ES2239582T3 - Una composicion para tratar enfermedades articulares degenerativas. - Google Patents

Una composicion para tratar enfermedades articulares degenerativas.

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ES2239582T3 ES00830035T ES00830035T ES2239582T3 ES 2239582 T3 ES2239582 T3 ES 2239582T3 ES 00830035 T ES00830035 T ES 00830035T ES 00830035 T ES00830035 T ES 00830035T ES 2239582 T3 ES2239582 T3 ES 2239582T3
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Abstract

Una composición farmacéutica que comprende una mezcla de sulfatos de condroitina y de un principio activo seleccionado entre el ácido DL-alfa-lipoico, una sal, éster o amida farmacéuticamente aceptable del mismo, o un isómero óptico del mismo, caracterizada porque dicha mezcla de sulfatos de condroitina es una fracción molecular que tiene un peso molecular promedio de entre 5.000 y 10.000 Da, y que carece de sulfatos de condroitina de pesos moleculares menores o iguales a 3.000 Da.

Description

Una composición para tratar enfermedades articulares degenerativas.
La presente invención se refiere a composiciones veterinarias y farmacéuticas que pueden usarse para la prevención y/o el tratamiento coadyuvante de enfermedades articulares degenerativas en el hombre y en los animales, y también enfermedades relacionadas con el dolor de las estructuras periarticulares restringidas (músculos, tendones, ligamentos).
Muchas dolencias parafisiológicas y patológicas en perros, y sobre todo el envejecimiento, predisponen a enfermedades articulares degenerativas que son conocidas como DJD (Mortellano y col., Veterinaria, 1 (supl.): 1-40, 1999).
Desde un punto de vista parafisiológico, algunas razas tienen predisposición a desarrollar DJD, en el sentido de que los perros de razas grandes y muy grandes son mucho más susceptibles ante la enfermedad articular debido a la diferente maduración del tejido osteocartilaginoso en comparación con el tejido musculoligamentoso, siendo este último mucho más lento (Grandjean y col., Rec. Med. Vet., 172: 519-530, 1996). Además de la predisposición de las razas, hay ciertas predisposiciones relacionadas con el estilo de vida. Los perros que son muy activos y/o se utilizan para actividades deportivas pueden sufrir un exceso de tensión en la zona articular, con un daño mecánico y/u oxidativo de las estructuras restringidas de la articulación, incluyendo distensiones de músculos y ligamentos.
Por último, existe una larga lista de dolencias patológicas que incluyen todas aquellas dolencias de desarrollo clínico que predisponen a las DJD, a las que recientemente se les ha atribuido el acrónimo DOD (enfermedad ortopédica del desarrollo) (Richardson y col., Vet. Clin, of North Am.: Small Animal Practice 28: 115-135, 1998), y que incluyen muchas artropatías del desarrollo que afectan al hombro (OCD), al codo (por ejemplo, OCD, UAP, FCP), el carpo, (RCC, hiperextensión), a la rodilla (OCD, dislocación de la rótula, genu valgum), al tobillo o empeine (OCD, pes varu, torsión lateral), al pie (por ejemplo, enfermedades sesamoideas), y a la cadera (displasia, enfermedad de Legg Calvè Perthes) (Thomson y col., Australian Vet. J., 72(10), 1995; Mitsuoka y col., Arthroscopy., 14(6): 630-633, 1998; Alexander, Vet. Clin, of North Am.: Small Animal Practice, 22(3): 503-511, 1992; Cardinet y col., JAVMA, 210(10): 1466-1473, 1997; Fluckiger y col., Zentralbl. Veterinarmed. A., 45(5): 199-207, 1998; Langenbach y col., J. Am. Vet. Med. Assoc., 213(10):1439-1443, 1998).
Debería mencionarse que las dolencias patológicas enumeradas anteriormente no son específicas únicamente para perros, sino que también afectan a caballos y a otros animales, así como al hombre.
Se ha averiguado que el tratamiento preventivo o terapéutico de los síntomas artríticos no puede limitarse únicamente a una intervención condroprotectora, sino que también debería aspirar a optimizar y/o reestablecer la funcionalidad restringida de los tejidos blandos periarticulares, en primer lugar, de los músculos y ligamentos, que en conjunto pueden definirse como unidades morfofuncionales mio-tendino-ligamentosas (MTL-MFU).
Las estructuras restringidas periarticulares (músculos, tendones, ligamentos) juegan de hecho un papel principal para hacer que la carga sobre la articulación sea homogénea y prevenir por consiguiente el desencadenamiento y/o progreso del fenómeno degenerativo. Sin embargo, con frecuencia estas estructuras pueden no ser lo suficientemente eficaces para amortiguar o reducir correctamente la carga que soporta el cartílago. Esto puede deberse a muchas causas, tales como, por ejemplo:
-
daño por desgaste de los tejidos blandos debido a excesivas actividades de competición/deportes, o al envejecimiento;
-
retraso en la maduración mioligamentosa, típico en cachorros de razas grandes;
-
obesidad, a la que los cachorros de razas medianas y pequeñas son proclives debido la pronta maduración del tejido adiposo;
-
microtraumas relacionados con la actividad física (estrés traumático en el cartílago);
-
laxitud de los ligamentos que frecuentemente acompaña a las DOD;
-
atrofia muscular resultado del dolor displásico;
-
ruptura del ligamento cruzado, que es típica de las razas grandes.
Esto conduce a una necesidad de proporcionar tratamientos que puedan proteger y/o reequilibrar la región articular en conjunto, en lugar de limitarse a un único componente.
La condroprotección, que durante algunos años se ha sabido que es una intervención que puede proteger el cartílago articular de una lesión degenerativa relacionada con la artrosis, representa una estrategia equilibradora dado que puede estimular las vías biosintéticas de condrocitos (anabólicas), inhibiendo al mismo tiempo las vías degradativas (catabólicas) que son responsables de la degeneración del cartílago (Burkhardt y col., Sem Arth. Rheum., 17 (supl. 1); 3-34, 1987). Clínicamente, un condroprotector se define como un compuesto que puede ralentizar el progreso de los principales signos radiológicos de la artrosis, y que puede prevenir la aparición de nuevos síntomas artríticos.
Entre las sustancias con actividad condroprotectora se ha prestado particular atención, durante algún tiempo, al sulfato de condroitina (CS). Ya que es un mucopolisacárido que está muy concentrado a nivel cartilaginoso, donde constituye el glucosaminoglucano (GAG) principal presente en la matriz de proteoglucanos (PG), el CS incurre en unas problemáticas alteraciones cualitativas y cuantitativas en el transcurso de la degeneración artrítica. Su uso como condroprotector está justificado no sólo por el hecho de que representa el principal producto de partida para la síntesis de proteoglucanos, sino también por sus actividades proanabolizantes, dado que puede estimular la síntesis de GAG y de colágeno, y puede proteger las macromoléculas de la matriz de la degradación (enzimática y no enzimática) en la que incurren durante la artrosis (Bassler y col., Int. J. Of Tissue React., 14: 231-241, 1992).
El CS combina, con su acción biológica de reequilibrado entre las actividades de síntesis y la degradación metabólica de los condrocitos, unas características fisicoquímicas y farmacocinéticas tales que sugieren su ventajosa aplicación terapéutica.
El uso de fracciones específicas de bajos pesos moleculares (peso molecular promedio de 5.000-10.000 Da) pero con un grado de sulfatación que puede superponerse fisiológicamente al del CS endógeno, no sólo consigue de hecho una alta absorción y una concentración selectiva a nivel articular, sino que también consigue una máxima estimulación sobre las capacidades de reparación tisular. También se ha averiguado que la eliminación de moléculas de CS con pesos moleculares menores o iguales a 3.000 Da conduce a una considerable ventaja, que es la de prevenir un efecto colagenolítico indeseado relacionado con estas moléculas.
El ácido DL-alfa-lipoico (ALA), que también se conoce como ácido tióctico, y que se define químicamente como el ácido 1,2-ditiolano-3-pentanoico, es un derivado disulfuro del ácido octanoico que se ha conocido durante décadas por ser un grupo prostético crucial de varios sistemas enzimáticos celulares que están implicados, en particular, en la vía oxidativa del piruvato, en el ciclo de Krebs y en el metabolismo de los aminoácidos (degradación y biosíntesis) (Bustamante y col., Free Radical Biol and Ned., 24: 1023-1039, 1998).
El ALA, como tal o en su forma reducida (DHLA, ácido dihidrolipoico), es un potente antioxidante, dado que realiza una actividad "depuradora de radicales" respecto a numerosos radicales libres (ROS, especies de oxígeno reactivas), tales como el oxígeno singlete, el radical hidroxilo, el ácido hipocloroso (HOCl), el monóxido de nitrógeno y el peroxinitrito. Este efecto antioxidante también está amplificado por las características físicoquímicas del compuesto, que le hacen ser una sustancia que es soluble tanto en la fase acuosa como en la fase lipídica.
Después de la reducción a DHLA, el ALA también es capaz de contribuir a la regeneración no enzimática de antioxidantes endógenos de crucial importancia, tales como el glutatión reducido (GSH). También estimula la síntesis intracelular de GSH, aumentando así las reservas endógenas del mismo.
El problema en el que se basa la presente invención es el de proporcionar un nuevo tratamiento para enfermedades articulares degenerativas tanto en animales como en el hombre.
La estrategia propuesta estipula la intervención, no sólo en las articulaciones, sino en toda la zona periarticular, es decir, en las unidades morfofuncionales mio-tendino-ligamentosas (MTL-MFU).
Este problema se resuelve mediante una composición según se describe en las reivindicaciones anexas.
La composición de la presente invención comprende una mezcla de sulfatos de condroitina y un principio activo seleccionado entre el ácido DL-alfa-lipoico, una sal, éster o amida farmacéuticamente aceptable del mismo, o un isómero óptico del mismo, en una proporción ponderal entre el sulfato de condroitina/principio activo variable entre 50:1 y 1:2, preferiblemente entre 10:1 y 1:1. Se ha averiguado que esta composición es particularmente útil en el tratamiento de dolencias patológicas que afectan a las MTL-MFU, en virtud de la acción sinérgica del sulfato de condroitina, que es particularmente activo en las articulaciones, y el ácido DL-alfa-lipoico (por sus derivados), que es activo tanto en las articulaciones como en los tejidos periarticulares.
Los sulfatos de condroitina usados son normalmente una mezcla de 4- y 6-sulfatos de condroitina con un grado de sulfatación por disacárido de entre 0,60 y 1.
El sulfato de condroitina será una fracción molecular particular con un peso molecular promedio de entre 5.000 y 10.000 Da que carece de sulfatos de condroitina con pesos moleculares menores o iguales a 3.000 Da. Estas fracciones moleculares de sulfatos de condroitina tienen un grado de sulfatación por disacárido de entre 0,75 y 1, y un contenido proteico menor del 1,5%, preferiblemente entre el 0,05% y el 1,2%. Las fracciones moleculares mencionadas anteriormente de sulfatos de condroitina pueden producirse mediante la purificación del sulfato de condroitina comercial, según se describirá a continuación.
El ácido DL-alfa-lipoico puede usarse como tal o en forma salificada, por ejemplo, como una sal de un metal alcalino o de un metal alcalinotérreo, preferiblemente como una sal sódica. Alternativamente, puede usarse un éster o una amida farmacéuticamente aceptable del ALA, preferiblemente DL-alfa-lipoamida. Para los propósitos de la presente invención también pueden usarse los isómeros ópticos D (la forma natural existente) o los isómeros ópticos L del ácido tióctico.
El ácido tióctico y sus derivados son productos comerciales o pueden prepararse a partir de productos comerciales mediante procedimientos conocidos por los expertos en la materia.
La composición de la presente invención también puede comprender excipientes farmacéuticamente aceptables seleccionados según el tipo de formulación y el procedimiento de administración deseados, según se describirá adicionalmente a continuación.
Además, la composición de la presente invención puede comprender adicionalmente uno o más principios activos seleccionados entre:
-
un aminoazúcar, preferiblemente glucosamina,
-
una sal de manganeso, preferiblemente ascorbato de manganeso,
-
un antioxidante seleccionado entre vitamina E, vitamina C y flavonoides.
El aminoazúcar, si está presente, tendrá preferiblemente una proporción ponderal, con respeto al sulfato de condroitina, de entre 1:1 y 4:1.
La sal de manganeso, si está presente, tendrá preferiblemente una proporción ponderal, con respeto al sulfato de condroitina, de entre 1:3 y 1:10.
La vitamina E, si está presente, tendrá preferiblemente una proporción ponderal, con respeto al sulfato de condroitina, de entre 1:7 y 1:3.
La vitamina C, si está presente, tendrá preferiblemente una proporción ponderal, con respeto al sulfato de condroitina, de entre 1:10 y 1:1.
El flavonoide, que preferiblemente es quercetina o rutina, si está presente, tendrá preferiblemente una proporción ponderal, con respeto al sulfato de condroitina, de entre 1:5 y 1:1.
El aminoazúcar, junto con el sulfato de condroitina, es un sustrato para la síntesis de colágenos y proteoglucanos.
El manganeso es un cofactor de las glucosiltransferasas y juega por tanto un papel importante en la síntesis de glucosaminoglucanos.
Los antioxidantes coadyuvan al ácido tióctico en su efecto reparador del daño oxidativo a nivel articular.
El ácido tióctico, según se ha enunciado, puede actuar tanto a nivel articular como a nivel de la musculatura esquelética, caracterizando así la nueva estrategia terapéutica propuesta para las MTL-MFU.
Ejemplos clínicos y biológicos A - Evaluación de la actividad condroprotectora de varias fracciones moleculares de sulfato de condroitina "in vitro" Materiales y procedimientos
Se usaron cultivos de condrocitos diferenciados de articulación canina, según el procedimiento descrito, para los condrocitos humanos, por Bassler (Bassler y col., In Vitro, 22, 113, 1986; Bassler y col., Biochem. Pharmacol., 37, 1939, 1988).
El cartílago de la articulación se extrajo por artroscopia de la articulación de la rodilla de perros machos de raza pastor alemán de siete años de edad, 35 kg de peso, con cojera en la pata trasera derecha, y de los que se había comunicado un episodio previo de cojera transitoria a la edad de seis años.
El cartílago fue inmediatamente digerido con 1 mg/ml de colagenasa de Clostridium histolítico (Fluka Cod. 27680) en un tampón de carbonato/bicarbonato sódico a pH 7,4 durante 24 horas.
Las células se sembraron a una tasa de 10^{6} por 2 ml de medio de cultivo, y se mantuvieron en rotación (100 revoluciones/minuto) a 37ºC en una atmósfera de 95% de aire y 5% de CO_{2}.
Las células se dejaron crecer durante ocho días. La adición de las fracciones moleculares del sulfato de condroitina que se va a ensayar - que se disolvieron en un tampón de carbonato/bicarbonato sódico a pH 7,4 a una concentración de 10 mg/ml - tuvo lugar el 4º día, de forma que fue posible computar un período de 4 días de incubación de las fracciones que se va a ensayar con las células.
Se ensayaron los siguientes compuestos:
a)
una fracción molecular de sulfato de condroitina con un peso molecular promedio menor de 5.000 Da (compuesto D);
b)
una fracción molecular de sulfato de condroitina con un peso molecular promedio de entre 5.000 y 10.000 Da (compuesto B);
c)
una fracción molecular de sulfato de condroitina con un peso molecular promedio de entre 10.000 y 20.000 Da (compuesto C);
d)
una fracción molecular de sulfato de condroitina con un peso molecular promedio mayor de 20.000 Da (compuesto E).
Se midió la actividad colagenolítica, como un parámetro indicativo de la actividad condroprotectora, con el uso de un NEN-KIT (NEK-016 de NEN Corp.) y cuantificándola como la producción de fragmentos radiactivos solubles, rápidamente separados por centrifugación de las fibrillas de colágeno no digeridas.
Los resultados se muestran en la Tabla I.
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TABLA I
Compuesto ensayado Número de ensayos Actividad colagenolítica
(mg/mg de ADN)
Tampón solo 5 35 \pm 4
Compuesto D 5 40 \pm 6
Compuesto B 5 15 \pm 2
Compuesto C 5 18 \pm 3
Compuesto E 5 24 \pm 5 
\vskip1.000000\baselineskip
Como puede observarse a partir de los datos proporcionados, mientras que la fracción molecular de sulfato de condroitina con un peso molecular promedio menor de 5.000 Da tuvo una actividad colagenolítica extremadamente alta, las fracciones moleculares mayores mostraron esta actividad en un grado menor. En particular, la fracción molecular entre 5.000 y 10.000 Da, de la que se habían eliminado las moléculas de CS con pesos moleculares menores o iguales a 3.000 Da mediante el procedimiento descrito a continuación, se caracterizó por una actividad colagenolítica menor, y constituye por tanto la fracción preferible.
B - Evaluación clínica de la combinación de fracciones moleculares de sulfato de condroitina y ácido DL-\alpha-lipoico sobre la funcionalidad de la articulación en conjunto en perros Materiales y procedimientos
Con el fin de evaluar la funcionalidad de la articulación en conjunto y el efecto de varios tratamientos sobre la misma in vivo, se usó un procedimiento combinado de investigación clínica, investigación con instrumentos e investigación bioquímica, y se aplicó a perros grandes, generalmente adultos, con una enfermedad articular degenerativa (DJD) secundaria a la ruptura del ligamento cruzado, a la dislocación de la rótula o a genu valgum.
El procedimiento usado comprendió la siguientes investigaciones:
(i) investigación clínica del dolor a la palpación según describe Bouck (G. R. Bouck y col., Veterinary and Comparative Orthopaedic Traumatology, 8, 177-83, 1995). La escala de valores usada era desde 1 hasta 4, en particular:
1 = dolor a la palpación ausente
2 = dolor a la palpación leve
3 = dolor a la palpación moderado
4 = dolor a la palpación intenso
(ii) examen clínico para evaluar el grado de tono muscular (músculos cuádriceps) con el uso de la "escala de Likert" según describe Innes (J. F. Innes y col., Journal of Small Animal Practice, 39, 325-332, 1998). La escala de valores usada era desde 0 hasta 3, en particular:
0 = tono normal
1 = atonía leve
2 = atonía moderada
3 = atonía grave
(iii) examen con instrumentos, consistente en la medida del grado de osteofitosis mediante un examen radiológico con rayos X realizados según describe Bouck (G. R. Bouck y col., Veterinary and Comparative Orthopaedic Traumatology, 8, 177-83, 1995). La escala de valores usada era desde 1 hasta 4, en particular:
1 = osteofitos ausentes
2 = formación de osteofitos mínima y localizada
3 = formación de osteofitos moderada en numerosos sitios de la articulación
4 = osteofitosis grave que afecta a toda la articulación
(iv) examen citológico del líquido sinovial, consistente en medir una línea celular característica del fenómeno inflamatorio; en particular, se eligió la medida del número de leucocitos por litro de líquido sinovial, realizada según describe Gibson (N. R. Gibson y col., The Veterinary Record, 24 de abril, 463-465, 1999). Los valores expresaron como el número de células por litro de líquido sinovial con un valor inferior a 3 x 10^{9} células/litro para pacientes normales.
Las evaluaciones se llevaron a cabo en perros grandes de varias razas y con edades comprendidas entre los 3 meses y los 7 años, que habían tenido cojera en la pata trasera derecha o izquierda durante no menos de 2 meses, debida a una DJD secundaria a la ruptura del ligamento cruzado, a la dislocación de la rótula (en cachorros) o a genu valgum (en cachorros). Los casos sometidos a tratamientos se resumen en la Tabla II.
TABLA II
2
3
Los tratamientos se llevaron a cabo durante un período de 40 días con administración diaria del medicamento por vía oral.
Las evaluaciones se realizaron en el tiempo cero (t_{0}) y en el cuadragésimo día (t_{40}).
La eficacia de la siguientes composiciones se evaluó mediante el procedimiento preseleccionado:
Composición A: una combinación de una fracción molecular específica de sulfato de condroitina caracterizada por un peso molecular promedio de entre 5.000 y 10.000 Da (Compuesto B) con ácido DL-\alpha-lipoico. Cada comprimido contenía:
Compuesto B 150 mg
Ácido DL-\alpha-lipoico 20 mg
excipientes hasta completar 700 mg
Composición B: una combinación de una fracción molecular específica de sulfato de condroitina caracterizada por un peso molecular promedio mayor de 20.000 Da (Compuesto E) con ácido DL-\alpha-lipoico. Cada comprimido contenía:
Compuesto E 150 mg
Ácido DL-\alpha-lipoico 20 mg
excipientes hasta completar 700 mg
Composición C: una composición basada en fenilbutazona en forma de comprimido. Cada comprimido contenía:
fenilbutazona 50 mg
excipientes hasta completar 700 mg
Composición D: una composición basada en una fracción molecular específica de sulfato de condroitina caracterizada por un peso molecular promedio de entre 5.000 y 10.000 Da (Compuesto B) pero sin ácido tióctico. Cada comprimido contenía:
Compuesto B 150 mg
excipientes hasta completar 700 mg
Los resultados de los ensayos clínicos se resumen en la Tabla III.
TABLA III
4 
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Como puede observarse a partir de los datos proporcionados en la Tabla III, las composiciones según la presente invención (Composiciones A y B) tienen unas ventajas sustanciales tanto en comparación con la fenilbutazona (composición C), con una verdadera actividad antinflamatoria, como en comparación con una composición que contiene sólo sulfato de condroitina (composición D). Las composiciones de la invención, particularmente la composición A, que contiene sulfato de condroitina con un peso molecular promedio de entre 5.000 y 10.000 Da, fueron las únicas que mostraron actividad sobre la atonía muscular, constituyendo por tanto una verdadera solución al problema esbozado anteriormente, es decir, la necesidad de actuar sobre la unidad morfofuncional mio-tendino-ligamentosa (MTL-MFU) en conjunto.
A partir de los datos de la tabla también puede apreciarse que la composición A tiende a tener un efecto más acusado que la composición B en el ensayo de atonía. Teniendo en mente que ambas composiciones contienen la misma cantidad de ácido tióctico, siendo la única diferencia la fracción molecular del sulfato de condroitina, y que éste último no puede afectar a la atonía muscular (véase la composición D), el resultado sólo puede explicarse por un efecto sinérgico entre los dos componentes activos de la composición.
El uso, en las composiciones de la presente invención, de fracciones moleculares de CS en las que - en virtud del procedimiento de purificación descrito a continuación - se han eliminado las moléculas con pesos moleculares mayores de 30.000 Da y que, además, carecen de fracciones inferiores a los 3.000 Da, potencia particularmente el efecto condroprotector.
Basándose en lo que se ha demostrado anteriormente, un sujeto adicional de la presente invención es una fracción molecular de sulfato de condroitina que tiene un peso molecular promedio de 5.000-10.000 Da, que carece de moléculas de sulfato de condroitina con pesos moleculares menores o iguales a 3.000 Da y, opcionalmente, carece de moléculas de sulfato de condroitina con pesos moleculares mayores o iguales a 30.000 Da, y su uso para la preparación de un medicamento o de un complemento alimenticio con actividad condroprotectora para uso humano o veterinario.
Un segundo sujeto adicional de la presente invención es el uso de un principio activo seleccionado entre el ácido DL-alfa-lipoico o una sal, éster o amida farmacéuticamente aceptable del mismo, o un isómero óptico del mismo, para la preparación de un medicamento o de un complemento alimenticio para uso humano o veterinario, para el tratamiento de la atonía muscular relacionada con enfermedades articulares degenerativas.
La invención se describe adicionalmente mediante los siguientes ejemplos de composiciones farmacéuticas. En los ejemplos, el compuesto A es la fracción molecular de sulfato de condroitina entre 10.000 y 35.000 Da; el compuesto B es la fracción de sulfato de condroitina entre 5.000 y 10.000 Da, sin CS con un peso molecular menor o igual a 3.000 Da y de CS con un peso molecular mayor o igual a 30.000 Da; el compuesto C es la fracción de sulfato de condroitina entre 10.000 y 20.000 Da.
Ejemplo 1 Ampollas inyectables
compuesto B 100 mg
DL-alfa-lipoamida 25 mg
cloruro sódico 17 mg
agua para inyección hasta completar 2 ml
Ejemplo 2 Ampollas liofilizadas
compuesto C 50 mg
clorhidrato de glucosamina 100 mg
sal sódica del ácido DL-alfa-lipoico 30 mg
manitol 80 mg
Cada ampolla disolvente contiene:
agua para inyección hasta completar 2 ml
Ejemplo 3 Comprimidos
compuesto A 150 mg
ácido DL-alfa-lipoico 20 mg
lactosa 100 mg
almidón de maíz 70 mg
talco 8 mg
estearato magnésico 4 mg
carboximetilcelulosa 8 mg
Ejemplo 4 Comprimidos
compuesto A 250 mg
ácido DL-alfa-lipoico 35 mg
acetato de DL-alfa-tocoferol 50 mg
lactosa 150 mg
celulosa microcristalina 100 mg
talco 12 mg
estearato magnésico 7 mg
Ejemplo 5 Cápsulas oleosas
compuesto B 25 mg
compuesto C 25 mg
ácido DL-alfa-lipoico, micronizado 50 mg
sulfato de glucosamina 150 mg
aceite de maíz 150 mg
gelatina FU 70 mg
glicerol FU 30 mg
dióxido de titanio (E171) 0,5 mg
eritrosina (E127) 1 mg
Naturalmente, pueden proporcionarse otras composiciones farmacéuticas que contienen una mezcla de los principios activos según la presente invención junto con excipientes farmacéuticamente aceptables. Estas composiciones pueden ser en forma de cápsulas, comprimidos, polvos y píldoras, y en formulaciones gastrorresistentes para su administración por vía oral, y también pueden producirse con el uso preliminar de técnicas de microencapsulación, incorporación en liposomas y micelización. Para procedimientos tópicos, incluyendo procedimientos transdérmicos, pueden usarse formulaciones en supositorios, microenemas, cremas, ungüentos, aerosoles, geles, esponjas, apósitos de diversas consistencias y parches. También pueden formularse todas las posibles formas indicadas farmacéuticamente para los diversos procedimientos de administración con los excipientes o los procesos tecnológicos adecuados para producir medicamentos de liberación rápida o de liberación lenta.
Las dosificaciones para el uso de las composiciones de la presente invención pueden variar según el procedimiento de administración y la gravedad de la enfermedad, y el estado general del paciente. Las dosificaciones terapéuticas previstas para el hombre son, en cualquier caso, desde 50 mg/día hasta 1.000 mg/día de sulfato de condroitina durante un periodo de entre 1 y 6 meses de administración ininterrumpida. En animales, particularmente en perros, estas dosificaciones terapéuticas son desde 10 mg/día hasta 500 mg/día de sulfato de condroitina. Según la gravedad de la dolencia, el tratamiento puede repetirse en varios ciclos. Las dosificaciones específicas o los procedimientos de tratamiento pueden ser estipulados por el médico según la gravedad de la dolencia y el estado físico del paciente.
Un sujeto adicional de la presente invención es un procedimiento para producir las fracciones moleculares del sulfato de condroitina indicadas anteriormente como los compuestos A, B, C, D y E con un alto grado de pureza, particularmente un procedimiento para producir la fracción molecular de CS que tiene un peso molecular de entre 5.000 y 10.000 Da y carece de moléculas de sulfato de condroitina con pesos moleculares menores o iguales a 3.000 Da (compuesto B).
Este procedimiento comienza con sulfato de condroitina comercial, preferiblemente de origen porcino, con un peso molecular promedio de entre 20.000 y 40.000 Da, un porcentaje de disacárido no sulfatado de entre el 2% y el 10%, un porcentaje de 4-sulfato de disacárido de entre el 50% y el 80%, un porcentaje de 6-sulfato de disacárido de entre el 15% y el 40%, y un grado de sulfatación por disacárido de entre 0,60 y 1.
En primer lugar, este producto de partida se disuelve en una disolución acuosa básica; la disolución se calienta en un autoclave a una presión de entre 1 y 1,2 atm y a una temperatura de entre 110ºC y 150ºC, preferiblemente entre 121ºC y 135ºC durante 30 minutos, se enfría rápidamente hasta temperatura ambiente, se neutraliza y se filtra a través de Celite.
La disolución transparente así obtenida se filtra a través de una membrana de 1 \mum y se vierte en acetona. Entonces el precipitado se separa por filtración y centrifugación, y se seca. El producto obtenido (compuesto A) tiene las siguientes características analíticas:
peso molecular promedio 10.000-35.000 Da
grado de sulfatación por disacárido 0,75-1
contenido proteico < 1,5%
El compuesto A producido anteriormente se disuelve en agua y la disolución se somete a ultrafiltración a volumen constante sobre una membrana de exclusión molecular de 3.000 NMWL (límite nominal de peso molecular). Una vez que se ha ultrafiltrado un volumen igual a 3,5 veces el volumen inicial, el filtrado se desecha (si se desea, la fracción molecular contenida puede recuperarse precipitándola con acetona y secándola; esta fracción constituye el compuesto D); la disolución que queda por encima del filtro se somete a una ultrafiltración adicional a volumen constante con una membrana de exclusión molecular de 10.000 NMWL. Una vez que se ha ultrafiltrado un volumen igual al doble del volumen inicial, el filtrado se concentra y después se precipita con acetona, y el precipitado se separa y se seca. Se obtiene un producto (compuesto B) con las siguientes características analíticas:
\newpage
peso molecular promedio 5.000-10.000 Da
grado de sulfatación por disacárido 0,75-1
contenido proteico < 1,5%
Una característica fundamental del compuesto B así obtenido es que carece de moléculas de CS con pesos moleculares menores o iguales a 3.000 Da. Este resultado se consigue mediante el uso de una membrana de exclusión molecular de 3.000 NMWL.
La disolución que queda por encima de la membrana de 10.000 NMWL se somete a ultrafiltración y concentración con una membrana de exclusión molecular de 30.000 NMWL. Una vez que se ha ultrafiltrado un volumen igual al doble del volumen inicial (adición constante de 1 volumen de agua en el transcurso de la ultrafiltración), la disolución que ha pasado a través de la membrana se concentra y después se precipita con acetona. El precipitado se separa y se seca, produciendo un producto (compuesto C) con las siguientes características analíticas:
peso molecular promedio 10.000-20.000 Da
grado de sulfatación por disacárido 0,75-1
contenido proteico < 1,5%
El compuesto C así obtenido no contiene moléculas de sulfato de condroitina con pesos moleculares mayores o iguales a 30.000 Da, y esto permite la producción de un principio activo en el que la actividad condroprotectora está maximizada.
El producto remanente por encima del filtro se retira; si se desea, la fracción molecular contenida puede recuperarse precipitándola en acetona y secándola.
Una posible variante del procedimiento descrito anteriormente estipula que la disolución que queda por encima de la membrana de exclusión molecular de 3.000 NMWL se someta directamente a ultrafiltración a volumen constante sobre una membrana de exclusión molecular de 30.000 Da. En este caso, se obtendrá una fracción molecular (compuesto F) con un peso molecular promedio de entre 5.000 y 20.000 Da, que carece de moléculas de sulfato de condroitina con pesos moleculares menores o iguales a 3.000 Da, y de moléculas de sulfato de condroitina con pesos moleculares mayores o iguales a 30.000 Da. Esta variante del procedimiento puede ser económicamente ventajosa, dado que permite la recuperación de una gran fracción de producto sin que esto conlleve reducciones drásticas de la actividad farmacológica.
La caracterización analítica de las diversas fracciones moleculares del sulfato de condroitina se realizó con el uso de los siguientes procedimientos analíticos.
El peso molecular promedio se determinó mediante cromatografía de exclusión molecular (HPSEC) según el procedimiento descrito por N. Volpi y L. Bolognini, J. Chromatogr., 630, 390-396 (1993).
El porcentaje de disacáridos se determinó mediante cromatografía HPLC de intercambio aniónico fuerte tras el tratamiento de las fracciones moleculares de sulfato de condroitina con liasa bacteriana, según el procedimiento descrito por N. Volpi, I. Sandri y T. Venturelli, Carbohydr. Res. 279, 193-200 (1995).
El grado de sulfatación se determinó mediante cromatografía de intercambio iónico (SAX-HPLC) según el procedimiento descrito por T. Imanari y col., J. Chromatogr., 720, 275-293 (1996).
El porcentaje de proteína se determinó mediante espectrofotometría según el procedimiento descrito por O. H. Lowry y col., J. Biol. Chem. 193, 265 (1951), modificado por G. L. Peterson, Methods in Enzymology 91, 95 (1983).
El procedimiento esbozado anteriormente se describe adicionalmente mediante los siguientes ejemplos de preparaciones, en los que también se describe la separación de la fracción E.
Ejemplo A Preparación del compuesto A
Se disolvieron 100 g de sulfato de condroitina comercial (en forma de sal sódica) de origen porcino, con las características analíticas establecidas anteriormente, con agitación, en 1 litro de una disolución de hidróxido sódico acuoso 1 N. La disolución opaca así obtenida se calentó en un autoclave de vapor a 121ºC durante 30 minutos a 1 atm y después se enfrió muy rápidamente hasta temperatura ambiente y se neutralizó a pH 7,2 con una disolución de ácido clorhídrico 1 N. Luego se filtró la disolución opaca a través de un lecho de Celite para dar un líquido claro con un leve color pajizo. Luego se llevó a cabo una filtración a presión sobre una membrana con un grado de filtración de 1 \mum (se usó un cartucho de polipropileno POLYGARD-CT 01 de Millipore y una presión diferencial de entre 300 y 350 kPa). La disolución completamente clara así obtenida se vertió en 5 litros de acetona anhidra a temperatura ambiente con agitación. Se continuó con una agitación lenta durante 2 horas, produciendo un precipitado en escamas de color blanco que tendía a sedimentar. El precipitado se recuperó mediante filtración y después se secó a vacío. Se obtuvieron 95 g de compuesto A, conforme con las características analíticas dadas anteriormente.
Ejemplo B Preparación del compuesto B
Se prefiltró una disolución acuosa al 10% de compuesto A, preparada según se indicó en el Ejemplo A, a través de un cartucho de polipropileno con un grado de filtración de 100 \mum (un cartucho POLYGARD-CT 99 de Millipore), y después se sometió a ultrafiltración a volumen constante sobre una membrana de exclusión molecular de 3.000 NMWL de celulosa regenerada (se usaron membranas PLBC de Millipore premontadas sobre módulos PELLICON de Millipore con flujo tangencial). El procedimiento se llevó a cabo a una temperatura de entre 20 y 25ºC con el uso de una presión diferencial de 600 kPa, conseguida mediante una bomba peristáltica (una bomba EASY-LOAD de Millipore). La bomba se montó de forma que fuera capaz de extraer la disolución a ultrafiltrar desde el recipiente, en el que se mantenía la agitación, y hacia el cual se admitía agua de forma continua en un volumen igual al del ultrafiltrado. Una vez que se había ultrafiltrado un volumen igual a 3,5 veces el volumen inicial, el filtrado se desechó (o se trató según se describe en el Ejemplo D), y la disolución remanente que permanecía por encima de la membrana se sometió a ultrafiltración a volumen constante sobre una membrana de exclusión molecular de 10.000 NMWL de celulosa regenerada compuesta (se usaron membranas PLCGC de Millipore premontadas sobre módulos PELLICON con flujo tangencial). También en este caso, la ultrafiltración se llevó a cabo a una temperatura de entre 20 y 25ºC con el uso de una presión diferencial de 600 kPa, conseguida mediante el aparato descrito anteriormente. Una vez que se había ultrafiltrado un volumen igual al doble del volumen inicial, la disolución que había pasado a través de la membrana se concentró hasta la mitad de su volumen y se precipitó vertiéndola en 5 volúmenes de acetona anhidra a temperatura ambiente, con agitación. Se continuó con una agitación lenta durante 2 horas, produciendo así un precipitado en escamas de color blanco que tendía a sedimentar. El precipitado se recuperó mediante filtración y después se secó a vacío. Se obtuvieron 60 g de compuesto B con las características analíticas dadas anteriormente.
Ejemplo C Preparación del compuesto C
La disolución que permanecía por encima de la membrana de 10.000 NMWL durante la preparación del Ejemplo B se sometió a una ultrafiltración adicional a volumen constante con una membrana de exclusión molecular de 30.000 NMWL de celulosa regenerada compuesta (se usaron membranas PLCTK de Millipore premontadas sobre módulos PELLICON con flujo tangencial). También en este caso, el procedimiento se llevó a cabo a una temperatura de entre 20 y 25ºC con el uso de una presión diferencial de 600 kPa, conseguida mediante el aparato descrito anteriormente. Una vez que se había ultrafiltrado un volumen igual al doble del volumen inicial, la disolución ultrafiltrada se concentró hasta la mitad de su volumen y se precipitó vertiéndola en 5 volúmenes de acetona anhidra a temperatura ambiente, con agitación. Se continuó con una agitación lenta durante 2 horas, produciendo así un precipitado en escamas de color blanco que tendía a sedimentar. El precipitado se recuperó mediante filtración y después se secó a vacío, produciendo 20 g de compuesto C con las características analíticas dadas anteriormente.
Ejemplo D Preparación del compuesto D
La disolución ultrafiltrada a través de la membrana de 3.000 NMWL (preparación del Ejemplo B) se concentró hasta la mitad de su volumen, en pequeñas cantidades, y se precipitó con 5 volúmenes de acetona anhidra. Se continuó con una agitación lenta durante 2 horas, produciendo así un precipitado en escamas de color blanco que tendía a sedimentar. El precipitado se recuperó mediante filtración y después se secó a vacío.
Ejemplo E Preparación del compuesto E
La disolución que permanecía por encima de la membrana de 30.000 NMWL en la preparación del Ejemplo C se concentró hasta la mitad de su volumen y se precipitó con 5 volúmenes de acetona anhidra. Se continuó con una agitación lenta durante 2 horas, produciendo así un precipitado en escamas de color blanco que tendía a sedimentar. El precipitado se recuperó mediante filtración y después se secó a vacío. Se obtuvieron 10 g de compuesto E con un peso molecular mayor de 20.000 Da.

Claims (23)

1. Una composición farmacéutica que comprende una mezcla de sulfatos de condroitina y de un principio activo seleccionado entre el ácido DL-alfa-lipoico, una sal, éster o amida farmacéuticamente aceptable del mismo, o un isómero óptico del mismo, caracterizada porque dicha mezcla de sulfatos de condroitina es una fracción molecular que tiene un peso molecular promedio de entre 5.000 y 10.000 Da, y que carece de sulfatos de condroitina de pesos moleculares menores o iguales a 3.000 Da.
2. Una composición según la reivindicación 1, en la que el sulfato de condroitina y el principio activo están en una proporción ponderal de sulfato de condroitina/principio activo variable desde 50:1 hasta 1:2.
3. Una composición según la reivindicación 2, en la que la proporción ponderal entre el sulfato de condroitina y el principio activo es de entre 10:1 y 1:1.
4. Una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que el sulfato de condroitina es una mezcla de 4-sulfato de condroitina, en una proporción variable entre el 50% y el 80% en peso, y 6-sulfato de condroitina, en una proporción variable entre el 15% y el 40% en peso, con un grado de sulfatación por disacárido de entre 0,60 y 1 y un porcentaje de disacárido no sulfatado de entre el 2% y el 10%.
5. Una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que el sulfato de condroitina tiene un grado de sulfatación por disacárido de entre 0,75 y 1 y un contenido proteico menor del 1,5% en peso.
6. Una composición según la reivindicación 5, en la que el contenido proteico está entre el 0,05% y el 1,2% en peso.
7. Una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en la que el principio activo es ácido DL-alfa-lipoico o una sal del mismo con un metal alcalino o un metal alcalinotérreo.
8. Una composición según la reivindicación 7, en la que la sal del ácido DL-alfa-lipoico es una sal sódica.
9. Una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, que comprende, además, una o más sustancias seleccionadas entre:
-
un aminoazúcar,
-
una sal de manganeso,
-
un antioxidante.
10. Una composición según la reivindicación 9, en la que el aminoazúcar es glucosamina en una proporción ponderal de entre 1:1 y 4:1, respecto al sulfato de condroitina.
11. Una composición según la reivindicación 9 o la reivindicación 10, en la que la sal de manganeso es ascorbato de manganeso en una proporción ponderal de entre 1:3 y 1:10, respecto al sulfato de condroitina.
12. Una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, en la que el antioxidante es vitamina E en una proporción ponderal de entre 1:7 y 1:3, respecto al sulfato de condroitina.
13. Una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, en la que el antioxidante es vitamina C en una proporción ponderal de entre 1:10 y 1:1, respecto al sulfato de condroitina.
14. Una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, en la que el antioxidante es un flavonoide, preferiblemente quercetina o rutina, en una proporción ponderal de entre 1:5 y 1:1, respecto al sulfato de condroitina.
15. Uso de una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 para la preparación de un medicamento o de un complemento alimenticio para uso humano o veterinario, para el tratamiento de enfermedades articulares degenerativas.
16. Una fracción molecular de sulfato de condroitina con un peso molecular promedio de entre 5.000 y 10.000 Da, caracterizándose la fracción molecular porque carece de moléculas de sulfato de condroitina con peso molecular menor o igual a 3.000 Da.
17. Uso de la fracción molecular según la reivindicación 16 para la preparación de un medicamento o de un complemento alimenticio con actividad condroprotectora, para uso humano o veterinario.
18. Un procedimiento para preparar la fracción de sulfato de condroitina según la reivindicación 16 a partir de sulfato de condroitina comercial, comprendiendo el procedimiento las etapas de:
(a) disolver el sulfato de condroitina comercial en una disolución acuosa básica y calentar la disolución a una presión de entre 1 y 1,2 atm y a una temperatura de entre 110ºC y 150ºC;
(b) enfriar la disolución obtenida en la etapa (a) hasta temperatura ambiente, neutralizarla, filtrarla hasta clarificarla y precipitar la disolución clara en acetona, obteniendo el compuesto A con un peso molecular promedio de 10.000-35.000 Da, un grado de sulfatación por disacárido de entre 0,75-1 y un contenido proteico de < 1,5%;
(c) disolver el compuesto A obtenido en la etapa (b) en agua y someter la disolución a ultrafiltración a volumen constante sobre una membrana de exclusión molecular de 3.000 NMWL, ultrafiltrando un volumen igual a 3,5 veces el volumen inicial,
(d) someter la disolución que queda por encima del filtro de la etapa (c) a ultrafiltración a volumen constante sobre una membrana de exclusión molecular de 10.000 NMWL, ultrafiltrando un volumen igual al doble del volumen inicial,
(e) precipitar el filtrado obtenido en la etapa (d) con acetona, opcionalmente tras una concentración, obteniendo un compuesto B con un peso molecular promedio de 5.000-10.000 Da, un grado de sulfatación por disacárido de 0,75-1 y un contenido proteico de < 1,5%, careciendo el compuesto B de moléculas de sulfato de condroitina con pesos moleculares menores o iguales a 3.000 Da.
19. Un procedimiento según la reivindicación 18, en el que el sulfato de condroitina comercial es de origen porcino y tiene un peso molecular promedio de entre 20.000 y 40.000 Da.
20. Un procedimiento según la reivindicación 18 o la reivindicación 19, en el que la disolución de sulfato de condroitina comercial se calienta, en la etapa (a), a entre 121ºC y 135ºC durante 30 minutos.
21. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 18 a 20, en el que la filtración de la disolución obtenida en la etapa (a) se realiza a través de Celite y/o una membrana de 1 \mum.
22. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 18 a 21, comprendiendo adicionalmente el procedimiento las etapas de:
(f) someter la disolución que queda por encima de la membrana de 10.000 NMWL de la etapa (d) a ultrafiltración a concentración sobre una membrana de exclusión molecular de 30.000 NMWL, ultrafiltrando un volumen igual al doble del volumen inicial,
(g) precipitar el filtrado obtenido en la etapa (f) con acetona, opcionalmente tras una concentración, obteniendo un compuesto C con un peso molecular promedio de 10.000-20.000 Da, un grado de sulfatación por disacárido de 0,75-1 y un contenido proteico de < 1,5%.
23. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 18 a 21, en el que la ultrafiltración a volumen constante de la etapa (d) se realiza sobre una membrana de exclusión molecular de 30.000 NMWL, produciendo, tras la etapa (e), un compuesto F con un peso molecular promedio de 5.000-20.000 Da, un grado de sulfatación por disacárido de 0,75-1 y un contenido proteico de < 1,5%, careciendo el compuesto F de moléculas de sulfato de condroitina con pesos moleculares menores o iguales a 3.000 Da y de moléculas de sulfato de condroitina con pesos moleculares mayores o iguales a 30.000 Da.
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