ES2224385T3

ES2224385T3 - Composicion de polimero de condensacion para evitar el embarazo.

Info

Publication number: ES2224385T3
Application number: ES98919920T
Authority: ES
Inventors: Andrew J. Sonderfan; Albert T. Profy; Toni Chancellor; Margo Mckinlay
Original assignee: Procept Inc
Current assignee: Procept Inc
Priority date: 1997-05-01
Filing date: 1998-04-27
Publication date: 2005-03-01
Anticipated expiration: 2018-04-27
Also published as: BR9809378A; DE69824580T2; CA2288024C; CN1124137C; DK0981354T3; JP2001523251A; KR100567796B1; NZ500640A; AU732693B2; RU2203672C2; CN1254288A; ATE269092T1; KR20010012149A; EP0981354B1; EP0981354A1; SI0981354T1; CA2288024A1; ZA983655B; JP4350805B2; DE69824580D1

Abstract

La invención se refiere al descubrimiento de que los polímeros de condensación de un aldehído y los ácidos sulfónicos aromáticos y fracciones de los mismos, tales como los polímeros de condensación del ácido nafatalenosulfónico en forma de formaldehído, pueden evitar el embarazo en un individuo.

Description

Composición de polímero de condensación para evitar el embarazo.

Antecedentes de la invención

Muchos polímeros de condensación de formaldehído y ácidos sulfónicos aromáticos se han descrito anteriormente. Los documentos de patente Nº 4.604.404, 5.677.343 y 5.614.559 de Estados Unidos, describen el uso de tales polímeros como agentes antivirales frente al virus del Herpes simplex y a la infección del VIH. Sin embargo, las referencias no enseñan o sugieren el uso de tales polímeros en la prevención del embarazo.

Las formulaciones espermicidas son formas populares de contraconcepción reversible en los Estados Unidos (Forrest, J.D. y Fordyce, R.R. Fam. Plann. Perspect. 20:112-118 (1988)). La mayoría de las formulaciones anticonceptivas intravaginales contienen el espermicida, nonoxinol-9 (N9) como el ingrediente activo. Estas formulaciones, típicamente cremas, geles, o espumas, son en general inmediatamente eficaces a la aplicación y se pueden aplicar hasta aproximadamente una hora antes de la relación (Hatcher, R.A. et al., "Contraceptive Technology, 16ª Edición Revisada" Nueva York, Irvington Publishers (1994)). Las películas anticonceptivas vaginales, tales como "VCF" (Apothecus, Inc., Oyster Bay, NY), son las introducciones más recientes en el mercado, al menos en los Estados Unidos. En contraste con otros anticonceptivos intravaginales, las películas deben ser introducidas algunos minutos antes de la relación para asegurar la disolución y dispersión adecuada previa al contacto con el esperma.

Cuando se usan solos, los espermicidas tienen un porcentaje de fallo de aproximadamente 21% (esto es, típicamente el 21% de parejas que usan estos productos experimentarán un embarazo accidental en el primer año de uso). La eficacia dada a conocer mejora bastante cuando los espermicidas se usan en combinación con métodos de barrera, por ej., condones (Hatcher, R.A. et al., "Contraceptive Technology, 16ª Edición Revisada," New York, Irvington Publishers (1994)).

Compendio de la invencion

Esta invención se refiere al descubrimiento de que los polímeros de condensación de ácidos sulfónicos aromáticos y un aldehído y sus fracciones, especialmente polímeros de formaldehído de ácido naftalenosulfónico pueden inhibir o prevenir el embarazo. La definición de prevención o inhibición del embarazo incluye, por ejemplo, la prevención o inhibición de la fertilización, la concepción o la implantación de un huevo fertilizado o embrión en el endometrio del útero en un animal hembra. Los compuestos de la presente invención han mostrado tener poca o ninguna irritación vaginal. En base a estos hallazgos, los polímeros de condensación de ácidos sulfónicos aromáticos y un aldehído y sus fracciones se pueden usar como agentes anticonceptivos. Así la invención se refiere al uso de los compuestos descritos en la fabricación de una formulación anticonceptiva.

En un aspecto, la invención se refiere al uso de una composición que comprende un polímero de condensación de un ácido sulfónico aromático y un aldehído o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en un vehículo fisiológicamente aceptable, como el agente anticonceptivo para la fabricación de una formulación anticonceptiva, en la que el polímero está presente en la composición en una concentración entre 1% y 10% en peso.

En otro aspecto, la invención se refiere al uso de una composición que comprende un polímero de condensación de un ácido sulfónico aromático y un aldehído o una de sus sales farmacéuticamente aceptables en un vehículo no anticonceptivo fisiológicamente aceptable, como el agente anticonceptivo para la fabricación de una formulación anticonceptiva.

Descripción detallada de la invención

La preparación de polímeros de condensación de aldehído de ácidos sulfónicos aromáticos es generalmente conocida en la técnica. Los polímeros preferidos poseen la estructura general:

[ ---

\delm{A}{\delm{\para}{(SO _{3}  M) _{x} }}

r --- CHR --- ]_{n}

Los ácidos sulfónicos aromáticos, como los empleados aquí, incluyen anillos heterocíclicos y carbocíclicos aromáticos sustituidos con uno o más restos de ácido sulfónico (por ej., x puede ser 1 a 4). Los anillos carbocíclicos aromáticos (Ar) incluyen, por ejemplo, fenilo, naftilo, tetrahidronaftilo, bifenilo, fenilalquil-fenilo, fenilalquenilfenilo, fenoxifenilo, feniltiofenilo y fenoxialcoxifenilo. Los anillos heterocíclicos aromáticos (Ar) incluyen, por ejemplo, piridinilo, pirimidinilo, quinolinilo, tiofenilo, furanilo, pirazolilo, imidazolilo, pirrolilo y tiazolilo. Los aldehídos (CHRO) útiles en la preparación de compuestos para la presente invención incluyen, por ejemplo, paraformaldehídos o formaldehídos, acetaldehído sustituido o no sustituido, propionaldehído y benzaldehído. Preferiblemente, el aldehído es formaldehído. La R correspondiente de la fórmula puede ser hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido (preferiblemente un alquilo inferior), arilo sustituido o no sustituido (tal como fenilo). Los sustituyentes incluyen, por ejemplo, alquilo, alcoxi, arilo, ariloxi, halógeno, hidroxi, amino, alquilamino, dialquilamino, carboxilo, sulfonato y fosfonato. El polímero puede ser un ácido libre, éster o una sal farmacéuticamente aceptable. Así, M puede ser hidrógeno, un catión farmacéuticamente aceptable (ej., un metal alcalino, metal alcalino-térreo, o grupo amonio), o un grupo sulfonato bloqueante que preferentemente se escindirá o hidrolizará in vivo (por ej. un alquilo lineal o ramificado). El término "polímero", tal como se emplea aquí, incluye cualquier compuesto formado por la unión de dos o más monómeros o unidades repetidas (por ej., n es un entero de dos o más). La Patente de Estados Unidos 4.604.404 ejemplifica polímeros adecuados útiles aquí y métodos de preparación, cuyas enseñanzas se incorporan aquí mediante referencia. Los polímeros están también descritos en las patentes de Estados Unidos Nºs 5.677.343 y 5.614.559.

Un polímero preferido especialmente es el producto de condensación de un ácido naftaleno-sulfónico y formaldehído de la fórmula:

1

en la que x es 1 ó 2; R_{2} es hidrógeno, alquilo, alcóxi o un grupo aniónico, tal como carboxilo y fosfonato; M es hidrógeno o un catión farmacéuticamente aceptable. En algunos casos, uno o más de los grupos ácidos sulfónicos pueden estar bloqueados irreversiblemente.

Los polímeros de la presente invención también incluyen copolímeros en los que el aldehído y/o el ácido sulfónico aromático son añadidos como mezclas de diferentes aldehídos y/o ácidos sulfónicos aromáticos (tales como los definidos anteriormente). También están incluidos los copolímeros en los que se añade un grupo aromático, no sustituido con ácido sulfónico. Por ejemplo, el grupo aromático puede ser un grupo carbocíclico o heterocíclico (como se definió anteriormente) no sustituido o sustituido con uno o más grupos, tales como alquilo, alcoxi, arilo, ariloxi, halógeno, hidroxi, sulfonamida, carboxilo o fosfonato.

Se prefiere que el peso molecular (PM) del polímero sea menor que aproximadamente 50 kDa y/o mayor que aproximadamente 0,7 kDa. Más preferidos son los polímeros con un peso molecular entre aproximadamente 1,3 a 30 kDa, o entre aproximadamente 4 a 12 kDa. Un polímero especialmente ventajoso es un condensado de ácido 2-naftalenosulfónico y formaldehído de 5 \pm 1kDa.

Preferiblemente, el número medio de ácidos sulfónicos por grupo aromático está entre aproximadamente 0,5 a 2,0, el más preferido está en aproximadamente 1,0.

Los polímeros de peso molecular estrecho o monodispersado pueden ser preparados por métodos de fraccionamiento generalmente conocidos en la técnica (ver, ej., Polymer Fractionation, Editors, Cantow y Manfred, Jr., (Acad. Press) 1967), tales como precipitación de disolvente, cromatografía de permeación de gel, precipitación con sales y diafiltración. Alternativamente, los polímeros pueden ser fabricados mediante condensación por etapas o controlada de ácido naftalenosulfónico y formaldehído.

Un "polímero de estrecha dispersión" se define como una composición polimérica en la que sustancialmente sus especies poseen el mismo peso molecular. Por ejemplo, un polímero de estrecha dispersión incluye composiciones poliméricas en las que la polidispersidad es aproximadamente menor que 2; preferiblemente menor que aproximadamente 1,5 y más preferiblemente menor que aproximadamente 1,2. Un "polímero monodispersado" se define como una composición polimérica en la que sustancialmente todas sus especies poseen un peso molecular único, tales como un tetrámero, pentámero, hexámero, heptámero, octámero, nonámero, etc.

Como se describió anteriormente, el polímero de condensación puede, opcionalmente, ser administrado como una sal farmacéuticamente aceptable. Ejemplos de sales adecuadas incluyen las sales alcalinas, de metal alcalino y sales de amonio, tales como sales de calcio, sodio, potasio, amonio y alquil o aril amonio (tales como sales de trimetilamonio, trietilamonio y trietanolamonio (trolamina)).

La preparación o el polímero de esta invención puede ser administrada intravaginalmente (ej., formulación anticonceptiva, supositorio o lubricante) en formulaciones de dosis que contienen un vehículo fisiológicamente aceptable y adyuvantes y conservantes opcionales. Las formulaciones adecuadas incluyen geles, espumas y cremas fisiológicamente aceptables. Los vehículos incluyen agua estéril salina, soluciones de Ringer, y soluciones de cloruro sódico isotónicas. Pueden ser usadas específicamente, por ejemplo, inyección de cloruro sódico USP (0,9%), inyección de Ringer USP, inyección de Ringer lactatada USP, inyección de lactato de sodio USP, inyección de dextrosa USP (5% o 10%), agua bacteriostática para inyección USP y agua estéril para inyección USP. En otra realización, el compuesto está compuesto en, aplicado a o rociado sobre, por ej. como una película, sobre un dispositivo anticonceptivo, tal como un condón (incluyendo condones masculinos y condones femeninos, como en el condón femenino REALITY ( Campaña de Salud de Mujeres), Patente de Estados Unidos 4.735.621) o diafragma. El nivel de dosis específico del ingrediente activo dependerá de numerosos factores, incluyendo la actividad biológica de la preparación en particular y la salud general del paciente o individuo.

Típicamente, el compuesto estará formulado en un gel a una concentración de entre aproximadamente 0,5% a 50%, preferiblemente entre aproximadamente 1% a aproximadamente 10% (p/p). Los agentes gelificantes para formulaciones farmacéuticas son generalmente conocidos en la técnica. Por ejemplo, el agente gelificante puede ser hidroxietil-celulosa (tal como hidroxietil-celulosa 250 HHX, (Natrosol)), goma guar, goma de celulosa, ácido poliacrílico entrecruzado (tal como Carbopol 1342, Carbomer 974B, Carbomer 980, Carbomer 910, Carbomer 1382), o poloxímero Theronic. Un agente gelificante preferido especialmente es Carbomer 1382, un copolímero de ácido acrílico y un metacrilato de cadena larga entrecruzada con aliléteres de pentaeritritol. El agente es generalmente añadido en una cantidad entre aproximadamente 1 a 5% en peso.

El compuesto o formulación es generalmente administrado antes o después de la relación sexual (por ej., hasta una hora antes o doce horas después de la relación), tal como inmediatamente antes o después de la relación sexual (por ej. dentro de los 30 minutos antes a una hora después de la relación). El compuesto puede ser administrado abiertamente (con el consentimiento del compañero masculino) o encubiertamente (sin la cooperación o consentimiento del compañero masculino).

Ventajosamente, el compuesto es administrado en una cantidad que es eficaz para actuar no sólo como un anticonceptivo, sino también como un agente antiviral o antibacteriano (por ej., en una cantidad que inhibe la infección por VIH o la infección por herpesvirus u otras enfermedades transmitidas sexualmente). Otros agentes antivirales que interfieren con la replicación viral del VIH pueden ser administrados en conjunción con esta preparación, según los métodos de esta invención, con resultados sinérgicos en algunos casos. La co-administración de agentes antivirales puede inhibir eficazmente varios estadíos del ciclo de vida del virus, optimizando así el beneficio terapéutico de la preparación de esta invención, para reducir o eliminar la infectividad viral y los síntomas asociados con ella. Por ejemplo, los agentes inhibidores de la transcriptasa inversa del VIH ( tales como azidotimidina (AZT), didesoxinosina (ddi), lamivudina, estavudina o PMPA), inhibidores de cubierta (biciclam), inhibidores de integración, trascripción, o translación (oligonucleótidos antisentido), otros inhibidores de fusión/unión, inhibidores de ensamble/liberación (por ej., interferón), inhibidores de proteinasa de VIH (tales como Saquinavir, Indinavir, Ritonavir, Nelfinavir, VX-478, o inhibidores de transcriptasa inversa sin nucleósido (tales como delavirdina o nevirapina) pueden ser co-administrados con el polímero de condensación separadamente o como una formulación de dosis única que contiene el polímero de condensación y otro(s) agente(s) antiviral (es).

La invención puede también ser administrada en conjunción con formulaciones anticonceptivas adicionales, tales como nonoxinol-9, octoxinol, clorohexidina, cloruro de benzalconio y menfegol.

La invención tiene ventajas sobre otros métodos para inhibir la concepción ya que no exhibe riesgos de fallo de rotura bajo condiciones de riesgo (como en condones masculinos y femeninos), no requiere la cooperación y/o consentimiento del compañero masculino ( como en los condones femeninos y masculinos), no está asociada con efectos adversos en el tracto reproductivo (como en dispositivos intrauterinos), puede ser adicionalmente eficaz en la prevención de enfermedades transmitidas sexualmente (ETS, no mostrado con espermicidas y anticonceptivos orales), no requiere administración diaria para que sea eficaz (como en los anticonceptivos orales), y no es generalmente absorbida sistémicamente, por lo que se evitan efectos laterales atribuidos a la administración sistémica (como en anticonceptivos orales).

La invención se ilustrará además mediante la siguiente ejemplificación no limitante:

Ejemplificación Ejemplo 1 Síntesis de Condensados: Polimerización

Una mezcla de sal sódica de ácido 2-naftalenosulfónico (1,15 g, 5 mmol), 37% de formaldehído acuoso (0,65 ml, \sim6 mmol), y ácido sulfúrico (0,7 g de ácido sulfúrico concentrado en 0,5 ml de agua) se calentó a 98ºC hasta 100ºC durante 43 horas. La mezcla de reacción se diluyó entonces con agua (30 ml), se neutralizó con carbonato cálcico a pH 7 y se filtró, el filtrado se evaporó a sequedad para producir 1,22 g del condensado del polímero.

El experimento anterior se repitió modificando los parámetros de la reacción como se ejemplifica en la tabla 1 como ejemplos 2 al 14.

2

Ejemplo 15 Síntesis del polímero de condensación de ácido 2-naftalenosulfónico y formaldehído

Una mezcla de 5,7 g de ácido 2-naftalenosulfónico, sal sódica (23 mmol) se combinó con \sim3 ml de formaldehído al 37% (\sim43 mmol), 1,9 ml de ácido sulfúrico concentrado, y 5 ml de agua y se calentó en un tubo sellado durante \sim24 horas a 120-130ºC. La mezcla de reacción se diluyó con agua (\sim20 ml) y neutralizó a pH = 7 con NaOH. La reacción neutralizada puede ser concentrada a sequedad para obtener \sim11 g, que consiste en el condensado y sales.

Síntesis de Condensados: Por etapas Ejemplo 16 Ácido 5-bromo-2-naftalenosulfónico

Se disolvió ácido 5-amino-2-naftalenosulfónico (11,15 g, 50 mmol) en 100 ml de solución NaOH 0,5N con agitación. La solución rojo-oscuro se enfrió a 0ºC mediante adición de hielo (\sim100g). Antes de que el hielo se disolviera completamente, se añadieron gota a gota 20 ml de solución acuosa de HBr al 40% y la suspensión resultante se mantuvo de -5ºC a 0ºC, entonces se añadieron en 30 minutos 10 ml de solución acuosa de NaNO_{2} (3,65 g). La mezcla se agitó continuamente durante 30 minutos a -5ºC - 0ºC. El NaNO_{2} no reaccionado se descompuso mediante adicción de 350 mg de urea al final de la reacción. La suspensión oscura resultante de diazonio se mantuvo por debajo de 0ºC, y se añadió gota a gota a lo largo de un periodo de una hora a una solución de CuBr (7,15 g) en 40 ml de HBr al 40% a 70ºC con agitación vigorosa (la solución de CuBr estaba en un matraz de 1000 ml). La mezcla oscura se agitó a 80ºC durante 40 minutos, entonces se enfrió a temperatura ambiente y se trató con 200 ml de agua. El precipitado se recogió en un embudo Buchner y se lavó con aproximadamente 50 ml de agua. Se obtuvieron 13,9 g de producto bruto tras secar en vacío. El compuesto bruto se refluyó en 500 ml de agua durante 2 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se evaporó a sequedad y sólido se secó in vacuo para producir 8,23 g (57% de rendimiento) de producto puro.

La pureza del producto se chequeó con HPLC de fase inversa y ^{1}H-RMN (250 MHz).

Ejemplo 17 Ácido 8'-metilen-bis-5-bromo-2-naftalenosulfónico (sal sódica)

Una mezcla de ácido 5-bromo-2-naftalenosulfónico (17,22 g), AFT (200 ml), resina de Amberlyst-15 (17g, Aldrich), paraformaldehído (4,5 g) y H_{2}O (50 ml) se calentaron a 130ºC durante 14 horas en un tubo de pared gruesa cerrado. Tras el enfriamiento a temperatura ambiente, la mezcla se filtró en un embudo Buchner y, el sólido recogido se lavó con aproximadamente 10 ml de AFT, se disolvió en 250 ml de metanol/agua (4/1) y se filtró. El filtrado se evaporó a sequedad y el sólido se suspendió en 80 ml de agua, se neutralizó a pH \sim8 con NaOH 10 M. El sólido se filtró, se lavó con 60 ml de acetona y se secó in vacuo toda la noche. Se obtuvieron 15,03 g (80% de rendimiento) de producto puro.

Ejemplo 18 Ácido 8,8'-metilen-bis-2-naftalenosulfónico

Una suspensión de ácido 8,8'-metilen-bis-5-bromo-2-naftalenosulfónico (sal sódica, 6,30 g), NaOH (0,32 g) en 300 ml de MeOH, se añadió lentamente con Pd-C (10%, 5,0 g) bajo atmósfera de argón. La suspensión se agitó con H_{2}a 0,34 MPa durante 18 horas. Entonces se filtró la mezcla y el filtrado se hizo pasar a través de una columna empaquetada con \sim20 g de resina IR-120. El disolvente se eliminó en rotavapor, y el residuo se disolvió en 200 ml de agua y entonces filtrado otra vez. El filtrado se neutralizó con NaOH 5 M a pH \sim7 y se concentró a \sim50 ml volumen, entonces se añadieron 300 ml de acetona lentamente con agitación. El precipitado blanco resultante se recogió en un embudo Buchner, se lavó con 20 ml de acetona y se secó in vacuo para dar como resultado 3,51 g de producto seco (sal sódica).

Ejemplo 19 y 20 Oligomerización para tetrámero y hexámero, respectivamente

Se convirtieron 5,11 g de sal sódica del dímero en ácido libre haciéndola pasar a través de una columna de resina IR-120 en agua. El agua se eliminó en rotavapor y el residuo se disolvió otra vez en 10 ml de agua y se transfirió a 50 ml de AFT en un matraz de pared gruesa, entonces se añadió paraformaldehído (0,195 g) y se selló el matraz. La solución se agitó durante 15 horas de 60ºC-65ºC. El disolvente se eliminó y el residuo se disolvió en metanol, se cubrió con gel de sílice y se sometió a una columna de gel de sílice instantánea (EM Science, gel de sílice 60 F-254, malla de 230-400 para columna), donde la elución se comenzó con 16:1:1 de THF:MeOH:H_{2}O a relación final de 5:1:1.

El sólido de la fracción del tetrámero se neutralizó a pH\sim7 con NaOH 5M en 5 ml de agua, se le añadieron 5 ml de MeOH y 125 ml de acetona para dar 0,94 g de precipitado. La sal se convirtió en ácido libre haciéndola pasar a través de resina IR-120 y se obtuvieron 0,73 g de tetrámero seco.

De la fracción del hexámero, se obtuvieron 0,21 g del hexámero mediante el mismo método que el descrito para el tetrámero

Se recogieron de la primera fracción 3,5 g de material iniciador (dímero).

Ejemplo 21 Octámero

Una mezcla de tetrámero (130 mg), resina de Amberlyst-15 (150 mg), agua (0,4 ml), y 2 ml de solución AFT de paraformaldehído (1 mg/ml) se agitó a 85ºC durante 15 horas en un vial de muestra cerrado con tapa de teflón. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con 5 ml de agua y se filtró. El filtrado se evaporó a sequedad, se disolvió en metanol, y se cubrió con gel de sílice, entonces se pasó a través de una columna instantánea donde el tetrámero se eluyó con 6:1:1 de THF:isopropanol:H_{2}O, y el octámero se eluyó con MeOH:H_{2}O (85:15). De la última fracción, se obtuvieron 50 mg de octámero bruto.

El octámero bruto se hizo pasar a través de resina IR-120, purificada mediante HPLC preparativa de fase inversa y se obtuvieron 15 mg de octámero (96,6% puro mediante HPLC analítica).

Ejemplo 22 Cromatografía de exclusión por tamaño

Alícuotas de soluciones de polímero sintético se fraccionaron por tamaño mediante el uso de una bomba Waters M625, detector diodo array M996, sistema software Millenium y o bien dos columnas Waters Ultrahydrogel 6 \mum 250 angstrom (7,8 x 300 mm; caudal de fase móvil 1ml/min) o una columna G3000PW TosoHaas 17\mum (21,5x 600mm) acoplada con una columna HWP Guard TSK-Gel (21,5 x 75 mm; caudal 3 ml/min). La fase móvil consistía en acetato amónico 0,2 M (pH 6,2) hecho de ácido acético glacial (Reactivo Baker analizado por HPLC) e hidróxido amónico (25%, Mallinckrodt) y 35% de acetonitrilo (Marca B&J). Antes del uso, la fase móvil se filtró a través de una membrana de nilón y se barboteó con helio de Grado 5. Se inyectó una solución de las muestras sintéticas a 2,2-10 mg hasta 200 \mul de agua MilliQ en las columnas Ultrahydrogel o 40-300 mg en fase móvil hasta 2 ml de agua MilliQ (50:50, v/v) en las columnas TosoHaas tras someter a ultrasonidos (Branson 2200), movimiento de remolino y filtración (0,45 \mum Acrodisc, Gelman Sciences). Las fracciones recogidas se agruparon según el tiempo de elución. Los perfiles cromatográficos superpuestos mediante medidas de absorbancia se resolvieron con réplicas y el disolvente se eliminó usando aspirador de velocidad Savant a alta temperatura (tanto SC200 y Vapornet VN100 como Plus SC210A). El residuo se redisolvió en agua y se resecó para eliminar el disolvente atrapado. El material se pesó, se disolvió en agua y normalizó a concentraciones patrón usando medidas de absorbancia a 290nm frente a patrones.

Ejemplo 12, la tabla 1 anterior, se fraccionó de esta manera para obtener fracciones de polímero que poseyeran un peso molecular de pico (pM) de 31 kDa (peso molecular medio (PM) de 38 kDa); un pM de 16 kDa (PM de 22 kDa); un pM de 10 kDa (PM de 15 kDa); y un pM de 5,6 kDa (PM de 10 kDa).

Ejemplo 23 Metodología de dispersión de luz

Las muestras se sometieron a HPLC analítica usando una bomba Waters 625/detector IR 410 modificado que contenía un detector de intensidad de dispersión de luz láser PD2000 (Precision Detectors, Inc., Amherst, MA). Este sistema se equipó con una columna de CPG acuosa Ultrahydrogel Waters 250 (7,8 mm D.I. x 300 mm, tamaño de poro 250 \ring{A}, límite de exclusión 8 x 10^{4}, PEO). La fase móvil consistió en 65% de acetato de amonio 0,2 M, pH = 6,5/35% de acetonitrilo en modo isocrático con un caudal de 1 ml/min. La elución se monitorizó mediante IR, dispersión de luz de alto ángulo (90º) y bajo ángulo (15º) y de esta información se obtuvieron los intervalos de peso molecular absolutos.

Ejemplo 24 Fraccionamiento del polímero

Las sales del proceso de neutralización se eliminaron del polímero producido en el Ejemplo 15 a través de un proceso de fraccionamiento mediante la adición de un disolvente orgánico polar (acetona, etanol, o metanol). Se trató una solución acuosa de la mezcla de la reacción final (\sim10 g/ 20 ml) con cantidades crecientes de disolvente orgánico. El disolvente orgánico inicial produjo que las sales disueltas formaran una capa inferior.

Una vez que la mayoría de la sal se eliminó, se realizó el fraccionamiento del material a intervalos de peso molecular más homogéneo. Se añadió disolvente adicional para formar una capa inferior más oscura. El volumen del disolvente orgánico añadido se determinó mediante la monitorización de las dos fases por CPG/SL. En general, el material de peso molecular más alto se trasladó a una capa inferior y el material de peso molecular más bajo permaneció en la capa superior.

Cuando el intervalo de peso molecular deseado se identificó, fue aislado de una de varias maneras. El primer método fue eliminar simplemente todos los disolvente volátiles del material (mediante una combinación de evaporación rotatoria bajo presión reducida y horno de vacío). El segundo método fue dispersar la solución del producto en un gran exceso de disolvente orgánico polar (acetona, etanol, o metanol) y recoger el sólido resultante mediante filtración.

El material preparado según la descripción de la reacción anterior y el proceso de fraccionamiento produjo diversos pesos moleculares en intervalos estrechos (\sim3K, \sim5K, \sim10K, \sim25K, XE 15/3, XE 15/5, XE 15/10 y XE 15/25, respectivamente).

Ejemplo 25

La sal sódica del ácido 2-naftalenosulfónico (1000g) se añadió a un reactor de cristal con 8925 ml de etanol, 3800 ml de agua desionizada y 10 g de carbón. La mezcla se calentó aproximadamente a 78ºC y se filtró a través de celite. La mezcla se enfrió y se mantuvo a temperatura ambiente durante aproximadamente 6 horas. Los cristales húmedos se recogieron mediante filtración y se secaron en un horno de vacío (80ºC/25'' vacío) hasta peso constante. El rendimiento medio fue 59%.

El ácido 2-naftaleno sulfónico recristalizado (1000 g como se preparó anteriormente) se combinó entonces con agua (866 g) y 99% de ácido sulfúrico (330 ml). El reactor se selló y se calentó con agitación hasta aproximadamente 105ºC sobre un baño de aceite a 130ºC. El formaldehído (502 g, solución acuosa al 37%) se añadió al reactor a lo largo de 45 minutos. El reactor se mantuvo durante aproximadamente 10 horas. A lo largo del transcurso de la reacción, la presión interna se elevó a aproximadamente 76 KPa.

Tras completar de la reacción, los contenidos del reactor se enfriaron y diluyeron con 500 g de agua desionizada. El pH se ajustó desde aproximadamente algo menos que 1 a un pH de aproximadamente 7 mediante la adición de aproximadamente 500 g de NaOH. La reacción produjo al menos cerca de 90% de polímero no fraccionado.

Las sales del proceso de neutralización se eliminaron mediante fraccionamiento por la adición de 10 l de acetona, resultando la formación de dos capas. La capa inferior se descartó. A la superior, se le añadieron 2 l de acetona, resultando otra vez dos capas, de las cuales la superior se descartó. Aproximadamente 600g de agua se añadieron a la capa inferior con aproximadamente 1,4 l de acetona, resultando de nuevo la formación de dos capas. La capa inferior se descartó, la capa superior se transfirió y trató con aproximadamente 1,2 l de acetona. La capa superior formada se descartó y aproximadamente 520 ml de agua se añadieron a la capa inferior. La solución se concentró y transfirió a un horno de vacío y se secó a 80ºC/ 24'' de vacío hasta peso constante. El fraccionamiento fue monitorizado mediante CPG/SL. El proceso produjo el polímero condensado, con peso molecular entre aproximadamente 4000-6000 daltons (rendimiento medio 11%).

Ejemplo 26

Las cantidades especificadas del Ejemplo 25 (solución acuosa al 10%), agua purificada (USP), y ácido láctico (solución acuosa al 1% (p/p)) se mezclaron minuciosamente en las cantidades establecidas en la Tabla 2. Durante la mezcla, la cantidad expuesta del Carbomer 1382 (BF Goodrich, Cleveland, OH) se añadió y la agitación se mantuvo hasta que el Carbomer se hidrató. Una solución acuosa al 50% (p/p) de Trolamina (Spectrum, New Brunswick, NJ) se añadió, con mezcla. El pH se monitorizó.

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Los geles se vertieron en tubos de 5/8 x 76,3 mm de terminación ciega de aluminio con revestimiento interno de epoxi con tapones de polipropileno y cuello de tamaño Nº. 16 especial (Montebello). La cantidad de relleno fue aproximadamente 3,7 g. Los tubos se sellaron y entonces se esterilizaron en un autoclave a 121ºC durante 20 minutos.

Experimento 27

Actividad biológica

Los efectos potenciales irritantes de concentraciones de polímero de 0,1%, 1% y 4% (Formulaciones 3, 5 y 6) como los formulados anteriormente, (gel PRO 2000) se evaluaron en las vaginas de conejas blancas de Nueva Zelanda. Cinco conejas en cada uno de los 5 grupos recibieron una dosis diaria de 1 ml de gel PRO 2000, un gel vehículo (Formulación 2), o una formulación de nonoxinol-9 al 4% (Conceptrol®; incluido para comparación) en la bóveda de la vagina. El tratamiento se repitió durante 14 días consecutivos. Un día después de la última dosis, las conejas se sacrificaron y el tejido vaginal se eliminó para evaluación histopatológica. Todas las conejas sobrevivieron y no exhibieron síntomas clínicos de toxicidad sistémica ni signos externos de irritación. Las conejas en general ganaron peso durante el estudio. Las puntuaciones de irritación histopatológica se estimaron como leves en cada grupo de tratamiento, y fueron buenas dentro de los límites aceptables de este ensayo.

El efecto de los geles PRO 2000 sobre el resultado del embarazo se estudió en conejas inseminadas artificialmente. Un gel vehículo (Formulación 1), una formulación de nonoxinol-9 al 4% (Conceptrol®), gel PRO 2000 al 0,5% (Formulación 4) o gel PRO 2000 al 4% (Formulación 7) fueron dosificados intravaginalmente a cuatro grupos de diez conejas cada uno. Se suministró la dosis una vez al día (1 ml/dosis) a las conejas desde el día anterior a la inseminación artificial hasta el día 7 de gestación. El día 0 de gestación, se suministró la dosis y entonces se inseminaron 15-30 minutos más tarde con 0,5 ml de semen diluido recogido de machos fértiles. El día 19 de gestación, se sacrificaron y sometieron a autopsia, sus estados de embarazo se anotaron, y se registraron el número de cuerpos lúteos, fetos, y sitios de implantación (por cada coneja preñada). El control positivo, (Conceptrol®) fue anticonceptivo en este experimento: Nueve de cada diez conejas en el grupo de Conceptrol® no se preñaron. El gel vehículo no tuvo efecto sobre el resultado del embarazo: Dos de cada diez conejas en el grupo del gel vehículo no se preñaron, una fracción consistente con la tasa de éxito en laboratorio para la concepción tras la inseminación artificial (85-90%). Cuando se compararon con el grupo del gel vehículo, unos pocos animales a los que se les había dado gel PRO 2000 al 4% fueron preñados: tres de diez conejos. La administración de gel PRO 2000 al 0,5% no tuvo efecto sobre el número de conejas que llegaron a estar preñadas: nueve de diez conejas se preñaron. Estos resultados se obtuvieron el día en el que las conejas se sometieron a autopsia para evaluar el estado de embarazo.

El fármaco puro se evaluó para estudiar su capacidad para inhibir la hialuronidasa, una enzima que facilita la penetración de la capa de cúmulo que es necesaria para la unión de un espermatozoide a un oocito. La actividad de la hialuronidasa se cuantificó mediante la medición de la extensión de la hidrólisis del ácido hialurónico en presencia de varias concentraciones del polímero del Ejemplo 25. La enzima se preincubó con agente de ensayo durante 10 minutos, y entonces las reacciones se iniciaron mediante la adición del sustrato. Se llevaron a cabo incubaciones de treinta minutos a temperatura ambiente, y entonces el producto de la reacción se determinó colorimétricamente. Se determinó que el IC50 del polímero era aproximadamente 6 \mug/ml. El polímero resultó ser un inhibidor de hialuronidasa aparentemente irreversible muy eficaz. No se conoce aún si esta propiedad contribuye a la eficacia anticonceptiva.

El gel PRO 2000 (4%) se evaluó para la compatibilidad con condones de látex. Usando métodos estándares de ensayo, se evaluó la resistencia al estallido y las propiedades físicas de condones de látex no lubricados inmediatamente después de desenvolverlos, o tras su exposición a gel PRO 2000 al 4% (30 minutos a 37ºC, 95% de humedad relativa). El gel no afectó a las propiedades de los condones.

Equivalentes

Si bien esta invención ha sido particularmente mostrada y descrita con referencias a sus realizaciones preferidas, se entenderá por aquellos expertos en la técnica que podrían ser hechos en ella varios cambios en forma y detalles sin separarse del alcance de la invención tal como se define por las reivindicaciones adjuntas. Aquellos expertos en la técnica reconocerán o serán capaces de determinar usando sólo experimentación rutinaria muchos equivalentes a las realizaciones específicas de la invención descritas específicamente en este documento.

Claims

1. Uso de una composición que comprende un polímero de condensación de un ácido sulfónico aromático y un aldehído o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en un vehículo fisiológicamente aceptable, como el agente anticonceptivo para la fabricación de una formulación anticonceptiva, en el que el polímero está presente en la composición en una concentración entre 1% y 10% en peso.

2. Uso de una composición que comprende un polímero de condensación de un ácido sulfónico aromático y un aldehído o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en un vehículo no anticonceptivo fisiológicamente aceptable, como el agente anticonceptivo para la fabricación de una formulación anticonceptiva.

3. El uso según cualquier reivindicación anterior, en el que el polímero está presente en una concentración suficiente para inhibir la hialuronidasa.

4. El uso según cualquier reivindicación precedente, en el que el polímero de condensación es un polímero de condensación de un ácido naftaleno-sulfónico y formaldehído, y/o el polímero de condensación es un polímero de condensación mono-dispersado o estrecho.

5. El uso de la reivindicación 4, en el que el polímero de condensación tiene un peso molecular seleccionado del grupo que consiste en: menor que aproximadamente 50 kDa; entre 0,7 kDa y 50 kDa; entre 1,3 kDa y 30 kDa; y entre 4 kDa y 12 kDa.

6. El uso de la reivindicación 4, en el que el polímero de condensación tiene, o bien (a) una media de entre 0,5 a 2,0 grupos de ácido sulfónico por grupo aromático; o (b) una media de aproximadamente 1 grupo ácido sulfónico por grupo aromático.

7. El uso de la reivindicación 1 o reivindicación 2 en el que la composición es un gel, crema o espuma.

8. El uso de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la composición es administrable inmediatamente antes de la relación sexual.

9. El uso de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el polímero está presente en la composición en una concentración de aproximadamente 4% en peso.

10. Una formulación anticonceptiva para administración vaginal, comprendiendo la formulación un gel que comprende entre 1% a 10% en peso de un agente anticonceptivo que consiste en un polímero de condensación de un ácido haftaleno-sulfónico y formaldehído.

11. La formulación de la reivindicación 10, en el que el polímero tiene un peso molecular de aproximadamente 5 kDa.