su preparación se obtiene un amplio
intervalo de pesos moleculares. El polipéptido se puede modificar
por reacción, sobre todo de los grupos amino, con reactivos mono o
polifuncionales tales como, por ejemplo, agentes de acilación,
aldehídos, epóxidos, compuestos halogenados, cianamidas o compuestos
insaturados activados. Así, por ejemplo en soluciones para infusión
se conocen, gelatinas succiniladas,
oxipoli-gelatinas y gelatinas reticuladas a través
de puentes de urea. Para la utilización como líquidos de lavado
conforme al invento se pueden utilizar fundamentalmente todos los
tipos de gelatina, modificados o no modificados.
De manera conveniente, el peso molecular de las
gelatinas utilizadas se selecciona, y la concentración de las
gelatinas en la solución acuosa se fija y se adapta al peso
molecular de tal modo, que la solución acuosa obtenida sea
esencialmente iso-oncótica, es decir, que
corresponde esencialmente a la presión
coloide-osmótica del plasma. Además, el peso
molecular y la concentración de la gelatina se adapta
convenientemente de tal modo, que la viscosidad de la solución
corresponda lo más ampliamente posible a la del plasma sanguíneo, y
que la densidad de la solución obtenida sea baja. En este caso, la
gelatina se elige favorablemente de modo que su peso molecular se
encuentre en el intervalo de 20.000 a 40.000, especialmente en el
intervalo de 30.000 a 35.000. Tipos de gelatinas de esta clase, de
tipo no modificado o modificado, se pueden adquirir comercialmente.
La concentración de las gelatinas en la solución acuosa conforme al
invento se encuentra preferentemente en el intervalo de 25 a 60 g/l
y, de modo especialmente preferido, en el intervalo de 30 a 55
g/l.
Según el fin de la aplicación, las soluciones
acuosas de las gelatinas utilizadas según el invento pueden contener
otros componentes habituales y se pueden esterilizar y envasar de
forma estéril. Aditivos adicionales son, por ejemplo, agentes
inhibidores de la coagulación de la sangre, tales como citrato,
heparina y derivados de la heparina, glucosa, especialmente en una
cantidad de 2,5 a 7,5 mmol/l y electrolitos. Entre éstos entran en
consideración en la solución acuosa de gelatina especialmente sodio,
preferentemente en una concentración de 130 a 150 mmol/l, potasio,
preferentemente en una concentración de 3 a 5 mmol/l, calcio,
preferentemente en una concentración de 1 a 3 mmol/l y magnesio,
preferentemente en una concentración de 0,5 a 1,5 mmol/l.
Ejemplos y ejemplos
comparativos
Para determinar la hemólisis de los eritrocitos
se emplearon soluciones acuosas de cuatro tipos de gelatinas
habituales en el comercio conformes al invento, así como aditivos y
dextranos y almidón hidroxietílico habituales en el comercio, los
cuales se ofrecen para soluciones de infusión y, por último,
solución de sal común. Las soluciones se compararon en cuanto a la
hemólisis espontánea y a la hemólisis mecánica, reuniéndose en cada
caso las soluciones de gelatinas, las soluciones de almidón
hidroxietílico, las soluciones de dextrano y las soluciones con
aditivos, puesto que sus valores de hemólisis, independientemente de
su procedencia, se encontraron muy próximas en cada caso.
La hemólisis espontánea se determinó como sigue:
sangre humana fresca se centrifugó tres veces (10 minutos en el caso
de 1600 g) sustituyéndose, en cada caso, el plasma por líquido de
lavado en exceso (10 ml de líquido por cada 2 ml de eritrocitos). El
hematocrito se fijó en 50 \pm 5% por sustracción del líquido de
lavado en exceso. Acto seguido, se calculó la concentración de la
hemoglobina libre en el último líquido de lavado.
La tasa de hemólisis mecánica se calculó con
ayuda de un tonómetro IL 237 (razón social Instrumentation
Laboratory). En este aparato, en un recinto calentado a 37ºC por el
que circulaban gases saturados con vapor de agua, situado dentro de
un recipiente de cristal (volumen máximo 8 ml) se originó en cada
caso, por rotación intermitente, es decir por aceleración y
detención del recipiente, una fina y reciente película de
eritrocitos. En condiciones fisiológicas (pH 7,40 y presión parcial
de CO_{2} de 40 mm Hg) se hizo girar de forma intermitente durante
una hora. Acto seguido, se determinó la concentración de hemoglobina
en el material sobrenadante. Los valores obtenidos se encuentran en
la Tabla siguiente.
| Hemólisis | Tasa de | |
| espontánea (%) | hemólisis | |
| mecánica (%/h) | ||
| 7 muestras de plasma | no medible | 0,06 \pm 0,07 |
| 7 muestras en 0,9 g/dl de NaCl (comparación) | 0,3 \pm 0,2 | 2,2 \pm 0,7 |
| Soluciones para infusión | ||
| \hskip0.3cm 4 preparados de gelatina (invento) | 0,04 \pm 0,04 | 0,1 \pm 0,08 |
| \hskip0.3cm concentración 30 - 55 g/l | ||
| \hskip0.3cm PM 30.000 - 35.000 | ||
| \hskip0.3cm 8 preparados de almidón | 0,3 \pm 0,02 | 3,0 \pm 0,7 |
| \hskip0.3cm hidroxietílico (comparación) | ||
| \hskip0.3cm concentración 30 - 100 g/l | ||
| \hskip0.3cm PM 70.000 - 450.000 | 0,4 \pm 0,2 | 5,7 \pm 2,7 |
| \hskip0.3cm 7 preparados de dextrano (comparación) | ||
| \hskip0.3cm concentración 60 - 100 g/l | ||
| \hskip0.3cm PM 40.000 - 70.000 | ||
| Soluciones con aditivos | ||
| \hskip0.3cm 2 preparados | 0,1 | 2,8 |
| \hskip0.3cm PAGGS-manitol o, respectivamente, | ||
| \hskip0.3cm SAG-manitol (comparación) |
Los valores obtenidos muestran que tanto la
hemólisis espontánea como también la tasa de hemólisis mecánica de
las cuatro soluciones de gelatinas examinadas son comparables con
los valores del plasma, y que las soluciones de gelatinas producen
una hemólisis despreciable. Los valores se encuentran muy por debajo
de los valores de hemólisis exigidos por el Council of Europe, de
0,8%. En contraposición con esto, los valores de la hemólisis, tanto
de la hemólisis espontánea como también de la hemólisis mecánica, en
la solución fisiológica de sal común habitualmente utilizada hoy en
día para el lavado de eritrocitos y en las soluciones con aditivos
habituales hoy en día para el almacenamiento de concentrados de
eritrocitos, eran considerablemente más altos y muy por encima del
valor exigido de 0,8%.
Para fines comparativos, se incluyeron también en
los ensayos conocidas soluciones para infusión con almidón
hidroxietílico y dextrano. La hemólisis con esos polímeros se
encontró aún mas alta que en las soluciones con aditivos y en la
solución fisiológica de sal común, examinadas.
Claims (7)
1. Utilización de una solución acuosa de 10 a 100
g/l de gelatina como líquido de lavado de células de la sangre,
especialmente de eritrocitos.
2. Utilización según la reivindicación 1 de una
solución de gelatina, cuyo intervalo de pesos moleculares y cuya
concentración se han adaptado entre sí de tal modo, que la solución
es esencialmente iso-oncótica.
3. Utilización según la reivindicación 1 o 2 de
una solución de gelatina con un peso molecular en el intervalo de
20.000 a 40.000, preferentemente en el intervalo de 30.000 a
35.000.
4. Utilización según una de las reivindicaciones
1 a 3 de una solución acuosa de gelatina con una concentración de 26
a 60 g/l, especialmente de 30 a 55 g/l.
5. Utilización según una de las reivindicaciones
1 a 4 de una solución acuosa de gelatina con un contenido en glucosa
preferentemente en el intervalo de 2,5 a 7,5 mmol/l.
6. Utilización según una de las reivindicaciones
1 a 5 de una solución acuosa de gelatina con una concentración en
electrólitos, preferentemente con 130 a 150 mmol/l de sodio, 3 a 5
mmol/l de potasio, 1 a 3 mmol/l de calcio y/o 0,5 a 1,5 mmol/l de
magnesio.
7. Utilización según una de las reivindicaciones
1 a 6 de una solución acuosa de gelatina con un contenido en un
agente inhibidor de la coagulación sanguínea, preferentemente
citrato, heparina o un derivado de heparina.
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