ES2229716T3 - Vesiculas cubiertas de fosfato calcico. - Google Patents

Vesiculas cubiertas de fosfato calcico.

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Abstract

Una vesícula, que comprende a) una capa interna que comprende un fosfolípido, y b) una capa externa que comprende fosfato cálcico.

Description

Vesículas cubiertas de fosfato cálcico.
La presente invención se refiere a materiales de recubrimiento que comprenden fosfato cálcico, a procesos para su preparación y a su uso en recubrimientos. La invención se refiere, en particular, a vesículas o gotitas hidrófobas que comprenden una capa externa, la cual comprende fosfato cálcico, a su preparación y a su uso, por ejemplo, en el recubrimiento de implantes y en la expedición de medicamentos.
Los materiales cerámicos monolíticos porosos basadas en hidroxiapatito (HA) han demostrado que ayudan en la osteoconducción del hueso cuando se implantan en un defecto óseo. Sin embargo, son demasiado frágiles para usarse en aplicaciones estructurales.
Una manera de superar este problema es recubrir un implante metálico con HA. El HA proporciona al hueso capacidad de unión, mientras que el metal proporciona el soporte estructural. Desafortunadamente, muchos métodos comunes para producir recubrimientos requieren temperaturas elevadas, lo que causa efectos indeseables tales como la degradación de HA a diversas fases de fosfato cálcico dependiendo de la estequiometría del polvo de partida y de la velocidad de enfriamiento en la formación del recubrimiento [R. LeGEROS, Clinical Materials. 14 (1993) 65].
Los materiales de implante pueden ser pulverizados con hidroxiapatito en forma de plasma antes de ser expuestos al entorno biológico. Sin embargo, el uso de recubrimientos pulverizados con plasma [K. de GROOT, J. Biomed. Mat. Res. 21 (1987) 1375] ha demostrado que las altas temperaturas de tratamiento son las responsables de los inconvenientes experimentados con tales recubrimientos. Los inconvenientes incluyen, por ejemplo, composiciones variables, falta de control sobre la microestructura, y ruptura y delaminación del recubrimiento desde el substrato. Los dos últimos efectos surgen también debido al espesor relativo del recubrimiento, causando deficientes propiedades mecánicas a través del espesor del recubrimiento. Además, los recubrimientos pulverizados con plasma no ofrecen la porosidad requerida para favorecer el crecimiento hacia dentro del hueso. También requieren un costoso equipo de tratamiento.
A fin de utilizar un margen de substratos más extenso que los metales usados tradicionalmente, es deseable poder usar un método de recubrimiento que no requiera elevadas temperaturas de tratamiento. Esto permitiría el uso de materiales que son considerados tradicionalmente bioinertes, pero que puedan tener la fortaleza y la resistencia necesarias para actuar como materiales de implante. Existen varios de estos métodos, e incluyen un proceso biomimético [T. KOKUBO en "Bone-Bonding Biomaterials" (Reed Healthcare Communications, Países Bajos, 1992) 102] y deposición electroforética [M. SHIRKANZADEH, M. AZADEGAN, V. STACK y S. SCHREYER, Materials Letters. 18 (1994) 211]. Sin embargo, estos métodos son específicos para un substrato y, en el caso del proceso biomimético, el período de tiempo requerido para el crecimiento de apatito es significativo.
También es ventajoso incorporar un grado de porosidad en los recubrimientos para favorecer el crecimiento hacia dentro del hueso en una situación de implante. Para conseguir tal crecimiento hacia dentro, la porosidad debe estar en una proporción compatible con la regeneración del hueso.
La presente invención proporciona materiales de recubrimiento que comprenden fosfato cálcico, los cuales superan los problemas tratados más arriba. Se pueden usar para recubrir substratos a bajas temperaturas, al tiempo que ofrecen un alto grado de control sobre el espesor del recubrimiento y a la vez sobre el grado de porosidad. Un método a baja temperatura de este tipo permite también la incorporación en el recubrimiento de otros compuestos que sufrirían degradación a altas temperaturas tales como, por ejemplo, compuestos farmacéuticamente activos sensibles al calor.
En un primer aspecto, la presente invención proporciona una vesícula que comprende
a) una capa interna que comprende un fosfolípido, y
b) una capa externa que comprende fosfato cálcico.
El fosfolípido que comprende la capa interna es cualquier fosfolípido capaz de formar vesículas en una mezcla acuosa, o una mezcla de tales fosfolípidos. Preferiblemente el fosfolípido es L-\alpha-fosfatidilserina. Más preferiblemente, el fosfolípido es L-\alpha-fosfatidilcolina.
La capa externa puede comprender, además, otros iones, los cuales se pueden incorporar para modificar las propiedades del fosfato cálcico, que incluyen aniones tales como carbonato, hidrógeno-carbonato, hidrógeno-fosfato, cloruro y fluoruro, y cationes tal como magnesio.
Las vesículas de la presente invención pueden contener compuestos farmacéuticamente activos, incluidos compuestos que ayudan a la unión del recubrimiento al hueso existente (factores de crecimiento óseo), tratan una enfermedad ósea específica o cualquier zona enferma adyacente al hueso, o alivian el dolor. En particular, las vesículas de la presente invención pueden contener compuestos para el tratamiento de tumores tal como compuestos que contienen ^{32}P o ^{89}Sr, compuestos para la reducción del dolor que surge de los tumores tal como analgésicos narcóticos (los cuales pueden ser administrados en dosis más bajas conforme a la invención, ya que pueden ser administrados en la ubicación del tumor), compuestos para la reducción de la actividad de osteoclasto causada por las células de tumor tal como indometacina, prostaglandinas e inhibidores de interleucina 6, además de aquellos compuestos que tratan enfermedades óseas específicas tal como osteoporosis, por ejemplo, hormona paratiroides, derivados de vitamina D, bisfosfonatos, proteínas morfogenéticas del hueso y antibióticos, o sus mezclas.
Se ha encontrado que las vesículas de la presente invención se pueden obtener fácilmente formándolas en una mezcla acuosa que comprende un fosfolípido, y luego calcificando dichas vesículas poniéndolas en contacto con una solución acuosa que comprende iones calcio y fosfato.
La concentración de fosfolípidos en la mezcla acuosa debería estar por debajo de la concentración a la que puede tener lugar la aglomeración del fosfolípido. Preferiblemente, la concentración de fosfolípido varía desde 5 x 10^{-5} a 1 x 10^{-3} g por cm^{3}, más preferiblemente desde 5 x 10^{-5} a 7,5 x 10^{-4} g por cm^{3} y con máxima preferencia desde 2,5 x 10^{-4} a 1 x 10^{-5} g por cm^{3}.
Las vesículas se pueden formar agitando la mezcla acuosa que comprende un fosfolípido como se describe arriba. Esto se puede conseguir mediante agitación, pero preferiblemente la mezcla se agita mediante ondas sonoras de alta frecuencia, que tienen una frecuencia y una potencia suficientes para formar una emulsión. Preferiblemente, la frecuencia de sonicación varía desde 20 a 30 kHz.
La temperatura de agitación debería estar por debajo del punto de ebullición de la mezcla acuosa. También debería estar por debajo de la temperatura a la cual puede tener lugar la degradación del fosfolípido. Preferiblemente, la temperatura de agitación está por debajo de 70ºC, más preferiblemente está por debajo de 50ºC y con máxima preferencia está aproximadamente a temperatura ambiente.
El tiempo de agitación depende del método de agitación y de la concentración de la mezcla acuosa. Preferiblemente, la mezcla se agita durante un tiempo suficiente para formar una emulsión o hasta que no se formen más vesículas, es decir hasta que se alcance un estado estacionario. Si la mezcla se trata con ultrasonidos, el tiempo de agitación para una mezcla con una concentración de 5 x 10^{-5} g de fosfolípido por cm^{3} de mezcla acuosa generalmente varía de 15 minutos a 2 horas, especialmente alrededor de 1 hora. Si una mezcla de la misma concentración se agita para formar las vesículas, entonces, de 30 minutos a 4 horas, más preferiblemente de 1 hora a 3 horas y con máxima preferencia, aproximadamente 2 horas.
Se pueden incorporar a la mezcla acuosa uno o más alcoholes para aumentar el tamaño de vesícula de acuerdo con métodos conocidos. El alcohol es típicamente metanol, etanol, propanol o butanol. Preferiblemente, el alcohol es etanol. La concentración del alcohol generalmente está por debajo de la concentración a la que el fosfolípido comienza a disolverse. Preferiblemente, la concentración del alcohol no es más de aproximadamente un 10% en volumen de la mezcla acuosa.
Otros componentes que se pueden añadir a la mezcla acuosa incluyen, por ejemplo, tensioactivos y compuestos farmacéuticamente activos. Tensioactivos preferidos incluyen tensioactivos aniónicos, por ejemplo ésteres de carboxilos, sulfatos y fosfatos. El uso de tensioactivos puede reducir el tiempo de agitación requerido para producir las vesículas.
La sedimentación de las vesículas después de la agitación se puede evitar, por ejemplo, agitando magnéticamente usando una baja velocidad de corte.
La calcificación de las vesículas se puede llevar a cabo poniendo en contacto las vesículas de fosfolípido con una solución acuosa que comprende iones calcio y fosfato (PO_{4}^{3-}). Típicamente, la relación de iones calcio a fosfato varía desde 1:1 a 2:1, preferiblemente desde 1,4:1 a 2:1 y más preferiblemente alrededor de 1,5:1.
La fuente de iones calcio en la solución es cualquier compuesto de calcio orgánico o inorgánico soluble en agua, preferiblemente cloruro cálcico o nitrito cálcico y más preferiblemente nitrato cálcico.
La fuente de iones fosfato en la solución es cualquier compuesto de fosfato soluble en agua, preferiblemente un ortofosfato, por ejemplo un ortofosfato potásico, especialmente hidrógeno-ortofosfato di-potásico trihidrato.
Como se indica arriba, se pueden incorporar otros iones a la capa que comprende fosfato cálcico. Por ejemplo, se pueden añadir iones carbonato e hidrógeno-fosfato para aumentar la velocidad de resorción en el cuerpo, mientras que se pueden añadir iones cloruro, fluoruro y magnesio para reducir la velocidad de resorción.
En particular, se pueden añadir iones carbonato a la solución acuosa de iones calcio y fosfato para variar la cristalinidad y la estequiometría de la capa calcificada. La concentración máxima de iones carbonato dependerá del pH, de la temperatura y de la presencia de otros iones. Se apreciará, sin embargo, que la capa calcificada es preferiblemente una capa de fosfato cálcico o una capa de fosfato cálcico sustituido. La fuente de iones carbonato es cualquier compuesto de carbonato o hidrógeno-carbonato soluble y es preferiblemente hidrógeno-carbonato potásico o hidrógeno-carbonato sódico.
La calcificación se puede realizar poniendo en contacto simultáneamente las vesículas con iones calcio y fosfato o introduciendo las vesículas en una solución de calcio, por ejemplo, durante aproximadamente dos horas, antes de la adición de iones fosfato.
El tiempo durante el cual las vesículas se ponen en contacto con la solución calcificante afecta al espesor de la capa externa formada en las vesículas. Típicamente, después de aproximadamente 1 hora, el espesor de la capa es aproximadamente 10 nm. El espesor de la capa (junto con su porosidad) puede afectar a la velocidad a la cual se quiebran las vesículas en el cuerpo y a la velocidad de liberación de cualquier compuesto farmacéuticamente activo desde dentro de las vesículas. Preferiblemente el espesor de la cubierta varía desde 5 a 50 nm, más preferiblemente desde aproximadamente 5 a 20 nm y con máxima preferencia aproximadamente 10 nm.
En otro aspecto, la presente invención proporciona una gotita hidrofóbica, que comprende
a) un núcleo hidrofóbico,
b) una capa interna que comprende un tensioactivo, y
c) una capa externa que comprende fosfato cálcico.
El núcleo hidrofóbico comprende preferiblemente un hidrocarburo o un lípido sólidos o líquidos. Además, puede comprender compuestos farmacéuticamente activos insolubles en agua.
El tensioactivo puede ser cualquier tensioactivo que pueda reducir la tensión superficial de la gotita no-acuosa. También puede proporcionar un lugar activo para la deposición de fosfato cálcico. Preferiblemente, el tensioactivo es un tensioactivo aniónico, por ejemplo un éster de un carboxilo, un sulfato o un fosfato.
Se ha encontrado que las gotitas hidrofóbicas de la presente invención se pueden obtener fácilmente mediante la formación de gotitas hidrofóbicas en una mezcla acuosa que comprende un líquido o sólido hidrofóbico y un tensioactivo. Las gotitas se calcifican luego poniéndolas en contacto con una solución acuosa que comprende iones calcio y fosfato y, opcionalmente, otros iones, como se comenta arriba.
Las gotitas hidrofóbicas de la presente invención se pueden formar mediante agitación y posterior calcificación como se describe arriba.
El tamaño de las vesículas y las gotitas hidrofóbicas de la presente invención varía generalmente desde 100 nm a 10 \mum, preferiblemente al menos 300 nm y más preferiblemente al menos 1 \mum. Se puede aumentar el tamaño por encima de 1 \mum mediante la adición de un alcohol, por ejemplo etanol, a la mezcla acuosa antes de la agitación. El tamaño de las vesículas o gotitas también se puede controlar mediante procesos de extrusión usando, por ejemplo, jeringas hipodérmicas o membranas porosas.
En un aspecto adicional, la presente invención proporciona un substrato sólido en el que zonas de dicho substrato tienen adherida una capa que comprende las vesículas o gotitas descritas arriba con otra u otras zonas que no tienen vesículas o gotitas adheridas. Tales substratos pueden encontrar aplicación en el tratamiento de afecciones óseas y/o en la expedición in vitro de compuestos farmacéuticamente activos.
Los substratos que pueden ser recubiertos, pueden ser eléctricamente conductores sobre toda o parte de su superficie. Pueden ser, por ejemplo, metales tal como oro, plásticos o materiales cerámicos recubiertos con metal sobre toda o parte de su superficie, metales parcialmente recubiertos con plásticos, o semi-conductores. Preferiblemente, los substratos tienen zonas no-conductoras en sus superficies con un diámetro de 10 \mum a 2 mm y más preferiblemente las zonas tienen un diámetro de aproximadamente 150 \mum.
Los substratos pueden ser recubiertos usando un proceso de deposición electrolítica o aplicando vesículas o gotitas de la presente invención en forma de polvo. Preferiblemente, los substratos se recubren electrolíticamente.
El proceso de deposición electrolítica se puede llevar a cabo en una solución acuosa a un pH de 5 a 11, preferiblemente de 6 a 8, más preferiblemente alrededor de 7,4. La forma del fosfato cálcico depositado puede variar con el pH. Por ejemplo, a un pH alto se puede depositar hidroxiapatito, mientras que a un pH bajo se puede depositar brushita.
La temperatura de deposición está generalmente por debajo de 100ºC; preferiblemente por debajo de 70ºC y más preferiblemente alrededor de 50ºC.
Se puede añadir a la solución una sal tal como, por ejemplo, cloruro potásico para mantener sobresaturación al conservar una alta concentración iónica de fondo y actuar como un electrolito. Alternativamente, se pueden añadir calcio y fosfato durante el proceso de precipitación para mantener sobresaturación.
El espesor del recubrimiento aumenta, por supuesto, con el tiempo de deposición. Por ejemplo, después de un tiempo de deposición de 1 hora, el espesor del recubrimiento es aproximadamente 2 \mum. Se pueden realizar deposiciones múltiples o se puede prolongar el tiempo de deposición para acceder a recubrimientos más gruesos, por ejemplo recubrimientos de aproximadamente 20 \mum.
Se pueden formar recubrimientos a partir de mezclas de las vesículas y/o gotitas de la presente invención. Así, diferentes zonas en la superficie de los substratos se pueden recubrir con diferentes tipos de vesículas o gotitas. Por ejemplo, se puede aplicar un modelo no-conductor al substrato antes de la primera deposición. Después de la primera deposición usando uno o más tipos de vesícula y/o gotita de la presente invención, se puede eliminar la estructura no-conductora y se puede realizar una segunda deposición usando diferentes vesículas y/o gotitas conformes a la invención. Alternativamente, por ejemplo, se recubre un substrato metálico. Luego se puede someter a éste a un proceso parcial de grabado o proceso litográfico y se puede realizar una segunda deposición en una solución diferente de vesículas y/o gotitas. El uso de diversas vesículas y/o gotitas puede permitir la liberación de compuestos farmacéuticamente activos en el recubrimiento a controlar. Por ejemplo, se liberarán más rápidamente los compuestos incorporados en vesículas o gotitas con un recubrimiento delgado que los compuestos incorporados en vesículas o gotitas con un recubrimiento grueso.
La presente invención se ilustra además, simplemente a modo de ejemplo, con relación a las figuras, en las cuales:
La Figura 1 muestra un esquema del aparato experimental usado para la deposición electrolítica de las vesículas y gotitas de la presente invención sobre la superficie de placas de substrato.
La Figura 2 muestra un registro de difracción de rayos X de vesículas calcificadas, formadas en una solución de calcificación que comprende iones carbonato a concentración atmosférica. El registro muestra picos diagnósticos de HA.
La Figura 3 muestra una ilustración esquemática de la jerarquía estructural y de la porosidad graduada en los recubrimientos de la presente invención. Se apreciará que la porosidad de primer orden concierne al espacio entre los depósitos, la porosidad de segundo orden concierne a la porosidad de las vesículas antes de la calcificación y el tercer orden de porosidad concierne a la capa de fosfato cálcico. Tal como se ha tratado arriba, estos tres órdenes de porosidad se pueden variar mediante la apropiada manipulación de los parámetros de proceso.
Los Ejemplos que siguen ilustran, además, la presente invención con relación a las figuras.
Ejemplos
Los recubrimientos fueron examinados usando un equipo de microscopía electrónica Jeol 840 FEG SEM, usando un voltaje de aceleración de 2 kV. La determinación de la fase se llevó a cabo en un difractómetro de rayos X Phillips PW 1710. La espectroscopía Infrarroja Transformada de Fourier se realizó en un espectrómetro ATI Mattson Genesis Series en el intervalo de número de onda de 4000 a 400 cm^{-1}.
Formación de la vesícula
Se trataron con ultrasonidos (es decir, agitados por ondas sonoras de alta frecuencia) 5 ó 10 mg de o bien L-\alpha-fosfatidilcolina o bien L-\alpha-fosfatidilserina (ambas de Sigma, Reino Unido), usando un agitador ultrasónico Kerry Ultrasonics Ltd en 20 ml de agua destilada durante una hora a temperatura ambiente para formar vesículas esféricas. Después de la sonicación, se evitó la sedimentación de las vesículas mediante agitación magnética usando una baja velocidad de corte. Estos fosfolípidos son bien conocidos por presentar una alta afinidad por fijar calcio.
Calcificación de vesículas
La solución tratada con ultrasonidos se añadió a una solución de trabajo de fosfato cálcico (CaP). Esta solución de trabajo se preparó como sigue: se prepararon soluciones de 1,75 mM [Ca] de relación Ca/P = 5/3 usando nitrato cálcico tetrahidrato de calidad analítica, Ca(NO_{3})_{2}\cdot4H_{2}O e hidrógeno-ostofosfato di-potásico trihidrato, K_{2}HPO_{4}\cdot3H_{2}O (ambos de Aldrich, Reino Unido) en agua destilada. Los iones carbonato se incorporaron usando hidrógeno-carbonato potásico, KHCO_{3} (de Aldrich, Reino Unido). Los iones carbonato se añadieron para corresponder a las siguientes concentraciones: (i) CO_{2} atmosférico (1,445 x 10^{-7} M), y (ii) [CO_{3}^{2-}] fisiológico (1,6 x 10^{-6} M).
Deposición de vesículas
Se colocaron un ánodo de platino y un cátodo de acero inoxidable 304 en las soluciones sobresaturadas preparadas como se describe arriba. Los electrodos se conectaron a un suministro de fuerza programable Phillips PM2831 capaz de conseguir ambas propiedades de intensidad constante (IC) y voltaje constante (VC). La concentración de iones calcio, el pH y la temperatura se vigilaron usando un medidor ION85 (Radiometer Ltd, Copenhague), a partir del que se midió la sobresaturación. Todos los experimentos se realizaron a 50ºC, pH de partida 7,4, solución de trabajo de 1,75 mM [Ca^{2+}], 0,1 M de KCl, con un espaciamiento de electrodo de trabajo de 2,25 cm y un potencial aplicado de 2,2 V. Además de las soluciones lípido/agua, se prepararon soluciones adicionales incorporando un alcohol (etanol) a la solución de lípido a ser tratada con ultrasonidos. La calcificación y deposición de las vesículas se realizó de la misma manera que la descrita previamente. A la temperatura de deposición de 50ºC, el alcohol se evapora lentamente, produciendo un aumento en el tamaño de vesícula. El porcentaje en volumen de alcohol en la solución tratada con ultrasonidos se limitó a 10% (2 ml), ya que los fosfolípidos son muy solubles en los alcoholes. La disposición experimental se detalla en la Figura 1.
No hubo ningún cambio en la solución cuando se subió la temperatura desde la temperatura de preparación de las vesículas (temperatura ambiente) hasta la temperatura de deposición de 50ºC. Toda la calcificación tuvo lugar sobre la superficie externa de las vesículas, ya que las vesículas se formaron antes de su introducción en un medio que contuviera calcio. Esto se confirmó mediante examen de microscopía electrónica SEM de los recubrimientos.
La DRX y la espectroscopía IR-TF de los recubrimientos preparados con una concentración de carbonato igual a la de equilibrio atmosférica indicaron que los depósitos se componían de hidroxiapatito casi estequiométrico, con muy bajos niveles de carbonato. Éstos no se ponen de manifiesto en los registros de DRX (Figura 2), pero se vieron picos atribuibles a CO_{3}^{2-} en el espectro de IR-TF. A concentraciones de carbonato más altas los registros de DRX fueron similares, pero las bandas en el espectro de IR-TF fueron más intensas.
Los estudios de microscopía electrónica SEM de los recubrimientos preparados usando 5 mg de fosfolípido indicaron que la cobertura de superficie era típicamente menor que 50%. Los recubrimientos preparados a partir de soluciones de lípidos de 10 mg presentaban una mayor cobertura, de tal manera que el substrato no era visible con microscopía electrónica SEM. Se eligieron recubrimientos de fosfatidilcolina para ser sometidos a examen con el Jeol FEG-SEM, porque una comparación de cinco de estos recubrimientos con aquellos preparados usando fosfatidilserina mostró que el % de cobertura era mayor con la fosfatidilcolina.
La microscopía electrónica SEM de los recubrimientos de fosfatidilcolina (10 mg) mostró que el tamaño de vesícula variaba desde 300 nm para soluciones acuosas, hasta 1 \mum para soluciones que contienen alcohol. De este modo es posible variar el tamaño de vesícula mediante la elección de las propiedades de las soluciones.
Se determinó que el espesor de la pared calcificada era alrededor de 10 nm para una suspensión de vesículas expuesta a iones calcio durante un periodo de una hora. El espesor de la pared calcificada aumenta con el tiempo de exposición a los iones calcio.
El espesor del recubrimiento (es decir, después del choque de las esferas sobre el substrato) aumenta con el tiempo de deposición. Variando el tiempo de deposición, se pueden obtener recubrimientos del espesor requerido.

Claims (33)

1. Una vesícula, que comprende
a) una capa interna que comprende un fosfolípido, y
b) una capa externa que comprende fosfato cálcico.
2. Una vesícula conforme a la reivindicación 1, en la que el fosfolípido se selecciona de L-\alpha-fosfatidilcolina y L-\alpha-fosfatidilserina.
3. Una gotita hidrofóbica, que comprende
a) un núcleo hidrofóbico,
b) una capa interna que comprende un tensioactivo, y
c) una capa externa que comprende fosfato cálcico.
4. Una gotita conforme a la reivindicación 3, en la que el núcleo hidrofóbico comprende un hidrocarburo o un lípido sólidos o líquidos.
5. Una gotita conforme a las reivindicaciones 3 ó 4, en la que el tensioactivo es un tensioactivo aniónico.
6. Una vesícula o gotita conforme a una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la capa externa comprende, además, iones seleccionados a partir de carbonato, hidrógeno-fosfato, cloruro, fluoruro o magnesio.
7. Una vesícula o gotita conforme a una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el espesor de la capa externa varía desde 5 a 50
nm.
8. Una vesícula o gotita conforme a la reivindicación 7, en la que el espesor de la capa externa varía desde 5 a 20 nm.
9. Una vesícula o gotita conforme a la reivindicación 8, en la que el espesor de la capa externa es aproximadamente 10 nm.
10. Una vesícula o gotita conforme a una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el tamaño de la vesícula o gotita varía desde 100 nm a 10 \mum.
11. Una vesícula o gotita conforme a la reivindicación 10, en la que el tamaño de la vesícula o gotita es al menos 300 nm.
12. Una vesícula o gotita conforme a la reivindicación 11, en la que el tamaño de la vesícula o gotita es al menos 1 \mum.
13. Una vesícula o gotita conforme a una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, la cual comprende, además, un compuesto farmacéuticamente activo.
14. Una vesícula o gotita conforme a la reivindicación 13, en la que el compuesto farmacéuticamente activo ayuda a la unión de un recubrimiento, que comprende la vesícula o gotitas, al hueso, trata una afección ósea específica o cualquier zona enferma adyacente al hueso, o alivia el dolor.
15. Una vesícula o gotita conforme a la reivindicación 14, en la que el compuesto farmacéuticamente activo se selecciona de hormona paratiroides, derivados de vitamina D, bisfosfonatos, proteínas morfogenéticas del hueso, analgésicos, compuestos que contienen ^{32}P o ^{89}Sr, indometacina, prostoglandinas, inhibidores de interleucina 6 y antibióti-
cos.
16. Un proceso para preparar una vesícula según una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 6 a 15, comprendiendo dicho proceso
a) formar una vesícula en una mezcla acuosa que comprende un fosfolípido, y
b) calcificar la vesícula mediante la puesta en contacto de dicha vesícula con una solución acuosa que comprende iones calcio y fosfato.
17. Un proceso para preparar una gotita hidrofóbica según se define en una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 15, comprendiendo dicho proce-
so
a) formar una gotita hidrofóbica en una mezcla acuosa que comprende un líquido o sólido hidrofóbico y un tensioactivo, y
b) calcificar la gotita mediante la puesta en contacto de dicha gotita con una solución acuosa que comprende iones calcio y fosfato.
18. Un proceso conforme a las reivindicaciones 16 ó 17, en el que la mezcla acuosa contiene, además, un alcohol.
19. Un proceso conforme a la reivindicación 18, en el que el alcohol se selecciona de metanol, etanol, propanol y butanol.
20. Un proceso conforme a las reivindicaciones 18 ó 19, en el que la concentración de alcohol no es más que 10% en volumen de la mezcla acuosa.
21. Un proceso conforme a una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 20, en el que la relación de calcio a iones fosfato en la solución acuosa varía desde 1:1 a 2:1.
22. Un proceso conforme a la reivindicación 21, en el que la relación de iones calcio a fosfato varía desde 1,4:1 a 2:1.
23. Un proceso conforme a la reivindicación 22, en el que la relación de iones calcio a fosfato es aproximadamente 1,5:1.
24. Una vesícula conforme a la reivindicación 1, preparada mediante el proceso conforme a una cualquiera de las reivindicaciones 16 ó 18 a 23.
25. Una gotita conforme a la reivindicación 3, preparada mediante el proceso conforme a una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 23.
26. Un substrato sólido, en el que zonas de dicho substrato tienen adherida una capa que comprende vesículas o gotitas según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, 24 ó 25, con otra u otras zonas que no tienen vesículas o gotitas adheridas.
27. Un substrato conforme a la reivindicación 26, que comprende
a) zonas eléctricamente conductoras y no-conductoras en su superficie, y
b) una capa que comprende vesículas o gotitas en las zonas conductoras.
28. Un substrato conforme a la reivindicación 27, en el que las zonas no-conductoras tienen un tamaño desde 10 \mum a 2 mm.
29. Un substrato conforme a la reivindicación 28, en el que las zonas no-conductoras tienen un tamaño de aproximadamente 150 \mum.
30. Un proceso para preparar un substrato conforme a una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 29, que comprende depositar electrolíticamente el recubrimiento, que comprende vesículas o gotitas, sobre las zonas conductoras del substrato.
31. Un substrato conforme a la reivindicación 26, preparado mediante el proceso conforme a la reivindicación 30.
32. Un substrato conforme a una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 29 para ser usado en el tratamiento del cuerpo humano o animal.
33. Uso de un substrato conforme a una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 29 en la fabricación de un implante médicamente aceptable en el tratamiento de afecciones óseas o en la liberación de compuestos farmacéuticamente activos.
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