ES2229376T3 - Uso de compuestos que favorecen la actividad estrogenica para el tratamiento de heridas. - Google Patents

Uso de compuestos que favorecen la actividad estrogenica para el tratamiento de heridas.

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ES2229376T3 ES97932922T ES97932922T ES2229376T3 ES 2229376 T3 ES2229376 T3 ES 2229376T3 ES 97932922 T ES97932922 T ES 97932922T ES 97932922 T ES97932922 T ES 97932922T ES 2229376 T3 ES2229376 T3 ES 2229376T3
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Abstract

LA INVENCION SE REFIERE AL USO DE COMPUESTOS QUE EJERCEN INFLUENCIA EN EL SISTEMA DE HORMONAS SEXUALES PARA EL TRATAMIENTO DE HERIDAS Y/O PATOLOGIAS FIBROTICAS. LOS COMPUESTOS PREFERIDOS PARA SU USO EN LOS TRATAMIENTOS SON HORMONAS ESTEROIDES Y ESPECIALMENTE LOS ESTROGENOS.

Description

Uso de compuestos que favorecen la actividad estrogénica para el tratamiento de heridas.
La presente invención se refiere al uso de compuestos que favorecen la actividad estrogénica para acelerar la cicatrización de heridas.
La cicatrización de heridas en adultos es un proceso reparativo complicado. El proceso de cicatrización se inicia con el reclutamiento de una variedad de células especializadas en el sitio de la herida e implica la matriz extracelular y la deposición de la membrana de base, angiogénesis, actividad de la proteasa selectiva y re-epitelización. Un componente importante del proceso de cicatrización en mamíferos adultos es la estimulación de los fibroblastos para generar la matriz extracelular. Esta matriz extracelular constituye un componente principal del tejido conectivo que se desarrolla para reparar el área herida.
El tejido conectivo que se forma durante el proceso de cicatrización es a menudo fibroso en esencia y comúnmente se forma en una cicatriz de tejido conectivo (un procedimiento conocido como fibrosis).
Una cicatriz es una estructura morfológica anormal que resulta de un daño o herida previa (por ejemplo una incisión, excisión o trauma). Las cicatrices están compuestas de un tejido conectivo que es de forma predominante una matriz de tipos de colágeno 1 y 3 y fibronectina. La cicatriz puede consistir en fibras de colágeno en una organización anormal (tal como se observa en la cicatrices de la piel) o puede ser una acumulación anormal de tejido conectivo (tal como se observa en las cicatrices del sistema nervioso central). La mayor parte de las cicatrices consisten en colágeno organizado de forma anormal y también en exceso de colágeno. En el hombre, las cicatrices en la piel pueden ser rebajadas por debajo de la superficie o elevadas por encima de la superficie de la piel. Las cicatrices hipertróficas son una forma más severa de la cicatrización normal, son elevadas por encima de la superficie normal de la piel y contienen el colágeno excesivo ordenado en un modelo anormal. Un queloide es otra forma de cicatrización patológica que no está elevada por encima de la superficie de la piel pero que también se extiende más allá de los límites del daño original. En un queloide hay excesivo tejido conectivo que está organizado de un modo anormal predominantemente en vueltas de tejido conectivo. Hay predisposiciones genéticas para formar tanto cicatrices hipertróficas como los queloides. Éstas son particularmente comunes en las razas Africo-caribeñas y Mongoloides.
Hay una necesidad de proporcionar medicamentos para favorecer la cicatrización de heridas. Por ejemplo, a menudo es deseable incrementar la velocidad de cicatrización en el caso de heridas agudas (tales como daños penetrantes, quemaduras, daños en los nervios o incluso heridas resultantes de la cirugía facultativa), heridas crónicas (tales como ulceración en diabéticos, ulceras venosas y de decúbito) o para los individuos expuestos a heridas de forma general (por ejemplo los ancianos). En estos ejemplos, las heridas pueden influenciar de forma severa en la calidad de vida o incluso resultar en daño y por consiguiente la velocidad de cicatrización precisa a menudo ser incrementada tanto como sea posible clínicamente. Cuando se incrementa la velocidad de cicatrización, a menudo hay un incremento asociado de la formación de cicatrices pero esto puede ser de importancia secundaria en comparación con el incremento deseado de la velocidad de cicatrización.
El término "herida" tal como se utiliza en el presente documento es ejemplificado pero no está limitado a los daños de la piel. Otros tipos de heridas pueden implicar daño, lesión o trauma en un tejido interno u órgano tal como el pulmón, riñón, corazón, intestino, tendones o hígado.
Aunque las consideraciones anteriores tienen principalmente aplicación a las condiciones, trastornos o enfermedades del hombre se apreciará que la cicatrización de heridas también puede ser problemática en otros animales, particularmente veterinarios o animales domésticos (por ej. caballos, vacas, perros, gatos, etc).
Ha habido varios desarrollos recientes en el campo de la cicatrización de heridas. Algunos de estos desarrollos giran alrededor del reciente conocimiento de que una formación de citoquinas y de factores de crecimiento está íntimamente implicada en la reparación de tejidos.
La patente WO-A-92/17206 describe el uso de agentes neutralizantes para los factores de crecimiento que favorecen la fibrosis que pueden ser utilizados para inhibir la formación de cicatrices durante la curación de heridas. Por ejemplo, la patente WO-A-92/17206 demuestra que las composiciones que inhiben de forma específica la actividad de los Factores de Crecimiento Transformantes \beta1 y \beta2 y del Factor de Crecimiento Derivado de las Plaquetas son particularmente beneficiosas para reducir la formación de cicatrices.
La patente WO-A-93/19769 describe el uso de factores de crecimiento no fibróticos, tales como los Factores de Crecimiento Transformantes \beta3, de los que se ha encontrado de forma sorprendente que favorecen la cicatrización de una herida sin inducir fibrosis.
La patente GB-A-2.288.118 describe el uso de anticuerpos específicos generados contra los factores de crecimiento que favorecen la curación porque potencian las acciones de dichos factores de crecimiento.
Otro desarrollo implica el uso de manosa-6-fosfato para uso en el tratamiento de los trastornos fibróticos asociados con la acumulación de la matriz extracelular y con los niveles elevados de Factores de Crecimiento Transformantes \beta1 o \beta2 (GB-A-2.265.310). Se cree que la manosa-6-fosfato interfiere con la conversión de formas latentes de estos Factores de Crecimiento Transformantes en su forma activa.
Otras composiciones que influencian la eficacia del factor de crecimiento y que favorecen la curación de heridas están descritas en la patente WO-A- 95/26203.
Además, Jaworski (Base de datos Embase Elsevier Science Publishers, Amsterdam, NL, No de acceso 279680 Roczn. Akad. Marchhewskiego, 1973s describe que el estradiol tiene un efecto en la curación de heridas de la vejiga urinaria en cobayas.
A pesar de estos avances, hay todavía una necesidad de continuar el desarrollo de medicamentos que pueden ser utilizados para modular la curación de heridas.
De acuerdo con un primer aspecto de la presente invención, se proporciona el uso de un compuesto que favorece la actividad estrogénica en la fabricación de un medicamento para acelerar la curación de heridas de la piel.
La invención se ha basado en nuestros estudios que han mostrado que la velocidad de curación de heridas disminuye con la edad del sujeto en términos de re-epitelialización, deposición de la matriz extracelular y de la membrana de base. También nos hemos dado cuenta que las mujeres de edad curan más rápidamente que los hombres de edad. En las mujeres esto ha sido asociado con un número incrementado de fibroblastos en la herida, con los niveles de Factor de Crecimiento Transformante \beta1 (TGF-\beta1) y con la actividad proteolítica incrementada en comparación con los hombres de edad pero disminuido en comparación con hombres y mujeres jóvenes. También se ha señalado que en hombres jóvenes hay una pérdida de cicatrización en comparación con la observada en mujeres jóvenes que hemos asociado con las diferencias entre los niveles de TGF-\beta1 observados en los dos sexos. Otra diferencia entre los sexos fue que la curación de heridas en mujeres está asociada generalmente con niveles superiores de elastina y de angiogénesis que en los hombres.
Estos descubrimientos nos han conducido al conocimiento de que los compuestos de acuerdo con la invención tienen una influencia en la velocidad y en la calidad (extensión de la formación de la cicatriz o fibrosis) de la curación de la herida y también influencia en la deposición de tejido fibroso en los trastornos fibróticos. Esta hipótesis fue examinada y confirmada por la valoración del efecto de la Terapia Hormonal Sustitutiva (THS) en la velocidad y calidad de la curación de heridas de mujeres post-menopaúsicas. Las mujeres tratadas con THS sólo con estrógeneos o con estrógenos y progesterona tienen velocidades de curación de heridas significativamente incrementadas (en términos de re-epitelialización y de la deposición de la matriz extracelular) en comparación con las mujeres de edades similares sin medicación. La actividad proteolítica tanto en piel normal (no dañada) como en las heridas de las mujeres post menopáusicas con THS se redujo al valor del grupo de mujeres de entre 20 y 30 años. Estos efectos también fueron asociados con una reversión de los cambios relacionados con la edad en los perfiles del factor de crecimiento transformante \beta1 o de interleuquina-1.
Aunque los inventores no desean estar limitados por ninguna hipótesis, creen que es posible que el mecanismo por el que los compuestos ejercen su efecto de cicatrización de heridas es por modulación de la actividad de moléculas que regulan la curación de heridas tal como las citoquinas (por ej., TGF-\beta1, Factor del Crecimiento Derivado de las Plaquetas o interleuquina-1) y por consiguiente por influencia en la función celular (por ejemplo la función de los fibroblastos). Por ejemplo, nuestros estudios in vitro han establecido que los estrógenos incrementan la producción de TGF-\beta en los fibroblastos que puede estar asociada con el efecto de los estrógenos para causar un incremento en la velocidad de curación de heridas. Otros compuestos que ejercen influencia en el sistema de hormonas sexuales también modulan la actividad de los fibroblastos. Por ejemplo la progesterona inhibe la proliferación de fibroblastos en sujetos de edad mientras que los andrógenos tienen efectos similares a los de los estrógenos.
Hemos encontrado que los compuestos de acuerdo con la invención también modulan los perfiles de las enzimas en una herida o tejido afectado por un trastorno fibrótico. En particular se ha encontrado que los niveles de enzima de las metaloproteinasas matriz (MMPs) (especialmente de MMP2 y MMP9) así como de otras enzimas líticas tales como las elastasas están moduladas por compuestos tales como estrógenos. Creemos que esta modulación es suficiente para influir en la velocidad de curación de heridas o para modular la fibrosis (y por consiguiente influenciar en la cicatrización de los trastornos fibróticos) y es posible que estos efectos representen un mecanismo complementario, adicional o incluso alternativo (a lo discutido en el párrafo anterior) por el que los compuestos sean capaces de tratar heridas o trastornos fibróticos.
Varias clases de compuestos son capaces de favorecer la actividad estrogénica. Dichos compuestos incluyen hormonas, agonistas o antagonistas de los receptores de hormonas, agentes que modulan la liberación de activadores endógenos o inhibidores de los receptores de hormonas, agentes que modulan la rotura de ligando de receptores de hormona endógena, agentes que modulan la expresión lo la actividad del receptor de hormona y agentes que incrementan los mecanismos implicados en la transducción de la señal entre el receptor del sistema de la hormona sexual y los sistemas efector.
Los compuestos preferidos son las hormonas (o derivados biológicamente activos de las mismas) y agonistas y antagonistas de los receptores hormonales. Se prefiere que el compuesto sea una hormona sexual esteroide (tal como estrógeno), o un agonista o antagonista de los receptores hormonales sexuales esteroides.
Hemos establecido que los compuestos que favorecen la actividad estrogénica son capaces de acelerar la velocidad de curación de las heridas, aunque esto puede ser a expensas de proporcionar una cicatrización o fibrosis incrementada. Dichos compuestos son obviamente particularmente útiles cuando la velocidad de curación de una herida es una prioridad y la calidad de cualquier cicatriz es una consideración secundaria. De este modo dichos compuestos serán útiles para las heridas agudas (tales como daños penetrantes, quemaduras, daño en los nervios, ligamentos dañados o tendones, o incluso heridas resultantes de un cirugía electiva) y heridas crónicas (tales como ulceración en diabéticos, ulceras venosas o de decúbito). Dichas heridas pueden influenciar de forma severa la calidad de vida o incluso dar lugar a la muerte y por consiguiente la velocidad de curación puede necesitar ser incrementada tanto como sea clínicamente posible.
Los compuestos que son más efectivos de acuerdo con la primera realización de la invención son generalmente aquellos que favorecen la actividad estrogénica en el sitio de la herida. Es esta facilitación lo que acelera la curación de la herida.
Ejemplos de compuestos que pueden ser utilizados para facilitar la actividad estrogénica incluyen estrógenos, agonistas de los receptores de estrógenos (tales como etinilestradiol, dienestrol, mestranol, estradiol, estriol, estrógenos conjugados, sulfato de piperacin estrona, estilboestrol, fosfesterol tetrasódico, fosfato de poliestradial, tibolona), inhibidores de estrógenos o descomposición de agonistas de los receptores de estrógenos, fitoestrógenos o incluso moduladores de la hormona luteinizante, hormona estimulante del folículo y gonadotrofina coriónica.
El compuesto preferido para uso de acuerdo con la invención es un agonista del receptor de la hormona estrógeno. Es particularmente preferido el 17 \beta-estradiol.
Los regímenes de tratamiento preferidos contemplados por la presente invención son tratamientos no sistémicos debido a que la aplicación sistémica de los compuestos puede tener efectos indeseables, tales como influencia en las características sexuales secundarias mientras que la administración no sistémica (por ej. la aplicación tópica a la piel) sólo tiene una acción local y por consiguiente no tiene dichos efectos indeseables. Sin embargo, hay casos (por ejemplo daño severo o cuando se requiere terapia aguda) en que son útiles las aplicaciones sistémicas.
Las composiciones de la invención pueden tomar un número de formas diferentes dependiendo, en particular, del modo en que se vaya a utilizar la composición. De este modo, por ejemplo, la composición puede ser en la forma de un líquido, ungüento, crema, gel, hidrogel, polvo o aerosol. Se apreciará que el vehículo de la composición de la invención sea uno que sea bien tolerado por el paciente y que permita la liberación del compuesto activo a la herida. Dicho vehículo es preferiblemente biodegradable, biorreabsorbible y/o no inflamatorio.
Cuando el compuesto sea un esteroide (tal como un estrógeno), el vehículo puede contener una molécula soporte que mejora la solubilidad acuosa del compuesto. Un soporte adecuado es la 2-hidroxipropil-\beta-ciclodextrina que está presente de forma preferible en la composición en concentraciones aproximadamente equimolares a las del esteroide.
La composición de la invención puede ser utilizada de diferentes modos. Así, por ejemplo, una composición de acuerdo con la invención puede ser aplicada en y/o alrededor de una herida de un paciente para proporcionar la regulación deseada de la curación de la herida.
Si la composición va a ser aplicada directamente a una herida, trauma o daño efectivo, entonces el vehículo farmacéuticamente aceptable será uno que no provoque respuesta inflamatoria o que no sea tóxico al tejido.
Sin embargo, también es posible utilizar composiciones de acuerdo con la invención como un profiláctico. Por ejemplo, antes de la cirugía (particularmente de la cirugía electiva) puede ser deseable proporcionar un compuesto que influencie el sistema de hormona sexual para la regulación de la curación de la herida quirúrgica formada subsecuentemente de modo que incremente la velocidad de curación de la herida. En este caso el vehículo de la composición precisará ser uno capaz de liberar el compuesto del sitio objetivo. Por ejemplo el vehículo puede precisar ser adecuado para llevar el compuesto a través de la capa queratinosa de la piel. Ejemplos de vehículos adecuados para este objetivo incluyen el sulfóxido de dimetilo y el ácido acético.
La composición puede ser proporcionada en un apósito o parche estéril que puede ser utilizado para cubrir o incluso envolver una herida a tratar. En este respecto los parches de la Terapia Sustitutiva Hormonal convencional pueden ser utilizados de forma adecuada para tratar heridas y/o trastornos fibróticos.
Una importante aplicación adicional de la composición de la invención se refiere a la curación de una herida en el ojo. Por ejemplo, las composiciones de acuerdo con la invención pueden ser utilizadas para proporcionar cicatrización (así como un incremento de la velocidad de curación) entre la esclerótica y la retina cuando se desee reparar una desgarradura en esta última. En este caso, la composición de la invención puede ser una solución inyectable. En este caso, la composición de la invención puede ser la forma de una gota ocular.
Será bien apreciado que la cantidad del compuesto a incorporar en una composición de acuerdo con la invención y/o la cantidad del compuesto a aplicar en el sitio de la herida depende de un número de factores tales como la actividad biológica y la biodisponibilidad del compuesto, que a su vez depende del modo de administración y de las propiedades fisicoquímicas del compuesto. Otros factores incluyen:
A) La vida media del compuesto en el sujeto a tratar.
B) El estado específico a tratar.
C) Si se desea una curación rápida o una cicatrización reducida.
D) La edad del sujeto.
E) El sexo del sujeto.
La frecuencia de administración también estará influenciada por los factores anteriormente mencionados y particularmente la vida media del compuesto en el sujeto a tratar.
Generalmente, cuando se utilizan las composiciones para tratar heridas existentes, el compuesto debe ser administrado tan pronto como se produce la herida. La terapia con la composición debe continuar hasta que la herida haya curado hasta satisfacción de los médicos.
Las composiciones que favorecen la velocidad de curación de una herida deben ser aplicadas a una herida tan pronto como sea posible después de que la herida se haya formado. Para heridas agudas y heridas de sujetos que sean capaces de curación (por ej. el joven) la aplicación de la composición se hará de forma ideal en el momento de la herida, preferiblemente en las horas de formación de la herida y no más de unos pocos días después de la herida. Para heridas crónicas o heridas con la curación comprometida (por ej. en personas de edad) la administración debe hacerse tan pronto como sea posible.
Cuando se utilizan como un profiláctico (por ej. antes de la cirugía) las composiciones deben ser administradas tan pronto como se haya reconocido el riesgo o una posible baja velocidad de curación de la herida (como puede ser en el caso de sujetos de edad avanzada). Por ejemplo, puede aplicarse una crema o ungüento conteniendo 17
\beta-estradiol en un sitio de la piel del sujeto en donde se vaya a llevar a cabo la cirugía electiva y subsecuentemente se desee una velocidad incrementada de la curación de la herida. En este caso, la composición puede ser aplicada durante la preparación preoperatoria del sujeto o incluso puede ser deseable aplicar la composición en las horas o días antes de la cirugía (dependiendo del estado de salud y de la edad del sujeto así como del tamaño de la herida a formar).
La frecuencia de la administración dependerá de la vida media biológica del compuesto utilizado. De forma típica deberá administrarse una crema o ungüento conteniendo un compuesto a un tejido objetivo de modo que la concentración del compuesto en el sitio de la herida o el tejido afectado por un trastorno fibrótico se mantenga a un nivel adecuado para tener un efecto terapéutico. Esto puede requerir la administración diaria o incluso de varias veces al día. En el caso del uso de 17 \beta-estradiol para la curación de heridas, hemos encontrado que la administración del compuesto (por un parche aplicado a la herida) durante 24 horas después de la formación de la herida es suficiente para mejorar la velocidad a la que curan las heridas.
Pueden utilizarse procedimientos conocidos, tales como los utilizados de forma convencional por la industria farmacéutica (por ej. experimentación in vivo, ensayos clínicos, etc.) para establecer las formulaciones específicas de composiciones y precisar regímenes terapéuticos (tal como dosis diarias de los compuestos y la frecuencia de administración).
De forma general, las composiciones de acuerdo con la invención contendrán entre el 0,001% y el 4% en peso del compuesto que ejerce influencia sobre el sistema de hormona sexual. Puramente por vía del ejemplo una composición que contenga entre el 0,005% y el 1% en peso de estradiol o etinilestradiol es adecuada para la aplicación a una herida existente (es decir "abierta").
Por vía de un ejemplo adicional, una composición que se vaya a utilizar de forma preoperativa como una composición profiláctica puede contener entre el 0,01% y el 2% en peso de estriol, estradiol o etinilestradiol para tener el efecto deseado en la curación de la herida.
Una composición preferida para uso en la presente invención comprende un máximo del 1% (por ej. entre el 0,005% y el 1%) de 17 \beta-estradiol.
Una dosis diaria adecuada de un compuesto dependerá de los factores discutidos anteriormente así como del tamaño de la herida a tratar. De forma típica la cantidad del compuesto requerido para el tratamiento de heridas o trastornos fibróticos estará comprendida en el intervalo de 1 ng a 100 g del compuesto activo/ 24 horas dependiendo del tamaño de la herida o de la extensión de la fibrosis entre otros varios factores. Por vía del ejemplo, entre 0,5-500 \mug/24 horas de 17 \beta-estradiol es una dosis adecuada para el tratamiento de una herida (para incrementar la velocidad de curación) hecha por una biopsia de la piel con un punzón de 4 mm, más preferiblemente se utilizan entre 10-100 \mug/24 horas de 17 \beta-estradiol y más preferiblemente 25 \mug/24 horas de 17 \beta-estradiol.
Un medio preferido de utilizar compuestos de tipo proteína o péptido que favorecen la actividad estrogénica es liberar el compuesto en la herida por medio de la terapia génica. La terapia génica puede ser utilizada para modular la expresión de una enzima implicada en la síntesis de hormonas sexuales de tipo esteroide (por ej. estrógenos). Por consiguiente, la actividad estrogénica puede ser favorecida por el uso de un sistema de liberación para uso en una técnica de terapia génica, de modo que dicho sistema de liberación comprenda una molécula de DNA que codifique una proteína que module de forma directa o indirecta la curación de la herida y/o module la fibrosis o la cicatrización por influencia del sistema de hormona sexual, de modo que dicha molécula de DNA sea capaz de ser transcrita para conducir a la expresión de dicha proteína.
Los sistemas de liberación son altamente adecuados para conseguir niveles sostenidos de un agente activo en el sitio de la herida durante un periodo de tiempo más largo del que es posible para la mayoría de los sistemas de liberación convencionales. La proteína puede ser expresada de forma continua a partir de células en el sitio de la herida o en el sitio de la fibrosis que ha sido transformada con la molécula de DNA del cuarto aspecto de la invención. Por consiguiente, incluso si la proteína tiene una vida media muy corta como un agente in vivo, cantidades terapéuticamente efectivas de la proteína pueden ser expresadas de forma continua a partir del tejido tratado.
Además, el sistema de liberación de la invención puede ser utilizado para proporcionar la molécula de DNA (y con ello la proteína que es un agente terapéutico activo) sin la necesidad del uso de vehículos farmacéuticos convencionales tales como los requeridos en los ungüentos o cremas que se ponen en contacto con la herida. Esto es particularmente beneficioso ya que a menudo puede ser difícil el proporcionar un vehículo satisfactorio para un compuesto para uso en la curación de la herida (el cual se requiere que sea no-inflamatorio, biocompatible, bioabsorbible y no debe degradar o inactivar el agente activo (en almacenaje o en uso)).
El sistema de liberación es tal de modo que la molécula de DNA sea capaz de ser expresada (cuando el sistema de liberación es administrado a un paciente) para producir una proteína que directa o indirectamente tiene actividad para la curación de la herida. Por "directamente" se quiere significar que el producto de la expresión del gen per se tiene la actividad requerida para la curación de la herida. Por "indirectamente" se quiere significar que el producto de la expresión del gen sufre o media (por ej. como una enzima) al menos una reacción adicional para proporcionar un agente efectivo para la curación de heridas.
La molécula de DNA puede estar contenida en un vector adecuado para formar un vector recombinante. El vector puede ser por ejemplo un plásmido, cósmido o un fago. Dichos vectores recombinantes son altamente útiles en los sistemas de liberación de la invención para transformar células con la molécula de DNA.
Los vectores recombinantes también pueden incluir otros elementos funcionales. Por ejemplo, los vectores recombinantes pueden ser diseñados de modo que el vector se replique de forma autónoma en el núcleo de la célula. En este caso, los elementos que inducen la replicación de DNA pueden ser requeridos en el vector recombinante. De forma alternativa el vector recombinante puede ser diseñado de modo que el vector y la molécula de DNA se integren en el genoma de una célula. En este caso son deseables secuencias de DNA que favorezcan la integración deseada (por ej. por recombinación homóloga). Los vectores recombinantes también pueden tener DNA que codifique los genes que pueden ser utilizados como marcadores seleccionables en el proceso de clonación.
El vector recombinante también puede comprender de forma adicional un promotor o regulador para controlar la expresión del gen tal como se requiera.
La molécula de DNA puede (pero no de forma necesaria) ser una que sea incorporada en el DNA de células del sujeto a tratar. Las células no diferenciadas pueden ser transformadas de forma estable conduciendo a la producción de células hijas modificadas genéticamente (en cuyo caso puede requerirse la regulación de la expresión en el sujeto, por ej. con factores de transcripción específicos o activadores de genes). De forma alternativa, el sistema de liberación puede ser diseñado para favorecer la transformación inestable o transitoria de células diferenciadas en el sujeto a tratar. Cuando éste sea el caso, la regulación de la expresión puede ser menos importante debido a que la expresión de la molécula de DNA se parará cuando las células transformadas mueran o paren la expresión de la proteína (idealmente cuando la herida haya sido tratada o prevenida).
El sistema de liberación puede proporcionar la molécula de DNA al sujeto sin que sea incorporada en un vector. Por ejemplo, la molécula de DNA puede ser incorporada en un liposoma o en una partícula de virus. De forma alternativa la molécula de DNA "desnuda" puede ser insertada en unas células del sujeto por unos medios adecuados, por ejemplo par captación endocitótica directa.
La molécula de DNA puede ser transferida a las células de un sujeto a tratar por transfección, infección, microinyección, fusión de células, fusión de protoplastos o bombardeo balístico. Por ejemplo, la transferencia puede ser por transfección balística con partículas recubiertas de oro, liposomas conteniendo la molécula de DNA, vectores virales (por ej. adenovirus) y medios de proporcionar la captación directa de DNA (por ej. endocitosis) por aplicación de DNA plásmido directamente al área herida de forma tópica o por inyección.
Aunque las consideraciones anteriores son principalmente aplicables a las heridas de humanos será apreciado que la curación de heridas también puede ser problemática en otros animales (especialmente animales domésticos tales como caballos, perros, gatos, etc). Los compuestos, composiciones y sistemas de liberación discutidos anteriormente son adecuados para uso en la curación de dichos animales.
La presente invención será ahora descrita de forma adicional con referencia a los siguientes Ejemplos no limitativos y a los dibujos que los acompañan en los que:
La Figura 1 representa las fotografías de las secciones histológicas teñidas de heridas de ratas en el Ejemplo 1;
La Figura 2 es un gráfico que representa la velocidad de re-epitelialización en el día 7 después de la herida en los sujetos del Ejemplo 2;
La Figura 3 representa las fotografías de las secciones histológicas de las heridas teñidas con H & E para los sujetos del Ejemplo 2;
La Figura 4 representa la inmunotinción para muestras de heridas del Ejemplo 2;
La Figura 5 representa los niveles de TGF-\beta1 en el día 7 después de la herida en los sujetos del Ejemplo 2;
La Figura 6 es un gráfico que representa el efecto de los estrógenos en la proliferación de fibroblastos humanos en fibroblastos derivados de los sujetos del Ejemplo 2; y
La Figura 7 es un gráfico que representa el efecto de estrógeno y progesterona en la formación de cicatriz evaluada microscópicamente en el Ejemplo 3; y
La Figura 8 es un gráfico que representa el efecto de estrógeno y progesterona en la formación de cicatriz evaluada macroscópicamente en el Ejemplo 3.
Ejemplo 1
Se llevaron a cabo experimentos en los que hubo el efecto de la ovarioectomía (y de este modo la eliminación de estrógenos) en la curación de la herida.
1.1 Métodos 1.1.1 Preparación de las ratas
Se alojaron ratas Dawley Spraque hembras juntas en tres grupos (1A, 1B y 1C) de nueve para permitir ciclos de estros sincronizados. El grupo 1A fue ovarioectomizado (OVX) 18 días antes de la formación de la herida para permitir la eliminación de los niveles de hormona sexual circulantes. El Grupo 1B (control) no estuvo tratado y el Grupo 1C tuvo el mismo procedimiento operativo que el OVX (Grupo 1A), pero sin la eliminación de los ovarios, para asegurar que el procedimiento operativo OVX no tenía efecto en los estudios de formación de heridas (simulacro).
1.1.2 Tratamientos
Se preparó el 17 \beta-estradiol (Sigma) en forma de soluciones estériles del 0,1% y del 1% en solución salina tamponada de fosfato (PBS) conteniendo entre el 0,1% y el 1% de 2-hidroxipropil-\beta-ciclodextrina respectivamente. Se utilizó la 2-hidroxipropil-\beta-ciclodextrina en las preparaciones como una molécula soporte para incrementar la solubilidad en agua del \beta-estradiol. Se utilizó PBS/ciclodextrina como un vehículo control.
A los animales de los Grupos 1A, 1B y 1C se les hicieron heridas incisionales de 4 x 1 cm de longitud en todo su espesor a 4,5-5,5 cm y 7,5-8,5 cm por debajo de la base del cráneo, 1 cm a cada lado de la línea central. A continuación se dio una única inyección intradérmica de 100 \mul a cada uno de los cuatro sitios de herida. Cada una de las heridas (un total de 36 heridas en 9 ratas en cada grupo) recibieron o bien 100 \mul de estradiol (0,1% o 1%)., 100 \mul del vehículo control (0,1% o 1% de ciclodextrina) o se dejaron sin manipular (sin inyección).
1.1.3 Ensayos en el Día 7 después de la herida
Se dejaron curar las heridas durante 7 días después de los que se separó el tejido herido para el análisis histológico.
Se tiñeron secciones de 7 \mum inmersas en parafina con H & E y Masson's Trichrone. Se determinó la velocidad de re-epitelialización (en el día 7 después de la herida), y los tamaños de las heridas tal como se determinaron por planimetría, con análisis de imagen utilizando una cámara Olympus Vanox y un sistema de toma de imagen PC. Se determinó la cantidad de colágeno en la herida por dos observadores ciegos respecto a la identidad de la muestra.
1.2 Resultados (7 días después de la herida)
Las heridas en el grupo de simulacro sin manipular (Grupo 1C) y en el grupo control (Grupo 1B) tuvieron re-epitelialización, fueron celulares y dejaron nuevo colágeno. Las heridas del grupo no manipulado ovarioectomizado (OVX; Grupo 1A) mostraron una re-epitelialización retardada, fueron muy anchas y celulares en comparación con las heridas del grupo de simulacro/control (1B y 1C) y dejaron muy poco colágeno nuevo. Esto indicó que el OVX causa un retraso en la curación de la herida a los 7 días después de la formación de la herida (ver Tabla I).
La ciclodextrina (controles del vehículo) tuvo un efecto adverso en las heridas a la mayor dosis del 1%. En los tres grupos las heridas fueron anchas y celulares con poco colágeno nuevo. Estos efectos no fueron apreciables con ciclodextrina al 0,1%, donde las heridas fueron similares a las heridas con PBS control que tuvieron menos células y dejaron algún colágeno nuevo.
Todas las heridas tratadas con \beta-estradiol al 1% tuvieron re-epitelialización y dejaron colágeno nuevo. Las heridas del grupo OVX fueron más estrechas que las heridas del grupo control/de simulacro, indicando que tuvieron una velocidad de curación de la herida incrementada en comparación con las heridas control tratadas con PBS y con las heridas no manipuladas. Todas ellas tuvieron mucho colágeno nuevo, muy pocas células inflamatorias y fueron muy estrechas. En las heridas tratadas con 0,1% de \beta-estradiol del OVX, una única aplicación de \beta-estradiol al 0,1% fue capaz de superar los efectos adversos del vehículo de ciclodextrina y el OVX, para mostrar una curación de la herida acelerada en comparación con las heridas control. Estos descubrimientos correlacionan con los datos de heridas en humanos que muestran una aceleración de la curación de heridas en los primeros puntos de tiempo cuando las mujeres post-menopáusicas están tomando estrógeno y progesterona HRT.
Hubo diferencias entre las dos dosis de \beta-estradiol mostrando mejores resultados la del 0,1% de \beta-estradiol que la del 1% de \beta-estradiol. Esto puede ser un resultado de los efectos adversos del vehículo de ciclodextrina ya que éste está presente al 1% en la solución de \beta-estradiol al 1% y al 0,1% en la solución de \beta-estradiol al 0,1%.
Estos descubrimientos indican que una dosis óptima de \beta-estradioles menor del 1% (particularmente cuando se utiliza la ciclodextrina como soporte), y utilizando un vehículo diferente, dosis diferentes y diferentes tiempos de administración pueden dar lugar a incluso a una mayor aceleración de la curación de la herida.
En las secciones de la fig. 1 se tiñeron con Mallory's Trichrome a = herida del día 7 en una rata hembra intacta (1B); b = herida del día 7 en una rata OVX (1A) (es de notar la re-epitelialización retardada y la deposición de colágeno reducida y un incremento significativo en la anchura de la herida); c = herida del día 7 a partir de una hembra intacta tratada con estrógeno en 5 mm; d = herida del día 7 en una rata OVX (es de notar una curación de la herida mejorada en c y d con mayores cantidades de colágeno maduro en una herida estrecha y la completa re-epitelialización). Barra de la escala = 100 \mum.
TABLA 1
1
Ejemplo 2
Se examinó el efecto de la terapia hormonal sustitoria (es decir, la suplementación con estrógenos) en la curación de heridas en mujeres post-menopáusicas para demostrar cómo, los compuestos que favorecen la actividad estrogénica, son capaces de modular la curación de heridas.
2.1 Métodos 2.1.1 Pacientes
La aprobación para este estudio la dio el Comité Ético local. Se dividieron en dos grupos veinte mujeres post-menopáusicas en una situación definida como sanas, de edades comprendidas entre 55 y 65 años:
(i) Grupo 2A comprendió diez sujetos que no estaban tomando medicación excepto la Terapia Hormonal Sustitotoria (HRT) (edad promedio de 55,9 años, SD (desviación estándar) 2,92; parche de estrógenos y combinación de progesterona oral durante más de 3 meses)
(ii) Grupo 2B comprendió diez sujetos que no estaban tomando medicación, y que nunca habían tomado HRT (edad del grupo: edad promedio de 59,5 años, SD 4,28).
Además, se formó para el estudio un tercer grupo de diez mujeres en un estado definido como sano, con edades comprendidas entre 20-39 años (Grupo 2C: edad promedio 29,8 años, SD 5,03) que no estaban tomando medicación (incluyendo la píldora contraceptiva oral).
Todos los sujetos tuvieron historias médicas y exámenes, CXR, ECG, hematológicos, lípidos y perfiles bioquímicos normales. Los sujetos fueron todos ellos no fumadores, con historias dietéticas e índices de masas corporales normales.
2.1.2 Biopsias
Después del consentimiento informado, se hicieron a los sujetos de cada uno de los Grupos 2A, 2B y 2C dos biopsias por punción de 4 mm en la parte superior interna del brazo (en un sitio no expuesto al aire) siguiendo con una infiltración local con 1 ml de lignocaina al 1%. Cada biopsia de piel normal fue biseccionada y una mitad fue inmersa en un compuesto de Temperatura de Corte Óptima (Miles Inc. Elkhart, IN), congelada sobre nitrógeno líquido, y almacenada a -70ºC, y una mitad congelada de forma rápida en nitrógeno líquido y almacenada a -70ºC.
Las heridas fueron cubiertas con un apósito de gasa seco Multisorb (Smith & Nephew, UK) durante 24 horas y a continuación se dejaron al descubierto.
2.1.3 Nueva-biopsia
Cinco sujetos de los Grupos 2A, 2B y 2C fueron sometidos a una nueva excisión de las heridas en el día 7 después de la herida, y los otros cinco sujetos en el día 84 después de la herida.
Se limpió la parte interior superior del brazo izquierdo con alcohol isopropílico, se hicieron excisiones elípticas de las heridas después de la infiltración de lignocaína al 1% y se utilizaron dos suturas para cerrar la abertura. Cada herida se biseccionó y se procesó tal como se ha descrito anteriormente (2.1.2).
2.1.4 Estudio de las Biopsias
Se utilizaron algunas biopsias para el análisis molecular. Se llevó a cabo la micro-disección de estas heridas para asegurar que no había contaminación de la piel normal.
2.1.4.1 Inmunotinción
Se prepararon criosecciones de 7 \mum y se inmunotiñeron utilizando una anticuerpo TGF-\beta1 en la herida.
2.1.4.2. Análisis por la imagen y valoración de la cicatrización de heridas
Se determinó la velocidad de re-epitelialización (sólo en el día 7 después de la herida) con análisis de la imagen utilizando un Joyce Loebel Mini-magiscan. Se valoró la apariencia macroscópica de las heridas humanas curadas teñidas con Trichrome de Masson utilizando el siguiente sistema:
a) Color - (comparado con el de la piel del contorno) 1 = Perfecto; 2 = desigualdad Menor; 3 = Desigualdad Obvia; 4 = Desigualdad Grande.
b) Contorno 1 = Normal; 2 = Palpable; 3 = Hipertrófico; 4 = Queloide.
c) Textura 1 = la misma que la piel normal; 2 = saliente/dentada; 3 = Firme; 4 = Dura.
Se valoró la apariencia microscópica de las heridas curadas utilizando el siguiente sistema de puntuación:
a) Orientación del colágeno (valoraciones separadas de la papilaridad superior y de los niveles dérmicos reticulares de la herida): 1 = ligamento radiado normal; 2 = ligamento radiado > fibras paralelas; 3 = fibras paralelas > fibras de ligamento radiado; 4 = fibras paralelas.
b) Densidad del bulto (valoraciones separadas de la papilaridad superior y de la profundidad reticular de la herida): 1 = todos los bultos normales; 2 = > 50% de los bultos normales; 3 = < 50% de los bultos normales; 4 = todos los bultos anormales (densidad incrementada o disminuida).
c) Formación del reborde del plexo: 1 = Apariencia normal; 2 = números reducidos; 3 = ninguna.
2.1.5 Experimentos con los Fibroblastos in vitro
Se extrajeron fibroblastos de las primeras muestras de biopsia de los Grupos 2A, 2B y 2C y se cultivaron con el fin de medir la expresión del TGF-\beta de las células.
2.1.5.1 Cultivo de las Células
Se extirparon y mantuvieron en cultivo fibroblastos dérmicos de humanos obtenidos de muestras de biopsia con perforación de 4 mm de piel normal. Se cultivaron los fibroblastos utilizados en el estudio a 37ºC en aire del 95%: 5% de CO_{2} a una humedad relativa del 100%, en rojo de fenol libre de DMEM (Gibco), 100 U/ml de penicilina, 100 mg/ml de estreptomicina, 1 mM de piruvato de sodio, 2 mM de L-glutamina, amino ácidos no esenciales y FCS al 10% purificado sobre carbón (Gibco, UK) (para eliminar los esteroides endógenos).
2.1.5.2 Tratamiento de los fibroblastos
Se sembraron células cultivadas en el paso 3-5 durante toda la noche en placas de 24 pocillos a una densidad de 2 x 10^{5} células por pocillo en un medio libre de suero. A la mañana siguiente se añadieron al medio, estrógeno o progesterona (solubilizados por la incorporación del soporte ciclodextrina; Sigma, Poole), durante 24 horas. Todas las muestras se valoraron por triplicado. Se eliminó el medio después de 24 horas de incubación. A continuación se añadió 1 mg/ml de aprotinina, leupeptina y pepstatina A al medio el cual se utilizó de forma inmediata en un ensayo de TGF-\beta (ver a continuación). Los controles incluyeron ciclodextrina a la concentración apropiada, y el medio libre de suero solo.
2.1.5.3 Valoración de la proliferación de fibroblastos
A continuación se incubaron las células con timidina [H^{3}] en un medio libre de suero (0,5 \muCi/pocillo) para valorar el efecto del estrógeno o la progesterona en la proliferación de fibroblastos. Después de 24 horas, se aspiró la solución de timidina y se sustituyó por TCA al 10% durante 4 horas a 4ºC, Se sustituyó el TCA por 250 \muls de una solución de NaOH 1 M durante 18 horas. Se midieron dos alícuotas de 100 \mul cada una a partir de cada pocillo para determinar la radioactividad en un contador de centelleo. En experimentos en paralelo, se investigó el efecto de hormonas/controles sobre la síntesis de proteínas por la adición de 20 \mug/ml de cicloheximida (para inhibir la transformación de proteínas) durante 15 minutos antes del periodo de incubación de 24 horas. Se utilizó la progesterona como un compuesto de referencia.
2.1.5.4 Ensayo de TGF-\beta
Se determinaron los niveles de TGF-\beta en el medio (2.1.5.2) utilizando un ensayo de inhibición del crecimiento del pulmón de visón tal como ha descrito Danielpour y col. (J. Cell. Physiol. 138 p. 79-86). De forma resumida, se mantuvieron células epiteliales de pulmón de visón (MLECs) en DMEM y en FCS al 10% a 37ºC en un 10% de CO_{2}. Se tripsinizaron las células subconfluentes, se suspendieron de nuevo en FCS al 10% se transformaron en pellets a 
\hbox{500 g}
durante 5 min, se lavaron con 10 ml del tampón del ensayo ( DMEM, FCS al 2%, 10 mM de HEPES pH 7,4, 25 U/ml de penicilna, 25 \mug/ml de estreptomicina), se suspendieron de nuevo en el tampón del ensayo y se sembraron a una concentración de 10^{5} células/pocillo en una placa Costar de 24 pocillos. Después de 1 hora se añadió el medio acondicionado o el medio control (con concentraciones variadas de hormonas oscilando entre 1 pM-1mM o sólo ciclodextrina). Después de 22 horas las células se pulsaron con timidina [H^{3}] (0,5 \muCi/pocillo) durante 2 horas a 37ºC, y se siguió con el procedimiento descrito anteriormente para la extracción y medición de la radioactividad (2.1.5.3). Se produjo una curva estándar utilizando entre 10-100 pg/ml de TGF-\beta estándar (R & D) a partir de la cual los datos de inhibición pudieron ser convertidos a pg/ml. Los resultados se presentaron como pg/ml de TGF-\beta/10^{5} células (con relación a las válvulas control para cada concentración de hormona individual). 2.1.6 RT-PCR Cuantitativo
Se utilizó el RT-PCR cuantitativo para determinar los niveles de estado fijo de TGF-\beta1 mRNA en la herida aguda y en 10^{5} células a partir del fibroblasto en estudios in vitro (2.1.5). Se aisló el RNA celular a partir de muestras utilizando el método de Chomcynski y Sacchi (Anal. Biochem. 162 p156-159 (1987)). Se valoró la pureza de la extracción utilizando la relación A_{260/280} espectrofotométricamente, lo que en todos los casos estuvo por encima de 1,75. No se observó ninguna diferencia significativa en el contenido de RNA total/\mug de peso del tejido húmedo entre individuos a cada punto de tiempo. Se llevó a cabo el RT-PCR cuantitativo tal como ha sido descrito por Tarnuzzer y col. (Biotechniques 20 p. 670-674 (1996). De forma resumida la reacción de la transcriptasa reversa se llevó a cabo utilizando 8 diluciones sucesivas del patrón con 1 \mug de RNA celular auténtico. Se utilizó la \beta-actina como un control positivo. Se llevaron a cabo las reacciones del PCR en la reacción de transcripción reversa. A continuación se llevó a cabo la electroforesis en un gel de agarosa al 2% conteniendo 25 ng/ml de bromuro de etidio a 100 v durante 1 hora utilizando un tanque Electro 4 (Hybaid, Teddington, UK) y se fotografió utilizando un transiluminador de intensidad dual (Genetic Research instrumentation, Dunmow (UK) con una cámara Polaroid MP 4+ y una película en blanco y negro Polaroid 665. Las imágenes fotográficas se captaron utilizando un sistema de Software de Imagen para PC (Foster Finley, Newcastle, UK) en un ordenador 486 Dan DX2 (Dan, UK) y una cámara CCD (Swift, UK). Se determinaron las intensidades de banda por análisis de imagen utilizando un ordenador Macintosh y un programa de software NIH. Se normalizaron los valores de intensidad de banda basados en los pesos moleculares de los productos. Se representó el log de la relación de las intensidades de banda entre cada línea frente al log del número de copia del patrón añadido por reacción. Se determinaron las cantidades de los mensajes objetivo cuando las relaciones entre el patrón y las intensidades de banda objetivo fueron iguales a 1. Los números de copia se expresaron por RNA total (para el tejido herido) o se expresaron por célula (para los estudios in vitro). Estos últimos se calcularon asumiendo 26 pg de RNA/célula.
2.1.7 Análisis estadístico
Todos los datos se presentaron como promedio +/-SD (desviación estándar). Todos los datos siguieron una distribución normal. Las diferencias entre los valores promedio se evaluaron por un ensayo t de Student independiente en los casos en que era apropiado y por un ANOVA de un factor y múltiple (análisis de varianza) complementado por un ensayo Tukey-HSD. En todas las circunstancias p < 0,05 fue considerado como ser significativo.
2.2 Resultados 2.2.1 Los efectos de la edad y de los esteroides sexuales circulantes en la reparación de heridas en humanos 2.2.1.1 Velocidad de curación: re-epitelialización y deposición de colágeno
Se asoció el envejecimiento intrínseco (Grupo 2B) con un retraso en la velocidad de curación de una herida en términos de re-epitelialización en el día 7 después de la herida (Fig. 2), y con una deposición de colágeno matriz reducida en los días 7 y 84. Sin embargo, el grupo HRT (2A) mostró una marcada aceleración de la velocidad de re-epitelialización en el día 7, similar a la observada en el grupo joven (2C) (Fig. 2). Además, el grupo HRT tuvo niveles marcadamente incrementados de la deposición de colágeno (que se aproximaron a los niveles observados en el grupo joven, 2C) en los días 7 y 84 en comparación con el grupo de mayor edad.
La Fig. 3 representa una secciones histológicas de heridas teñidas con H & E para a = 28 años de edad (grupo 2C), b = 57 años de edad (grupo 2B) y c = 58 años de edad en HRT (grupo 2A). La tinción con H & E mostró la deposición de colágeno (CO) en las heridas de los grupos 2A y 2C (c y a). En b (grupo 2B) el tejido de granulación (G) es inmaduro con ausencia de tinción para el colágeno. La re-epitelialización es completa en a (2C) y c (2A) con neoepidermis (E) cubriendo completamente la herida (las fechas indican la capa basal de la epidermis). En b la flecha señala a la neo-epidermis migrante que está presente sólo en el eje de la herida, C = bulto. Barra de escala = 100 \mum.
2.2.1.2 Calidad de la curación: grado de cicatrización microscópico y macroscópico
La apariencia macroscópica del tejido de la cicatriz madura fue significativamente superior en los sujetos de edad (Grupos 2A y 2B) en términos de color, textura y contorno, en contraste con la cicatrización hipertrófica en los sujetos jóvenes (2C) (puntuaciones con n = 5 para cada grupo: jóvenes (2C) promedio = 10 SD = 1; de edad (2B) promedio = 4 SD = 2; HRT (2A) promedio = 10 SD = 2; p < 0,001). Las cicatrices del grupo de edad (2B) fueron consistentemente pálidas y planas en comparación con las lesiones hacia dentro, pigmentadas en el grupo joven (2C). El incremento de edad también fue un factor significativo en determinar la calida de la reparación microscópica, con restauración de la arquitectura dérmica en las heridas del grupo de edad (puntuaciones para los jóvenes (2C) promedio = 13 SD = 2; de edad (2B) promedio = 9 SD = 2; HRT (2A) promedio = 13 SD = 2; p < 0,01). De forma notable, en las heridas de los sujetos de edad los rebordes de los plexos se habían regenerado, se observaron vasos sanguíneos de mayor papilaridad y la organización del ligamento radiado del colágeno se pareció a de la dermis normal. En las heridas del joven (2C), la unión dermo-epidérmica fue plana, y se encontraron capas paralelas de colágeno agrupadas densamente a lo largo de toda la herida. Se asoció HRT (2A) con perfiles de cicatrices adversas similares tanto de forma microscópica como macroscópica a éstas hembras jóvenes. De forma microscópica la unión dermo-epidérmica fue plana y la dermis consistió en capas paralelas de colágeno del tejido de la cicatriz y fibroblastos. De forma macroscópica, las heridas estuvieron de forma invariable subidas y pigmentadas.
2.2.1.3. Inmunotinción del TGF-\beta1 y niveles de mRNA
Los niveles de TGF-\beta1 disminuyeron de forma marcada y consistente en el grupo de edad (2B) en el día 7 después de la herida en comparación tanto con el grupo joven (2C) como con el grupo HRT (2A) tal como se ilustra en la Fig 4 en la que la tinción para el TGF-\beta1 se muestra para a = 22 años de edad (grupo 2C), b = 60 años de edad (grupo 2B) y c = 61 años de edad en HRT (grupo 2A).
Los datos de RT-PCR cuantitativos indican que el envejecimiento intrínseco en hembras del grupo 2B estuvo asociado con niveles bajos de mRNA de estado fijo para TGF-\beta1 con un promedio de 87 copias/pg de RNA total (SD de 6) en el día 7 después de la herida y un promedio de 116 copias/pg de RNA total (SD de 9) en el día 84, mientras que para el grupo joven (2C) el número de copia promedio/pg de RNA total fue de 5656 (SD de 74) en el día 7, disminuyendo hasta 140 copias/pg (SD de 9) en el día 84. Para el grupo HRT (2A) los niveles promedio fueron de 6216 copias/pg (SD de 97) en el día 7, disminuyendo hasta 140 copias/pg de RNA total (SD de 9) en el día 84.
Las diferencias entre los niveles de mRNA en el día 7 entre los diferentes grupos se ilustran en la Fig 5. En la Fig. 5 se muestran el mRNA de a = 22 años de edad (grupo 2C), b = 60 años de edad (grupo 2B) y c = 61 años de edad en HRT (grupo 2A). Las diferencias en mRNA entre el grupo de edad (2B) y el joven (2C) o el grupo HRT (2A) fue altamente significativo (p = 0,0006). De este modo, el HRT revierte la disminución relacionada con la edad de los niveles de estado fijo de mRNA del TGF-\beta1 local observada durante la pronta curación de la herida. Esto sugiere que los compuestos que influencian el sistema de hormona sexual pueden hacerlo por un mecanismo que implica la modulación de la expresión del TGF-\beta.
2.2.1.4 El efecto del HRT en los números de macrófagos
La inmunotinción para un marcador monocito/macrófago reveló que el HRT (2A) estuvo asociado con un incremento en los números de macrófagos en las heridas del día 7 con un promedio de 39 células/área de campo (SD de 6). Esto fue similar en grado a los números de macrófagos observados en las heridas de hembras jóvenes (2C): promedio de 35 células/área de campo (SD de 4). Las heridas del grupo de edad (2B) tuvieron números de macrófagos reducidos de forma significativa en comparación con los otros dos grupos con un promedio de 12 células/área de campo (SD de 4) (un factor ANOVA F (2,14) = 14,3, p = 0,0007, intervalo Turkey-HSD para el nivel 0,05 = 3,77). La infiltración de macrófagos incrementadas observada en las heridas del grupo HRT en comparación con el grupo de edad puede tener consecuencias importantes para el procedimiento de curación de heridas: además a su papel en fagocitosis, los macrófagos también producen una variedad de citoquinas, incluyendo el TGF-\beta1, que es importante en la estimulación de la migración de células, la proliferación y la producción de la matriz.
2.2.3 Efectos de los estrógenos en la proliferación de fibroblastos dérmicos humanos y en la producción de TGF-\beta1
Para investigar de forma adicional los efectos de los compuestos que influencian el sistema de hormonas sexuales en la curación de heridas hemos determinado los efectos del estrógeno y de la progesterona de forma separada en la proliferación de fibroblastos y en la producción de TGF-\beta. La progesterona se utilizó como un compuesto de referencia. La proliferación de fibroblastos de línea de base promedio después de 24 horas (sólo media) no fue significativamente diferente entre los tres grupos.
Los estrógenos a dosis comprendidas entre 1 pM y 1 mM inhibieron la proliferación de fibroblastos tanto en los sujetos jóvenes como en los de edad (en comparación con los controles de ciclodextrina) (Fig. 6). El grado de inhibición de la proliferación fue similar para los fibroblastos tanto de hembras jóvenes como de edad.
La viabilidad de las células no se vio afectada por el tratamiento hormonal tal como se determinó por el ensayo de exclusión de Azul de Tripano. La pre-incubación del medio durante 30 minutos con un anticuerpo neutralizante a TGF-\beta1 (10 \mug/l; sistemas R & D) antes de la adición a las células no revertió el efecto de la hormona, indicando que la inhibición de la proliferación se produjo de forma independiente del TGF-\beta1.
Utilizando el ensayo de células de pulmón de visón (2.1.5.2), los medios acondicionados de los cultivos de fibroblastos de control de la línea de base de sujetos hembra jóvenes (Grupo 2C) tratados sólo con medio libre de suero (sin hormonas o soporte de ciclodextrina) mostraron una inhibición significativamente mayor de la proliferación de la célula epitelial de pulmón de visón (MLEC) en comparación con los fibroblastos de hembra de edad (Grupos 2A o 2B) (p < 0,05; Tabla II). La preincubación del medio durante 30 minutos con un anticuerpo neutralizante al TGF-\beta1 antes de la adición a las MLECs revertió completamente el efecto de la hormona, indicando que la inhibición de la proliferación de la MLEC fue dependiente del TGF-\beta1.
Cuando se incubaron los fibroblastos con estrógeno o progesterona, los medios acondicionados indujeron la inhibición del crecimiento de las MLECs dependientes de la hormona en cuestión, y de su concentración (relativa a los controles) (Tabla II). El anticuerpo neutralizante al TGF-\beta1 (a 10 \mug/ml; R & D) abolió los efectos de las hormonas a todas las concentraciones valoradas cuando se pre-incubó con muestras durante 30 minutos antes de la adición a las células de pulmón de visón (los anticuerpos al TGF-\beta2 y \beta3 no tuvieron efecto). Los anticuerpos a esta concentración añadidos a células de pulmón de visón (en medios de control) no tuvieron efecto en la captación de timidita en comparación con sólo los medios de control. Los niveles de TGF-\beta1 totales en los medios acondicionados activados por calor se incrementaron después de l tratamiento de 24 horas con estrógeno en todos los sujetos analizados, con un inc5remento máximo de TGF-\beta1 a la dosis de estrógeno mM (en comparación con los controles), con un incremento promedio de 4 veces en los niveles para células jóvenes (2C), y un incremento de 12 veces para las células de sujetos de edad (2A y 2B) (Tabla II). El tratamiento con progesterona de fibroblastos no tuvo efecto significativo en la producción de TGF-\beta1 (comparado con los controles) para fibroblastos jóvenes (Grupo 2C). Sin embargo hubo un incremento significativo de 2 veces en los niveles a las dosis nM y \muM para los fibroblastos de los sujetos de edad (2A o 2B). No hubo incremento en el TGF-\beta1 activo tanto después del tratamiento con estrógeno como con progesterona (es decir las muestras no activadas con calor no tuvieron efecto en el ensayo de célula de pulmón de visón en comparación con el control apropiado). Estos datos sugieren que el estrógeno es el mayor esteroide sexual implicado en la producción de fibroblastos dérmicos / secreción de TGF-\beta1 y que el mecanismo por el que los compuestos que influyen en el sistema de hormonas sexuales ejerce su efecto en la curación de heridas puede ser por modulación de los niveles de TGF-\beta1.
TABLA II Niveles de TGF-\beta1 segregados por fibroblastos dérmicos de hembras jóvenes (2C) y de edad (2A o 2B) tal como se determinó por el ensayo de inhibición del crecimiento de células de pulmón de Visón
3
Para distinguir entre el control transcripcional y el post-transcripcional de los niveles de TGF-\beta1, se determinaron los niveles de estado fijo de mRNA de fibroblastos tratados con concentraciones variables de estrógenos. No se encontraron diferencias significativas en los niveles de mRNA del TGF-\beta1 entre los fibroblastos control y tratados de todas las hembras (sin tener en cuanta la edad) (Tabla III). La cicloheximida añadida conjuntamente con las hormonas o sólo el medio no tuvieron efecto en los niveles de proteína de TGF-\beta1 total observados, indicando que la inhibición de la síntesis de proteínas no tenía efecto en los niveles aumentados de TGF-\beta1 en el medio después del tratamiento con estrógenos. La cicloheximida no tuvo efecto en la viabilidad de las células a la dosis utilizada en el estudio. Los datos sugieren que el incremento en los niveles de citoquina totales en el medio secundario al tratamiento con estrógenos fue debido a los sucesos post-translacionales.
TABLA III Efectos de la edad y del tratamiento hormonal en los niveles de mRNA del TGF-\beta1 de los fibroblastos dérmicos tal como se determinaron por RT-PCR cuantitativo
5
Ejemplo 3
Los experimentos se llevaron a cabo para ilustrar el efecto de los estrógenos tópicos en la curación de heridas en un ensayo clínico utilizando hombres y mujeres.
3.1 Métodos 3.1.1 Pacientes
La aprobación para este estudio fue dada por el Comité Ético. Se dividieron cuarenta voluntarios definidos en el estatus de sanos en cuatro grupos:
(i) Grupo 3A que comprendió diez mujeres con edad promedio de 76,3 años (Sd 5,6) quienes recibieron suplementos de estrógenos (25 \mug/24 horas de estradiol).
(ii) Grupo 3B que comprendió diez mujeres con edad promedio de 72,5 años (Sd 7,1) quienes recibieron placebo en lugar de estrógeno.
(iii) Grupo 3C que comprendió diez hombres con edad promedio de 69,6 años (Sd 3,6) quienes recibieron suplementos de estrógeno.
(iv) Grupo 3D que comprendió diez hombres con edad promedio de 71,8 años (Sd 8,9) quienes recibieron placebo en lugar de estrógeno.
Todos los sujetos tuvieron historias médicas y exámenes de CXR, ECG, hematológicos, de lípidos y perfiles bioquímicos normales. Los sujetos fueron todos ellos no fumadores, con historias dietéticas e índices de masas corporales normales.
3.1.2 Biopsias
Después del consentimiento informado los sujetos de cada uno de los Grupos 3A, 3B, 3C y 3D fueron sometidos a dos biopsias por punción de 4 mm en la parte superior interna del brazo (un sitio de no exposición al sol) siguiendo por una infiltración local con 1 ml de lignocaína al 1%. Cada biopsia de piel normal fue diseccionada y una mitad fue inmersa en el compuesto de Temperatura de Corte Óptimo (Miles Inc. Elkhart, IN), congelado sobre nitrógeno líquido y almacenado a -70ºC.
Se cubrió el área de la biopsia con un parche de 2 x 3 cm (con placebo los Grupos 3B y 3 D o con estradiol activo los grupos 3A y 3C) sobre la zona en que se habían hecho las biopsias. El parche se cubrió con un apósito en gasa seca Multisorb (Smith & Nephew) y ambos se eliminaron después de 24 horas. Los parches activos conteniendo suficiente estradiol como los de los sitios de las heridas fueron expuestos a 25 \mug/24 horas de estradiol.
3.3.3. Nueva biopsia
Cinco sujetos de los grupos 3A. 3B, 3C y 3D fueron sometidos s una nueva escisión de las heridas en el día 7 después de la herida, y los otros cinco sujetos de cada grupo en el día 84 después de la herida.
Se limpió la parte superior interna del brazo izquierdo con alcohol isopropílico, y se hicieron escisiones elípticas de las heridas siguiendo con la infiltración de lignocaína al 1% y se utilizaron dos suturas para cerrar la abertura. Cada herida fue diseccionada y se procesó tal como se ha descrito anteriormente (3.1.3).
3.1.4 Mediciones de las hormonas Endógenas
Los niveles de estrógenos circulantes en los grupos hembras (3A y 3B) fueron < 50 pmpl/l con progesterona < 2 nmol/l tanto en la biopsia inicial como en la nueva escisión.
Para los grupos macho (3C y 3D) todos los niveles de progesterona fueron < 2 nmol/l. Para el Grupo 3C: los niveles de testosterona fueron de 15,9 nmol/l (Sd 3,9). El SHBG fue de 47,3 (SD 14,2) y los niveles de estrógenos 92 pmol/l (Sd 16,6). Para el Grupo 3: los niveles de testosterona fueron de 13,0 nmol/l (Sd 3,5). SHBG fue de 46,9 (SD 27,4) y los niveles de estrógeno de 100 pmol/l (Sd 14,7). Los niveles de prolactina y los niveles de PSA (3C y 3D) estuvieron dentro de los límites normales.
3.1.5 Estudio de las Biopsias
Se utilizaron algunas biopsias para el análisis molecular y se llevó a cabo la micro-disección de la herida para asegurar que no había contaminación de la piel normal.
3.1.5.1 Análisis por la imagen de las heridas
Se tensaron secciones de 7 \mum inmersas en parafina con H & E y Masson's Tricrome. Se determinó la velocidad de re-epitelialización (en el día 7 después de la herida), y los tamaños de las heridas por planimetría, con análisis por la imagen utilizando una cámara Olympus Vanox y un sistema de toma de imágenes por PC. Se determinó la cantidad de colágeno en la herida por dos observadores ciegos respecto a la identidad de la muestra en la siguiente escala 
\hbox{+ =}
cantidades mínimas; ++ = menos que en la piel normal; +++ = similar a lo normal; ++++ = mayor que en la piel normal. 3.1.5.2 Sistema de Análisis Dimensional
Se determinó la rigidez de la herida en el día 80 utilizando el Sistema de Análisis Dimensional no disruptivo (Das). Los estudios previos han correlacionado los valores de fuerza para la rotura de la herida (presión última de fallo) para la rigidez de la herida utilizando este sistema. El sistema aplica una pendiente multiaxial (presión negativa) a la herida y mide la deformación debida a la pendiente de dos puntos de referencia de reflexión situados en los ejes de la herida, utilizando una cámara de alta resolución y un procesador de video. Se aplicó presión a un máximo de 100 mm de Hg y a continuación se liberó. Se midió la rigidez entre 20 y 80 mm de Hg.
3.1.5.3 Zimografía de la Fibronectina
Se identificaron las proteasas responsables de la degradación de la fibronectina por zimografía utilizando geles de acrilamida conteniendo fibronectina (arcrilamida al 12% y 0,33 mg/ml de fibronectina, Central Blood Products Ltd.). Se liofilizaron las muestras de tejido y se homogenizaron utilizando un homogenizador de cristal esmerilado conteniendo 0,5 ml de tampón (100 mM de Tris/HCl, 6 M de Urea, 15 mM de CaCl_{2}, 0,25% de Triton-X100, pH 7,4). Después de centrifugación a 11.000 rpm durante 10 min a 4ºC se incubaron las muestras (20 \mug en peso seco) durante 30 min a 37ºC con 2 x tampón de muestra Laemmli y se sometieron a electroforesis bajo condiciones de reducción (Laemmli, 1970). Después de la electroforesis, se lavaron los geles dos veces con 2,5% de Triton-X100 durante 1 hora para eliminar el SDS. Los geles se lavaron de forma breve con agua destilada dos veces y se incubaron durante 18 horas a 37ºC en un tampón de desarrollo conteniendo 50 mM de Tris/HCl, 150 mM de NaCl y 5 mM de CaCl_{2}, pH 7,4. Al final de la incubación se tiñeron los geles con azul brillante de Coomassie al 0,5% y se destiñeron. Las áreas de actividad de la proteasa aparecieron como zonas claras frente a un fondo azul oscuro. Se incubaron los geles duplicados tanto con la adición de 10 mM del inhibidor de la metaloproteasa, EDTA (BDII, Poole) o 1,7 mM de inhibidor de la serina proteasa, fluoruro de aminoetilbencenosulfonilo (AEBSF; Sigma). Se utilizaron estándares pre-teñidos con un amplio margen de pesos moleculares (Bio-rad) como marcadores de peso molecular. Se cargaron líneas separadas con 500 ng y 50 ng de neutrofil elastasa humana (ICN).
3.1.5.4. SDS-PAGE e Inmuno-formación de manchas
Se sometieron a electroforesis muestras de proteínas (20 \mug de peso seco) extraídas tal como se ha descrito anteriormente en un gel de acrilamida al 12%. Se hicieron correr los zimogramas de fibronectina paralela de forma simultánea. Para la inmuno-formación de manchas, se transfirieron los polipéptidos a un papel de nitrocelulosa (0,45 \mum de tamaño de poro, Bio-rad) por electroforesis a 20 V durante 30 minutos (aparato de manchas de transferencia en seco Bio-Rad Semi) en un tampón de transferencia (25 mM tris/HCl), 192 mM de glicina, 10% de metanol, pH 8,3). Para bloquear la unión no específica, se incubaron las inmunomanchas en un 4% de leche baja en grasas Marcel en TBST (10 mM de Tris/HCl, 150 mM de NaCl, 0,5% de Tween-20, pH 7,5) durante 18 horas a 4ºC. Se incubaron las proteínas transferidas con anticuerpo policlonal anti-humano de neutrofil elastasa (Calibiochem Co) diluido 1:500 en TBST durante 2 horas a temperatura ambiente con agitación seguido por incubación con peroxidasa de rábano picante conjugado con IgG de cabra anti-conejo (Sigma) a una dilución de 1:3000 en TBST con un 4% de leche no grasa durante 1 hora a temperatura ambiente. Se visualizó la unión a anticuerpos utilizando el equipo ECL de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Amersham Int.)
3.1.5.5 Determinación de Elastasa
Las muestras de tejido (20 \mug de peso seco) y de neutrofil elastasa humana (0,01-0,3 \mug/ml) se incubaron hasta 1 hora a 37ºC en 200 \mul de tampón Hepes 0,1 M, pH 7,5, conteniendo 0,5 M de NaCl, dimetilsulfóxido al 10% y 0,1 mM de substrato de elastasa (metoxisuccinil-ala-ala-pro-val-p-nitroanilida; Calbiochem Co;). Se determinó la degradación del substrato por medición del OD_{410} (Dynatech MR5000). Se preparó una curva estándar para la degradación a partir de los datos de la elastasa. Los resultados se expresaron como ng/ml de actividad de la elastasa/20 \mug de peso seco.
3.1.6. Análisis Estadístico
Todos los datos se normalizaron y valoraron utilizando un análisis t de student independiente. Se considera que
P < 0,05 es significativa.
3.2 Resultados 3.2.1 El efecto del estrógeno en la velocidad de curación de la herida
El tratamiento con estrógeno aceleró la velocidad de re-epitelialización tanto se sujetos hembra (3A) como en sujetos machos (3C) en relación con los controles de placebo (3B y 3D respectivamente) (ver Tabla IV). Los resultados fueron sólo significativos en el grupo de hembras (p > 0,005) debido a la discrepancia entre los sexos en el grupo de placebo (los machos se re-epitelializaron más rápidamente que las hembras). El área de la herida en el día 7 después de la formación de la herida se vio reducida de forma significativa con el tratamiento con estrógeno tanto en los Grupos de machos 3C y 3D (p < 0,05). Los niveles de colágeno se vieron incrementados de forma consistente tanto en el día 7 como en el día 80 después de la herida en ambos sexos tratados con estrógeno (3A y 3C) en comparación con el placebo (3B y 3D). La rigidez de la herida no se vio afectada por el tratamiento con estrógeno en el día 80 después de la herida.
3.2.2 El efecto del estrógeno en la actividad de la elastasa de la herida
Los extractos de tejido de las heridas agudas del día 7 degradaron todos la fibronectina mostrando una banda mayor a aproximadamente 30 kd, pero de forma consistente se produjo menos degradación en los grupos tratados con estrógeno (3A y 3C). La actividad de la proteasa específica de la fibronectina de 30 kd en todas las muestras fue eliminada por incubación con el amplio intervalo de inhibidor de la serina proteasa, AEBSF, pero no por el inhibidor de la metaloproteasa, EDTA, sugiriendo que la mayor actividad de degradación de la fibronectina era debida a la serina proteasa, que co-emigró con la neutrofilelastasa comercial. Las manchas de inmunotinción confirmaron que la actividad de la proteasa de 30 kd observada en los zimogramas de la fibronectina fue elastasa. La actividad de la elastasa estuvo presente sólo en los grupos tratados con placebo (3B y 3D). Se cuantificó la actividad de la elastasa utilizando un ensayo de degradación del substrato de la elastasa sintética, que mostró que el tratamiento con estrógeno reduce de forma significativa la actividad de la elastasa en las heridas en el día 7 en comparación con el placebo
(< 50 ng de elastasa por 20 \mug de peso seco de tejido para los grupos de placebo concurrentes con los datos de manchas Western) (Tabla IV).
TABLA IV El estrógeno tópico acelera la curación de heridas en machos y hembras ancianos
6
3.2.3 El efecto del estrógeno en la cicatrización
Las Figuras 7 y 8 ilustran el efecto del estrógeno (e) en la cicatrización (microscópicamente y macroscópicamente respectivamente) tal como se determinó en 2.1.4.2. El tratamiento con estrógeno estuvo asociado con una inferior calidad de la herida (que pudo estar correlacionada con los niveles del TGF-\beta).

Claims (12)

1. El uso de un compuesto que favorece la actividad estrogénica en la fabricación de un medicamento para la aceleración de la curación de las heridas de la piel.
2. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 en donde dicho compuesto es un estrógeno o un agonista del receptor de estrógeno seleccionado entre etinilestradiol, dienoestrol, mestranol, estradiol, estriol, estrógenos conjugados, sulfato de piperacina estrona, estilboestrol, fosfesterol tetrasódico, poliestradial fosfato, tibolona o un fitoestrógeno.
3. El uso de acuerdo con la reivindicación 2 en donde dicho compuesto es el 17 \beta-estradiol.
4. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 en donde dicho compuesto es uno de: un inhibidor de la rotura de estrógeno, un inhibidor de la rotura del agonista del receptor de estrógeno; un modulador de la actividad de la hormona luteinizante, la hormona estimuladora del folículo o la gonadotropina coriónica.
5. El uso de acuerdo con cualquiera de las anteriores reivindicaciones en donde la herida es una herida aguda.
6. El uso de acuerdo con la reivindicación 5 en donde la herida es un daño penetrativo, una quemadura o el resultado de una cirugía electiva.
7. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 en donde la herida en una herida crónica.
8. El uso de acuerdo con la reivindicación 7 en donde la herida es una ulceración diabética, venosa o de decúbito.
9. El uso de acuerdo con cualquiera de las anteriores reivindicaciones en donde dicho compuesto es un precursor de una hormona esteroidea sexual de estrógeno.
10. El uso de acuerdo con cualquiera de las anteriores reivindicaciones para una aplicación no sistémica.
11. El uso de acuerdo con cualquiera de las anteriores reivindicaciones para la fabricación de un medicamento en la forma de un líquido, ungüento, crema, gel, hidrogel, polvo, aerosol o implante o gotas para los ojos.
12. El uso de acuerdo con cualquiera de las anteriores reivindicaciones en donde el medicamento contiene entre un 0,001% y un 4% en peso de dicho compuesto.
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US (3) US6696433B2 (es)
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DE (1) DE69731302T3 (es)
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PT (1) PT930876E (es)
WO (1) WO1998003180A2 (es)

Families Citing this family (87)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5660835A (en) * 1995-02-24 1997-08-26 East Carolina University Method of treating adenosine depletion
US20020032160A1 (en) * 1995-02-24 2002-03-14 Nyce Jonathan W. Compositions & formulations with an epiandrosterone or a ubiquinone & kits & their use for treatment of asthma symptoms & for reducing adenosine/adenosine receptor levels
US6653297B1 (en) * 1997-07-03 2003-11-25 Medical College Of Hampton Roads Control of selective estrogen receptor modulators
EP0943333A1 (de) * 1998-03-18 1999-09-22 S.W. Patentverwertungs GmbH Medikament zur Prophylaxe und/oder Behandlung des Mammakarzinoms enthaltend einen Hemmer der Bildung von Oestrogenen
GB9923076D0 (en) 1999-09-29 1999-12-01 Phytopharm Plc Sapogenin derivatives and their use
WO2000009070A2 (en) * 1998-08-13 2000-02-24 Hadasit Medical Research Services And Development Company Ltd. Inhibition of pathogenic processes related to tissue trauma
HUP0301335A3 (en) * 2000-04-12 2006-02-28 Novartis Ag Combination of organic compounds
AU2001271162A1 (en) * 2000-07-05 2002-01-14 Astrazeneca Ab Pharmaceutical combination of an anti-androgen and letrozole for providing an anit-androgenic effect and aromatase inhibition
WO2002002099A1 (en) * 2000-07-05 2002-01-10 Astrazeneca Ab Pharmaceutical combination of an anti-androgen and tamoxifen for providing an anti-androgenic effect and aromatase inhibition
WO2002002112A1 (en) * 2000-07-05 2002-01-10 Astrazeneca Ab Pharmaceutical combination of an anti-androgen and anastrozole for providing an antiandrogenic effect and aromatase inhibition
JP2004269356A (ja) * 2000-12-27 2004-09-30 Ajinomoto Co Inc 創傷部癒着防止剤
US6559177B2 (en) 2001-04-19 2003-05-06 Wyeth 5, 11-Dioxa-benzo[b]fluoren-10-one and 5-oxa-11-thia-benzo[b]fluoren-10-ones as estrogenic agents
WO2002085297A2 (en) * 2001-04-24 2002-10-31 East Carolina University Compositions & formulations with a non-glucocorticoid steroid &/or a ubiquinone & kit for treatment of respiratory & lung disease
US20050070487A1 (en) * 2001-04-24 2005-03-31 Nyce Jonathan W. Composition, formulations and kit for treatment of respiratory and lung disease with non-glucocorticoid steroids and/or ubiquinone and a bronchodilating agent
US6589980B2 (en) 2001-05-17 2003-07-08 Wyeth Substituted 10,11-benzo[b]fluoren-10-ones as estrogenic agents
CN1638732A (zh) 2002-03-04 2005-07-13 研究及应用科学协会股份有限公司 含载体肽的缓释药物制剂
US7405207B2 (en) 2002-06-17 2008-07-29 Epigenesis Pharmaceuticals, Inc. Nebulizer formulations of dehydroepiandrosterone and methods of treating asthma or chronic obstructive pulmonary disease using compositions thereof
EP1553954A4 (en) * 2002-06-17 2009-12-23 Epigenesis Pharmaceuticals Llc DIHYDRATE DEHYDROEPIANDROSTERONE AND METHOD FOR THE TREATMENT OF ASTHMA OR CHRONIC OBSTRUCTIVE LUNG DISEASE, COMPOSITIONS THEREOF
EP1621199B8 (en) * 2003-04-18 2011-01-19 Advanced Medicine Research Institute Remedies for diseases to be applied to eye
ATE353653T1 (de) * 2003-07-29 2007-03-15 Acme Srl Verwendung von stanozolol zur herstellung von entzündungshemmenden und antidegenerativen arzneimitteln
US20050026881A1 (en) * 2003-07-31 2005-02-03 Robinson Cynthia B. Combination of dehydroepiandrosterone or dehydroepiandrosterone-sulfate with an anti-IgE antibody for treatment of asthma or chronic obstructive pulmonary disease
US20110209699A1 (en) * 2003-07-31 2011-09-01 Robinson Cynthia B Combination of dehydroepiandrosterone or dehydroepiandrosterone-sulfate with a lipoxygenase inhibitor for treatment of asthma or chronic obstructive pulmonary disease
US20050026883A1 (en) * 2003-07-31 2005-02-03 Robinson Cynthia B. Combination of dehydroepiandrosterone or dehydroepiandrosterone-sulfate with a PDE-4 inhibitor for treatment of asthma or chronic obstructive pulmonary disease
US20050113318A1 (en) * 2003-07-31 2005-05-26 Robinson Cynthia B. Combination of dehydroepiandrosterone or dehydroepiandrosterone-sulfate with a beta-agonist bronchodilator for treatment of asthma or chronic obstructive pulmonary disease
US20050026848A1 (en) * 2003-07-31 2005-02-03 Robinson Cynthia B. Combination of dehydroepiandrosterone or dehydroepiandrosterone-sulfate with a methylxanthine derivative for treatment of asthma or chronic obstructive pulmonary disease
US20050026884A1 (en) * 2003-07-31 2005-02-03 Robinson Cynthia B. Combination of dehydroepiandrosterone or dehydroepiandrosterone-sulfate with a beta-agonist bronchodilator for treatment of asthma or chronic obstructive pulmonary disease
US20050026882A1 (en) * 2003-07-31 2005-02-03 Robinson Cynthia B. Combination of dehydroepiandrosterone or dehydroepiandrosterone-sulfate with a leukotriene receptor antagonist for treatment of asthma or chronic obstructive pulmonary disease
US20090274676A1 (en) * 2003-07-31 2009-11-05 Robinson Cynthia B Combination of dehydroepiandrosterone or dehydroepiandrosterone-sulfate with a pde-4 inhibitor for treatment of asthma or chronic obstructive pulmonary disease
US20050026880A1 (en) * 2003-07-31 2005-02-03 Robinson Cynthia B. Combination of dehydroepiandrosterone or dehydroepiandrosterone-sulfate with a cromone for treatment of asthma or chronic obstructive pulmonary disease
US20050101545A1 (en) * 2003-07-31 2005-05-12 Robinson Cynthia B. Combination of dehydroepiandrosterone or dehydroepiandrosterone-sulfate with an anticholinergic bronchodilator for treatment of asthma or chronic obstructive pulmonary disease
US20050026890A1 (en) * 2003-07-31 2005-02-03 Robinson Cynthia B. Combination of dehydroepiandrosterone or dehydroepiandrosterone-sulfate with an antihistamine for treatment of asthma or chronic obstructive pulmonary disease
US20050085430A1 (en) * 2003-07-31 2005-04-21 Robinson Cynthia B. Combination of dehydroepiandrosterone or dehydroepiandrosterone-sulfate with a PDE-4 inhibitor for treatment of asthma or chronic obstructive pulmonary disease
US20050043282A1 (en) * 2003-07-31 2005-02-24 Robinson Cynthia B. Combination of dehydroepiandrosterone or dehydroepiandrosterone-sulfate with a lipoxygenase inhibitor for treatment of asthma or chronic obstructive pulmonary disease
US20090285899A1 (en) * 2003-07-31 2009-11-19 Robinson Cynthia B Combination of dehydroepiandrosterone or dehydroepiandrosterone-sulfate with a methylxanthine derivative for treatment of asthma or chronic obstructive pulmonary disease
US20050038004A1 (en) * 2003-07-31 2005-02-17 Robinson Cynthia B. Combination of dehydroepiandrosterone or dehydroepiandrosterone-sulfate with an anticholinergic bronchodilator for treatment of asthma or chronic obstructive pulmonary disease
US20050026879A1 (en) * 2003-07-31 2005-02-03 Robinson Cynthia B. Combination of dehydroepiandrosterone or dehydroepiandrosterone-sulfate with a tyrosine kinase inhibitor, delta opioid receptor antagonist, neurokinin receptor antagonist, or VCAM inhibitor for treatment of asthma or chronic obstructive pulmonary disease
US20090285900A1 (en) * 2003-07-31 2009-11-19 Robinson Cynthia B Combination of dehydroepiandrosterone or dehydroepiandrosterone-sulfate with a beta-agonist bronchodilator for treatment of asthma or chronic obstructive pulmonary disease
US20090263381A1 (en) * 2003-07-31 2009-10-22 Robinson Cynthia B Combination of dehydroepiandrosterone or dehydroepiandrosterone-sulfate with an anti-ige antibody for treatment of asthma or chronic obstructive pulmonary disease
CA2572223C (en) * 2004-06-25 2014-08-12 The Johns Hopkins University Angiogenesis inhibitors
CA2587090C (en) * 2004-09-21 2016-10-25 Diapedia, L.L.C. Method for design and manufacture of insoles
US20060189909A1 (en) * 2005-02-24 2006-08-24 Hurley Timothy B Load relieving wound dressing
US20070009470A1 (en) * 2005-07-06 2007-01-11 Kin Jung Topical/on-the-skin estrogen cream, lotion, ointment, hair tonic, shampoo and wound healing powder
ITMI20051516A1 (it) 2005-08-02 2007-02-03 Prime Europ Therapeuticals Derivati 17 alfa-sostituti dell'estradiolo ad attivita' cicatrizzante
US20070163147A1 (en) * 2005-09-21 2007-07-19 Cavanagh Peter R Method for Design and Manufacture of Insoles
EP2091557A2 (en) 2006-11-15 2009-08-26 Coda Therapeutics, INC. Improved methods and compositions for wound healing
US20080132475A1 (en) * 2006-12-05 2008-06-05 Charles Gerald Connor Treatment for dry eye
GB0625962D0 (en) * 2006-12-23 2007-02-07 Renovo Ltd Medicaments and methods for wound healing
WO2008078073A1 (en) * 2006-12-23 2008-07-03 Renovo Limited Medicaments and methods comprising a compound that promotes oestrogenic activity for wound healing
WO2008078074A1 (en) * 2006-12-23 2008-07-03 Renovo Limited Promotion of wound contraction with a compound that promotes oestrogenic activity
US20100016264A1 (en) * 2007-12-05 2010-01-21 Connor Charles G Treatment for dry eye using testosterone and progestagen
GB0724231D0 (en) * 2007-12-12 2008-01-30 Renono Ltd Methods for inhibiting scarring
CA2710375A1 (en) * 2007-12-21 2009-07-09 Coda Therapeutics, Inc. Treatment of orthopedic conditions
JP2011507599A (ja) 2007-12-21 2011-03-10 コーダ セラピューティクス， インコーポレイテッド 改良医療デバイス
US10279007B2 (en) 2010-11-15 2019-05-07 Oxygenetix Institute, Inc. Topical treatment method for healing wounds, disinfecting, covering and concealing the wound until healing occurs
MX369385B (es) * 2011-09-13 2019-11-07 Univ Brigham Young Productos para cicatrizar heridas tisulares.
US9301920B2 (en) 2012-06-18 2016-04-05 Therapeuticsmd, Inc. Natural combination hormone replacement formulations and therapies
US8633178B2 (en) 2011-11-23 2014-01-21 Therapeuticsmd, Inc. Natural combination hormone replacement formulations and therapies
ES2691070T3 (es) 2012-05-11 2018-11-23 Kael-Gemvax Co.,Ltd Péptidos antiinflamatorios y composición que comprende los mismos
WO2013169060A1 (ko) 2012-05-11 2013-11-14 주식회사 카엘젬백스 패혈증 예방 또는 치료용 조성물
US10806740B2 (en) 2012-06-18 2020-10-20 Therapeuticsmd, Inc. Natural combination hormone replacement formulations and therapies
US20130338122A1 (en) 2012-06-18 2013-12-19 Therapeuticsmd, Inc. Transdermal hormone replacement therapies
US10806697B2 (en) 2012-12-21 2020-10-20 Therapeuticsmd, Inc. Vaginal inserted estradiol pharmaceutical compositions and methods
US20150196640A1 (en) 2012-06-18 2015-07-16 Therapeuticsmd, Inc. Progesterone formulations having a desirable pk profile
ES2981865T3 (es) 2012-07-11 2024-10-10 Gemvax & Kael Co Ltd Conjugado que comprende un péptido de penetración celular y composiciones que comprenden el mismo
US10568891B2 (en) 2012-12-21 2020-02-25 Therapeuticsmd, Inc. Vaginal inserted estradiol pharmaceutical compositions and methods
US11266661B2 (en) 2012-12-21 2022-03-08 Therapeuticsmd, Inc. Vaginal inserted estradiol pharmaceutical compositions and methods
US10471072B2 (en) 2012-12-21 2019-11-12 Therapeuticsmd, Inc. Vaginal inserted estradiol pharmaceutical compositions and methods
US10537581B2 (en) 2012-12-21 2020-01-21 Therapeuticsmd, Inc. Vaginal inserted estradiol pharmaceutical compositions and methods
US9180091B2 (en) 2012-12-21 2015-11-10 Therapeuticsmd, Inc. Soluble estradiol capsule for vaginal insertion
US11246875B2 (en) 2012-12-21 2022-02-15 Therapeuticsmd, Inc. Vaginal inserted estradiol pharmaceutical compositions and methods
RU2677277C2 (ru) 2013-06-07 2019-01-16 Джемвакс Энд Каэл Ко., Лтд. Биологические маркеры, которые могут быть использованы в иммунотерапии рака
TWI539960B (zh) 2013-06-21 2016-07-01 凱爾傑姆維克斯有限公司 激素分泌調節劑、包括其的組成物以及其用途
EP3072519B1 (en) 2013-11-22 2020-08-19 Gemvax & Kael Co., Ltd. Peptide having angiogenesis inhibitory activity and composition containing same
ES2809251T3 (es) 2013-12-17 2021-03-03 Gemvax & Kael Co Ltd Composición para tratar cáncer de próstata
JP6420459B2 (ja) 2014-04-11 2018-11-07 ジェムバックス アンド カエル カンパニー，リミティド 線維症抑制活性を有するペプチド及びこれを含む組成物
US10662223B2 (en) 2014-04-30 2020-05-26 Gemvax & Kael Co., Ltd. Composition for organ, tissue, or cell transplantation, kit, and transplantation method
EP3145489A1 (en) 2014-05-22 2017-03-29 TherapeuticsMD, Inc. Natural combination hormone replacement formulations and therapies
US10465188B2 (en) 2014-08-22 2019-11-05 Auckland Uniservices Limited Channel modulators
KR102413243B1 (ko) 2014-12-23 2022-06-27 주식회사 젬백스앤카엘 안질환 치료 펩티드 및 이를 포함하는 안질환 치료용 조성물
KR102636129B1 (ko) 2015-02-27 2024-02-14 주식회사 젬백스앤카엘 청력 손상 방어용 펩타이드 및 이를 포함하는 조성물
EP3318265B1 (en) 2015-07-02 2021-08-18 Gemvax & Kael Co., Ltd. Peptide having anti-viral effect and composition containing same
US10328087B2 (en) 2015-07-23 2019-06-25 Therapeuticsmd, Inc. Formulations for solubilizing hormones
WO2017173071A1 (en) 2016-04-01 2017-10-05 Therapeuticsmd, Inc. Steroid hormone pharmaceutical composition
WO2017173044A1 (en) 2016-04-01 2017-10-05 Therapeuticsmd Inc. Steroid hormone compositions in medium chain oils
EP4272829A3 (en) 2016-04-07 2024-01-17 Gemvax & Kael Co., Ltd. Peptide having effects of increasing telomerase activity and extending telomere, and composition containing same
WO2020160225A1 (en) * 2019-01-30 2020-08-06 Ohio State Innovation Foundation ESTROGEN RECEPTOR BETA (ERβ) AGONISTS FOR THE TREATMENT OF FIBROTIC CONDITIONS
KR102842907B1 (ko) 2019-09-27 2025-08-07 (주)아모레퍼시픽 신규 진세노사이드를 포함하는 갱년기 증상의 예방 또는 개선용 조성물

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4150128A (en) 1976-03-15 1979-04-17 Jasionowski Edward A Method of treating atrophic vulvar dystrophy
FR2515041A1 (fr) 1981-10-26 1983-04-29 Besins Jean Medicament a base de progesterone pour le traitement des affections mammaires
IL65184A0 (en) 1982-03-05 1982-05-31 Yissum Res Dev Co Preparation for the treatment of oral diseases,comprising glycyrrhizin
EP0155934B1 (en) 1983-07-29 1989-12-06 Duke University Pharmaceutical compositions for treating androgen-related disorders in humans
SE8305864D0 (sv) 1983-10-25 1983-10-25 L E Medical Ogondroppar
US4684635A (en) 1984-05-11 1987-08-04 Norman Orentreich Compositions and methods for inhibiting the action of androgens
JPS61137820A (ja) 1984-12-07 1986-06-25 Yoshiaki Oshima 塗布用男性ホルモン混和剤
US5276022A (en) * 1987-09-24 1994-01-04 Jencap Research Ltd. Hormone preparation and method
US4950483A (en) * 1988-06-30 1990-08-21 Collagen Corporation Collagen wound healing matrices and process for their production
US5569678A (en) * 1989-07-31 1996-10-29 Massachusetts Institute Of Technology Control of wound scar production
JP3273430B2 (ja) 1989-12-28 2002-04-08 日東電工株式会社 エストロゲン含有ゲル製剤
EP1236470A3 (en) 1991-11-22 2004-09-01 Alcon Laboratories, Inc. Angiostatic steroids
WO1994002130A1 (en) * 1992-07-20 1994-02-03 Massachusetts Institute Of Technology Control of wound scar production with calcium antagonists alone or in a combination with a steroid
US5639743A (en) * 1992-11-13 1997-06-17 University Of Georgia Research Foundation Compositions and methods for treating exocrine gland atrophy
US5552162A (en) 1993-02-09 1996-09-03 Arch Development Corporation Method for improvement of scar size and appearance
US5504074A (en) * 1993-08-06 1996-04-02 Children's Medical Center Corporation Estrogenic compounds as anti-angiogenic agents
AU1942995A (en) * 1994-03-15 1995-10-03 K.U. Leuven Research & Development New use of growth hormone
US5656450A (en) 1994-05-27 1997-08-12 Board Of Regents, The University Of Texas System Activation of latent transforming growth factor β by matrix vesicles
AU1970197A (en) 1996-05-09 1997-11-26 Alcon Laboratories, Inc. Use of steroid compounds to prevent non-cancerous tissue growth
US6117911A (en) * 1997-04-11 2000-09-12 Neorx Corporation Compounds and therapies for the prevention of vascular and non-vascular pathologies

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