ES2232115T3

ES2232115T3 - Procedimientos y composiciones anti-incrustaciones para una superficie marina.

Info

Publication number: ES2232115T3
Application number: ES99908499T
Authority: ES
Inventors: Warren Paul Powers; Thomas Allan Selvig; Richard Irwin Leavitt
Original assignee: W P POWERS Co; Wp Powers Co
Current assignee: W P POWERS Co; Wp Powers Co
Priority date: 1996-10-29
Filing date: 1999-02-26
Publication date: 2005-05-16
Anticipated expiration: 2019-02-26
Also published as: EA003219B1; MXPA01008609A; CN1204209C; US5919689A; JP2002537470A; DK1161502T3; WO2000050521A9; PT1161502E; AU770648B2; NO20013874L; CN1337982A; CA2362569A1; EP1161502A1; EA200100919A1; BR9917140A; AU2791699A; WO2000050521A1; ATE283901T1; DE69922415D1; NZ513846A

Abstract

Una composición antiincrustación marina que comprende: una resina polimérica como material base; y al menos un microorganismo en el material base que produce al menos una enzima amilolítica o proteolítica en el mencionado material base, en la que el microorganismo está presente en una cantidad efectiva para reducir o prevenir la incrustación en una superficie marina revestida con la composición antiincrustación marina.

Description

Procedimientos y composiciones anti-incrustaciones para una superficie marina.

Antecedentes de la invención

La presente invención se refiere a procedimientos, pinturas y componentes contra la incrustación marina.

La incrustación marina ha estado presente desde la primera interacción de los seres humanos con el entorno marino. La incrustación marina, que es la adhesión no deseada de organismos a la superficie marina, ocurre no sólo en naves marinas como cascos de barcos y sistemas de pilotaje, sino también en otras estructuras expuestas al agua marina. Tales estructuras pueden incluir: boyas, medios de transporte sumergidos como cables y tubos, mamparos, torres de refrigeración y cualquier objeto o estructura que opera sumergida.

La incrustación depende de un número de factores que incluyen la luz, características y configuración del sustrato, flujo de agua, factores químicos, complejidad biológica de la larva, la densidad y composición del larvario, y la presencia o ausencia de películas superficiales.

Las películas superficiales en las superficies marinas tienen mucho interés, debido a que la gran mayoría de las larvas marinas están más preparadas para la incrustación en películas superficiales. D. J. Crisp, Chemosorbtion in Marine Organisms: Factors Influencing the Settlement of Marine Invertebrate Larvae 177, 215 (1974) (ed. P. T. Grant & A. M. Mackie). Estas películas superficiales en estructuras marinas las generan microbios marinos inmediatamente después de la inmersión de la estructura en el agua. D. Kirchman et al., Mar. Chem. 27:201-17 (1989).

Estos microbios actúan estimulando el desarrollo de los organismos que se incrustan. C. E. Zobell and E. C. Allen, The significance of Marine Bacteria in the Fouling o Submerged Surface, J. Bact. 29:230-51 (1935). De hecho, los investigadores han encontrado que parece existir una estrecha relación entre la formación de una película primaria y la adhesión de animales a las superficies marinas. R. Mitchell & L. Young, The Role of Microorganisms in Marine Fouling, Technical Report Nº 3 V.S. Office of Naval Research Contract Nº N00014-67-A-0298-0026 NR-306-025 (1972).

Las películas superficiales pueden incluir hidratos de carbono y proteínas extracelulares exudadas por los microorganismos marinos, las cuales las pueden utilizar los propios microorganismos para adherirse a la superficie marina. A. Danielsson et al., On Bacterial Adhesión - the effect of certain enzymes on adherid cells of a marine Pseudomonas sp., Botanica Marina 20:13-17 (1977); G. G. Geesey et al., Microscopic Examination of Natural Sessil Bacterial Populatios from an Alpine Stream, Can. J. Microbio. 23:1733-36 (1977). La adsorción de proteínas en superficies puede impactar sustancialmente en procesos microbianos, químicos y biogeoquímicos que ocurren en las interfaces de la superficie del agua marina. D. L. Kirchman, et al., Adsorption of Proteins to Surfaces in Seawater, Marine Chemistry 27:201-217 (1989). Tal adhesión proporciona a un microorganismo ventajas pues puede recibir constantemente un suministro renovado de nutrientes orgánicos en unas condiciones físicas que le conducen a su crecimiento. J. W. Costerton et al., How Bacteria Stick, Scientific American 238:86-95 (1977)

No obstante, la incrustación (esto es, adhesiones no deseadas de organismos en una superficie marina) crea numerosos problemas. La incrustación implica un incremento de rozamiento, peso y corrosión en las estructuras marinas; disminuye la estética de la estructura marina; e incrementa el coste de mantenimiento debido a la eliminación de la incrustación y a las reparaciones de la estructura. Además, incluso un número reducido de balanos u organismos equivalentes adheridos a los propulsores de un barco pueden reducir significativamente la eficiencia de la propulsión y generar problemas de cavitación.

La industria naval ha intentado reducir la incrustación añadiendo a los revestimientos de las naves y estructuras varios materiales tóxicos como mercurio, estaño y cobre. No obstante, hay problemas medioambientales muy significativos con la utilización de estos aditivos. Los revestimientos que contienen estos aditivos se formulan normalmente exponiendo al medioambiente los materiales tóxicos embebidos en la estructura del revestimiento. Esta exposición permite que los materiales tóxicos pasen al medio marino reduciendo la adhesión de los crustáceos.

No obstante, la naturaleza tóxica de los materiales es una espada de doble filo; estos materiales tienen generalmente un efecto adverso sobre el medioambiente marino por el simple hecho de reducir la adhesión de los crustáceos. Debido a la preocupación medioambiental que genera la utilización de tales aditivos, la Agencia de Protección Medioambiental (APM) de Estados Unidos ha restringido enormemente la utilización de estos compuestos, especialmente el estaño y el mercurio. Además, incluso donde se permite la utilización de estos aditivos, su utilización es cara pues necesitan reacondicionamientos frecuentes (en algunas regiones incluso cada seis meses). De este modo, estos aditivos tóxicos son costosos tanto en recursos como en daño al medioambiente. Por otra parte, los organismos marinos que se adhieren a la superficie bajo el agua pueden hacerse inmunes a los materiales tóxicos haciendo inútil la utilización de estos materiales.

Se han realizado otros intentos para solucionar el problema de las incrustaciones en un entorno marino. La patente francesa 2.562.554 describe una composición de antiincrustante marino en forma de pintura que contiene una enzima proteolítica. La aplicación internacional publicada WO 95/27009 describe una pintura antiincrustación que contiene una enzima haloperoxidosa. También, el abstracto de la patente de Japón, Vol. 012, Nº 491 (C-554) (21 de diciembre 1988), describe una composición antiincrustante que combina un agente tensoactivo catiónico específico con una enzima.

Teniendo en cuenta lo anterior, existen necesidades de métodos antiincrustantes marinos y composiciones que no utilicen aditivos tóxicos que degraden el medioambiente. Después de mucha experimentación, los inventores desarrollaron la idea de incorporar, en los revestimientos marinos, enzimas hidrolíticas y/o microorganismos cuya función es limitar las incrustaciones marinas no deseadas.

La forma de abordar esta problemática por parte del inventor ofrece una serie de ventajas sobre otros intentos de solución de la problemática que presentan las incrustaciones marinas. Por ejemplo, el método inventado se basa en enzimas hidrolíticas y/o células vivas para prevenir las bioincrustaciones. De este modo, los recubrimientos de esta invención se pueden formular de forma que no contengan una cantidad apreciable de materiales tóxicos (como metales pesados), y sigan manteniendo su eficacia. Esto elimina las preocupaciones medioambientales asociadas con la utilización de biocidas de metales pesados.

En estas incorporaciones de la invención, microorganismos y/o enzimas hidrolíticas se embeben por mezcla simple en recubrimientos estables marinos tales como epoxi, poliuretano y otros materiales de recubrimientos. Los microorganismos y/o enzimas hidrolíticas se pueden utilizar en toda superficie en la que las composiciones marinas y/o pinturas de la invención se pueden enlazar (paletas, propulsores, cascos, torres de refrigeración, etc.). Por lo tanto, se dispone de un amplio rango de aplicaciones para los revestimientos y/o pinturas de la invención.

La utilización de microorganismos, como adición a las enzimas hidrolíticas, genera mayores beneficios. Por ejemplo, cuando la composición y/o pintura inventada se inocula con microorganismos beneficiosos, los microorganismos pueden excretar materiales como enzimas hidrolíticas adicionales que aumentan las enzimas hidrolíticas que se han añadido al recubrimiento y/o pintura. Este reaprovisionamiento puede continuar realizándose durante el intervalo de vida de la composición y/o pintura, o hasta que la población de microorganismos se desintegre en el medio marino. Alternativamente, los microorganismos beneficiosos pueden expulsar a los organismos incrustantes de la superficie marina y por lo tanto reducen las incrustaciones.

Sumario de la invención

Teniendo el cuenta lo anteriormente expuesto, la presente invención se refiere a los métodos, composiciones y pinturas que de manera sustancial eliminan uno o varios de los problemas indicados anteriormente.

Para lograr estas y otras ventajas, y de acuerdo con el propósito de la invención descrita, la presente invención se refiere a composiciones antiincrustación marina que comprenden como material base una resina polimérica y al menos un microorganismo en el material base que produce al menos una enzima amiolítica o proteolítica en el mencionado material base, en el cual se encuentra presente el microorganismo en una cantidad suficiente para reducir o prevenir la incrustación de una capa de superficie marina gracias a la composición antiincrustación marina.

La invención se dirige a una pintura antiincrustación marina que comprende una pintura como material base, válida para aplicaciones marinas, un pigmento y al menos un microorganismo en la pintura material base que produce al menos una enzima amiolítica o proteolítica en dicha pintura como material base, en la cual el microorganismo está presente en una cantidad efectiva para reducir o prevenir la incrustación de una capa de superficie marina con la pintura antiincrustación marina.

La invención también se refiere a métodos para reducir la incrustación de una superficie marina, objetos revestidos con la composición antiincrustante o la pintura antiincrustante, métodos para reducir la corrosión marina, y métodos para limitar la absorción de agua por la superficie marina.

Otro aspecto de la invención revela métodos para eliminar el crecimiento marino de una superficie marina, para reducir la tendencia de un propulsor a cavitar bajo una carga, y para reducir la superficie que ocupa el hongo mildiu en una superficie marina.

Otro aspecto de la invención revela que la composiciones y pinturas antiincrustación marina tienen presente una sal inorgánica en una cantidad catalíticamente efectiva.

Descripción breve de los dibujos

La figura 1 es un gráfico de los resultados obtenidos en una prueba en los paneles 1-4 de los niveles superiores con los revestimientos según la invención.

La figura 2 es un gráfico de los resultados obtenidos en una prueba en los paneles 5-7 de los niveles superiores con los revestimientos según la invención.

La figura 3 es un gráfico de los resultados obtenidos en una prueba en los paneles 8-10 de los niveles superiores con los revestimientos según la invención.

La figura 4 es un gráfico de los resultados obtenidos en una prueba en los paneles 1-4 de los niveles inferiores con los revestimientos según la invención.

La figura 5 es un gráfico de los resultados obtenidos en una prueba en los paneles 5-7 de los niveles inferiores con los revestimientos según la invención.

La figura 6 es un gráfico de los resultados obtenidos en una prueba en los paneles 8-10 de los niveles inferiores con los revestimientos según la invención.

Descripción detallada de la invención

La presente invención se refiere a composiciones antiincrustación marina conteniendo al menos una enzima hidrolítica y/o al menos un microorganismo, caracterizada porque la enzima hidrolítica o el microorganismo o la mezcla reduce la incrustación en una superficie marina revestida con la composición antiincrustación marina. La invención también se refiere a un objeto marino revestido con la composición, y a un método para reducir la incrustación en una superficie marina, incluyendo el paso de revestir la superficie marina con la composición, en el cual la composición reduce la incrustación en una superficie marina revestida con la composición antiincrustación marina.

Otro aspecto de la invención es una pintura antiincrustación marina conteniendo una composición de pintura adecuada para aplicaciones marinas; y al menos una enzima hidrolítica y/o al menos un microorganismo, caracterizada porque la enzima hidrolítica o el microorganismo o la mezcla reduce la incrustación en una superficie marina revestida con la pintura antiincrustación marina. La invención también se refiere a un objeto marino pintado con la pintura, y a un método para reducir la incrustación en una superficie marina, incluyendo el paso de pintar la superficie marina con la pintura, caracterizado porque la pintura reduce la incrustación en una superficie marina pintada con la pintura antiincrustación marina.

Otra adición de la invención es la descripción de un método para reducir la corrosión marina, incluyendo el paso de revestir la superficie marina con una composición antiincrustación marina, de tal forma que la composición forma al menos una película que reduce la adsorción de moléculas corrosivas en la superficie. También se describe un método por el cual la composición impide la corrosión superficial y la corrosión intergranular.

Otra adición de la invención es la descripción de un método para reducir la corrosión marina, incluyendo el paso de pintar la superficie marina con una pintura antiincrustación marina, de tal forma que la pintura forma al menos una película que reduce la adsorción de moléculas corrosivas en la superficie. Otro aspecto de la invención reivindicada consiste en la descripción de un método por el cual la pintura impide la corrosión superficial y la corrosión intergranular.

Otra adición de la invención es un método para limitar la absorción de agua por parte de una superficie marina incluyendo el paso de recubrir la superficie con una composición antiincrustación marina o una pintura antiincrustación marina, por medio de lo cual la composición o la pintura produce una película que reduce la porosidad de la superficie.

En otro aspecto de la invención describe un método para reducir el coeficiente de resistencia de una superficie marina, incluyendo el paso de recubrir la superficie con una composición antiincrustación marina o una pintura antiincrustación marina. La invención también se refiere a métodos de utilización de la composición antiincrustación marina o la pintura antiincrustación marina de forma que los microorganismos en la composición o en la pintura produzcan agentes tensoactivos capaces de actuar como agentes humectantes.

Otro aspecto de la invención es un método para eliminar el crecimiento marino de una superficie marina, incluyendo el paso de recubrir la superficie con una composición antiincrustación marina o una pintura antiincrustación marina. Otro aspecto de la invención es un método para utilizar la composición antiincrustación marina o la pintura antiincrustación marina cuando el crecimiento es duro o blando. Otro aspecto de la invención es un método para utilizar la composición antiincrustación marina o la pintura antiincrustación marina de forma que la enzima hidrolítica o el microorganismo o la mezcla ataque por exudación los crecimientos existentes causando la eliminación de los crecimientos blandos y duros.

En otro aspecto de la invención describe que las composiciones antiincrustación marina o las pinturas antiincrustación marina contienen presente una sal inorgánica en una cantidad catalíticamente efectiva. Otro aspecto de la invención es un método para reducir la tendencia de un propulsor a cavitar bajo una carga, incluyendo el paso de revestir la superficie del propulsor con una composición antiincrustación marina o una pintura antiincrustación marina. Otro aspecto de la invención es un método para reducir el hongo mildiu en una superficie marina utilizando una composición antiincrustación marina, incluyendo el paso de revestir la superficie marina con una composición antiincrustación marina, por medio de la cual la composición forma al menos una película que reduce la adsorción o anclaje del hongo mildiu en la superficie, o impide el crecimiento del hongo mildiu en la superficie
marina.

A continuación se va a hacer referencia en detalle a la incorporación más importante de la invención y se van a dar algunos ejemplos.

Los revestimientos y/o pinturas protectoras inventadas conteniendo microorganismos y/o enzimas hidrolíticas pueden actuar de diversas formas. Un mecanismo posible de actuación de la presente invención es que se puedan aplicar poblaciones de microorganismos inocuos como parte del revestimiento. Estos microorganismos inocuos se pueden seleccionar para evitar la presencia de los organismos no deseados y de este modo reducir la incrustación, pueden actuar potencialmente eliminando nutrientes críticos, tales como los compuestos orgánicos o los microorganismos que son su fuente de alimentación, de la micropelícula de agua en la superficie de la estructura marina. Alternativamente, estos microorganismos pueden actuar exudando antibióticos u otros compuestos para retrasar la expansión de los organismos incrustadores. De esta forma, estos microorganismos inocuos reducirían efectivamente la expansión de los microorganismos incrustadores (como el mildiu), y las colonias del larvario
marino.

Los revestimientos y/o pinturas también pueden funcionar atacando directamente en la película superficial destruyendo la estructura polimérica por medio de hidrólisis de las proteínas y polisacáridos de la película. Esto interrumpiría la cadena de eventos que llevaría a la acumulación de grandes cantidades de organismos marinos (incluyendo bacterias, hongos, balanos, etc.) en el casco del barco. Este ataque se podría llevar a cabo utilizando enzimas extracelulares que destruirían los hidratos de carbono y las proteínas que se encuentran en la película superficial. Los inventores han probado este mecanismo utilizando leche desnatada y almidón de maíz como sustratos para determinar la acción de dos enzimas hidrolíticas claves: proteasa y alfa-amilasa. Alternativamente, los revestimientos y/o pinturas pueden funcionar modificando la tensión superficial de la superficie marina sobre la que se han aplicado los revestimientos y/o pinturas. Este cambio en la tensión superficial puede destruir la colonización de la superficie por parte de organismos marinos no deseados.

Esta invención es útil contra crustáceos y otros crecimientos marinos duros, tales como:

Gusanos tubícolas: polichaetes; filum - Annelida; subclase - Eunicea; familia -Serpulidae

Mejillones: bivalvos; filum - Molusco: subclase - Pteriomorphia; familia -Mytilidae

Ostras: bivalvos; filum - Molusco; subclase - Pteriomorphia; familia -Ostreidae

Almejas: bivalvos; filum - Molusco; subclase - Hterodonta; familia -Veneridae

Briozoos: briozoos; filum - Briozoos; suborden - Anasca y Ascophora; género - Schizoporella

Balanos: crustáceos; filum - Artrópodos; subfilum - Crustáceo

La invención también tiene utilidad contra el crecimiento blando, que puede impedir la eficiencia de las formas del casco, dañar los sustratos de las estructuras marinas, generalmente reducir el intervalo de vida útil del equipamiento, y aumentar el coste de operación. Son ejemplos de este tipo de crecimiento blando:

: Algas (Botanus): Padina y Codium

: Briozoos (Animal): Bugula Neretina

: Hidrozoos (Animal): Obelia

: Sabélidos (Animal)

: Delaya marina (Bacterias marinas): Zibria

Los métodos y composiciones que se describen aquí se pueden utilizar en varias superficies, incluyendo cascos de buques, boyas, entradas de agua, suelos, techos y placas. Por ejemplo, los métodos y composiciones se pueden utilizar para minimizar la incrustación en boyas. Estas boyas constituyen una categoría amplia de objetos flotantes a las que les afecta la acumulación del crecimiento marino.

De manera similar, los métodos y composiciones se pueden utilizar en mamparos marinos. La acumulación de crecimiento marino en estructuras de mamparos es perjudicial para la estructura a largo plazo. Por otra parte, el crecimiento ocasiona numerosos efectos a corto plazo que son estéticamente desagradables y peligrosos. Es más, las fuertes características abrasivas del crecimiento duro pueden ocasionar grandes daños a los buques.

De manera similar, la presente invención se puede utilizar para minimizar obstrucciones debido a la incrustación de crecimiento marino en cambiadores de calor, vaporizadores, condensadores y sistemas de encendido y purgado, ocasionando de esta manera una reducción significativa de los costes de mantenimiento en todas categorías de las estructuras marinas.

Las composiciones y/o pinturas según la invención pueden incluir varias enzimas hidrolíticas, aunque también es posible utilizar la invención sin estas enzimas hidrolíticas. Son ejemplos de enzimas apropiadas proteasas, amilasas y otras enzimas hidrolíticas conocidas. Las enzimas hidrolíticas seleccionadas deben actuar en el medio marino previniendo o reduciendo las incrustaciones no deseadas de organismos marinos. Las enzimas hidrolíticas elegidas deben ser capaces de sobrevivir y crecer en el medio marino al que estarán expuestas.

Las composiciones y/o pinturas según la invención pueden incluir varios microorganismos, aunque también es posible utilizar la invención sin estos microorganismos. Entre los microorganismos apropiados se incluyen: Bacillus, Esterichia, Pseudomonas u otros microorganismos conocidos. Los microorganismos seleccionados deben actuar en el medio marino previniendo o reduciendo las incrustaciones no deseadas de organismos marinos. Los microorganismos elegidos deben ser capaces de sobrevivir y crecer en el medio marino al que estarán expuestos.

Las composiciones y/o pinturas según la invención incluyen las enzimas y los microorganismos mencionados anteriormente en una cantidad efectiva para reducir la expansión de microorganismos no deseados. Estas composiciones y/o pinturas se pueden presentar de varias formas, incluyendo pinturas, lacas, pastas, laminados, epoxis, resinas, ceras, geles y colas en adición a otras formas ya conocidas. Las composiciones y/o pinturas pueden ser poliméricas, oligoméricas, monoméricas y pueden contener enlaces cruzados o generadores de curado si se necesitan. Estas composiciones y/o pinturas pueden contener otros aditivos además de los anteriormente expuestos para llevar a cabo los objetivos conocidos de la invención. Estos aditivos incluyen conservantes, pigmentos, tintes, rellenos, agentes tensoactivos y otros aditivos conocidos para tales propósitos.

Las composiciones y/o pinturas según la invención pueden incluir una base de resina polimérica, aunque es posible utilizar la invención sin esa base, o utilizando una base de un material diferente. Las composiciones y/o pinturas se pueden aplicar en una sola capa o en varias capas.

Adicionalmente, los inventores han observado que la adición de algunas sales inorgánicas (NaCl, CaCl_{2}, MgSO_{4}) incrementan la hidrólisis catalítica en los estados líquido y sólido (resina embebida) de la alfa-amilasa (obtenida de Genencor). Mientras el cloruro cálcico está implicado como cofactor en las reacciones de catalización de la alfa-amilasa, las cantidades necesarias para la activación (aproximadamente 60 ppm) son mucho menores que la cantidad utilizada en la fórmula de la resina epoxi proporcionada en los siguientes ejemplos. De esta forma es posible añadir estas sales inorgánicas en una cantidad catalíticamente efectiva. La cantidad catalíticamente efectiva es mayor que la cantidad de sal inorgánica necesaria para la activación. El efecto catalítico se ha explorado más en detalle en los ejemplos 7 y 8 que se describen más adelante.

Con los siguientes ejemplos se van a demostrar varios aspectos de la invención.

Ejemplo 1

Para demostrar que las enzimas encapsuladas en un revestimiento o pintura marina retienen sus características enzimáticas, se han llevado a cabo una serie de experimentos. Los sustratos utilizados para determinar la actividad de dos enzimas claves, proteasas y alfa-amilasas, fueron respectivamente leche desnatada y almidón de maíz. Como se ha explicado anteriormente, estos sustratos representan a los sustratos de prueba para las porciones de proteína y polisacárido de la glicoproteína objeto descrita como elemento inicial en el proceso de bioincrustación.

Como reactores enzimáticos se han utilizado recipientes de plástico o vidrio (100 ml de capacidad). Las enzimas se obtuvieron de Genecor International, Inc. (Rochester, NY). Se probaron las siguientes enzimas:

\bullet: Desize 160 (alfa-amilasa -líquida)

\bullet: Maxamyl CXT 5000 (alfa-amilasa -encapsulada)

\bullet: Purafect 2000G - (proteasa - encapsulada)

\bullet: Maxamyl 15.000 CTX - (alfa-amilasa líquida)

Las enzimas se añadieron directamente a los revestimientos indicados en todos los ensayos. Cuando se investigó la actividad de las enzimas líquidas, las enzimas se añadieron primero al cloruro de calcio. El cloruro de calcio se incluyó como absorvente para facilitar la mezcla con los revestimientos debido a que el agua interfería en el proceso de endurecimiento. Luego se encontró que la adición de cloruro de calcio (CaCl_{2}) y otras sales producía como resultado un incremento de la actividad amilolítica.

La actividad proteolítica se determinó por medio del siguiente ensayo. El vinagre (ácido acético diluído) precipitaría las proteínas de la leche en solución. La hidrólisis enzimática de las proteínas de la leche se monitorizó exponiendo una solución de proteínas de leche a una proteasa y añadiendo ácido acético mientras se retiraban muestras a lo largo del tiempo. Por lo tanto, la reducción de la cantidad de precipitado era una medida de la actividad de la enzima y se expresó como porcentaje de hidrólisis.

A menos que se indique lo contrario, los ensayos de actividad enzimática se llevaron a cabo con la adición de 25 ml de una dilución acuosa 1:4 de leche desnatada (diluida hasta contener un 0,94% de proteínas). La actividad se cuantificó por comparación con un control sin la presencia de enzimas o células. Se añadió suficiente ácido para precipitar todas las proteínas existentes. La cantidad de precipitado compactado por fijación se utilizó como medida volumétrica de la cantidad de proteína presente en la solución de leche antes de la hidrólisis. La actividad enzimática se determinó comparando la cantidad de proteína precipitable ácida presente antes y después de la exposición a las enzimas o células indicadas. La ausencia de proteína precipitable ácida se tomó como indicador del 100% de hidrólisis por parte de la enzima añadida.

La actividad de la enzima amilolítica se determinó con la adición de una suspensión de almidón de maíz, mezclado de tal forma que se consiguió una viscosidad cercana a la de solidificación (12 gramos/10 ml de agua). El agua y el almidón se añadieron a la alfa-amilasa suspendida en agua o embebida en una resina epoxi solidificada. Cuando una reacción resultaba en la eliminación completa de la suspensión de almidón solidificado se designaba como una hidrólisis completa (100%). En las reacciones donde había una reducción de la viscosidad debido a la adición de una alfa-amilasa, la actividad se calculaba por el grado de resistencia a la agitación a mano con una cucharilla. Aunque estas medidas de actividad eran subjetivas, eran reproducibles con relación a un control estándar, como una muestra que contenía agua y almidón sin tener presente la enzima.

400 mg de proteasa encapsulada (Purafect 2000G, obtenida de Genencor International Inc., Rochester, NY) se mezcaron con una cinta de 5,08 cm de epoxi y endurecedor (2,4,6 tri(dimetilaminometil) fenol, obtenido de ITW Brand, Woodale, IL). La mezclas resina/enzima se utilizaron para revestir la parte interior del fondo de botellas de plástico con una capacidad de 10 ml y un diámetro de 2 pulgadas (50 mm). A las mezclas se les dejó endurecer durante 16 horas. A los reactores se les añadió leche desnatada diluida, como se muestra en la tabla 1, y se incubó a temperatura ambiente durante 5 horas. Se tomaron muestras y se examinaron para detectar la actividad proteolítica por adición de ácido acético diluido para precipitar la proteína sin hidrolizar.

TABLA 1

\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\+#\hfil\+#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
  Mezcla de prueba  \+  \hskip3cm  \+  % de hidrólisis \cr
 Epoxi sola \+ \+ 0\cr  Epoxi + Purafect 2000G \+ \+
100\cr}

De este modo, la proteasa encapsulada (Purafect 2000G) mantiene su actividad enzimática después de quedar embebida en la cola de resina epoxi.

Ejemplo 2

La actividad enzimática de la proteasa embebida (Purafect 2000G) se determinó de nuevo según el procedimiento del ejemplo 1, con la diferencia que el agua marina se sustituyó por agua dulce como diluyente de la leche desnatada. Se obtuvieron resultados idénticos al ejemplo 1. De este modo se comprobó que la sustitución de agua marina por agua dulce no tenía efecto en la actividad de la enzima proteolítica mezclada con la resina epoxi.

Ejemplo 3

Una bola de plástico de 1/2 pulgada (12'5 mm) de diámetro se cubrió con la mezcla epoxi/enzima según el ejemplo 1. A cada recipiente de reacción se le añadió leche desnatada diluida con una concentración de proteínas del 12%. Tras 4 horas de incubación a temperatura ambiente, se tomaron muestras y se les añadió ácido acético diluido para precipitar las proteínas de la leche sin hidrolizar. Se obtuvieron los siguientes resultados:

TABLA 2

\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\+#\hfil\+#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
  Material de prueba  \+  \hskip3cm  \+  % de
hidrólisis \cr  Control (sin enzima) \+ \+ 0\cr  Epoxi y Purafect
2000G \+ \+ 100\cr  Bola cubierta de Purafect 2000G \+ \+
80\cr}

De esta forma, los reactores que contenían en la superficie interior del fondo un revestimiento de epoxi/enzima o una bola cubierta de enzima, evidenciaron una hidrólisis de las proteínas completa o casi completa.

Ejemplo 4

En un reactor enzimático preparado según el ejemplo 1, se revistió la superficie interior del fondo de un recipiente de plástico con epoxi/enzima (proteasa), se comprobó su actividad hidrolítica a las 24 horas y a los 28 días después de su preparación con el fin de examinar su estabilidad con el paso del tiempo. Se obtuvieron los siguientes
resultados:

\newpage

TABLA 3

\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\+#\hfil\+#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
  Material de prueba  \+  \hskip3cm  \+  % de
hidrólisis \cr  Control (sin enzima) \+ \+ 0\cr  Epoxi y Purafect
2000G (24 horas) \+ \+ 100\cr  Epoxi y Purafect 2000G (28 días) \+
\+
80\cr}

El epoxi y la enzima se encontraban activos después de 28 días a temperatura ambiente con sólo una pequeña pérdida de actividad.

Ejemplo 5

Como alternativas al Devcon epoxi utilizado anteriormente, se examinaron otras resinas.

1) PC - 11: cola de resina epoxi muy resistente obtenida de Protective Painting Company

2) Polypoxy: composición de resina epoxi (compuesto de reparación bajo el agua obtenido de Pettit Saint Company, Rockaway, NJ)

3) Gel - Coat: Composición de resina poliéster

\quad: (Recubrimiento de gel blanco obtenido de Clear Coat Corp., FL)

4) Bondo: Material de resina poliéster y fibra de vidrio

\quad: (Obtenido de Dynatron/Bondo Corporation)

Todas las mezclas resina/enzima se prepararon como se describe en el ejemplo 1 y se utilizaron 100 mg de Purafect 2000G como fuente de enzima proteolítica. Después de 2 horas se tomó una muestra de cada reactor de mezcla. El porcentaje de hidrólisis se determinó como se describe en el ejemplo 1. Los resultados se muestran en la siguiente tabla:

TABLA 4

\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\+#\hfil\+#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
  Material de prueba  \+  \hskip3cm  \+  % de
hidrólisis \cr  Control (sin epoxi ni enzima) \+ \+ 0\cr  PC11 \+
\+ 70\cr  Polypoxy \+ \+ 90\cr  Gel-Coat \+ \+ 50\cr
 Fiberglass \+ \+
95\cr}

Ejemplo 6

Se han estudiado enzimas líquidas como constituyentes de formulaciones enzima-resina. En experimentos previos, sólo se consideró la proteolisis como un medio de hidrolizar la glicoproteína por creer que ésta era el agente primario en el proceso de bioincrustación. En este experimento se examinan enzimas proteolíticas y amiolíticas. Para reducir la cantidad de agua libre añadida con las enzimas, se añadió Purafect 4000L (0,5 ml) o Desize 160 (0,5ml) a 4.0 gramos de CaCl_{2} antes de mezclarlo con Devcon's 5 Minute Epoxy. El agua libre interfiere con la solidificación de la resina epoxi bajo investigación.

A los recipientes de reacción 2 y 4 se les añadió una suspensión de almidón. A los recipientes de reacción 1 y 3 se les añadió leche diluída. Después de dos horas de incubación a temperatura ambiente se obtuvo el grado de hidrólisis de cada mezcla según los métodos descritos en el ejemplo 1. Se obtuvieron los resultados de la siguiente tabla:

TABLA 5

1

La mezcla de reacción en el recipiente 3 se aclaró y no reaccionó ante la adición de ácido acético diluido indicando una hidrólisis completa de las proteínas de la leche por parte del CaCl_{2} absorbido en la formulación enzima/resina. La mezcla de reacción que contenía CaCl_{2} y agua era altamente viscosa y difícil de verter. La mezcla que contenía la resina de enzima era acuosa y se podía verter fácilmente. En cada caso las enzimas líquidas fueron fáciles de utilizar en la formulación de la resina epoxi. Las formulaciones epoxi/enzima líquida hidrolizaron tanto el almidón como las proteínas. La hidrólisis del almidón (polisacárido) o de las proteínas no interfirieron con la adición de cloruro cálcico a la formulación de resina y enzima.

Ejemplo 7

Como se ha descrito anteriormente, el efecto de la adición de la sal inorgánica a la formulación de la resina epoxi-enzima se estudió para examinar que efecto tenía la sal sobre la actividad de la alfa-amilasa. Esta investigación primero apuntó al efecto que tenía el agente secante cloruro de calcio sobre la reactividad de la enzima. El ión calcio ha estado implicado en las actividades de la alfa-amilasa y se conoce su función como cofactor a concentraciones de aproximadamente 60 ppm. En consecuencia con esto se examinó el efecto de la adición de cloruro cálcico sobre la actividad de la alfa-amilasa líquida.

Se prepararon recipientes de prueba según el método del ejemplo 1. Se añadieron 12 gramos de almidón a cada recipiente junto con agua y cloruro de calcio como se indica a continuación. La mezcla acuosa se agitó para homogeneizarla. El porcentaje de hidrólisis de las mezclas se determinó como se indicó en el ejemplo 1. Los resultados aparecen en la siguiente tabla.

TABLA 6

2

\text{*}: Un exceso de cloruro de calcio produce un polímero elástico, blando y moldeable. Esto se utilizó para indicar la interacción entre el almidón y el ión divalente.

La actividad catalítica de la alfa-amilasa líquida parece fuertemente incrementada por la adición de cloruro cálcico en cantidades mayores de las necesarias para la activación simple de la enzima. Este parece ser otro mecanismo indicado para incrementar la actividad catalítica de la alfa-amilasa.

Ejemplo 8

Se examinaron otras sales inorgánicas para ver si también incrementaban la actividad catalítica de la alfa-amilasa. Las dos que se eligieron fueron cloruro sódico, una sal monovalente neutra, y cloruro magnésico, una sal ácida divalente capaz de formar un hidrato.

Los siguientes resultados se obtuvieron utilizando el procedimiento definido en el ejemplo 7.

TABLA 7

3

Ejemplo 9

Como alternativa a la utilización de enzimas líquidas encapsuladas, se pueden utilizar células completas como fuente de actividad enzimática. Por ejemplo, Sybron Corporation produce suspensiones líquidas de esporas o células vegetativas para una variedad de aplicaciones que tienen la capacidad de producir alfa-amilasa y/o proteasa.

En consecuencia, se examinó la utilización de esporas de Sybron y suspensiones celulares embebidas en capas de gel. En la mezcla de resina epoxi se incluyó cloruro cálcico ya que los recipientes de reacción se utilizaron para examinar la actividad de las enzimas alfa-amilasa y proteasa en el mismo reactor. Las actividades enzimáticas de las enzimas alfa-amilasa y proteasa se compararon con las actividades de las suspensiones de células y
esporas.

La suspensión de esporas que se utilizó fue Bio B+, obtenida de Sybron Chemicals Inc, 111 Kesler Mill Road, Salem, Virginia 25143, que contenía el tipo de espora Bacillus polymyxa.

La suspensión celular utilizada fue Bio P, obtenida de Sybron Chemicals Inc, 111 Kesler Mill Road, Salem, Virginia 25143, que incluía la forma vegetativa de los siguientes microorganismos: Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas putida, Pseudonomas fluoresens, y Escherichia hermanii.

Los recipientes de muestra se prepararon según los métodos del ejemplo 1 y, también utilizando el procedimiento del ejemplo 1, se determinó el porcentaje de hidrólisis de las soluciones de leche y almidón.

TABLA 8

5

En este ensayo no se detecto la actividad de la alfa-amilasa ni utilizando las esporas ni las células vegetativas. No obstante, se podría haber esperado esta actividad en las suspensiones de células o esporas.

La actividad de la proteasa (Purafect 2000G) sobre el almidón sugiere la contaminación de esta enzima con alfa-amilasa.

Ejemplo 10

Las enzimas alfa-amilasa líquida y encapsulada embebidas en un material de resina de poliéster y fibra de vidrio (Bondo, descrito en el ejemplo 5) se examinaron con el fin de conocer su habilidad para catalizar la hidrólisis del almidon. Se añadió sulfato de magnesio a las formulaciones de la enzima encapsulada y líquida. Cada enzima se añadió en una concentración que aproximadamente normalizó su actividad.

Los recipientes de reacción se prepararon según el procedimiento del ejemplo 5 y se exponen el la tabla 9.

TABLA 9

7

: * Se añadió 0,1 ml de agua antes de embeberlo en la resina

A los recipientes se les dejó endurecer durante la noche. A cada recipiente se le añadió 10 ml de agua y 11,5 gramos de almidón y estas mezclas se agitaron para homogeneizarlas. El porcentaje de hidrólisis después de 60 minutos se determinó según el procedimiento del ejemplo 1. Los resultados se exponen en la tabla 10.

TABLA 10

Muestra	% hidrólisis
1	10
2	10
3	10
4	0
5	10
6	50
7	80
8	70

Ejemplo 11

Para explorar el concepto de utilización de microorganismos para proteger superficies bajo el agua de la incrustación de organismos marinos, se revistieron láminas de fibra de vidrio con una mezcla de microorganismos embebidos en distintos materiales de revestimiento tal como aparece en la tabla 11. El procedimiento de preparación fue el siguiente:

Se pulieron a mano con 60 lijas de arenilla fina 21 paneles de fibra de vidrio y se secaron con xileno y toallitas de papel para eliminar el residuo. Los paneles largos tenían las siguientes dimensiones: 17 7/8 x 5 7/8 x 1/8 pulgadas de ancho (454 mm x 149 mm x 3,2 mm), mientras que los paneles cortos eran de 13 7/8 x 5 7/8 x 1/8 pulgadas de ancho (352 mm x 148 mm x 3,2 mm).

A las bases de la resina se le añadieron microorganismos según se indica en la tabla 11 y más adelante se agitaron a mano para que se mezclaran. Las unidades de las cantidades que aparecen en la tabla 11 son gramos y entre paréntesis aparece su equivalente en onzas multiplicado por 100. El panel de control "C" no se revistió con la composición de prueba.

Dura Shine es un polímero líquido, como se describe en la patente número 5.073.407 de Estados Unidos, y se puede obtener de Howe Labs, Eden, New Cork. Turtle Wax Finish 2001 Liquid (Finish 2001) es una resina de silicona con uretano que se puede obtener de Turtle Wax, Chicago, Illinois. Glidden Latex es una pintura de látex acrílico no tóxico que se puede obtener de Glidden Paints, Jacksonville, Florida.

Bio B+, se obtuvo de Sybron Chemicals Inc, 111 Kesler Mill Road, Salem, Virginia 25143; esta mezcla incluía las formas espora de Bacillus polymyxa, Bacillus subtilis, y Bacillus lichenformis.

Bio P se obtuvo también de Sybron Chemicals Inc, 111 Kesler Mill Road, Salem, Virginia 25143; incluía la forma vegetativa de los siguientes microorganismos: Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas putida, Pseudomonas fluoresens y Esterichia hemanil.

Las mezclas de recubrimiento se aplicaron a mano con brocha sintética de 50,8 mm (2 pulgadas) fabricada por Poly Paints. Los paneles se sometieron a aire seco durante 24 horas y a continuación se aplicó una segunda capa. Los paneles se sometieron a aire seco durante 48 horas, se envolvieron en toallas de papel y se llevaron al lugar de pruebas marinas.

TABLA 11 Protocolo para el experimento marino

9

Una vez llegaron los paneles se les amarró a estantes de PVC y se les expuso a un entorno marino desde una plataforma flotante para permitir su continua inmersión en agua de mar según el flujo de la marea. Las láminas se sumergieron en agua marina durante cuatro meses en dos niveles diferentes (nivel superior = en la línea de flotación, nivel inferior = completamente sumergido). Las cantidades de algas que quedaron acumuladas al final de cada mes se midieron y se registraron en la tabla 12.

TABLA 12 Algas

10

La tabla 12 muestra el porcentaje de área de panel donde se incrustaron las algas por mes (ene. - abr.) y por panel (1 - 10 y control) para los estantes del nivel superior y del nivel inferior. Estos resultados también aparecen en las figuras 1 a 6.

Estos resultados demuestran que es posible conseguir y mantener características antiincrustación en un revestimiento seleccionando los microorganismos adecuados. Por ejemplo, el revestimiento Dura Shine tiene un área de incrustación de algas por término medio del 2,67% en el nivel superior, mientras que en el control es del 30%. El Finish 2001 tiene un área de incrustación de algas por término medio del 1,33% en el nivel superior, mientras que en el control es del 30%.

Las tablas 13 y 14 muestran el porcentaje del área que quedó incrustada, tras un periodo de inmersión de cuatro meses. por briozoos, unos representantes de la comunidad de organismos que producen incrustaciones duras. El crecimiento de los briozoos se inhibió del 33 al 100% con la aplicación de un revestimiento microbiano en capas. Además de esto, se observó la generación en las láminas de una biopelícula verde oscura. Esta biopelícula se cree que es una película microbiana subyacente que protege contra el crecimiento blando y duro. Esto lo apoya la observación de que las formulaciones de recubrimiento más efectivo, Dura Shine y Finish 2001, tienen el mayor porcentaje de su área cubierta por la biopelícula lo que es una manifestación del crecimiento de la suspensión de la comunidad microbiana protectora añadida con el revestimiento.

TABLA 13 Nivel superior - cuatro meses

11

TABLA 14 Nivel inferior - cuatro meses

12

Las tablas 15 y 16 muestran el porcentaje del área de panel total (crecimiento blando y duro) que permaneció sin incrustación cuando se inspeccionaron las láminas. Los datos aparecen por meses (ene - abr) y por panel (1 - 10 y control) para los estantes en niveles superiores y los estantes en niveles inferiores.

TABLA 15 Nivel superior - número de lámina

14

TABLA 16 Nivel superior - número de lámina

15

De nuevo, estos resultados demuestran que es posible logar una mejora significativa contra la incrustación utilizando composiciones y/o pinturas según la invención frente al control sin tratar.

Ejemplo 12

La efectividad de la invención contra el crecimiento duro se probó en una mezcla de resina de poliuretano. Las mezclas de prueba contenían varias combinaciones de esporas, enzimas y células vegetativas. Se utilizó el siguiente procedimiento.

Los paneles se prepararon según el procedimiento del ejemplo 11. Los paneles se dividieron longitudinalmente con cinta aislante con el fin de utilizar dos superficies de prueba por panel. Las mezclas de revestimiento se prepararon utilizando 113,5 grs (4 onzas) de resina de poliuretano (obtenida como Polyurethane Clear Gloss No. 603 de Behr Process Corp., Santa Ana, CA) y añadiendo 7,1 grs (0,25 onzas) de esporas, células vegetativas y/o enzimas como se indica en la tabla 17 más adelante. Las mezclas se realizaron manualmente y se aplicaron manualmente a los paneles como se indica en la Tabla 17. Las esporas, células vegetativas y/o enzimas que se utilizaron fueron las mismas que en el ejemplo 11.

TABLA 17

16

La cantidad de esporas, células vegetativas y/o enzimas viene indicada en gramos (onzas).

Una vez que se aplicaron los recubrimientos, los paneles se colgaron en un estante tubular de PVC y se sometieron a aire seco durante un mínimo de 24 horas para que se secaran. Luego se llevó a los paneles al lugar de prueba. En este lugar se acoplaron los paneles a estructuras tubulares de PVC. Como técnica de acoplado se utilizaron lazos de plástico para colocar los paneles sobre una de sus superficies en las esquinas de la estructura de PVC. Una vez que los paneles quedaron acoplados a las estructuras de PVC, las estructuras se sumergieron en el agua de tal forma que las filas horizontales de los paneles quedaron a aproximadamente 152,4 mm (6 pulgadas) por debajo de la superficie del agua.

Las estructuras de PVC se ataron y se colgaron de una plataforma flotante. De esta forma los paneles mantuvieron en el agua la misma posición relativa durante todo el experimento.

Los paneles estuvieron sumergidos durante tres meses. Durante el primer mes, una vez por semana, se sometió a los paneles a una corriente de agua lenta que aproximadamente simulaba la velocidad de un buque a tres nudos. A los paneles nunca se les dejó secar. Después de estas exposiciones a la corriente, la estructura tubular de PVC se volvía a colocar en su posición original bajo el agua.

La prueba terminó a los 4 meses. Al final del primer mes se documento el número de balanos, mejillones, ostras, bugula y algas. El área que se tuvo en cuenta quedó restringida a 76.2 mm cuadrados (3 pulgadas cuadradas) desde lo alto del panel de prueba. Los resultados aparecen en la tabla 17. Los datos demuestran que el número medio de balanos en el área de prueba fue de 38,5 y la media en la zona de control fue de 49. Esto representa una reducción del 21 por ciento y demuestra la utilidad de la invención para reducir el crecimiento duro. Las algas y la bugula cubrían aproximadamente el cuarenta por ciento del área de prueba. Durante los siguientes tres meses, el crecimiento en el área de prueba no experimento mayores variaciones, mientras que en el área de control continuó aumentando incluso hasta llegar a un grosor de 9,53 mm (tres octavos de pulgada) en un uno por ciento de la superficie; fue crecimiento en capas. Por otra parte, el crecimiento blando en el área de prueba continuó decreciendo con el transcurso del tiempo y al final de la prueba sólo un diez por ciento del área estaba cubierto de algún tipo de crecimiento blando. De nuevo, esto demuestra la utilidad de la invención para inhibir los crecimientos blandos y duros.

Ejemplo 13

Otra demostración de la invención se exploró según el siguiente ejemplo. En este ejemplo se examinaron dos polímeros líquidos actuando como sustitutos de las resinas epoxi como agentes embebedores de catalizadores celulares y enzimáticos.

Los revestimientos de prueba se agitaron a mano para mezclarlos. Los ingredientes de cada mezcla de revestimiento se dan más adelante en la tabla 18 (las medidas aparecen en gramos). Los materiales que se utilizaron fueron Finish 2001, Dura Shine, Bio B+ y Bio P como se describe en el ejemplo 11. La proteasa utilizada fue Purafect 4000L como se describe en el ejemplo 6.

Las mezclas de revestimiento se aplicaron sobre superficies de madera a secciones de 25,4 mm x 38,1 mm (1 x 1½ pulgadas) y se dejaron secar al aire seco durante sesenta minutos. Después las superficies de madera se lavaron con un chorro de agua para eliminar el revestimiento sin adherir. Las superficies revestidas se sumergieron durante 2 horas en 25 ml de una dilución de 1:4 de leche desnatada. El porcentaje de hidrólisis se determinó según el método del ejemplo 1. Los resultados obtenidos aparecen en la tabla 18.

TABLA 18

17

Claims

1. Una composición antiincrustación marina que comprende:

una resina polimérica como material base; y

al menos un microorganismo en el material base que produce al menos una enzima amilolítica o proteolítica en el mencionado material base, en la que el microorganismo está presente en una cantidad efectiva para reducir o prevenir la incrustación en una superficie marina revestida con la composición antiincrustación marina.

2. Una composición antiincrustación marina, como se reivindica en la reivindicación 1, en la que el material base se selecciona del grupo constituido por un material epoxi, un material de poliuretano, un material de poliéster, un material de fibra de vidrio, un material de silicona y un material de acrílico; y en la cual se mezcla al menos una enzima amilolítica o proteolítica con el material base, en la que la enzima está presente en una cantidad efectiva para reducir o prevenir la incrustación de una superficie marina revestida con la composición antiincrustación marina.

3. Un artículo marino revestido con la composición de la reivindicación 2.

4. Un procedimiento para reducir la incrustación en una superficie marina, que comprende el revestimiento de la superficie marina con una composición como la reivindicada en la reivindicación 2, en el que la composición reduce la incrustación en la superficie marina revestida con la composición antiincrustación marina.

5. Una pintura antiincrustación marina que comprende:

una pintura como material base, apropiada para aplicaciones marinas;

un pigmento; y

al menos un microorganismo en la pintura como material base que produce al menos una enzima amilolítica o proteolítica en la mencionada pintura como material base, en la que el microorganismo está presente en una cantidad efectiva para reducir o prevenir la incrustación en una superficie marina pintada con la pintura antiincrustación marina.

6. Una pintura antiincrustación marina, como se reivindica en la reivindicación 5, en la que la pintura como material base se selecciona del grupo constituido por un material de epoxi, un material de poliuretano, un material de poliéster, un material de fibra de vidrio, un material de silicona y un material de acrílico; y en la que se mezcla al menos una enzima amilolítica o proteolítica con la pintura como material base, en la que la enzima está presente en una cantidad efectiva para reducir o prevenir la incrustación en una superficie marina pintada con la pintura antiincrustación marina.

7. Un artículo marino revestido con la pintura de la reivindicación 6.

8. Un procedimiento para reducir la incrustación en una superficie marina según la reivindicación 4, en el que la composición se encuentra en forma de pintura conteniendo un pigmento.

9. Un procedimiento para reducir la corrosión marina que comprende:

revestir la superficie marina con una composición como se reivindica en la reivindicación 2, por lo que la composición forma al menos una película que reduce la adsorción de moléculas corrosivas en la superficie.

10. El procedimiento de la reivindicación 9, en el que la composición impide la corrosión superficial y la corrosión intergranular.

11. Un procedimiento para reducir la corrosión marina según la reivindicación 9, en el que la composición se encuentra en forma de pintura conteniendo un pigmento.

12. El procedimiento de la reivindicación 11, en el que la pintura impide la corrosión superficial y la corrosión intergranular.

13. Un procedimiento para limitar la adsorción de agua por una superficie marina, que comprende el revestimiento de la superficie con una composición como se reivindica en la reivindicación 2, por lo que la composición produce una película que reduce la porosidad de la superficie.

14. Un procedimiento para limitar la adsorción de agua por una superficie marina según la reivindicación 13, en el que la composición está en forma de pintura conteniendo un pigmento.

15. Un procedimiento para reducir el coeficiente de resistencia al avance de una superficie marina, que comprende el revestimiento de la superficie con una composición como la reivindicada en la reivindicación 2.

16. El procedimiento de la reivindicación 4, en el que el microorganismo también produce un agente tensoactivo que actúa como agente humectante.

17. Un procedimiento para reducir el coeficiente de resistencia al avance de una superficie marina según la reivindicación 15, en el que la composición se encuentra en la forma de pintura conteniendo un pigmento.

18. El procedimiento de la reivindicación 8, en el que el microorganismo también produce un agente tensoactivo que actúa como agente humectante.

19. La composición antiincrustación marina de la reivindicación 2, en la que la composición incluye una sal inorgánica presente en una cantidad catalíticamente efectiva.

20. La pintura antiincrustación marina de la reivindicación 6, en la que la composición incluye una sal inorgánica presente en una cantidad catalíticamente efectiva.

21. Un procedimiento para reducir la tendencia de una hélice a cavitar bajo una carga, que comprende el revestimiento de la superficie de la hélice con la composición antiincrustación marina de la reivindicación 2.

22. Un procedimiento para reducir la tendencia de una hélice a cavitar bajo una carga según la reivindicación 21, en el que la composición se encuentra en forma de pintura conteniendo un pigmento.

23. Un procedimiento para reducir el hongo mildiu de una superficie marina, que comprende el revestimiento de la superficie marina con una composición según se reivindica en la reivindicación 2, en el que la composición forma al menos una película que reduce la adsorción del hongo mildiu en la superficie.

24. Una composición antiincrustación marina según la reivindicación 1 en la que el microorganismo también produce un agente tensoactivo que actúa como agente humectante.

25. Una pintura antiincrustación según la reivindicación 5, en la que la pintura como material base se selecciona del grupo constituido por un material de epoxi, un material de poliuretano, un material de poliéster, un material de fibra de vidrio, un material de silicona y un material de acrílico.

26. Una pintura antiincrustación marina según la reivindicación 5, en la que el microorganismo también produce un agente tensoactivo que actúa como agente humectante.

27. Una composición antiincrustación marina según la reivindicación 1, incluyendo al menos una enzima amilolítica o proteolítica en el material base.

28. Una pintura antiincrustación marina según la reivindicación 5, incluyendo al menos una enzima amilolítica o proteolítica en el material base.

29. Un procedimiento para eliminar el crecimiento no deseado en una superficie, incluyendo el paso de revestir la superficie con una composición que comprende:

un material base, y

al menos un microorganismo capaz de producir al menos una enzima amilolítica o proteolítica;

en el que el microorganismo y la enzima están presentes en una cantidad efectiva para eliminar el crecimiento no deseado de la superficie.

30. El procedimiento de la reivindicación 29 en el que la composición además incluye un pigmento.

31. El procedimiento de las reivindicaciones 29 ó 30, en el que el material base es un polímero.

32. El procedimiento de las reivindicaciones 29 ó 30, en el que el material base se selecciona del grupo constituido por un material de epoxi, un material de poliuretano, un material de poliéster, un material de fibra de vidrio, un material de silicona y un material de acrílico.

33. El procedimiento de las reivindicaciones 29 ó 30, en el que la composición además contiene una sal inorgánica presente en una cantidad catalíticamente efectiva.

34. El procedimiento de las reivindicaciones 29 ó 30, en el que la composición además contiene al menos una enzima amilolítica y proteolítica.

35. El procedimiento de las reivindicaciones 29 ó 30, en el que el microorganismo además produce un agente tensoactivo que actúa como agente humectante.

36. El procedimiento de las reivindicaciones 29 ó 30, en el que el crecimiento es crecimiento blando.

37. El procedimiento de las reivindicaciones 29 ó 30, en el que el crecimiento es crecimiento duro.

38. El procedimiento de las reivindicaciones 29 ó 30, en el que la enzima ataca los exudados de los crecimientos existentes y ocasiona la liberación de los crecimientos blandos y duros.

39. El procedimiento de las reivindicaciones 29 ó 30, en el que la superficie es suelo, techo o forros.