ES2207636T3 - Mersacidina recombinante y un metodo para su produccion. - Google Patents

Mersacidina recombinante y un metodo para su produccion.

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ES2207636T3
ES2207636T3 ES94114298T ES94114298T ES2207636T3 ES 2207636 T3 ES2207636 T3 ES 2207636T3 ES 94114298 T ES94114298 T ES 94114298T ES 94114298 T ES94114298 T ES 94114298T ES 2207636 T3 ES2207636 T3 ES 2207636T3
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Klaus-Peter Dr. Koller
Hans Georg Prof. Sahl
Gabriele Dr. Bierbaum
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Sanofi Aventis Deutschland GmbH
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Aventis Pharma Deutschland GmbH
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
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    • A61P31/04—Antibacterial agents
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    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)

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Abstract

LA PRESENTE INVENCION SE REFIERE EN PARTICULAR A LA SECUENCIA DE GENES ESTRUCTURAL DE LA MERSACIDINA ANTIBIOTICA DE PEPTIDOS. LA SECUENCIACION HA REVELADO QUE LA PREMERSACIDINA CONSISTE EN UNA SECUENCIA PRINCIPAL 48 AMINOACIDOS INUSUALMENTE LARGA Y UNA PARTE DE PROPEPTIDO DE 20 AMINOACIDOS QUE SE MODIFICA DURANTE LA BIOSINTESIS AL LANTIBIOTICO MADURO.

Description

Mersacidina recombinante y un método para su producción.
La presente invención se refiere en particular a la secuencia genética estructural del antibiótico peptídico mersacidina. El secuenciado reveló que la premersacidina consiste en una secuencia de iniciadores inusualmente larga de 48 aminoácidos y una parte propeptídica de 20 aminoácidos que se modifica durante la biosíntesis al lantibiótico maduro.
La mersacidina pertenece a un grupo de péptidos bactericidas que se designó "lantibióticos" para significar que estos péptidos contienen los raros aminoácidos lantionina y/o 3-metillantionina. Regularmente se encuentran aminoácidos modificados adicionales tales como deshidroalanina y deshidrobutirina, mientras que solo se encuentran en algunos lantibióticos la S-aminovinilcisteína y la lisinoalanina (G. Jung (1991), Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 30: 1051-1068). Los lantibióticos son producidos por bacterias gram positivas y son derivados de prepéptidos sintetizados por los ribosomas. Se han encontrado genes estructurales de lantibióticos o en los cromosomas bacterianos (por ejemplo, subtilina y cinamicina), o asociados con elementos móviles como transposones (por ejemplo, nisina) o grandes plásmidos (por ejemplo, epidermina y Pep5). Los prepéptidos consisten en una secuencia de iniciadores de N terminal que se escinde después de la exportación de la célula productora y el propéptido de C terminal, que se modifica post-translacionalmente al lantibiótico maduro (G. Jung (1991), supra). En una primera etapa de la modificación, se deshidratan los residuos de serina y treonina para dar respectivamente deshidroalanina (Dha) o deshidrobutirina (Dhb) (H. P. Weil et al. (1990), Eur. J. Biochem. 194: 217-223). Posteriormente los grupos SH de los residuos de cisteína reaccionan con los dobles enlaces de los residuos de Dha o Dhb para formar respectivamente lantioninas o metillantioninas.
La mersacidina se aisló del sobrenadante del cultivo de Bacillus spec. HIL Y-85.54728 y adquirió interés por su significativa eficacia in vivo frente al Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA) (S. Chatterjee et al. (1992), J. Antibiotics 45: 839-845. Es el lantibiótico más pequeño aislado hasta la fecha (1825 Da), sintetizado a partir de un propéptido de 20 aminoácidos y contiene 3 residuos de metillantionina, una deshidroalanina y una S-aminovinil-2-metilcisteína (Fig. 1 A) (S. Chatterjee (1992), J. Antibiotics 45: 832-838). La mersacidina no lleva carga neta y tiene propiedades hidrófobas globales. Resultados recientes indican que la mersacidina interfiere con la biosíntesis de peptidoglicanos. Lo más probable es que esto ocurra en el nivel de la transglicosilación por medio de un mecanismo que difiere del de los antibióticos en uso actualmente frente a MRSA.
Por consiguiente, la presente invención se refiere a la premersacidina que tiene la secuencia de aminoácidos como se muestra en la Fig. 2 desde el aminoácido nº 1 hasta el 68 y la promersacidina que tiene la secuencia de aminoácidos como se muestra en la Fig. 2 desde el aminoácido nº 49 hasta el 68.
Una realización adicional de la presente invención son las codificaciones de ADNs de premersacidina, en particular ADNs que tienen la secuencia de nucleótido como se muestra en la Fig. 2 desde el nº 22 hasta el 225 que codifican la premersacidina, un vector que contiene dicho ADN y una célula anfitrión que contiene dicho vector.
Otra realización es un proceso para producir premersacidina, promersacidina o mersacidina madura por métodos de tecnología génica generalmente conocidos por una persona experimentada en la técnica, i.e. se realiza un cultivo de una célula anfitrión adecuada que contiene dicha codificación de ADNs para premersacidina en condiciones adecuadas, seguido por aislamiento de la premersacidina expresada por dicha célula anfitrión, preferiblemente una bacteria gram positiva, tal como Bacillus, Streptomyces o Streptococcus.
Finalmente, de acuerdo con la presente invención el péptido de la premersacidina o sus genes pueden usarse para la producción de mersacidina madura como se describe, por ejemplo, en el documento de patente WO 90/00558.
Como ejemplo, la mersacidina madura es útil como antibiótico peptídico para la conservación de alimentos, particularmente frente a Staphylococcus aureus resistente a meticilina o como un antibiótico para tratar infecciones de Staphylococcus aureus en animales o seres humanos. Adicionalmente puede utilizarse la invención para obtener derivados de mersacidina modificados en la secuencia de aminoácidos con un espectro de antibióticos extruidos o con una eficacia diferente. Más aún, la invención abre vías para sobre expresar Mersacidina o sus derivados por ingeniería genética.
Descripción de las figuras
Fig. 1: A) Estructura del lantibiótico mersacidina. B) Secuencia supuesta del prepéptido y secuencia de las 51 bases guessmer que se utilizaron para la identificación del gen estructural.
Fig. 2: Secuencia de nucleótidos del gen estructural mrsA del lantibiótico mersacidina y secuencia deducida de aminoácidos del prepéptido. El sitio de unión al ribosoma frente al codón de inicio de ATG está dentro de un rectángulo y el sitio de procesado está marcado con una flecha. El supuesto finalizador independiente de rho está subrayado.
Fig. 3: Comparación de las secuencias de iniciadores de varios lantibióticos. Se han marcado las secuencias conservadas con letra negrilla.
Ejemplo 1. Clonación del gen estructural de mersacidina
Se dedujo la secuencia de propéptido mersacidina supuesta (Fig. 1B) de la estructura de mersacidina y se basó en información general acerca de la biosíntesis de lantibióticos. Se sintetizó la sonda representada como un guessmer de 51 bases basado en el uso de codón preferido de Bacillus en un PCR-mate® (Applied Biosystems, Weiterstadt, RFA) y se marcó con digoxigenina (Boehringer Mannhein, Mannhein, RDA) (Fig. 1B). En el propéptido, los residuos de aminobutirilo (Abu_{S} - mitad de metillantionina) derivan de treoninas, mientras que los residuos de alanina (Ala_{S} - mitad de metilantionina) se codifican como cisteína. Probablemente, la S-aminovinil-2-metilcisteína, que forma la estructura en anillo terminal, se forma de una metillantionina que ha sido descarboxilada por oxidación como se mostró para la epidermina que contiene una S-aminovinilcisteína de C terminal (T. Kupke et al. (1992), J. Bacteriol. 174: 5354-5361).
Como los plásmidos no podrían detectase en la cepa productora, se preparó ADN cromosómico como se ha descrito por Marmur (J. Marmur (1961), J. Mol. Biol. 3: 208-218) excepto en que solo se realizó una extracción con cloroformo y una precipitación y que se disolvió posteriormente el ADN en tampón de equilibrado y se purificó en una columna Oiagen-tip® 100 (Diagen, Hilden, RFA). A 51ºC, una única banda de 2kb de una digestión de restricción cromosómica con Hind III se hibridó con la sonda en un ensayo de trasferencia Southern (E. M. Southern (1975), J. Mol. Biol. 98: 503-517). Se separaron del gel los fragmentos que estaban en el intervalo de 1,9 a 2,3 kb de tamaño, se eluyeron con un BIOTRAP® (Schleicher y Schüll, Dassel, RFA) y se subclonaron en pUC18 (C. Yanisch-Perron et al. (1985), Gene 33: 103-109) en E. Coli. Se prepararon los plásmidos de varias colonias recombinantes por el método de Birnboin y Doly (H. C. Birnboin y J. Doly (1979), Nucl. Acids Res. 7: 1513-1523), se digirieron con Hind III y se sondearon con el guessmer. Uno de los clones que dio una señal positiva se analizó posteriormente por digestiones de restricción con diferentes enzimas y subsiguientes ensayos de transferencia Southern. Finalmente, se subclonó un fragmento de 1,3 kb EcoR I-Hind III en pEMBL 18 y pEMBL 19 (L. Dente et al. (1983), Nucleic Acids. Res. 11:1645-1655) en E. Coli. Más aún, se clonó un fragmento de 0,6 kb EcoR V en el vector pCU1 (J. Augustin et al. (1992), Eur. J. Biochem. 204: 1149-1154) después de mutagénesis dirigida al sitio del sitio de EcoR I en un sitio de EcoR V utilizando el kit de mutagénesis dirigida al sitio transformador (Clontech, Palo Alto, EE.UU.).
2. Secuencias de nucleótidos del gen estructural de mersacidina, mrsA
Se secuenció el fragmento de 0,6 kb en un secuenciador automático de ADN A.L.F. (Pharmacia, Brussels, Belgium) utilizando el método de terminación de cadena didesoxi (F. Sanger et al. (1977), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74: 5463-5467) a partir de ADN de cadena doble; para cebar el cebador universal y de inversión del kit secuenciador AutoRed® (Pharmacia, Brussels, Belgium) y se emplearon dos oligonucleótidos sintéticos 5'-(TCTCTTCCATTTTTTTG)3' y 5'-(AAATCAAATTAACAAATAC)3'. En la Fig. 2 se muestra la secuencia de nucleótidos del gen estructural de mersacidina, mrsA. Se encontró un sitio de enlace de ribosoma potencial ocho pares de bases más arriba del codón de inicio ATG del marco de lectura abierto. La parte de C terminal de la secuencia está de acuerdo con la estructura primaria de mersacidina publicada (S. Chatterjee et al. (1992), J. Antibiotics 45:832-838) y su secuencia de propéptido propuesta. La parte de N terminal consiste en una secuencia de iniciadores de 48 aminoácidos (la flecha en la Fig. 2). La promersacidina consiste en 20 aminoácidos. Por consiguiente, la longitud completa del prepéptido es 68 aminoácidos con una masa molecular calculada de 7228 Da. Ocho bases más abajo del codón finalizador TAA (ocre) se encontró una estructura en forma de U con un valor de energía libre de -86,7 kJ mol^{-1} y un tamaño de tronco de 14 pares de bases, que podría servir como un finalizador independiente de rho durante la transcripción cuando es seguido por una secuencia TTTAATT (Fig. 2).
3. Caracterización del prepéptido mersacidina
Los lantibióticos se han subdividido en dos grupos (G. Jung (1991), supra). Los lantibióticos del tipo A son péptidos anfifílicos alargados que forman poros transitorios en las membranas de bacterias sensibles (H. -G. Sahl (1991), Pore formation in bacterial membranes by cationic lantibiotics, p. 347-358. En G. Jung y H.-G. Sahl (ed.), Nisin and novel lantibiotics, Escom, Leiden). Los lantibióticos de tipo B son péptidos globulares producidos por Streptomyces, que tienen masas moleculares menores de 2100 Da y son altamente homólogos a su secuencia de aminoácidos y a su estructura en anillo que incluye una condensación cabeza a cola (G. Jung (1991), supra). Hasta ahora la mersacidina no podía ser clasificada en ningún grupo (G. Bierbaum y H.-G. Sahl (1993), Zbl. Bakt. 278: 1-22). En este aspecto, es de especial interés la comparación de la secuencia de prepéptido de mersacidina con los lantibióticos de tipo A y B.
Se han conservado en la mersacidina dos características especiales de las secuencias de iniciadores de lantibiótico: i) No hay cisteína en la secuencia de iniciadores (G. Jung (1991), supra), ii) Se predice una propensión \alpha-espiral para la parte de C terminal de la secuencia de iniciadores. También se han predicho y demostrado tales elementos estructurales para los péptidos iniciadores de lantibióticos de tipo A por medidas de dicroismo circular en mezclas de trifluoroetanol/agua (A. G. Beck-Sickinger y G. Jung. Synthesis and conformational analysis of lantibiotic leader-, pro- and prepeptides, p. 218-230. En G. Jung y H.-G. Sahl (ed.), Nisin and novel lantibiotics, Escom, Leiden 1991). En cualquier otro aspecto la secuencia de iniciadores de mersacidina difiere de las secuencias de iniciadores de lantibiótico de tipo A descritas hasta la fecha: Como se muestra en la Fig. 3 se parece más bien en longitud y distribución de carga (48 aminoácidos / 12 cargas) al inusualmente largo iniciador de 59 aminoácidos (11 cargas) del lantibiótico de tipo B cinamicina (C. Kaletta et al. (1989), Pep5 a new lantibiotic: structural gene isolation and prepeptide sequence. Arch. Microbiol. 152: 16-19). En contraste, una típica secuencia de iniciadores de lantibiótico de tipo A altamente cargada, por ejemplo, el péptido iniciador Pep5, contiene 10 residuos cargados en un total de solo 26 aminoácidos (C. Kaletta et al. (1989), supra). No se encuentran secuencias conservadas de lantibióticos de tipo A (por ejemplo, el motivo F D/N L D/E) en el péptido iniciador de mersacidina. El sitio de escisión de proteasa de la secuencia de iniciadores de mersacidina (^{-4}M - ^{-3}E - ^{-2}A - ^{-1}A - ^{+1}C) difiere del sitio conservado de los lantibióticos de tipo A (Fig. 3). Aquí encontramos o sitio de escisión de tipo nisina (-1, aminoácido cargado positivamente; -2, prolina; -3, polar o cargado negativamente y -4, hidrófobo) o la glicina hidrófoba que contiene sitios de escisión de lacticina 481 (J.-C. Piard et al. (1993), J. Biol. Chem., 268, 16361-16368) o estreptococina A-FF22 (W. L. Hynes et al. (1993), Appl. Env. Microbiol. 59: 1969-1971). El sitio de escisión (^{-3}A - ^{-2}F - ^{-1}A) de cinamicina (C. Kaletta et al. (1989), supra) está de acuerdo con la regla (^{-3}A - ^{-2}X - ^{-1}A) para proteínas secretadas vía la ruta Sec. En conclusión, el prepéptido de mersacidina no muestra homologías con las secuencias conservadas de secuencias de iniciadores de lantibiótico de tipo A. Hay similitud con el prepéptido de cinamicina en longitud y distribución de carga, pero no hay homología evidente de secuencia al nivel de aminoácidos. La mersacidina es más pequeña que los lantibióticos de tipo A, no está cargada positivamente y no despolariza membranas, pero sin embargo inhibe la biosíntesis de peptidoglicanos. Esto, además de las propiedades del péptido iniciador, indica que la mersacidina está más relacionada con lantibióticos de tipo B que con los de tipo A. Recientemente, se ha dilucidado la secuencia y la estructura de puentes de otro lantibiótico, actagardina, que también inhibe la biosíntesis de la pared celular (S. Somma et al., Antimicrob. Agents Chenother. 11: 396-401, 1977). La comparación con mersacidina muestra que se conserva casi completamente un anillo en ambos lantibióticos. En vista de la fuerte homología de los lantibióticos de tipo B caracterizados hasta hora duramicina A, B, C, ancovenina y cinamicina, estos péptidos podían también ser catalogados como variantes estructurales como se observa para epidermina y galidermina o nisina A y nisina Z. Por consiguiente, proponemos que la mersacidina y la actagardina deberían ser clasificadas con los lantibióticos de tipo B y que la designación lantibiótico de tipo B no debería ser reservada exclusivamente para variantes estructurales de duramicina sino que comprenda lantibióticos pequeños, globulares que llevan una carga baja e inhiben la actividad enzimática.
(1) INFORMACIÓN GENERAL:
\vskip0.666000\baselineskip
(i)
SOLICITANTE:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
(A)
NOMBRE: Hoechst Aktiengesellschaft
\vskip0.333000\baselineskip
(B)
CALLE: -
\vskip0.333000\baselineskip
(C)
CIUDAD: Frankfurt am Main
\vskip0.333000\baselineskip
(D)
ESTADO: -
\vskip0.333000\baselineskip
(E)
PAIS: Alemania
\vskip0.333000\baselineskip
(F)
CÓDIGO POSTAL (ZIP): 65926
\vskip0.333000\baselineskip
(G)
TELÉFONO: 069-305-6031
\vskip0.333000\baselineskip
(H)
TELEFAX: 069-35 7175
\vskip0.333000\baselineskip
(I)
TELEX: 41234700 hod
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(ii)
TÍTULO DE LA INVENCIÓN: Mersacidina recombinante y un método de producción
\vskip0.666000\baselineskip
(iii)
NÚMERO DE SECUENCIAS: 4
\vskip0.666000\baselineskip
(iv)
FORMATO INTERPRETABLE POR EL ORDENADOR:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
(A)
TIPO DE SOPORTE: Disco flexible
\vskip0.333000\baselineskip
(B)
ORDENADOR: IBM PC compatible
\vskip0.333000\baselineskip
(C)
SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.333000\baselineskip
(D)
PROGRAMA: PatentIn Release n° 1, versión n° 1.25 (EPO)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 1:
\vskip0.666000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICASDE LA SECUENCIA
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
(A)
LONGITUD: pares de base 17
\vskip0.333000\baselineskip
(B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
(C)
ENCADENAMIENTO: Simple
\vskip0.333000\baselineskip
(D)
TOPOLOGIA: Lineal
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
\vskip0.666000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICO: SI
\vskip0.666000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: SI
\vskip0.666000\baselineskip
(vi)
\vskip0.666000\baselineskip
(ix)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 1:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
\dddseqskip
TCTCTTCCAT TTTTTTG 
\hfill
17 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 2:
\vskip0.666000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
(A)
LONGITUD: pares de base 19
\vskip0.333000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
(C)
ENCADENAMIENTO: Simple
\vskip0.333000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
\vskip0.666000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICO: SI
\vskip0.666000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: SI
\vskip0.666000\baselineskip
(vi)
\vskip0.666000\baselineskip
(ix)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 2:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
\dddseqskip
AAATCAAATT AACAAATAC 
\hfill
19 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 3
\vskip0.666000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
(A)
LONGITUD: PARES DE BASE 288
\vskip0.333000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
(C)
ENCADENAMIENTO: simple
\vskip0.333000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
\vskip0.666000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICO NO
\vskip0.666000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO : SI
\vskip0.666000\baselineskip
(vi)
FUENTE ORIGINAL:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
(A)
NOMBRE CIENTÍFICO: Mersacidina
\vskip0.333000\baselineskip
(B)
CEPA: Bacillus 
\vskip0.333000\baselineskip
(C)
AISLADO INDIVIDUAL: HIL Y-85,54728
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: RBS
\vskip0.333000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 1..21
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 22..225
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE:: Finalizador
\vskip0.333000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 208..288
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN `DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 3:
\vskip1.000000\baselineskip
1 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 4:
\vskip0.666000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 62 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: Proteína
\vskip0.666000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 4:
\vskip1.000000\baselineskip
2

Claims (8)

1. Premersacidina que tiene la secuencia de aminoácidos como se muestra en SEQ ID NO: 4, desde el aminoácido nº 1 hasta el 68.
2. ADN que codifica premersacidina de acuerdo con la reivindicación 1.
3. ADN que codifica premersacidina con la secuencia de ácidos nucleicos como se muestra en SEQ ID NO: 3 desde el ácido nucleico nº 22 hasta el 225.
4. ADN que codifica premersacidina que tiene la secuencia de ácidos nucleicos como se muestra en SEQ ID NO: 3 desde el ácido nucleico nº 166 hasta el 225.
5. Vector que contiene un ADN de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2, 3 ó 4.
6. Célula anfitrión que contiene un vector de acuerdo con la reivindicación 5.
7. Proceso para producir premersacidina, promersacidina o Mersacidina madura que contiene las etapas:
a)
cultivar una célula anfitrión adecuada que contiene una secuencia de ADN de acuerdo con las reivindicaciones 2-4 en condiciones adecuadas; y
b)
aislar la premersacidina, promersacidina o Mersacidina madura.
8. Uso de premersacidina de acuerdo con la SEQ ID NO: 4 desde el aminoácido nº 1 hasta el 68 para la producción de Mersacidina madura.
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