ES2216218T3 - Procedimiento para la deteccion y la determinacion de reacciones enzimaticas en la orina. - Google Patents
Procedimiento para la deteccion y la determinacion de reacciones enzimaticas en la orina.Info
- Publication number
- ES2216218T3 ES2216218T3 ES98115696T ES98115696T ES2216218T3 ES 2216218 T3 ES2216218 T3 ES 2216218T3 ES 98115696 T ES98115696 T ES 98115696T ES 98115696 T ES98115696 T ES 98115696T ES 2216218 T3 ES2216218 T3 ES 2216218T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- procedure
- added
- determination
- concentration
- urine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/968—High energy substrates, e.g. fluorescent, chemiluminescent, radioactive
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
LA PRESENTE INVENCION TRATA DE UN PROCEDIMIENTO PARA LA DETECCION Y PARA LA DETERMINACION DE REACCIONES ENZIMATICAS EN LA ORINA, AÑADIENDOSE EN LA REACCION DETERMINADAS SUSTANCIAS, QUE MEJORAN LA CAPACIDAD DE MEDIDA OPTICA DE LA REACCION ENZIMATICA.
Description
Procedimiento para la detección y la
determinación de reacciones enzimáticas en la orina.
El invento se refiere a un procedimiento para la
detección y la determinación de reacciones enzimáticas en la orina,
en el que a la tanda de reacción se le añaden determinadas
sustancias, que mejoran la aptitud para medir ópticamente la
reacción enzimática.
En el diagnóstico de una enfermedad de los
riñones y del tracto urogenital tiene gran importancia la detección
de determinadas enzimas, en particular de pseudoperoxidasas y
esterasas en líquidos corporales, en particular en la orina.
Originalmente, los métodos físicos, tales como p.ej. los de
separación por centrifugación y recuento de leucocitos, desempeñaban
un cometido especial en el diagnóstico de la orina. Estos
procedimientos - aún cuando son satisfactorios desde el punto de
vista de su resultado - ya no son practicables hoy en día, puesto
que exigen un alto grado de actividad manual. También las
denominadas "tiras de ensayo", muy ampliamente propagadas en el
sector del diagnóstico de la orina, exigen un cierto grado de
manipulación, por lo que apenas es posible una automatización de la
medición desde el momento de la toma de muestras hasta el de la
evaluación. Les corresponde una importancia especial en el marco del
diagnóstico de orina, por una parte, al registro de las esterasas de
granulocitos como una investigación de base en el marco del estado
de la orina, así como al registro de la sangre en orina por medio de
la determinación de pseudoperoxidasas.
La medición de estos parámetros mediante tiras de
ensayo se ha podido mantener durante largo tiempo en la práctica,
entre otras razones por cuanto que las tiras de ensayo simplifican
esencialmente la medición por causa de las propiedades
cromatográficas del material de soporte. Ya se han descrito acerca
de ello correspondientes procedimientos y medios.
El documento de patente de los EE.UU. US
5.516.700 divulga un procedimiento químico en húmedo para la
detección y la determinación de analitos en la orina.
Fue misión del invento, por lo tanto, desarrollar
un procedimiento químico en húmedo para la determinación de ciertas
enzimas en la orina. De modo sorprendente, se ha puesto de
manifiesto que, mediante la utilización de determinados aditivos a
reactivos, la determinación óptica de las enzimas se puede llevar a
cabo con facilidad en aparatos de análisis automáticos, también en
orinas coloreadas.
Se describe un procedimiento para la detección y
la determinación de reacciones enzimáticas en la orina, en el que
una muestra de orina, que contiene las enzimas que se han de
detectar, se mezcla en un aparato automático de análisis con un
substrato específico, la reacción enzimática se vigila y mide
ópticamente, y a la tanda de reacción se le añade una sustancia que
mejora la aptitud para la medición, seleccionándose esta sustancia
entre el conjunto de los alcoholes inferiores: metanol, etanol y
propanol.
De manera ventajosa, en este contexto, el alcohol
se emplea en una concentración de aproximadamente 1 a 70% en volumen
- en la tanda de reacción -, de manera preferida de aproximadamente
10 a 60% en volumen, de manera especialmente preferida de 40 a 60%
en volumen, de manera muy especialmente preferida de 45 a 55% en
volumen.
Ventajosamente, la enzima que se ha de detectar
es la pseudoperoxidasa de hemoglobina o la esterasa de
leucocitos.
Para la detección de la reacción de la
pseudoperoxidasa de hemoglobina se emplean ventajosamente TMB, y se
añade a la tanda de reacción por lo menos una sustancia seleccionada
entre el siguiente conjunto:
6-metoxi-quinolina y
fenantridina, añadiéndose la
6-metoxi-quinolina en una
concentración de 0,1 a 0,5% en volumen y la fenantridina en una
concentración de 1 a 3 mg/ml.
Con el fin de detectar la esterasa de leucocitos,
se emplea como substrato el éster de
3-hidroxi-5-fenil-pirrol
de
N-tosil-L-alanina,
se añade a la tanda de reacción una sal de diazonio y por lo menos
una sustancia seleccionada entre el siguiente conjunto: Brij®, ácido
cólico, etilenglicol y EDTA.
La sal de diazonio es ventajosamente el zincato
de cloruro de diazonio y se añade en una concentración de 0,02 a 0,1
mg/ml, y además se añaden: el Brij® en una concentración de 0,1 a
0,5% en volumen, el ácido cólico en una concentración de 0,02 a 0,3%
en volumen, el etilenglicol en una concentración de 0,01 a 0,5% en
volumen y el EDTA en una concentración de 0,1 a 0,5 mmol/l.
Con el fin de evitar trastornos causados por el
ácido ascórbico, se puede añadir la ascorbato oxidasa.
Ventajosamente, se lleva a cabo una doble
determinación, añadiéndose el substrato solamente en una de las
determinaciones, y valorándose como valor medido la diferencia entre
la determinación sin substrato y la determinación con substrato.
EDTA ácido
etilen-diamina-tetraacético
PBS solución de cloruro de sodio tamponada con
fosfato
TMB tetrametil-bencidina
Los siguientes Ejemplos deben explicar el
invento.
La determinación se efectuó en un aparato Hitachi
911 (de Boehringer Mannheim, Alemania). Se emplean los siguientes
reactivos:
| R1: | 0,25 mol/l de PBS, de pH 7,5 |
| 0,5% de Brij® | |
| 1,0% de etilenglicol | |
| 0,25% de ácido cólico | |
| 1 mmol/l de EDTA |
| R2: | 2,5 mg del éster de 3-hidroxi-5-fenil-pirrol de N-tosil-L-alanina en |
| 9,8 ml de etanol (al 96%) + 0,2 ml de decanol |
| R3: | 0,625 mg/ml de zincato de cloruro de diazonio en agua destilada |
| R4: | 70 ml de etanol (al 96%) + 30 ml de agua destilada. |
La medición se efectúa como una determinación del
punto final a 546 nm.
Los volúmenes de los reactivos son:
| R1: | 40 \mul |
| R2: | 20 \mul |
| R3: | 20 \mul |
| R4: | 160 \mul |
Muestra: 40 \mul de una orina sin diluir
La determinación se efectuó en un aparato Hitachi
911 (de Boehringer Mannheim, Alemania). La medición se efectuó como
determinación del punto final a 660 nm. Se emplearon los siguientes
reactivos:
| R1: | 0,1 mg/ml de ascorbato oxidasa en 0,1 mol/l de una solución de NaCl tamponada con fosfato (PBS) |
| R2: | 1,0 mol/l de un tampón de citrato, de pH 4,8 |
| R3: | 45 mg de TMB |
| + 4 ml de R2 | |
| + 6 ml de etanol (al 96%) | |
| + 0,4 ml de 6-metoxi-quinolina | |
| + 280 mg de fenantridina | |
| + 200 mg de un dihidroperóxido (Luperox®) | |
| R4: | 70 ml de etanol (al 96%) + 30 ml de agua destilada. |
Los volúmenes de los reactivos fueron:
| R1 | 20 \mul |
| R2 | 1 \mul |
| R3 | 20 \mul |
| R4 | 190 \mul |
Muestra: 50 \mul de una orina sin diluir
Claims (11)
1. Procedimiento químico en húmedo para la
detección y la determinación de reacciones enzimáticas en la orina,
en el que
- a)
- una muestra de orina, que contiene la enzima que se ha de detectar, se mezcla en un aparato automático de análisis con un substrato específico,
- b)
- la reacción enzimática se vigila y mide ópticamente, y
- c)
- a la tanda de reacción se le añade una sustancia que mejora la aptitud para la medición,
caracterizado porque el mencionado
substrato se añade en forma líquida, y
porque la sustancia mencionada se selecciona
entre el conjunto de los alcoholes inferiores: metanol, etanol y
propanol.
2. Procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 1,
caracterizado porque el alcohol se emplea
en una concentración de aproximadamente 1 a 70% en volumen - en la
tanda de reacción -.
3. Procedimiento de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 a 2,
caracterizado porque la enzima que se ha
de detectar es la pseudoperoxidasa de hemoglobina.
4. Procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 3, para la determinación de sangre en orina.
5. Procedimiento de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 a 2,
caracterizado porque la enzima que se ha
de detectar es la esterasa de leucocitos.
6. Procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 3,
caracterizado porque para la detección de
la reacción se emplea tetrametil-bencidina (TMB), y
se añade a la tanda de reacción por lo menos una sustancia
seleccionada entre el siguiente conjunto:
6-metoxi-quinolina y
fenantridina.
7. Procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 6,
caracterizado porque se añade: la
6-metoxi-quinolina en una
concentración de 0,1 a 0,5% en volumen y la fenantridina en una
concentración de 1 a 3 mg/ml.
8. Procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 5,
caracterizado porque como substrato se
emplea el éster de
3-hidroxi-5-fenil-pirrol
de
N-tosil-L-alanina, y
se añade a la tanda de reacción una sal de diazonio y por lo menos
una sustancia seleccionada entre el siguiente conjunto:
ácido cólico, etilenglicol y EDTA.
9. Procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 8,
caracterizado porque la sal de diazonio es
zincato de cloruro de diazonio y se añade en una concentración de
0,02 a 0,1 mg/ml, y además se añaden: ácido cólico en una
concentración de 0,02 a 0,3% en volumen, etilenglicol en una
concentración de 0,1 a 0,5% en volumen y EDTA en una concentración
de 0,1 a 0,5 mmol/l.
10. Procedimiento de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 a 9,
caracterizado porque con el fin de evitar
trastornos causados por el ácido ascórbico, se añade la ascorbato
oxidasa.
11. Procedimiento de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 a 10,
caracterizado porque se realiza una doble
determinación, añadiéndose el substrato solamente en una de las
determinaciones y valorándose como valor medido la diferencia entre
la determinación sin substrato y la determinación con substrato.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19741447 | 1997-09-19 | ||
| DE19741447A DE19741447A1 (de) | 1997-09-19 | 1997-09-19 | Verfahren und Nachweis zur Bestimmung enzymatischer Reaktionen in Urin |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2216218T3 true ES2216218T3 (es) | 2004-10-16 |
Family
ID=7842988
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES98115696T Expired - Lifetime ES2216218T3 (es) | 1997-09-19 | 1998-08-20 | Procedimiento para la deteccion y la determinacion de reacciones enzimaticas en la orina. |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6013465A (es) |
| EP (1) | EP0903410B1 (es) |
| JP (1) | JPH11187898A (es) |
| AT (1) | ATE266736T1 (es) |
| CA (1) | CA2247648A1 (es) |
| DE (2) | DE19741447A1 (es) |
| ES (1) | ES2216218T3 (es) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7727206B2 (en) * | 2005-12-27 | 2010-06-01 | Gorres Geoffrey H | Device for monitoring a patient for a urinary tract infection |
| US20100120073A1 (en) * | 2007-05-08 | 2010-05-13 | Superior Medical Llc | Methods and devices for detecting organisms causing urinary tract infections |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4499185A (en) * | 1982-05-17 | 1985-02-12 | Miles Laboratories, Inc. | Test for esterase activity in a liquid sample |
| US4637979A (en) * | 1984-04-06 | 1987-01-20 | Miles Laboratories, Inc. | Composition and test device for determining the presence of leukocytes containing a zwitterion coupling agent |
| US4755472A (en) * | 1986-01-16 | 1988-07-05 | Miles Inc. | Stable composition for the determination of peroxidatively active substances |
| EP0279614A3 (en) * | 1987-02-17 | 1990-03-21 | Synbiotics Corporation | Stable peroxide substrate formulation |
| US5135875A (en) * | 1990-08-15 | 1992-08-04 | Abbott Laboratories | Protein precipitation reagent |
| JPH06148168A (ja) * | 1992-11-09 | 1994-05-27 | Kyoto Daiichi Kagaku:Kk | 過酸化活性物質検出用組成物 |
| US5516700A (en) * | 1993-05-28 | 1996-05-14 | Chimera Research And Chemical, Inc. | Automated urinalysis method |
-
1997
- 1997-09-19 DE DE19741447A patent/DE19741447A1/de not_active Withdrawn
-
1998
- 1998-08-20 DE DE59811370T patent/DE59811370D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1998-08-20 ES ES98115696T patent/ES2216218T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-20 EP EP98115696A patent/EP0903410B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-20 AT AT98115696T patent/ATE266736T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-09-17 CA CA002247648A patent/CA2247648A1/en not_active Abandoned
- 1998-09-18 US US09/157,105 patent/US6013465A/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-09-18 JP JP10263824A patent/JPH11187898A/ja not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0903410A1 (de) | 1999-03-24 |
| EP0903410B1 (de) | 2004-05-12 |
| CA2247648A1 (en) | 1999-03-19 |
| US6013465A (en) | 2000-01-11 |
| JPH11187898A (ja) | 1999-07-13 |
| ATE266736T1 (de) | 2004-05-15 |
| DE59811370D1 (de) | 2004-06-17 |
| DE19741447A1 (de) | 1999-03-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6395504B1 (en) | Use of phage associated lytic enzymes for the rapid detection of bacterial contaminants | |
| JP4646147B2 (ja) | 試料採取およびアッセイ用のデバイス | |
| ES2666350T3 (es) | Método y dispositivo para la detección combinada de infecciones virales y bacterianas | |
| CN101128738B (zh) | 分析方法 | |
| ES2244861T3 (es) | Dispositivo cromatografico y procedimiento de deteccion de un analito en una muestra de sangre. | |
| US4859583A (en) | Chemiluminescent immunochemical technique for low molecular weight antigens | |
| US20080026417A1 (en) | Assays for trichomonal and other hydrolases | |
| EP0335244A2 (en) | Solid-phase analytical device and method for using same | |
| JPH04258765A (ja) | 診断試験用キットおよびこれを用いる方法 | |
| CS275761B6 (en) | Apparatus for carrying out analyses | |
| US20220258154A1 (en) | Devices, methods and systems for reducing sample volume | |
| CN102043058A (zh) | 用于预测肿瘤的乙酰金刚烷胺的检测试剂盒 | |
| EP1066516B1 (en) | METHOD and KIT FOR THE DETECTION AND IDENTIFICATION OF CRYSTALS IN BIOLOGICAL FLUIDS | |
| EP0094554A1 (en) | Test for esterase activity in a liquid sample | |
| EP1069432B1 (en) | METHOD FOR EXAMINING IgA NEPHROPATHY | |
| ES2322931T3 (es) | Preparacion de esferas para pruebas de diagnostico. | |
| CN113030456A (zh) | 一种抗环瓜氨酸肽抗体的检测试纸条、检测卡及试剂盒 | |
| ES2754237T3 (es) | Nuevo sistema de ensayo de PoC y procedimiento | |
| US4476016A (en) | Heart attack screening method, apparatus and kit for same | |
| US5096812A (en) | Assay method for gamma glutamyltransferase (GGT) in liquid blood and dried blood | |
| PT93548A (pt) | Equipamento e metodo de dosagem enzimatica aplicavel em celulas completas | |
| US20180321202A1 (en) | Methods and devices for detecting methanol poisoning using formate oxidase | |
| FI68653B (fi) | Metod foer bestaemning av tyroxin-bindningsindex i serum och testfoerpackning foer utfoerande av bestaemningen | |
| Breyer et al. | The adsorptive capacity of serum proteins in renal insufficiency. | |
| ES2316302B1 (es) | Metodo de analisis inmunologico, su utilizacion y kit para su realizacion. |