ES2239194T3 - Nitronas ciclicas y composiciones farmaceuticas que las contienen. - Google Patents

Nitronas ciclicas y composiciones farmaceuticas que las contienen.

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Abstract

Un compuesto seleccionado de: N-óxido de 2, 2-dimetil-1, 2-dihidrobenzo[f]isoquinolina y N-óxido de 3, 3-dimetil-3, 4-dihidrobenzo[h]isoquinolina.

Description

Nitronas cíclicas y composiciones farmacéuticas que las contienen.
La presente invención está dirigida a las nitronas cíclicas, a su utilización en la prevención de la alteración oxidativa del tejido por radicales libres, a su utilización en el tratamiento de numerosas enfermedades en las que los radicales libres dañan o destruyen los tejidos por oxidación, y a las composiciones farmacéuticas que contienen estas nitronas cíclicas.
Antecedentes de la invención
Las moléculas que contienen un electrón desparejado se denominan radicales libres. Los radicales libres son sumamente reactivos. La reducción parcial del oxígeno por los sistemas biológicos de los mamíferos produce radicales libres, superóxido e hidroxilo. También se produce el producto de la reducción de dos electrones del oxígeno, peróxido de hidrógeno, pero no contiene electrones desparejados. Sin embargo, normalmente es un precursor del radical hidroxilo que es el más reactivo de los tres. El radical libre hidroxilo reaccionará con casi cualquier biomolécula. Ejemplos de dichas biomoléculas incluyen los ácidos nucleicos, los lípidos y las proteínas. El radical hidroxilo oxidará la biomolécula, ya sea extrayendo un átomo de hidrógeno de la biomolécula o añadiéndolo directamente a la propia biomolécula. Esta oxidación por el radical libre hidroxilo transforma la biomolécula en un radical que reaccionará fácilmente con el oxígeno molecular, formando de este modo el denominado radical libre peroxilo. El radical peroxilo resultante reaccionará con otra biomolécula que produce un radical libre, que se transformará asimismo en otro radical peroxilo descrito anteriormente. La presencia inicial del radical libre del oxígeno inicia una reacción en cadena en la que se oxidan numerosas moléculas en el organismo. Mediante los lípidos oxidantes, estos radicales libres pueden afectar las membranas celulares, su permeabilidad, los canales iónicos, el funcionamiento celular, etc. Oxidando las proteínas, se pueden alterar las enzimas, la función muscular, los nervios, etc. Oxidando los ácidos nucleicos, se pueden afectar el ADN, ARN y sus productos de expresión.
La investigación reciente ha indicado que concentraciones excesivas de estos radicales libres de oxígeno están relacionadas con la alteración del tejido que tiene lugar en numerosas enfermedades tales como la embolia cerebral, el infarto de miocardio, la demencia senil, el choque séptico, etc. La embolia pulmonar y el choque séptico en particular son enfermedades en las que la alteración del tejido producida por radicales es predominante. La investigación reciente ha demostrado asimismo que se pueden utilizar agentes atrapadores del spin para terminar la reacción en cascada descrita anteriormente, impidiendo o minimizando de este modo cualquier alteración del tejido. Los radicales libres con oxígeno y los radicales centrados en el carbono reaccionarán más fácilmente con el agente atrapador del spin que con una biomolécula. La reacción con el agente atrapador del spin dará como resultado la formación de un aducto de radical estable y de este modo terminará la reacción en cadena que está normalmente asociada a los radicales del oxígeno. La mayoría de las lesiones del tejido proceden de la reacción en cadena que inicia el radical de oxígeno en lugar del propio radical de oxígeno. El mecanismo de acción por el que los radicales de oxígeno producen la alteración del tejido, así como la utilización de los agentes atrapadores del spin para impedir esta alteración, está descrita más en detalle por Floyd, FASEB Journal, vol. 4, página 2588 (1990).
Las nitronas N-óxido de 3-4-dihidro-3,3-dimetilisoquinolina (A) y N-óxido de espiro[ciclohexano-1,3'] 3,4-dihidroisoquinolina (B) (Figura 1) son análogos cícliclos del conocido radical antioxidante PBN, que se había desarrollado anteriormente. La Inserción del grupo nitrona en un sistema cíclico debería dar una molécula esencialmente plana en cuyo orbital adecuado existe solapamiento entre el doble enlace de la nitrona y el anillo aromático. Los estudios de modelado molecular sugieren de hecho que en la conformación de energía más baja de A, el doble enlace de la nitrona es coplanar con el anillo aromático, mientras que la correspondiente relación con PBN presenta aprox. 30º de desviación con respecto a la coplanariedad. Estas predicciones se han apoyado en la cristalografía de rayos X. Este aumento del grado de conjugación, en comparación con PBN, es de esperar que realice la función de nitrona en los análogos cíclicos más accesibles a los radicales, y produzcan radicales producto más estables. Experimentalmente, tanto A como B son inhibidores más potentes de la oxidación de los lípidos y mejores trampas para el radical hidroxilo, que PBN. Véase la patente U.S. nº 5.397.789, concedida el 14 de marzo de 1995, incorporada a esta memoria como referencia.
Figura 1
1
El documento EP-A-532 027, que pertenece a la misma familia de patentes de la patente U.S. citada anteriormente, da a conocer, entre otras, las nitronas cíclicas de fórmula I en la que R_{1} y R_{2} representa cada una independientemente un alquilo C_{1-3} o R_{1} y R_{2} forman conjuntamente un anillo de alquileno C_{5-6}, el anillo X representa fenilo opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado de entre alquilo C_{1-3}, y R_{3} representa hidrógeno.
Asimismo, Journal of Biological Chemistry, vol. 269, páginas 28055-28061, 1994, describe la inhibición de la oxidación de la lipoproteína de baja densidad por algunas de las nitronas descritas también en el documento EP-A-532 027.
Compendio de la invención
Los compuestos dados a conocer en la presente memoria son nitronas cíclicas seleccionadas de:
N-óxido de 2,2-dimetil-1,2-dihidrobenzo[f]isoquinolina;
N-óxido de 3,3-dimetil-3,4-dihidrobenzo[h]isoquinolina;
N-óxido de 5,5-dimetil-4,5-dihidrotieno[2,3-c]piridina;
N-óxido de 6,6-dimetil-6,7-dihidrotieno[2,3-c]piridina;
N-óxido de 5,5-dimetil-4,5-dihidrofuro[2,3-c]piridina.
Descripción detallada de la invención
Se utilizan dos métodos generales para preparar las nitronas cíclicas. Siempre que sea posible se utiliza la "vía formamida".
La "vía isocianato" se utiliza cuando falla la "vía formamida" debido a la sensibilidad al ácido de los sustratos o de los productos intermedios de la reacción. Estas vías se describirán con detalle para los ejemplos representativos.
La vía formamida
A continuación se ilustra la "vía formamida" para la síntesis de los compuestos 9 y 10 de naftaleno (véase el Esquema 1). La adición de compuestos de Grignard a los ésteres 1 y 2 proporciona los alcoholes terciarios 3 y 4 con buen rendimiento. La reacción de Ritter en estos sustratos con cianuro de sodio da las correspondientes formamidas 5 y 6. La reacción de las formamidas con cloruro de oxalilo, seguida de ciclación con FeCl_{3} e hidrólisis ácida (para escindir el resto oxalato), da las iminas cíclicas 7 y 8 (véase Larsen, R.D.; R.A.; Corley, E.G.; Davis, P.; Grabowski, E.J.J.; Reider, P.J.; Shinkai, I., J. Org. Chem. 1991, 56, 6034). Se obtiene un solo regioisómero en cada caso. La oxidación a las nitronas 9 y 10 procede más rápida y eficazmente cuando se reducen las iminas en primer lugar a las correspondientes aminas con borohidruro de sodio. En los esquemas, ejemplos y textos siguientes deberá entenderse que el catalizador de tungstato de sodio (Na_{2}WO_{4}) es la forma dihidrato, es decir, Na_{2}WO_{4}\cdot2H_{2}O.
Esquema 1
2
El compuesto 11 se puede preparar también por esta vía formamida, o una de sus variaciones.
Figura 2
3
La vía isocianato
En el Esquema 2 se muestra la vía isocianato. La alquilación del isobutirato de etilo con clorometil tiofeno y posterior hidrólisis del éster (14), da el sustrato 15 de reconfiguración de Curtius. El isocianato 16 se forma sin dificultad, y se aísla fácilmente tras una preparación acuosa. El compuesto 16 se cicla rápidamente en el tratamiento con H_{3}PO_{4} anhidro en dicloroetano (DCE) caliente. Umezawa, B.; Hoshino, O.; Sawaki, S.; Mori, K. Chem. Pharm. Bull. 1980, 28, 1003. La lactama 17 resultante se reduce a la correspondiente amina con borano, con lo cual la oxidación convencional da 18.
Esquema 2
4
Una vía análoga se utiliza para preparar el análogo 23 de furano, BF_{3} eterato que demuestra ser el mejor catalizador de ciclación en este caso.
5
El compuesto A (véase Figura 1, supra) produce sedación cuando se administra en dosis altas a ratas. De hecho, desde el principio, un objetivo principal ha sido encontrar un potente antioxidante que carezca de este efecto secundario observado con el compuesto A. A este respecto, las siguientes observaciones fueron de especial interés. El efecto sedativo aumenta y disminuye rápidamente, mientras que la actividad in vivo persiste durante un periodo de tiempo considerablemente más prolongado. La disminución en la sedación coincide con la aparición de un metabolito principal de A, y esto conduce a la especulación de que el metabolito conserva la actividad antioxidante del precursor, pero no produce sedación.
Evaluación del compuesto
La oxidación de macromoléculas celulares, incluyendo los lípidos y el ADN, ha estado implicada en la etiología de numerosas enfermedades. En el sistema nervioso central (SNC), se han propuesto tanto la embolia cerebral como el neurotraumatismo para iniciar una secuela de casos oxidativos que conducen por último a la muerte de las células neuronales Kontos, H.A. (1989) Chem.-Biol. Interactions 72, 229-255. Las membranas de las neuronas cerebrales contienen un gran porcentaje de ácidos grasos poliinsaturados y una abundancia de hierro y ácido ascórbico. En conjunto, estas propiedades proporcionan tejido neural muy vulnerable a la formación de radicales de oxígeno y a la peroxidación de lípidos. El hierro y el ácido ascórbico pueden participar en la formación de radicales tal como el radical hidroxilo (^{\cdot}OH) que es capaz de iniciar la peroxidación de lípidos. Las respuestas celulares al medio isquémico o hipóxico que surgen tras la oclusión de una arteria o tras la lesión traumática favorecen la generación de radicales de oxígeno. Por ejemplo, el transporte aberrante de electrones en los mitocondrias debido a la falta de oxígeno conduce a un aumento al reducir los equivalentes que pueden reducir parcialmente el dioxígeno para producir superóxido (O_{2}^{\cdot -}) y peróxido de hidrógeno (H_{2}O_{2}) en la reperfusión. La acumulación de catecolamina, la transformación de xantina deshidrogenasa en su forma oxidasa, la liberación de ácido araquidónico de los fosfolípidos y la atracción de los neutrófilos al tejido isquémico son otros cambios descritos que favorecen todos un medio muy oxidante.
Los modelos animales de la isquemia global y focal han proporcionado pruebas para la producción de radicales de oxígeno y la aparición de la peroxidación de lípidos. Se han observado aumentos en dienos conjugados derivados de lípidos y disminuciones del antioxidante protector \alpha-tocoferol (vitamina E) en ratas sometidas a reperfusión con isquemia en el cerebro. Hall, E.D. y Braughler, J.M. (1989) J. Free Rad. Biol. Med. 6, 303-313. Según esto, el tejido cerebral de los animals insuficiente en vitamina E fue más sensible a la alteración inducida por la isquemia mientras que el enriquecimiento con vitamina E presentaba algún efecto protector. Yoshida, S., Busto, R., Watson, B.D., Santiso, M., y Ginsberg, M. (1985) J. Neurochem. 44, 1593-1601. El pentano producido en la peroxidación de lípidos se ha observado en la expiración de gerbos sometidos a isquemia global y reperfusión, lo que apoya también la argumentación de que la oxidación de los lípidos neuronales se produce en estas condiciones. Mickel, H.S., Vaishnav, S.Y.N., Kempski, O., von Lubitz, D., Weiss, J.F., y Feuerstein, G. (1987) Stroke 18, 426-430.
Los casos oxidativos tras la reperfusión con isquemia del CNS no están limitados a los lípidos. En los gerbos, se produjo isquemia global en la formación del carbonilo de la proteína inducida por oxidación y pérdida de actividad de glutamina sintetasa, una enzima susceptible de la inactivación oxidativa. Oliver, C.N., Starke-Reed, P.E., Stadtman, E.R., Liu, G.J., Carney, J.M., y Floyd, R.A. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 5144-5147.
Sometiendo secciones de corteza cerebral a hipoxia y reoxigenación o inyección de hierro en el tejido del SNC conduce a una pérdida de actividad de Na^{+}, K^{+}-ATPasa que puede reflejar la oxidación directa de la proteína y/o la perturbación de la membrana en la bicapa asociada. Taylor, M.D., Mellert, T.K., Parmentier, J.L., y Eddy, L.J. (1985) Brain Res. 346, 268-273; Anderson, D.K. y Jeans, E.D. (1983) Neurochem. Pathol. 1, 249-264.
Mientras que las pruebas que implican la formación del radical de oxígeno como causa de la alteración neuronal permanecen muy circunstanciales, se han ensayado la capacidad de varias terapias antioxidantes para prevenir o minimizar la pérdida de viabilidad celular. Tal como se mencionó anteriormente, la administración previa de vitamina E ha demostrado proporcionar protección parcial. Se ha conseguido éxito limitado con varias formas de superóxido dismutasa (SOD) y los animales transgénicos que sobreexpresan SOD son más resistentes a la alteración inducida por la isquemia. Kinouchi, H. Epstein, C.J., Mizui, T., Carlson, E., Chen, S.F., y Chan, P.H. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88, 11158-11162. Recientemente, los investigadores han publicado que la trampa de spin de nitronas alfa-fenil-terc-butil-nitrona (PNB) puede mejorar significativamente la pérdida de células neuronales y las insuficiencias neurológicas inducidas por la embolia cerebral en un modelo de gerbo. Phillis, J.W., y Clough-Helfman, C. (1990) Med. Sci. Res. 18, 403-404. Yue, T.-L., Gu, J.-L., Lysko, P.G., Cheng, H.-Y., Barone, F.C., y Feuerstein, G. (1992) Brain Res. 574, 193-197. Además, PBN demostró por espectroscopía de resonancia de spin electrónico (RSE) que atrapa radicales libres derivados de lípidos en el tejido cortical de estos animales.
Se han utilizado durante numerosos años trampas de spin de nitronas tales como PBN para permitir el atrapamiento de radicales reactivos de vida corta tales como \cdotOH. El nitróxido resultante es un radical más estable y se puede detectar por espectroscopia de resonancia de spin electrónico. Más recientemente, los investigadores han demostrado que las nitronas como PBN pueden inhibir la oxidación de lípidos incluyendo las lipoproteínas y proteínas de baja densidad tal como la glutamato sintetasa. Thomas, C. E., Ku, G., y Kalyanaraman, B. (1994) J. Lipid Res. 35, 610-619; Thomas, C.E., Ohlweiler, D.F., y Kalyanaraman, B. (1994) J. Biol. Chem. 269, 28055-28061 (utilización de antioxidantes en el tratamiento de aterosclerosis); Carney, J-M., Starke-Reed, P.E., Oliver, C.N., Landrum, R.W., Cheng, M.S., Wu, J.F., y Floyd, R.A. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88, 3633-3636.
Otra situación patofisiológica en la que se ha propuesto con frecuencia una función para los radicales oxígeno es el choque séptico, que se puede caracterizar como la respuesta generalizada a una infección grave. La activación resultante de las células inflamatorias tales como los leucocitos es de esperar que produzca la formación de O_{2}\cdot- y H_{2}O_{2}. De hecho, las pruebas de radicales libres y de alteración del tejido mediada por radicales libres ha sido descrita en modelos animales de choque endotóxico y en el hombre con choque séptico. Takeda, K., Shimada, Y., Okada, T., Amono, M., Sakai, T., y Yoshiya, I. (1986) Crit. Care Med. 14, 719-723. Novelli, G.P., Angiolini, P., Livi, P., y Paternostro, E. (1989) Resuscitation 18, 195-205 Biasi, F., Chiarpotto, E., Lanfranco, G., Capra, A., Zummo, U., Chiappino, I., Scavazaa, A., Albano, E., y Poli, G. (1994) Free Rad. Biol. Med. 17, 225-233. De manera interesante, se ha demostrado que PBN reduce la mortalidad asociada a endotoxinas en ratas. Hamburger, S.A., y McCay, P.B. (1989) Circ. Shock 29, 329-334. Así pues, la utilización de trampas de spin como PBN puede proporcionar nuevos productos terapéuticos para el tratamiento de varias enfermedades. Véase "Prospects for the Use of Antioxidant Therapies", Drugs 49(3) 1995, 345-361. Además, la capacidad de las nitronas para atrapar y estabilizar los radicales puede proporcionar medios potenciales para identificar los radicales que se generan in vivo. Por estas razones, se ha sintetizado y evaluado una nueva serie de trampas de spin de nitrona para la actividad de atrapamiento de radicales in vitro.
Materiales y métodos
Se prepararon nitronas cíclicas tal como se describió anteriormente.
Productos químicos
2-desoxi-D-ribosa, FeCl_{2}, FeCl_{3}, EDTA disódico, H_{2}O_{2} al 30%, ácido ascórbico, ácido tiobarbitúrico (TBA), solución al 100% de ácido tricloroacético (TCA), hidroxitolueno butilado (BHT), NADPH, p-nitrosodimetilanilina (p-NDA), glutatión reducido (GSH), anhídrido dietilentriaminpentaacético (DETAPAC), xantina, xantina oxidasa (de mantequilla de la leche), N-metil-D-glucamina, HEPES, bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil tetrazolio (MTT), Cu,Zn-superóxido dismutasa (SOD) y 1,1,3,3-tetraetoxipropano se adquirieron en Sigma Chemical Co. La fosfatidilcolina de la soja fue un producto de Avanti Polar Lipids mientras que PBN y las \beta-ciclodextrinas se adquirieron 15 en Aldrich. Los suministros de cultivo celular se adquirieron en Gibco o Sigma. Todos los demás productos químicos eran de la máxima calidad disponible.
Se evaluó el atrapamiento de radicales in vitro por las nitronas cíclicas mediante: 1) examen de la capacidad de las nitronas para inhibir la oxidación de los liposomas con fosfatidilcolina de soja; 2) evaluación del atrapamiento de \cdotOH utilizando p-nitrosodimetilanilina o 2-desoxirribosa y 3) atrapamiento de spin por ESR para \cdotOH y O_{2}\cdot-.
1. Inhibición de la peroxidación de lípidos
Para la determinación de la capacidad para inhibir la peroxidación de lípidos, se prepararon liposomas a partir de fosfatidilcolina de soja por inyección de etanol. Se secó una alícuota de fosfatidilcolina en un vial de vidrio pequeño en N_{2}. Se resolubilizó en etanol a un volumen 10 ml por ml de liposomas. Normalmente, se prepararon volúmenes de 8 ml de liposomas por tubo y a continuación se combinaron todas las preparaciones para proporcionar una mezcla homogénea para el ensayo. El etanol que contiene el lípido fue absorbido en una jeringuilla Hamilton e inyectado en el volumen apropiado de NaCl 50 mM, Tris 10 mM, pH 7,0 a 37ºC con mezclado para conseguir una concentración de lípido final de 0,563 mM.
Se añadieron los liposomas a vasos de precipitados de 25 ml en un agitador metabólico Dubnoff a 37ºC. A los liposomas se añadió el compuesto de ensayo (en etanol o tampón), histidina-FeCl_{3}, 250:50 mM final), FeCl_{2} (50 mM final, preparado en agua purgada con N_{2}) y suficiente tampón para conseguir una concentración de lípido final de 0,5 mM. Se iniciaron las oxidaciones mediante la adición de Fe^{2+} y se llevaron a cabo en una atmósfera de aire con agitación. Se extrajeron alícuotas de un ml a 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 y 15 min y se añadieron a 2 ml de ácido tiobarbitúrico al 0,67%: ácido tricloroacético al 10% (2:1) en HCl 0,25 N, conteniendo 0,05 ml de BHT al 2% para terminar la oxidación. Thomas, C.E., Malean, L.R., Parker, R.A., y Ohlweiler, D.F. (1992) Lipids 27, 543-550.
Se calentaron las muestras a 100ºC durante 20 min en tubos de vidrio de borosilicato de 13 \times 100 mm cubiertos con bolitas para impedir la evaporación. Tras el enfriamiento, se centrifugaron los tubos a 3.000 rpm durante 10 min y se leyó la absorbancia del sobrenadante resultante a 532 nm - 580 nm. Se determinó cuantitativamente las sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico (TBARS) por comparación con una curva patrón de equivalentes de malondialdehído generada por hidrólisis ácida catalizada de 1,1,3,3-tetraetoxipropano. Se determinó el IC_{50} utilizando el valor del tiempo a los 15 min con el programa informático GraphPad INPLOT 4. Este programa utiliza una regresión no lineal con una curva sigmoidea a escala semilogarítmica. Estos resultados están tabulados en la Tabla I.
2. Evaluación como trampas de \cdotOH A. Inhibición del blanqueo de p-NDA
Se evaluó la actividad de atrapamiento de \cdotOH de las nitronas cíclicas mediante varios ensayos. El ensayo primario era dependiente de la capacidad de los compuestos para inhibir el blanqueamiento dependiente de \cdotOH de p-NDA. Bors, W., Michel, C., y Saran, M. (1979) J. Biochem. 95, 621-627. Se preparó el p-NDA. Bors, W., Michel, C., y Saran M. (1979) J. Biochem. 95, 621-627. El p-NDA se preparó a 1 mM en NaCl 50 mM, pH 7,0. Se generó el radical hidroxilo utilizando la química de Fenton (Fe^{2+}/H_{2}O_{2}). Se disolvió FeCl_{2}, en H_{2}O destilada purgada dos veces con N_{2}, hasta una concentración final de 2,5 mM. Se preparó H_{2}O_{2} de una solución madre al 30% (8,8 M) a 1,25 mM en el tampón. Se solubilizaron los compuestos del ensayo en tampón o etanol a una concentración de 1 M o 5 M, dependiendo de la solubilidad.
Las mezclas del ensayo en las cubetas de vidrio contenían soluciones de 0,02 ml de H_{2}O_{2}, 0,02 ml del compuesto del ensayo, 0,10 ml de p-NDA y NaCl 50 mM, pH 7,0 hasta un volumen final de 0,98 ml. La oxidación se inició mediante la adición de 0,02 ml de Fe^{2+} y el blanqueo de p-NDA se controló por la pérdida en absorbancia a 440 nm durante 100 s. Para generar las curvas de concentración, se realizaron diluciones en serie de los compuestos de ensayo de modo que se añadió un volumen constante de 0,02 ml a la mezcla de reacción. El propio etanol es una trampa de \cdotOH, así pues las referencias contenían un volumen igual de etanol para cualquier compuesto del ensayo que requiera este vehículo. Los valores de IC_{50} para las nitronas se determinaron mediante GraphPad InPlot 4 y representan la cantidad de trampa de spin requerida para inhibir el blanqueo de p-NDA al 50%.
B. Inhibición de la degradación de 2-desoxirribosa
En este ensayo, se generan también radicales hidroxilo mediante la reacción de Fenton. Su posterior reacción con 2-desoxirribosa da lugar a que esta molécula de azúcar destruya los productos reactivos con TBA que se pueden medir espectrofotométricamente. El Fe^{3+} utilizado en este ensayo se reduce a Fe^{2+} mediante ácido ascórbico y EDTA se utiliza como quelante del hierro para impedir la alteración específica en el sitio por el hierro directamente en la molécula de desoxirribosa.
Soluciones madre
El tampón utilizado en el ensayo de incubación fue un tampón de Sorenson 30 mM modificado conteniendo NaCl 40 mM, pH 7,4. Se preparó con Na_{2}HPO_{4} 30 mM al 19% y NaH_{2}PO_{4} 30 mM al 81%, con NaCl añadido para dar una concentración de 40 mM.
Se prepararon soluciones madre de la forma siguiente:
1)
2-desoxirribosa 100 mM = 13,41 mg/ml de tampón
2)
H_{2}O_{2} 100 mM = 50 \mul de solución de H_{2}O_{2} al 30% + 4,4 ml de tampón
3)
EDTA 10 mM/ Fe^{3+} 10 mM = 3,72 mg de EDTA disódico + 2,70 mg de FeCl_{3}\cdot6H_{2}O/ml de tampón
4)
Ácido ascórbico 10 mM = 1,761 mg/ml de tampón
5)
Se prepararon antioxidantes con radicales que se deben ensayar como soluciones madre variando desde 5 a 100 mM de tampón, en función de su solubilidad. Los disolventes orgánicos, tales como metanol o etanol, no se podían utilizar ya que cantidades tan pequeñas en volumen como 5 ml del disolvente solo inhibían sustancialmente la degradación de 2-desoxirribosa.
6)
TBA al 0,378%/TCA al 15,2%/BHT al 0,014%
a)
TCA al 16,7% = 20 ml de solución de TCA al 100% + 100 ml de HCl 0,125 N
b)
TBA al 0,416% = 0,500 g de TBA + 120 ml de solución de TCA al 16,7% (calentada)
c)
100 ml de solución TBA/TCA + 10 ml de BHT al 0,15% en etanol
7)
malondialdehído (MDA) 1,0 mM = 200 \mul de MDA 4,4 mM + 0,880 ml de TCA al 10%
a)
MDA 4,4 mM = 10 \mul de 1,1,3,3-tetraetoxipropano 4,4 M + 9,99 de TCA al 10%
Patrones
Se prepararon los patrones de MDA de la forma siguiente:
1)
0,0 mmoles/ml = 1,00 ml de tampón
2)
10 mmoles/ml = 10 \mul de MDA 1,0 mM + 0,990 ml de tampón
3)
25 mmoles/ml = 25 \mul de MDA 1,0 mM + 0,975 ml de tampón
4)
50 mmoles/ml = 50 \mul de MDA 1,0 mM + 0,950 ml de tampón
Incubaciones
Se realizaron incubaciones en vasos de precipitado de 20 ml en un baño de agua en agitación a 37ºC y expuesto a la temperatura ambiente. Se añadieron los constituyentes siguientes en el orden enumerado: 1) tampón para hacer un volumen final de 5,0 ml (4,71 ml para la referencia); 2) 5 \mul a 4,5 ml de antioxidante radical de interés (intervalo final de concentración de 5 \muM a 4 mM); 3) 140 \mul de 2-desoxirribosa 100 mM (2,8 mM) 4) 50 \mul de H_{2}O_{2} 100 mM (1,0 mM); 5) 50 \mul de EDTA 10 mM/Fe^{3+} 10 mM (100 mM); y 6) 50 \mul de ácido ascórbico 10 mM (100 mM).
En los valores de tiempo de 0 y 15 min tras la adición del ácido ascórbico, se pipetearon 1,0 ml de alícuotas de medio de incubación a los tubos que contenían 2,0 ml de solución TBA/TCA/BHT. Se añadieron también los patrones a los tubos que contenían 2,0 ml de TBA/TCA/BHT. Tras la agitación, se taparon las muestras y se calentaron los patrones en un bloque calefactor a 100ºC durante 20 min. Se enfriaron las muestras y se centrifugaron a 1500 \times g durante 10 min. Se leyeron las absorbancias a A_{532} - A_{580}. Se calculó la concentración de antioxidante radical que inhibe la formación de TBARS el 50% (IC_{50}) utilizando GraphPad INPLOT.
Determinación de la constante de velocidad (k_{s}) para la reacción de radicales hidroxilo con antioxidantes radicales
Cuando se añade un antioxidante radical hidroxilo a la reacción, tiene lugar una competencia sencilla entre el antioxidante y la molécula de desoxirribosa.
A partir del método de Ching T., Halnen, G.R.M.M., y Bast, A. (1993) Chem-Biol. Interactions 86, 119-127, se puede calcular la constante de velocidad para la reacción del antioxidante con el radical hidroxilo con la ecuación:
1/A = 1/A* (1 + k_{s}[S]/k_{DR}[D])
en la que
A = absorbancia en presencia del antioxidante radical
[S] = concentración de antioxidante radical
A* = absorbancia en ausencia de antioxidante radical
k_{s} = constante de velocidad para la reacción del antioxidante con el radical hidroxilo
k_{DR} = constante de velocidad para la reacción de 2-desoxirribosa con el radical hidroxilo = 3,1 \times 10^{9} M^{-1} set^{-1}
[D] = 2-desoxirribosa = 2,8 mM
Si 1/A se representa frente a [S], entonces
pendiente = k_{s}/k_{DR}[D]A*
k_{s} = pendiente \times k_{DR} \times [D] \times A*
3. Protección de las células del gránulo del cerebelo frente a la alteración oxidativa
Se determinó la capacidad de las nitronas cíclicas para proteger los cultivos primarios de las células del gránulo cerebelar frente a la alteración oxidativa inducida por el tratamiento con Fe^{2+}. Se prepararon cultivos de células del gránulo cerebelar en ratas de 8 días tal como se describió anteriormente. Levi, G., Aloisi, F., Ciotti, M.T., Thangnipon, W., Kingsbury, A., y Balazs, R. (1989) En: A Dissection and Tissue Culture Manual of the Nervous System (Shahar, A., de Vellis, J., Vernadakis, A., y Haber, B., eds.) Alan R. Liss, Inc. Nueva York, NY, págs. 211-214. En resumen, se extirparon 8 a 10 cerebelos y se colocaron en un medio de bicarbonato de Krebs-Ringer enriquecido con BSA y MgSO_{4}. Se picaron finamente los cerebelos y se digerieron con tripsina/solución de Krebs-Ringer. Se dispersaron a continuación las células por trituración en solución de Krebs-Ringer conteniendo DNasa, MgSO_{4} e inhibidor de tripsina seguido de colocación en placas a una densidad de 1 \times 10^{6} células/pocillo e una placa recubierta con poli-1-lisina en MEM/suero bovino fetal al 10%/KCl/glutamina/gentamicina. Se reemplazó el medio a las 24 horas y se añadió citosina-arabinósido. Se realizaron los experimentos con las células 8 a 10 días in vitro.
Para los estudios de oxidación se retiró el medio y se reemplazó con solución de Locke exenta de Na^{+} (N-metil-D-glucamina 154,6 mM, KCl 5,6 mM, CaCl_{2} 2,3 mM, MgCl_{2} 1 mM, NaHCO_{3} 3,6 mM y HEPES 5 mm, pH 7,3) con la omisión de glucosa. Se añadieron las nitronas en solución de Locke o en \beta-ciclodextrinas al 20% y se dejaron incorporar en las células durante 30 min. En este momento se añadió 20 \mul de una solución madre 5 mM de cloruro ferroso hasta una concentración final de 100 \muM. Tras 45 min se retiró el medio y se añadió a 1,5 ml de TBA/TCA (2:1) con 25 \mul de BHT al 2% y se determinó TBARS como se describió anteriormente. Se restó la absorbancia de las células de referencia (sin hierro) de las células tratadas con hierro y este valor se tomó como denominador para determinar la concentración de nitrona requerida para inhibir la oxidación el 50%.
Se añadió medio MEM reciente a las células junto con 100 \mul de MTT. Tras 4 h, se añadió 1 ml de isopropanol frío/HCl 0,04 N, se rasparon las células, se mezclaron bien y se transfirieron a tubos de ensayo de vidrio de 13 \times 100 mm. Se midió la absorbancia resultante de la reducción de mitocondrias de la MTT (570 nm menos 630 nm) como evaluación de la viabilidad. Se determinó el % de muerte celular en comparación con la absorbancia de las células a las que no se añadió hierro. La diferencia entre las células tratadas con hierro y de referencia se consideró como 100% y la concentración de nitrona para impedir la pérdida de capacidad de reducción de MTT (expresada en la Tabla II como viabilidad) del 50% se utilizó como IC_{50}.
Las nitronas cíclicas que se prepararon se enumeran en la Tabla I junto con sus valores IC_{50} para la inhibición de la oxidación de lípidos y el atrapamiento de radicales hidroxilo in vitro. Se incluye MDL 101.002 para comparación.
TABLA I
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TABLA II Valores de IC_{50} para la inhibición de la alteración inducida por Fe^{2+} a las células del gránulo cerebelar
Compuesto IC_{50} de TBRAS (\muM) Viabilidad
PBN 2600 2600
A(R=H) 307 292
10(naftilo) 104 103
18(sulfofenilo) 2600 880
Los compuestos de la presente invención se pueden administrar por variasvías. Son eficaces si se administran por vía oral. Los compuestos se pueden administrar también por vía parenteral (es decir por vía subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal o intratecal).
Las composiciones farmacéuticas se pueden preparar utilizando técnicas conocidas en la materia. Normalmente una cantidad protectora del compuesto se mezcla con un portador farmacéuticamente aceptable.
Para la administración oral, los compuestos se pueden formular en preparaciones sólidas o líquidas tales como cápsulas, píldoras, comprimidos, pastillas, gominas, polvos, suspensiones o emulsiones. Las formas sólidas de dosificación unitarias pueden ser cápsulas del tipo gelatina que contienen, por ejemplo, tensioactivos, lubricantes y cargas inertes tales como lactosa, sacarosa y almidón de maíz o pueden ser preparaciones de liberación lenta.
En otra realización, los compuestos de la invención se pueden preparar en comprimidos con bases de comprimido convencionales tales como lactosa, sacarosay almidón de maíz en combinación con aglutinantes tales como acacia, almidón de maíz o gelatina, agentes disgregadores tales como almidón de patata o ácido algínico y un lubricante tal como ácido esteárico o estearato de magnesio. Las preparaciones líquidas se preparan disolviendo el ingrediente activo en un disolvente acuoso o no acuoso farmacéuticamente aceptable que puede contener además agentes de suspensión, agentes edulcorantes, agentes potenciadores del sabor y agentes conservantes como son conocidos en la técni-
ca.
Para la administración parenteral los compuestos se pueden disolver en un portador farmacéutico fisiológicamente aceptable y administrar como solución o suspensión. Ejemplos ilustrativos de portadores farmacéuticos adecuados son el agua, solución salina, soluciones de dextrosa, soluciones de fructosa, etanol o aceites de origen animal, vegetal o sintético. El portador farmacéutico puede contener también conservantes, tampones, etc., tal como son conocidos en la técnica. Cuando los compuestos se administran por vía intrafecal, se pueden también disolver en el fluido cerebroespinal como es conocido en la técnica.
Los compuestos de esta invención se pueden también administrar por vía tópica. Esto se puede realizar simplemente preparando una solución del compuesto que se debe administrar, preferentemente utilizando un disolvente conocido que favorezca la absorción transdérmica tal como etanol o sulfóxido de dimetilo (DMSO) con o sin otros excipientes. Preferentemente la administración tópica se realizará utilizando un parche ya sea del tipo de depósito y membrana porosa o de una variedad de matriz sólida.
Algunos dispositivos transdérmicos están descritos en la patente U.S. nº 3.742.951, nº 3.797.494, nº 3.996.934 y nº 4.031.894. Estos dispositivos generalmente contienen un elemento de refuerzo que define una de sus superficies frontales, una capa adherente permeable al agente activo que define la otra superficie de la cara y al menos un depósito que contiene el agente activo interpuesto entre las superficies de la cara. Como alternativa, el agente activo puede estar contenido en multitud de microcápsulas distribuidas a través de la capa adherente permeable. En ambos casos, el agente activo se libera continuamente del depósito o las microcápsulas a través de una membrana en el adhesivo permeable al agente activo, que está en contacto con la piel o la mucosa del receptor. Si el agente activo se absorbe a través de la piel, se administra un flujo controlado y predeterminado del agente activo al receptor. En el caso de las microcápsulas, el agente de encapsulación puede también funcionar como membrana.
En otro dispositivo para administrar por vía transdérmica los compuestos según la presente invención, el compuesto farmacéuticamente activo está contenido en una matriz de la que se libera a la velocidad gradual, constante y controlada deseada. La matriz es permeable a la liberación del compuesto por difusión o flujo microporoso. La liberación es a velocidad controlada. Dicho sistema, que no requiere membrana, se describe en la patente U.S. nº 3.921.636. Al menos dos tipos de liberación son posibles en estos sistemas. La liberación por difusión tiene lugar cuando la matriz no es porosa. El compuesto farmacéuticamente eficaz se disuelve y se difunde a través de la propia matriz. La liberación por flujo microporoso tiene lugar cuando el compuesto farmacéuticamente eficaz es transportado a través de una fase líquida en los poros de la matriz.
Los compuestos de la invención se pueden administrar en una cantidad desde 0,01 mg/kg a 500 mg/kg, dependiendo de una variedad de factores tales como el peso, la edad, el sexo, la enfermedad que se está tratando, etc.
Aunque la invención se ha descrito en relación con las realizaciones específicas de ésta, debe entenderse que es capaz de modificaciones adicionales y esta solicitud se pretende que abarque algunas variaciones, utilizaciones o adaptaciones de la invención siguiendo, en general, los principios de la invención e incluyendo dichas desviaciones de la presente exposición ya que vienen con la práctica conocida y habitual dentro de la técnica a la que aplica la invención.
Tal como se utiliza en esta solicitud:
a) el término "paciente" se refiere a los animales de sangre caliente tales como, por ejemplo, cobayas, ratones, ratas, gerbos, gatos, conejos, perros, monos, chimpancés y el hombre;
b) el término "tratar" se refiere a la capacidad de los compuestos para mitigar, aliviar o disminuir la evolución de la enfermedad en el paciente o cualquier alteración del tejido relacionada con la enfermedad;
c) el término "neurodegeneración" se refiere a la muerte progresiva y a la desaparición de una población de células nerviosas que tiene lugar de una forma característica de una determinada enfermedad y que conduce a la lesión del cerebro o de otras lesiones neuronales;
d) el término "choque" se utiliza para referirse al choque circulatorio, choque séptico, choque tóxico o cualquier otra enfermedad en la que los radicales derivados del oxígeno conducen a la perfusión inadecuada de los órganos vitales por el sistema circulatorio;
e) La expresión "radical libre de oxígeno" debería considerarse que se refiere a los radicales de carbono centrados, radicales o oxígeno o cualquier biomolécula que contenga un electrón desparejado en cualquier exposición de la alteración del tejido.
Los compuestos de la invención se pueden también mezclar con cualquier portador inerte y utilizarse en ensayos de laboratorio para determinar la concentración de los compuestos en el suero, orina, etc., del paciente como es conocido en la técnica. Los compuestos se pueden también utilizar como una herramienta de investigación formando aductos con oxígeno molecular.
Parte experimental Métodos generales
Excepto donde se indique de otro modo, los reactivos y materiales de partida se adquieren de los proveedores comerciales habituales y se utilizan tal como se reciben. Se destila tetrahidrofurano (THF) en cetilbenzofenona de sodio inmediatamente antes de su uso. Otros disolventes de la reacción, y todos los disolventes cromatográficos, de recristalización y de trabajo son de calidad espectroscópica y se utilizan tal como se reciben. Las reacciones descritas que se desarrollan "bajo N_{2}" se realizan bajo una atmósfera de N_{2} anhidro en matraces secados en la estufa.
La cromatografía en capa fina (TLC) se realiza en placas 60 F-254 de gel de sílice, reforzadas con vidrio, recubiertas con un espesor de 0,25 mm. Las placas se eluyen con sistemas disolventes (v/v) tal como se describe, y se observan mediante uno o más de los siguientes métodos: luz de W, vapor de I_{2}, o tinción con ácido fosfomolíbdico, soluciones de Ce(SO_{4})_{2}, KMnO_{4}, o de FeCl_{3}, seguido de calentamiento (mechero). "Thin-Layer Chromatography, a Laboratory Handbook", Egon Stahl, Ed. Springer-Verlag Berlin Heildelberg-Nueva York, 1969. La cromatografía de gases (GC) se realizó en un cromatógrafo de gases 5890 serie II de Hewlett Packard equipado con un integrador 3392A de Hewlett Packard. Las separaciones se realizaron en una columna capilar de sílice fundida de DI 15 m \times 0,32 mm (película DB-5 de 0,25 mm) de J & W Scientific.
"Concentrado al vacío" y frases similares indican la evaporación rotativa en un aparato Buche a aprox. 50ºC y 15 a 20 Torr (aspirador de agua), a menos que se indique de otra manera. La cromatografía de flash (FC) se realiza utilizando gel de sílice 60 de EM Science (40 - 63 \mum) según el procedimiento de la bibliografía. Still, W.C.; Kahn, M,K Mitra, A.J. Org. Chem. 1978, 43, 2923.
Los puntos de fusión se determinan en un aparato capilar de punto de fusión Uni-melt de Thomas Hoover. Los puntos de fusión y los puntos de ebullición se indican sin corregir.
Los espectros IR se registran en un espectrofotómetro infrarrojo serie 5020 de Mattson Galaxy con muestras preparadas tal como se indica y se presentan en frecuencias (cm^{-1}). Los espectros RMN de ^{1}H se registran en un instrumento de Varian Gemini (300 MHz) con los desplazamientos químicos (\delta) presentados en ppm con relación a tetrametilsilano (0,00 ppm) o cloroformo (7,26 ppm), a menos que se indique de otra manera. Las señales se denominan s (singlete), d (doblete), t (triplete), q (cuarteto), p (penteto), m (multiplete), br (ancho), etc. Las constantes de acoplamiento (J) se presentan en Hz. Se intentan análisis de primer orden de los espectros cuando es posible; por consiguiente, los desplazamientos químicos y las constantes de acoplamiento para los multipletes solamente pueden ser aproximados. Los espectros de masas (MS) se obtienen en un sistema de espectrómetro de masas modelo TSQ 700 de Finnigan MAT utilizando impacto electrónico o ionización química con el ión molecular denominado M dado entre paréntesis.
Procedimiento general para la reacción de MeMgBr con ésteres (Procedimiento A)
Una solución de MeMgBr (2,5 equiv. de una solución de Et_{2}O 3 M) THF (volumen igual) se coloca bajo N_{2}. La solución se enfría a -78ºC, y se añade el substrato (1 equiv), y puro o como solución en THF. Se retira el baño de refrigeración y se deja calentar la mezcla de reacción a temperatura ambiente (rt). Se enfría el exceso de MeMgBr añadiendo solución saturada de NH_{4}Cl y la mezcla resultante se vierte en HCl dil. y se extrae con EtOAc (2\times). Se lava la fase orgánica con solución saturada de NaCl (salmuera), se seca (MgSO_{4}, o Na_{2}SO_{4}), se filtra y se evapora. Se purifica el residuo como se indica.
Procedimiento general para la reacción de Ritter (Procedimiento B)
Se coloca NaCN en polvo (1,5 a 2,5 equiv) en un matraz seco bajo N_{2} y se enfría en un baño con hielo. Se añade ácido acético (HOAc) y se agita la mezcla a fondo mientras se prepara previamente la mezcla de H_{2}SO_{4} conc. en un volumen igual de HOAc se añade mediante un embudo de decantación (¡Cuidado! Se genera HCN). Se añade a continuación el substrato (1 equiv) puro o en un volumen mínimo de HOAc, se retira el baño de refrigeración y se agita la mezcla a temperatura ambiente hasta que el análisis TLC indica que la reacción es completa. Se evapora a continuación el exceso de HCN bajo una atmósfera de N_{2} durante 1 a 2 h. Se añade el residuo lentamente a la solución saturada de NaHCO_{3} (evolución de gas fuerte) y se extrae la mezcla a fondo con EtOAc. Se lava la fase orgánica con salmuera y se seca (Na_{2}SO_{4}), se filtra y se concentra. Se purifica el residuo como se indica.
Procedimiento general para la ciclación de formamidas (Procedimiento C)
Se disuelve la formamida (1 equiv) en CH_{2}Cl_{2} y se enfría en un baño con hielo. Se añade cloruro de oxalilo puro (1,1 equiv) con una jeringuilla, se retira el baño de refrigeración y se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 1 a 2 h. Se enfría la mezcla de nuevo a 0ºC y se añade FeCl_{3} sólido (1,2 equiv) de una vez. Se retira el baño de refrigeración y se agita la mezcla a temperatura ambiente toda la noche. La mezcla de reacción resultante se vierte en solución 0,5 M de HCl y se extrae con EtOAc (2 \times). Se lava la fase orgánica con salmuera, se seca (Na_{2}SO_{4}), se filtra y se evapora. Se absorbe el residuo en EtOH, se trata con una cantidad catalítica de H_{2}SO_{4} conc. y se calienta a reflujo hasta que el análisis TLC indica la reacción completa (aprox. 3 h). Se enfría a continuación la mezcla, se vierte en solución saturada de NaHCO_{3} y se extrae con EtOAc (3 \times). Se lava la fase orgánica con salmuera, se seca (Na_{2}SO_{4}), se filtra y se evapora. Se purifica el residuo como se indica.
Procedimiento general para la reducción de iminas (Procedimiento D)
Se disuelve la imina (1 equiv) en MeOH bajo N_{2}. Se añade a la solución NaBH_{4} sólido (1,5 equiv) en porciones pequeñas (evolución de gas y calor). Se agita la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 1 a 2 h, se añade a continuación con cuidado a una solución de HCl 1 M. Se lava la fase acuosa con EtOAc (se descarta) y se basifica añadiendo perlas de KOH. Se extrae la amina libre liberada en EtOAc (3 \times). Se lava la fase orgánica con salmuera, se seca (Na_{2}SO_{4}), se filtra y se evapora, para dar la amina que se utiliza como tal.
Procedimiento general para la oxidación de aminas a nitronas (Procedimiento E)
Se disuelve la amina (1 equiv) en MeOH y se trata sucesivamente con Na_{2}WO_{4} (0,1 equiv) y H_{2}O_{2} al 30% (3 equiv). Se agita la mezcla resultante a temperatura ambiente hasta que el análisis de TLC indica reacción completa (aprox. 4 h). Se vierte la mezcla de reacción en salmuera conteniendo Na_{2}SO_{3} (para destruir el peróxido en exceso) y se extrae varias veces con EtOAc (hasta que la fase acuosa presenta poco o nada de producto por TLC). Se seca la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}), se filtra y se evapora. Se purifica el producto en bruto como se indica.
Procedimiento general para la alquilación de isobutirato de etilo (Procedimiento F)
Se añade isobutirato de etilo (1 equiv) a una solución de (bis)trimetilsililamida de litio (LiN(TMS)_{2}, solución 1 M en THF, 1,5 equiv.) en THF enfriado a -78ºC bajo N_{2}. Se continúa la agitación a -78ºC durante 1 h, a continuación se añade 1,3-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-2(1H)-pirimidinona (DMPU, 2% en volumen), seguido del electrófilo. Se retira el baño de refrigeración y se agita la mezcla de reacción toda la noche. Se vierte la mezcla de reacción en HCl 1 M y se extrae con EtOAc (3\times). Se lava la fase orgánica con agua y salmuera, a continuación se seca (MgSO_{4}), se filtra y se evapora. Se purifica el residuo por FC (CH_{2}Cl_{2}).
Procedimiento general para la hidrólisis de los ésteres etílicos (Procedimiento G)
Se añade el éster (1 equiv) a una solución de KOH (2,5 equiv) en MeOH acuoso al 10% y la mezcla resultante se calienta a reflujo hasta que la TLC demuestra la ausencia de material de partida. Se enfría la mezcla y se evapora la mayoría del MeOH. Se diluye el residuo con agua y se extrae con Et_{2}O (2\times, se descarta). Se acidifica la fase acuosa añadiendo HCl diluido y se extrae con EtOAc (3\times). Se lava la fase orgánica con salmuera, se seca (MgSO_{4}), se filtra y se evapora. Se utiliza el producto en bruto sin purificación posterior.
Procedimiento general para la reconfiguración de Curtius (Procedimiento H)
A una solución de ácido carboxílico (1 equiv) en tolueno a 0ºC y bajo N_{2} se añaden Et_{3}N (0,95 equiv) y fosforilazida de difenilo (0,95 equiv). Se agita la mezcla a 0ºC durante 30 min, se calienta a continuación a reflujo durante 3 h. Se enfría la mezcla, se lava con solución NaHCO_{3} fría (2\times) y salmuera (2\times), a continuación se seca (MgSO_{4}), se filtra y se evapora. El producto en bruto se utiliza sin purificación.
Procedimiento general para la reducción de lactamas (Procedimiento I)
Se añade la lactama (1 equiv) con cuidado (evolución de gas) a la solución de BH_{3}\cdotTHF (1 M en THF, 2,5 equiv) bajo N_{2}. Una vez que disminuye la evolución de gas, se calienta a reflujo la mezcla toda la noche. Se enfría la mezcla de reacción, se trata con cuidado con MeOH (aprox. 50% en volumen) y una solución NaOH 1 M y se calienta a reflujo durante 7 h. Se enfría la mezcla resultante y se extrae con EtOAc (2\times). Se extrae la fase orgánica con HCl 1 M (2\times) y se neutraliza la fase acuosa añadiendo NaHCO_{3}. Se extrae el producto en EtOAc (2\times) y se lava la fase orgánica con salmuera, se seca (MgSO_{4}), se filtra y se evapora. Las aminas se utilizan sin purificación adicional.
Los siguientes ejemplos ilustran más las secuencias de la reacción descritas anterior. Sin embargo, no deben considerarse de ninguna manera limitantes de la invención.
Ejemplo 1 N-óxido de 2,2-dimetil-1,2-dihidrobenzo[f]isoquinolina (9) 2-metil-1-naftalen-1-il-propan-2-ol (3)
Se trata el éster 1 (véase Acton, N.; Berliner, E. J. Am. Chem. Soc. 1984, 86, 3312) (20,0 g, 100 mmol) con MeMgBr según el procedimiento general A. Se obtiene el producto 3 como un sólido blanco, punto de fusión 47-48ºC, tras la evaporación del disolvente. No requiere purificación adicional. Rendimiento: 19,4 25 g (97%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) 8,16 (d, 1, J = 7,5), 7,85-7,75 (m, 2), 7,50-7,35 (m, 4), 3,27 (s, 2), 1,27 (s, 6); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) 134,18, 133,96, 133,06, 129,01, 128,60, 127,29, 125,70, 125,42, 125,15, 125,04, 71,64, 45,08, MS 29,69; (P.M. = 200,3, CI/CH_{4}, eE=70 eV) m/z 200 (M+), 185, 184, 183, 171, 167, 155, 143, 142 (pico base), 115, 89.
N-(1,1-dimetil-2-naftalen-1-il-etil)-formamida (5)
Se somete el alcohol 3 (3,00 g, 15,0 mmol) a la reacción de Ritter según el procedimiento general B. Se obtiene el producto 5 como un sólido de color tostado, punto de fusión 79-80ºC, tras FC (1:1, hexano/EtOAc). Rendimiento: 2,76 g, 81%. El espectro ^{1}H RMN siguiente es para una mezcla aprox. 70:30 de rotámeros de amida. Las señales del rotámero mayor se denominan A y las del rotámero menor se denominan B. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) 8,18 (d, 0,7, J = 8,5, A), 8,05-8,00 (m, 1,3), 7,85-7,75 (m, 2), 7,55-7,33 (m, 4), 5,90 (br d, 0,3, J=9,0, B), 5,25 (br s, 0,7, A), 3,56 (s, 1,4, A), 3,29 (s, 0,6, B), 1,40 (s, 4,2, A), 1,39 (s, 1,8, B); MS (P.M. = 227,3, EI, eE=70 eV) m/z 227 (M+), 209, 183, 182, 167, 165, 141, 139, 128, 115, 89, 86 (pico base), 76, 63, 58, 42.
2,2-dimetil-1,2-dihidrobenzo[f]isoquinolina (7)
Se cicla la formamida 5 (2,27 g, 10,0 mmol) según el procedimiento general C. Se obtiene la imina 7 (1,61 g, 77%) como un sólido marrón oscuro tras la cromatografía de flash (FC) (19:1, CH_{2}Cl_{2}/MeOH). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) 8,31 (s, 1), 8,08 (d, 1, J=7,8), 7,90-7,75 (m, 2), 7,60-7,50 (m, 2), 7,42 (d, 1, J=8,1), 3,12 (s, 2), 1,35 (s, 6); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) 157,76, 134,78, 128,57, 126,85, 126,34, 124,32, 124,23, 123,79, 123,41, 54,75, 33,69, 28,49; MS (P.M. = 209,3, EI, e=70 eV) m/z 209 (M+, pico base), 194, 181, 167, 152, 139, 115, 97, 82, 75, 63, 41.
2,2-dimetil-1,2,3,4-tetrahidrobenzo[f]isoquinolina
La reducción de la imina 7 (1,61 g, 7,7 mmol) según el procedimiento general D libera la amina (1,61 g, 100%) como un líquido oscuro que no está caracterizado, pero se utiliza directamente en la reacción siguiente.
N-óxido de 2,2-dimetil-1,2-dihidrobenzo[f]isoquinolina (9)
La amina en bruto de la reacción anterior (1,481 g, 7,024 mmol) se oxida según el procedimiento general E para dar un sólido de color tostado, punto de fusión 155-157ºC, tras la recristalización en CH_{2}Cl_{2}/hexano 1:9. Rendimiento: 0,866 g (55%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) 7,96 (d, 1, J=8,3), 7,85-7,75 (m, 2), 7,81 (s, 1), 7,55-7,50 (m, 2), 7,22 (d, 1, J=8,5), 3,45 (s, 2), 1,54 (s, 6); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) 133,76, 132,95, 130,75, 128,89, 127,09, 126,45, 125,72, 125,47, 123,25, 122,55, 66,89, 38,32, 25,42; MS (EI, eE=70 eV) m/z 225 (M+, pico base), 210, 194, 193, 165, 139, 115, 89, 76, 63, 41;
Anal. Calc. para C_{15}H_{15}NO (P.M.=225,3): C, 79,97 H, 6,71 N, 6,22
Obtenido: C, 78,79 H, 6,66 N, 6,22.
Ejemplo 2 N-óxido de 3,3-dimetil-3,4-dihidrobenzo[h]isoquinolina (10) 2-metil-1-naftalen-2-il-propan-2-ol (4)
Se trata el éster 2 (véase Acton, N.; Berliner, E. J. Am. Chem. Soc. 1984, 86, 3312) (7,87 g, 39,3 mmol) con MeMgBr según el procedimiento general A. Se obtiene el producto 4 como un sólido blanco, punto de fusión 79-80ºC, tras la evaporación del disolvente. No requiere purificación adicional. Rendimiento: 5,88 g (75%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) 7,80-7,75 (m, 3), 7,66 (s, 1), 7,45-7,35 (m, 3), 2,92 (s, 2), 1,26 (s, 6); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) 135,37, 133,33, 132,19, 129,06, 128,80, 127,57, 125,96, 125,46, 70,95, 49,80, 29,25; MS (P.M. =200,3, EI, e=70 eV) m/z 200 (M+), 185, 167, 165, 143, 142, 141 (pico base), 128, 115, 89, 63, 59, 57, 43, 31.
N-(1,1-dimetil-2-naftalen-2-il-etil)-formamida (6)
Se trata el alcohol 4 (3,00 g, 15,0 mmol) con NaCN según el procedimiento general B. Se obtiene el producto 6 como un sólido amarillo (3,31 g, 97%), punto de fusión 59-63ºC, tras FC (CH_{2}Cl_{2}). El espectro ^{1}H RMN siguiente es para una mezcla aprox. 67:33 de rotámeros de amida. Las señales del rotámero mayor se denominan A y las del rotámero menor se denominan B. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) 8,10-8,05 (m, 1), 7,80-7,75 (m, 3), 7,60 (m, 1), 7,50-7,45 (m, 2), 7,30-7,25 (m, 1), 5,95 (br s, 0,33, B), 5,22 (br s, 0,67, A), 3,20 (s, 1,3, A), 2,92 35 (s, 0,7, B), 1,40-1,30 (m, 6); MS (P.M. = 227,3, EI, eE=70 eV). m/z 227 (M+), 209, 183, 182, 152, 141, 139, 115, 89, 86 (pico base), 63, 58, 42, 32.
3,3-dimetil-3,4-dihidrobenzo[f]isoquinolina (8)
La ciclación de la formamida 6 (2,27 g, 10,0 mmol) según el procedimiento general C proporciona la imina 8 (1,55 g, 74%) como un sólido de color tostado que se utiliza sin purificación. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) 9,08 (s, 1), 8,31 (d, 1, J=8,4), 7,90-7,85 (m, 2), 7,60-7,55 (m, 1), 7,50 (m, 1), 7,29 (s, 1), 2,88 (s, 2), 1,30 (s, 6); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) 153,38, 134,69, 132,61, 131,07, 129,12, 128,50, 127,04, 126,44, 125,18, 121,34, 121,02, 53,97, 38,59, 27,71; MS (P.M. = 209,3, EI, eE=70 eV) m/z 209 (M+, pico base), 194, 180, 167, 152, 139, 115, 97, 82, 76, 63, 51, 41.
3,3-dimetil-1,2,3,4-tetrahidrobenzo[h]isoquinolina
La reducción de la imina 8 (1,47 g, 7,03 mmol) según el procedimiento general D libera la amina (1,47 g, 99%) como un líquido oscuro que no está caracterizado, pero se utiliza directamente en la reacción siguiente.
N-óxido de 3,3-dimetil-3,4-dihidrobenzo[h]isoquinolina (10)
La amina en bruto de la reacción anterior (1,47 g, 6,97 mmol) se oxida según el procedimiento general E para dar un sólido amarillo, punto de fusión 155-157ºC, tras la recristalización en CH_{2}Cl_{2}/hexano 1:9. CH_{2}Cl_{2}/hexano. Rendimiento: 0,950 g (61%).^{1}H RMN (CDCl_{3}) 8,51 (s, 1), 7,97 (d, 1, J=8,5), 7,85-7,75 (m, 2), 7,55-7,50 (m, 2), 7,31 (d, 1, J=8,3), 3,21 (s, 2), 1,50 (s, 6); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) 132,64, 129,51, 129,27, 128,75, 128,15, 127,58, 125,90, 125,63, 123,06, 121,28, 66,15, 42,34, 24,45; MS (Cl/CH_{4}, eE=70 eV) m/z 226 [(M+H)+, pico base], 210, 193, 167, 152;
Anal. Calc. para C_{15}H_{15}NO (P.M.=225,3): C, 79,97 H, 6,71 N, 6,22.
Obtenido: C, 79,58 H, 6,72 N, 6,02.
Ejemplo de referencia 3
N-óxido de 5,5-dimetil-4,5-dihidrotieno[2,3-c]piridina (11) 2-metil-1-tiofen-3-il-propan-2-ol (12)
Se trata el éster etílico del ácido tiofen-3-acético (15,0 g, 88,2 mmol) con MeMgBr según el procedimiento general A. Se obtiene el producto 12 como un líquido incoloro (16,1 g, 88%) que no requiere purificación posterior. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) 7,25-7,20 (m, 1), 7,00-6,95 (m, 2), 2,77 (s, 2), 1,21 (s, 6); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) 138,39, 130,18, 125,39, 123,12, 70,77, 44,42, 29,37; MS (P.M. = 156,2, EI, eE=70 eV) m/z 156 (M+), 141, 139, 100, 98 (pico base), 97, 85, 69, 59, 43, 32.
5,5-dimetil-4,5-dihidrotieno[2,3-c]piridina (13)
El tratamiento del alcohol 12 de la reacción anterior (15,9 g, 102 mmol) con NaCN según el procedimiento general B da la imina ciclada directamente como un líquido oscuro tras la FC (hexano/EtOAc 3:1). Rendimiento: 4,15 g (25%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) 8,17 (s, 1), 7,36 (d, 1, J=4,8), 6,88 (d, 1, J=4,8), 2,75 (s, 2), 1,28 (s, 6); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) 153,96, 141,02, 131,45, 125,79, 124,39, 56,24, 35,65, 28,03; MS (P.M. = 165,3, EI, eE=70 eV) m/z 165 (M+, pico base), 150, 138, 124, 123, 97, 86, 77, 69, 58, 45.
5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidrotieno[2,3-c]piridina
La reducción de la imina 13 de la reacción anterior (1,00 g, 6,1 mmol) según el procedimiento general de D proporciona la correspondiente amina (1,00 g, 100%) como un líquido oscuro (P.M. = 167,3) que se utiliza sin purificación posterior. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) 7,13 (d, 1, J=5,1), 6,75 (d, 1, J=5,1), 4,07 (s, 2), 2,56 (s, 2), 2,37 (s, 1), 1,23 (s, 6).
N-óxido de 5,5-dimetil-4,5-dihidrotieno[2,3-c]piridina (11)
La amina en bruto de la reacción anterior (1,00 g, 5,99 mmol) se oxida según el procedimiento general E para dar un sólido amarillo (300 mg, 28%, punto de fusión 136-138ºC), tras FC (CH_{2}Cl_{2}/MeOH 19:1). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) 7,73 (s, 1), 7,33 (d, 1, J=4,9), 6,93 (d, 1, J=4,9), 3,04 (s, 2), 1,48 (s, 6); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) 132,25, 128,30, 127,52, 127,14, 126,64, 68,03, 38,24, 25,25; MS (EI, eE=70 eV) m/z 181 (M+, pico base), 166, 149, 138, 134, 110, 96, 91, 77, 65, 51, 45;
Anal. Calc. para C_{9}H_{11}NOS (P.M.=181,3): C, 59,64 H, 6,12 N, 7,73 S, 17,69.
Obtenido: C, 59,57 H, 6,10 N, 7,86 S, 17,56. 
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Ejemplo de referencia 4
N-óxido de 6,6-dimetil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridina (18) Éster etílico del ácido 3-tiofen-2-il-2,2-dimetilpropiónico (14)
Se alquila el isobutirato de etilo (10,9 ml, 81,7 mmol) con 2-(clorometil)tiofeno según el procedimiento general F para dar el producto 14 como un líquido amarillo (16,4 g, 95%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) 7,15-7,10 (m, 1), 6,95-6,90 (m, 1), 6,77 (d, 1, J=3,6), 4,15 (t, 2, J=7,0), 3,07 (s, 2), 1,26 (t, 3, J=7,0), 1,21 (s, 6); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) 176,96, 139,80, 126,74, 126,42, 123,94, 60,59, 43,65, 40,30, 25,07, 14,22; MS (P.M. = 212,3, CI/CH_{4} eE=70 eV) m/z 213 [(M^{+}H)^{+}, pico base], 193, 179, 167, 140, 139, 125, 98, 97.
Ácido 3-tiofen-2-il-2,2-dimetilpropiónico (15)
Se hidroliza el éster 14 (16,4 g, 77,2 mmol) según el procedimiento general G para dar 15 como un líquido lechoso (11,0 g, 77%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) 7,15 (d, 1; J=5,1), 6,95-6,90 (m, 1), 6,83 (d, 1, J=3,4), 3,10 (s, 2), 1,26 (s, 6); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) 183,98, 139,37, 127,05, 126,66, 124,19, 43,55, 39,86, 24,69; MS (P.M. = 184,3, EI, eE=70 eV) m/z 184 (M^{+}), 139, 123, 97 (pico base), 77, 69, 53, 45.
2-(2-isocianato-2-metilpropil)-tiofeno (16)
El ácido carboxílico de la reacción anterior (11,0 g, 60,0 mmol) se somete a la reconfiguración de Curtius según el procedimiento general H para dar el isocianato 16 como un líquido amarillo (9,94 g, 92%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) 7,22 (d, 1, J=5,1), 6,99, 6,89 (d, 1, J=3,5), 3,00 (s, 2), 1,38 (s, 6); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) 138,20, 127,58, 126,74, 124,80, 58,12, 43,77, 29,92; IR (CHCl_{3}) 2982, 2259, 1265, 1167, 704; MS (P.M. = 181,3, EI, eE=70 eV) m/z 181 (M^{+}), 149, 138, 127, 123, 99, 97 (pico base), 84, 77, 58, 45.
6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-tieno[3,2-c]piridin-4-ona (17)
A una mezcla de DCE anhidro (60 ml) y H_{3}PO_{4} (35 ml, preparado a partir de H_{3}PO_{4} al 85% y P_{2}O_{5}) se añade una solución de isocianato 16 (5,12 g, 28,3 mmol) en DCE (20 ml). Se agita la mezcla de reacción a fondo a temperatura ambiente durante 2 h, a continuación a reflujo durante 4 h. Se deja enfriar la mezcla de reacción y se separa en dos capas. Se decanta la capa orgánica superior, se diluye con EtOAc y solución de Na_{2}CO_{3} y se extrae con EtOAc (2\times). Se lava el extracto orgánico con salmuera (2\times) y se seca (MgSO_{4}), se filtra y se evapora. El residuo se purifica por FC (CH_{2}Cl_{2}/CH_{3}CN 6:4) para dar un sólido amarillo, punto de fusión 153-154ºC. Rendimiento: 2,10 g (41%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) 7,43 (d, 1, J=5,2), 7,10 (d, 1, J=5,2), 6,82 (s, 1), 2,99 (s, 2), 1,38 (s, 6); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) 162,64, 144,99, 130,86, 125,70, 122,96, 54,00, 37,31, 29,05; MS (EI, eE=70 eV) m/z 181 (M^{+}), 166, 151, 148, 125, 124 (pico base), 96, 83, 70, 45;
Anal. Calc. para C_{9}H_{11}NOS (P.M.=181,3): C, 59,64 H, 6,12 N, 7,73.
Obtenido: C, 59,76 H, 6,17 N, 7,87.
6,6-dimetil-4,5,6,7-tetrahidrotieno[3,2-c]piridina
Se reduce la lactama 17 (2,76 g, 15,2 mmol) según el procedimiento general I para dar un líquido oscuro (P.M. = 167,3, 1,82 g, 71%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) 7,07 (d, 1, J=5,1), 6,75 (d, 1, J=5,1), 3,93 (s, 2), 2,66 (s, 2), 1,64 (br s, 1), 1,21 (s, 6).
N-óxido de 6,6-dimetil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridina (18)
La amina en bruto de la reacción anterior (1,82 g, 10,9 mmol) se oxida según el procedimiento general E para dar la nitrona 18 como un sólido amarillo (660 mg, 33%, punto de fusión 130-131ºC) tras recristalización en hexano/CH_{2}Cl_{2} 4:1. CH_{2}Cl_{2}/hexano. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) 7,72 (s, 1), 7,17 (d, 1, J=5,1), 6,89 (d, 1, J=5,1), 3,15 (s, 2), 1,50 (s, 6); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) 131,24, 130,31, 128,63, 124,73, 123,54, 67,87, 37,41, 24,99; MS (EI, eE=70 eV) m/z 181 (M^{+}, pico base), 166, 149, 138, 134, 110, 96, 91, 77, 65, 51, 45;
Anal. Calc. para C_{9}H_{11}NOS (P.M.=181,3): C, 59,64 H, 6,12 N, 7,73.
Obtenido: C, 59,45 H, 6,22 N, 7,67. 
\newpage
Ejemplo de referencia 5
N-óxido de 5,5-dimetil-4,5-dihidrofuro[2,3-c]piridina (23) Éster etílico del ácido 3-furan-3-il-2,2-dimetilpropiónico (14)
Se alquila el isobutirato de etilo (10,7 ml, 80,1 mmol) con 3-(clorometil)furano según el procedimiento general F para dar el producto como un líquido amarillo (12,91 g, 82%) tras FC (CH_{2}Cl_{2}).^{1}H RMN (CDCl_{3}) 7,32 (s, 1), 7,20 (s, 1), 6,20 (s, 1), 4,12 (t, 2, J=7,4), 2,66 (s, 2), 1,25 (t, 3, J=7,4), 1,18 (s, 6); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) 177,56, 142,36, 140,54, 120,78, 112,76, 60,39, 42,85, 35,43, 24,96, 14,13; MS (P.M.=196,3, CI/CH_{4}, eE=70 eV) m/z 197 (M^{+}H)^{+}, 195, 161, 151, 123 (pico base), 109, 81.
Ácido 3-furan-3-il-2,2-dimetilpropiónico (20)
Se hidroliza el éster de la reacción anterior (12,9 g, 65,8 mmol) según el procedimiento general G para dar un líquido amarillo (10,24 g, 93%) tras la FC (CH_{2}Cl_{2}). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) 7,34 (s, 1), 7,24 (s, 1), 6,25 (s, 1), 2,69 (s, 2), 1,22 (s, 6); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) 184,25, 142,38, 140,60, 120,34, 112,14, 42,99, 35,27, 24,81; MS (P.M.=168,2, EI, eE=70 eV) m/z 168 (M^{+}), 123, 81 (pico base), 53.
3-(2-isocianato-2-metilpropil)-furano (21)
El ácido carboxílico de la reacción anterior (10,2 g, 60,7 mmol) se somete a la reconfiguración de Curtius según el procedimiento general H para dar el isocianato (8,56 g, 85%) como un líquido amarillo. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) 7,39 (s, 1), 7,31 (s, 1), 6,34 (s, 1), 2,63 (s, 2), 1,34 (s, 6); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) 142,66, 140,96, 128,32, 119,64, 58,00, 39,35, 29,99; IR (película) 2962, 2930, 2257, 2172, 2135, 1717, 1489, 1208, 1186, 1163, 963; MS (P.M.=165,2, EI, eE=70 Ev) m/z 168 (M^{+}), 123, 81 (pico base), 53.
5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-furo[2,3-c]piridin-7-ona (22)
A una solución de BF_{3}\cdotEt_{2}O (2 ml, 160 mmol) en DCE anhidro (60 ml) a temperatura ambiente bajo N_{2} se añade una solución de isocianato (6,60 g, 40,0 mmol) en DCE (20 ml) gota a gota durante 20 min. La agitación a temperatura ambiente se continúa durante 5 h. Se enfría la mezcla de reacción añadiendo solución de NaHCO_{3} enfriada con hielo. Se diluye la mezcla con EtOAc, se lava con solución de NaHCO_{3}, se seca (MgSO_{4}), se filtra y se concentra. Se cristaliza el residuo en EtOAc para dar 22 (2,19 g, 33%) como un sólido amarillo pálido, punto de fusión 133-134ºC. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) 7,53 (d, 1, J=1,8), 6,37 (d, 1, J=1,8), 5,50 (br s, 1), 2,77 (s, 2), 1,38 (s, 6); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) 159,15, 146,02, 128,42, 111,71, 110,72, 54,83, 35,07, 29,35; MS (EI, eE=70 eV) m/z 165 (M^{+}), 150 (pico base), 132, 122, 108, 94, 80, 52, 42;
Anal. Calc. para C_{9}H_{11}NO_{2} (P.M.=165,2): C, 65,44 H, 6,71 N, 8,48
Obtenido: C, 65,33 H, 6,81 N, 8,42
5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidrofuro[3,2-c]piridina
Se reduce la lactama de la reacción anterior (5,60 g, 3,39 mmol) según el procedimiento general I para dar un líquido oscuro (P.M. = 151,3, 2,46 g, 48%) que no está caracterizado, pero se utiliza directamente en la etapa siguiente.
N-óxido de 5,5-dimetil-4,5-dihidrofuro[2,3-c]piridina (23)
La amina en bruto de la reacción anterior (2,42 g, 16,0 mmol) se oxida según el procedimiento general E. Se obtiene la nitrona 23 como un sólido amarillo (1,35 g, 51%, punto de fusión 89-90ºC) tras FC (CH_{2}Cl_{2}/CH_{3}CN 3:2). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) 7,68 (s, 1), 7,42 (s, 1), 6,40 (s, 1), 2,89 (s, 2), 1,48 (s, 6); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) 145,01, 143,97, 124,05, 115,30, 110,91, 69,52, 34,67, 29,68, 25,45; MS (EI, eE=70 eV) m/z 165 (M^{+}, pico base), 150, 148, 133, 122, 105, 95, 91, 79, 77, 66, 65, 53, 51, 41;
Anal. Calc. para C_{3}H_{11}NO_{2} (P.M.=165,2): C, 65,44 H, 6,71 N, 8,48
Obtenido: C, 65,43 H, 6,70 N, 8,51.

Claims (10)

1. Un compuesto seleccionado de:
N-óxido de 2,2-dimetil-1,2-dihidrobenzo[f]isoquinolina y
N-óxido de 3,3-dimetil-3,4-dihidrobenzo[h]isoquinolina.
2. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según la reivindicación 1 mezclado con un portador farmacéuticamente aceptable.
3. Un compuesto según la reivindicación 1, para su utilización como medicamento.
4. Utilización de un compuesto según la reivindicación 1, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de la embolia cerebral.
5. Utilización de un compuesto según la reivindicación 1, para la preparación de un medicamento para el tratamiento del infarto de miocardio.
6. Utilización de un compuesto según la reivindicación 1, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de la enfermedad neurodegenerativa.
7. Utilización de un compuesto según la reivindicación 1, para la preparación de un medicamento para el tratamiento del choque séptico.
8. Utilización de un compuesto según la reivindicación 1, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de la lesión del tejido asociada al traumatismo físico que implica hemorragia excesiva.
9. Utilización de un compuesto según la reivindicación 1, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de la aterosclerosis.
10. Utilización de un compuesto según la reivindicación 1, para la preparación de un medicamento para su utilización en la inhibición de la alteración oxidativa del tejido.
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