ES2213862T3 - Lantibiotico relacionado con actagardina, procedimiento para su preparacion y empleo del mismo. - Google Patents
Lantibiotico relacionado con actagardina, procedimiento para su preparacion y empleo del mismo.Info
- Publication number
- ES2213862T3 ES2213862T3 ES98119105T ES98119105T ES2213862T3 ES 2213862 T3 ES2213862 T3 ES 2213862T3 ES 98119105 T ES98119105 T ES 98119105T ES 98119105 T ES98119105 T ES 98119105T ES 2213862 T3 ES2213862 T3 ES 2213862T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- baselineskip
- compound
- ala
- actagardine
- dsm
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/10—Peptides having 12 to 20 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
LA PRESENTE INVENCION TRATA DE UN NUEVO ANTIBIOTICO DE FORMULA NH2-R-ACTAGARDINA, EN DONDE NH2-R SIGNIFICA EL RADICAL DEL AMINOACIDO ALANINA, QUE SE FORMA A PARTIR DEL MICROORGANISMO ACTINOPLANES LIGURIAE, DSM 11797 O ACTINOPLANES GARBADIENSIS, DSM 11796 DURANTE LA FERMENTACION, DERIVADOS QUIMICOS DEL ANTIBIOTICO, UN PROCEDIMIENTO PARA SU UTILIZACION Y LA UTILIZACION DEL ANTIBIOTICO COMO MEDICAMENTO.
Description
Lantibiótico relacionado con actagardina,
procedimiento para su preparación y empleo del mismo.
La presente invención se refiere a un nuevo
lantibiótico relacionado con actagardina, en particular un
lantibiótico con la denominación
Ala^{0}-actagardina, a un procedimiento para su
preparación, a derivados químicos derivados del lantibiótico y al
empleo de los lantibióticos como medicamentos.
Se ha descrito ya un gran número de
lantibióticos. Los lantibióticos son antibióticos peptídicos
policíclicos que, como rasgo característico, contienen el aminoácido
lantionina o metil-lantionina. Son sustancias
naturales obtenidas microbianamente que, en calidad de sustancias
activas antibacterianas, encuentran aplicación en la terapia humana,
como sustancias conservantes o como inhibidores de enzimas (G. Jung.
Angew. Chem. Int. Ed. ingl., 1991, 30, 1051 - 1068).
Para el tratamiento de enfermedades infecciosas
bacterianas se emplea terapéuticamente un gran número de
antibióticos. Sin embargo, los agentes patógenos se vuelven
crecientemente resistentes contra los medicamentos utilizados, e
incluso se corre un gran riesgo por los denominados gérmenes
multirresistentes que no sólo se han vuelto resistentes contra
grupos de antibióticos individuales tales como, por ejemplo,
antibióticos de \beta-lactama o glicopépticos o
macrolidas, sino que al mismo tiempo portan varias resistencias.
Existen incluso agentes patógenos que se han vuelto resistentes
contra todos los antibióticos adquiribles en el comercio. Las
enfermedades infecciosas que son provocadas por este tipo de
gérmenes ya no pueden ser tratadas terapéuticamente. Por lo tanto,
existe una gran demanda de nuevos agentes que puedan emplearse
contra gérmenes resistentes. Ciertamente, en la bibliografía están
descritos muchos miles de antibióticos, pero la mayoría son
demasiado tóxicos como para poder ser empleados como
medicamentos.
La actagardina es un lantibiótico que ha sido
descrito por primera vez en 1977 por S. Somma et al. en
Antimicrob. Agents Chemother. 11, 396-401. Su
estructura ha sido clarificada correctamente sólo recientemente (N.
Zimmermann et al., Eur. J. Biochem. 1995, 228, 786 -
797).
Sorprendentemente, se ha encontrado que las cepas
Actinoplanes liguriae y Actinoplanes garbadiensis son
capaces de formar en cada caso al menos un nuevo antibiótico, por
ejemplo la Ala^{0}-actagardina, que no sólo es muy
eficaz antibacterianamente, sino también bien compatible. Un
material aislado de Actinoplanes liguriae se depositó en la
Deutschen Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH,
Mascheroder Weg 1B, 30124 Braunschweig, Alemania (en lo que sigue
"DSM"), según las Reglas del Tratado de Budapest el 24.09.97
bajo el siguiente número: DSM 11797. Un material aislado de
Actinoplanes garbadiensis se depositó en la DSM según las
Reglas del Tratado de Budapest del 24.09.97 bajo el siguiente
número: DSM 11796.
De manera correspondiente, la invención
representa compuestos de la fórmula I,
en donde R significa el resto de un aminoácido,
así como sus sales fisiológicamente compatibles. R puede ser el
resto de un aminoácido sustituido o no sustituido, en el que el
grupo amino está en posición \alpha a \omega y tiene la
configuración D o L. Son particularmente preferidos
\alpha-aminoácidos sustituidos o no sustituidos
con la configuración D o
L.
Preferiblemente, R significa el resto de un
aminoácido natural elegido de: Ala, Gly, Glu, Phe, Pro, Thr, Cys,
Met, Trp, Tyr, Asn, Gln, Asp, His, Ile, Leu, Lys, Arg, Ser y Val. De
manera particularmente preferida, el aminoácido significa Ala, Ile,
Lys, Phe, Val, Glu, Asp, His, Leu, Arg o Ser, y de manera muy
particularmente preferida, el aminoácido significa Ala^{0}.
R puede significar también un resto de ácido
diaminoalquílico sustituido o no sustituido tal como, por ejemplo,
ácido 2,4-diaminobutírico (Dab).
Además, la invención se refiere a un compuesto de
la fórmula empírica: C_{84}H_{129}N_{21}O_{25}S_{4}
(Ala^{0}-actagardina), obtenible por fermentación
de Actinoplanes liguriae, DSM 11797 o Actinoplanes
garbadiensis DSM 11796 o de una de sus variantes y/o mutantes,
en un medio de cultivo hasta que el compuesto
Ala^{0}-actagardina se acumula en el caldo de
cultivo y mediante subsiguiente aislamiento del compuesto, así como
a sus sales farmacológicamente compatibles.
La invención se refiere, además, a derivados
químicos que se derivan de un compuesto de la fórmula empírica
C_{84}H_{129}N_{21}O_{25}S_{4}
(Ala^{0}-actagardina), obtenible por fermentación
de Actinoplanes liguriae, DSM 11797 o Actinoplanes
garbadiensis DSM 11796 o de una de sus variantes y/o mutantes,
en un medio de cultivo hasta que el compuesto
Ala^{0}-actagardina se acumula en el caldo de
cultivo y mediante subsiguiente aislamiento del compuesto y
transformación en derivados químicos, así como a sus sales
farmacológicamente compatibles.
Derivados químicos preferidos son: Ile^{0}-,
Lys^{0}-, Phe^{0}-, Val^{0}-, Glu^{0}-, Asp^{0}-,
His^{0}-, Leu^{0}-, Arg^{0}- y
Ser^{0}-actagardina. La transformación de
Ala^{0}-actagardina en los derivados químicos
mencionados puede producirse según métodos conocidos por el experto
en la materia.
El antibiótico
Ala^{0}-actagardina se diferencia de sustancias
conocidas por la bibliografía por las fórmulas estructurales
indicadas. Junto a la actagardina se han descrito todavía algunos
componentes secundarios de actagardina (patente de EE.UU. 4.022.884
del 10 de mayo de 1976, así como A. Malabarba et al., J.
Antibiotics, 1985, 38, 1506 - 1511), los cuales, sin embargo, se
diferencian del compuesto de acuerdo con la invención por la
polaridad también en relación con la actagardina o por la
composición de amino-ácidos o por la actividad antimicrobiana o por
otras propiedades físicas.
La cepa Actinoplanes liguriae, DSM 11797
forma la actagardina así como los productos secundarios conocidos
por la bibliografía en soluciones nutricias con contenido en
glucosa, almidón o glicerol. Sorprendentemente, se ha encontrado que
el propio organismo produce, en medios difícilmente digeribles y con
contenido en manita, con muy buenos rendimientos el antibiótico
NH_{2}-R-actagardina de acuerdo
con la invención, significando R el resto de un aminoácido natural,
en particular alanina, pero no los compuestos descritos, incluso la
actagardina sólo en cantidades traza.
Además, la invención se refiere, por lo tanto, a
un procedimiento para la preparación del compuesto de la fórmula I,
caracterizado porque el microorganismo Actinoplanes liguriae,
DSM 11797 o Actinoplanes garbadiensis, DSM 11796 o una de sus
variantes o mutantes se cultiva en un medio nutricio acuoso, se
aísla un compuesto de la fórmula I y se purifica y, eventualmente,
se transforma en sus sales farmacológicamente compatibles.
El citado procedimiento abarca el cultivo de
Actinoplanes liguriae, DSM 11797 o Actinoplanes
garbadiensis DSM 11796, de sus mutantes y/o variantes en
condiciones aerobias en medios de cultivo con contenido en fuentes
de carbono y nitrógeno, sales inorgánicas y elementos traza.
Preferiblemente, el cultivo se lleva a cabo a una
temperatura entre 20 y 35ºC y a un pH entre 4 y 10.
Además, la invención se refiere a un
procedimiento para la preparación de un compuesto de la fórmula I,
caracterizado porque el compuesto actagardina se hace reaccionar con
un aminoácido.
Por ejemplo, un éster de aminoácido activado se
puede hacer reaccionar con el grupo amino terminal de la
actagardina. Al nitrógeno amino del aminoácido está unido
preferiblemente un grupo protector tal como, por ejemplo,
terc-butiloxi-carbonilo (Boc-), con
el fin de evitar reacciones de los ésteres de aminoácidos activados
consigo mismos. Ésteres activados son, por ejemplo, los ésteres de
N-hidroxisuccinimida de los respectivos aminoácidos.
El grupo protector se separa y a continuación se purifica la mezcla
de reacción.
Actinoplanes posee un micelio de sustrato naranja
y ningún micelio aéreo. Forma los esporangios característicos de
Actinoplanes. La pared celular contiene ácido
meso-diaminopimélico así como glicina como
aminoácidos característicos y xilosa así como arabinosa como
azúcares, lo que son rasgos característicos para el género
Actinoplanes.
En lugar de la cepa DSM 11797 u 11796 también
pueden emplearse sus mutantes y variantes, siempre que sinteticen
los compuestos de acuerdo con la invención. Mutantes de este tipo
pueden producirse de manera en sí conocida por medios físicos, por
ejemplo irradiación tal como con rayos ultravioleta o rayos X, o
mutagénesis química tal como, por ejemplo, etilmetanosulfonato
(EMS);
2-hidroxi-4-metoxi-benzofe-nona
(MOB) o
N-metil-N'-nitro-N-nitrosoguanidina
(MNNG).
El rastreo de mutantes y variantes que producen
el antibiótico de acuerdo con la invención puede efectuarse por
determinación de la actividad biológica de la sustancia activa
acumulada en el caldo de cultivo, por ejemplo mediante el ensayo de
la actividad antibacteriana.
Como fuente de carbono preferida para la
fermentación aerobia se adecuan hidratos de carbono y
azúcar-alcoholes asimilables pero difícilmente
digeribles tales como manita, inosita, así como productos naturales
con contenido en hidratos de carbono tales como, por ejemplo, harina
de soja. Como sustancias nutricias nitrogenadas entran en
consideración: aminoácidos, péptidos y proteínas así como sus
productos de degradación tales como peptonas o triptonas y, además,
extractos de carne, semillas molidas, por ejemplo de maíz, trigo,
judías, avena, soja o de la planta del algodón, residuos de la
destilación de la preparación de alcoholes, harinas de carne o
extractos de levaduras, pero también sales de amonio y nitratos. La
solución nutricia puede contener en sales inorgánicas, por ejemplo,
cloruros, carbonatos, sulfatos o fosfatos de los metales alcalinos o
alcalinotérreos, hierro, zinc, cobalto y manganeso.
La formación de la
Ala^{0}-actagardina discurre particularmente bien,
por ejemplo, en una solución nutricia que contiene aproximadamente
0,5 a 5% de manita, preferiblemente 1 a 3%, 0,5 a 5% de harina de
soja, preferiblemente 1 a 3% y una solución de elementos traza en
una concentración de 0,1 a 0,5%, preferiblemente 0,2 a 0,3%. La
solución de elementos traza contiene CaCl_{2}, citrato de Fe III,
MnSO_{4}, ZnCl_{2}, CuSO_{4}, tetraborato de sodio, CoCl_{2}
y molibdato de sodio.
El cultivo se efectúa en condiciones aerobias, es
decir, por ejemplo, sumergido con sacudimiento o agitación en
matraces sacudidores o fermentadores, eventualmente con introducción
de aire u oxígeno. La fermentación puede llevarse a cabo, por
ejemplo, en frascos de cuerpo erguido o matraces redondos de
diferentes volúmenes, en fermentadores de vidrio o depósitos de
acero de V_{2}A. Puede llevarse a cabo en un intervalo de
temperaturas de aproximadamente 20 a 35ºC, de preferencia a
aproximadamente 25 a 30ºC. El valor del pH debería estar entre 4 y
10, ventajosamente entre 5,5 y 8,5. El microorganismo se cultiva en
estas condiciones en general a lo largo de un espacio de tiempo de
20 a 300 horas, preferiblemente 24 a 140 horas. Ventajosamente, el
cultivo se realiza en varias etapas, es decir primeramente se
preparan uno o varios cultivos previos en un medio nutricio líquido
que luego se sobreinoculan en el propio medio de producción, el
cultivo principal, por ejemplo en la relación en volumen 1:10. El
cultivo previo se obtiene, por ejemplo, sobreinoculando un micelio
en una solución nutricia y dejándolo crecer durante aproximadamente
20 a 120 horas, preferiblemente 24 a 72 horas. El micelio puede
obtenerse, por ejemplo, dejando que la cepa crezca durante
aproximadamente 1 a 40 días, preferiblemente 3 a 10 días en un medio
nutricio sólido o líquido, por ejemplo agar de
levadura-malta o agar de copos de avena.
El transcurso de la fermentación y la formación
del antibiótico de acuerdo con la invención puede vigilarse de
manera correspondiente a métodos conocidos por el experto en la
materia tales como, por ejemplo, por ensayo de la actividad
biológica en bioensayos o por métodos cromatográficos tales como
cromatografía en capa delgada (CD) o cromatografía líquida de alto
rendimiento (HPLC).
El antibiótico
Ala^{0}-actagardina puede presentarse tanto en el
micelio como también en el filtrado del cultivo, habitualmente la
cantidad principal se encuentra en el filtrado del cultivo. Por lo
tanto, es conveniente separar la solución de fermentación por
filtración o centrifugación. El filtrado se extrae en forma de fase
sólida con una resina de adsorción. El micelio se extrae
convenientemente con metanol o acetona, pero pueden utilizarse
también otros disolventes.
Las extracciones pueden llevarse a cabo en un
amplio intervalo de pHs, siendo sin embargo conveniente trabajar en
un medio neutro o débilmente ácido, preferiblemente entre pH 3 y pH
7. Los extractos pueden concentrarse, por ejemplo en vacío, y
secarse.
Un método para el aislamiento del antibiótico de
acuerdo con la invención es la distribución en solución de manera en
sí conocida.
Otro método de la purificación es la
cromatografía en resinas de adsorción tales como, por ejemplo en
Diaion® HP-20 (Mitsubishi Casei Corp., Tokio), en
Amberlite® XAD 7 (Rohm and Haas, EE.UU.), en Amberchrom® CG, (Toso
Haas, Filadelfia, EE.UU.) o similares. Además de ello, son adecuados
numerosos soportes de fase inversa, por ejemplo RP_{8} y RP_{18}
tal como son generalmente conocidos, por ejemplo, en el marco de la
cromatografía líquida a alta presión (HPLC).
Otra posibilidad de purificación para el
antibiótico de acuerdo con la invención consiste en la utilización,
de manera en sí conocida, de los denominados soportes de
cromatografía de fases normales tales como, por ejemplo, gel de
sílice o Al_{2}O_{3} u otros.
Un procedimiento de aislamiento alternativo es la
utilización, de manera en sí conocida, de tamices moleculares tales
como, por ejemplo, Fractogel® TSK HW-40, Sephadex®
G-25 y otros. Además de ello, también es posible
obtener la Ala^{0}-actagardina por cristalización
a partir de material enriquecido. Son adecuados para ello, por
ejemplo, disolventes orgánicos y sus mezclas, exentos de agua o con
adición de agua. Un procedimiento adicional para el aislamiento y la
purificación de los antibióticos de acuerdo con la invención
consiste en el empleo de intercambiadores de aniones,
preferiblemente en el intervalo de pHs de 4 a 10 e intercambiadores
de cationes, preferiblemente en el intervalo de pHs de 2 a 5. Es
particularmente adecuado para ello el empleo de soluciones tampón a
las que se han añadido porciones de disolventes orgánicos.
Ala^{0}-actagardina, los
derivados químicos de la misma mencionados así como los equivalentes
químicos evidentes de la misma pueden transformarse, según métodos
conocidos por el experto en la materia, en las correspondientes
sales farmacológicamente compatibles.
Equivalentes químicos evidentes de los compuestos
de acuerdo con la invención son compuestos que presentan una escasa
diferencia química, es decir tienen la misma actividad o se
transforman en condiciones suaves en los compuestos de acuerdo con
la invención. A los equivalentes mencionados pertenecen, por
ejemplo, ésteres, derivados amino, complejos o aductos del o bien
con los compuestos de acuerdo con la invención.
Por sales farmacológicamente compatibles de los
compuestos de acuerdo con la invención se entienden tanto sales
inorgánicas como también orgánicas tal como se describe en
Remingtons Pharmaceutical Sciences (17^{a} edición, página 1418
(1985)). Como sales entran particularmente en consideración sales de
metales alcalinos, de amonio, de metales alcalinotérreos, sales con
aminas fisiológicamente compatibles y sales con ácidos inorgánicos u
orgánicos, tales como, por ejemplo, HCl, HBr, H_{2}SO_{4}, ácido
maleico, ácido fumárico.
Las propiedades físico-químicas
así como espectroscópicas de los antibióticos de acuerdo con la
invención se pueden resumir como sigue:
Ala^{0}-actagardina:
Aspecto:
sustancia incolora soluble en metanol y agua.
Estable en un medio neutro y suavemente alcalino, pero inestable en
solución fuertemente ácida y fuertemente alcalina.
Fórmula empírica:
C_{84}H_{129}N_{21}O_{25}S_{4}
Peso molecular: 1961,21
^{1}H- y ^{13}C-RMN: véanse
las Tablas 1 y 2.
Máximos de UV (log \varepsilon): 280 nm (3,71),
288 nm (hombro)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
El análisis de aminoácidos proporciona,
adicionalmente a los aminoácidos de la actagardina [1 Ser, 2 Gly, 1
Trp, 2 Val, 1 Leu, 2 Ile, 1 Glu, 1 Ala, 1 lantionina
(Ala-S-Ala) y
3-\beta-metil-lantionina
(Abu-S-Ala)], otro Ala.
Además, se encontró que el compuesto de acuerdo
con la invención presenta actividades antibacterianas fuertes, la
Tabla 3 resume a título de ejemplo las concentraciones inhibidoras
mínimas (CIM) de Ala^{0}-actagardinas.
Es particularmente digno de atención el hecho de
que el compuesto de acuerdo con la invención no sólo presente
actividades antibacterianas aproximadamente el doble de buenas
contra gérmenes Gram-positivos que la actagardina,
sino que, al mismo tiempo, no presente ningún tipo de resistencia
cruzada con antibióticos habituales tales como, por ejemplo, las
\beta-lactamas (penicilinas, cefalosporinas),
aminoglicósidos (estreptomicina), macrolidas (eritromicina),
quinolonas (ciprofloxacina), sulfonamidas o glicopéptidos
(vancomicina) y otros. Además de ello, se ha de destacar el fuerte
efecto inhibidor sobre organismos anaerobios que pueden provocar
enfermedades infecciosas pertinaces, que incluso hacen peligrar la
vida. Para la terapia de enfermedades de este tipo se adecua la
Ala^{0}-actagardina en particular medida.
La compatibilidad de la
Ala^{0}-actagardina es buena en la concentración
eficaz y por encima de ella. No se observaron efectos citotóxicos ni
otras toxicidades.
Por consiguiente, la presente invención se
refiere también al empleo de los compuestos de acuerdo con la
invención como medicamentos, así como a la utilización de los
compuestos en cuestión para la preparación de medicamentos para el
tratamiento y/o la profilaxis de infecciones bacterianas.
Además, la presente invención se refiere a
medicamentos con un contenido en el compuesto de acuerdo con la
invención.
El citado medicamento se prepara por mezcladura
de al menos un compuesto de la fórmula I con una sustancia
coadyuvante y/o de soporte fisiológica y se lleva a una forma de
administración adecuada.
Los medicamentos de acuerdo con la invención
pueden aplicarse por vía enteral (oral), parenteral (intramuscular o
intravenosa), rectal o local (tópica). Pueden administrarse en forma
de soluciones, polvos (tabletas, cápsulas, incluidas microcápsulas),
pomadas (cremas o gel) o supositorios. Como sustancias coadyuvantes
para formulaciones de este tipo entran en consideración las
sustancias de carga líquidas o sólidas farmacéuticamente usuales y
agentes extendedores, disolventes, emulsionantes, lubricantes,
correctores del sabor, colorantes y/o sustancias tampón. Como
dosificación conveniente se administran 0,1 - 1000, preferiblemente
0,2 - 100 mg/kg de peso corporal. Los medicamentos se administran
convenientemente en unidades de dosificación que contienen al menos
la cantidad diaria eficaz de los compuestos de acuerdo con la
invención, por ejemplo 30 - 3000, preferiblemente 50 - 1000 mg.
La presente invención ha de explicarse más
detalladamente mediante los siguientes ejemplos de realización así
como por el contenido de las reivindicaciones.
100 ml de solución nutricia (10 g de almidón, 10
g de glicerol, 10 g de glucosa, 2,5 g de líquido de maceración de
maíz, 5 g de peptona y 2 g de extracto de levadura en 1 l de agua
del grifo, valor del pH antes de la esterilización: 6,0) en un
matraz Erlenmeyer estéril de 500 ml se inoculan con la cepa y se
incuban durante 72 horas a 28ºC y 140 rpm en una máquina sacudidora
rotatoria. A continuación, se distribuyen uniformemente y decantan
120 ml del líquido de cultivo en un matraz Erlenmeyer de 500 ml
estéril con la sustancia nutricia infusión de harina de avena, 2,0
g/l, a la que se le añadieron adicionalmente 15 g de agar/l para la
consolidación. Los cultivos se incubaron durante 10 a 14 días a
28ºC. El micelio resultante después de este tiempo de un matraz se
extrae con un elemento punzante, se utiliza inmediatamente de nuevo
o se almacena a -22ºC en 50% de glicerol o en 10% de
dimetilsulfóxido a -140ºC.
Un matraz Erlenmeyer de 500 ml estéril con 100 ml
de la solución nutricia descrita en el Ejemplo 1 se inocula con un
cultivo desarrollado en un tubito inclinado o con un trozo de agar y
se incuba en una máquina sacudidora en la oscuridad a 140 rpm y
28ºC. La producción máxima de los compuestos de la fórmula I se ha
alcanzado al cabo de aproximadamente 72 horas. Para la inoculación
de fermentadores de 10 y 100 l es suficiente con un cultivo inmerso
de 72 horas (cantidad de inoculación, aproximadamente 5%) de la
misma solución nutricia.
Un fermentador de 10 l se hace funcionar bajo las
siguientes condiciones:
| Medio nutricio: | 2% de harina de soja |
| 2% de manita | |
| Tiempo de incubación: | 24 ó 48 horas |
| Temperatura de incubación: | 28ºC |
| Velocidad del agitador: | 200 rpm |
| Aireación: | 5 l de aire/min. |
Mediante la adición repetida de unas pocas gotas
de solución etanólica de poliol se puede suprimir la formación de
espuma. El máximo de producción se alcanza al cabo de 48 horas.
27 l de la solución de cultivo obtenida según el
Ejemplo 3 se separan por centrifugación, y el filtrado del cultivo
transparente se incorpora en una columna de 3 l de capacidad, llena
de la resina de adsorción MCI Gel® CHP20P. Dimensiones de la
columna: anchura x altura: 11,3 cm x 30 cm. Se eluye con un
gradiente de disolvente de 5% de isopropanol en agua hasta 50% de
isopropanol, y la cantidad que efluye de la columna se recoge en
fracciones de en cada caso 2 l. Las fracciones con contenido en
Ala^{0}-actagardina, que se examinaron mediante
análisis HPLC, se recogieron y se concentraron en vacío así como
liofilizaron (4 g).
| Columna: | Nucleosil® 100 - 5 C_{18}AB, 250/4. |
| Fase móvil: | 32% de acetonitrilo en tampón fosfato de potasio 10 mM, pH 7. |
| Caudal: | 1 ml por minuto. |
Detección por absorción UV a 210 nm.
Para Ala^{0}-actagardina se
encontró el tiempo de retención de 16 min 50 segundos, para la
propia actagardina, 11 min y 20 segundos.
3 g del producto obtenido según el Ejemplo 4 se
incorporan en una columna de 3 litros de capacidad cargada con
Fractogel® TSK HW-40 s (anchura x altura = 10 cm x
50 cm). El eluyente, 50% de metanol en agua se bombea sobre la
columna con un caudal de 50 ml por minuto y la cantidad que efluye
de la columna se recoge fraccionada (65 ml). En las fracciones 24 a
28 se encuentra principalmente el antibiótico
Ala^{0}-actagardina, 140 mg.
El antibiótico
Ala^{0}-actagardina enriquecido (280 mg), obtenido
según el Ejemplo 6, se separa en una columna Nucleosil®
12C_{18}AB-HPLC (anchura x altura = 3,2 cm x 25
cm) en un procedimiento de gradiente con 5% a 30% de acetonitrilo en
ácido trifluoroacético al 0,05%. Las fracciones investigadas por
HPLC analítica (véase el Ejemplo 5) se reúnen de manera
correspondiente, se concentran en vacío y se liofilizan.
Proporcionan 185 mg de Ala^{0}-actagardina con una
pureza del 98%.
Peso molecular calculado por espectroscopía de
masas ESI+ de la Ala^{0}-actagardina: M+H^{+} =
1962,6.
En 10 ml de dimetilformamida (DMF) anhidra se
disuelven 94,5 mg (0,05 mmol) de actagardina y se añaden 22 mg (0,05
mmol) de
di-Boc-lisin-O-N-hidroxisuccinimida,
así como 100 \mul de trietilamina (TEA) y se deja reposar a la
temperatura ambiente. El transcurso de la reacción se vigila
analíticamente mediante HPLC (véase el Ejemplo 5). Después de 96
horas, la reacción se interrumpe mediante la eliminación de la DMF y
de la TEA en alto vacío, y el producto de reacción se purifica
mediante HPLC preparativa en el procedimiento de gradiente con 25 a
50% de acetonitrilo en ácido trifluoroacético (TFA) al 0,05%. Las
dimensiones de la columna son de altura x anchura: 25 mm x 250 mm;
soporte: Select B®. Después de la liofilización de las fracciones
con contenido en producto de reacción, se obtienen 33 mg (0,015
mmol) de
diBoc-Lys^{0}-actagardina.
Los grupos protectores de Boc se separan
completamente con TFA al 60%. Para ello, 25 mg (0,011 mmol) del
derivado protegido se disuelven en 5 ml de TFA al 60% a la
temperatura ambiente. Después de 90 minutos ha finalizado la
separación. La lisil-actagardina libre se purifica
con el mismo gradiente, tal como se ha descrito antes, en una
columna de HPLC preparativa (10 mm x 250 mm, LiChrospher®). La
liofilización del material purificado proporciona 14 mg (0,007 mmol)
de Lys^{0}-actagardina.
Mediante espectrometría de masas se examina el
peso molecular del producto final. Este asciende a
(M+H)^{+}: 2019, correspondiente a la fórmula empírica
C_{87}H_{136}O_{25}N_{22}S_{4}.
189 mg (0,1 mmol) de actagardina se hacen
reaccionar, tal como se ha descrito en el Ejemplo 8, con 33 mg (0,1
mmol) de éster de
Boc-Ile-O-N-hidroxisuccinimida.
Se obtienen 210 mg de
Boc-Ile^{0}-actagardina.
La separación del grupo protector de Boc y la
purificación final proporcionan 84 mg (0,042 mmol) de
Ile^{0}-actagardina.
El peso molecular calculado por espectrometría de
masas asciende a (M+H)^{+}: 2004, correspondiente a la
fórmula empírica C_{87}H_{135}O_{25}N_{21}S_{4}.
94,5 mg (0,05 mmol) de actagardina se hacen
reaccionar, tal como se ha descrito en el Ejemplo 8, con 16,3 mg
(0,05 mmol) de éster para-nitrofenílico de ácido
N-Boc-\alpha-aminobutírico.
Al cabo de 9 días resultan 54 mg de
N-Boc-Abu^{0}-actagardina
y, después de la separación del grupo protector, 19 mg (0,01 mmol)
de
N-\alpha-aminobutiril-actagardina.
Pico molecular (M+H)^{+}: 1976,
correspondiente a la fórmula empírica
C_{85}H_{131}O_{25}N_{21}S_{4}.
94,5 mg (0,05 mmol) de actagardina se hacen
reaccionar, tal como se ha descrito en el Ejemplo 8, con 16,4 mg
(0,05 mmol) de éster
Boc-glutamin-paranitrofenílico.
Después de separar el grupo protector, se obtienen 38 mg (0,019
mmol) de Gln^{0}-actagardina.
Pico molecular (M+H)^{+}: 2019,
correspondiente a la fórmula empírica
C_{86}H_{132}O_{26}N_{22}S_{4}.
94,5 mg (0,05 mmol) de actagardina se hacen
reaccionar, tal como se ha descrito en el Ejemplo 8, con 15,6 mg
(0,05 mmol) de éster de
Boc-Phe-O-N-hidroxisuccinimida.
Después de separar el grupo protector, se obtienen 26 mg (0,013
mmol) de Phe^{0}-actagardina.
Pico molecular (M+H)^{+}: 2038,
correspondiente a la fórmula empírica
C_{90}H_{133}O_{25}N_{21}S_{4}.
94,5 mg (0,05 mmol) de actagardina se hacen
reaccionar durante 3 horas, tal como se ha descrito en el Ejemplo 8,
con 21,7 mg (0,05 mmol) de éster de
Boc-Phe-Ala-O-N-hidroxisuccinimida.
Después de separar el grupo protector, se obtienen 37 mg (0,018
mmol) de
Phe-Ala^{0}-actagardina.
Pico molecular (M+H)^{+}: 2109,
correspondiente a la fórmula empírica
C_{93}H_{138}O_{26}N_{22}S_{4}.
94,5 mg (0,05 mmol) de actagardina se hacen
reaccionar, durante 24 horas, tal como se ha descrito en el Ejemplo
8, con 14,5 mg (0,05 mmol) de éster de
Boc-D-Ala-O-N-hidroxisuccinimida.
Después de separar el grupo protector, se obtienen 47 mg (0,024
mmol) de
D-Ala^{0}-actagardina.
Pico molecular (M+H)^{+}: 1961,
correspondiente a la fórmula empírica
C_{84}H_{129}O_{25}N_{21}S_{4}.
Las Tablas 4 a 6 muestran la actividad
antibacteriana in vitro (valores de CIM [\mug/ml]) de la
actagardina (Acta) y de los compuestos de acuerdo con la
invención.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
(1) INFORMACIÓN GENERAL:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- SOLICITANTE:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: Hoechst Marion Roussel Deutschland GmbH
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CALLE: - -
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- LUGAR: Frankfurt
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- PROVINCIA FEDERAL: - -
\vskip0.333000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Alemania
\vskip0.333000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL: 65926
\vskip0.333000\baselineskip
- (G)
- TELÉFONO: 069-305-40623
\vskip0.333000\baselineskip
- (H)
- TELEFAX: 069-35-7175
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TÍTULO DE LA SOLICITUD: Nuevo lantibiótico relacionado con actagardina, procedimiento para su preparación y uso del mismo
\vskip0.666000\baselineskip
- (iii)
- NÚMERO DE SECUENCIAS: 8
\vskip0.666000\baselineskip
- (iv)
- FORMA LEGIBLE POR ORDENADOR:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- SOPORTE DE DATOS: disco blando
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- ORDENADOR: IBM PC compatible
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- SOFTWARE: PatentIn Release nº 1.0, versión nº 1.25 (OEP)
\vskip0.666000\baselineskip
- (v)
- DATOS DE LA SOLICITUD ACTUAL:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NÚMERO DE SOLICITUD: EP98119105.9
\vskip0.666000\baselineskip
(2) DATOS DE LA SEQ ID NO: 1:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE LA CADENA: cadena sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.666000\baselineskip
- (vi)
- PROCEDENCIA
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- ORGANISMO: Actinoplanes liguriae y/o garbadiensis
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: característica especial
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: 8, 10 y 15
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- DEMÁS DATOS: "Xaa = Abu"
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace tioéter
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 2 a 7
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace tioéter
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 8 a 13
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace tioéter
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 10 a 18
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace sulfóxido
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 15 a 20
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 1:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Ala Ser Gly Trp Val Ala Xaa Leu Xaa Ile
Glu Ala Gly Xaa Val}
\sac{Ile Ala Ala Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) DATOS DE LA SEQ ID NO: 2:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE LA CADENA: cadena sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.666000\baselineskip
- (vi)
- PROCEDENCIA
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- ORGANISMO: Actinoplanes liguriae y/o garbadiensis
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: característica especial
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: 8, 10 y 15
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- DEMÁS DATOS: "Xaa = Abu"
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace tioéter
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 2 a 7
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace tioéter
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 8 a 13
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace tioéter
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 10 a 18
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace sulfóxido
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 15 a 20
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 2:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Lys Ala Ser Gly Trp Val Ala Xaa Leu Xaa Ile
Glu Ala Gly Xaa Val}
\sac{Ile Ala Ala Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) DATOS DE LA SEQ ID NO: 3:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE LA CADENA: cadena sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.666000\baselineskip
- (vi)
- PROCEDENCIA
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- ORGANISMO: Actinoplanes liguriae y/o garbadiensis
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: característica especial
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: 8, 10 y 15
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- DEMÁS DATOS: "Xaa = Abu"
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace tioéter
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 2 a 7
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace tioéter
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 8 a 13
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace tioéter
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 10 a 18
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace sulfóxido
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 15 a 20
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 3:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ile Ala Ser Gly Trp Val Ala Xaa Leu Xaa Ile
Glu Ala Gly Xaa Val}
\sac{Ile Ala Ala Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) DATOS DE LA SEQ ID NO: 4:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE LA CADENA: cadena sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.666000\baselineskip
- (vi)
- PROCEDENCIA
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- ORGANISMO: Actinoplanes liguriae y/o garbadiensis
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: característica especial
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: 8, 10 y 15
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- DEMÁS DATOS: "Xaa = Abu"
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace tioéter
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 2 a 7
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace tioéter
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 8 a 13
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace tioéter
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 10 a 18
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace sulfóxido
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 15 a 20
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 4:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Xaa Ala Ser Gly Trp Val Ala Xaa Leu Xaa Ile
Glu Ala Gly Xaa Val}
\sac{Ile Ala Ala Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) DATOS DE LA SEQ ID NO: 5:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE LA CADENA: cadena sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.666000\baselineskip
- (vi)
- PROCEDENCIA
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- ORGANISMO: Actinoplanes liguriae y/o garbadiensis
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: característica especial
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: 8, 10 y 15
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- DEMÁS DATOS: "Xaa = Abu"
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace tioéter
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 2 a 7
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace tioéter
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 8 a 13
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace tioéter
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 10 a 18
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace sulfóxido
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 15 a 20
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 5:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gln Ala Ser Gly Trp Val Ala Xaa Leu Xaa Ile
Glu Ala Gly Xaa Val}
\sac{Ile Ala Ala Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) DATOS DE LA SEQ ID NO: 6:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE LA CADENA: cadena sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.666000\baselineskip
- (vi)
- PROCEDENCIA
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- ORGANISMO: Actinoplanes liguriae y/o garbadiensis
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: característica especial
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: 8, 10 y 15
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- DEMÁS DATOS: "Xaa = Abu"
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace tioéter
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 2 a 7
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace tioéter
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 8 a 13
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace tioéter
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 10 a 18
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace sulfóxido
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 15 a 20
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 6:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Phe Ala Ser Gly Trp Val Ala Xaa Leu Xaa Ile
Glu Ala Gly Xaa Val}
\sac{Ile Ala Ala Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) DATOS DE LA SEQ ID NO: 7:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE LA CADENA: cadena sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.666000\baselineskip
- (vi)
- PROCEDENCIA
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- ORGANISMO: Actinoplanes liguriae y/o garbadiensis
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: característica especial
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: 9, 11 y 16
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- DEMÁS DATOS: "Xaa = Abu"
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace tioéter
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 3 a 8
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace tioéter
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 9 a 14
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace tioéter
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 11 a 19
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace sulfóxido
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 16 a 21
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 7:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Phe Ala Ala Ser Gly Trp Val Ala Xaa Leu Xaa
Ile Glu Ala Gly Xaa}
\sac{Val Ile Ala Ala Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) DATOS DE LA SEQ ID NO: 8:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE LA CADENA: cadena sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.666000\baselineskip
- (vi)
- PROCEDENCIA
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- ORGANISMO: Actinoplanes liguriae y/o garbadiensis
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: característica especial
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: 1
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- DEMÁS DATOS: "Xaa = D-alanina"
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: característica especial
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: 8, 10 y 15
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- DEMÁS DATOS: "Xaa = Abu"
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace tioéter
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 2 a 7
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace tioéter
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 8 a 13
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace tioéter
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 10 a 18
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: enlace sulfóxido
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: de 15 a 20
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 8:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Xaa Ala Ser Gly Trp Val Ala Xaa Leu Xaa Ile
Glu Ala Gly Xaa Val}
\sac{Ile Ala Ala Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
Claims (16)
1. Compuesto de la fórmula general I
\vskip1.000000\baselineskip
en donde R significa el resto de un aminoácido,
así como sus sales fisiológicamente
compatibles.
2. Compuesto de la fórmula I según la
reivindicación 1, en donde R significa el resto de un aminoácido
natural.
3. Compuesto de la fórmula I según la
reivindicación 2, en donde el aminoácido significa Ala, Ile, Lys,
Phe o Val.
4. Compuesto de la fórmula I según la
reivindicación 1, 2 ó 3, en donde el aminoácido significa Ala.
5. Compuesto de la fórmula I según una o varias
de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el nitrógeno amino del
aminoácido lleva un grupo protector separable.
6. Compuesto de la fórmula empírica:
C_{84}H_{129}N_{21}O_{25}S_{4}
(Ala^{0}-actagardina), obtenible por fermentación
de Actinoplanes liguriae, DSM 11797 o Actinoplanes
garbadiensis, DSM 11796 o de una de sus variantes y/o mutantes
en un medio de cultivo hasta que el compuesto
Ala^{0}-actagardina se acumula en el caldo de
cultivo y mediante subsiguiente aislamiento del compuesto, así como
sus sales farmacológicamente compatibles.
7. Derivados químicos que se derivan de un
compuesto de la fórmula empírica
C_{84}H_{129}N_{21}O_{25}S_{4}
(Ala^{0}-actagardina), obtenible por fermentación
de Actinoplanes liguriae, DSM 11797 o Actinoplanes
garbadiensis DSM 11796 o de una de sus variantes y/o mutantes,
en un medio de cultivo hasta que el compuesto
Ala^{0}-actagardina se acumula en el caldo de
cultivo y mediante subsiguiente aislamiento del compuesto y
transformación en derivados químicos, así como sus sales
farmacológicamente compatibles.
8. Procedimiento para la preparación de un
compuesto según una o varias de las reivindicaciones 1 a 5,
caracterizado porque se hace reaccionar actagardina con un
aminoácido y eventualmente se transforma en sus sales
farmacológicamente compatibles.
9. Procedimiento para la preparación de un
compuesto según una o varias de las reivindicaciones 1 a 5,
caracterizado porque el microorganismo Actinoplanes
liguriae, DSM 11797 o Actinoplanes garbadiensis DSM 11796
o una de sus variantes o mutantes se fermenta en un medio de
cultivo, se aísla un compuesto de la fórmula I y eventualmente se
transforma en sus sales farmacológicamente compatibles.
10. Procedimiento según la reivindicación 9,
caracterizado porque Actinoplanes liguriae, DSM 11797
o Actinoplanes garbadiensis DSM 11796 o sus mutantes y/o
variantes se fermentan, en condiciones aerobias, en medios de
cultivo que contienen una fuente de carbono y nitrógeno así como las
sales inorgánicas usuales y elementos traza.
11. Procedimiento según la reivindicación 9 ó 10,
caracterizado porque la fermentación se lleva a cabo en un
medio nutricio que como fuente de carbono contiene 0,5 a 5% de
manita y 0,5 a 5% de harina de soja.
12. Procedimiento según una o varias de las
reivindicaciones 9 a 11, caracterizado porque la fermentación
se lleva a cabo en condiciones aerobias a una temperatura entre 20 y
35ºC y a un pH entre 4 y 10.
13. Compuesto según una o varias de las
reivindicaciones 1 a 7 para empleo como medicamento.
14. Empleo de un compuesto según una o varias de
las reivindicaciones 1 a 7 para la preparación de un medicamento
para el tratamiento y la profilaxis de enfermedades infecciosas
bacterianas.
15. Medicamento con un contenido en al menos un
compuesto según una o varias de las reivindicaciones 1 a 7 y uno o
varios soportes fisiológicamente aceptables así como, eventualmente,
sustancias coadyuvantes adecuadas.
16. Procedimiento para la preparación de un
medicamento según la reivindicación 15, caracterizado porque
al menos un compuesto según una o varias de las reivindicaciones 1 a
7 se lleva a una forma de administración adecuada con una sustancia
coadyuvante y/o de soporte fisiológica.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19745583A DE19745583A1 (de) | 1997-10-15 | 1997-10-15 | Neues Lantibiotikum verwandt mit Actagardine, Verfahren zur Herstellung und Verwendung derselben |
| DE19745583 | 1997-10-15 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2213862T3 true ES2213862T3 (es) | 2004-09-01 |
Family
ID=7845627
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES98119105T Expired - Lifetime ES2213862T3 (es) | 1997-10-15 | 1998-10-09 | Lantibiotico relacionado con actagardina, procedimiento para su preparacion y empleo del mismo. |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6022851A (es) |
| EP (1) | EP0916680B1 (es) |
| JP (1) | JP3684432B2 (es) |
| KR (1) | KR100482402B1 (es) |
| CN (1) | CN1165547C (es) |
| AR (1) | AR015962A1 (es) |
| AT (1) | ATE258558T1 (es) |
| AU (1) | AU739516C (es) |
| BR (1) | BRPI9803914B1 (es) |
| CA (1) | CA2250630C (es) |
| DE (2) | DE19745583A1 (es) |
| DK (1) | DK0916680T3 (es) |
| ES (1) | ES2213862T3 (es) |
| PT (1) | PT916680E (es) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6861236B2 (en) * | 2002-05-24 | 2005-03-01 | Applied Nanosystems B.V. | Export and modification of (poly)peptides in the lantibiotic way |
| GB0600928D0 (en) * | 2006-01-17 | 2006-02-22 | Novacta Biosystems Ltd | Improvements relating to lantibiotics |
| EP1908774A1 (en) * | 2006-10-06 | 2008-04-09 | sanofi-aventis | Antibacterial and antiviral peptides from Actinomadura namibiensis |
| GB0714030D0 (en) | 2007-07-18 | 2007-08-29 | Novacta Biosystems Ltd | The use of type-B lantibiotic-based compounds having antimicrobial activity |
| GB0714029D0 (en) * | 2007-07-18 | 2007-08-29 | Novacta Biosystems Ltd | Lantibiotic-based compounds having antimicrobial activity |
| AU2008364202A1 (en) * | 2008-11-24 | 2011-07-07 | Sentinella Pharmaceuticals, Inc. ("Sentinella") | Lantibiotic carboxyamide derivatives with enhanced antibacterial activity |
| GB0900599D0 (en) * | 2009-01-14 | 2009-02-18 | Novacta Biosystems Ltd | Treatment |
| DK2387580T3 (da) | 2009-01-14 | 2014-10-13 | Novacta Biosystems Ltd | Deoxyactagardinderivater |
| EA020733B1 (ru) | 2009-02-04 | 2015-01-30 | Новакта Биосистемс Лимитед | Производные актагардина |
| GB201001688D0 (en) | 2010-02-02 | 2010-03-17 | Novacta Biosystems Ltd | Compounds |
| GB201013513D0 (en) | 2010-08-11 | 2010-09-22 | Novacta Biosystems Ltd | Formulations |
| US20140094402A1 (en) * | 2011-03-30 | 2014-04-03 | Sentinella Pharmaceuticals, Inc. | Lantibiotic NAI-802, Pharmaceutically Acceptable Salts, Compositions and Uses Thereof |
| DK3122764T3 (en) * | 2014-03-25 | 2019-04-15 | Lanthiopep Bv | CYCLIC APELINE ANALOGS |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1470407A (en) * | 1974-07-27 | 1977-04-14 | Lepetit Spa | Antibiotic substances |
| GB8507528D0 (en) * | 1985-03-22 | 1985-05-01 | Lepetit Spa | Basis monocarboxyamide derivatives |
| US5512269A (en) * | 1993-06-09 | 1996-04-30 | Burroughs Wellcome, Co. | Method of treating retained pulmonary secretions |
-
1997
- 1997-10-15 DE DE19745583A patent/DE19745583A1/de not_active Withdrawn
-
1998
- 1998-10-09 PT PT98119105T patent/PT916680E/pt unknown
- 1998-10-09 DK DK98119105T patent/DK0916680T3/da active
- 1998-10-09 AT AT98119105T patent/ATE258558T1/de active
- 1998-10-09 ES ES98119105T patent/ES2213862T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-10-09 EP EP98119105A patent/EP0916680B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-10-09 DE DE59810658T patent/DE59810658D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-10-13 AU AU89261/98A patent/AU739516C/en not_active Ceased
- 1998-10-13 AR ARP980105093A patent/AR015962A1/es active IP Right Grant
- 1998-10-13 CA CA002250630A patent/CA2250630C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-10-14 JP JP29202498A patent/JP3684432B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-10-14 US US09/172,042 patent/US6022851A/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-10-15 BR BRPI9803914A patent/BRPI9803914B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-10-15 CN CNB981241085A patent/CN1165547C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-10-15 KR KR10-1998-0043572A patent/KR100482402B1/ko not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE59810658D1 (de) | 2004-03-04 |
| KR19990037179A (ko) | 1999-05-25 |
| PT916680E (pt) | 2004-06-30 |
| CN1165547C (zh) | 2004-09-08 |
| DE19745583A1 (de) | 1999-04-22 |
| ATE258558T1 (de) | 2004-02-15 |
| CA2250630A1 (en) | 1999-04-15 |
| BR9803914A (pt) | 2000-03-28 |
| JP3684432B2 (ja) | 2005-08-17 |
| CN1221752A (zh) | 1999-07-07 |
| AR015962A1 (es) | 2001-05-30 |
| EP0916680A2 (de) | 1999-05-19 |
| DK0916680T3 (da) | 2004-05-24 |
| EP0916680A3 (de) | 2001-10-17 |
| CA2250630C (en) | 2008-07-15 |
| HK1020739A1 (en) | 2000-05-19 |
| AU8926198A (en) | 1999-05-06 |
| AU739516C (en) | 2002-05-02 |
| JPH11193299A (ja) | 1999-07-21 |
| US6022851A (en) | 2000-02-08 |
| BRPI9803914B1 (pt) | 2016-11-01 |
| EP0916680B1 (de) | 2004-01-28 |
| AU739516B2 (en) | 2001-10-11 |
| KR100482402B1 (ko) | 2005-08-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR0174264B1 (ko) | 약리학적 작용을 갖는 악티노플레인스 종으로부터의 리포펩타이드, 이의 제조방법 및 이를 함유하는 약제학적 조성물 | |
| JP3684432B2 (ja) | アクタガルジンに関連した新規なランチビオティック、その製法およびその使用 | |
| EP2076529B1 (en) | Antibacterial and antiviral peptides from actinomadura namibiensis | |
| RU2498995C2 (ru) | Пептиды с большим числом мостиковых связей, выделяемые из actinomadura namibiensis | |
| ES2240434T3 (es) | Tripropaptinas antibioticas y procedimiento para producir las mismas. | |
| JP3111240B2 (ja) | Ｆａ−７０ｄ物質、その製造法及びその用途 | |
| US6331521B1 (en) | Echinocandine derivatives with antimicrobial activity | |
| US5891851A (en) | Antibiotic, feglymycin, processes for its preparation and its use | |
| EP0584360A1 (en) | Wf11243 substance | |
| EP0604945A1 (en) | TAN-1511, its derivatives, production and use thereof | |
| ES2221956T3 (es) | Peptidos de scleroderma texense. | |
| ES2243332T3 (es) | Amicomicina, un procedimiento para su produccion y su uso como producto farmaceutico. | |
| ES2299635T3 (es) | Antibioticos factores a, b, b1 de ge81112, composiciones y sales farmaceuticamente aceptables y su uso. | |
| KR100225601B1 (ko) | 항생물질 wap-8294a와 이의 제조방법 및 항균조성물 | |
| MXPA98008484A (es) | Nuevo lantibiotico relacionado con actagardina, procedimiento para su preparacion y empleo del mismo | |
| KR100474161B1 (ko) | 에어로트리신 유도체, 이의 제조 방법 및 이를 함유하는 약학조성물 | |
| KR20020029769A (ko) | 신규 화합물 에프-15078 | |
| HK1012009B (en) | Lipopeptides from actinoplanes sp. endowed with pharmacological activity, process for their preparation and their use | |
| HK1135708B (en) | Antibacterial and antiviral peptides from actinomadura namibiensis |