ES2214628T3

ES2214628T3 - Compuestos farmaceuticos que comprenden una mezcla de acido hialuronico autorreticulado y acido hialuronico no reticulado y su utilizacion para el tratamiento de artropatias.

Info

Publication number: ES2214628T3
Application number: ES97930376T
Authority: ES
Inventors: Davide Belini; Annamaria Paparella; Michael O'regan; Lanfranco Callegaro
Original assignee: Fidia SpA
Current assignee: Fidia SpA
Priority date: 1996-06-21
Filing date: 1997-06-20
Publication date: 2004-09-16
Anticipated expiration: 2017-06-20
Also published as: IT1288290B1; CA2258920C; WO1997049412A1; ITPD960163A1; DE69727158T2; US6251876B1; DE69727158D1; AU3435497A; JP2000512650A; AU732979B2; CA2258920A1; ATE257386T1; EP0954323A1; EP0954323B1; HK1024865A1

Abstract

LA INVENCION SE REFIERE A COMPOSICIONES QUE COMPRENDE UNA FORMA AUTORRETICULADA DE UN ACIDO HIALURONICO SOLO O COMO UN PRIMER COMPONENTE EN UNA MEZCLA CON UN SEGUNDO COMPONENTE DE ACIDO HIALURONICO NO RETICULADO, Y POSIBLEMENTE TAMBIEN EN COMBINACION CON OTRA SUBSTANCIA FARMACOLOGICAMENTE ACTIVO. ESTAS COMPOSICIONES PUEDEN UTILIZARSE EN EL TRATAMIENTO DE ARTROPATIAS DEBIDO A SUS PROPIEDADES VISCOELASTICAS UNICAS.

Description

Compuestos farmacéuticos que comprenden una mezcla de ácido hialurónico autorreticulado y ácido hialurónico no reticulado y su utilización para el tratamiento de artropatías.

Características de la invención

La presente invención se refiere a compuestos que contienen una forma autorreticulada de ácido hialurónico como primer componente, en mezcla con un segundo componente de ácido hialurónico no reticulado y, posiblemente, asimismo en combinación con otras sustancias farmacológicamente activas. Estos compuestos pueden ser utilizados en el tratamiento de artropatías debido a sus especiales características viscoelásticas.

Antecedentes de la invención

El ácido hialurónico (HA) es un polisacárido natural de la familia de los glicosaminoglicanos, que está presente en concentración particularmente elevada en los cartílagos y fluido sinovial de las uniones articulares. Se ha demostrado que el fluido sinovial actúa como líquido viscoso para cizalladura reducida (correspondiente a una unión con movimiento lento) pero muestra un comportamiento elástico con fuerzas de cizalladura elevadas (correspondiendo a una unión en movimiento rápido) (Balazs E.A., Univ. Of Michigan, Med. Ctr. J. (Special Arthritis Issue), Diciembre 1968, 255).En pacientes con artropatías tales como osteoartritis y artritis reumatoide, las características viscoelásticas del fluido sinovial se encuentran comprometidas y esto se ha demostrado que refleja una disminución de la contribución viscoelástica proporcionada por el componente HA (Kobayashi Y., y otros, Biorheology, 1994, 31, 235-244). Esto es claramente evidente de la figura 1 que muestra los perfiles reológicos del fluido sinovial procedente de las uniones de voluntarios sanos y de donantes osteoartríticos ("The Rheological and Biological Function of Hyaluronic Acid", E.A. Balazs, D.A. Gibbs, in Chemistry and Molecular Biology of the Intercellular Matrix, ed. de E.A. Balazs, Academic Press, 1970). En fluido sinovial normal, a diferencia del caso de la osteoartritis, los valores de la viscoelasticidad son altos y G'y G'' se cruzan entre sí. La existencia de este punto de cruzamiento está relacionada no solamente con la concentración de HA (2-4 mg/ml), sino también y, por encima de todo, con su elevado peso molecular (aproximadamente 4-5 millones). En sujetos osteoartríticos, por otra parte, existe degradación de ácido hialurónico, con la consiguiente reducción de su peso molecular, y una disminución de su concentración (1-2 mg/ml).

La administración de HA exógeno, altamente purificado, por inyección intra-articular se ha demostrado que es eficaz en el tratamiento de la osteoartritis. Esto es debido no solamente a las características viscoelásticas exclusivas del HA, sino también a sus características farmacológicas potenciales. En realidad, los productos comerciales basados en HA que son comercializados actualmente para el tratamiento de la osteoartritis por inyección intra-articular reflejan dos escuelas referentes a la forma de acción del HA en el tratamiento de estas patologías. Existen pruebas de que el HA sin modificar muestra actividad farmacológica además de provocar un restablecimiento transitorio de las características viscoelásticas del fluido sinovial (G. Abatangelo y M. O'Regan, Eur. J. Rheumatol. Inflamm., 1995, 15, 1:9-16; P. Ghosh, Clin Exp. Rheumatol., 1993, 12, 1-8; R.K. Strachan y otros, An. Rheum. Dis., 1990, 49:949-952). Por otra parte, los fabricantes de derivados de HA químicamente reticulados sostienen la hipótesis de que sus derivados actúan únicamente por medios mecánicos (E.A. Balazs y J.L. Denlinger, J. Rheumatology, 1993, vol. 20, suplemento 39: 3-9).

El documento WO 89 10941 da a conocer solamente ácido hialurónico autorreticulado.

Adams y otros (Osteoarthritis and Cartilage (1995) 3, 213-226) dan a conocer un estudio clínico sobre la utilización de G-F 20, preparado de hialuronán reticulado solo o en combinación con medicamentos antiinflamatorios para el tratamiento continuo de osteoartritis de la rodilla con medicamentos antiinflamatorios no esteroides (NSAID). El documento D2 no indica o ni siquiera sugiere la utilización de una mezcla de HA reticulado y no reticulado.

Otras formas de artropatía además de la osteoartritis pueden resultar de modificaciones de las características viscoelásticas del fluido sinovial de las uniones articulares que pueden tener lugar como resultado de operaciones mecánicas o quirúrgicas específicas llevadas a cabo en la unión, tal como inmovilización después de distorsión de la unión o reparación de fracturas y artroscopia de la unión. En el tratamiento de las consecuencias funcionales de estas intervenciones, el potencial de lubrificación de HA o derivados del mismo puede ser más pertinente que los efectos farmacológicos a largo plazo de los compuestos. Además, es conocido que el HA tiene una rápida transformación en la unión (Brown T.J. y otros, Exp. Physiol., 1991, 76, 125-134; Fraser, J.R.E. y otros, Semin. Arthritis Rheum., 1993, 22 (Suppl. 1), 9-17; Laurent U.B.G. y otros, Matrix, 1992, 12, 130-6). Por lo tanto, otro objetivo de las formulaciones descritas en la presente invención consiste en incrementar el tiempo de permanencia del HA exógeno que es inyectado en las uniones para el tratamiento de artropatías.

Objetivos de la invención

Por lo tanto, es un objetivo de la presente invención dar a conocer nuevos compuestos de ácido hialurónico (HA) y polisacárido autorreticulado (ACP), posiblemente juntos con un excipiente farmacéutico adecuado o portador y/o medicamento para utilización intra-articular, cuyos compuestos muestran las características viscoelásticas apropiadas para el tratamiento de artropatías.

Otro objetivo de la presente invención consiste en conseguir compuestos que actúan como depósitos de HA natural.

Otro objetivo de la presente invención consiste en utilizar un compuesto basado en HA y ACP que muestra características apropiadas de viscoelasticidad y tiempo de permanencia dentro de la unión para el tratamiento de artropatías.

Los objetivos anteriormente indicados y otros se consiguen de acuerdo con la presente invención al dar a conocer una forma autorreticulada del ácido hialurónico como primer componente en mezclas que contienen, como segundo componente, ácido hialurónico no autorreticulado, de manera que las proporciones relativas del ácido hialurónico autorreticulado y ácido hialurónico no autorreticulado son de 95:05 hasta 05:95.

Breve descripción de los dibujos

La presente invención se ha mostrado adicionalmente en los dibujos adjuntos, en los que:

La figura 1 muestra espectros viscoelásticos de fluido sinovial humano procedente de donantes sanos jóvenes, donantes sanos de edad, y de donantes osteoartríticos;

Las figuras 2A-2D muestran espectros viscoelásticos para diferentes proporciones relativas de mezclas de ACP/HA en tampón fosfato, Cp=1% p/p, T=25º (G'(º); G'', (\bullet); \eta*, (v);

La figura 3 muestra el módulo de almacenamiento (G') (º) y el módulo de pérdida (G'') (\bullet) como función del contenido de ACP (%). Frecuencia = 0,72 rad/s (correspondiendo al movimiento de la unión a ritmo normal de andar), T=25ºC;

La figura 4 muestra una comparación de las viscosidades dinámicas de las formulaciones de ACP/HA en varias proporciones distintas;

La figura 5 muestra el espectro viscoelástico de una formulación de ACP/HA, 100/0; ACP 20%, 0,5% H_{2}O;

La figura 6 muestra el espectro viscoelástico de una formulación de ACP/HA, 75/25; ACP 20%, 0,5% H_{2}O;

La figura 7 muestra el espectro viscoelástico de una formulación de ACP/HA, 50/50; ACP 5%, 0,5% H_{2}O;

La figura 8 muestra el espectro viscoelástico de una formulación de ACP/HA, 50/50; ACP 20%, 0,5% H_{2}O;

La figura 9 muestra la comparación de las viscosidades dinámicas de las formulaciones de ACP/HA, 100/0; ACP 20%, 10%, y 5%, 0,5% H_{2}O;

La figura 10 muestra la comparación de las viscosidades dinámicas de las formulaciones de ACP/HA, 50/50; ACP 20%, 10%, y 5%, 0,5% H_{2}O;

La figura 11 muestra la comparación de las viscosidades dinámicas de las formulaciones de ACP/HA, 40/60; ACP 20% y 5%, 0,5% H_{2}O;

La figura 12 muestra el espectro viscoelástico de fluido sinovial de un caballo no afectado de osteoartritis;

La figura 13 muestra el espectro viscoelástico de ACP/HA, 100/0; ACP 10%, 0,5% H_{2}O;

La figura 14 muestra el espectro viscoelástico de fluido sinovial procedente de un caballo no osteoartrítico con la adicción de ACP 100/0, 10%, 0,5% H_{2}O, 3,3 mg/ml;

La figura 15 muestra el espectro viscoelástico de fluido sinovial procedente de un caballo no osteoartrítico con la adicción de ACP 100/0, 10%, 0,5% H_{2}O, 5,5 mg/ml;

La figura 16 muestra la comparación de las viscosidades dinámicas de ACP, Synvisc, Fermentech, Artz y Hyalgan.

Descripción detallada de la invención

Es un objetivo de la presente invención dar a conocer una nueva formulación capaz de mejorar la viscoelasticidad y tiempo de residencia sinovial de HA exógeno que es inyectado en las uniones para el tratamiento de las artropatías.

Esta formulación consiste en HA autorreticulado, como primer componente en mezclas que contienen como segundo componente ácido hialurónico no autorreticulado, en el que las proporciones relativas del ácido hialurónico autorreticulado con respecto al ácido hialurónico no autorreticulado son de 95:05 a 05:95. En estas formulaciones el polisacárido autorreticulado (ACP) se obtiene mediante un proceso de autorreticulado que conduce a la formación de enlaces intra e intercadena de éster sin introducir puentes extraños entre las cadenas de polímero, tal como se describen en la Patente EP 0341745 B1.

El componente ACP se puede sintetizar a partir de HA teniendo un peso molecular comprendido en la gama de 50 kDa a 5.000 kDa y debe tener una pureza de calidad farmacéutica así como un nivel de reticulación que está comprendido entre 1% y 30% con respecto a los grupos carboxilo del polímero.

Se incluyen entre los ejemplos preferentes del componente ACP: ACP 5, ACP 10, ACP 15 y ACP 20 en el que los números 5, 10, 15 y 20 reflejan el nivel nominal de reticulación basándose en la estequiometría de la reacción química.

Estos derivados de HA autorreticulados pueden ser utilizados, por lo tanto, de modo ventajoso en la preparación de suspensiones para el tratamiento de artropatías debido a su viscoelasticidad mejorada con respecto al HA natural, que es liberado en la degradación de estos derivados autorreticulados. Por lo tanto, los derivados HA de ACP constituyen materiales viscoelásticos ideales además de ser una reserva de HA natural que es liberado lentamente en la degradación, teniendo como resultado la prolongación del tiempo de contacto del HA natural con los tejidos de la unión. La seguridad de estos derivados HA autorreticulados es asimismo potencialmente mejor que los derivados HA producidos por reacciones alternativas de reticulación dado que el HA nativo que se libera por la degradación de ACP es metabolizado por rutas metabólicas fisiológicas.

Además, teniendo en cuenta el comportamiento tipo gel del ACP en medios acuosos (Mensitieri y otros, Abstract, "12th European Conference on Biomaterials" Porto Portugal, Sept. 10-13, 1995), es posible por combinación de HA con sus derivados ACP para obtener una amplia gama de sistemas que pueden combinar las características viscoelásticas y de reserva.

Las características reológicas no ideales del ACP sólo pueden ser compensadas por la preparación de compuestos farmacéuticos que están constituídos por mezclas de ACP y HA sin modificar con proporciones variables de los dos compuestos de acuerdo con el estado del paciente y de la articulación a tratar.

Las proporciones relativas de ACP y HA utilizados en las formulaciones de la presente invención incluyen en general ACP/HA en cantidades relativas de 95:05 hasta aproximadamente 05:95. Las proporciones preferentes para las formulaciones de ACP/HA comprenden ACP/HA con proporciones aproximadas desde 75:25 hasta 25:75.

Las formulaciones ACP/HA de la presente invención se pueden constituir en compuestos farmacéuticos y se pueden combinar con medicamentos activos farmacéuticamente apropiados, tales como anestésicos, antibióticos, medicamentos antiinflamatorios esteroides y no esteroides, agentes antiinflamatorios de tipo hormonal, tales como somatostatina, vitaminas epiteliotróficas, citoquinas tales como IL-1 e IL-6, receptores de citoquinas, factores de crecimiento tales como FGF y excipientes aceptables. Además, es posible utilizar compuestos farmacéuticos partiendo de mezclas de ACP y HA en las que el HA se ha salificado con sales de plata, cobre, zinc y calcio. Estos compuestos farmacéuticos se pueden formular en preparados semisólidos o líquidos para utilización intra-articular.

La cantidad total de HA, en forma de ACP o de HA, se encuentra en una gama de 3-50 mg. Una dosificación apropiada es la que contiene una cantidad total de HA contenido en los compuestos farmacéuticos, en forma de ACP o de HA, de 20 mg en un volumen final de 2 ml de un excipiente farmacéutico adecuado.

1. Producto autorreticulado polisacárido (ACP)

Los derivados ACP utilizados en el presente compuesto son derivados autorreticulados de ácido hialurónico. En estos derivados, la totalidad o una parte de los grupos carboxilo del ácido hialurónico son esterificados con grupos de hidroxilo de la misma molécula y/o de distintas moléculas de ácido hialurónico (HA), formando por lo tanto lactona o uniones éster intermoleculares. Estos ésteres "internos" de HA, en los que no hay intervención por grupos OH de otros alcoholes, se pueden definir también como "polisacáridos autorreticulados", dado que la formación de reticulación mono o polimolecular es la consecuencia de la esterificación interna antes mencionada. El adjetivo "reticulado" se refiere a las conexiones cruzadas entre los carboxilos y los hidroxilos de las moléculas de polisacáridos.

Los ésteres internos pueden ser totales o parciales, dependiendo de si la totalidad o solamente una parte de las funciones carboxi están esterificadas en la forma mencionada. En los ésteres parciales internos, otras funciones carboxi pueden ser esterificadas de manera total o parcial con alcoholes monovalentes o polivalentes formando, de este modo, grupos éster "externos", y en ésteres parciales de ambos grupos éster, las funciones carboxi no esterificadas pueden encontrarse libres o salificadas con metales o bases orgánicas.

Los ésteres internos utilizados en la presente invención pueden ser preparados por el método descrito en la patente EP 0 341 745 B1 que comporta la activación de los grupos carboxi por la adición de sustancias capaces de inducir dicha activación. Los productos intermedios e inestables obtenidos a partir de la reacción de activación se separan espontáneamente, bien sea después de la adición de catalizadores y/o después de un aumento de la temperatura, formando los enlaces internos de éster antes mencionados con hidroxilos de la misma molécula de HA u otra. De acuerdo con el grado de esterificación interna deseado, la totalidad o una parte alícuota de las funciones carboxi son activadas (siendo obtenida la parte alícuota utilizando un exceso de sustancias activadoras o por métodos de dosificación adecuados).

Los grupos carboxi a convertir en grupos éster internos pueden ser activados partiendo de polisacáridos que contienen grupos carboxi libres o, preferentemente, a partir de polisacáridos que contienen grupos carboxi salificados, por ejemplo, sales metálicas, preferentemente metales alcalinos o alcalino-térreos y, sobre todo, con sales de amonio cuaternarias, tales como las que se describen a continuación. No obstante, también se pueden utilizar sales con bases orgánicas, tales como aminas, como sustancias iniciales.

El número de funciones carboxi a convertir en ésteres internos se encuentra en proporción con el número de funciones carboxi activadas y este número depende de la calidad del agente de activación utilizado. Por lo tanto, a efectos de obtener ésteres internos totales, se debe utilizar un exceso de agentes activantes, mientras que en el caso de ésteres parciales, la cantidad de este agente se tiene que dosificar de acuerdo con el grado de esterificación deseado.

Los grupos carboxi que se encuentran todavía libres o salificados después de la reacción de reticulación se pueden intercambiar a efectos de obtener las sales oportunas o se pueden esterificar con alcoholes monovalentes o polivalentes obteniendo, de esta forma, ésteres mixtos, parcialmente reticulados y parcialmente esterificados exteriormente. Desde luego, la esterificación parcial con alcoholes se puede llevar a cabo antes de la activación de parte de los grupos carboxi y subsiguiente conversión en ésteres internos.

En los productos reticulados producidos, los grupos carboxi libres restantes o los que adoptan forma de sales pueden ser esterificados en manera total o parcial con alcoholes mono o polivalentes, obteniendo de esta manera ésteres mixtos con enlaces que son en parte internos y en parte externos. Los alcoholes utilizados para esta esterificación corresponden a los descritos a continuación y de los que se derivan los ésteres mixtos.

De acuerdo con el documento EP 0 216 453 A1, los ésteres externos pueden ser preparados ventajosamente empezando con sales de amonio cuaternario con el agente eterificante en un disolvente aprótico, tal como dialquisulfóxidos, dialquilcarboxilamidas, tales como en particular alquil dialquilsulfóxidos de cadena corta con un máximo de 6 átomos de carbono, particularmente dimetilsulfóxido, y alquil dialquilamidas de cadena corta de ácidos alifáticos de cadena corta, tales como dimetil o dietil formamida o dimetil o dietil acetamida. La reacción se tiene que llevar a cabo preferentemente dentro de una gama de temperatura entre unos 25º y 75º grados, por ejemplo unos 30º. La esterificación es llevada a cabo preferentemente por adición gradual del agente eterificante a la sal amónica antes mencionada disuelta en uno de los disolventes indicados, por ejemplo en dimetilsulfóxido.

En los ésteres internos, los grupos carboxi que han quedado todavía intactos se pueden salificar con bases orgánicas o inorgánicas. La elección de bases para la formación de dichas sales se basa en la utilización deseada para el producto. Las sales inorgánicas son preferentemente las de metales alcalinos, tales como sales de sodio o potasio o sales amónicas, sales de cesio, sales de metales alcalino térreos, tales como calcio, magnesio o aluminio.

Las sales de bases orgánicas son especialmente las de aminas alifáticas, aralifáticas, cicloalifáticas o heterocíclicas. Las sales amónicas de este tipo se pueden derivar de aminas, inactivas, pero terapéuticamente aceptables, o de aminas con acción terapéutica. De las primeras, se debe dar consideración especial a las aminas alifáticas, por ejemplo, mono, di y trialquilaminas, grupos alquilo con un máximo de 18 átomos de carbono, o arilalquilaminas con el mismo número de átomos de carbono en la parte alifática y en las que arilo significa un grupo de benceno posiblemente sustituido por 1 a 3 grupos hidroxi. Como aminas terapéuticamente aceptables, pero no activas en sí mismas, son muy apropiadas las aminas cíclicas, tales como alquilen aminas con anillos de 4 a 6 átomos de carbono, posiblemente interrumpidos en el anillo por eteroátomos, tales como oxígeno, azufre y nitrógeno, tales como piperidina, morfolina o piperazina, o se puede substituir, por ejemplo, por funciones amino o hidroxi, tal como el caso de aminoetanol, etilén diamina o colina.

En los derivados ACP que tienen también funciones carboxi esterificadas con alcoholes monovalentes o polivalentes, tanto si estas funciones se encuentran presentes en los materiales iniciales del proceso antes mencionado o si se introducen al final del procedimiento, los alcoholes pueden corresponder a las series alifática, aralifática, alicíclica o heterocíclica.

Los alcoholes de las series alifáticas a utilizar como componentes esterificantes son, por ejemplo, los que tienen un máximo de 34 átomos de carbono, que pueden ser saturados o no saturados y que pueden estar también posiblemente sustituidos por otros grupos funcionales libres o funcionalmente modificados, tales como amino, hidroxilo, aldehído, ceto, mercapto, carboxi o por grupos que derivan de éstos, tales como hidrocarbilo o dihidrocarbilamino (significando en este caso y a continuación el término "hidrocarbilo" no solamente radicales monovalentes de carbohidratos, por ejemplo, del tipo C_{n}H_{2n+1'}, sino también radicales bivalentes o trivalentes, tales como "alquilenos" C_{n}H_{2n} o "alquilidenos" C_{n}H_{2n}), grupos éter o éster, grupos acetal o cetal, grupos tioéter o tioéster, y grupos carboxi esterificados o grupos carbamídicos y carbamídicos substituidos por uno o dos grupos hidrocarbilo, por grupos nitrito o halógenos. De los grupos anteriores que contienen radicales hidrocarbilo, éstos deben ser preferentemente radicales alifáticos de cadena corta, tales como los alquílicos, con un máximo de 6 átomos de carbono. Estos alcoholes pueden ser interrumpidos a continuación en la cadena de átomos de carbono por eteroátomos, tales como átomos de oxígeno, nitrógeno y azufre.

Es preferible escoger alcoholes substituidos con uno o dos de los grupos funcionales antes mencionados. Los alcoholes del grupo anterior preferibles para los objetivos de la presente invención son aquellos que tienen un máximo de 12 y especialmente 6 átomos de carbono y en los que los radicales hidrocarbilo de los grupos anteriormente mencionados amino, éter, éster, cioéter, tioéster, acetal, cetal, representan grupos alquilo con un máximo de 4 átomos de carbono y, asimismo en los grupos carboxi esterificados o grupos carbamídicos substituidos o grupos hidrocarbilo son alquilos con el mismo número de átomos de carbono, y en los que los grupos amino o carbamídicos pueden ser grupos alquilen amina o alquileno carbamídico con un máximo de 8 átomos de carbono. De estos alcoholes, son de especial interés los que son saturados y no substituidos tales como metil, etil, propil, isopropil alcoholes, n-butil alcohol, isobutil alcohol, tertbutil alcohol, alcoholes amílicos, alcoholes pentílico, hexílico, octílico, nonílico y dodecílico y sobre todo los que tienen una cadena lineal, tales como alcoholes n-octílico y n-dodecílico. De los alcoholes substituidos de este grupo son preferentes: alcoholes bivalentes tales como etilén glicol, propilén glicol, butilén glicol, alcoholes trivalentes tales como glicerina, aldehído alcoholes tales como alcohol tartrónico, carboxi alcoholes tales como ácidos lácticos, por ejemplo, ácido glicólico, ácido málico, ácidos tartáricos, ácido cítrico, aminoalcoholes, tales como aminoetanol, aminopropanol, n-aminopropanol, n-aminobutanol y sus dimetil y dietil derivados en la función amínea, colina, pirrolidiniletanol, piperidiniletanol, piperaciniletanol y los derivados correspondientes de alcoholes n-propílico o n-butílico, monotioetilenglicol y sus alquil derivados, por ejemplo, el derivado etílico en la función mercapto.

De los alcoholes saturados alifáticos de cadena larga, se pueden indicar los siguientes como ejemplos: alcohol cetílico y alcohol miricílico, pero de especial importancia a los efectos de la presente invención son los alcoholes no saturados de cadena más larga con uno o dos dobles enlaces, tales como los contenidos en muchos aceites esenciales y que tienen afinidad con terpenos, tales como citronelol, geraniol, nerol, nerolidol, linalool, farnesol, fitol. De los alcoholes no saturados de cadena corta, los que se deben considerar son alcohol alílico y alcohol propargílico.

De los alcoholes aralifáticos son preferentes aquellos que tienen solamente un residuo bencénico y en los que la cadena alifática tiene un máximo de 4 átomos de carbono y en los que el residuo de benceno puede ser substituido por 1 a 3 grupos metilo o hidroxi o por átomos de halógeno, especialmente cloro, bromo, yodo, y en los que la cadena alifática puede ser substituida por una o varias funciones escogidas entre los grupos que comprenden grupos amino libres o grupos mono o dimetilo o por grupos pirrolidina o piperidina. De estos alcoholes, los más preferentes son alcohol bencílico y alcohol fenetílico.

Los alcoholes de las series cicloalifática o alifática cicloalifática pueden derivar de carbohidratos mono o policíclicos, pudiendo tener preferentemente un máximo de 34 átomos de carbono, pudiendo ser no substituidos y pudiendo contener uno o varios substituyentes, tales como los mencionados anteriormente para los alcoholes alifáticos. De los alcoholes derivados de carbohidratos cíclicos de un solo anillo, son preferibles aquellos que tienen un número máximo de 12 átomos de carbono, poseyendo los anillos preferentemente entre 5 y 7 átomos de carbono, que pueden ser substituidos, por ejemplo, por uno a tres grupos alquilo inferiores, tales como grupos metil, etil, propil o isopropil. Como alcoholes específicos de este grupo se pueden citar ciclohexanol, ciclohexanediol, 1,2,3, ciclohexanetriol y 1,3,5 ciclohexanetriol (floroglucitol), inositol, así como los alcoholes que se derivan de p-mentano, tales como carvomentol, mentol, \alpha y \gamma-terpineol, 1-terpinenol, 4-terpinenol y piperitol, o bien la mezcla de estos alcoholes como "terpineol", 1,4-y 1,8-terpina. De los alcoholes derivados de carbohidratos con anillos condensados, por ejemplo los de tujano, pinano o canfano, son también útiles tujanol, sabinol, hidrato de pinol, D y L-borneol y D y L-isoborneol.

Los alcoholes alifáticos-cicloalifáticos policíclicos a utilizar para los ésteres de la presente invención son esteroles, ácidos cólicos y esteroides, tales como las hormonas sexuales y sus análogos sintéticos, y en particular corticosteroides y sus derivados. Por lo tanto, es posible utilizar, por ejemplo: colesterol, dihidrocolesterol, epidihidrocolesterol, coprostanol, epicoprostanol, sitosterol, estigmasterol, ergosterol, ácido cólico, ácido desoxicólico, ácido litocólico, estriol, estradiol, equilenín, equilín y sus alquil derivados, así como los etinil o propinil derivados en posición 17, por ejemplo, 17-\alpha-etinil-estradiol o 7-\alpha-metil-17-\alpha-etinil-estradiol, pregnenolona, pregnanediol, testosterona y sus derivados, tales como 17-\alpha-metiltestosterona, 1,2-dehidrotestosterona y 17-\alpha-metil-1,2-dehidrotestosterona, alquinil derivados en posición 17 de testosterona y de 1,2-dehidrotestosterona, tales como 17-\alpha-etiniltestosterona, 17-\alpha-propiniltestosterona, norgestrel, hidroxiprogesterona, corticosterona, deoxicorticosterona, 19-nortestosterona, 19-nor-17-\alpha-metiltestosterona y 19-nor-17-\alpha-etiniltestosterona, cortisona, hidrocortisona, prednisona, prednisolona, fludrocortisona, dexametasona, betametasona, parametasona, flumetasona, fluocinolona, fluprednilidona, clobetasol, beclometasona, aldosterona, desoxicorticosterona, alfaxolona, alfadolona, bolasterona.

Son componentes esterificantes útiles para los ésteres de la presente invención las geninas, (aglicones) de glicósidos cardioactivos, tales como digitoxigenina, gitoxigenina, digoxigenina, estrofantidina, tigogenina, saponinas.

Otros alcoholes a utilizar según la invención son alcoholes vitamina tales como axeroftol, vitaminas D_{2} y D_{3}, aneurina, lactoflavina, ácido ascórbico, riboflavina, tiamina, ácido pantoténico.

Los alcoholes heterocíclicos pueden ser considerados derivados de los mencionados alcoholes cicloalifáticos o alifático-cicloalifáticos, si sus cadenas lineales o cíclicas están interrumpidas por uno o varios eteroátomos, por ejemplo entre uno y tres, eteroátomos escogidos del grupo formado por - O -, - S -, - N y -NH y en éstos pueden presentarse uno o varios enlaces no saturados por ejemplo dobles enlaces, particularmente entre uno y tres, incluyendo, de este modo, asimismo compuestos heterocíclicos con estructuras aromáticas. Los siguientes son ejemplos específicos útiles: alcohol furfurílico, alcaloides y derivados tales como atropina, escopolamina, cinconina, cinconidina, quinina, morfina, codeína, nalorfina, bromuro de N-butilescopolamonio, ajmalina; feniletilaminas tales como efedrina, isoproterenol, epinefrina; fenotiacina, medicamentos tales como perfenacina, pipotiacina, carfenacina, homofenacina, acetofenacina, flufenacina, cloruro de N-hidroxietilprometacina; medicamentos de tioxanteno tales como flupentizol y clopentixol; anticonvulsivos tales como meprofendiol; antipsicóticos tales como opipramol; antieméticos tales como oxipendil; analgésicos tales como carbetidina y fenoperidina y metadol; hipnóticos tales como etodroxicina; anoréxicos tales como bencidrol y difemetoxidina; tranquilizantes ligeros tales como hidroxicina; relajantes musculares tales como cinamedrina, difilina, mefenesina, metocarbamol, clorofenesina, 2,2-dietil-1,3-propanediol, guaifenesina, idrocilamida; vasodilatadores coronarios tales como dipiridamol y oxifedrina; bloqueadores adrenérgicos tales como propanalol, timolol, pindolol, bupranolol, atenolol, metropolol, practolol; antineoplásicos tales como 6-azauridina, citarabina, floxuridina; antibióticos tales como cloramfenicol, tiamfenicol, eritromicina, oleandomicina, lincomicina; antivíricos tales como idoxuridina; vasodilatadores periféricos tales como isonicotinil alcohol; inhibidores de la anhidrasa carbónica tales como sulocarbilato; antiasmáticos y antiinflamatorios tales como tiaramida; sulfamidas tales como 2-p-sulfanilanilinoetanol.

2. El ácido hialurónico

En la presente invención, el ácido hialurónico (HA) sirve como material inicial para la preparación de los derivados ACP, o como segundo componente en combinación con derivados ACP. El HA reticulado puede utilizar, como material inicial, cualquier HA natural o sintético.

El substrato de ácido hialurónico puede ser de cualquier origen, tal como ácidos extraídos de los materiales iniciales naturales antes mencionados, por ejemplo, crestas de pollos. Las formulaciones ACP/HA de la presente invención utilizan ácido hialurónico aislado de fuentes bacterianas (WO 95/04132) o animales (EP 0138572; WO 92/18543) o ácido hialurónico producido por síntesis enzimática in vitro (WO 95/24497). De acuerdo con la invención es preferible utilizar ácidos hialurónicos que constituyen fracciones moleculares de los ácidos integrales obtenidos directamente por extracción de materiales orgánicos con una amplia gama de pesos moleculares, por ejemplo, entre 90%-80% y 0,2% del peso molecular del ácido integral, preferentemente entre 5% y 0,2%. Estas fracciones pueden ser obtenidas por diferentes procedimientos descritos en la literatura, es decir, por hidrolización, oxidación o agentes químicos enzimáticos o procedimientos físicos, por ejemplo, procedimientos mecánicos o de irradiación, y frecuentemente durante los mismos procesos de purificación, se pueden formar extractos primordiales. La separación y purificación de las fracciones moleculares obtenidas tienen lugar por medio de técnicas conocidas, tales como filtración molecular. Una fracción de HY purificada adecuada para su utilización de acuerdo con la invención es, por ejemplo, la conocida como "hialuronato sódico no inflamatorio-NIF-NaHA", descrito por Balazs en el folleto "Healon" - A guide to its use in Opthalmic Surgery - D. Miller & R. Stegmann, eds. John Wiley & Sons N.Y 81983:pág.5.

Son asimismo particularmente importantes como materiales iniciales para los ésteres ACP dos fracciones purificadas que pueden ser obtenidas a partir de ácido hialurónico, por ejemplo, la extraída a partir de crestas de pollos, conocida con los nombres "Hyalastine" y "Hyalectin". La fracción de Hyalastine tiene un peso molecular promedio aproximado de 50.000 a 100.000, mientras que la fracción de Hyalectin tiene un peso molecular promedio aproximado de 500.000 a 730.000. Una fracción combinada de estas dos fracciones ha sido también aislada y caracterizada poseyendo un peso molecular promedio comprendido aproximadamente entre 250.000 y 350.000. Esta fracción combinada puede ser obtenida con un rendimiento de 80% del total del ácido hialurónico disponible en el material inicial específico, mientras que la fracción Hyalectin puede ser obtenida con un rendimiento de 30% y la fracción Hyalastine con un rendimiento de 50% del HY inicial. La preparación de estas fracciones se describe en la publicación de patente europea antes mencionada No. 0138572A3.

La invención se ha mostrado en los ejemplos ilustrativos siguientes.

3. Preparación de derivados ACP Ejemplo 1 Preparación de ácido hialurónico reticulado (HY)

Descripción del producto:

1% de grupos carboxi utilizados en esterificación interna.

99% de grupos carboxi salificados con sodio.

6,21 gr de sal de HY tetrabutilamonio con un peso molecular de 170.000 correspondientes a 10 mEq de una unidad monómera se solubilizan en 248 ml de DMSO a 25ºC, añadiéndose 0,01 gr (0,1 mEq) de trietilamina y la solución resultante es agitada durante 30 minutos.

Una solución de 0,026 g (0,1 mEq) de yoduro de 2-cloro-1-metilpiridinio en 60 ml de DMSO es añadida lentamente gota a gota en un intervalo de 1 hora y la mezcla se mantiene durante 15 horas a 30ºC.

Se forma una solución con 100 ml de agua y 2,5 g de cloruro sódico que se añade y la mezcla resultante es vertida lentamente en 750 ml de acetona, manteniendo agitación continua. Se forma un precipitado que es filtrado y lavado tres veces con 100 ml de acetona/agua 5:1 y tres veces con 100 ml de acetona y finalmente se seca en vacío durante 24 horas a 30ºC.

Se obtienen 3,97 gr del compuesto del título. La determinación cuantitativa de los grupos éster se lleva a cabo de acuerdo con el método de saponificación descrito en las páginas 169-172 de "Quantitative Organic Analysis Via Functional Groups" 4ª Edición John Wiley and Sons Publication.

Ejemplo 2 Preparación de ácido hialurónico reticulado (HY)

Descripción del producto:

5% de grupos carboxi utilizados en esterificación interna.

95% de grupos carboxi salificados con sodio.

6,21 gr de sal de HY tetrabutilamonio con un peso molecular de 85.000 correspondiendo a 10 mEq de una unidad monómera se solubilizan en 248 ml de DMSO a 25ºC, se añaden 0,051 gr (0,5 mEq) de trietilamina y la solución resultante es agitada durante 30 minutos.

Una solución de 0,128 gr (0,5 mEq) de yoduro de 2-cloro-1-metilpiridinio en 60 ml de DMSO es añadida lentamente gota a gota a lo largo de un intervalo de tiempo de 1 hora y la mezcla es mantenida durante 15 horas a 30ºC.

Una solución formada por 100 ml de agua y 2,5 gr de cloruro sódico es añadida a continuación y la mezcla resultante es vertida a continuación lentamente en 750 ml de acetona, manteniendo agitación continua. Se forma un precipitado que a continuación es filtrado y lavado tres veces en 100 ml de acetona/agua 5:1 y tres veces con 100 ml de acetona y finalmente es secada en vacío durante 24 horas a 30ºC.

Se obtienen 3,95 gr del compuesto del título. La determinación cuantitativa de los grupos éster es llevada a cabo de acuerdo con el método de saponificación descrito en las páginas 169-172 de la publicación "Quantitative Organic Analysis Via Functional Groups" 4ª Edición John Wiley and Sons Publication.

Ejemplo 3 Preparación de ácido hialurónico reticulado (HY)

Descripción del producto:

10% de grupos carboxi utilizados en esterificación interna.

90% de grupos carboxi salificados con sodio.

6,21 gr de sal de HY tetrabutilamonio con un peso molecular 620.000 correspondientes a 10 mEq de una unidad monómera se solubilizan en 248 ml de DMSO a 25ºC, se añaden 0,101 gr (1,0 mEq) de trietilamina y la solución resultante es agitada durante 30 minutos.

Una solución de 0,255 gr (1,0 mEq) de yoduro de 2-cloro-1-metil-piridinio en 60 ml de DMSO es añadida lentamente gota a gota durante un intervalo de tiempo de 1 hora y la mezcla es mantenida durante 15 horas a
30ºC.

Una solución formada por 100 ml de agua y 2,5 gr de cloruro sódico es añadida a continuación y la mezcla resultante es vertida a continuación lentamente en 750 ml de acetona, manteniendo agitación continuada. Se forma un precipitado que a continuación es filtrado y lavado tres veces en 100 ml de acetona/agua 5:1 y tres veces con 100 ml de acetona y finalmente es secado en vacío durante 24 horas a 30ºC.

Se obtienen 3,93 gr del compuesto del título. La determinación cuantitativa de los grupos éster es llevada a cabo de acuerdo con el método de saponificación descrito en las páginas 169-172 de la publicación "Quantitative Organic Analysis Via Functional Groups" 4ª Edición John Wiley and Sons Publication.

Ejemplo 4 Preparación de ácido hialurónico reticulado (HY)

Descripción del producto:

25% de grupos carboxi utilizados en esterificación interna.

75% de grupos carboxi salificados con sodio.

6,21 gr de sal de HY tetrabutilamonio con un peso molecular de 170.000 correspondientes a 10 mEq de una unidad monómera se solubilizan en 248 ml de DMSO a 25ºC, se añaden 0,253 gr (2,5 mEq) de trietilamina y la solución resultante es agitada durante 30 minutos.

Una solución de 0,639 gr (2,5 mEq) de yoduro de 2-cloro-1-metilpiridinio en 60 ml de DMSO es añadida lentamente gota a gota durante un intervalo de tiempo de 1 hora y la mezcla es mantenida durante 15 horas a 30ºC.

Se obtienen 3,85 gr del compuesto del título. La determinación cuantitativa de los grupos éster es llevada a cabo de acuerdo con el método de saponificación descrito en las páginas 169-172 de la publicación "Quantitative Organic Analysis Via Functional Groups" 4ª Edición John Wiley and Sons Publication.

Ejemplo 5 Preparación de ácido hialurónico reticulado (HY)

Descripción del producto:

50% de grupos carboxi utilizados en esterificación interna.

50% de grupos carboxi salificados con sodio.

6,21 gr de sal de HY tetrabutilamonio con un peso molecular de 85.000 correspondientes a 10 mEq de una unidad monómera se solubilizan en 248 ml de DMSO a 25ºC, se añaden 0,506 gr (5,0 mEq) de trietilamina y la solución resultante es agitada durante 30 minutos.

Una solución de 1,28 gr (5 mEq) de yoduro de 2-cloro-1-metilpiridinio en 60 ml de DMSO es añadida lentamente gota a gota durante un intervalo de tiempo de 1 hora y la mezcla es mantenida durante 15 horas a 30ºC.

Se obtienen 3,65 gr del compuesto del título. La determinación cuantitativa de los grupos éster es llevada a cabo de acuerdo con el método de saponificación descrito en las páginas 169-172 de la publicación "Quantitative Organic Analysis Via Functional Groups" 4ª Edición John Wiley and Sons Publication.

Ejemplo 6 Preparación de ácido hialurónico reticulado (HY)

Descripción del producto:

75% de grupos carboxi utilizados en esterificación interna.

25% de grupos carboxi salificados con sodio.

6,21 gr de sal de HY tetrabutilamonio con un peso molecular 170.000 correspondientes a 10 mEq de una unidad monómera se solubilizan en 248 ml de DMSO a 25ºC, se añaden 0,759 gr (7,5 mEq) de trietilamina y la solución resultante es agitada durante 30 minutos.

Una solución de 1,92 gr (7,5 mEq) de yoduro de 2-cloro-1-metilpiridinio en 60 ml de DMSO es añadida lentamente gota a gota durante un intervalo de tiempo de 1 hora y la mezcla es mantenida durante 15 horas a 30ºC.

Se obtienen 3,54 gr del compuesto del título. La determinación cuantitativa de los grupos éster es llevada a cabo de acuerdo con el método de saponificación descrito en las páginas 169-172 de la publicación "Quantitative Organic Analysis Via Functional Groups" 4ª Edición John Wiley and Sons Publication.

Ejemplo 7 Preparación de ácido hialurónico reticulado (HY)

Descripción del producto:

100% de grupos carboxi utilizados en esterificación interna.

6,21 gr de sal de HY tetrabutilamonio con un peso molecular de 70.000 correspondientes a 10 mEq de una unidad monómera se solubilizan en 248 ml de DMSO a 25ºC, se añaden 1,012 gr (10 mEq) de trietilamina y la solución resultante es agitada durante 30 minutos.

Una solución de 2,55 gr (10 mEq) de yoduro de 2-cloro-1-metilpiridinio en 60 ml de DMSO es añadida lentamente gota a gota durante un intervalo de tiempo de 1 hora y la mezcla es mantenida durante 15 horas a 30ºC.

La mezcla resultante es vertida lentamente en 750 ml de acetona, manteniendo agitación continua. Se forma un precipitado que es separado por filtrado y lavado seis veces con 100 ml de acetona y finalmente secado en vacío durante 24 horas a 30ºC.

Se obtienen 3,52 gr del compuesto del título. La determinación cuantitativa de los grupos éster es llevada a cabo de acuerdo con el método de saponificación descrito en las páginas 169-172 de la publicación "Quantitative Organic Analysis Via Functional Groups" 4ª Edición John Wiley and Sons Publication.

Ejemplo 8 Preparación del etil éster parcial del ácido hialurónico reticulado (HY)

Descripción del producto:

25% de grupos carboxi esterificados con etanol;

25% de grupos carboxi utilizados en esterificación interna.

50% de grupos carboxi salificados con sodio.

6,21 gr de sal HY tetrabutilamonio con un peso molecular de 170.000 correspondiendo a 10 mEq de una unidad monómera se solubilizan en 248 ml de DMSO a 25ºC, se añaden 0,390 gr (2,5 mEq)de yoduro de etilo y la solución es mantenida durante 12 horas a 30ºC. Se añaden 0,253 gr (2,5 mEq) de trietilamina y la solución es agitada durante 30 minutos.

Una solución formada por 100 ml de agua y 2,5 gr de cloruro sódico es añadida a continuación y la mezcla resultante es vertida lentamente en 750 ml de acetona, manteniendo una agitación continua. Se forma un precipitado que es filtrado a continuación y lavado tres veces en 100 ml de acetona/agua 5:1 y tres veces con 100 ml de acetona y finalmente es secado en vacío durante 24 horas a 30ºC.

Se obtienen 3,84 gr del compuesto del título. La determinación cuantitativa de los grupos etoxi es llevada a cabo mediante el método de R.H. Cundiff y P.C. Markunas (Anal. Chem. 33, 1028-1930 (1961)). La determinación cuantitativa de los grupos éster es llevada a cabo de acuerdo con el método de saponificación descrito en las páginas 169-172 de la publicación "Quantitative Organic Analysis Via Functional Groups" 4ª Edición John Wiley and Sons
Publication.

Ejemplo 9 Preparación del etil éster parcial del ácido hialurónico reticulado (HY)

Descripción de producto:

50% de grupos carboxi esterificados con etanol;

25% de grupos carboxi utilizados en esterificación interna.

25% de grupos carboxi salificados con sodio.

6,21 gr de sal de HY tetrabutilamonio con un peso molecular de 85.000 correspondiendo a 10 mEq de una unidad monómera se solubilizan en 248 ml de DMSO a 25ºC, se añaden 0,780 gr (5,0 mEq) de yoduro de etilo y la solución es mantenida durante 12 horas a 30ºC. Se añaden 0,253 gr (2,5 mEq) de trietilamina y la solución es agitada durante 30 minutos.

Se obtienen 3,87 gr del compuesto del título. La determinación cuantitativa de los grupos etoxi es llevada a cabo según el método de R.H. Cundiff y P.C. Markunas (Anal. Chem. 33, 1028-1930 (1961)). La determinación cuantitativa de los grupos éster totales es llevada a cabo de acuerdo con el método de saponificación descrito en las páginas 169-172 de la publicación "Quantitative Organic Analysis Via Functional Groups" 4ª Edición John Wiley and Sons Publication.

Ejemplo 10 Preparación del etil éster del ácido hialurónico reticulado (HY)

Descripción del producto:

75% de grupos carboxi esterificados con etanol;

25% de grupos carboxi utilizados en la esterificación interna.

6,21 gr de sal de HY tetrabutilamonio con un peso molecular de 170.000 correspondiendo a 10 mEq de una unidad monómera se solubilizan en 248 ml de DMSO a 25ºC, se añaden 1,17 gr (7,5 mEq) de yoduro de etilo y la solución es mantenida durante 12 horas a 30ºC. Se añaden 0,253 gr (2,5 mEq) de trietilamina y la solución es agitada durante 30 minutos.

La mezcla resultante es vertida lentamente en 750 ml de acetona, manteniendo agitación continua. Se forma un precipitado que es separado por filtrado y lavado cinco veces con 100 ml de acetona y finalmente secado en vacío durante 24 horas a 30ºC.

Se obtienen 3,91 gr del compuesto del título. La determinación de los grupos etoxi es llevada a cabo de acuerdo con el método de R.H. Cundiff y P.C. Markunas (Anal. Chem. 33, 1028-1930 (1961)). La determinación cuantitativa de los grupos éster totales es llevada a cabo de acuerdo con el método de saponificación descrito en las páginas 169-172 de la publicación "Quantitative Organic Analysis Via Functional Groups" 4ª Edición John Wiley and Sons Publication.

Ejemplo 11 Preparación del éster parcial de cortisona (C21) del ácido hialurónico reticulado (HY)

Descripción del producto:

20% de grupos carboxi esterificados con cortisona.

25% de grupos carboxi utilizados en esterificación interna.

55% de grupos carboxi salificados con sodio.

6,21 gr de sal de HY tetrabutilamonio con un peso molecular de 70.000 correspondiendo a 10 mEq de una unidad monómera se solubilizan en 248 ml de DMSO a 25ºC, se añaden 0,85 gr (2mEq) de 21-bromo-4-pregneno-17-\alpha-ol-3,11,20-trion y la solución resultante se mantiene durante 24 horas a 30ºC. Se añaden 0,253 gr (2,5 mEq) de trietilamina y la solución resultante es agitada durante 30 minutos.

Una solución formada por 100 ml de agua y 2,5 gr de cloruro sódico es añadida a continuación y la mezcla resultante es vertida lentamente en 750 ml de acetona, manteniendo una agitación continua. Se forma un precipitado que es filtrado a continuación y lavado tres veces con 100 ml de acetona/agua 5:1 y tres veces con 100 ml de acetona y finalmente es secado en vacío durante 24 horas a 30ºC.

Se obtienen 4,5 gr del compuesto del título. La determinación cuantitativa de la cortisona, la hidrólisis alcalina suave con una solución hidroalcohólica de Na_{2}CO_{3} y extracción con cloroformo, son llevadas a cabo de acuerdo con B.P.

La determinación cuantitativa de los grupos éster totales es llevada a cabo de acuerdo con el método de saponificación descrito en las páginas 169-172 de la publicación "Quantitative Organic Analysis Via Functional Groups" 4ª Edición John Wiley and Sons Publication.

Ejemplo 12 Preparación del éster parcial mixto de etanol y cortisona (C21) del ácido hialurónico reticulado (HY)

Descripción del producto:

20% de grupos carboxi esterificados con cortisona (C21).

25% de grupos carboxi esterificados con etanol.

25% de grupos carboxi utilizados en esterificación interna.

30% de grupos carboxi salificados con sodio.

6,21 gr de sal de HY tetrabutilamonio con un peso molecular de 85.000 correspondiente a 10 mEq de una unidad monómera se solubilizan en 248 ml de DMSO a 25ºC. Se añaden 0,39 gr (2,5 mEq) de yoduro de etilo y la solución resultante se mantiene a 30ºC durante 12 horas. Se añaden 0,85 gr (2 mEq) de 21-bromo-4-pregneno-17-\alpha-ol- 3,11,20-trion y la solución resultante se mantiene a 30ºC durante 24 horas. Se añaden 0,253 gr (2,5 mEq) de trietilamina y la solución resultante es agitada durante 30 minutos.

Se obtienen 4,41 gr del compuesto del título. La determinación cuantitativa de la cortisona, hidrólisis alcalino suave con solución hidroalcohólica de Na_{2}CO_{3} y extracción con cloroformo se llevan a cabo de acuerdo con B.P.

La determinación cuantitativa de los grupos etoxi es llevada a cabo de acuerdo con el método de R.H. Cundiff y P.C. Markunas (Anal. Chem. 33, 1028-1930 (1961)). La determinación cuantitativa de los grupos éster totales es llevada a cabo de acuerdo con el método de saponificación descrito en las páginas 169-172 de la publicación "Quantitative Organic Analysis Via Functional Groups" 4ª Edición John Wiley and Sons Publication.

Ejemplo 13 Preparación del éster mixto de etanol y cortisona (C21) de ácido hialurónico reticulado (HY)

Descripción del producto:

20% de grupos carboxi esterificados con cortisona (C21).

70% de grupos carboxi esterificados con etanol.

10% de grupos carboxi utilizados en esterificación interna.

6,21 gr de sal de HY tetrabutilamonio con un peso molecular de 170.000 correspondiendo a 10 mEq de una unidad monómera se solubilizan en 248 ml de DMSO a 25ºC, se añaden 1,09gr (7 mEq) de yoduro de etilo y la solución resultante es mantenida durante 12 horas a 30ºC. Se añaden 0,85gr (2 mEq) de 21-bromo-4-pregneno-17-\alpha-ol-3,11,20-trion y la solución resultante se mantiene a 30ºC durante 24 horas. Se añaden 0,101 gr (1,0 mEq) de trietilamina y la solución resultante es agitada durante 30 minutos.

Una solución de 0,255 g (1,0 mEq) yoduro de 2-cloro-1-metil-piridinio en 60 ml de DMSO es añadido lentamente, gota a gota, en un intervalo de tiempo de 1 hora y la mezcla es mantenida durante 15 horas a 30ºC.

La mezcla resultante es vertida lentamente en 750 ml de acetona, manteniendo agitación continua. Se forma un precipitado que es filtrado a continuación y lavado cinco veces con 100 ml de acetona y finalmente es secado en vacío durante 24 horas a 30ºC.

Se obtienen 4,58 grs del compuesto del título. Se llevan a cabo de acuerdo con B.P. la determinación cuantitativa de cortisona, hidrólisis alcalina suave con una solución hidroalcohólica de Na_{2}CO_{3} y extracción con cloroformo.

La determinación cuantitativa de los grupos etoxi es llevada a cabo de acuerdo con el método de R.H. Cundiff y P.C. Markunas [Anal. Chem. 33, 1028-1930 (1961)]. La determinación cuantitativa de los grupos éster totales es llevada a cabo de acuerdo con el método de saponificación descrito en las páginas 169-172 de "Quantitative Organic Analysis Via Functional Groups" 4a Edición John Wiley and Sons Publication.

Ejemplo 14 Preparación con canamicina de la sal de un ácido hialurónico reticulado

Descripción del producto:

Se utiliza 25% de grupos carboxi en la esterificación interna.

75% de grupos carboxi con Canamicina.

4,39 gr de la sal parcial de tetrabutilamonio (25%) de ácido hialurónico correspondiente a 10 mEq de una unidad monómera se solubilizan en 248 ml de DMSO a 25ºC, se añaden 0,253 gr (2,5 mEq) de trietilamina y la solución resultante es agitada durante 30 minutos.

Se añade lentamente, gota a gota, durante un intervalo de tiempo de 1 hora una solución de 0,639 g (2,5 mEq) de yoduro de 2-cloro-1-metil- piridinio en 60 ml de DMSO y la mezcla se mantiene durante 15 horas a 30ºC.

El precipitado es suspendido en 400 ml de agua destilada y enfriado a 5ºC después de lo cual se añade una solución obtenida por solubilización de 1,1 gr de sulfato de Canamicina en (7,5 mEq) 25 ml de H_{2}O destilada y eluyendo en una columna conteniendo 15 ml de resina de amoníaco cuaternario (Dowex 1x8) forma OH-, manteniendo la agitación durante 30 minutos. La mezcla resultante es liofilizada.

Se obtienen 4,6 grs del compuesto del título. La determinación cuantitativa de los grupos éster es llevada a cabo de acuerdo con el método de saponificación descrito en las páginas 169-172 de "Quantitative Organic Analysis Via Functional Groups" 4a Edición John Wiley and Sons Publication.

La determinación microbiológica cuantitativa de Canamicina es llevar a cabo en B. subtilis 6633 en comparación con Canamicina estándar.

Ejemplo 15 Preparación de amicacina de una sal reticulada de ácido hialurónico

Descripción del producto:

25% de grupos carboxi utilizados en esterificación interna.

75% de grupos carboxi con amicacina.

Se solubilizan 4,39 gr de la sal parcial de tetrabutilamonio (25%) de ácido hialurónico correspondiente a 10 mEq de una unidad monómera en 248 ml de DMSO a 25ºC, se añaden 0,253 gr (2,5 mEq) de trietilamina y la solución resultante es agitada durante 30 minutos.

Una solución de 0,639 gr (2,5 mEq) de yoduro de 2-cloro-1-metil-piridinio en 60 ml de DMSO es añadida lentamente, gota a gota, en un intervalo de tiempo de 1 hora y la mezcla es mantenida durante 15 horas a 30ºC.

El precipitado es suspendido a 400 ml de agua destilada y enfriado a 5ºC.

Se añaden 1,1 gr (7,5 mEq) de amicacina básica con agitación constante durante 30 minutos. La mezcla resultante es liofilizada.

Se obtienen 4,8 grs del compuesto del título. La determinación cuantitativa de los grupos éster es llevada a cabo de acuerdo con el método de saponificación descrito en las páginas 169-172 de "Quantitative Organic Analysis Via Functional Groups" 4a Edición John Wiley and Sons Publication.

La determinación cuantitativa de la amicacina es llevada a cabo microbiológicamente en S. aureus 29737, en comparación con amicacina estándar.

Ejemplo 16 Preparación del etil éster parcial de ácido hialurónico (HY) reticulado

Descripción del producto:

50% de grupos carboxi esterificados con etanol.

10% de grupos carboxi utilizados en esterificación interna.

40% de grupos carboxi salificados con sodio.

6,21 gr de sal HY de tetrabutilamonio con un peso molecular 85.000 correspondientes a 10 mEq de una unidad monómera se solubilizan en 248 ml de DMSO a 25ºC, se añaden 0,780 gr (5,0 mEq) de yoduro de etil y la solución es mantenida durante 12 horas a 30ºC. Se añaden 0,118 gr (1 mEq) de cloruro de piridina y la solución resultante es agitada durante 30 minutos.

Una solución de 0,16 g (1 mEq) de N-bencilo-N'-etilcarbodiimida en 20 ml de DMSO es añadida lentamente, gota a gota, en un intervalo de tiempo de 1 hora y la mezcla es mantenida durante 45 horas a 30ºC.

A continuación, se añade una solución formada por 100 ml de agua y 2,5 de cloruro sódico y la mezcla resultante es vertida a continuación lentamente en 750 ml de acetona, manteniendo agitación continuada. Se forma un precipitado que es filtrado y lavado tres veces con 100 ml de acetona/H_{2}O 5:1 y tres veces con 100 ml de acetona y finalmente es secado en vacío durante 24 horas a 30ºC.

Se obtienen 3,85 grs del compuesto del título. La determinación cuantitativa de los grupos etoxi es llevada a cabo según el método de R.H. Cundiff y P.C. Markunas [Anal. Chem. 33, 1028-1930 (1961)]. La determinación cuantitativa de los grupos éster totales es llevada a cabo de acuerdo con el método de saponificación descrito en las páginas 169-172 de "Quantitative Organic Analysis Via Functional Groups" 4a Edición John Wiley and Sons Publication.

Ejemplo 17 Preparación de ácido hialurónico reticulado (HY)

Descripción del producto:

10% de grupos carboxi utilizados en esterificación interna.

90% de grupos carboxi salificados con sodio.

6,21 gr de sal de HY de tetrabutilamonio con un peso molecular de 170.000 correspondiendo a 10 mEq de una unidad monómera se solubilizan en 248 ml de DMSO a 25ºC, se añaden 0,118 gr (1 mEq) de cloururo de piridina y la solución resultante es agitada durante 30 minutos.

A continuación, una solución constituida por 100 ml de agua y 2,5 de cloruro sódico es añadida y la mezcla resultante es vertida lentamente en 750 ml de acetona, manteniendo agitación continuada. Se forma un precipitado que es filtrado a continuación y lavado tres veces con 100 ml de acetona/H_{2}O 5:1 y tres veces con 100 ml de acetona sometiendo finalmente a secado en vacío durante 24 horas a una temperatura de 30ºC.

Se obtienen 3,9 grs del compuesto del título. La determinación cuantitativa de los grupos éster totales es llevada a cabo de acuerdo con el método de saponificación descrito en las páginas 169-172 de "Quantitative Organic Analysis Via Functional Groups" 4a Edición John Wiley and Sons Publication.

4. Formulaciones según la invención Ejemplo 18 Preparación de una suspensión inyectable conteniendo un principio activo basado en ácido hialurónico reticulado (ACP)

Un vial de 2 ml contiene:

- ácido hialurónico autorreticulado (ACP)	20 mg
- cloruro sódico	17 mg
- fosfato sódico dihidratado monobásico	0,1 mg
- fosfato sódico bibásico dodecahidratado	1,2 mg
- agua para inyección	2 ml

Ejemplo 19 Preparación de una suspensión inyectable que contiene un principio activo que es una mezcla 75/25 basada en ácido hialurónico autorreticulado y sal sódica de ácido hialurónico

Una jeringa prellenada de 2 ml contiene:

- ácido hialurónico autorreticulado (ACP)	15 mg
- sal sódica de ácido hialurónico (hyalectin)	5 mg
- cloruro sódico	17 mg
- fosfato sódico monobásico dihidratado	0,1 mg
- fosfato sódico bibásico dodecahidratado	1,2 mg
- agua para inyección	2 ml

Ejemplo 20 Preparación de una suspensión inyectable que contiene un principio activo basado en ácido hialurónico autorreticulado vehiculando un agente antiinflamatorio tal como sal sódica de metilprednisolona 21-succinato

Una jeringa prellenada de 2 ml contiene:

- ácido hialurónico autorreticulado (ACP)	20 mg
- sal sódica de metilprednisolona 21- succinato	10 mg
- cloruro sódico	18 mg
- agua para inyección	2 ml

Ejemplo 21 Preparación de una suspensión inyectable que contiene un principio activo que es una mezcla 75/25 basada en ácido hialurónico autorreticulado y sal sódica de ácido hialurónico vehiculando un agente antiinflamatorio tal como sal sódica de fosfato de triamcinolona

Un vial de 2 ml contiene:

- ácido hialurónico autorreticulado (ACP)	15 mg
- sal sódica de ácido hialurónico (hyalectin)	5 mg
- sal sódica de fosfato de triamcinolona	20 mg
- cloruro sódico	18 mg
- agua para inyección	2 ml

5. Pruebas de formulaciones según la invención Ejemplo 22 Preparación de una formulación ACP/HA en la que el componente ACP es autorreticulado a un grado normal de 5%

Se reticuló HA con un peso molecular en una gama de 500-730 KDa a un nivel nominal de 5%.

Se prepararon formulaciones de ACP/HA a una concentración final de 1% peso/peso en fosfato tampón (NaCl 0,15M, sales fosfato 0,002M) a pH=6,5, mezclando varias proporciones de ACP/HA, comprendidas entre 0/100 y 100/0%. Las suspensiones se dejaron hinchar durante 24 horas.

Las características reológicas de las mezclas ACP/HA fueron medidas en un espectrómetro Rheometrics Fluid Spectrometer (RFS-8500) dotado de varias geometrías [placas paralelas con diámetro de 50 mm; intersticio 1 mm o 2 mm y Couette; diámetro de la copa 34 mm, diámetro y longitud cursor ("bob") 32 respectivamente] a la temperatura fija de 25ºC. De la medición de cizadallura oscilante (típicamente para un valor de deformación de 10%), los parámetros viscoelásticos G' (módulo de almacenamiento), G'' (módulo de pérdida) y \eta* (viscosidad compleja) fueron obtenidos en la gama de frecuencia de 0,01-100 rad/sec.

Las mediciones indicaron que los ACP, dispersados a una concentración de polímeros suficientemente elevada e hinchados en un medio acuoso, producen sistemas viscoelásticos y transparentes parecidos a sólidos. El espectro viscoelástico indicado en la figura 2A (ACP/HA 100/0) indica claramente un comportamiento parecido a un gel. En particular, G' (\omega) > G'' (\omega) en toda la gama de frecuencias investigadas y tanto G' como G'' son ligeramente dependientes de la frecuencia. La proporción G'/G'' (tan) alcanza un valor constante (0,3) para frecuencias menores de 2 rad/seg e incrementa ligeramente (hasta 0,4) al incrementar la frecuencia. La viscosidad compleja, \eta*, es fuertemente dependiente de la frecuencia siguiendo una ley potencial en toda la gama de frecuencias investigadas. El exponente aparente de potencia es \approx -0,82.

Utilizando la misma deformación aplicada (0,1 unidades de formación), los valores absolutos medidos en ambos módulos y viscosidad compleja, pero no el comportamiento viscoelástico, están apreciablemente afectados por la geometría utilizada. Este descubrimiento refleja el carácter no homogéneo del sistema. La respuesta parecida a un gel de ACP (100/0) es muy diferente del comportamiento típico de la red entremezclada del material inicial HA (Kobayaski Y. y otros Biorheology, 1994, 31, 235-244).

Tal como se ha mostrado en la figura 2D (ACP/HA 0/100), el espectro mecánico muestra G'' (\omega) > G' (\omega) y en la zona terminal G' \propto \omega2 y G''\propto \omega. Además, \eta* (\omega) es esencialmente independiente de la frecuencia. Mezclando los dos polímeros en diferentes proporciones, manteniendo constante simultáneamente la concentración total de polímero (1% peso/peso), es posible obtener una amplia gama de sistemas de dos componentes. En particular, una mezcla rica en HA (ACP/HA 30/70) se puede considerar como suspensión de la que el componente disperso está constituido por partículas dispersas de ACP hinchado y el componente continuo es la solución de HA acuoso. Inversamente, la mezcla rica en ACP (ACP/HA 75/25) se puede considerar como "compuesto" en el que el componente continuo es mucho más rígido que el componente disperso constituido por la solución acuosa de HA.

La respuesta mecánica de dicho sistema se espera que se vea dominada por las características viscoelásticas del componente continuo. En realidad, el espectro viscoelástico de la mezcla rica en HA (figura 2C, 30/70) muestra un comportamiento similar a los líquidos en la gama completa de la frecuencia investigada. No obstante, en comparación con el HA solo (figura 2D), G' y G'' quedan acentuadas (notable incremento en el caso de G'') especialmente en la región terminal en la que las frecuencias correspondientes a los movimientos de la articulación a la velocidad normal de andar quedan incluidas. Por otra parte, el espectro viscoelástico de la mezcla rica en ACP (figura 2B, 75/25) muestra un comportamiento similar a un gel parecido al del ACP solo pero con una disminución de ambos módulos especialmente a baja frecuencia. En este caso, G' y G'' muestran una dependencia mayor de la frecuencia. Los cambios a baja frecuencia observados para ambas mezclas reflejan las enormes diferencias entre los módulos de los dos componentes del medio.

Tal como se muestra claramente en la figura 3, en la frecuencia que corresponde aproximadamente al movimiento de la articulación al andar (0,72 rad/seg) (Kobayashi y otros, Biorheology, 1994, supra), y a T=25ºC, G' y G'' se cruzan entre sí como función del contenido de ACP en las mezclas. En particular, es evidente una "transición" desde un comportamiento parecido a un líquido a un comportamiento parecido a un sólido que tiene lugar aproximadamente en correspondencia con 50% peso/peso de contenido de ACP en la mezcla.

La figura 4 muestra una comparación de la viscosidad dinámica de las formulaciones de ACP/HA con proporciones de ACP/HA comprendidas en valores de 100/0 a 0/100. La mejora en características viscoelásticas del compuesto con el incremento de contenido de ACP es claramente evidente.

Ejemplo 23 Preparación y prueba de las formulaciones de ACP/HA en las que el componente de ACP está autorreticulado en diferentes grados

Entre los polisacáridos de carboxilo autorreticulado (ACP) sintetizados a partir de ácido hialurónico (HA) (640.000 Da) y utilizados para preparar mezclas de ACP/HA se incluyen los siguientes:

ACP 20%	0,5% H_{2}O
ACP 10%	0,5% H_{2}O
ACP 5%	0,5% H_{2}O

Los valores 20, 10 y 5% se refieren al porcentaje nominal de esterificación, mientras que 0,5% indica la cantidad de agua añadida durante la síntesis.

Las formulaciones fueron preparadas por mezcla de diferentes cantidades de ACP y Ha (640.000 Da) en tampón fosfato (NaCl 0,15M y sales fosfato 0,002M) a pH=6,5. Todas las mezclas tenían concentraciones finales de 10 mg/ml y fueron preparadas en una gama de proporciones de ACP/HA de 100/0-0/100%. Las suspensiones se dejaron hinchar durante 24 horas y a continuación se filtraron sobre filtros de vidrio con una dimensión de poros de
100/40 \mum.

Se realizaron mediciones reológicas con un reómetro "Fluid Spectrometer RFS 8500" (Rheometrics). Las geometrías fueron seleccionadas de acuerdo con la viscosidad de la solución: placas paralelas (intersticio 2 mm) para soluciones bastante viscosas y Couette (intersticio 1 mm) para soluciones que eran solamente ligeramente viscosas.

Los estudios fueron llevados a cabo con barrido de frecuencias dinámicas (gama = 100-0,05 rad/seg, deforma-
ción = 10%, T = 25ºC).

Las formulaciones constituidas por ACP/HA a 100/0 se caracterizan de manera general por ser G' superior a G'' en toda la gama de frecuencias consideradas (figura 5). Si bien se mantiene el grado de reticulación constante, la adición de cantidades superiores de HA en las mezclas tiene como resultado valores de viscosidad más bajos, mientras que G' y G'' tienden a acercarse (figura 6).

Particularmente en el caso de formulaciones de un contenido de ACP de 50%, G' y G'' pueden, de acuerdo con el tipo de ACP objeto de estudio, solaparse o cruzarse en correspondencia con una o dos frecuencias distintas (figuras 7 y 8).

Las figuras 9, 10 y 11 muestran el efecto del porcentaje de esterificación en la viscosidad de formulaciones de ACP/HA con diferentes proporciones de ACP/HA.

Es posible llegar a la conclusión, a partir del espectro viscoelástico, de que para las formulaciones ACP/HA con un elevado contenido de ACP (por ejemplo 100/0), el modelo de viscosidad es de tipo 20%>10%>5% (figura 9), mientras que para mezclas 50/50 el resultado es 20%>5%>10% (figura 10). Finalmente, mezclas de ACP/HA 40/60, que empiezan en ACP 20% y ACP 5%, presentan solamente ligeras diferencias de viscosidad (figura 11).

Si el objetivo es conseguir elevados valores de viscoelasticidad, se debe utilizar ACP con un elevado grado de reticulación (ACP 20%) solo (100/0) o mezclado con pequeñas cantidades de ácido hialurónico (por ejemplo 75/25). Por otra parte, si la viscoelasticidad deseada corresponde a valores no elevados, (ACP/HA 40/60, 30/70), entonces el porcentaje de reticulación es un factor menos decisivo.

Los resultados descritos anteriormente indican que la reticulación de HA para formar rendimientos de ACP produce un derivado de HA con características viscoelásticas superiores a las del HA sin modificar. Además, las características reológicas del ACP se pueden modular preparando compuestos que consisten en mezclas de ACP/HA con proporciones variables de peso/peso.

Aunque el ACP formulado en excipientes farmacéuticos presenta perfiles reológicos parecidos a un gel, se han obtenido interesantes resultados al mezclar diferentes cantidades de ACP 10% 100/0 con fluido sinovial procedente de caballos no afectados de osteoartritis.

Las figuras 12 y 13 muestran respectivamente los perfiles reológicos de fluido sinovial equino y ACP 10% 100/0 formulado en excipientes farmacéuticos con una concentración de 10 mg/ml.

Mezclas de ACP al 10% con fluido sinovial a concentraciones finales de 3,3 y 5 mg/ml de gel ACP (figuras 14 y 15) muestran no solamente un incremento decisivo en todos los parámetros viscoelásticos en comparación con el fluido sinovial solo, sino que asimismo muestran un perfil reológico teóricamente ideal cuando se compara con el del ACP solo. Ciertamente, G' y G'' que tienen valores paralelos en formulaciones basadas en ACP, se cruzan o tienden a cruzarse en presencia de fluido sinovial de acuerdo con la cantidad de ACP añadida.

Estos resultados indican que, de modo sorprendente, la adición de ACP a fluido sinovial con una concentración que se podía esperar que existe después de la inyección de compuestos farmacéuticos de ACP en uniones articulares, podría modificar el perfil reológico típico de los ACP.

Ejemplo 24 Comparación de las características viscoelásticas de ACP y productos comerciales existentes basados en HA para el tratamiento de osteoartritis por inyección intra-articular

Los productos basados en HA actualmente en el mercado y utilizados para tratar artropatías por inyección intra-articular incluyen:

-: ARTZ (Seikagaku, Japón) y formulaciones basadas en HA con pesos moleculares comprendidos entre 600.000 y 1.200.000 Da;

-: SYNVISC (Biomatrix, U.S.A.), un sistema de dos componentes formado por una mezcla de dos derivados de HA reticulados, fluido hylan y gel hylan (USA 4.713.448).

-: HYALGAN (Fidia), una formulación basada en HA con un peso molecular comprendido entre 500.000 y 730.000 (EP 0138572 B1).

La viscosidad dinámica de ACP 20%, 0,5% agua fue comparada con la de los productos farmacéuticos anteriormente indicados. Las cuatro formulaciones tenían similares características con respecto a la concentración final de HA y los excipientes farmacéuticos presentes. Los resultados de esta comparación se muestran en la figura 16 e indican que la formulación de ACP tiene superiores características de viscosidad dinámica en comparación con los tres productos comercialmente disponibles.

El desarrollo de compuestos farmacéuticos de ACP/HA fue diseñado para conseguir compuestos con características viscoelásticas mejoradas, y como consecuencia con tiempos de permanencia mejorados en las articulaciones, con respecto a los productos comerciales actualmente disponibles basados en HA para el tratamiento de artropatías. La variación de la proporción de ACP y HA contenida en estos compuestos permite también la preparación de compuestos farmacéuticos que tienen las características reológicas óptimas para el tratamiento de artropatías de diferentes orígenes.

Claims

1. Compuesto farmacéutico para el tratamiento de artropatías que comprende:

(1) una mezcla de ácido hialurónico autorreticulado y ácido hialurónico no autorreticulado, en la que las proporciones relativas del ácido hialurónico autorreticulado y el ácido hialurónico no autorreticulado son aproximadamente de 95:05 a 05:95, y

(2) un excipiente farmacéuticamente aceptable, diluyente o portador.

2. Compuesto farmacéutico, según la reivindicación 1, que comprende además como mínimo una sustancia farmacológicamente activa.

3. Compuesto farmacéutico, según la reivindicación 2, en el que el ácido hialurónico tiene un peso molecular comprendido entre 500.000 y 1.230.000 D.

4. Compuesto farmacéutico, según la reivindicación 3, en el que dicho peso molecular está comprendido entre 500.000 y 730.000 D.

5. Compuesto farmacéutico, según la reivindicación 2, en el que la sustancia farmacológicamente activa es un antibiótico.

6. Compuesto farmacéutico, según la reivindicación 2, en el que la sustancia farmacológicamente activa es un agente antiinflamatorio esteroide.

7. Compuesto farmacéutico, según la reivindicación 2, en el que la sustancia farmacológicamente activa es un agente antiinflamatorio no esteroide.

8. Compuesto farmacéutico, según la reivindicación 2, en el que la sustancia farmacológicamente activa es un anestésico, una vitamina epiteliotrófica, un agente antiinflamatorio/analgésico de tipo hormonal, una citoquina, un receptor de citoquina o un factor de crecimiento.

9. Compuesto farmacéutico, según la reivindicación 2, en el que la sustancia farmacológicamente activa es ácido hialurónico salificado.

10. Compuesto farmacéutico, según la reivindicación 9, en el que el ácido hialurónico es salificado con una sal de plata, cobre, cinc o calcio.

11. Utilización de una mezcla de ácido hialurónico autorreticulado y ácido hialurónico no autorreticulado, en la que las proporciones relativas del ácido hialurónico autorreticulado y el ácido hialurónico no autorreticulado son de 95:05 hasta 05:95 para la fabricación de un medicamento utilizado en el tratamiento de artropatías.