ES2238285T3 - Uso de bacterias acidolacticas en la preparacion de leches fermentadas para el tratamiento de niveles inmunitarios reducidos. - Google Patents

Abstract

Uso de Lactobacillus casei en la preparación de una leche fermentada para la prevención y el tratamiento de niveles inmunitarios reducidos de forma temporal asociados con un descenso en células NK en sangre en individuos sometidos a estrés fisiológico.

Description

Uso de bacterias acidolácticas en la preparación de leches fermentadas para el tratamiento de niveles inmunitarios reducidos.

Esta invención se refiere al uso de bacterias acidolácticas para la preparación de leches fermentadas pretendidas para la prevención y el tratamiento de niveles de actividad inmunitaria reducidos de forma temporal y niveles de actividad inmunitaria normalizantes que están reducidos en comparación con los que se pueden considerar normales, especialmente en individuos sanos que están sometidos a ejercicio intenso o en general a una gran fatiga fisiológica, causada directamente por el esfuerzo físico o inducida por situaciones de tensión fisiológica. En concreto, se refiere al uso de Lactobacillus casei en la preparación de leche fermentada para aliviar la reducción fisiológica de los niveles inmunitarios en humanos.

Más específicamente, esta invención se refiere a medios para mejorar los estados inmunitarios de individuos sanos cuando están sometidos a diferentes tipos de estrés fisiológicos.

La presente invención se ha desarrollado como resultado de las investigaciones llevadas a cabo por los inventores para descubrir algunos medios preventivos y/o terapéuticos para asegurar una rápida recuperación de una actividad inmunitaria temporalmente reducida, inducida por estrés físico o psicológico.

Esta invención logrado la siguiente investigación en los efectos de leches fermentadas con bacterias acidolácticas, tales como Lactobacillus casei en individuos que realizan ejercicio intenso y, especialmente, atletas y, en general, individuos sometidos a estados de estrés fisiológico. Como es bien conocido, existe un interés creciente en la comunidad científica especializada sobre los efectos favorables producidos por el ejercicio. No obstante, se ha observado que en condiciones de ejercicio muy intenso tales como en atletas, tanto durante periodos de entrenamiento como durante periodos de ejercicio competitivo, ocurre un efecto inverso al normalmente esperado en el sistema inmunitario en forma de una reducción en la actividad de dicho sistema inmunitario, y se han producido informes que describen enfermedades infecciosas leves en atletas como resultado de la caída en un nivel de inmunidad tras ejercicio exhaustivo, medido por un descenso en el número y actividad de las células conocidas como células NK ("asesinas naturales") tras ejercicio intenso y prolongado.

Como es bien conocido, en las condiciones de ejercicio intenso y prolongado tales como, por ejemplo, en atletas y otros individuos que desempeñan un esfuerzo muy grande, y, en general, individuos sometidos a estados de estrés fisiológico, ha habido una corriente para ayudar a la recuperación de individuos mediante bebidas isotónicas y/o bebidas vitaminadas de diversas clases.

No obstante, los inventores han observado que no ha habido serios intentos en la comunidad científica por conseguir una rápida restauración de los niveles inmunitarios en individuos que desempeñan tal ejercicio intensivo y prolongado, con el resultado de que en tales personas se inicia una situación en la que, aunque la restauración natural pueda permitir al individuo recuperar la capacidad de desempeñar mayores esfuerzos tras un periodo de agotamiento, los niveles de actividad inmunitaria permanecen bajos durante un extenso periodo hasta que la recuperación natural los restablece lentamente. Es precisamente la existencia de estos periodos de baja respuesta inmunitaria en aquellos individuos que están generalmente en un estado satisfactorio de salud, como puede ser el caso de los atletas, lo que les expone a contraer determinadas infecciones como resultado de su situación temporal de tener un bajo nivel de actividad inmunitaria.

Los inventores han realizado de forma específica unas investigaciones y unos experimentos para superar la desventaja mencionada anteriormente, es decir, la baja actividad inmunitaria temporal en individuos que desempeñan ejercicio intenso. Sorprendentemente, en el transcurso de las investigaciones realizadas por los inventores se ha descubierto que es posible conseguir, de forma simultánea, un descenso menos pronunciado en el nivel de actividad inmunitaria y una restauración más rápida de dicho nivel en individuos con un estado de salud generalmente satisfactorio, tales como atletas que desempeñan un entrenamiento intensivo y/o pruebas deportivas, y, en general, individuos sometidos a estados de estrés fisiológico, mediante la administración a los mismos de leches fermentadas que contienen Lactobacillus casei. Este efecto sorprendente se ha confirmado por las pruebas realizadas y será explicado durante esta descripción. La importancia de esta invención necesita explicarse debido a sus efectos de gran alcance y eficacia y porque no está alineado con el uso conocido de leches fermentadas, con el objeto especial de aumentar los niveles de calcio en el cuerpo, flora intestinal y otros factores similares, considerando que hasta ahora su uso en personas con un estado de salud generalmente satisfactorio, e incluso menor en el caso de individuos que desempeñan un ejercicio intenso y prolongado, no se ha considerado por ser de especial interés.

Se ha publicado previamente que en pacientes expuestos a patógenos, la absorción de leche fermentada que contiene Lactobacillus casei reduce la gravedad de infecciones, concretamente infecciones intestinales.

Por ejemplo, Reinert y col. (Anales Españoles de Pediatría, 1997) han demostrado que la duración de la diarrea aguda en niños se redujo mediante el consumo de leche fermentada con Lactobacillus casei. Sin embargo, no se reveló un efecto preventivo.

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Por otra parte, se ha demostrado que la ingestión de productos de leche fermentada induce cambios en la microflora intestinal y puede ejercer una influencia sobre las funciones digestivas (Guerin-Danan y col., 1998).

Sorprendentemente, los inventores han descubierto ahora que la ingestión de leche fermentada que contiene al menos una bacteria acidoláctica tal como Lactobacillus casei puede contribuir a una reducción en el nivel de descenso de la función inmunitaria sistémica en individuos sanos en estados de estrés fisiológico y pueda permitir también una restauración más rápida de los niveles normales, consiguiendo de este modo una acción preventiva, limitando la reducción temporal del nivel inmunitario y acelerando la restauración de los niveles que existían antes de la situación de estrés fisiológico.

Dicho estrés fisiológico puede ocurrir, por ejemplo, después de una actividad física o intelectual intensa, durante el embarazo, como resultado de estrés psicológico, etc.

Por lo tanto, uno de los propósitos de esta invención es el uso de leches fermentadas administradas por vía oral para los propósitos de conseguir un efecto significativo en la restauración de la actividad inmunitaria; otro propósito de la invención es el uso de las leches fermentadas para la prevención y reducción de la función inmunitaria sistémica en sujetos sanos en estado de estrés fisiológico. Por lo tanto se adaptará de forma concreta en los casos en los que existe una reducción temporal principal en tales niveles cuando el individuo desempeña actividad física intensa y prolongada.

Las leches fermentadas contienen al menos una cepa de Lactobacillus casei. En una forma de realización preferida de la presente invención, dicha cepa es la cepa depositada en la CNCM (Collection Nationale de Culture de Microorganismes, Instituto Pasteur, 25 rue Docteur Roux) con el número 1-1518 el 30 de diciembre de 1994.

Las leches fermentadas que contienen Lactobacillus casei pueden contener además otras bacterias acidolácticas que pertenecen a los géneros Lactobacillus, Lactococcus, Streptococcus y Bifidobacterium. Dichas bacterias acidolácticas se seleccionan preferiblemente de un grupo constituido por:

- Lactobacillus helveticus

- Lactobacillus delbrueckii subespecie bulgaricus

- Lactobacillus paracasei - Lactobacillus zeae - Lactobacillus acidophilus - Lactococcus lactis - Streptococcus thermophilus

- Bifidobacterium longum y/o

- Bifidobacterium breve

De acuerdo con la invención, la leche fermentada puede contener también otras bacterias acidolácticas, tales como las descritas en la solicitud PCT WO 96/20607.

En una forma de realización preferida, la cepa de Lactobacillus casei estará presente en el producto en una concentración mínima de 10^{5} u.f.c./ml, más preferiblemente entre 10^{6} y 10^{9} u.f.c./ml. Los productos que proporcionan buenos resultados de acuerdo con la invención contendrán Lactobacillus casei en concentraciones por encima de 10^{7} u.f.c./ml.

Lactobacillus casei se puede usar para la preparación de leches fermentadas en forma semisólida o pastosa, similares al yogur, o en forma líquida, para el tratamiento de estados temporales caracterizados por un bajo nivel de actividad inmunitaria.

Los experimentos se llevaron a cabo en grupos de atletas que mostraron un descenso en el número de células NK tras un esfuerzo intenso.

Individuos y procedimientos Individuos

El acuerdo para tomar parte en el estudio se obtuvo a partir de un grupo de 99 personas de ambos sexos. Los individuos se comprometieron como atletas que desempeñaban actividad aeróbica física al menos tres veces por semana durante un periodo de más de 30 minutos, con una intensidad de 60% de su VO_{2} máximo o más. Todos los individuos fueron requeridos para abstenerse de tomar las ayudas ergogénicas que estuvieron usando durante un periodo mínimo de dos meses previos al comienzo de la prueba. Se excluyeron los individuos con hipersensibilidad o intolerancia conocida a productos lácteos, así como los individuos con dietas especiales, tales como dietas de reducción de peso o dietas vegetarianas. También se excluyeron los individuos que habían experimentado episodios de asma inducida por ejercicio y aquellos que habían recibido antibióticos u otro tratamiento médico durante un periodo de hasta un mes antes del día 35.

La tabla 1 indica las características de los individuos comprometidos en el experimento.

TABLA 1

1

Diseño experimental

El experimento comprendía dos partes. En la primera parte cada individuo desempeñó una cantidad prefijada de ejercicio en un cicloergómetro para alcanzar su VO_{2} máximo. Tras un periodo de calentamiento de 5 minutos con una potencia generada de 50 vatios, la potencia se aumentó en 30 vatios cada 3 minutos hasta que se alcanzó el nivel de comienzo de fatiga. Los valores de VO_{2}, frecuencia cardíaca, pCO_{2}, ventilación de pO_{2} y cociente respiratorio se midieron cada 30 segundos en aire exhalado hasta el final de la prueba. También se midió el valor de ECC de forma continua. La concentración sanguínea de lactato y la temperatura de la membrana timpánica se midieron también antes de la prueba y cinco minutos después con la ayuda de la evaluación de la temperatura en el sistema nervioso central. Las muestras de sangre venosa se recogieron del lóbulo de la oreja para el análisis de lactato. El análisis se realizó usando un procedimiento fotoenzimático usando un fotómetro Hitachi/Boehringer Mannheim 4020. La temperatura de la membrana timpánica se midió usando un escáner de temperatura por infrarrojos (Ototemp 3000 SD Natick, MA). Tras un descanso durante un periodo de entre una semana y 10 días, se realizó una segunda prueba de ejercicio en el cicloergómetro al 75% del VO_{2} máximo durante 60 minutos. Antes de la prueba de esfuerzo máximo se obtuvieron los historiales clínicos de los individuos y la salud de sus familiares, junto con un completo análisis sanguíneo incluyendo el recuento sanguíneo, colesterol, HDL, LDL, glucosa, ácido úrico, urea, GOT, GPT y proteínas.

Los individuos asistieron al laboratorio tras un desayuno ligero (sin leche u otros productos lácteos). Tras descansar durante unos 20 minutos, cada uno de los individuos desempeñaron ejercicio con una potencia de 50 vatios durante 5 minutos y posteriormente al 75% de VO_{2} durante 60 minutos a 60 r.p.m. Durante la ventilación de prueba, el uso de O_{2} (VO_{2}) y la emisión de CO_{2} (VCO_{2}) se controlaron durante periodos de 30 minutos, 45 minutos y 60 minutos usando el equipo Jaeger Bos-Sprint (Erich Jaeger GmbH, Wurzburg, Alemania) calibrado antes de cada prueba. El equipo estaba formado por un analizador de oxígeno paramagnético y un equipo de infrarrojos para el dióxido de carbono (CO_{2}) y un neumotacógrafo de tipo Fleisch. Del mismo modo se registraron la frecuencia cardíaca y el ECC de forma continua hasta el final de la prueba. Se extrajo sangre de la vena antecubital derecha con el individuo recostado antes de la prueba y de nuevo 5 minutos y 2 horas tras la prueba, para el análisis de células NK y otros parámetros relacionados con el nivel inmunitario. La concentración de lactatos en sangre y la temperatura de la membrana timpánica se midieron antes de la prueba y 5 minutos después. Los investigadores creyeron que sería útil medir la temperatura ya que se ha mostrado que la hipertermia puede inducir cambios inmunitarios que son similares a los cambios observados en relación con el ejercicio (B. K. Pedersen y col., 1994, M. M. Hammami y col., 1998).

Segunda fase de la investigación

Se seleccionaron veinticinco individuos de un grupo de 94 (5 individuos no desearon continuar) para la segunda fase de la investigación. La selección se basó en el hecho de que los individuos mostraban una reducción significativa (más del 3%) en el número de células NK en comparación con sus niveles plasmáticos basales 2 horas después de la prueba. Durante la segunda fase de la investigación los individuos se incluyeron en dos grupos paralelos. El grupo 1 recibió 500 ml al día de leche fermentada con Lactobacillus casei administrada por vía oral durante un periodo de un mes y el grupo 2 recibió 500 ml de leche administrada por vía oral durante un periodo de un mes. La leche fermentada que contenía Lactobacillus casei se proporcionó a diferentes intervalos y se mantuvo a una temperatura de 2-6ºC. Al final de cada periodo se sometió a todos los individuos a una prueba de ejercicio de 60 minutos al 75% de su VO_{2} máximo en el cicloergómetro a 60 r.p.m. Se obtuvieron muestras de sangre de la vena antecubital antes de la prueba y de nuevo en periodos de 5 minutos y 2 horas después de cada prueba para un análisis de los parámetros inmuni-
tarios.

Se obtuvo el historial dietético de cada individuo dos días antes de las pruebas (tras beber leche fermentada con Lactobacillus casei y leche) y se analizó usando el programa de ordenador Professional Diet Balancer (Nutridata Software Co., Wappingers Falls, NY, EE.UU.). Este programa de ordenador tiene una base de datos de 1600 elementos de comida con 23 valores de nutrientes para cada tipo de alimento. El programa compara el total de cada nutriente indicado por los individuos con la cantidad diaria recomendada (CDR) en EE.UU. en función del peso, edad, sexo y actividad física o consumo de energía. Fue útil para medir el porcentaje de hidratos de carbono en su ingesta total de calorías. Esto es importante ya que Nieman y col. (1997) han demostrado que los hidratos de carbono afectan a la redistribución de las células NK.

Leche fermentada que contiene Lactobacillus casei

La leche fermentada con Lactobacillus casei se preparó usando cultivos tradicionales de yogur (L. bulgaricus y. S. thermophilus) además de Lactobacillus casei (cepa DN-114001). Se confirmó la presencia de un mínimo de 10^{7} de unidades formadoras de colonia por ml (u.f.c./ml) de bacterias de yogur, encontrándose con un contenido de 3,2\cdot10^{8} u.f.c./ml de Lactobacillus casei.

La composición del nutriente fue: 3,7 g de proteínas, 3,3 g de grasas y 5,2 g de hidratos de carbono por 100 g.

Procedimientos Recogida de muestra y preparación sérica

Se extrajeron 20 ml de sangre venosa de cada atleta. Se recogieron 10 ml en tubos heparinizados comerciales (Sarstedt, Alemania) y se dejaron coagular 10 ml durante 30 minutos a temperatura ambiente en tubos de 10 ml
(Sarstedt, Alemania). Los tubos se centrifugaron (1500g) a temperatura ambiente y se retiró el suero. Todas las muestras se analizaron respecto a inmunoglobulinas dentro de las siguientes 3 horas y luego se almacenaron a -30ºC antes de la prueba de citoquinas.

Recuento de células sanguíneas

En las gráficas adjuntas:

La figura 1 muestra los resultados con sangre entera con tinción CD3-FITC/CD16+CD56-PE y analizados en un citómetro de flujo Epics XL-MCL;

La figura 2 muestra la temperatura de la membrana timpánica medida por termografía infrarroja antes y después de la prueba de ejercicio. Las dos columnas claras de la izquierda de la gráfica muestran las temperaturas con administración de leche, antes y 5 minutos después, respectivamente, y los dos gráficas oscuras [sic] en la derecha muestran la situación correspondiente a Lactobacillus casei;

La figura 3 muestra la concentración sanguínea de lactato antes y después de una prueba de ejercicio tras la ingestión de leche fermentada que contiene Lactobacillus casei y leche, representando las columnas, respectivamente: antes, 3 minutos después y 5 minutos después, correspondiendo las columnas oscuras a leche fermentada que contiene Lactobacillus casei y las columnas claras a leche;

La figura 4 muestra un diagrama de valores promedio NKL, correspondiendo la línea oscura a leche fermentada con Lactobacillus casei y la línea clara a leche; y

La figura 5 muestra, de manera similar a la figura 4, el diagrama de valores promedio NKA.

Para determinar subconjuntos de linfocitos, se mezclaron 100 \mul de sangre heparinizada con 10 \mul de anticuerpos monoclonales seleccionados (mab) conjugados con isocianato de fluoresceína (FITC), ficoeritrina (PE) o rojo de ficoeritrina Texas (ECD) en las siguientes combinaciones de tinte: anti-CD4 mab (PE)/anti-CD8 mab (FITC)/anti-CD3 mab (ECD) de la compañía Coulter (Coulter Corp. EE.UU.), anti-CD19 mab (PE)/anti-HLADR mab (FITC)/anti-CD3 mab (ECD), anti-CD14 mab(PE)/anti-CD64 mab (FITC) de la compañía Immunotech (Immunotech, Francia) y anti-CD16+CD56 mab (PE)/anti-CD3 mab (FITC) de la compañía Becton Dickinson (Becton Dickinson, EE.UU.) (Figure 1). Tras 15 minutos de incubación en la oscuridad, las muestras se lisaron con una disolución Immunoprep en la unidad Qprep (Coulter Corp., EE.UU.). El lisado se analizó de forma inmediata usando un citómetro de flujo Coulter Epics XL-MCL. El número de células contadas fue de 10.000 por muestra. Los descubrimientos se expresaron como porcentajes de células que ocasionaron una fluorescencia específica en una región controlada de linfocitos, con la excepción de que CD14/CD64 se controló en la región de monocitos.

Actividad de células NK ("asesinas naturales")

Se aislaron células mononucleares de sangre periférica y sangre heparinizada por centrifugación en gradiente de densidad. Se diluyeron 8 ml de sangre entera 1:1 con PBS. Esta se dispuso en forma de capas sobre 5 ml de
Lymphoprep (Nycomed, Noruega) y se centrifugó (600 g) durante 20 minutos a 20ºC. La capa de células mononucleares se retiró y se lavó dos veces con RPMI 1640 (GIBCO) suplementado con 10% de suero AB humano (GIBCO). El sedimento se reconstituyó con una concentración de 2\cdot10^{6} células/ml (células efectoras).

La actividad NK se evaluó usando la prueba de citotoxicidad EuTDA (Wallac, Finlandia). Se añadieron 2 ml de K562 (ATCC-CCL 243) a 1\cdot10^{6} células/ml y se cargaron con 5 \mul de un ligando para activar la fluorescencia (BATDA) a 20ºC durante 15 minutos. Las células se lavaron 6 veces con PBS con 10% de BSA. Por último el sedimento se ajustó con RPMI 1640 hasta 5\cdot10^{4} células/ml (células diana). Se dispusieron 100 \mul de estas células en cada pocillo de una placa de microtitulación (Sarstedt, EE.UU.) que contenía células efectoras para proporcionar una proporción diana:efector de 40:1, 20:1, 10:1 y 5:1. La placa de microtitulación se incubó a 37ºC durante 2 horas en una incubador con 5% de CO_{2}. Cuando se completó la incubación, la placa se centrifugó durante 5 minutos a 500g. Después se transfirieron 20 \mul del sobrenadante en una placa de fondo plano (placa de microtitulación DELFIA); Se añadieron 200 \mul de solución Eu a cada pocillo y se incubaron luego a temperatura ambiente durante 15 minutos en un dispositivo Sacudidas. Por último se midió la fluorescencia en un fluorómetro de resolución de tiempos DELFIA 1232 (Wallac). Los controles incluyeron liberación espontánea (100 \mul de medio RPMI 1640 añadido a las células diana marcadas) y liberación total (100 \mul de medio RPMI 1640 suplementado con Tween al 10%, añadido a las células diana marcadas). El porcentaje de lisis se calculó usando los recuentos para cada proporción E:T:

% de lisis = \frac{(\text{liberación desde las muestras} - \text{liberación espontánea})}{(\text{liberación total} - \text{liberación espontánea})} x 100

Los resultados se estandarizaron en unidades líticas (UL), calculadas como el número de células efectoras requeridas para lisis del 20% de 5\cdot10^{3} células diana, y consideradas por ser el número de unidades líticas incluidas en 1\cdot10^{7} células. El coeficiente interno de varianza para la prueba fue 3%.

Inmunoglobulinas

Las inmunoglobulinas (IgG, IgA e IgM) se determinaron cuantitativamente por nefelometría usando el equipo BN II (Behring Nephelometer II). Las curvas de referencia se construyeron mediante calibración multipunto basada en el patrón IFCC CRM-470. En el protocolo para el ensayo de sueros, se diluyeron automáticamente las muestras de suero y se midieron; las diluciones usadas fueron 1:20 (IgA e IgM) y 1:400 (IgG). Los resultados se expresan en
mg/dl.

Citoquinas

Las pruebas se realizaron para IL-1\beta, sIL-2R y IL-6 mediante el ensayo inmunométrico enzimático quimioluminiscente usando un analizador automático IMMULITE (Diagnostic Products Corp. DPC, EE.UU.). Los límites de detección fueron: 5 pg/ml para IL-1\beta, 10 U/ml para sIL-2R y 2 pg/ml para IL-6. IL-2 e INF\gamma se realizaron mediante ELISA Immunotech (Immunotech, Francia) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Los límites de detección fueron 10 pg/ml para IL-2 y 0,5 U/ml para INF-\gamma.

Resultados y discusión

Las pruebas de ejercicio realizadas para el tratamiento con leche y leche fermentada mostraron el mismo nivel de aumento en la temperatura del tímpano respecto a los valores de línea base en 5 minutos (figura 2). En ningún caso la temperatura superó los 37ºC. Se ha mostrado que la temperatura rectal es 1ºC mayor que la temperatura del tímpano. B. K. Pedersen y col. 1994 mostraron que una temperatura básica de 39ºC puede ocasionar cambios en el sistema inmunitario que son similares a los cambios experimentados en relación con el ejercicio. Por tanto ninguna interferencia con el sistema inmunitario tras el ejercicio podría deberse al aumento en la temperatura observado en la investigación realizada por los inventores.

La concentración en sangre de lactato de línea base y el aumento a 3 y 5 minutos tras ejercicio no mostró diferencias significativas entre los dos programas de tratamiento (figura 3).

Células NK.- No hubo diferencia en la concentración de células NK en ninguno de los puntos correspondientes a la línea base 5 minutos y 2 horas después del tratamiento entre leche fermentada con Lactobacillus casei y leche (figura 2). Se observó una diferencia significativa después de ejercicio en respuesta a la concentración de células NK entre 5 minutos y 2 horas, ambas en el grupo que había tomado leche fermentada que contenía Lactobacillus casei y el grupo que había tomado leche. El descenso en las células NK observado tras 2 horas fue significativamente menor en el grupo que había tomado leche fermentada con Lactobacillus casei (3,14 para leche fermentada con Lactobacillus casei en comparación con 5,24 para leche; p < 0,0035) (figura 4).

Hasta el punto que concierne la actividad de las células NK, se observó una tendencia hacia una actividad aumentada en ambos grupos (leche fermentada con Lactobacillus casei y leche) entre la línea base y 5 minutos. También se observó un descenso entre 5 minutos y 2 horas en el caso de leche fermentada con Lactobacillus casei y leche, siendo la tendencia para la leche fermentada con Lactobacillus casei menor que para la leche (figura 5).

La función inmunitaria reducida tras periodos de ejercicio intenso y entrenamiento excesivo está relacionado en parte con una secreción aumentada de cortisona y una fase proteica aguda mediada por IL-6 (J. A. Woods y col., 1999). El descubrimiento de que la ingestión de leche fermentada con Lactobacillus casei puede modular el descenso en el nivel de células NK puede ayudar en parte a contrarrestar la acción inmunosupresora de la cortisona en atletas durante el entrenamiento intenso y competición.

De acuerdo con los experimentos realizados para certificar el efecto más eficaz del nuevo uso para Lactobacillus casei en la preparación de leches fermentadas, el contenido de Lactobacillus casei estará presente en una cantidad por encima de 1\cdot10^{7} u.f.c. por mililitro.

Todo lo que afecte, modifique, cambie o corrija la esencia del nuevo uso descrito se puede variar para los propósitos de esta invención.

Claims (5)

1. Uso de Lactobacillus casei en la preparación de una leche fermentada para la prevención y el tratamiento de niveles inmunitarios reducidos de forma temporal asociados con un descenso en células NK en sangre en individuos sometidos a estrés fisiológico.

2. Uso de la reivindicación 1, en el que dicho estrés fisiológico procede de esfuerzo físico intenso.

3. Uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, en el que dicha leche fermentada comprende más de 1\cdot10^{5} u.f.c. por mililitro de Lactobacillus casei.

4. Uso de la reivindicación 3, en el que dicha leche fermentada comprende más de 1\cdot10^{7} u.f.c. por mililitro de Lactobacillus casei.

5. Uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, w en el que dicha leche fermentada comprende además al menos otra bacteria acidoláctica seleccionada entre Lactobacillus helveticus, Lactobacillus delbrueckii subespecie bulgaricus, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus acidophilus, Lactococcus lactis, Streptococcus thermophilus,
Bifidobacterium longum y/o Bifidobacterium breve.