ES2205702T3

ES2205702T3 - Compuesto farmaceuticos de benzotiofeno.

Info

Publication number: ES2205702T3
Application number: ES99202800T
Authority: ES
Inventors: Henry Uhlman Bryant; Jeffrey Alan Dodge
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 1995-03-10
Filing date: 1996-03-06
Publication date: 2004-05-01
Anticipated expiration: 2016-03-06
Also published as: EP0731100B1; IL117398A; SI0731100T1; DE69609748D1; DE69609748T2; CA2214261A1; DE69629500D1; PT731100E; IL117398A0; AU5304896A; AU697502B2; US6395755B1; ATE247100T1; EP0731100A1; DK0731100T3; BR9607775A; WO1996028155A1; ES2148681T3; ATE195519T1; GR3034762T3

Abstract

LA INVENCION SE REFIERE A UN COMPUESTO DE FORMULA I: DONDE R 1 ES H, OH, HALO, OCO(ALQUILO C 1 - C 6 ), OCO (ARILO), OSO 2 (ALQUILO C 4 - C 6 ), OCOO(ALQUILO C 1 - C 6 ), OCOO(ARILO), OCONH(ALQUILO C 1 - C6 ) O OCON(ALQUILO C 1 - C 6 ) 2 ; R 2 ES ARILO, ALQUILO C 1 - C 6 , CICLOALQUILO C 3 C 6 O 4 - CICLOHEXANOL; R 3 ES O(CH 2 ) 2 O O(CH 2 ) 3 ; R 4 Y R 5 SE COMBINAN PARA FORMAR, CON EL ATOMO DE NITROGENO AL QUE ESTAN UNIDOS, PIPERIDINA, MORFOLINA, PIRROLIDINA, 3 METILPIRROLIDINA, 3,3 - METILPIRROLIDINA, 3, 3 - DIMETILPIRROLIDINA, 3, 4 - DIMETILPIRROLIDINA, AZEPINA O PIPECOLINA; DONDE EL ARILO DE R 1 Y R 2 ES F ENILO OPCIONALMENTE SUSTITUIDO DE 1 A 3 VECES POR ALQUILO C SUB,1 - C 6 , ALCOXI C 1 - C 6 , HALO, AMINO O HID ROXILO. SE INCLUYEN ASIMISMO LAS SALES FARMACEUTICAMENTE ACEPTABLES DE DICHOS COMPUESTOS.

Description

Compuestos farmacéuticos de benzotiofeno.

La presente invención se refiere a los campos de la química farmacéutica y orgánica, y proporciona compuestos benzotiofenos nuevos que son útiles para varias indicaciones médicas de tratamiento asociadas al síndrome posmenopáusico y a la enfermedad fibroide uterina, la endometriosis y la proliferación de las células del músculo liso de la aorta.

"Síndrome posmenopáusico" es un término usado para describir varios estados patológicos que con frecuencia afectan a las mujeres que han entrado en la menopausia o terminado la metamorfosis fisiológica conocida como menopausia. Aunque son numerosas las patologías contempladas por el uso de este término, tres efectos importantes del síndrome posmenopáusico son la fuente de mayor preocupación desde el punto de vista médico a largo plazo: la osteoporosis, los efectos cardiovasculares como la hiperlipidemia y el cáncer dependiente de estrógeno, en particular el cáncer de mama y el cáncer uterino.

La osteoporosis describe un grupo de enfermedades que surgen de diversas etiologías pero que se caracterizan por la pérdida neta de masa ósea por unidad de volumen. La consecuencia de esta pérdida de masa ósea y la fractura ósea resultante es la incapacidad del esqueleto de proporcionar un apoyo estructural adecuado para el cuerpo.

Uno de los tipos más comunes de osteoporosis es la asociada a la menopausia. La mayoría de las mujeres pierden alrededor del 20% al 60% de la masa ósea del compartimiento trabecular del hueso dentro del plazo de los 3 a 6 años después de la interrupción de la menstruación. Por lo general, esta pérdida rápida está asociada a un aumento de la resorción y formación ósea. Sin embargo, el ciclo de resorción es más dominante y el resultado es una pérdida neta de masa ósea. La osteoporosis es una enfermedad grave y común entre las mujeres menopáusicas.

Se ha estimado que sólo en Estados Unidos existen 25 millones de mujeres que padecen esta enfermedad. Los resultados de la osteoporosis son perjudiciales en lo personal y, además, suponen grandes pérdidas económicas debido a su cronicidad y a la necesidad de un apoyo importante y prolongado (hospitalización y asistencia auxiliar domiciliaria) de las secuelas de la enfermedad. Esto es especialmente cierto para los pacientes de mayor edad. Además, aunque por lo general no se considera que la osteoporosis sea una enfermedad potencialmente mortal, en las pacientes ancianas un 20% al 30% del índice de mortalidad está relacionado con las fracturas de cadera. Un porcentaje alto de este índice de mortalidad puede estar directamente asociado a la osteoporosis posmenopáusica.

El tejido del hueso más vulnerable a los efectos de la osteoporosis posmenopáusica es la sustancia trabecular. Este tejido se denomina con frecuencia hueso espojoso o hueso trabecular, y está particularmente concentrado cerca de los extremos del hueso (cerca de las articulaciones) y en las vértebras de la columna vertebral. En el tejido óseo trabecular se distinguen pequeñas estructuras osteoides que se interconectan entre sí, y tejido cortical más sólido y denso que constituye la superficie más externa y eje central del hueso. Esta red interconectada de trabécula brinda soporte lateral a la estructura cortical externa y es crítica para la fuerza biomecánica de toda la estructura. En la osteoporosis posmenopáusica es principalmente la resorción y pérdida neta de trabécula la que conduce a la insuficiencia y la fractura del hueso. En vista de la pérdida de trabécula de las mujeres posmenopáusicas, no es sorprendente que las fracturas más comunes sean las asociadas a aquellos huesos que son muy dependientes del apoyo trabecular, por ejemplo las vértebras, y el cuello de los huesos que soportan el peso como el fémur y el antebrazo. En realidad, la fractura de cadera, las fracturas de Colles y el aplastamiento vertebral son características distintivas de la osteoporosis posmenopáusica.

En este momento, el único método generalmente aceptado para el tratamiento de la osteoporosis posmenopáusica es el tratamiento sustitutivo con estrógenos. Aunque por lo general el tratamiento es satisfactorio, su cumplimiento por parte de las pacientes es bajo principalmente porque la estrógenoterapia produce efectos secundarios indeseables.

Durante todo el periodo premenopáusico, la mayoría de las mujeres tiene una incidencia menor de enfermedad cardiovascular que los hombres de su misma edad. Sin embargo, después de la menopausia la incidencia de enfermedad cardiovascular en las mujeres aumenta lentamente hasta alcanzar el índice observado en los varones. Esta pérdida de protección se ha vinculado a la pérdida de estrógenos y, en particular, a la pérdida de la capacidad de los estrógenos de regular los niveles de lípidos séricos. Aún no se ha comprendido del todo la naturaleza de la capacidad de los estrógenos de regular los lípidos séricos, pero los indicios hasta la fecha indican que el estrógeno puede regular en aumento los receptores de los lípidos de baja densidad (LBD) del hígado para eliminar el exceso de colesterol. Además, el estrógeno parece tener algún efecto sobre la biosíntesis de colesterol y otros efectos beneficiosos sobre la salud cardiovascular.

Se ha publicado en la bibliografía que en las mujeres posmenopáusicas que reciben tratamiento sustitutivo con estrógenos se produce un regreso a los niveles de lípidos séricos hasta las concentraciones del estado premenopáusico. Por tanto, el estrógeno podría parecer ser un tratamiento razonable para este estado. Sin embargo, para muchas mujeres los efectos secundarios del tratamiento sustitutivo con estrógenos no son aceptables, limitando así el uso de este tratamiento. Un tratamiento ideal para este estado sería un agente que regulara el nivel de lípidos séricos como lo hace el estrógeno, pero que careciera de los efectos secundarios y riesgos asociados al tratamiento con estrógenos.

La tercera patología importante asociada al síndrome posmenopáusico es el cáncer de mama dependiente del estrógeno y, en menor medida, los cánceres dependientes del estrógeno de otros órganos, en particular del útero. Aunque esos neoplasmas no están sólo limitados a las mujeres posmenopáusicas, están más extendidos en la población posmenopáusica, de mayor edad. La quimioterapia actual de estos cánceres se basa en gran medida en el uso de compuestos antiestrógenos como por ejemplo el tamoxifeno. Los agonistas-antagonistas mixtos de ese tipo estos no son ideales, a pesar de sus efectos beneficiosos en el tratamiento de estos cánceres y de que sus efectos secundarios estrógenos son tolerables en situaciones agudas potencialmente mortales. Por ejemplo, estos agentes pueden tener efectos estimulantes sobre ciertas poblaciones de células cancerosas del útero debido a sus propiedades estrógenas (agonistas) y, por tanto, pueden ser contraproducentes en algunos casos. Un tratamiento mejor para estos cánceres sería un agente que fuera un compuesto antiestrógeno cuyas propiedades estrógenas agonistas sobre los tejidos reproductores fueran insignificantes o inexistentes.

En respuesta a la necesidad clara de agentes farmacéuticos nuevos que sean capaces de aliviar los síntomas de, por ejemplo, el síndrome posmenopáusico, la presente invención proporciona compuestos benzotiofenos nuevos, composiciones farmacéuticas de los mismos y métodos para usar esos compuestos para el tratamiento del síndrome posmenopáusico y otros estados patológicos asociados al estrógeno como los mencionados más arriba.

La fibrosis uterina (tumor fibroide uterino) es un problema clínico antiguo y siempre presente conocido por varios nombres, incluyendo enfermedad fibroide uterina, hipertrofia uterina, leiomioma uterino, hipertrofia miometrial, fibrosis uterina y metritis fibrótica. Esencialmente la fibrosis uterina es una enfermedad en la que se produce una deposición inadecuada de tejido fibroide sobre la pared del útero.

Esta enfermedad es una de las causas de dismenorrea e infertilidad de la mujer. Se conoce escasamente la causa exacta de esta enfermedad, pero los indicios indican que es una respuesta inadecuada de tejido fibroide al estrógeno. Una enfermedad de este tipo se ha producido en conejos mediante la administración diaria de estrógeno durante 3 meses. En cobayas, la enfermedad se ha producido mediante la administración diaria de estrógeno durante cuatro meses. Además, en ratas, el estrógeno causa una hipertrofia similar.

El tratamiento más común para la fibrosis uterina implica procedimientos quirúrgicos costosos y, algunas veces, fuente de complicaciones tales como la formación de adherencias abdominales e infecciones. En algunas pacientes, la cirugía inicial sólo es un tratamiento provisional y los fibroides vuelven a crecer. En esos casos se realiza una histerectomía que efectivamente acaba con los fibroides pero también con la vida reproductiva de la paciente. Asimismo pueden administrarse los antagonistas de la hormona liberadora de la gonadotropina, aunque su uso es limitado por el hecho de que puede llevar a la osteoporosis. De modo que existe una necesidad de contar con métodos nuevos para tratar la fibrosis uterina y los métodos de la presente invención satisfacen esa necesidad.

La endometriosis es una enfermedad con dismenorrea grave que está acompañada por dolor intenso, hemorragia dentro de las masas endometriales o cavidad peritoneal y con frecuencia lleva a la infertilidad. Aparentemente, los síntomas de esta enfermedad se deben a proliferaciones endometriales ectópicas que responden de forma inadecuada al control hormonal normal y están localizadas en tejidos inadecuados. Debido a que la proliferación endometrial se produce en localizaciones inadecuadas, el tejido parece iniciar respuestas locales de tipo inflamatorio que causan infiltración de macrófagos y una sucesión de eventos en cascada que lleva al inicio de la respuesta dolorosa. Todavía no se conoce bien la etiología exacta de esta enfermedad y su tratamiento por hormonoterapia es diverso, está mal definido y se encuentra marcado por numerosos efectos colaterales indeseables y posiblemente peligrosos.

Uno de los tratamientos para esta enfermedad es el uso de estrógenos a dosis baja para suprimir el crecimiento endometrial a través de un efecto de retroalimentación negativa sobre la liberación de gonadotropina de origen central y la posterior producción de estrógeno ovárico; sin embargo, algunas veces es necesario usar estrógeno continuo para controlar los síntomas. Con frecuencia este uso de estrógeno puede llevar a efectos secundarios indeseables e incluso al riesgo de cáncer de endometrio.

Otro tratamiento consiste en la administración continua de progestágenos que inducen amenorrea y al suprimir la producción de estrógeno ovárico puede causar regresiones de los crecimientos endometriales. A menudo el uso de un tratamiento prolongado con progestágenos está acompañado por los efectos secundarios desagradables de los progestágenos al sistema nervioso central y muchas veces conduce a la infertilidad debido a la supresión de la función ovárica.

Un tercer tratamiento consiste en la administración de andrógenos débiles que son eficaces para controlar la endometriosis; sin embargo, inducen efectos virilizantes graves. Varios de estos tratamientos de endometriosis también causan un grado leve de pérdida ósea con tratamiento continuo. Por tanto, se requieren métodos nuevos para el tratamiento de la endometriosis.

La proliferación de células del músculo liso de la aorta desempeña un papel importante en enfermedades como la ateroesclerosis y la reestenosis. Se ha comprobado que la reestenosis vascular después de la angioplastia coronaria transluminal percutánea (PTCA: percutaneous transluminal coronary angioplasty) es una respuesta tisular caracterizada por una fase inicial y una fase tardía. La fase inicial, que se produce horas a días después de la PTCA, se debe a la trombosis con algunos vasoespasmos mientras que la fase tardía parece estar dominada por una proliferación y migración excesiva de células del músculo liso de la aorta. En esta enfermedad, el aumento de la movilidad y colonización celular por parte de esas células musculares y macrófagos contribuye de forma importante a la patogenia de la enfermedad. La proliferación y migración excesiva de células de músculo liso vascular de la aorta puede ser el mecanismo principal de la reoclusión de las arterias coronarias después de la PTCA, la aterectomía, la angioplastia por láser y la cirugía de injerto de derivación arterial. Véase "Intimal Proliferation of Smooth Muscle Cells as an Explanation for Recurrent Coronary Artery Stenosis after Percutaneous Transluminal Coronary Angioplasty," Austin et al., Journal of the American College of Cardiology, 8: 369-375 (agosto, 1985).

La reestenosis vascular sigue siendo una complicación a largo plazo importante después de la intervención quirúrgica de las arterias bloqueadas mediante angioplastia coronaria transluminal percutánea, la aterectomía, la angioplastia por láser y la cirugía de injerto de derivación arterial. En aproximadamente el 35% de los pacientes que se someten a una PTCA, la reoclusión se produce dentro del plazo de los tres a seis meses posteriores al procedimiento. Las estrategias que se utilizan en la actualidad para tratar la reestenosis vascular incluyen la intervención mecánica con dispositivos tales como las endoprótesis vasculares (stents) o las farmacoterapias que incluyen el tratamiento con heparina, heparina de bajo peso molecular, coumarina, aspirina, aceite de pescado, antagonistas del calcio, esteroides y prostaciclina. Estas estrategias han fracasado en frenar la tasa de reoclusión, y han sido ineficaces para tratar y prevenir la reestenosis vascular. Véase "Prevention of Restenosis after Percutaneous Transluminal Coronary Angioplasty: The Search for a 'Magic Bullet'," Hermans et al., American Heart Journal, 122: 171-187 (julio, 1991).

En la patogenia de la reestenosis la proliferación y migración excesiva de las células se produce como resultado de factores de crecimiento producidos por los componentes celulares de la sangre y la pared del vaso arterial lesionado que median la proliferación de las células del músculo liso en la reestenosis vascular.

Los agentes que inhiben la proliferación y/o la migración de las células de músculo liso de la aorta son útiles para el tratamiento y la prevención de la reestenosis. La presente invención prevé el uso de compuestos como inhibidores de la proliferación de células del músculo liso de la aorta y, por tanto, inhibidores de la reestenosis.

El documento EP 0062 503 está relacionado con los compuestos 6-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)-3-[4-(2-piperidino)etoxi)benzoil]benzo[b]tiofeno y 6-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)-3-[4-(3-metil-pirrolidino)etoxi)benzoil]benzo[b]tiofeno, como antiestrógenos y andrógenos.

En el documento EP 0471 609 se describe un proceso para la preparación de benzofurano, benzotiofeno, derivados de indol o indocilina.

El documento EP 0641 791 está relacionado con derivados del benzotiofeno sustituidos en la posición 2 por un átomo de halógeno, un grupo alquilo inferior, o un grupo cicloalquilo o cicloalquenilo sustituido opcionalmente por un grupo alquilo inferior, un grupo hidroxilo, un grupo aciloxi o un grupo oxo, como antiestrógenos.

El documento EP 0516 257 describe los derivados del 2-fenil benzo [b] furano y tiofeno como antiestrógenos.

El documento DE-B-1300575 describe los compuestos benzotiofenos como agentes antifertilidad.

La presente invención está relacionada con los compuestos de fórmula I

1

donde R_{1} es H, OH, halógeno, OCO (alquilo de C_{1}-C_{6}), OCO (arilo), OSO_{2} (alquilo de C_{4}-C_{6}), OCOO (alquilo de C_{1}-C_{6}), OCOO (arilo), OCONH (alquilo de C_{1}-C_{6}) o OCON (alquilo de C_{1}-C_{6})_{2};

R_{2} es arilo, alquilo de C_{1}-C_{6}, cicloalquilo de C_{3}-C_{6} o 4-ciclohexanol;

R_{3} es O(CH_{2})_{2} o O(CH_{2})_{3};

R_{4} y R_{5} son opcionalmente CO(CH_{2})_{2}CH_{3}, CO(CH_{2})_{3}CH_{3}, alquilo de C_{1}-C_{6}, o R_{4} y R_{5} se combinan para formar, con el nitrógeno al cual están unidos, piperidina, morfolina, pirrolidina, 3-metilpirrolidina, 3,3-dimetilpirrolidina, 3,4-dimetilpirrolidina, acepina o pipecolina;

R_{6} es

2

y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

La presente invención está relacionada, además, con composiciones farmacéuticas de fórmula I, que opcionalmente contienen estrógeno o progestágeno y el uso de esos compuestos, solos o en combinación con estrógeno o progestágenos, para el alivio de los síntomas del síndrome posmenopáusico, en particular la osteoporosis, los procesos patológicos cardiovasculares y el cáncer dependiente del estrógeno. Según se lo utiliza aquí, el término "estrógeno" incluye los compuestos esteroides con actividad estrógena tales como, por ejemplo, 17\beta-estradiol, estrona, estrógeno conjugado (Premarin®), estrógeno equino, 17\beta-etinil-estradiol y otros similares. Según se lo utiliza aquí, el término "progestágeno" incluye compuestos con actividad progestacional tales como, por ejemplo, progesterona, noretilnodrel, nongestrel, acetato de megestrol y noretindrona.

Los compuestos de la presente invención también son útiles para inhibir la enfermedad fibroide uterina y la endometriosis en mujeres y la proliferación de las células del músculo liso de la aorta, particularmente la reestenosis, en los seres humanos.

Un aspecto de la presente invención incluye compuestos de fórmula I

3

donde R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4}, R_{5} y R_{6} son según se los define más arriba;

y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Los términos generales usados en la descripción de los compuestos aquí descritos mantienen su significado usual. Por ejemplo "alquilo" se refiere a las cadenas alifáticas lineales o ramificadas de 2 a 6 átomos de carbono, incluyendo el etilo, propilo, isopropilo, butilo, n-butilo, pentilo, isopentilo, hexilo e isohexilo. De la misma forma, el término "alqueno de C_{2}-C_{6}" representa alquenos lineales o ramificados con 2 a 6 átomos de carbono e incluye el propileno, etileno, isopropileno, butileno, n-butileno, hexileno y pentileno.

El término "arilo" incluye el fenilo opcionalmente sustituido 1 a 3 veces con alquilo de C_{1}-C_{6}, alcoxi de C_{1}-C_{6}, halógeno, amino, nitro o hidroxi.

Preparación del benzotiofeno

Los compuestos de la presente invención son derivados del benzo [b] tiofeno que se denomina y se numera según el Índice anular de The American Chemical Society de la siguiente forma:

4

En el proceso de preparación de los compuestos de la presente invención, el material de partida es un compuesto de fórmula II.

5

donde

R_{7} es un grupo protector de hidroxi; y

R_{3}, R_{4} y R_{5} son como se ha definido más arriba;

o una sal de los mismos.

Aunque la base libre de un compuesto de fórmula II es un material de partida aceptable, con frecuencia es más conveniente la forma en sal de adición ácida, en particular la sal clorhidrato.

Los compuestos de fórmula II son conocidos en la técnica y se preparan esencialmente a través de los métodos descritos en las patentes de EE.UU. nº 4.133.814, 4.380.635 y 4.418.068.

Por lo general, se prepara un precursor benzotiofeno de fórmula III

6

mediante los procedimientos conocidos. Típicamente, los dos grupos hidroxi están protegidos por grupos protectores de hidroxi conocidos que son capaces de resistir la acilación en las condiciones normales Fiedel-Crafts (que forman los grupos protectores R_{5} de los compuestos de fórmula II) y la subsiguiente reducción por un agente fuertemente reductor. Los grupos protectores de hidroxi preferidos son alquilos de C_{1}-C_{4} y se prefiere especialmente el metilo. Ver, por ejemplo, las patentes mencionadas más arriba de Estados Unidos, J. W. Barton, "Protective Groups in Organic Chemistry", J. G. W. McOmie (ed.), Plenum Press, Nueva York, NY, 1973, Capítulo 2, y T. W. Green, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, Nueva York, NY, 1981, Capítulo 7.

Después de la preparación del precursor protegido deseado de fórmula III, se realiza la acilación del precursor con un compuesto de fórmula IV usando las condiciones normales de Friedel-Crafts.

7

donde

n, R_{3}, R_{4} y R_{5} son según se han definido más arriba; y

R es cloro, bromo, yodo o un grupo éster activador. La preparación de compuestos de fórmula IV y los métodos de acilación preferidos, se describen en las patentes de Estados Unidos incluidas más arriba. Cuando R_{4} y R_{5} son cada uno un alquilo de C_{1}-C_{4}, se prefieren metilo y etilo. Cuando R_{4} y R_{5} están combinados, se prefieren 1-piperidinil y 1-pirrolidinil. De estos, el grupo piperidino es especialmente preferido.

Después de la acilación y, por tanto, de la preparación de un compuesto de fórmula II o una sal del mismo, los compuestos de la presente invención en que R_{7} es -OH se preparan agregando un compuesto de fórmula II o una sal del mismo a un disolvente adecuado y, luego, reaccionando el compuesto de fórmula II con un agente reductor tal como, por ejemplo, hídrido de litio aluminio (LAH) en una atmósfera de gas inerte como nitrógeno.

Entre los disolventes adecuados se incluye cualquier disolvente o mezcla de disolventes que permanezca inerte en condiciones reductoras. Entre los disolventes adecuados se incluyen el éter dietílico, el dioxano y el tetrahidrofurano (THF). Se prefiere la forma anhidra de estos disolventes y se prefiere especialmente el THF anhidro.

La temperatura empleada en este paso es aquella que sea suficiente como para lograr que se complete la reacción de reducción. Por lo general, la temperatura ambiente, en el intervalo de los 17ºC a los 25ºC es adecuada.

La duración de este paso es la necesaria para que se produzca la reacción. Típicamente, esta reacción tarda entre 1 y 20 horas. El tiempo óptimo puede determinarse controlando la evolución de la reacción mediante las técnicas cromatográficas convencionales.

El \alpha-carbono (carboxi) puede modificarse entonces a los grupos definidos por R_{6}

cuando R_{6} es

8

Un grupo como el RLi, RMgX u otras especies neuclofílicas del carbono, donde R es alquilo de C_{1}-C_{5}, alquenilo de C_{2}-C_{5} o arilo, se agrega a un compuesto de fórmula II en un disolvente adecuado como se definió antes de una temperatura de 0 a -85ºC. Después de transcurrida una cantidad de tiempo suficiente (15 minutos a 20 horas) para permitir que termine la reacción, se agrega bicarbonato de sodio en disolución acuosa saturada, se realiza una extracción de la mezcla, y se lavan, secan, filtran, concentran y purifican los extractos combinados para producir un compuesto de fórmula Ia.

Para grupos donde R_{6} es

9

el grupo \alpha-hidroxi se reduce del compuesto Ia anterior con un agente reductor, tal como trietilsilano, seguido del agregado de un ácido como el ácido trifluoracético. Después de transcurrido un tiempo suficiente (15 minutos a 24 horas), se detiene la reacción como por ejemplo con el uso de una mezcla de acetato etílico/bicarbonato de sodio en disolución acuosa saturada. Se extrae la mezcla, y se lavan, secan, filtran, concentran y purifican las materias orgánicas para producir un compuesto de fórmula Ib. Métodos alternativos para llevar a cabo esto incluyen (a) trialquilsilano con un ácido de Lewis como Et_{2}AlCl_{2} o BF_{3}Et_{2}O (trifluoruro de boro-eterato); (b) hidrogenolisis (H_{2}) con un catalizador como paladio o carbono. Además, es efectivo el diclorodimetilsilano seguido de yoduro de sodio.

Se preparan otros compuestos reemplazando los grupos hidroxi R_{1} y R_{2} por un grupo de fórmula -O-CO-(alquilo de C_{1}-C_{6}), -O-CO-Ar en el cual Ar es opcionalmente sustituido por fenilo, o -O-SO_{2}-(alquilo de C_{4}-C_{6}) por procedimientos bien conocidos. Ver, por ejemplo, la Patente de EE.UU. nº 4.358.593, supra.

Por ejemplo, cuando se desea un grupo -O-CO (alquilo de C_{1}-C_{6}) o -O-CO-Ar, el compuesto dihidroxi de fórmula I se hace reaccionar con un agente tal como cloruro, bromuro, cianuro de acilo o azida, o con un anhídrido adecuado o mezclado con anhídrido. Las reacciones se realizaron convenientemente en un disolvente básico como piridina, lutidina, quinolina o isoquinolina, o en un disolvente amina terciaria tal como trietilamina, tributilamina, metilpiperidina y otros similares. La reacción también se puede realizar en un disolvente inerte como el acetato etílico, dimetilformamida, dimetilsulfoxida, dioxano, dimetoxietano, acetonitrilo, acetona, metil etil cetona y otros similares, a los que se ha agregado al menos un equivalente de un antioxidante ácido, tal como una amina terciaria. Si se lo desea, se puede usar un catalizador de acilación tal como la 4-dimetilaminopiridina o la 4-pirrolidino-piridina. Ver, por ejemplo, Haslam, et al., Tetrahedron, 36: 2409-2433 (1980).

Las reacciones de acilación que proporcionan los grupos R_{1} y R_{2} antes mencionados se realizan a temperaturas moderadas dentro del intervalo de aproximadamente -25ºC a aproximadamente 100ºC, con frecuencia en una atmósfera inerte como el gas nitrógeno. Sin embargo, la temperatura ambiente normalmente es adecuada para que se produzca la reacción.

Este tipo de acilaciones del grupo hidroxi también se pueden realizar por reacciones catalizadas por ácidos carboxílicos adecuados en disolventes orgánicos inertes o al calor. Se usan catalizadores ácidos tales como el ácido sulfúrico, el ácido polifosfórico, el ácido metansulfónico y otros similares.

Los grupos R_{1} y R_{2} antes mencionados también se pueden proporcionar formando un éster activo del ácido apropiado, tales como los ésteres formados por reactivos conocidos tales como la diciclohexilcarbodiimida, los acilimidazoles, los nitrofenoles, el pentaclorofenol, la N-hidroxisuccinimida y el hidroxibenzotriazol. Ver, por ejemplo, Bull. Chem. Soc. Japan, 38: 1979 (1965) y Chem. Ber., 788 y 2024 (1970).

Cada una de las técnicas antes mencionadas que proporciona -O-CO- (alquilo de C_{1}-C_{6}) y grupos -O-CO-Ar se realizan en disolventes según se comenta más arriba. Desde luego, esas técnicas que no producen un producto ácido durante el transcurso de la reacción, no necesitan el uso de un antioxidante ácido en la mezcla reactiva.

Cuando se desea un compuesto de fórmula I en el que R_{1} y R_{2} sea -O-SO_{2}-(alquilo de C_{4}-C_{6}), el compuesto dihidroxi de fórmula I se hace reaccionar con, por ejemplo, un derivado del ácido sulfónico adecuado tal como el cloruro de sulfonilo, bromuro o sal amonio de sulfonilo, como explican King y Monoir en J. Am. Chem. Soc., 97: 2566-2567 (1975). El compuesto dihidroxi también puede reaccionar con el anhídrido sulfónico adecuado. Tales reacciones se realizan en condiciones como las que se explican más arriba en el comentario de la reacción con haluros de ácidos y similares.

Los compuestos de fórmula I se pueden preparar de forma tal que R_{1} y R_{2} tengan diferentes grupos protectores biológicos o, preferiblemente, se preparan de forma tal que R_{1} y R_{2} lleven cada uno el mismo grupo biológico protector. Los grupos biológicos protectores incluyen –OCH_{3}, -O-CO-C (CH_{3})_{3}, -O-CO-C_{6}H_{5} y -O-SO_{2}- (CH_{2})_{3}-CH_{3}.

Aunque en los métodos de la presente invención se puede usar la forma de base libre de los compuestos de fórmula I, se prefiere preparar y usar una forma salina farmacéuticamente aceptable. De modo que, los compuestos usados en los métodos de esta invención forman principalmente sales de adición ácida farmacéuticamente aceptables con una gran variedad de ácidos orgánicos e inorgánicos, e incluyen las sales fisiológicamente aceptables que pueden usarse con frecuencia en la química farmacéutica. Tales sales también son parte de la presente invención. Los ácidos orgánicos típicos usados para formar esas sales incluyen el ácido clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, nítrico, sulfúrico, fosfórico e hipofosfórico.

También pueden usarse las sales derivadas de los ácidos orgánicos tales como los ácidos alifáticos monocarboxílico y dicarboxílico, los ácidos alcanoicos fenil-sustituidos, los ácidos hidroxialcanoico e hidroxialcanodioico, ácidos aromáticos, ácidos sulfónicos alifáticos y aromáticos. De modo que esas sales farmacéuticamente aceptables incluyen acetato, fenilacetato, trifluoroacetato, acrilato, ascorbato, benzoato, clorobenzoato, dinitrobenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, metilbenzoato, o-acetoxibenzoato, naftalen-2-benzoato, bromuro, isobutirato, fenilbutirato, \beta-hidroxibutirato, butin-1-4-dioato, hexin-1,4-dioato, caprato, caprilato, cloruro, cinamato, citrato, formato, fumarato, glucolato, heptanoato, hipurato, lactato, malato, maleato, hidroximaleato, malonato, mandelato, mesilato, nicotinato, isonicotinato, nitrato, oxalato, ftalato, tereftalato, fosfato, monohidrogenofosfato, dihidrogenofosfato, metafosfato, pirofosfato, propiolato, propionato, fenilpropionato, salicilato, sebacato, succinato, suberato, sulfato, bisulfato, pirosulfato, sulfito, bisulfito, sulfonato, bencenosulfonato, p-bromofenilsulfonato, clorobencenosulfonato, etanosulfonato, 2-hidroxietanosulfonato, metanosulfonato, naftalen-1-sulfonato, naftalen-2-sulfonato, p-toluenosulfonato, xilenosulfonato y tartarato. Una sal preferida es la sal clorhidrato.

Las sales de adición ácida farmacéuticamente aceptables se forman típicamente haciendo reaccionar un compuesto de fórmula I con una cantidad ácido equimolar o en exceso. Los reactivos se combinan generalmente en un disolvente mutuo tal como el éter dietílico o el acetato etílico. La sal normalmente precipita de la solución en el plazo de una hora a 10 días y se puede aislar por filtración o se puede eliminar el disolvente por los métodos convencionales.

Por lo general, las sales farmacéuticamente aceptables tienen mejores características de solubilidad que el compuesto del cual derivan, de modo que con frecuencia son más fáciles de tratar para las formulaciones como líquidos o emulsiones.

Los ejemplos siguientes se presentan para ilustrar más la preparación de los compuestos de la presente invención. No se supone que la invención esté limitada en su aplicación debido a cualquiera de los siguientes ejemplos.

RMN de ^{1}H y RMN de ^{13}C se miden como se indicó a 300 y 75 respectivamente. Los cambios químicos del RMN de ^{1}H se notifican como valores \delta en ppm relativos al disolvente RMN empleado. Las constantes de acoplamiento RMN de ^{1}H se notifican en Hertz (Hz) y se refieren a las multiplicidades aparentes. La multiplicidad se indica de la siguiente forma: s (simple); \delta (doble, t (triple), q (cuádruple); m (múltiple); comp (compleja), br (amplia) y app (aparente). La cromatografía en columna se realiza según el método de Still (Still, W. C.; Kahn, M.; Mitra, A. J. Org. Chem. 1987, 43, 2923) a no ser que se indique otra cosa con gel de sílice EM Science (malla 230-400 ASTM). Se realiza cromatografía radial en un Chromatotron usando placas de 1, 2 ó 4 mm. Todas las reacciones sensibles al aire o a la humedad se las deja migrar bajo una atmósfera de argón o nitrógeno en equipo de vidrio rigurosamente seco. En todos los casos las concentraciones se realizan a presión reducida con un evaporador rotativo.

Preparación 1

10

Se agrega N,N-dimetilaminopiridina a una solución de raloxifeno (1,00 g; 1,96 mmol) agitando en THF (20 ml) a temperatura ambiente se agrega a N,N-dimetilaminopiridina (1,00 g; 8,2 mmol), seguida de t-butildimetilsililcloruro (0,90 g; 6 mmol). Después de 12 horas, se diluye la reacción con agua y se extrae con cloroformo. Los extractos orgánicos combinados se secan (sulfato de sodio) y se concentran. Se recoge el aceite en etil acetato y se filtra el precipitado resultante. Se concentra el filtrado y se purifica por cromatografía rápida (flash) (gel de sílice, acetato elílico) para dar 1,1 g (80%) del producto deseado como un aceite amarillo espeso: RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,76 (d, J = 8,9 Hz, 2H); 7,68 (d; 9,0 Hz; 1H); 7,22-7,29 (m, 3H); 6,88 (dd, J = 8,9; 3,1 Hz, 1H); 6,72 (d, J = 9,1 Hz, 2H); 6,63 (d, J = 9,1 Hz, 2H); 4,10 (br, 2H); 2,79 (br, 2H); 2,54 (br, 4H); 1,62 (br; 4H); 1,25 (br; 2H); 1,01 (s, 9H); 0,93 (s, 9H); 0,22 (s, 6H); 0,06 (s, 6H); MS (FD) 701 (M+); IR (CHCl_{3}), 2934, 1642, 1599, 1259 cm^{-1}; AE teórico/encontrado C (68,43/68,53), H (7,90/7,92), N (2,00/2,23).

Ejemplo 1

11

A una solución del producto de la Preparación 1, (2,04 g; 2,91 mmol), agitando a -78ºC en THF (10 ml), se agrega MeLi (4,16 ml de una solución de 1,4 M en éter dietílico; 5,82 mmol) gota a gota. Después de 15 minutos se detiene la reacción con un exceso de disolución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y se extrae con acetato etílico. Los extractos orgánicos combinados se lavan con solución saturada (salmuera), se seca (MgSO_{4}), se filtra y se concentra. Se purifica el material resultante por cromatografía radial (gel de sílice, 4 mm; 2,5:2,5:0,1:0,1 de hexanos:acetato etílico:trietilamina:MeOH) para dar 1,70 g (81%) del material deseado como una espuma blanca: RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,31-7,36 (m, 5H), 7,17 (d, J =2,9 Hz, 1H), 6,81 (d, J = 8,9 Hz, 4H), 6,84 (dd, J = 9,0, 2,9 Hz, 1H, 4,12 (br, 2H), 2,81 (br, 2H), 2,59 (br, 4H), 1,65 (s, 3H), 1,63 (br, 4H), 1,45 (br, 2H), 0,99 (s, 9H), 0,97 (s, 9H), 0,21 (s, 6H), 0,19 (s, 6H), MS (FD), 0,19 (s, 6H), MS (FD) 718 (M+); IR (CHCl_{3}), 2934, 1606, 1467, 1525 cm^{-1}; AE teórico/encontrado C (68,57/68,93), H (8,28/8,26), N (1,95/2,10).

Ejemplo 2

12

A una solución del producto del Ejemplo 1 (0,50 g; 0,69 mmol), agitando en THF (5 ml) a 0ºC, se agrega fluoruro de tetrabutilamonio (1,74 ml de una solución de 1,0 M en THF; 1,74 mmol). Después de 15 minutos, se agrega bicarbonato de sodio en disolución acuosa saturada y se extrae la mezcla resultante con acetato etílico. Los extractos orgánicos combinados se lavan con solución saturada (salmuera), se secan con (MgSO_{4}), se filtran y se concentran. El material resultante se purifica por cromatografía radial (gel de sílice, 2 mm; 2,5:2,5:0,1:0,1 hexanos:acetato etílico:MeOH:trietilamina) para dar un rendimiento cuantitativo del producto deseado como un sólido blanco del producto deseado como un aceite amarillo espeso: RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,81 (s, 1H), 9,40 (s, 1H), 7,53 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,24 (app t, J = 9,0 Hz, 4H), 7,03 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,80 superposición d, J = 9,1 Hz, 6,61 (dd, J = 8,9, 2,9 Hz, 1H), 5,72 (s, 1H), 3,98 (tm J = 4,0 Hz, 2H), 2,61 (br, 2H), 2,41 (br, 4H), 1,24-1,55 (series de m, 9H); MS (FD) 490 (M+).

Ejemplo 3

13

A una solución del producto del Ejemplo 1, (1,77 g; 2,46 mmol) agitando en CH_{2}Cl_{2} (50 ml) a 0ºC se agrega trietilsilano (2,36 ml; 14,8 mmol) seguido de ácido trifluoroacético (4,72 ml). Después de 15 minutos se detiene la reacción vertiendo con cuidado la mezcla reactiva en una mezcla de acetato etílico/bicarbonato de sodio en disolución acuosa saturada. La mezcla bifásica se extrae con acetato etílico y los extractos orgánicos combinados se lavan con solución saturada (salmuera), se secan (MgSO_{4}), se filtran y se concentran. El material resultante se purifica por cromatografía radial (gel de sílice, 2 mm; 2,5:2,5:0,1:0,1 hexanos:acetato etílico:trietilamina:MeOH) para dar 1,5 g (87%) del producto deseado como una espuma blanca: RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7, 7,36 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,17-7,21 (compleja, 4H), 6,86 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 6,80 (s, J = 9,0 Hz, 2H), 6,68 (dd, J = 9,0, 2,8 Hz, 1H), 4,57 (q, J = 4,0 Hz, 1H), 4,17 (br, 2H), 2,84 (br, 2H), 2,62 (br, 4H), 1,62-1,74 (compleja, 7H), 1,49 (br, 2H), 0,99 (s, 9H), 0,97 (s, 9H), 0,22 (s, 6H), 0,20 (s, 6H), MS (FD) 703 (M+); IR (CHCl_{3}), 2935, 1605, 1468, 1265 cm^{-1}; AE teórico/encontrado C (70,13/69,78); H (8,47/8,62), N (2,00/2,11).

Ejemplo 4

14

A una solución del producto del Ejemplo 3 (0,50 g; 0,71 mmol), agitando en THF (5 ml) a 0ºC, se agrega fluoruro de tetrabulilamonio (1,78 ml de una solución 1,0 M en THF; 1,78 mmol). Después de 15 minutos se detiene la reacción con el agregado de bicarbonato de sodio en disolución acuosa saturada. La mezcla resultante se extrae con acetato etílico y posteriormente los extractos orgánicos combinados se lavan con solución saturada (salmuera), se secan (MgSO_{4}), se filtran y se concentran. El material resultante se purifica por cromatografía radial (gel de sílice, 2 mm; 2,5:2,5:0,75:0,25 hexanos:acetato etílico:MeOH:trietilamina) para dar 314 mg (93%) del producto deseado como un sólido blanco: RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,71 (s, 1H), 9,50 (s, 1H), 7,30 (d, J = 9,1; 2H), 7,08-7,17 (compleja, 4H), 6,81-6,88 (complejo, 4H), 6,63 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1H), 4,41 (q, J = 4,2 Hz, 1H), 3,98 (t, J = 3,8 Hz, 2H), 2,60 (br, 2H), 2,41 (br, 4H), 1,81 (d, J = 4,0 Hz, 3H), 1,35-1,51 (series de br m, 6H); MS (FD) 474 (M+).

Ejemplo 5

15

A una solución del producto de la Preparación 1 (1,00 g; 1,42 mmol) se agrega PhLi (1,6 ml de una solución 1,8 M en THF; 2,84 mmol) agitando a -78ºC. Después de 15 minutos se agrega de bicarbonato de sodio en disolución acuosa saturada y la mezcla resultante se extrae con acetato etílico. Los extractos orgánicos combinados se lavan posteriormente con solución saturada (salmuera), se secan (MgSO_{4}), se filtran y se concentran. La purificación del material bruto resultante por cromatografía radial (4 mm, gel de sílice, 2,5:2,5:0,01:0,005 acetato etílico:hexanos:trietilamina:MeOH) da 0,81 g (73%) del producto deseado como una espuma blanca: RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,11-7,22 (compleja, 10H), 6,93 (d, J = 9,1 Hz, 2H), 6,57-6,78 (series de m, 4H), 4,18 (br, 2H), 2,90 (br, 2H), 2,61 (br, 4H), 1,40-1,80 (br, 6H), 0,98 (s, 9H), 0,97 (s, 9H), 0,19 (s, 6H), 0,16 (s, 6H); MS (FD) 781 (M+); AE teórico/encontrado C (70,81/71,05), H (7,88/7,94), N (1,80/1,97).

Ejemplo 6

16

A una solución del producto del Ejemplo 7 (0,50 g; 0,64 mmol) se agrega fluoruro de tetrabutilamonio (1,60 ml de una solución 1,0 M en THF; 1,60 mmol) agitando en THF (5 ml) a -0ºC. Después de 15 minutos se agrega de bicarbonato de sodio en disolución acuosa saturada y la mezcla resultante se extrae con acetato etílico. Los extractos orgánicos combinados se lavan posteriormente con solución saturada (salmuera), se secan (MgSO_{4}), se filtran y se concentran. El material resultante se purifica por cromatografía radial (gel de sílice, 2 mm, 2,5:2,5:0,1:0,1) hexanos:acetato etílico:MeOH:trietilamina) para dar 323 mg (91%) del producto deseado como un sólido blanco: RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,35 (br, 2H), 7,38 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,00-7,20 (compleja, 7H), 6,86 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 6,58 (compleja, 3H), 6,40 (s, 1H), 6,31 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 3,91 (t, J = 3,9 Hz, 2H), 2,60 (br, 2H), 2,41 (br, 4H), 1,38-1,51 (series de m, 6H); MS (FD) 552 (M+); AE teórico/encontrado C (74,02/73,79), H (6,03/6,26), N (2,54/2,60).

Procedimiento de evaluación Procedimiento general de preparación

En los ejemplos que ilustran los métodos, se usó un modelo posmenopáusico en el que se determinaron los efectos de los diferentes tratamientos sobre los lípidos en circulación.

Se obtuvieron ratas Sprague Dawley de setenta y cinco días (intervalo de peso de 200 a 225 mg) de Charles River Laboratories (Portage, Michigan, EE.UU.). Los animales se sometieron a ovariectomía bilateral (OVX) o a un procedimiento quirúrgico Sham en Charles River Laboratories, y luego se enviaron una semana después. Al llegar, se albergaron en jaulas de metal colgantes en grupos de 3 ó 4 por jaula y se les dio un acceso ad libitum al alimento (contenido de calcio aproximadamente 0,5%) y agua durante una semana. La temperatura del ambiente se mantuvo a 22,2ºC \pm 1,7ºC, con una humedad relativa mínima del 40%. El fotoperiodo de la habitación fue de 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad.

Régimen de administración y obtención de tejido

Después de un periodo de aclimatación de una semana (por tanto, dos semanas post-OVX) se inicia la dosificación a diario con el compuesto de prueba. A no ser que se especifique otra cosa, se administra el 17\alpha-etinil estradiol o el compuesto de prueba por vía oral, como una suspensión de carboximetilcelulosa al 1% o disuelto en ciclodextrina al 20%. Se administró la dosis a los animales a diario durante 4 días. Después del régimen de administración, se pesaron los animales, se anestesiaron con una mezcla de Ketamina:Xilazina (2:1; V:V) y se obtuvo una muestra de sangre por punción cardiaca. Se sacrificaron los animales por asfixia con CO_{2}, se extrajo el útero a través de una incisión sobre la línea media y se determinó el peso uterino húmedo.

Análisis de colesterol

Se dejan coagular las muestras de sangre a temperatura ambiente durante 2 horas y se extrae el suero después de centrifugar durante 10 minutos a 3.000 rpm. Se determina el colesterol sérico usando una determinación Boehringer Mannheim Diagnostics de alta resolución. Brevemente, se oxida el colesterol a colest-4-en-3-ona y peróxido de hidrógeno. Luego se hace reaccionar el peróxido de hidrógeno con fenol y 4-aminofenazona en presencia de peroxidasa para producir colorante p-quinonaimina, que se lee mediante espectrofotometría a 500 nm. Se calcula la concentración de colesterol comparando con una curva normalizada. Toda la determinación se hace de forma automática con un Biomek Automated Workstation.

Determinación de peroxidasa eosinófila uterina (EPO)

Se mantienen los úteros a 4ºC hasta el momento del análisis enzimático. Luego se homogeneizan los úteros en 50 volúmenes de tampón Tris 50 mM (pH - 8,0) que contiene 0,005% Triton X-100. Después del agregado de 0,01% de peróxido de hidrógeno y 10 mM de O-fenilendiamina (concentraciones finales) en tampón Tris, se comprueba la absorbancia durante un minuto a 450 nm. La presencia de eosinófilos en el útero es una indicación de la actividad estrógena del compuesto. La velocidad máxima en un intervalo de 15 segundos se determina sobre la porción inicial, lineal de la curva de reacción.

Fuente del compuesto

Se obtuvo 17\alpha-etinil estradiol de Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri, EE.UU.

Influencia de los compuestos de Fórmula I en el colesterol sérico y determinación de la actividad agonista/no agonista

Los datos presentados en la Tabla 1 más abajo muestran los resultados comparativos en ratas sometidas a ovariectomía, ratas tratadas con 17\alpha-etinil estradiol (EE_{2}; una forma de estrógeno oralmente disponible) y ratas tratadas con ciertos compuestos de la presente invención. Aunque EE_{2} causó una disminución del colesterol sérico cuando se lo administró por vía oral a 0,1 mg/kg/día, también ejerció una acción estimulante del útero de modo que el peso uterino con EE_{2} fue sustancialmente mayor que el peso uterino de los animales experimentales sometidos a ovariectomía. Esta respuesta uterina al estrógeno es bien reconocida en la técnica.

Los compuestos de la invención no sólo disminuyeron, en general, el colesterol sérico en comparación con los animales de control sometidos a ovariectomía, sino que sólo produjeron un aumento mínimo del peso uterino o lo disminuyeron con la mayoría de los compuestos de la fórmula de la presente invención probados. En comparación con los compuestos estrógenos conocidos en la técnica, el beneficio de la reducción del colesterol sérico sin afectar negativamente el peso uterino es muy poco frecuente y deseable.

Como expresan los datos que se presentan más abajo, también se evaluó la estrogenicidad examinando la respuesta adversa de infiltración eosinófila dentro del útero. Los compuestos de la presente invención no causaron ningún aumento del número de eosinófilos observados en la capa estromal de las ratas sometidas a ovariectomía, mientras que el estradiol causó un aumento sustancial, esperado, de la infiltración eosinófila.

Los datos presentados a continuación en la Tabla 1 reflejan la respuesta de las ratas por tratamiento.

(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 1

17

Además de demostrar los beneficios de los compuestos de la presente invención, en especial cuando se comparan con el estradiol, los datos presentados más arriba demuestran claramente que los compuestos de Fórmula I no son miméticos de estrógenos. Además, no se observaron efectos toxicológicos perjudiciales (supervivencia) con ningún tratamiento.

Procedimiento de evaluación de la osteoporosis

Siguiendo el Procedimiento general de preparación, infra, se trataron las ratas diariamente durante 35 días (6 ratas por grupo experimental) y se sacrificaron por asfixia con dióxido de carbono el día 36. El periodo de 35 días de duración es suficiente como para permitir una reducción máxima de la densidad ósea, medida según se ha descrito aquí. En el momento del sacrificio, se extrajeron los úteros, se disecaron para separarlos de los tejidos ajenos y se expulsaron los contenidos líquidos antes de determinar el peso húmedo para confirmar la deficiencia de estrógeno asociada a la ovariectomía total. El peso uterino se redujo de forma sistemática aproximadamente un 75% en respuesta a la ovariectomía. Luego se colocaron los úteros en formalina tamponada neutra al 10% para permitir el posterior análisis histológico.

Se extirparon los fémures derechos y se generaron radiografías digitalizadas que se analizaron mediante un programa de análisis de imágenes (NIH: image analysis program) en la metáfisis distal. El aspecto proximal de la tibia de estos animales también se digitalizó por tomografía cuantitativa computarizada.

Conforme a los procedimientos anteriores, los compuestos de la presente invención y el etinil estradiol (EE_{2}) en hidroxipropil \beta-ciclodextrina al 20% se administraron a los animales experimentales por vía oral.

En resumen, la ovariectomía de los animales experimentales causa una reducción significativa de la densidad del fémur en comparación con los controles intactos, tratados con el vehículo. El etinil estradiol (EE_{2}) administrado por vía oral evitó esta pérdida, pero con este tratamiento siempre está presente el riesgo de la estimulación uterina.

Los compuestos de la presente invención evitan la pérdida ósea de una forma general dependiente de la dosis. Conforme a ello, los compuestos de la presente invención son útiles para el tratamiento del síndrome posmenopáusico, en particular la osteoporosis.

Prueba de proliferación de MCF-7

Células de adenocarcinoma de mama MCF-7 (ATCC HTB 22) se mantienen en un MEM (medio esencial mínimo, sin rojo fenol, Sigma, St. Louis, Missouri, EE.UU.) suplementado con suero fetal bovino (FBS) al 10% (V/V), L-glutamina (2 mM), piruvato de sodio (1 mM), HEPES ((N-[2-hidroxietil] piperacina-N'-[2-ácido etanosulfónico] 10 mM), aminoácidos no esenciales e insulina bovina (1 \mug/ml) (medio de mantenimiento). Diez días antes de la prueba, se cambian las células MCF-7 a un medio de mantenimiento suplementado con un 10% de medio de prueba de suero fetal bovino tratado con carbón vegetal recubierto por dextrano (DCC-FBS) en lugar de un 10% de FBS para disminuir la reserva interna de esteroides. Las células MCF-7 se extraen de los matraces de mantenimiento usando medio de disociación de células (HBSS sin Ca^{++}/Mg^{++} (sin rojo fenol) suplementado con HEPES 10 mM y EDTA 2 mM). Se lavan las células dos veces con medio de prueba ajustado a 80.000 células/ml. Se agregan aproximadamente 100 \mul (8.000 células) a pocillos de microcultivo de fondo plano (Costar 3596) y se incuban a 37ºC en una incubadora humidificada y con un 5% de CO_{2} durante 48 horas para permitir la adherencia de las células y el equilibrado después de la transferencia. Se preparan diluciones en serie en el medio de prueba de los fármacos o del DMSO como control de diluyente, y se transfieren 50 \mul a microcultivos por triplicado seguidos por 50 \mul de medio de prueba para un volumen final de 200 \mul. Después de otras 48 horas a 37ºC en incubadora humidificada y con CO_{2} al 5%, se pulsan los microcultivos con timidina tritiada (1 \muCi/pocillo) durante 4 horas. Se terminan los cultivos por congelación a -70ºC durante 24 horas, seguida de descongelación y separación de los microcultivos usando un Skatron Semiautomatic Cell Harvester. Se cuentan las muestras por centelleo líquido usando un contador Wallac BetaPlace \beta.

Inhibición de tumor de mama inducido por DMBA

Se producen tumores de mama dependientes del estrógeno en ratas Sprague-Dawley hembra que se compran a Harlan Industries, Indianápolis, Indiana, EE.UU. Cuando tienen aproximadamente 55 días de edad, las ratas reciben un aporte único oral de 20 mg de 7,12-dimetilbenz[a]antraceno (DMBA). Alrededor de 6 semanas después de la administración de DMBA, se palpan las mamas a intervalos semanales para detectar la aparición de tumores. Cuando aparecen uno o más tumores, se miden los diámetros más largos y más cortos de cada tumor con un calibre métrico, se registran las mediciones y se elige ese animal para experimentación. Se intenta distribuir uniformemente los diversos tamaños de tumores entre los grupos tratados y de control de modo tal que los tumores de tamaño medio estén distribuidos de forma equivalente entre los grupos experimentales. Los grupos de control y los grupos de prueba de cada experimento contienen 5 a 9 animales.

Los compuestos de Fórmula I se administran mediante inyecciones intraperitoneales en goma arábiga al 2% o por vía oral. Los compuestos administrados por vía oral se disuelven o se suspenden en 0,2 ml de aceite de maíz. Cada tratamiento incluyendo los tratamientos de control de goma arábiga y aceite de maíz se administran una vez al día a cada animal experimental. Después de la medición inicial de los tumores de los animales experimentales, se miden los tumores cada semana mediante el método antes mencionado. El tratamiento y las mediciones a los animales continúan durante 3 a 5 semanas, momento en el que se determinan las áreas finales de los tumores. Para todos los grupos tratados con el compuesto y el control, se determina el cambio del área media del tumor.

Procedimientos de evaluación de la fibrosis uterina

Prueba 1

Entre 3 y 20 mujeres con fibrosis uterina reciben el compuesto de la presente invención. La cantidad de compuesto administrado es de 0,1 a 1.000 mg/día y el periodo de administración es de 3 meses.

Se observan las mujeres durante el periodo de administración y hasta 3 meses después de la interrupción de la administración para evaluar los efectos sobre la fibrosis uterina.

Prueba 2

Se usa el mismo procedimiento que en la Prueba 1, excepto en que el periodo de administración es de 6 meses.

Prueba 3

Se usa el mismo procedimiento que en la Prueba 1, excepto en que el periodo de administración es de 1 año.

Prueba 4

A. Inducción de tumores fibroides en cobayas

Se usa estimulación estrógena prolongada para inducir leiomiomata en cobayas hembra sexualmente maduras. Se administra la dosis de estradiol por inyección a los animales 3-5 veces por semana durante 2-4 meses o hasta que surgen los tumores. Los tratamientos que consisten en un compuesto de la invención o el vehículo se administran a diario durante 3-16 semanas, y luego se sacrifican los animales, y se separa el útero y se analiza en ellos la regresión del tumor.

B. Implantación de tejido fibroide uterino en ratones atímicos

Tejido de leiomiomas humanos se implanta en la cavidad peritoneal y/o miometrio uterino de ratones atímicos maduros, castrados, hembras. Se suministra estrógeno exógeno para inducir el crecimiento del tejido explantado. En algunos casos, las células de tumor separadas se incuban in vitro antes de la implantación. El tratamiento consistente en un compuesto de la presente invención o el vehículo se suministra por lavado gástrico a diario durante 3-16 semanas y se extraen los implantes y se analiza el crecimiento o la regresión. En el momento del sacrificio, se separan los úteros para evaluar el estado del órgano.

Prueba 5

A. Se separa tejido de tumores fibroides uterinos humanos y se mantiene in vitro como cultivos iniciales sin transformar. Las muestras quirúrgicas se pasan a través de una malla o criba estéril o, alternativamente, se separan del tejido que las rodea para producir una suspensión única de células. Se mantienen las células en un medio que contiene un 10% de suero y antibiótico. Se determinan las velocidades de crecimiento en presencia y ausencia de estrógeno. Se evalúa la capacidad de las células de producir el componente C_{3} del complemento y su respuesta a los factores de crecimiento y hormonas de crecimiento. Se evalúa la respuesta proliferativa de los cultivos in vitro después del tratamiento con progestágenos, GnRH, un compuesto de la presente invención y el vehículo. Se evalúan semanalmente los niveles de receptores de hormona esteroide para determinar si las características celulares importantes se mantienen in vitro. Se utiliza tejido de 5-25 pacientes.

La actividad en al menos una de las pruebas anteriores indica que los compuestos de la presente invención son útiles para el tratamiento de la fibrosis uterina.

Procedimiento de evaluación de la endometriosis

En las Pruebas 1 y 2 se pueden examinar los efectos de 14 días y 21 días de administración de los compuestos de la presente invención sobre el crecimiento del tejido endometrial explantado.

Prueba 1

Doce a treinta ratas hembra adultas de la estirpe CD se usan como animales experimentales. Se dividen en tres grupos de igual número de animales. Se hace un seguimiento del ciclo estrual de todos los animales. El día del proestro, se practica una cirugía a cada una de las hembras. Se extrae el cuerno izquierdo del útero de las hembras de todos los grupos, se divide en dos pequeños cuadrados y se hace una sutura floja de los cuadrados en varios lugares adyacentes al flujo sanguíneo mesentérico. Además, se eliminan los ovarios de las hembras del Grupo 2.

El día después de la cirugía, los animales de los Grupos 1 y 2 reciben inyecciones intraperitoneales de agua durante 14 días mientras que los animales del Grupo 3 reciben inyecciones intraperitoneales de 1,0 mg de un compuesto de la presente invención por kilo de peso corporal durante el mismo tiempo. Después de 14 días de tratamiento, se sacrifican todas las hembras y se extraen y se preparan para el examen histológico los explantes de endometrios, suprarrenales, úteros remanentes y ovarios, cuando se aplique. Se pesan los ovarios y las suprarrenales.

Prueba 2

Doce a treinta ratas hembra adultas de la estirpe CD se usan como animales experimentales. Se dividen en dos grupos iguales. Se hace un seguimiento del ciclo estrual de todos los animales. El día del proestro, se practica una cirugía a cada una de las hembras. Se extrae el cuerno izquierdo del útero de las hembras de todos los grupos, se divide en dos pequeños cuadrados y se hace una sutura floja de los cuadrados en varios lugares adyacentes al flujo sanguíneo mesentérico.

Aproximadamente 50 días después de la cirugía, los animales asignados al Grupo 1 reciben inyecciones intraperitoneales de agua durante 21 días mientras que los animales del Grupo 2 reciben inyecciones intraperitoneales de 1,0 mg de un compuesto de la presente invención por kilo de peso corporal durante el mismo tiempo. Después de 21 días de tratamiento se sacrificaron todas las hembras y se extraen todos los explantes endometriales y adrenales y se pesan. Se miden los explantes como una indicación del crecimiento. Se hace un seguimiento de los ciclos estruales.

Prueba 3

A. Inducción quirúrgica de la endometriosis

Se usan autografías de tejido endometrial para inducir endometriosis en ratas y/o conejos. Los animales hembra en madurez reproductiva se someten a una ovariectomía bilateral y se suministra estrógeno exógeno proporcionando así un nivel de hormona constante y específico. Se implanta tejido endometrial autólogo en el peritoneo de 5-150 animales y se proporciona estrógeno para inducir el crecimiento de tejido explantado. Se suministra diariamente durante 3-16 semanas un tratamiento que consiste en un compuesto de la presente invención por lavado gástrico, y se extraen los implantes y se mide el crecimiento o la regresión. En el momento del sacrificio, se extrae el cuerno del útero intacto para evaluar el estado del endometrio.

B. Implantación de tejido endometrial humano en ratones atímicos

Tejido de lesiones de endometrio humano se implantan en el peritoneo de ratones hembra, sexualmente maduros, castrados, atímicos. Se proporciona estrógeno exógeno para inducir el crecimiento del tejido explantado. En algunos casos, las células de endometrio separadas se cultivan in vitro antes de la implantación. Se administra diariamente durante 3-16 días un tratamiento que consiste en un compuesto de la presente invención por lavado gástrico, y se extraen los implantes y se mide su crecimiento o regresión. En el momento del sacrificio, se extraen los úteros para evaluar el estado del endometrio intacto.

Prueba 4

A. Se separa tejido de las lesiones endometriales humanas y se mantiene in vitro como cultivo inicial sin transformar. Las muestras quirúrgicas se pasan a través de una malla o criba estéril o, alternativamente, se separa del tejido que las rodea para obtener una suspensión única de células. Se mantienen las células en un medio que contiene un 10% de suero y antibiótico. Se determinan las velocidades de crecimiento en presencia y ausencia de estrógeno. Se evalúa la capacidad de las células de producir el componente C_{3} del complemento y su respuesta a los factores de crecimiento y hormonas de crecimiento. Se evalúa la respuesta proliferativa de los cultivos in vitro después del tratamiento con progestágenos, GnRH, un compuesto de la presente invención y el vehículo. Se evalúan semanalmente los niveles de receptores de hormona esteroide para determinar si las características celulares importantes se mantienen in vitro. Se utiliza tejido de 5-25 pacientes.

La actividad en al menos una de las pruebas anteriores indica que los compuestos de la presente invención son útiles para el tratamiento de la endometriosis.

Procedimiento de evaluación de la inhibición de la proliferación de las células del músculo liso de la aorta/Reestenosis

Los compuestos de la presente invención tienen la capacidad de inhibir la proliferación de las células del músculo liso de la aorta. Esto se puede demostrar usando un cultivo de células del músculo liso de la aorta derivadas de aorta de conejo, determinándose la proliferación mediante la medición de la síntesis de ADN. Se obtienen las células por un método de explante como el descrito en Ross, J. of Cell Bio. 50: 172 (1971). Se cultivan las células en placas de 96 pocillos para microtitulación durante cinco días. Los cultivos confluyen y se detiene el crecimiento. Luego se transfieren las células a un Medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) que contiene 0,5% - 2% de plasma de bajo contenido de plaquetas, 2 mM de L-glutamina, 100 U/ml de penicilina, 100 mg ml de estreptomicina, 1 mC/ml ^{3}H-timidina, 20 ng/ml de factor de crecimiento derivado de plaquetas y concentraciones variables de los presentes compuestos. La solución madre de los compuestos se prepara en dimetil sulfóxido y luego se diluye hasta la concentración adecuada (0,01 - 30 mM) en el medio de prueba anteriormente mencionado. Se incuban las células a 37ºC durante 24 horas en 5% de CO_{2}/95% de aire. Después de un periodo de 24 horas se fijan las células en metanol. Luego se determina la incorporación de ^{3}H timidina al ADN con contador de centelleo según se describe en Bonin, et al., Exp. Cell Res. 181: 475-482 (1989).

La inhibición de la proliferación de las células del músculo liso de la aorta por los compuestos de la presente invención se demuestra, además, determinando sus efectos sobre el crecimiento exponencial de las células. Células de músculo liso de la aorta de conejo se siembran en placas de cultivo de tejido de 12 pocillos en DMEM que contiene un 10% de suero fetal bovino, de L-glutamina 2 mM, 100 U/ml de penicilina y 100 mg/ml de estreptomicina. Después de 24 horas las células están juntas y se reemplaza el medio por DMEM que contiene un 10% de suero, L-glutamina 2 mM, 100 U/ml de penicilina, 100 mg/ml de estreptomicina y concentraciones deseadas de los compuestos. Se deja crecer las células durante cuatro días. Se tratan las células con tripsina y se determina el número de células de cada cultivo contando mediante un contador ZM-Coulter.

La actividad en las pruebas anteriores indica que los compuestos de la presente invención son útiles para el tratamiento de la reestenosis.

La presente invención también proporciona un método para aliviar el síndrome posmenopáusico en mujeres que comprende el método antes mencionado usando compuestos de Fórmula I y comprende, además, la administración a una mujer de una cantidad eficaz de estrógeno o progestágeno. Estos tratamientos son particularmente útiles para tratar la osteoporosis y disminuir el nivel de colesterol sérico porque la paciente recibe los beneficios de cada agente farmacéutico mientras que los compuestos de la presente invención inhiben los efectos secundarios indeseables del estrógeno y el progestágeno. La actividad de esta combinación de tratamientos en cualquiera de las pruebas posmenopáusicas, infra, indica que los tratamientos combinados son útiles para aliviar los síntomas posmenopáusicos en mujeres.

Hay varias formas de estrógeno y progestágeno comercialmente disponibles. Los agentes basados en estrógeno incluyen, por ejemplo, estrógeno etinilo (0,01 - 0,03 mg/día), mestranol (0,05 - 0,15 mg/día) y hormonas estrógenas conjugadas como Premarin® (Wyeth-Ayerst; 0,3 - 2,5 mg/día). Los agentes basados en progestágeno incluyen, por ejemplo, medroxiprogesterona como Provera® (Upjohn; 2,5 - 10 mg/día), noretilnodrel (1,0 - 10,0 mg/día) y noretindrona (0,5 - 2,0 mg/día). Un compuesto preferido basado en estrógeno es Premarin, y el noretilnodrel y la noretindrona son los agentes basados en progestágeno preferidos.

El método de administración de cada uno de los agentes basados en estrógeno y en progestágeno es coherente con los conocidos en la técnica. Para la mayoría de los métodos de la presente invención, se administran los compuestos de Fórmula I continuamente desde 1 a 3 veces por día. Sin embargo, el tratamiento cíclico puede ser especialmente útil en el tratamiento de la endometriosis o puede usarse brevemente durante ataques dolorosos de la enfermedad. En el caso de reestenosis, el tratamiento puede limitarse a intervalos cortos (1-6 meses) después de los procedimientos médicos como la angioplastia.

Como se ha usado aquí, el término "cantidad eficaz" significa una cantidad de un compuesto de la presente invención que es capaz de aliviar los síntomas de los diversos estados patológicos aquí descritos. La dosis específica de un compuesto administrado conforme a la presente invención será, desde luego, determinada por las circunstancias particulares que rodean al caso, por ejemplo, el compuesto administrado, la vía de administración, el estado del paciente y la enfermedad a tratar. Una dosis diaria típica contendrá un nivel de dosis atóxico de alrededor de 5 mg a alrededor de 600 mg/día de un compuesto de la presente invención. Las dosis diarias preferidas serán de alrededor de 15 mg a alrededor de 80 mg/día.

Los compuestos de la presente invención se pueden administrar por varias vías, incluyendo la oral, la rectal, la transdérmica, la subcutánea, la intravenosa, la intramuscular y la intranasal. Estos compuestos se formulan preferiblemente antes de la administración, y la elección del compuesto a usar será decidida por el médico a cargo. Por tanto, otro aspecto de la presente invención es una composición farmacéutica de un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que contenga opcionalmente una cantidad eficaz de estrógeno o progestágeno, y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

El total de las sustancias activas de este tipo de formulaciones comprende desde 0,1% a 99,9% en peso de la formulación. Por "farmacéuticamente aceptable" se quiere decir que el vehículo, diluyente, excipientes y sal deben ser compatibles con los otros componentes de la formulación y no ser nocivos para el receptor de los mismos.

Las formulaciones farmacéuticas de la presente invención se pueden preparar por los procedimientos conocidos en la técnica usando los componentes conocidos y fácilmente disponibles. Por ejemplo, los compuestos de Fórmula I, con o sin un compuesto estrógeno o progestágeno, se pueden formular con los excipientes, diluyentes o vehículos comunes, y en forma de comprimidos, cápsulas, suspensiones, polvos y otras formas similares. Ejemplos de excipientes, diluyentes y vehículos que son adecuados para este tipo de formulaciones incluyen los siguientes: rellenos y diluyentes como el almidón, los azúcares, el manitol y los derivados de sílice; agentes aglutinantes como la carboximetilcelulosa y otros derivados de la celulosa, los alginatos, la gelatina y la polivinilpirrolidona; agentes humectantes como el glicerol, agentes desagregantes como el carbonato de calcio y el bicarbonato de sodio; agentes para retrasar la disolución como la parafina; aceleradores de la resorción como los compuestos de amonio cuaternario; agentes tensioactivos como el alcohol cetílico, monoestearato de glicerol; vehículos de adsorción tales como el caolín y la bentonita y lubricantes como el talco, el estearato de calcio y magnesio y polietilenglicoles sólidos.

Los compuestos también se pueden formular como elixires o soluciones para la administración oral conveniente o como soluciones adecuadas para la administración parenteral adecuada, por ejemplo, por las vías intramuscular, subcutánea o intravenosa. Además, los compuestos son bien adecuados para la formulación como formas farmacéuticas de liberación prolongada y otras similares. Las formulaciones se pueden constituir de forma tal que la liberación de la sustancia activa se realice sólo o preferiblemente en un lugar fisiológico particular, posiblemente durante un lapso de tiempo. Los recubrimientos, envolturas y matrices protectoras se pueden hacer, por ejemplo, con sustancias poliméricas o ceras.

Los compuestos de fórmula I, solos o en combinación con un agente farmacéutico de la presente invención, por lo general se administrarán mediante una formulación conveniente. Los siguientes ejemplos de formulación sólo son ilustrativos y no pretenden limitar la aplicación de la presente invención.

Formulaciones

En las formulaciones siguientes, "sustancia activa" significa un compuesto de fórmula I o una sal o solvato del mismo.

Formulación 1

Cápsulas de gelatina

Las cápsulas de gelatina dura se preparan usando lo siguiente:

\newpage

Ingrediente	Cantidad (mg/cápsula)
Ingrediente activo	0,1 - 1.000
Almidón, NF	0 - 650
Polvo fluido de almidón	0 - 650
Fluido de silicona 350 centistoques	0 - 15

La formulación anterior se puede cambiar para cumplir con las variaciones razonables que se proporcionen.

Una formulación en comprimidos se prepara usando los siguientes ingredientes:

Formulación 2

Comprimidos

Ingrediente	Cantidad (mg/comprimido)
Ingrediente activo	2,5 - 1.000
Celulosa microcristalina	200 - 650
Dióxido de silicona, de combustión	10 - 650
Ácido esteárico	5 - 15

Los componentes de mezclan y se comprimen para formar los comprimidos.

Como alternativa, es posible hacer comprimidos que contengan 2,5 - 1.000 mg de sustancia activa de la siguiente forma:

Formulación 3

Comprimidos

Ingrediente	Cantidad (mg/comprimido)
Ingrediente activo	25 - 1.000
Almidón	45
Celulosa microcristalina	35
Polivinilpirrolidona (como solución al 10% en agua)	4
Carboximetilcelulosa sódica	4,5
Estearato de magnesio	0,5
Talco	1

La sustancia activa, el almidón y la celulosa se pasan a través de una criba de malla nº 45 de EE.UU. y se mezclan minuciosamente. La solución de polivinilpirrolidona se mezcla con los polvos resultantes que luego se pasan a través de una criba de malla nº 14 de EE.UU. Los gránulos así producidos se secan a 50-60ºC y se pasan a través de una criba de malla nº 18 de EE.UU. El almidón carboximetilo sódico, el estearato de magnesio y el talco, se pasan previamente por una criba nº 60 de EE.UU., luego se agregan a los gránulos que, después de mezclar, se comprimen sobre una máquina para hacer comprimidos para producir los comprimidos.

Suspensiones que contienen 0,1 - 1.000 mg de medicamento por cada 5 ml de dosis se hacen de la siguiente forma:

Formulación 4

Suspensiones

Ingrediente	Cantidad (mg/5 ml)
Ingrediente activo	0,1 - 1.000 mg
Carboximetilcelulosa sódica	50 mg
Jarabe	1,25 mg

(Continuación)

Ingrediente	Cantidad (mg/5 ml)
Solución de ácido benzoico	0,10 ml
Aroma	q.v.
Color	q.v.
Agua destilada para	5 ml

El medicamento se pasa a través de una criba de malla nº 45 de EE.UU. y se mezcla con carboximetilcelulosa sódica y jarabe para formar una pasta suave. La solución de ácido benzoico, el aroma y el color se diluyen con algo de agua y se agregan con agitación. Luego se agrega agua suficiente como para producir el volumen requerido.

Una solución en aerosol se prepara con los siguientes ingredientes:

Formulación 5

Aerosol

Ingrediente	Cantidad (% de peso)
Ingrediente activo	0,25
Etanol	25,75
Propelente 22 (Clorodifluorometano)	70,00

El ingrediente activo se mezcla con etanol y se agrega la mezcla a una parte del propelente 22, se enfría hasta los 30ºC y se transfiere a un dispositivo para rellenar. La cantidad requerida se alimenta a un recipiente de acero inoxidable y se diluye con el resto del propelente. Luego se ajustan las unidades de válvula al recipiente.

Supositorios se preparan de la siguiente forma:

Formulación 6

Supositorios

Ingrediente	Cantidad (mg/supositorio)
Ingrediente activo	250
Glicéridos de ácidos grasos saturados	2.000

La sustancia activa se pasa a través de una criba de malla nº 60 de EE.UU. y se suspende en glicéridos de ácidos grasos saturados previamente fundidos usando el calor mínimo necesario. Luego se vierte la mezcla en un molde para supositorio de 2 g de capacidad nominal y se deja enfriar.

Una formulación intravenosa se prepara de la siguiente forma:

Formulación 7

Solución intravenosa

Ingrediente	Cantidad
Ingrediente activo	50 mg
Solución salina isotónica	1.000 mg

La solución de los ingredientes anteriores se administra por vía intravenosa a un paciente a una velocidad de aproximadamente 1 ml por minuto.

\newpage

Formulación 8

Cápsula combinada I

Ingrediente	Cantidad (mg/cápsula)
Ingrediente activo	50
Premarin	1
Avicel pH 101	50
Almidón 1.500	117,50
Aceite de silicona	2
Tween 80	0,50
Cab-O-Sil	0,25

Formulación 9

Cápsula combinada II

Ingrediente	Cantidad (mg/cápsula)
Ingrediente activo	50
Noretilnodrel	5
Avicel pH 101	82,50
Almidón 1.500	90
Aceite de silicona	2
Tween 80	0,50

Formulación 10

Comprimido combinado

Ingrediente	Cantidad (mg/cápsula)
Ingrediente activo	50
Premarin	1
Almidón de maíz NF	50
Povidona, K29-32	6
Avicel pH 101	41,50
Avicel pH 102	136,50
Crospovidona XL10	2,50
Estearato de magnesio	0,50
Cab-O-Sil	0,50

Claims

1. Un compuesto de Fórmula I

18

en el que R_{1} es H, OH, halógeno, OCO (alquilo de C_{1}-C_{6}), OCO (arilo), OSO_{2} (alquilo de C_{4}-C_{6}), OCOO (alquilo de C_{1}-C_{6}), OCOO (arilo), OCONH (alquilo de C_{1}-C_{6}) o OCON (alquilo de C_{1}-C_{6})_{2};

R_{3} es O (CH_{2})_{2} o O (CH_{2})_{3};

R_{6} es

19

y "acilo" significa fenilo opcionalmente sustituido 1 a 3 veces con alquilo de C_{1}-C_{6}, alcoxi de C_{1}-C_{6}, halógeno, amino, nitro o hidroxi;

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

2. Un compuesto de acuerdo con la Reivindicación 1 en el que R_{3} es -O(CH_{2})_{2}.

3. Un compuesto de acuerdo con la Reivindicación 2 en el que R_{4} y R_{5} forman piperidino.

4. Un compuesto de acuerdo con la Reivindicación 3 en el que R_{1} es -OH y R_{2} es 4-hidroxifenilo.

5. Un compuesto de acuerdo con la Reivindicación 4 en el que R_{6} es

20

6. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con la Reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y, opcionalmente, una cantidad eficaz de estrógeno o progestágeno, en combinación con un vehículo, diluyente o excipiente aceptable.

\newpage

7. El uso de un compuesto de cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 5 o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la fabricación de un medicamento para aliviar los síntomas del síndrome posmenopáusico.

8. El uso de un compuesto de cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 5, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la fabricación de un medicamento para inhibir la enfermedad fibroide uterina.

9. El uso de un compuesto de cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 5, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la fabricación de un medicamento para inhibir la endometriosis.

10. El uso de un compuesto de cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 5, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la fabricación de un medicamento para inhibir la proliferación de las células del músculo liso de la aorta o la reestenosis.