ES2207740T3 - Analogo de la hormona paratiroide para el tratamiento de la osteoporosis. - Google Patents
Analogo de la hormona paratiroide para el tratamiento de la osteoporosis.Info
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Abstract
LA INVENCION PRESENTA ANALOGOS DE LA HORMONA PARATIROIDEA HUMANA, QUE PRESENTAN ACTIVIDADES INCREMENTADAS EN CUANTO A RECONSTITUCION OSEA, Y BIODISPONIBILIDADES INCREMENTADAS. LOS PEPTIDOS DESCRITOS SON DERIVADOS DE HPTH - (1-31), QUE SE CICLIZAN, POR EJEMPLO, MEDIANTE FORMACION DE LACTAMAS ENTRE, BIEN GLU 22 Y LYS 26 , O ENTRE LYS 26 Y ASP 30 . AD EMAS, LA LYS 27 NATURAL SE PUEDE SUSTITUIR, BIEN POR UNA LEU O POR OTROS RESIDUOS HIDROFOBOS, COMO ILE, NORLEUCINA, MET, VAL, ALA, TRP O PHE. TIPICAMENTE DICHOS ANALOGOS PRESENTAN CAPACIDADES MEJORADAS PARA ESTIMULAR LA ADENILIL CICLASA EN CELULAS DE OSTEOSARCOMA DE RATA, Y MUESTRAN ACTIVIDADES INCREMENTADAS EN CUANTO A RECONSTITUCION OSEA, UTILIZANDO EL MODELO DE LA RATA OVARIECTOMIZADA. DICHOS ANALOGOS MUESTRAN ASIMISMO ACTIVIDADES Y BIODISPONIBILIDADES INCREMENTADAS, COMO SE DEMOSTRO POR SUS EFECTOS HIPOTENSORES EN RATA. SE DESCRIBE TAMBIEN UN ENSAYO QUE CORRELACIONA LA ACTIVIDAD HIPOTENSORA CON LA ACTIVIDAD OSTEOGENICA.
Description
Análogos de la hormona paratiroide para el
tratamiento de la osteoporosis.
La presente invención se refiere a los análogos
de la hormona paratiroide humana, que se ha descubierto son
efectivos para el tratamiento de la osteoporosis.
La osteoporosis es la principal causa de
invalidez en los ancianos, particularmente en las mujeres ancianas.
Se ha descubierto recientemente que la hormona paratiroide humana
(hPTH) y ciertos análogos son estimulantes del crecimiento óseo
útiles para el tratamiento de la osteoporosis. La osteoporosis es
una enfermedad progresiva que resulta en la reducción de la masa
total de hueso y en un incremento en la fragilidad de los huesos.
Ello resulta generalmente en fracturas espontáneas de los huesos que
soportan carga y el deterioro físico y mental característico de las
heridas inmovilizantes. La osteoporosis postmenopausica está
causada por la desaparición de los estrógenos que dispara la
acelerada movilización del hueso de una década de duración con un
incremento del desequilibrio entre la reabsorción del antiguo hueso
y la formación de nuevo hueso. Ello tiene como consecuencia un
adelgazamiento, un incremento en la porosidad y una desaparición de
la trabécula de los huesos que soportan carga. La osteoporosis
también está asociada con el hipertiroidismo, el
hiperparatiroidismo, el síndrome de Cushing y la utilización de
ciertos fármacos esteroideos. Los remedios históricamente han
implicado el incremento del calcio dietético, la terapia con
estrógenos y el incremento en la dosis de vitamina D, pero
principalmente con agentes tales como los antireabsorbentes que
inhiben la reabsorción por los osteoclastos.
La hormona paratiroide (PTH) se produce en la
glándula paratiroide y es el principal regulador del nivel de
calcio en la sangre. La PTH es un polipéptido y se pueden preparar
el polipéptidos sintéticos por el procedimiento dado a conocer por
Erickson y Merrifield, The Proteins, Neurath et al., Eds., Academic
Press, New York, 1976, página 257, y según la modificación por el
método de Hodges et al., (1988), Peptide Research 1,19 o por
Atherton, E. And Sheppard, R.C. Solid Phase Peptide Synthesis, IRL
Press, Oxford, 1989.
Cuando se reduce el nivel sérico de calcio por
debajo de un nivel normal, la glándula paratiroide libera PTH y
aumenta el nivel de calcio por la reabsorción del calcio de los
huesos, por un incremento de la absorción intestinal de calcio y por
el incremento de la reabsorción renal de calcio de la orina naciente
en los túbulos del riñón. Aunque la infusión de PTH a niveles bajos
puede eliminar el calcio de los huesos, la misma dosis baja, cuando
se inyectan intermitentemente puede de hecho promocionar el
crecimiento óseo.
Tregear, patente US nº 4.086.196, describió
análogos de la PTH humana y reivindicó que los primeros 27 a 34
aminoácidos son los más efectivos en términos de la estimulación de
la adenilil ciclasa en un ensayo celular in vitro.
Rosenblatt, patente US nº 4.771.124, dio a conocer la propiedad del
análogo de hPTH en el que Trp^{23} está sustituido por el
aminoácido fenilalanina, leucina, norleucina, valina, tirosina,
\beta-naftilalanina o
\alpha-naftilalanina como antagonistas de PTH.
Tales análogos de hPTH modificado también tienen los 2 y 6 ácidos
aminoterminales eliminados, resultando en la pérdida de la mayoría
de las actividades agonistas cuando se utilizan para tratar la
osteoporosis. Dichos análogos fueron diseñados como inhibidores de
PTH y péptidos relacionados con PTH. Los análogos fueron
reivindicados como posiblemente útiles para el tratamiento de la
hipercalcemia asociada con ciertos tumores.
Pang et al, WO 93/06845, publicada en Abril 15,
1993, dio a conocer análogos de hPTH que implican sustituciones de
Arg^{25}, Lys^{26}, Lys^{27} con numerosos amino ácidos,
incluyendo alanina, asparragina, ácido aspártico, cisteína,
glutamina, ácido glutámico, glicina, histidina, isoleucina, leucina,
metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptofano,
tirosina o valina. Estos se reivindican, sin datos de ensayos en
animales o humanos que lo apoyen, que son efectivos para el
tratamiento de la osteoporosis con efectos mínimos sobre la presión
sanguínea y el músculo liso.
PTH opera a través de la activación de un sistema
de dos segundos mensajeros, la adenilil ciclasa (AC) activada por
la proteína G_{s} y la fosfolipasa C_{\beta} activada por la
proteína G_{q}. La última produce una estimulación de la actividad
proteína quinasa Cs (PKC) unida a membrana. La actividad PKC se ha
demostrado que requiere los residuos 29 a 32 de PTH (Joushomme et
al., J. Bone Mineral Res. 9:1179-1189 (1994).
Se ha establecido que el incremento en el crecimiento del hueso, es
decir, aquel efecto útil para el tratamiento de la osteoporosis,
está acoplado a la capacidad de la secuencia de péptidos para
aumentar la actividad AC. Se conoce que la secuencia de PTH nativa
tiene todas estas actividades. La secuencia
hPTH-(1-34) se muestra típicamente como (A):
Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly
Lys His Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln
Asp Val His Asn Phe-OH
El siguiente análogo lineal,
hPTH-(1-31)-NH_{2}, para la cual
se incluyen datos en la Tabla 1, más adelante, solamente tiene
actividad estimulante de AC y se ha demostrado que es totalmente
activa para restablecer la pérdida de hueso en el modelo de rata
ovarietomizada (Rixon, R.H. et al., J. Bone Miner. Res.
9:1179-1189 (1994); Whitfield et al.,
Calcified Tissue Int. 58:81-87 (1998);
Willick et al., patente US nº 5.556.940 concedida el 17 de
Septiembre 1996):
Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly
Lys His Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln
Asp Val-NH_{2}
La molécula anterior, B, puede tener un carboxilo
terminal libre en lugar de la amina terminal ilustrada.
Es un objetivo de la presente invención producir
nuevos análogos de PTH con mayor actividad AC y mínimos efectos
secundarios.
Un aspecto de la presente invención es un análogo
de la hormona paratiroide humana hPTH-(1-31) en el
que el aminoácido 27 es Lys o ha sido sustituido por un residuo
hidrofóbico, y que ha sido ciclado entre Glu^{22} y Lys^{26}
para formar una lactama. El residuo hidrofóbico puede ser Leu, Ile,
Nle, Met o ácido \alpha-aminobutírico y el análogo
puede comprender grupos C-terminales amida o
C-terminales carboxilo.
Los análogos de la invención son útiles para la
terapia, particularmente para el tratamiento de la osteoporosis. La
invención también se refiere a composiciones comprendiendo el
análogo y la utilización del análogo para la producción de
medicamentos para la utilización en el tratamiento de la
osteoporosis.
Los Ejemplos de las sales incluyen sales de
ácidos inorgánicos, sales de ácidos orgánicos tales como el ácido
fórmico, ácido acético, ácido tartárico y ácido cítrico, sales de
bases inorgánicas tales como el sodio y amonio y sales de bases
orgánicas tales como la trietilamina, etilamina y metilamina.
Según la presente invención, la ciclación se
efectúa mediante la formación de una lactama, implicando el enlace
de las cadenas laterales de los residuos naturales 22 y 26.
Se ha descubierto también que las sustituciones
de múltiples aminoácidos son efectivas. Se puede reemplazar la
Lys^{27} por Leu o por otros múltiples residuos hidrofóbicos o
polares naturales. Otro factor es lo bien que el residuo encaja en
el receptor. La Ala no es tan hidrofóbica como la Leu. Generalmente
se considera que la Lys y la Tyr son polares, pero sin embargo
tienen interacciones hidrofóbicas con el receptor. La Lys, por
ejemplo, se puede doblar de forma que la parte hidrofobica
interaccione con otros residuos hidrofóbicos en el receptor, y el
NH_{2} se exponga al disolvente. Dichas sustituciones incluyen la
ornitina, citrulina, ácido \alpha-aminobutírico,
alanina, norleucina, isoleucina y tirosina, o cualquier ácido
\alpha-amino alifático lineal o ramificado, con 2
a 10 átomos de carbono en la cadena lateral, cualquiera de tales
análogos con un grupo polar o cargado en el extremo de la cadena
alifática. Los ejemplos de grupos polares o cargados incluyen;
amino, carboxilo, acetamido, guanidino o ureido. Aunque parece que
la Leu^{27} es la mejor sustitución, también parece que muchas
otras sustituciones en la posición^{27} retienen la casi completa
actividad y también podrían tener propiedades deseables, tales como
el incremento de la estabilidad proteolítica o la solubilidad en
agua, la Ile, norleucina, Met y ornitina se espera que sean los más
activos.
Tales sustituciones producen una estabilización
en la hélice \alpha de la región de unión al receptor de la
hormona. Ello ha sido confirmado por el examen del espectro de
dicroismo circular de los análogos de lactama, en comparación con el
espectro de dicroismo circular de la molécula lineal,
[Leu^{27}]-hPTH-(1-31)-NH_{2}.
Los espectros de dicroismo circular son muy sensibles a la
presencia de estructuras secundarias en hélice \alpha y el
procedimiento se ha utilizado para demostrar la presencia de
hélices \alpha en fragmentos de hPTH (Neugebauer et al.,
Biochemistry 31:2056-2063 (1991). Además, la
estabilización de la hélice \alpha con la formación de las
lactamas anteriormente mencionadas en
hPTH-(20-34)-NH_{2} ha sido
demostrada (Neugenbauer et al., Int. J. Protein Peptide Res.
43:555-562 (1994). Existe una hélice \alpha
potencialmente anfifílica entre los residuos 21 y 31 de
hPTH-(1-31)-NH_{2}, y se han
presentado datos mostrando que la cara hidrofóbica de dicha hélice
interactúa con el receptor PTH (Neugebauer, W., et al.,
Biochemistry 34:8835-8842 (1995); Gardella,
T.J. et al., Endocrinology 132:2024-2030
(1993).
Se ha encontrado que la ciclación más efectiva
implica la formación de una lactama entre lo residuos Glu^{22} y
Lys^{26}.
Más específicamente, los estudios de unión a
receptor de los fragmentos de PTH han indicado una región principal
de unión entre los residuos 14-34.^{1} Nosotros
hemos sugerido que la hélice \alpha de los residuos 17 a 29 se une
como tal al receptor de PTH y que la parte anfifílica de dicha
hélice \alpha se une por su cara hidrofóbica al receptor. ^{2}
Dicho modelo es consistente con los resultados de un estudio de
análogos a la región de unión al receptor. ^{3}
Los estudios de NMR han demostrado que incluso un
péptido modelo que por CD se ha descubierto que es muy helicoidal
también puebla muchas conformaciones no helicoidales. Por
consiguiente, la estructura de un hormona peptídica unida al
receptor, tal como PTH, no se puede deducir con seguridad a partir
de su estructura libre en disolución. Se han utilizado análogos
restringidos de hormonas peptídicas para limitar el número de
estados conformacionales asequibles al péptido ^{8}. El examen de
la secuencia de hPTH revela 3 puentes salinos posibles entre los
residuos 17 a 29 lo que podría estabilizar o desestabilizar la
hélice \alpha. Esto se encuentran entre la Glu^{22} y
Lys^{26}, y Lys^{26} y Asp^{30}, tanto la una como la otra
se espera que estabilicen una hélice \alpha, y entre Lys^{27}
and Asp^{30}, lo que se espera desestabilice una hélice \alpha.
^{4} La formación de lactama entre tales pares de residuos
restringiría las conformaciones disponibles para hPTH en la región
helicoidal. Además, dos de dichas lactamas,
Glu^{22}-Lys^{26} y
Lys^{26}-Asp^{30} que se espera estabilicen la
estructura de hélice \alpha se encuentran en la cara polar de la
parte anfifílica de la hélice \alpha. La tercera,
Lys^{27}-Asp^{30}, se espera que por lo menos
desestabilice parcialmente la hélice \alpha e implica un residuo,
Lys^{27}, que se encuentra en la cara hidrofóbica de la hélice
anfifática. Ciclación entre las posiciones 25 y 29 también puede
tener lugar si Lys u Orn reemplazan a Arg en la posición 25, y si
Gnl^{29} es reemplazada por Glu o Asp.
La sustitución de Leu por Lys^{27} produce un
residuo más hidrofóbico en la cara hidrofóbica de la hélice
anfifílica. Ello produce un incremento en la actividad estimulante
de la adenilil ciclasa en la línea celular ROS. Los expertos en la
técnica apreciarán que otras de tales sustituciones discutidas
anteriormente probablemente producirían análogos con la misma o
mayor actividad.
El efecto combinado de la sustitución y la
formación de cualquiera de las lactamas se espera que estabilice la
hélice \alpha e incremente la bioactividad y proteja dicha región
de la molécula de la degradación proteolítica. Se prefiere la
presencia de la amida en el extremo C en el sentido en que se espera
que además proteja al péptido contra la degradación exoproteolítica,
aunque algunas peptidasas pueden hidrolizarlos, (Leslie, F.M. and
Goldstein, A. Neuropeptides 2:185-196
(1982)).
También se ha descubierto que otras sustituciones
de aminoácidos se pueden realizar con utilidad. Específicamente,
hemos reemplazado los residuos de Met sensibles a la oxidación en
las posiciones 8, 18 con el residuo hidrofóbico natural Nle, como en
la publicación de la patente japonesa 61-24598.
También se debe esperar que otros residuos hidrofóbicos tales como
Leu, Ile, Val, Phe y Trp también podrían ser útiles, como en la
patente USP 5.393.869 a Nakagawa et al..
En la patente estadounidense 5.393.869 Nakagawa
et al y en USP 5.434.246, Fukuda et al., se dieron a conocer algunos
análogos de hPTH que tienen una sustancial actividad AC y podrían
tener una estabilidad incrementada al ataque proteolítico,
específicamente,
- 1.
- Ser-1 a Aib (ácido \alpha-aminoisobutírico)
- 2.
- Lys-27 a Gln (que se reporta tiene 2,5 x actividad AC)
- 3.
- Residuos 14, 15, 16, 17, a Lys, en todo o en parte (se da a conocer que tiene una actividad muy incrementada de hasta 8 x. Ello puede deberse al incremento en la solubilidad en agua. In vivo, se espera que estos sean más lábiles a los enzimas similares a la tripsina). Reivindican que tal tetrapéptido (residuos 14 a 17, inc.) que tiene por lo menos un aminoácido soluble en agua. Por ejemplo His-14 o Lys-14; Leu-15, Lys-15 o Arg-15; Asn-16, Orn-16, Hci (homocitrulina)-16, Asp-16, Arg-16, Lys-16, DLys-16, Ser-16 o Gly-16; y Ser-17, Lys-17, Asp-17 o Arg-17. Podría incluir Glu, por ejemplo.
- 4.
- Arg 25 a His para minimizar el ataque de las proteasas. Ya que nuestras lactamas, particularmente con Leu u otro aminoácido hidrofóbico en la posición 27, se pueden hacer algo insolubles y difíciles de disolver, se esperaría que las mismas sustituciones serían útiles en nuestras lactamas.
- 5.
- Las lactamas según la invención se pueden preparar por procedimientos conocidos descritos más adelante y pueden utilizarse para estimular el crecimiento óseo, para reparar el hueso y para promocionar la cicatrización en diversas circunstancias, tales como en el tratamiento de la osteoporosis y fracturas normales.
La Figura 1 muestra la estructura de la PTH
natural, residuos 1-31 (SEC ID NO:1);
La Figura 2 muestra la estructura de
[Leu^{27}]ciclo(Glu^{22}-Lys^{26})-hPTH-(1-31)-NH_{2}
(SEC ID NO: 3);
La Figura 3 muestra secciones histológicas
representativas de hueso preparadas al final de 8 semanas después de
OVX, ilustrando las diferentes capacidades de
http-(1-31)NH_{2} y su derivados lactama
para evitar la pérdida de hueso y para estimula el crecimiento de
hueso en ratas Sprague-Dawley ovariectomizadas
(OVX);
La Figura 4 muestra el volumen trabecular del
hueso de los animales control y tratados con el análogo de hPTH para
las ratas inicialmente con severas mermas de hueso. El tratamiento
de los animales comenzó 9 semanas después de la OVX.
[Leu^{27}]ciclo[Glu^{22}-Lys^{26}]hPTH-(1-31)-NH_{2}
fue el fragmento más efectivo de los fragmentos, restableciendo los
huesos a los valores en las ratas control normales; y
La Figura 5 muestra el grosor trabecular de los
fémures de rata para los animales normales, ovariectomizados (OVX),
simulados y tratados con
hPTH-(1-31)-NH_{2},
[Leu^{27}]ciclo(Glu^{22}-Lys^{26})-hPTH-(1-31)-NH_{2}).
La Figura 6 muestra la máxima caída en presión
sanguínea y el tiempo para la máxima caída en presión sanguínea con
la adición de una dosis de 0,8 nmol/100g de
hPTH-(1-31)-NH_{2},
[Leu^{27}]ciclo(Glu^{22}-Lys^{26})hPTH-(1-31)-NH_{2}.
Los péptidos se administraron subcutáneamente (barras abiertas) o
intravenosamente (barras rayadas).
La Figura 7 muestra la estructura
[Leu^{27}]-hPTH-(1-31)-NH_{2}
(SEC ID NO:5).
\newpage
La Figura 8 es una gráfica ilustrando el efecto
sobre el crecimiento del hueso de múltiples dosis de
hPTH(1-31)-NH_{2}.
La Figura 9 muestra la estructura de
[Leu^{27}]ciclo(Glu^{22}-Lys^{26})-hPTH-(1-31)-OH.
La Figura 10 muestra la estructura de
[Ala^{27}]ciclo(Glu^{22}-Lys^{26})-hPTH-(1-31)-NH_{2}
(SEC ID NO:11).
La Figura 11 muestra la estructura de
[Nle^{27}]ciclo(Glu^{22}-Lys^{25})-hPTH-(1-31)-NH_{2}
(SEC ID NO:12).
La Figura 12 muestra la estructura de
[Nle^{8,18};Leu^{27}]ciclo(Glu^{22}-Lys^{26})-hPTH-(1-31)-NH_{2}
(SEC ID NO:13).
La Figura 13 muestra la estructura de ciclo
(Glu^{22}-Lys^{26})-hPTH-(1-31)-NH_{2}
(SEC ID NO:14).
La Figura 14 muestra la estructura de
[Ile^{27}]ciclo(Glu^{22}-Lys^{26})-hPTH-(1-31)-NH_{2}
(SEC ID NO:15).
La Figura 15 muestra la estructura de
[Tyr^{27}]ciclo(Glu^{22}-Lys^{26})-hPTH-(1-31)-NH_{2}
(SEC ID NO:16).
La Figura 16 muestra la estructura de
\alpha-acetil-[Leu^{27}]ciclo(Glu^{22}-Lys^{26})-hPTH-(1-31)-NH_{2}
(SEC ID NO:17).
La Figura 17 muestra la estructura de
[Leu^{27}]ciclo(Lys^{22}-Glu^{26})-hPTH-(1-31)-NH_{2}
(SEC ID NO:18).
El procedimiento de síntesis de péptidos en fase
sólida desarrollado por R.B. Merrifield
("Solid-Phase Peptide Synthesis", Advances
in Enzymology 32:221-296, (1969), incorporado en
la presente solicitud como referencia, es ampliamente utilizado con
éxito para la síntesis de polipéptidos tales como la hormona
paratiroide. La estrategia tiene como base el tener el aminoácido
del extremo carboxílico del péptido unido a un soporte sólido. Los
aminoácidos sucesivos se añaden entonces con gran rendimiento. El
grupo amino \alpha N-terminal se protege de tal
forma que este grupo protector se puede eliminar sin eliminar el
péptido del soporte sólido. La química utilizada aquí implica una
modificación del procedimiento original de Merrifield, referido como
la aproximación Fmoc. El grupo Fmoc (fluoroenilmetoxicarbonil) se
puede eliminar en condiciones alcalinas suaves, lo que deja sin
afectar el grupo protector de cadena lateral estable al alcali y la
unión al soporte. Dicho procedimiento esta descrito por E. Atherton
and R.C. Sheppard, "Solid Phase Peptide Synthesis: a Practical
Approach", IRL Press, New York, N.Y., Incorporado a la presente
solicitud como referencia.
Los grupos \alpha amino de los aminoácidos se
protegieron con
9-fluorenil-metoxicarbonilo (Fmoc)
durante el acoplamiento. Los acoplamientos se realizaron con una
mezcla de hidroxibenzotriazol (HOBt), tetrafluoroborato de
2-(1H-benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetrametiluronium
(TBTU) y diisopropiletilamina (DIPEA). Se utilizó un exceso de
aminoácidos activados de 4 veces con acoplamiento doble con la
adición de residuos de Asn, Gln, His, Val e Ile. Los tiempos de
acoplamiento para la adición de Arg y Gly se incrementaron de 30 a
60 minutos. El acoplamiento del primer residuo (Val 31) al soporte
(Tentagal* R, Rapp Polymere, Tubingen, Germany) se realizó
manualmente. Todas las demás etapas se realizaron en un
sintetizador de péptidos automático PerSeptive Biosystems* Model
9050 Plus. Las protecciones de las cadenas laterales fueron las
siguientes: Arg
(2,2,5,7,8-pentametilcroman-6-sulfonilo);
Glu, Asp y Ser (t-butilo); His, Gln y Asn (tritil);
Trp (t-butiloxicarbonilo).
Una vez eliminado el Fmoc de la Ser
N-terminal, se lavó la resina de péptido con DCM, a
continuación se escindió de la resina mediante agitación con 7,5 ml
de reactivo K (6,19 ml TFA, 0,38 ml cada uno de, agua,
90% fenol/agua y tioanisol y 0,19 ml de
1,2-etanditiol) durante 4 horas a 20ºC. La mezcla
de péptidos escindidos se extrajo por filtración y se precipitó por
adición a t-butil-metileter. El
precipitado se recogió por centrifugación, se lavó 2x con
t-buti-metileter, a continuación se
secó por centrifugación al vacío.
El producto crudo se disolvió en 14 ml de 15%
acetonitrilo/agua, 0,1% TFA y se cromatografió en una columna Vyda*
C_{18} (10 \mu, 1 x 25 cm). El producto se eluyó con un
gradiente de acetonitrilo del 1%/min (14-40%) en
0,1% TFA en agua. La pureza del producto final se evaluó por HPLC
analítica en una columna C_{18} Vydac (10 \mu, 0,4 x 25 cm) y
por ensayo de masa molecular en un espectrómetro de masas
electrospray (VG Quattro). Los datos para el
hPTH-(1-31)-NH_{2} así formado, se
dan a conocer en la Tabla 1 más adelante.
[Leu^{27}]ciclo(Glu^{22}-Lys^{26})-hPTH-(1-31)-NH_{2}.
Tal péptido se sintetizó tal como se describió para el Ejemplo 1,
con Lys-Alloc y Glu-OAll sustituido
en las posiciones 26 y 22, respectivamente. Una vez añadido
Fmoc-Ser^{17}, la resina de péptido se extrajo de
la columna a un vial de reacción (Minivial*, Applied Science), se
suspendió en 1,7 ml de una disolución de
tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) (0,24
mmol), 5% ácido acético y 2,5% N-metilmorfolina
(NMM) en diclorometano (DCM) bajo argón, a continuación se agitó a
20ºC durante 6 horas para eliminar los grupos protectores alilo y
alloc (Solé, N.A. et al., (1993) en Peptides: Chemistry, Structure
and Biology, Smith, J. And Hodges, R. (Eds). ESCOM pp.
93-94). Incorporado en la presente solicitud como
referencia. A continuación se lavó la resina de péptido con 0,5%
dietilditiocarbamato (DEDT), 0,5% NMM en DMF (50 ml) seguido de DMF
(50 ml) en DCM (50 ml). El péptido (0,06 mmol) se ciclo agitando con
0,06 mmol de
1-hidroxi-7-azabenzotriazol
(HOAt)/0,12 mmol NMM en 2 ml DMF durante 14 horas a 20ºC (Carpino,
L.A. J. Am. Chem. Soc., 115:4397-4398 (1993).
La resina de péptido se filtró, a continuación se lavó una vez con
DMF, se reempaquetó en la columna y se lavó con DMF hasta que se
eliminaron las burbujas de la suspensión. El resto de la síntesis
se realizó como en el Ejemplo 1 excepto que no se eliminó el grupo
Fmoc N-terminal. El péptido Fmoc se escindió de la
resina con el reactivo K tal como se describió anteriormente. Se
realizó la HPLC como en el Ejemplo 1, eliminando el grupo Fmoc
antes de la HPLC final.
La capacidad de los análogos de hPTH para unirse
a los receptores y activar el mecanismo de señal acoplado a la
adenilil ciclasa se determinó en la línea celular competente para la
diferenciación ROS 17/2 de osteosarcoma de rata (ROS) similar a
osteoblasto. Se conoce que dicha actividad está muy acoplada a la
capacidad del análogo para restablecer la masa de hueso en la rata
ovariectomizada. La actividad estimulante de la adenilil ciclasa se
evaluó premarcando el conjunto del ATP celular con
[^{3}H]-adenina y midiendo a continuación la
cantidad de [^{3}H]AMP cíclico generado a partir del
[^{3}H]-ATP durante los primeros 10 minutos de
exposición a un análogo en particular. Ello estuvo basado en el
procedimiento descrito por Whitfield et al., J. Cellular
Physiology 150:299-303 (1992) incorporado en la
presente solicitud como referencia.
Los resultados de la adenilil ciclasa se expresan
en la Tabla 2 más adelante como la concentración necesaria para
expresar un incremento la mitad del máximo en la actividad AC.
Las dosis se basaron en los datos de dosis
respuesta de
hPTH(1-31)-NH_{2}. La
potencia constructora de hueso de
hPTH-(1-31)NH_{2} se ensayó utilizando
múltiples dosis (0,8, 0,6, 0,4 y 0,2 nmoles/100 g de peso corporal)
y un modelo regenerativo o evaluador del tratamiento, en lugar de
uno preventivo.^{11} Durante 9 semanas se dejo que ratas
ovariectomizadas de 3 meses agotasen la mayor parte del hueso
trabécular no lamelar femoral antes de empezar las 6 semanas de
inyecciones diarias. Al final de la 9ª semana habían perdido
aproximadamente el 75% de su masa de hueso trabecular femoral. La
Figura 8 muestra el incremento dosis dependiente en el grosor
trabecular medio causado por la deposición lamelar que se había
producido por las 36 inyecciones de 4 dosis diferentes del
fragmento. El fragmento también pudo estimular el crecimiento de
hueso trabecular en ratas mucho más viejas. En consecuencia, 38
inyecciones de la dosis de rango intermedio de 0,6 nmoles/100 g de
peso corporal de hPTH-(1-31)NH_{2} fueron
capaces de incrementar significativamente el grosor trabecular medio
sobre el valor inicial normal del hueso trabecular femoral
preagotado de ratas de 1 año (9 semanas después de OVX), y lo
hicieron tan efectivamente como el hPTH-(1-84). En
consecuencia, en los siguientes ensayos se utilizó la dosis de 0,6
nmoles/100 g de peso corporal.
En Rixon et al. J. Bone and Mineral
Research 9:1179-1189 (1994), y en Whitfield
et al., Calcif. Tissue Int. 58:81-87
(1996) se da una descripción completa del protocolo, incorporada en
la presente solicitud como referencia. Se compraron ratas
Sprague-Dawley OVX simulada (ovariectomizadas) y OVX
(de 3 meses de edad; 255-260 g) de Charles River
Laboratories (St. Constant, QC). Se mezclaron aleatoriamente las
ratas en grupos de 8 animales que recibieron pienso para ratas
Purina y agua ad libitum. No hubo muertes no programadas.
Los animales recibieron 6 inyecciones subcutáneas una vez al
día/semana empezando al final de la segunda semana después de la OVX
y terminando al final de la 8ª semana después de la OVX (es decir,
36 inyecciones). Ocho ratas OVX-simulada y 8
controles OVX recibieron 36 inyecciones de vehículo (0,15 M NaCl
conteniendo 0,001 N HCl) mientras que 8 ratas OVX recibieron 0,6
nmoles de fragmento en el vehículo/100 g de peso corporal). Al
final de la 8ª semana después de la OVX, se extrajeron los fémures,
se limpiaron y se cortaron por la mitad por la diafisis media y la
mitad próxima se descartó. Una vez eliminada la epífisis, cada
medio fémur se partió a lo largo en dos partes y se expulsó la
médula ósea.
La potencia para generar hueso de los fragmentos
se ensayó a partir de los cambios en el grosor medio de los huesos
(área/perímetro) de la trabécula en el extremo distal de los medios
fémures de los distintos animales tratados. Para medir el grosor
medio de la trabécula, las dos medios fémures desmineralizados de
cada rata fueron deshidratados y embebidos en parafina. Se cortaron
secciones longitudinales de 10 \mum de grosor del plano medio de
cada hueso y se tiñeron con la tinción rápida para hueso de
Sanderson (Surgipath Medical Industries, Inc., Winnipeg, MB,
Canada). El grosor medio de la trabécula se midió utilizando un
sistema de imagen M4 y programación informática morfométrica de
Imaging Research Inc., (St. Catherines, ON, Canada).
Las secciones histológicas representativas
preparadas al final de las 8 semanas después de la OVX se muestran
en la Figura 3. Los resultados se representan además en forma de
una gráfica de barras en la Figura 5. Las barras muestran los
valores de los grosores de trabécula de las ratas normales,
ovariectomizadsas (OVX), simuladas,
hPTH-(2-31)-NH_{2} y
[Leu^{27}]ciclo(Glu^{22})-Lys^{26})-hPTH-(1-31)-NH_{2}.
[Leu^{27}]ciclo(Glu^{22}-Lys^{26})-hPTH-(1-31)-NH_{2}
muestra una actividad especialmente superior en comparación con el
análogo lineal,
hPTH-(1-31)-NH_{2}. Dicho análogo
lineal se ha mostrado que es completamente activo en la restauración
del hueso, pero utiliza solamente una senda de señalización celular
(la activada por AC). Por consiguiente, estos análogos cíclicos, lo
mismo que sus análogos lineales, se espera que tengan menos efectos
clínicos indeseables secundarios que los correspondientes más
largos, tales como hPTH-(1-31) o
hPTH-(1-84), que activan ambos mecanismos de
señalización celular.
En este segundo ejemplo de restauración de hueso,
se compara la capacidad de los fragmentos de lactama para
restablecer hueso trabecular severamente exhausto. En este
experimento, el programa de 6 semanas de una inyección diaria de 0,6
nmoles de péptido/100 g de peso corporal en ratas jóvenes
sexualmente maduras se retrasó hasta el final de la 9ª semana
después de la OVX. En dicho tiempo se había perdido el 75% de su
hueso trabecular. Tal como se puede observar en la Figura 4,
[Leu^{27}]ciclo(Glu^{22}-Lys^{26})-hPTH-(1-31)NH_{2}
fue el más efectivo de los fragmentos. Restaura el volumen de hueso
trabecular al volumen normal de las ratas control.
Se anestesiaron ratas
Sprague-Dawley (pesando más de 290 g) mediante
pentobarbital sódico inyectado intraperitonealmente (65 mg/kg peso
corporal). Se siguió la temperatura rectal mediante un termistor
YSI402 (Yellow Springs Instrument Co. Inc. Yellow Springs, OH) y se
mantuvo entre 36,0 y 38,5ºC a lo largo del experimento. También se
siguió la temperatura de la oreja pinna utilizando un termistor de
banjo YSI. Se expuso la arteria de la cola y se canuló con un
cateter Jelco 25-gIV (Johnson and Johnson Medical
Inc., Arlington, TX) y se conecto a un transductor de presión
Statham, las señales del cual se grabaron digitalmente con un
Monitor Biopac Systems MP100 (Harvard Instruments, Saint Laurent,
QC, Canada). Para la inyección intravenosa de PTH o uno de sus
fragmentos, también se expuso una vena femoral. Después de la
cirugía, se dejó que las ratas se estabilizasen durante 8 minutos a
continuación de los cuales se inyecto en la vena femoral o bajo la
piel del abdomen PTH o uno de sus fragmentos (disuelto en disolución
salina acidificada conteniendo 0,001 N HCl). Los datos se
recogieron durante 12 minutos después de la inyección intravenosa o
durante 22 minutos después de la inyección subcutánea. La Figura 6
muestra la máxima caída de presión sanguínea y el tiempo hasta la
máxima caída con la adición de dosis de 0,8 nmoles/100 g de
[Leu^{27}]ciclo(Glu^{22}-Lys^{26})hPTH-(1-31)-NH_{2}
para las administraciones por ruta subcutánea (barra abierta) o
intravenosa (barra rayada). El análogo
[Leu^{27}]ciclo(Glu^{22}-Lys^{26})hPTH-(1-31)-NH_{2}
muestra biodisponibilidad incrementada. Ello está indicado por el
mucho más corto tiempo necesitado para caer al bp mínimo después de
la inyección subcutánea. Ambos análogos cíclicos muestran efectos
hipotensivos cuando se inoculan subcutáneamente, cuando se comparan
con hPTH-(1-31)-NH_{2}. Por
consiguiente, cada análogo de lactama cíclica, cuando es inoculado
subcutáneamente, se espera que tenga propiedades más deseables que
el correspondiente lineal. Ello incluye mayor biodisponibilidad,
consecuencia de una resistencia contra las proteasas incrementada
y/o una capacidad aumentada para ser transportada a través de los
ambientes lipídicos. Lo último podría ser debido a la
estabilización de las hélices anfifílicas en la proximidad del
extremo C de la hormona.
Más resultados:
Para estos resultados, los péptidos se
identifican como sigue:
hPTH-(1-31)-NH_{2} (1);
[Leu^{27}]-hPTH-(1-31)-NH_{2}
(2) (Figura 9);
[Leu^{27}]ciclo(Glu^{22}-Lys^{26})-hPTH-(1-31)-NH_{2}.
Actividad adenilil ciclasa. Previamente
hemos reportado que
[Leu^{27}]-hPTH-(1-34)-NH_{2}
es más activo en la estimulación de la actividad AC en la línea
celular ROS que
hPTH-(1-34)-NH_{2}.^{5} Hemos
descubierto también que el péptido 2 (EC_{50},11,5\pm5,2 nM) es
más activo que la secuencia nativa 1, (EC_{50},19,9\pm3,9 nM)
(Fig.12). Se muestran los péptidos 1(\bullet); 2
(\square); 3(\Delta) 4(\blacktriangle);
5(\medcirc). La formación de lactama entre Glu^{22} y
Lys^{26} (3) indujo todavía una mayor actividad estimuladora de
AC, con valores EC_{50} de 3,3 \pm 0,3 nM. Por consiguiente el
efecto neto de dicha ciclación y reemplazo de Lys^{27} por Leu es
aproximadamente un incremento en actividad de 6 veces.
Tal como se describe en el Ejemplo 6 y se ilustra
en la Figura 6, el rápido efecto hipotensivo observado a
continuación de la inyección subcutánea de un análogo de hPTH se
correlaciona con la actividad osteogénica. En consecuencia, el
ensayo es de utilidad para el escrutinio de los candidatos análogos
a hPTH para los efectos osteogénicos y para eliminar las
construcciones no hipotensivas, sin tener que sacrificar animales de
laboratorio para ensayos.
Como fondo, hemos utilizado un conjunto único de
fragmentos osteogénicos o no osteogénicos de PTH activadores de AC,
AC/PLC o PLC para probar definitivamente que es solamente la
estimulación de AC la que reduce la presión sanguínea y para
comparar las acciones hipotensivas de tales fragmentos cuando son
inoculados subcutáneamente o intravenosamente en ratas hembras.
Hemos demostrado que la respuesta hipotensiva es disparada
solamente por los fragmentos estimuladores de AC o AC/PLC y que es
la relativamente pequeña respuesta hipotensiva a la inyección
subcutánea, y no la mucho mayor respuesta a la inyección
intravenosa, la que se correlaciona con la actividad osteogénica de
hPTH-(1-31)NH_{2},
hPTH-(1-34) y hPTH-(1-84) en ratas
OVX, pero no con hPTH-(1-30)NH_{2} que
estimula AC y reduce la presión sanguínea, pero no estimula la
formación de hueso.
Específicamente, hPTH-(1-84) y
sus fragmentos hPTH-(1-34),
hPTH-(1-31)NH_{2} y
hPTH-(1-30)NH_{2} redujeron la presión de
las arterias altas en las ratas hembra
Sprague-Dawley anestesiadas en un
42,4-67,1% en aproximadamente 1 minuto después de la
inoculación en la vena femoral, pero redujeron la presión por
solamente el 8,5-36,2% 2 a 19 minutos después de la
inyección subcutánea. hPTH-(1-84) y
hPTH-(1-34) estimulan tanto la adenilil ciclasa como
la fosfolipasa-C en sus células diana, pero la
acción hipotensiva debió ser estimulada específicamente por la
activación de la adenilil ciclasa, porque
hPTH-(1-31)NH_{2} y
hPTH-(1-31)NH_{2}, que solamente pueden
estimular la adenilil ciclasa, fueron potentes hiptensivos cuando
inyectados intravenosamente mientras que
hPTH-(7-84), que solamente puede estimular la
fosfolipasa-C, no fue significativamente hipotensiva
cuando inyectada intravenosamente. Ya que la acción osteogénica de
PTH también está mediada por la estimulación de la adenilil ciclasa,
se esperó que la respuesta hipotensiva podría ser utilizada para
escrutinizar la osteogenicidad de nuevas construcciones de PTH.
Desde luego, las actividades osteogénicas de
hPTH-(1-31)NH_{2},
hPTH-(1-34) y hPTH-(1-84) inyectados
subcutáneamente se correlacionan de cerca con sus actividades
hipotensivas, siendo hPTH-(1-34) mucho más
hipotensivo y más significativamente, las otras dos moléculas,
hPTH-(1-31)NH_{2} y
hPTH-(1-84) fueron igualmente osteogénicas e
hipotensivas. Sin embargo, dicha correlación se rompió con
hPTH-(1-30)NH_{2} que estimula AC casi tan
fuertemente como
hPTH-(1-31)-NH_{2} y
hPTH-(1-34) y reduce la presión sanguínea tanto como
hPTH-(1-31)-NH_{2} pero no
estimula la formación de hueso. Sin embargo, la capacidad para
reducir la presión arterial significativamente es una propiedad
común de los PTH osteogénicos y los fragmentos de PTH y es por
consiguiente un indicador preliminar rápidamente determinable de
bioactividad in vivo de los fragmentos de PTH.
Más específicamente, tanto
hPTH-(1-34) como
hPTH-(1-31)-NH_{2} fueron
máximamente hipotensivos a 0,8 nmoles/100 g de peso corporal.
Tal repuesta hipotensiva estuvo acompañada por un
transitorio (20-30 minutos) enrojecimiento de las
orejas y zarpas, que se puede considerar como un indicador visual
cualitativo útil.
Aunque los fragmentos estimulantes de AC o AC/PLC
fueron potentemente hipotensivos cuando inyectados intravenosamente,
una inyección intravenosa de 0,8 nmol/100 g de peso corporal de
hPTH-(7-84), que solamente puede estimular PLC,
redujo la presión arterial de la cola muy lentamente (9,8 \pm 2,0
minutos) y solo muy ligeramente en un 3,28 \pm 1,0 mm Hg en
comparación con la rápida (0,9 \pm 0,08 minutos) 43,2 \pm 5,8 mm
Hg reducción causada por el estimulador de AC/PLC
hPTH-(1-84) o la igualmente rápida 51,6 \pm 3,3 mm
Hg caída causada por el estimulador de AC
hPTH-(1-31)NH_{2}.
Una inyección subcutánea de un fragmento
estimulador de AC o AC/PLC causó una reducción mucho más lenta y
menor de la presión arterial de la cola que una inyección
intravenosa de la misma dosis. Por ejemplo, 0,8 nmol/100 g de peso
corporal de hPTH-(1-34) redujo le presión solamente
27,9 \pm 3,6 mm Hg cuando inyectado subcutáneamente en comparación
con 50,9 \pm 5,6 mm Hg cuando inyectado intravenosamente. La misma
dosis de hPTH-(1-31)NH_{2} redujo la
presión sanguínea en 11,1 \pm 1,6 mm Hg solamente cuando inyectada
subcutáneamente en comparación con 51,6 \pm 3,3 mm Hg cuando
inyectada intravenosamente.
No hubo una diferencia significante entre las
rápidas y grandes reducciones en la presión arterial de la cola
causada por hPTH-(1-84), hPTH-(1-34)
y hPTH-(1-31)NH_{2} inyectados
intravenosamente, pero hPTH-(1-34) fue por lo menos
el doble de efectiva (P<0,01) que las otras dos moléculas cuando
inyectada subcutáneamente.
Uno de los factores que afecta a la acción
hipotensiva y la osteogenicidad de PTH o un fragmento de PTH
inyectado subcutáneamente es su habilidad para desplazarse sin ser
desactivado desde el punto de inyección hasta su destino, primero en
la vasculatura y luego en los huesos. Esta habilidad se refleja en
el tiempo requerido para que la presión arterial de la cola caiga a
su valor mínimo tras la inyección. Acortar la molécula de pPTH en el
C-terminal por 84 a 31 residuos eliminó la habilidad
de estimular PLC sin disminuir la capacidad de estimular AC y
disminuyó nueve veces la cantidad de tiempo necesario para que la
presión arterial de la cola alcanzase su mínimo. La eliminación de
uno más residuos para generar
hPTH-(1-30)NH_{2} aumentó dramáticamente la
cantidad de tiempo necesaria para que la presión sanguínea cayese a
su mínimo desde 2,0\pm0,31 minutos en el caso de
hPTH-(1-31)NH_{2} hasta 13,8\pm2,3
minutos. Sin embargo es importante tener en cuenta que
hPTH-(1-31)NH_{2} no tardó más en reducir
la presión sanguínea que hPTH-(1-84).
El uso en el presente estudio de
hPTH-(1-31)NH_{2}, la primera construcción
de PTH capaz de estimular AC tan fuertemente como
hPTH-(1-34) sin activar PLC y estimulando la
actividad asociada a membrana de los PKCs, ha proporcionado ahora la
prueba más directa de que la acción hipotensiva del PTH es
totalmente debida a la activación de AC. Por consiguiente, aunque
la inyección intravenosa de 0,8 nmol/100 g de peso corporal de
hPTH-(7-84), que solo puede estimular PLC/PKCs, no
afectó significativamente la presión arterial de la cola, la
inyección intravenosa de la misma dosis de
hPTH-(1-31)NH_{2} hizo caer la presión
tanto como hPTH-(1-34).
Como el AC también media la estimulación inducida
por PTH de la formación de hueso cortical y trabecular en ratas OVX,
el disparo de una respuesta hipotensiva en ratas hembra intactas
parece ser un simple, rápidamente medible indicador de la posible
osteogenicidad de una construcción de PTH. Por otra parte, el fallo
en reducir la presión arterial eliminaría un fragmento de más
evaluación, evitando así el ensayo de osteogenicidad en ratas OVX
innecesario, caro y a largo plazo. Las respuestas hipotensivas a
inyecciones intravenosas de los PTHs no estuvieron correlacionados
con osteogenicidades. Sin embargo, las mucho menores respuestas
hipotensivas a hPTH-(1-31)NH_{2},
hPTH-(1-34) y hPTH-(1-84) inyectados
subcutáneamente se correlacionaron con las osteogenicidades de estas
moléculas, con hPTH-(1-34) teniendo la acción
hipotensiva y osteogénica más fuerte y las otras dos moléculas
siendo tan efectivas una como la otra, pero menos efectivas que
hPTH-(1-34) en reducir la presión sanguínea y
estimular la formación de hueso. Pero dicha correlación se rompió
con hPTH-(1-30)NH_{2} que estimuló AC casi
tan fuertemente como hPTH-(1-31)NH_{2} y
hPTH-(1-34) y redujeron la presión sanguínea tanto
como hPTH-(1-31)NH_{2} pero no estimula la
formación de hueso^{11}. La razón de esta falta de osteogenicidad
es desconocida. No puede deberse solamente a que
hPTH-(1-30)NH_{2} inyectado subcutáneamente
necesite más tiempo para reducir la presión sanguínea porque
hPTH-(1-84) inyectado subcutáneamente necesita la
misma cantidad de tiempo para reducir la presión sanguínea, sin
embargo es fuertemente osteogénico. Claramente la respuesta
osteogénica depende de muchos factores distintos que se combinan
para posibilitar la llegada desde el punto de inyección de
suficiente hormona activa o fragmento de hormona a los osteoblastos
maduros diana que expresan receptores de PTH. El fallo de
hPTH-(1-30)NH_{2} estimulador de AC y
reductor de presión sanguínea para estimular formación ósea puede
ser el resultado de una combinación de mayor inestabilidad, un
EC_{50} ligeramente más alto para estimulación de AC es decir, 20
nM en lugar de los 16 nM para
hPTH-(1-31)NH_{2} y
hPTH-(1-34) y un largo tiempo para entrar en la
circulación desde el punto de inyección.
A pesar del fallo de
hPTH-(1-30)NH_{2} para ser oseteogénico, la
capacidad de reducir significativamente la presión arterial es
todavía una propiedad común de los PTHs osteogénicos y es por ello
un indicador rápidamente determinable de la posible bioactividad
"in vivo" de los fragmentos de PTH. Se deduce que la
respuesta hipotensiva también debería servir como un indicador
efectivo de la capacidad de una construcción osteogénica de PTH para
alcanzar sus metas tras la administración por vía oral u otras vías
no inyectables.
La incomodidad y otras posibles secuelas de una
reacción hipotensiva a cada inyección puede limitar la disposición
de los pacientes osteoporóticos a aceptar un tratamiento prolongado
con PTH o un fragmento de PTH. Afortunadamente, las inyecciones
subcutáneas intermitentes de los PTHs se utilizan en la actualidad
para estimular la formación de hueso y tales moléculas son mucho
menos hipotensivas cuando son inyectadas subcutáneamente que cuando
son inyectadas intravenosamente. Como también hemos argumentado
previamente^{6,7} hPTH-(1-31)NH_{2}
tendría la ventaja añadida de estimular AC sin estimular PLC y
cualquier potencial efecto secundario mediado por Ca^{2+} y PKCs
que pueda disparar.
Los análogos de la presente invención pueden ser
administrados a un mamífero de sangre caliente, que lo necesite,
particularmente un ser humano, por administración parenteral,
tópica, rectal, oral o por inhalación. Los análogos se pueden
formular convencionalmente en una forma de dosis parenteral
conteniendo aproximadamente 1 a 300 mg por unidad de dosis con un
vehículo convencional, agente excipiente, agregante, preservante,
estabilizante, color o similar tal como requiere la práctica
farmacéutica aceptada.
Para la administración parenteral, sería
suficiente administra una inyección subcutánea indolora de 1 a 2 ml
a través de una jeringa ultra-fina de grosor 30 nada
más que una vez al día durante un o dos años, dependiendo de la
severidad de la enfermedad. El material inyectado contendría una de
las presentes invenciones en una solución o suspensión acuosa,
isotónica y estéril (opcionalmente con un preservante tal como fenol
o un agente disolvente tal como el ácido etilendiaminotetraacético
(EDTA). Entre los vehículos aceptables y disolventes que se pueden
emplear se encuentran el agua, agua ligeramente acidificada, la
solución de Ringer y la solución de cloruro sódico isotónico.
Además, los aceites estériles, fijados, se utilizan
convencionalmente como disolventes o medios de suspensión. Los
monoglicéridos sintéticos, monoglicéridos, diglicéridos, ácidos
grasos (tales como ácido oleico) encuentran uso como aceites fijados
en la preparación de inyectables.
Para administración rectal, los análogos de la
presente invención pueden ser preparados en forma de supositorio
mezclando con un excipiente no irritante adecuado, como es la
manteca de cacao o polietilenglycoles.
Para uso tópico, los análogos de la presente
invención pueden ser preparados en forma de ungüentos, gelatinas,
disoluciones, suspensiones o parches dérmicos adhesivos.
Para la inhalación, se puede conseguir, por
ejemplo, por los medios descritos en la solicitud de PCT publicada
no. W094/07514.
La dosis diaria no debería exceder 0,05 mg/kg de
peso corporal, o aproximadamente 3,5 mg/humano de 70 kg, dependiendo
de la actividad del compuesto específico, la edad, peso, sexo y
condiciones del sujeto tratado. Como es bien sabido, la cantidad de
ingrediente activo que se puede combinar con los materiales
aportados para producir una sola dosis variará dependiendo del
huésped tratado y del modo particular de administración.
La siguiente lista tabulada de análogos fue
producida según los procedimientos descritos anteriormente.
La publicación de las siguientes referencias se
incorpora en la presente solicitud como referencia.
- (1)
- Caulfield, M.P., McKee, R.L., Goldman, M.E., Duong, L.T., Fisher, J.E., Gay, C.T; DeHaven, P.A.; Levy, J.J.; Roubini, E.; Nutt, R.F.; Chorev, M., Rosenblatt, M, The Bovine Renal Parathyroid Hormone (PTH) Receptor Has Equal Affinity for 2 Different Amino Acid Sequences- The Receptor Binding Domains of PTH yand PTH-Related Protein Are Located Within the 14-34 Region. Endocrinology 127:83-87 (1990).
- (2)
- Neugebauer, W.; Barbier, J.R.; Sung, W.L., Whitfield, J.F., Willick, G.E. Solution Structure and Adenylyl Cyclase Stimulating Activities of C-Terminal Truncated Human Paratyroid Hormone Analogues Biochemistry 34:8835-8842 (1995).
- (3)
- Gardella, T.J., Wilson, A.K., Keutmann, H.T., Oberstein, R., Potts, J.T., Kronenberg, H.M., and Nussbaum, S.R. Analysis of Parathyroid Hormone's Principal Receptor-Binding Region by Site-Directed Mutagenesis and Analog Desing. Endocrinology 132: 2024-2030 (1993).
- (4)
- Marquese, S., Baldwin, R.L., Helix Stabilization by Glu...Lys+ Salt Bridges in Short Peptides of De Novo Design. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84:8898-8902 (1987).
- (5)
- Surewicz, W.K., Neugebauer, W.,Gagnon, L., MacLean, S., Whitfield, J.F., Willick, G.E. Structure-Function Relationships in Human Parathyroid Hormone: The Essential Role of Amphiphilic-Helix. In Peptides: Chemistry, Structure and Biology 1993; Smith, J., Hodges, R., Eds., ESCOM Leiden, The Netherlands, 1993, pp.556-558.
- (6)
- Whitfield, J.F., Morley, P., Willick, G.E., Ross, V., Barbier, J.R., Isaacs, R.J., Ohannessianbarry, L. Stimulation of the Growth of Femoral Trabecular Bone in Ovariectomized Rats by the Novel Parathyroid Hormone Fragments, hPTH-(1-31)NH_{2} (Ostabolin) Calcif.Tissue Int. 58:81-87 (1996).
- (7)
- Whitfield, J.J., Morley, P. Small Bone-Building Fragments of Parathyroid Hormone: New Therapeutic Agents for Osteoporosis. Trends Pharmacol. Sci. 16:382-386 (1995).
(1) INFORMACIÓN GENERAL:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- SOLICITANTE:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: National Research Council of Canada
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CALLE: Intellectual Property Services Montreal Road, Bldg. M-58, Room EG-12
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: Ottawa
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- ESTADO: Ontario
\vskip0.333000\baselineskip
- (E)
- PAIS: Canada
\vskip0.333000\baselineskip
- (F)
- CODIGO POSTAL: K1A OR6
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TITULO DE LA INVENCIÓN: ANALOGOS DE LA HORMONA PARATIROIDE PARA EL TRATAMIENTO DE LA OSTEOPOROSIS
\vskip0.666000\baselineskip
- (iii)
- NUMERO DE SECUENCIAS : 33
\vskip0.666000\baselineskip
- (iv)
- FORMATO LEGIBLE POR ORDENADOR:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- TIPO DE MEDIO: Disquet de 31/2
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- ORDENADOR: IBM PC COMPATIBLE
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- PROGRAMA: PatentIn Edición #1.0, Versión #1.30
\vskip0.666000\baselineskip
- (v)
- FECHA DE LA SOLICITUD ACTUAL:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NUMERO DE SOLICITUD: PCT/CA97/00547
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- FECHA DE LA SOLICITUD: 01-AGOSTO-1997
\vskip0.666000\baselineskip
- (vi)
- FECHA DE LA SOLICITUD ANTERIOR:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NUMERO DE SOLICITUD: 08/691.647
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- FECHA DE SOLICITUD: 02-AGOSTO-1996
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID nº:1:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLECULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NO:1:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu
Gly Lys His Leu Asn}
\sac{Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys
Leu Gln Asp Val}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID nº:2:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (E)
- LONGITUD: 31 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (F)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (G)
- TIPO DE CADENA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (H)
- TOPOLOGIA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLECULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº:2:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu
Gly Lys His Leu Asn}
\sac{Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu
Leu Gln Asp Val}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID NO:3:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: circular
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLECULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NO:3:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu
Gly Lys His Leu Asn}
\sac{Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu
Leu Gln Asp Val}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID nº:4:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: circula
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLECULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº:4:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu
Gly Lys His Leu Asn}
\sac{Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu
Leu Gln Asp Val}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID nº:5:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLECULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº:5:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu
Gly Lys His Leu Asn}
\sac{Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu
Leu Gln Asp Val}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID nº:8:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: circular
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLECULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº:8:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu
Gly Lys His Leu Asn}
\sac{Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu
Leu Gln Asp Val}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID nº:11:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: circular
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLECULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº:11:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu
Gly Lys His Leu Asn}
\sac{Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Ala
Leu Gln Asp Val}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID nº:12:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: circular
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLECULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº:12:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu
Gly Lys His Leu Asn}
\sac{Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Xaa
Leu Gln Asp Val}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID nº:13:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: circula
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLECULA: péptido
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº:13:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Xaa His Asn Leu
Gly Lys His Leu Asn}
\sac{Ser Xaa Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu
Leu Gln Asp Val}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID nº:14:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: circular
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLECULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº:14:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu
Gly Lys His Leu Asn}
\sac{Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys
Leu Gln Asp Val}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID nº:15:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: circular
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLECULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº:15:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu
Gly Lys His Leu Asn}
\sac{Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Ile
Leu Gln Asp Val}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID nº:16:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (E)
- TOPOLOGIA: circular
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLECULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº:16:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu
Gly Lys His Leu Asn}
\sac{Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Tyr
Leu Gln Asp Val}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID nº:17:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: circular
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLECULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº:17:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu
Gly Lys His Leu Asn}
\sac{Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu
Leu Gln Asp Val}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID nº:18:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLECULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº:18:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu
Gly Lys His Leu Asn}
\sac{Ser Met Glu Arg Val Lys Trp Leu Arg Glu Leu
Leu Gln Asp Val}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID nº:23:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLECULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº:23:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Xaa Val Ser Glu Ile Gln Leu Xaa His Asn Leu
Gly Lys Xaa Xaa Xaa}
\sac{Xaa Xaa Glu Arg Val Xaa Trp Leu Xaa Xaa Xaa
Leu Xaa Asp Xaa}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID nº:24:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- LONGITUD: 4 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (E)
- TIPO DE CADENA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (F)
- TOPOLOGIA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLECULA: péptido
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº:24:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Val His Asn Xaa}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID nº:25:
\vskip0.666000\baselineskip
- (iii)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 5 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (iv)
- TIPO DE MOLECULA: péptido
\vskip0.333000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº:25:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Val His Asn Phe Xaa}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID nº:26:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLECULA: péptido
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº:26:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Val His Asn Phe Val Xaa}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID nº:27:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLECULA: péptido
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº:27:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Val His Asn Phe Val Ala Xaa}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID nº:28:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 8 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLECULA: péptido
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº:28:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Val His Asn Phe Val Ala Leu Xaa}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID nº:29:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 4 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLECULA: péptido
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº:29:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{His Lys Lys Lys}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID NO:30:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 4 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLECULA: péptido
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº:30:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{His Leu Lys Lys}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID nº:31:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 4 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLECULA: péptido
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº:31:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Lys Lys Lys Lys}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID nº:32:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 4 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLECULA: péptido
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº:32:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{His Leu Lys Ser}
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(2) INFORMACIÓN PARA SEC ID nº:33:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 5 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLECULA: péptido
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº:33:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Val Leu Asn Phe Xaa}
Claims (9)
1. Análogo de la hormona paratiroide humana
hPTH-(1-31) en el que el aminoácido 27 es Lys o ha
sido sustituido por un residuo hidrofóbico, y que ha sido ciclado
entre Glu^{22} y Lys^{26} para formar una lactama.
2. Análogo según la reivindicación 1, en el que
el residuo hidrofóbico es Leu.
3. Análogo según la reivindicación 1, en el que
el residuo hidrofóbico está seleccionado de entre Ile, Nle, Met y
ácido \alpha-aminobutírico.
4. Análogo según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 3, que presenta una amida
C-terminal o un grupo carboxilo
C-terminal.
5. Análogo según la reivindicación 1, que
presenta SEC ID nº: 3.
6. Análogo según la reivindicación 1, que
presenta SEC ID nº: 14.
7. Composición que comprende un análogo según
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en asociación con un
vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.
8. Análogo según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, para utilización en terapia.
9. Utilización de un análogo según cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 6, para la preparación de un medicamento
para su utilización en el tratamiento de la osteoporosis.
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