JP2922013B2 - 耐酸性及び酸素耐性を有する新規ビフィズス菌 - Google Patents
耐酸性及び酸素耐性を有する新規ビフィズス菌Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、耐酸性及び酸素耐性を
有する新規なビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifido
bacterium breve）に関する。本発明のビフィドバクテ
リウム・ブレーベは、耐酸性及び酸素耐性が良好である
ので、発酵乳のスターターとして有用である。
有する新規なビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifido
bacterium breve）に関する。本発明のビフィドバクテ
リウム・ブレーベは、耐酸性及び酸素耐性が良好である
ので、発酵乳のスターターとして有用である。
【０００２】
【従来の技術】一般的に、ビフィズス菌は、乳幼児から
老人に至るまで人の健康と深く関わっているといわれて
いる。現在、ビフィズス菌を利用した医薬品や食品は大
変多く、特に発酵乳（ヨーグルト）などの乳製品に多く
使われている。しかしながら、この商品の中で高い生菌
数を維持しているものは少ない。これは、ビフィズス菌
がその生存に嫌気条件を必要とし、発酵乳のような低ｐ
Ｈ域では生存し難いこと、また、栄養要求性が複雑で酵
母エキスのような生育促進物質の添加を必要とすること
等が挙げられる。
老人に至るまで人の健康と深く関わっているといわれて
いる。現在、ビフィズス菌を利用した医薬品や食品は大
変多く、特に発酵乳（ヨーグルト）などの乳製品に多く
使われている。しかしながら、この商品の中で高い生菌
数を維持しているものは少ない。これは、ビフィズス菌
がその生存に嫌気条件を必要とし、発酵乳のような低ｐ
Ｈ域では生存し難いこと、また、栄養要求性が複雑で酵
母エキスのような生育促進物質の添加を必要とすること
等が挙げられる。
【０００３】このような点からビフィズス菌の耐酸性
株、酸素耐性株について研究が行われ、ビフィドバクテ
リウム・ビフィダム（Bifidobacterium bifidum）につ
いては、耐酸性変異株の存在、及びその菌株による発酵
乳の製造法（特公昭５６−４２２５０号公報）、耐酸性
株を用いての酸性乳の製造法（特開昭６１−２０５４８
１号公報）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（B. bre
ve）については、酸素耐性変異株の存在、及びその菌株
による発酵乳の製造法（特公昭５９−５３０３１号公
報）、耐酸性株を用いての酸性乳の製造法（特開昭６１
−２０５４８１号公報）ビフィドバクテリウム・ロンガ
ム（B. longum ）については、耐酸性変異株の存在、及
びその菌株による発酵乳の製造法（特開昭５９−５３８
２９号公報）、過酸化水素耐性変異株の存在、及びその
菌株による培養組成物（特開昭６１−１８５１８２号公
報）等が、現在までに知られている。また、発酵乳など
への使用菌種としては、乳幼児にはビフィドバクテリウ
ム・ブレーベ（B. breve）、幼児から成人用にはビフィ
ドバクテリウム・ロンガム（B. longum ）が推奨されて
いる（化学と生物 Vol. 21, No. 1,８〜９頁）。
株、酸素耐性株について研究が行われ、ビフィドバクテ
リウム・ビフィダム（Bifidobacterium bifidum）につ
いては、耐酸性変異株の存在、及びその菌株による発酵
乳の製造法（特公昭５６−４２２５０号公報）、耐酸性
株を用いての酸性乳の製造法（特開昭６１−２０５４８
１号公報）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（B. bre
ve）については、酸素耐性変異株の存在、及びその菌株
による発酵乳の製造法（特公昭５９−５３０３１号公
報）、耐酸性株を用いての酸性乳の製造法（特開昭６１
−２０５４８１号公報）ビフィドバクテリウム・ロンガ
ム（B. longum ）については、耐酸性変異株の存在、及
びその菌株による発酵乳の製造法（特開昭５９−５３８
２９号公報）、過酸化水素耐性変異株の存在、及びその
菌株による培養組成物（特開昭６１−１８５１８２号公
報）等が、現在までに知られている。また、発酵乳など
への使用菌種としては、乳幼児にはビフィドバクテリウ
ム・ブレーベ（B. breve）、幼児から成人用にはビフィ
ドバクテリウム・ロンガム（B. longum ）が推奨されて
いる（化学と生物 Vol. 21, No. 1,８〜９頁）。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、ビフィ
ズス菌の利用におけるこのような現状に鑑み、発酵乳等
の乳製品中で高い生菌数で生存し得る乳酸菌、換言すれ
ば高い耐酸性、及び酸素耐性を示す乳酸菌を探索した。
その結果、母乳栄養児の糞便からこのような性質をもつ
乳酸菌を発見し、これを発酵乳のスターターとして使用
し得ることを見出し、本発明を完成した。
ズス菌の利用におけるこのような現状に鑑み、発酵乳等
の乳製品中で高い生菌数で生存し得る乳酸菌、換言すれ
ば高い耐酸性、及び酸素耐性を示す乳酸菌を探索した。
その結果、母乳栄養児の糞便からこのような性質をもつ
乳酸菌を発見し、これを発酵乳のスターターとして使用
し得ることを見出し、本発明を完成した。
【０００５】すなわち、本発明の目的は、高い耐酸性及
び酸素耐性をもち、発酵乳のスターターとして用いるこ
とができる新規な乳酸菌を提供することにある。
び酸素耐性をもち、発酵乳のスターターとして用いるこ
とができる新規な乳酸菌を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明は、高い耐酸性及
び酸素耐性を示すビフィドバクテリウム・ブレーベに関
する。
び酸素耐性を示すビフィドバクテリウム・ブレーベに関
する。
【０００７】本発明者らは、ビフィドバクテリウム・ブ
レーベのなかで強い耐酸性を有する菌株を得るために、
各種の試料を用いて検索したところ、健康な母乳栄養児
の糞便から分離した菌株のなかに好気的発育の優れたも
のを見出し、これを選び出し、さらに低ｐＨの酢酸緩衝
液で数回処理し、そのなかから最も生育性に優れた菌株
ビフィドバクテリウム・ブレーベＳＢＲ３２１２を分離
した。この菌株は、ビフィドバクテリウム・ブレーベの
菌学的性質を示すが、さらに高い耐酸性及び酸素耐性を
有する点で新規であり、微工研に微工研菌寄第１１９１
５号として寄託されている。
レーベのなかで強い耐酸性を有する菌株を得るために、
各種の試料を用いて検索したところ、健康な母乳栄養児
の糞便から分離した菌株のなかに好気的発育の優れたも
のを見出し、これを選び出し、さらに低ｐＨの酢酸緩衝
液で数回処理し、そのなかから最も生育性に優れた菌株
ビフィドバクテリウム・ブレーベＳＢＲ３２１２を分離
した。この菌株は、ビフィドバクテリウム・ブレーベの
菌学的性質を示すが、さらに高い耐酸性及び酸素耐性を
有する点で新規であり、微工研に微工研菌寄第１１９１
５号として寄託されている。
【０００８】本発明の耐酸性は、（１）菌体をｐＨ４．
３の滅菌酢酸緩衝液に懸濁し、５℃で７日間保存したと
き、少なくとも生残を示し、かつ（２）菌体を還元脱脂
乳で培養し、ｐＨ４．１に達したとき急冷して５℃で７
日間保存しても少なくとも生残を示すものである。ま
た、さらに（３）酸素耐性は、菌体を撹拌還元脱脂乳で
４８時間培養したとき、少なくとも増殖を示すものであ
る。
３の滅菌酢酸緩衝液に懸濁し、５℃で７日間保存したと
き、少なくとも生残を示し、かつ（２）菌体を還元脱脂
乳で培養し、ｐＨ４．１に達したとき急冷して５℃で７
日間保存しても少なくとも生残を示すものである。ま
た、さらに（３）酸素耐性は、菌体を撹拌還元脱脂乳で
４８時間培養したとき、少なくとも増殖を示すものであ
る。
【０００９】本発明の新菌株は、全乳、脱脂乳、又は還
元乳などからなる牛乳培地、あるいは乳糖またはグルコ
ース等を主成分とする合成あるいは半合成培地に接種培
養することによってビフィドバクテリウム菌を含有する
生残性の高い乳酸菌スターターを得ることができる。
元乳などからなる牛乳培地、あるいは乳糖またはグルコ
ース等を主成分とする合成あるいは半合成培地に接種培
養することによってビフィドバクテリウム菌を含有する
生残性の高い乳酸菌スターターを得ることができる。
【００１０】そして、この乳酸菌スターターを用いてド
リンクヨーグルト、酸性乳飲料等の発酵乳を製造すると
生菌数の高い発酵乳を得ることができる。
リンクヨーグルト、酸性乳飲料等の発酵乳を製造すると
生菌数の高い発酵乳を得ることができる。
【００１１】次に、本発明の高い耐酸性及び酸素耐性を
もつビフィドバクテリウム・ブレーベの分離方法を具体
的に説明する。生後数ヶ月の母乳栄養児８名の糞便から
光岡の方法（1980年叢文社発行 光岡知足著「腸内細菌
の世界」53〜92頁）に従って分離操作を行ってビフィズ
ス菌２５菌株を得た。このうちビフィドバクテリウム・
ブレーベは１３菌株であった。
もつビフィドバクテリウム・ブレーベの分離方法を具体
的に説明する。生後数ヶ月の母乳栄養児８名の糞便から
光岡の方法（1980年叢文社発行 光岡知足著「腸内細菌
の世界」53〜92頁）に従って分離操作を行ってビフィズ
ス菌２５菌株を得た。このうちビフィドバクテリウム・
ブレーベは１３菌株であった。
【００１２】この菌株１３株をまず酸素耐性菌株のスク
リーニングを行った。すなわち、この菌株をブリッグス
リバーブロス（Briggs liver broth）（光岡知足：臨床
検査、18、1163〜1172頁（1974））中で培養し、集菌洗
浄し、原液の２倍濃度の菌体液を調製した。この菌体液
を、０．５％酵母エキス入り１２％還元脱脂乳（１８×
１８０ｍｍ試験管）に２％接種し、１０秒間激しく撹拌
し、３７℃で２４時間培養した。培養物のカード形成
性、乳酸酸度及びｐＨを測定し、少なくとも培養物のカ
ード形成を示した菌株を酸素耐性株とした。１３菌株か
ら、酸素耐性株２株を得た。
リーニングを行った。すなわち、この菌株をブリッグス
リバーブロス（Briggs liver broth）（光岡知足：臨床
検査、18、1163〜1172頁（1974））中で培養し、集菌洗
浄し、原液の２倍濃度の菌体液を調製した。この菌体液
を、０．５％酵母エキス入り１２％還元脱脂乳（１８×
１８０ｍｍ試験管）に２％接種し、１０秒間激しく撹拌
し、３７℃で２４時間培養した。培養物のカード形成
性、乳酸酸度及びｐＨを測定し、少なくとも培養物のカ
ード形成を示した菌株を酸素耐性株とした。１３菌株か
ら、酸素耐性株２株を得た。
【００１３】次に、この酸素耐性株２株を用いて耐酸性
菌株のスクリーニング試験を行なった。すなわち、酸素
耐性株をブリッグスリバーブロスで培養し、集菌洗浄
し、原液の２倍濃度の菌体液を調製した。この菌体液
を、ｐＨ４．３の１／１００Ｍ酢酸緩衝液（１８×１８
０ｍｍ試験管）に５％分散し、５℃、３日間保存し、Ｂ
Ｌ平板寒天培地（日水製薬製）で３７℃、７２時間嫌気
培養を行なった。このような培養によって出現したコロ
ニーをブリッグスリバーブロスで３７℃、２４時間培養
を行なった。このようにして得られた培養液を用い、前
記菌体液の調製、嫌気培養及び出現したコロニーをブリ
ッグスリバーブロスでの培養を繰り返して３回行い、最
終操作でＢＬ平板寒天培地に形成されたコロニーを耐酸
性菌とした。この結果、前記酸素耐性株から耐酸性菌１
株を得た。この菌株をビフィドバクテリウム・ブレーベ
ＳＢＲ３２１２株とし、微工研に寄託した。この菌の受
託番号は、微工研菌寄第１１９１５号であった。
菌株のスクリーニング試験を行なった。すなわち、酸素
耐性株をブリッグスリバーブロスで培養し、集菌洗浄
し、原液の２倍濃度の菌体液を調製した。この菌体液
を、ｐＨ４．３の１／１００Ｍ酢酸緩衝液（１８×１８
０ｍｍ試験管）に５％分散し、５℃、３日間保存し、Ｂ
Ｌ平板寒天培地（日水製薬製）で３７℃、７２時間嫌気
培養を行なった。このような培養によって出現したコロ
ニーをブリッグスリバーブロスで３７℃、２４時間培養
を行なった。このようにして得られた培養液を用い、前
記菌体液の調製、嫌気培養及び出現したコロニーをブリ
ッグスリバーブロスでの培養を繰り返して３回行い、最
終操作でＢＬ平板寒天培地に形成されたコロニーを耐酸
性菌とした。この結果、前記酸素耐性株から耐酸性菌１
株を得た。この菌株をビフィドバクテリウム・ブレーベ
ＳＢＲ３２１２株とし、微工研に寄託した。この菌の受
託番号は、微工研菌寄第１１９１５号であった。
【００１４】次に本発明の耐酸性及び酸素耐性をもつ菌
株の菌学的性質を示すと次のとおりである。１．分類学
的性状 （１） 菌 形（光学顕微鏡による観察） ＢＬ寒天平板培地を用い、３７℃、４８〜７２時間スチ
ールウール法により嫌気培養したとき 大きさ：０．５±０．３×１．１±０．５μｍ 形 状：棍棒状あるいは分岐状の菌形を示す （２） グラム染色性前記（１）と同一条件で培養した
とき陽性あるいは弱陽性を示す （３） コロニー形態 前記（１）と同一条件で培養したときのコロニーの形態
は次のとおりである 形 状：円 形 隆 起：円錐状あるいは凸円状 周 縁：円 滑 大きさ：１〜３ｍｍ 色 調：白褐色あるいは赤褐色 表 面：円滑で光沢有り （４） 芽胞形成：陰 性 （５） ガス産生：陰 性 （６） 運動性 ：陰 性 （７） カタラーゼ活性：陰 性 （８） ミルク凝固性 ：陽 性 （９） ゼラチン液化性：陰 性 （１０）硝酸塩還元性 ：陰 性 （１１）インドール産生：陰 性 （１２）硫化水素産生 ：陰 性 （１３）酢酸／Ｌ（＋）乳酸のモル比：１．７±０．３
株の菌学的性質を示すと次のとおりである。１．分類学
的性状 （１） 菌 形（光学顕微鏡による観察） ＢＬ寒天平板培地を用い、３７℃、４８〜７２時間スチ
ールウール法により嫌気培養したとき 大きさ：０．５±０．３×１．１±０．５μｍ 形 状：棍棒状あるいは分岐状の菌形を示す （２） グラム染色性前記（１）と同一条件で培養した
とき陽性あるいは弱陽性を示す （３） コロニー形態 前記（１）と同一条件で培養したときのコロニーの形態
は次のとおりである 形 状：円 形 隆 起：円錐状あるいは凸円状 周 縁：円 滑 大きさ：１〜３ｍｍ 色 調：白褐色あるいは赤褐色 表 面：円滑で光沢有り （４） 芽胞形成：陰 性 （５） ガス産生：陰 性 （６） 運動性 ：陰 性 （７） カタラーゼ活性：陰 性 （８） ミルク凝固性 ：陽 性 （９） ゼラチン液化性：陰 性 （１０）硝酸塩還元性 ：陰 性 （１１）インドール産生：陰 性 （１２）硫化水素産生 ：陰 性 （１３）酢酸／Ｌ（＋）乳酸のモル比：１．７±０．３
【００１５】（１４）糖の発酵性 光岡の方法〔光岡知足：臨床検査、18、1163〜1172頁
（1974年）〕に従い実施した。また、ビフィドバクテリ
ウム・ブレーベに属する菌株ＡＴＣＣ１５７００及びＪ
ＣＭ７０１６についても同様に試験を行なった。結果を
表１に示す。
（1974年）〕に従い実施した。また、ビフィドバクテリ
ウム・ブレーベに属する菌株ＡＴＣＣ１５７００及びＪ
ＣＭ７０１６についても同様に試験を行なった。結果を
表１に示す。
【００１６】
【表１】
【００１７】以上の性状より、本発明のＳＢＲ３２１２
は、Bergey'sManual of Systematic bacteriology(Will
iams ＆ Wilkins、1986年）、「腸内細菌の世界」（光
岡知足著、叢文社、1980年）の分類基準を参照して、ビ
フィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium bre
ve）であると同定した。 ２．さらに、本発明のＳＢＲ３２１２菌株について従来
のビフィドバクテリウム・ブレーベとの詳細な菌学的性
質の比較試験を行なった。すなわち、ＳＢＲ３２１２、
ＡＴＣＣ１５７００、ＪＣＭ７０１６、市販商品からの
分離株Ａの４菌株のビフィドバクテリウム・ブレーベを
用いて、次の方法により試験をした。
は、Bergey'sManual of Systematic bacteriology(Will
iams ＆ Wilkins、1986年）、「腸内細菌の世界」（光
岡知足著、叢文社、1980年）の分類基準を参照して、ビ
フィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium bre
ve）であると同定した。 ２．さらに、本発明のＳＢＲ３２１２菌株について従来
のビフィドバクテリウム・ブレーベとの詳細な菌学的性
質の比較試験を行なった。すなわち、ＳＢＲ３２１２、
ＡＴＣＣ１５７００、ＪＣＭ７０１６、市販商品からの
分離株Ａの４菌株のビフィドバクテリウム・ブレーベを
用いて、次の方法により試験をした。
【００１８】〔１〕耐酸性（低ｐＨ緩衝液）の比較試験 （１）方 法 ブリッグス リバー ブロスにて３７℃、２４時間
培養後、洗浄、集菌する。 集菌したものを滅菌生理
食塩水（Ｌ−システイン塩酸塩０．１％、チオグリコー
ル酸Ｎａ ０．１％入り）にて原菌液の４倍濃度にす
る。 この菌液を各ｐＨの緩衝液（１７×１００ｍｍ
ファルコンチューブに５ｍｌ分注）に５％の割で添加、
混合し、最終的に３．８、４．０、４．３、４．６、
５．０の５段階のｐＨになるよう調整し５℃に保存し、
生菌数を経時的に測定した。緩衝液は、１／１００モル
の酢酸・酢酸Ｎａの酢酸緩衝液を使用した。また、生菌
数は、光岡の方法〔臨床検査、18、1163〜1172（197
4）〕に従い血液を加えないＢＬ平板寒天培地を用いて
スチールウール法で３７℃、７２時間の嫌気培養で測定
した。
培養後、洗浄、集菌する。 集菌したものを滅菌生理
食塩水（Ｌ−システイン塩酸塩０．１％、チオグリコー
ル酸Ｎａ ０．１％入り）にて原菌液の４倍濃度にす
る。 この菌液を各ｐＨの緩衝液（１７×１００ｍｍ
ファルコンチューブに５ｍｌ分注）に５％の割で添加、
混合し、最終的に３．８、４．０、４．３、４．６、
５．０の５段階のｐＨになるよう調整し５℃に保存し、
生菌数を経時的に測定した。緩衝液は、１／１００モル
の酢酸・酢酸Ｎａの酢酸緩衝液を使用した。また、生菌
数は、光岡の方法〔臨床検査、18、1163〜1172（197
4）〕に従い血液を加えないＢＬ平板寒天培地を用いて
スチールウール法で３７℃、７２時間の嫌気培養で測定
した。
【００１９】（２）結 果 結果を表２に示す。表２から明かなように、ＳＢＲ３２
１２はいずれのｐＨにおいても他の３菌株より生残性が
高く、特にｐＨ３．８〜４．３の低ｐＨ域においてその
差が顕著であった。即ち、ＳＢＲ３２１２を５℃で１０
日間保存した場合、ｐＨ４．３において３７．６９％、
ｐＨ４．０において７．１０％、ｐＨ３．８において
０．３１％の生残率を示すのに対して、他の３菌株はｐ
Ｈ４．３以下において生残率がいずれも１％未満だっ
た。
１２はいずれのｐＨにおいても他の３菌株より生残性が
高く、特にｐＨ３．８〜４．３の低ｐＨ域においてその
差が顕著であった。即ち、ＳＢＲ３２１２を５℃で１０
日間保存した場合、ｐＨ４．３において３７．６９％、
ｐＨ４．０において７．１０％、ｐＨ３．８において
０．３１％の生残率を示すのに対して、他の３菌株はｐ
Ｈ４．３以下において生残率がいずれも１％未満だっ
た。
【００２０】
【表２】
【００２１】〔２〕耐酸性（還元脱脂乳）の比較試験 前記試験結果から生残性の劣る分離株Ａを除き、ＳＢＲ
３２１２、ＡＴＣＣ１５７００、ＪＣＭ７０１６の３菌
株のビフィドバクテリウム・ブレーベを用いて、次の方
法により試験をした。 （１）方 法 ０．５％酵母エキス（Difco)入り、１２％還元脱脂
乳を１１５℃、２０分間滅菌後、２％接種し、３７℃、
１８時間培養し、スターターとした。 次に、０．３
％酵母エキス入り１０％還元脱脂乳（１８×１８０ｍｍ
試験管に１０ｍｌ分注）を１１５℃、２０分間滅菌後、
上記スターターを２％接種し、３７℃で培養した。
培養物がｐＨ４．６及び４．１に達したら急冷し、５℃
に保存し、生菌数を経時的に測定した。
３２１２、ＡＴＣＣ１５７００、ＪＣＭ７０１６の３菌
株のビフィドバクテリウム・ブレーベを用いて、次の方
法により試験をした。 （１）方 法 ０．５％酵母エキス（Difco)入り、１２％還元脱脂
乳を１１５℃、２０分間滅菌後、２％接種し、３７℃、
１８時間培養し、スターターとした。 次に、０．３
％酵母エキス入り１０％還元脱脂乳（１８×１８０ｍｍ
試験管に１０ｍｌ分注）を１１５℃、２０分間滅菌後、
上記スターターを２％接種し、３７℃で培養した。
培養物がｐＨ４．６及び４．１に達したら急冷し、５℃
に保存し、生菌数を経時的に測定した。
【００２２】（２）結 果 結果を表３に示す。表３よりＳＢＲ３２１２は、ｐＨ
４．６において７日目で他の２菌株とほぼ同じ生残率を
示した。しかし、ｐＨ４．１においては、７日目で８．
２１％と高い生残率を示したのに対して他の２菌株は
０．００１％未満だった。
４．６において７日目で他の２菌株とほぼ同じ生残率を
示した。しかし、ｐＨ４．１においては、７日目で８．
２１％と高い生残率を示したのに対して他の２菌株は
０．００１％未満だった。
【００２３】
【表３】
【００２４】〔３〕好気的生育性試験 ＳＢＲ３２１２、ＡＴＣＣ１５７００、ＪＣＭ７０１６
の３菌株のビフィドバクテリウム・ブレーベを用いて、
次の方法により試験を行った。 （１）内 容 上記各菌株をスターターとして０．５％酵母エキス
入り１２％還元脱脂乳（１１５℃、２０分間滅菌）培地
にて３７℃、１８時間培養した。 １６％還元脱脂乳
１５０ｍｌを３００ｍｌ容量の三角フラスコに入れ、綿
栓を施し１１５℃、２０分間滅菌後、３７℃まで撹拌冷
却した。その後、上記スターターを２％接種し撹拌分散
後、３７℃で培養を行い生菌数、乳酸酸度、ｐＨを経時
的に測定した。また、増殖率（％）＝各時間生菌数／初
期生菌数×１００を算出した。
の３菌株のビフィドバクテリウム・ブレーベを用いて、
次の方法により試験を行った。 （１）内 容 上記各菌株をスターターとして０．５％酵母エキス
入り１２％還元脱脂乳（１１５℃、２０分間滅菌）培地
にて３７℃、１８時間培養した。 １６％還元脱脂乳
１５０ｍｌを３００ｍｌ容量の三角フラスコに入れ、綿
栓を施し１１５℃、２０分間滅菌後、３７℃まで撹拌冷
却した。その後、上記スターターを２％接種し撹拌分散
後、３７℃で培養を行い生菌数、乳酸酸度、ｐＨを経時
的に測定した。また、増殖率（％）＝各時間生菌数／初
期生菌数×１００を算出した。
【００２５】（２）結 果 結果を表４に示す。表４から明らかなようにＳＢＲ３２
１２は、培養時間２４時間後に増殖率１０００％以上と
なり、４８時間後にも５００％を維持していた。一方、
他の２菌株は２４時間後に増殖率４００％程度で４８時
間後には５０％以下と増殖性を示さなかった。
１２は、培養時間２４時間後に増殖率１０００％以上と
なり、４８時間後にも５００％を維持していた。一方、
他の２菌株は２４時間後に増殖率４００％程度で４８時
間後には５０％以下と増殖性を示さなかった。
【００２６】
【表４】
【００２７】
【発明の効果】現在までに知られているビフィズス菌の
耐酸性株、酸素耐性株は、ビフィドバクテリウム・ビフ
ィダムの耐酸性及び酸素耐性株、ビフィドバクテリウム
・ブレーベの酸素耐性株あるいは耐酸性株、ビフィドバ
クテリウム・ロンガムの耐酸性あるいは過酸化水素耐性
株などが挙げられる。しかしながら、ビフィドバクテリ
ウム・ブレーベの耐酸性と酸素耐性の両特性を持つ菌株
は、知られていなかった。そこで、本発明者らは、健康
な母乳栄養児の糞便から分離した中で好気的発育に優れ
たものを選び出し、さらに低ｐＨの緩衝液で処理したも
のの中から最も生育性に優れた菌株ＳＢＲ３２１２を分
離した。
耐酸性株、酸素耐性株は、ビフィドバクテリウム・ビフ
ィダムの耐酸性及び酸素耐性株、ビフィドバクテリウム
・ブレーベの酸素耐性株あるいは耐酸性株、ビフィドバ
クテリウム・ロンガムの耐酸性あるいは過酸化水素耐性
株などが挙げられる。しかしながら、ビフィドバクテリ
ウム・ブレーベの耐酸性と酸素耐性の両特性を持つ菌株
は、知られていなかった。そこで、本発明者らは、健康
な母乳栄養児の糞便から分離した中で好気的発育に優れ
たものを選び出し、さらに低ｐＨの緩衝液で処理したも
のの中から最も生育性に優れた菌株ＳＢＲ３２１２を分
離した。
【００２８】さらに、この分離株ＳＢＲ３２１２の性状
把握試験を行った。その結果は、（１）分類学的性状試
験からビフィドバクテリウム・ブレーベに属する菌株で
あると同定した。 （２）耐酸性（低ｐＨ緩衝液）の比較試験からｐＨ３．
８、４．０、４．３、４．６、５．０のいずれのｐＨに
おいても他のB. breveの３菌株（ＡＴＣＣ１５７００、
ＪＣＭ７０１６、市販品分離株Ａ）より生残性が高く、
特に５℃で１０日間保存した場合、ｐＨ４．３において
３７．６９％、ｐＨ４．０で７．１０％、ｐＨ３．８で
０．３１％の生残性を示すのに対して、他の３菌株はｐ
Ｈ４．３以下において生残率がいずれも１％未満だっ
た。 （３）耐酸性（還元脱脂乳）の比較試験では、生残性の
劣る市販品分離株Ａを対照から除き試験を行った。この
試験からｐＨ４．６では、他の２菌株と５℃、７日間の
保存でほとんど差がなかった。しかし、ｐＨ４．１で
は、７日目で８．２１％の生残率を示すのに対して、他
の２菌株は０．００１％未満の生残率を示し顕著な差が
あった。 （４）好気的生育性試験では、培養時間２４時間後に増
殖率１０００％以上となり、４８時間後にも５００％を
維持していた。一方、他の２菌株は２４時間後に増殖率
４００％程度で４８時間後には５０％以下と増殖性を示
さなかった。このことから、溶存酸素を多く含んだ還元
脱脂乳培地において増殖性があると考える。となった。
把握試験を行った。その結果は、（１）分類学的性状試
験からビフィドバクテリウム・ブレーベに属する菌株で
あると同定した。 （２）耐酸性（低ｐＨ緩衝液）の比較試験からｐＨ３．
８、４．０、４．３、４．６、５．０のいずれのｐＨに
おいても他のB. breveの３菌株（ＡＴＣＣ１５７００、
ＪＣＭ７０１６、市販品分離株Ａ）より生残性が高く、
特に５℃で１０日間保存した場合、ｐＨ４．３において
３７．６９％、ｐＨ４．０で７．１０％、ｐＨ３．８で
０．３１％の生残性を示すのに対して、他の３菌株はｐ
Ｈ４．３以下において生残率がいずれも１％未満だっ
た。 （３）耐酸性（還元脱脂乳）の比較試験では、生残性の
劣る市販品分離株Ａを対照から除き試験を行った。この
試験からｐＨ４．６では、他の２菌株と５℃、７日間の
保存でほとんど差がなかった。しかし、ｐＨ４．１で
は、７日目で８．２１％の生残率を示すのに対して、他
の２菌株は０．００１％未満の生残率を示し顕著な差が
あった。 （４）好気的生育性試験では、培養時間２４時間後に増
殖率１０００％以上となり、４８時間後にも５００％を
維持していた。一方、他の２菌株は２４時間後に増殖率
４００％程度で４８時間後には５０％以下と増殖性を示
さなかった。このことから、溶存酸素を多く含んだ還元
脱脂乳培地において増殖性があると考える。となった。
【００２９】このように、ＳＢＲ３２１２は、（２）、
（３）の低ｐＨ緩衝液及び還元脱脂乳培養物において、
生残率が他のB. breveの生残率との間には顕著な差が認
められ、優れた耐酸性を有する。また、（４）の好気的
生育性でも増殖率が他のビフィドバクテリウム・ブレー
ベの増殖率との間には差が認められ、酸素耐性も有す
る。このことは、ＳＢＲ３２１２が優れた耐酸性と酸素
耐性を持ち、従来の文献に記載されていない優れた新規
菌株である。
（３）の低ｐＨ緩衝液及び還元脱脂乳培養物において、
生残率が他のB. breveの生残率との間には顕著な差が認
められ、優れた耐酸性を有する。また、（４）の好気的
生育性でも増殖率が他のビフィドバクテリウム・ブレー
ベの増殖率との間には差が認められ、酸素耐性も有す
る。このことは、ＳＢＲ３２１２が優れた耐酸性と酸素
耐性を持ち、従来の文献に記載されていない優れた新規
菌株である。
【００３０】また、この菌株を使用する培養物、その加
工物での保存中の生菌数は、低下が少なく広いｐＨ域の
飲食物への加工が可能であり、特に、ドリンクヨーグル
ト、酸性乳飲料等への使用には、高い生菌数を維持でき
る。また、整腸剤として使用することができる。さらに
飼料に添加することもできる。
工物での保存中の生菌数は、低下が少なく広いｐＨ域の
飲食物への加工が可能であり、特に、ドリンクヨーグル
ト、酸性乳飲料等への使用には、高い生菌数を維持でき
る。また、整腸剤として使用することができる。さらに
飼料に添加することもできる。
【００３１】
【実施例１】１８％還元脱脂乳を滅菌後、攪拌冷却した
培地にあらかじめ培養しておいたビフィドバクテリウム
・ブレーベＳＢＲ３２１２スターターとラクトバチルス
・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）
スターターをそれぞれ１％づつ接種し、３７℃で１８時
間、好気的条件下で培養した。この培養液５０００ｍｌ
と蔗糖８００ｇを含むシロップ５０００ｍｌとを混合
し、均質機で均質化して発酵乳を得た。製造直後の製品
の乳酸酸度０．８０％、ｐＨ４．３０でビフィドバクテ
リウム・ブレーベＳＢＲ３２１２の生菌数２．０×１０
9 ／ｍｌ、ラクトバチルス・カゼイの生菌数６．５×１
０8 ／ｍｌであり、保存７日目でビフィドバクテリウム
・ブレーベＳＢＲ３２１２の生菌数５．３×１０7 ／ｍ
ｌ、ラクトバチルス・カゼイの生菌数５．８×１０8 ／
ｍｌとなり、ビフィドバクテリウム・ブレーベＳＢＲ３
２１２の生残率は２．７％であった。
培地にあらかじめ培養しておいたビフィドバクテリウム
・ブレーベＳＢＲ３２１２スターターとラクトバチルス
・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）
スターターをそれぞれ１％づつ接種し、３７℃で１８時
間、好気的条件下で培養した。この培養液５０００ｍｌ
と蔗糖８００ｇを含むシロップ５０００ｍｌとを混合
し、均質機で均質化して発酵乳を得た。製造直後の製品
の乳酸酸度０．８０％、ｐＨ４．３０でビフィドバクテ
リウム・ブレーベＳＢＲ３２１２の生菌数２．０×１０
9 ／ｍｌ、ラクトバチルス・カゼイの生菌数６．５×１
０8 ／ｍｌであり、保存７日目でビフィドバクテリウム
・ブレーベＳＢＲ３２１２の生菌数５．３×１０7 ／ｍ
ｌ、ラクトバチルス・カゼイの生菌数５．８×１０8 ／
ｍｌとなり、ビフィドバクテリウム・ブレーベＳＢＲ３
２１２の生残率は２．７％であった。
【００３２】
【実施例２】１８％還元脱脂乳を滅菌後、攪拌冷却した
培地にあらかじめ培養しておいたビフィドバクテリウム
・ブレーベＳＢＲ３２１２スターターを２％接種し、３
７℃で４８時間、好気的条件下で培養した。同様にラク
トバチルス・カゼイスターターも３７℃で４８時間培養
した。培養後、ビフィドバクテリウム・ブレーベＳＢＲ
３２１２培養液２５００ｍｌとラクトバチルス・カゼイ
培養液２５００ｍｌと蔗糖８００ｇを含むシロップ５０
００ｍｌとを混合し、酸味料を加えてから均質機で均質
化して発酵乳を得た。製造直後の製品の乳酸酸度０．７
３％、ｐＨ４．５４でビフィドバクテリウム・ブレーベ
ＳＢＲ３２１２の生菌数１．２×１０8 ／ｍｌ、ラクト
バチルス・カゼイの生菌数７．８×１０8 ／ｍｌであ
り、保存７日目でビフィドバクテリウム・ブレーベＳＢ
Ｒ３２１２の生菌数１．１×１０7 ／ｍｌ、ラクトパチ
ルス・カゼイの生菌数６．３×１０8 ／ｍｌとなり、ビ
フィドバクテリウム・ブレーベＳＢＲ３２１２の生残率
は９．２％であった。
培地にあらかじめ培養しておいたビフィドバクテリウム
・ブレーベＳＢＲ３２１２スターターを２％接種し、３
７℃で４８時間、好気的条件下で培養した。同様にラク
トバチルス・カゼイスターターも３７℃で４８時間培養
した。培養後、ビフィドバクテリウム・ブレーベＳＢＲ
３２１２培養液２５００ｍｌとラクトバチルス・カゼイ
培養液２５００ｍｌと蔗糖８００ｇを含むシロップ５０
００ｍｌとを混合し、酸味料を加えてから均質機で均質
化して発酵乳を得た。製造直後の製品の乳酸酸度０．７
３％、ｐＨ４．５４でビフィドバクテリウム・ブレーベ
ＳＢＲ３２１２の生菌数１．２×１０8 ／ｍｌ、ラクト
バチルス・カゼイの生菌数７．８×１０8 ／ｍｌであ
り、保存７日目でビフィドバクテリウム・ブレーベＳＢ
Ｒ３２１２の生菌数１．１×１０7 ／ｍｌ、ラクトパチ
ルス・カゼイの生菌数６．３×１０8 ／ｍｌとなり、ビ
フィドバクテリウム・ブレーベＳＢＲ３２１２の生残率
は９．２％であった。
【００３３】
【実施例３】ポリペプトン４０ｇ、ミートエキス２０
ｇ、酵母エキス４０ｇ、乳糖１２０ｇ、ＫＨ2 ＰＯ4 ２
０ｇ、Ｋ2 ＨＰＯ4 ４ｇ、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウ
ム２ｇを含む４０００ｍｌの培地を濾過滅菌した。そし
て、先に同一組成の培地により３７℃で１８時間培養し
たビフィドバクテリウム・ブレーベＳＢＲ３２１２のシ
ードカルチャー２００ｍｌを前記の培養液に接種し、３
７℃で１８時間培養した。培養後の生菌数は、３．２×
１０9 ／ｍｌであった。次いで、遠心分離機で菌体を集
め、培地と同量の９５℃で３０分間殺菌の生理食塩水に
再懸濁し、再度遠心分離して集菌した。得られた菌体を
９５℃、３０分間殺菌した脱脂粉乳１００ｇ、グルタミ
ン酸ナトリウム１０ｇを含む１０００ｍｌの分散液に懸
濁し、凍結乾燥を行った。得られた１１３ｇの粉末は、
生菌数が１．０×１０11／ｇであった。
ｇ、酵母エキス４０ｇ、乳糖１２０ｇ、ＫＨ2 ＰＯ4 ２
０ｇ、Ｋ2 ＨＰＯ4 ４ｇ、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウ
ム２ｇを含む４０００ｍｌの培地を濾過滅菌した。そし
て、先に同一組成の培地により３７℃で１８時間培養し
たビフィドバクテリウム・ブレーベＳＢＲ３２１２のシ
ードカルチャー２００ｍｌを前記の培養液に接種し、３
７℃で１８時間培養した。培養後の生菌数は、３．２×
１０9 ／ｍｌであった。次いで、遠心分離機で菌体を集
め、培地と同量の９５℃で３０分間殺菌の生理食塩水に
再懸濁し、再度遠心分離して集菌した。得られた菌体を
９５℃、３０分間殺菌した脱脂粉乳１００ｇ、グルタミ
ン酸ナトリウム１０ｇを含む１０００ｍｌの分散液に懸
濁し、凍結乾燥を行った。得られた１１３ｇの粉末は、
生菌数が１．０×１０11／ｇであった。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 白岩 清隆 愛知県小牧市篠岡１丁目６番地 県営篠 岡住宅８棟501号 (72)発明者 三橋 重之 東京都田無市西原町４丁目３−47 西原 グリーンハイツ７−302 (56)参考文献 特開 昭61−205481（ＪＰ，Ａ) 特開 昭53−109961（ＪＰ，Ａ) 特公 昭56−42250（ＪＰ，Ｂ１) (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) A23C 1/00 - 23/00 C12N 1/20
Claims (1)
- 【請求項１】 高い耐酸性及び酸素耐性をもつ、ビフィ
ドバクテリウム・ブレーベ(Bifidobacterium breve) S
BR3212 (微工研菌寄 11915号) 。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3112402A JP2922013B2 (ja) | 1991-04-17 | 1991-04-17 | 耐酸性及び酸素耐性を有する新規ビフィズス菌 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3112402A JP2922013B2 (ja) | 1991-04-17 | 1991-04-17 | 耐酸性及び酸素耐性を有する新規ビフィズス菌 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04320642A JPH04320642A (ja) | 1992-11-11 |
| JP2922013B2 true JP2922013B2 (ja) | 1999-07-19 |
Family
ID=14585761
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3112402A Expired - Lifetime JP2922013B2 (ja) | 1991-04-17 | 1991-04-17 | 耐酸性及び酸素耐性を有する新規ビフィズス菌 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2922013B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007010977A1 (ja) | 2005-07-21 | 2007-01-25 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | 新規ビフィドバクテリウム属細菌及びその利用 |
| WO2011105335A1 (ja) | 2010-02-24 | 2011-09-01 | 株式会社ヤクルト本社 | 新規ビフィドバクテリウム属細菌の作出方法 |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6306638B1 (en) | 1996-10-22 | 2001-10-23 | Food Industry Research And Development Institute | Mutant bifidobacteria strains with acid, bile salt and oxygen tolerance |
| JP4046389B2 (ja) * | 1997-09-04 | 2008-02-13 | 株式会社ヤクルト本社 | ビフィドバクテリウム・ブレーベ及びこれを用いた発酵豆乳 |
| ATE291353T1 (de) * | 1999-05-07 | 2005-04-15 | Gervais Danone Sa | Verwendung von milchsaürebakterien bei der herstellung von fermentierten milchprodukten zur behandlung von verringerten immunitätsebenen |
| WO2001030167A1 (en) * | 1999-10-28 | 2001-05-03 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Fermented foods containing bifidobacterium |
| ATE483791T1 (de) * | 2001-11-05 | 2010-10-15 | Yakult Honsha Kk | Bakterium des genus bifidobacterium und vergorene lebensmittel, bei denen dieses eingesetzt wird |
| WO2003048343A1 (en) | 2001-12-07 | 2003-06-12 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | Bifidobacterium longum |
| BG110506A (bg) | 2009-10-27 | 2011-05-31 | "Селур Вк Холдинг" Еоод | Нови щамове млечно-кисели бактерии и техни комбинации за получаване на пробиотични препарати |
| CN102604855B (zh) * | 2011-12-15 | 2013-09-11 | 上海交通大学 | 一株长双歧杆菌sqs7-31及其制备方法和应用 |
| CN111876352B (zh) * | 2020-07-28 | 2022-07-08 | 科兴生物制药股份有限公司 | 一种耐氧耐酸婴儿双歧杆菌及其筛选方法 |
| CN112442464B (zh) * | 2020-12-02 | 2022-09-02 | 扬州大学 | 耐氧化胁迫的短双歧杆菌grx201及其应用 |
-
1991
- 1991-04-17 JP JP3112402A patent/JP2922013B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007010977A1 (ja) | 2005-07-21 | 2007-01-25 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | 新規ビフィドバクテリウム属細菌及びその利用 |
| US8058051B2 (en) | 2005-07-21 | 2011-11-15 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Bacterium belonging to the genus Bifidobacterium and utilization of the same |
| WO2011105335A1 (ja) | 2010-02-24 | 2011-09-01 | 株式会社ヤクルト本社 | 新規ビフィドバクテリウム属細菌の作出方法 |
| US8889120B2 (en) | 2010-02-24 | 2014-11-18 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Method for constructing novel bacterium belonging to the genus Bifidobacterium |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH04320642A (ja) | 1992-11-11 |
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