ES2242242T3 - Utilizacion de hcc-1 para el tratamiento de trombocitopenias. - Google Patents

Abstract

LA INVENCION TRATA DE LA UTILIZACION DE POLIPEPTIDOS DEL TIPO DE LAS MIP (PROTEINAS INFLAMATORIAS DE MACROFAGOS) PARA EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES, QUE SE DESARROLLAN CON UNA MODIFICACION PATOLOGICA DE LA FORMACION DE PLAQUETAS SANGUINEAS, EN PARTICULAR PARA EL TRATAMIENTO DE LA TROMBOCITOPENIA.

Description

Utilización de HCC-1 para el tratamiento de trombocitopenias.

El invento se refiere a la utilización del polipéptido HCC-1 de la clase de las MIPs (del inglés "macrophage inflammatory proteins", proteínas inflamatorias de macrófagos) para el tratamiento de enfermedades, que van acompañadas de una disminución patológica de la formación de plaquetas.

Los trombocitos desempeñan un cometido primordial en la coagulación de la sangre y en la cicatrización. Las enfermedades trombocitarias pueden conducir, por consiguiente, a perturbaciones en el restañamiento hemostático de la sangre y, con ello, a hemorragias masivas. Generalmente, se establece diferencia entre trombocitopenias, en las que se disminuye el número de los trombocitos, y disfunciones trombocitarias, en las que, a pesar de que se presentan unos números normales de trombocitos, se ha perturbado su función.

Como causas de una trombocitopenia entran en cuestión un número disminuido o ausente de megacariocitos en la médula ósea, una producción disminuida de plaquetas, un secuestro de los trombocitos en el bazo, una degradación aumentada de los trombocitos, un consumo aumentado de trombocitos o una dilución de la agrupación de trombocitos. Independientemente de cual sea la etiología, una trombocitopenia grave conduce a hemorragias cutáneas en forma de petequias múltiples, que aparecen de la manera más manifiesta en la mayoría de los casos en las piernas, así como a pequeñas equimosis dispersas después de traumas triviales. Sin embargo, son más graves las hemorragias en las mucosas (hemorragias nasales; hemorragias en el tracto gastrointestinal, en el tracto urogenital y en la vagina), así como hemorragias después de intervenciones quirúrgicas. En dependencia de la extensión de la trombocitopenia pueden aparecer graves hemorragias gastrointestinales, así como hemorragias en el sistema nervioso central con consecuencias amenazantes para la vida.

Las trombocitopenias se pueden observar en un gran número de enfermedades y en el caso de determinadas intervenciones terapéuticas. Una formación disminuida de plaquetas puede aparecer como consecuencia, p.ej. de una terapia mielosupresora (irradiación, quimioterapia, en particular terapia con dosis altas), un trasplante de médula ósea, una leucemia, una anemia (anemia aplásica, anemia de Fanconi, etc.) o también después de un uso indebido de alcohol. Un consumo aumentado, o una degradación aumentada, de trombocitos pueden tener como fundamento enfermedades, tales como la púrpura trombocitopénica idiopática, infecciones (trombocitopenia en el caso de una infección causada por HIV, sepsis, etc.), enfermedades básicas inmunológicas (enfermedades autoinmunitarias, tales como p.ej. el lupus eritematoso sistémico), la leucemia crónica o linfomas malignos. Un número disminuido de plaquetas puede aparecer también en forma de una trombocitopenia inducida por medicamentos después de una administración, por ejemplo, de heparina, quinidina, sulfonamidas, agentes antidiabéticos orales, sales de oro o rifampicina.

Dentro del marco del diagnóstico en la química clínica, la determinación de los números de células en el cuadro de sangre periférica constituye el parámetro esencial, para comprobar la extensión de la trombocitopenia, y para obtener unos primeros indicios en cuanto a las posibles causas. Así, p.ej. una proporción aumentada de trombocitos grandes (determinable con ayuda del frotis sanguíneo o mediante medición del volumen medio de trombocitos en un aparato electrónico para análisis de células sanguíneas) apunta a la existencia de una producción, aumentada de manera compensatoria, de trombocitos. Ésta se presenta frecuentemente en el caso de trombocitopenias secundarias a causa de una degradación aumentada o de un consumo aumentado de trombocitos. La duración de una hemorragia es prolongada en el caso de trombocitopenias agudas de cualquier causa. En el caso de pacientes con una trombocitopenia sólo moderada (p.ej. 5.000 trombocitos/\mul), la determinación de la duración de una hemorragia puede constituir una información valiosa. Una duración grandemente prolongada de una hemorragia apunta en este caso a que una carga de los trombocitos con anticuerpos conduce evidentemente a una perturbación funcional de los trombocitos circulantes. Un criterio de diagnóstico adicional lo constituyen las investigaciones de punciones de médula ósea. Las trombocitopenias pueden valorarse en este caso en función del número y del aspecto de los megacariocitos.

Para el tratamiento de trombocitopenias, se tienen que reconocer y corregir las causas que las provocan, p.ej. en el caso de trombocitopenias inducidas por medicamentos, mediante una rápida interrupción de la toma del medicamento que provoca la trombocitopenia, o mediante reconocimiento y tratamiento de una infección con gérmenes gram-negativos que forman endotoxinas. Cuando la trombocitopenia es consecuencia de una perturbación de la megacariopoyesis y de la producción disminuida con ello de plaquetas, p.ej. después de una quimioterapia, mediante administración de concentrados de trombocitos se puede aumentar el número de trombocitos en la mayoría de los casos por una duración de 2-3 días. Para el tratamiento de la trombocitopenia se administran concentrados de trombocitos o bien de una manera continua (de 1 a 2 unidades por hora) o en cantidades mayores a intervalos de algunas horas, p.ej. de 6 a 8 unidades cada 4 a 6 horas. No obstante, los concentrados de trombocitos se deberían de emplear profilácticamente con moderación, puesto que a causa del desarrollo de alo-anticuerpos dirigidos contra trombocitos puede disminuir su efectividad en el caso de una aplicación repetida. Tampoco en el caso de transfusiones se debe despreciar el riesgo de una infección. Cuando no sea de esperar una regeneración rápida de la función de la médula ósea, la transfusión de trombocitos se debería emplear solamente para el tratamiento de una tendencia clínicamente manifiesta a las hemorragias. En el caso de trombocitopenias como consecuencia de un consumo aumentado de plaquetas, las transfusiones de trombocitos se deberían administrar profilácticamente sólo en casos excepcionales, puesto que, en los casos de estas enfermedades, los trombocitos son eliminados de nuevo desde la circulación en el transcurso de una hora a unas pocas horas. En el caso del tratamiento de la trombocitopenia inducida por heparina, los trombocitos transfundidos pueden conducir también a la formación de trombos con trombocitos y fibrina, y con ello a una grave tendencia a la trombosis.

Los polipéptidos de la clase de las MIPs (proteínas inflamatorias de macrófagos) son conocidos a partir del documento de solicitud de patente internacional WO 95/17092. Estos polipéptidos son segregados, por ejemplo, por macrófagos o linfocitos, cuando éstos son estimulados por bacterias gram-negativas, lipopolisacáridos o concanavalina A. El documento WO 95/17092 describe tales polipéptidos y su utilización para la preparación de medicamentos destinados al tratamiento de infecciones, cáncer, inflamaciones, disfunciones mielopoyéticas o enfermedades autoinmunitarias. En particular, en conexión de hematopoyesis se describe la inhibición de células troncales de médula ósea por medio de MIPs, a fin de tratar, por ejemplo, enfermedades mieloproliferativas. El efecto inhibidor de las MIPs sobre la proliferación de células troncales se ha descrito también como un principio terapéutico en el tratamiento de un cáncer, a fin de inmovilizar a las células troncales mediante la administración previa de MIPs, y de esta manera protegerlas con respecto de los efectos secundarios de una quimioterapia. Además de esto, el documento WO 95/17092 describe inhibidores o bien antagonistas contra tales polipéptidos, que han de interrumpir una supresión de médula ósea provocada por MIPs, y que se pueden emplear, por consiguiente, para el tratamiento p.ej. de la anemia aplásica o del síndrome mielodisplásico. Un tratamiento de la trombocitosis mediante administración de MIPs se debe de conseguir mediante un aumento de la permeabilidad de los vasos en la periferia, y por secuestro, aumentado con ello, de los trombocitos. En un resumen de congreso, que ha aparecido recientemente, se describe para la MIP1\gamma, conocida a partir del documento WO 95/17092, que la maduración de las células precursoras de monocitos y macrófagos es inhibida en presencia de MIP1\gamma. La MIP1\gamma se designa como consecuencia de ello como M-CIF (del inglés, "Macrophage colony inhibition factor", factor de inhibición de colonias de macrófagos).

Además, a partir del documento de patente alemana DE 43.44.397 se conoce otro fragmento de MIP con la denominación HCC-1. En el caso de este fragmento se trata de un polipéptido, que abarca la secuencia de MIP-3 (1-69) y que está prolongado en el extremo terminal de N por cinco aminoácidos adicionales. Este péptido encuentra utilización terapéuticamente para el tratamiento de perturbaciones de la migración de células, enfermedades del sistema inmunitario, tumores, así como una disfunción de factores reguladores del crecimiento.

A partir del documento WO 97/06871 se conoce que por la administración continua de quimiocinas de células troncales ("SCC" del inglés "stem cell chemokins") se puede conseguir un restablecimiento reforzado del sistema hematopoyético en conexión con la terapia mielosupresora. Como quimiocinas de células troncales se hace mención allí, por ejemplo, a las proteínas LD78 (huMIP-1\alpha), muMIP-1\alpha, MIP-1\beta, IL-8, GRO, NAP-2, MCAF, ENA78, PF4, GCP-2, INPROL, MCP-1, MCP-2 y MCP-3, y a sus compuestos análogos. El restablecimiento del sistema hematopoyético se define como satisfactorio, cuando los valores de neutrófilos, plaquetas y/o células precursoras aumentan de nuevo a un intervalo de más que 25% del valor normal. La administración de las quimiocinas de células troncales se describe, no obstante, solamente en el contexto de la terapia mielosupresora (MT), en particular antes del comienzo de la MT, durante la MT o directamente después de la MT.

En el documento WO 96/19234 se describe la utilización combinada de quimiocinas CxC y de agentes que estimulan la hematopoyesis, tales como p.ej. CSFs, para aumentar la liberación y la movilización de células hematopoyéticas procedentes de la médula ósea. Tales formulaciones combinadas se emplean en el caso de tratamientos, en los que el enriquecimiento de la sangre con células troncales hematopoyéticas es conveniente desde el punto de vista terapéutico, p.ej. en el caso de trasplantes de células troncales de sangre periférica y para aumentar la respuesta inmunitaria.

En el documento WO 94/28916 se describe la utilización de inhibidores de células troncales ("SCI" del inglés stem cell inhibitors), tales como p.ej. muMIP-1\alpha o huMIP-1\alpha y sus compuestos análogos para el refuerzo de la liberación y la movilización de células troncales hematopoyéticas. Los inhibidores de células troncales se utilizan, por ejemplo, en el caso del tratamiento de neutropenias, que pueden aparecer en conexión con la quimioterapia.

Sorprendentemente, se ha encontrado, por fin, que el polipéptido HCC-1 de la clase de las MIPs, y sus derivados, producen un aumento significativo y específico del número de plaquetas (PLT), y por consiguiente se pueden utilizar para la producción de medicamentos destinados al tratamiento de estados patológicos, que por regla general van acompañados de una disminución de los números de trombocitos. Esto abarca sobre todo las enfermedades, que van acompañadas o bien de una perturbación de la megacariopoyesis o de una disminución patológica de la formación de plaquetas. En este contexto, se utiliza este polipéptido en particular para el tratamiento de trombopenias, tales como por ejemplo trombopenias, que habían sido provocadas por una quimioterapia o irradiación; o trombopenias que están en conexión con trasplantes de médula ósea, infecciones víricas o retrovíricas, enfermedades autoinmunitarias y anemias. El efecto terapéutico de este polipéptido se comprobó in vivo mediante estimulación de la trombopoyesis. En este caso, después de un tratamiento previo con agentes quimioterapéuticos, se pudo conseguir una recuperación más rápida de las células precursoras en la médula ósea y, por consiguiente, una duración, acortada manifiestamente, del estado trombopénico.

Como derivados de HCC-1 entran en cuestión también los polipéptidos, que se derivan por prolongación, deleción (supresión) o sustitución de aminoácidos individuales o de múltiples aminoácidos (compárense, a modo de ejemplo, los documentos WO 94/28916; WO 95/17092; WO 93/09799; WO 94/24285; y las citas bibliográficas The Faseb Journal 1989; 3: 2.565-2.573; Int. J. Hematol. 1993, 57; 197-206; Blood 1995, 86(12); 4.400-4.408). Tales fragmentos o derivados son, por ejemplo, los polipéptidos, en los que uno o varios aminoácidos se reemplazan por aminoácidos naturales o por otros aminoácidos, uno o varios de los aminoácidos tienen un sustituyente o el polipéptido está acoplado con otros compuestos (tales como p.ej. un polietilenglicol), a fin, por ejemplo, de aumentar el período de tiempo de semidesintegración. Además, el polipéptido se puede prolongar o acortar en los extremos terminales de N y/o C por uno o varios aminoácidos, permaneciendo no obstante esencialmente conservada la actividad biológica del polipéptido en lo que se refiere a la estimulación de la trombopoyesis. Unas correspondientes prolongaciones son en particular secuencias de guía o secuencias secretoras, pudiendo preceder hasta 40 aminoácidos, preferiblemente hasta 20 o 10 aminoácidos al extremo terminal de N de la secuencia del polipéptido maduro.

La actividad biológica del péptido conforme al invento se describe a modo de ejemplo con ayuda de las siguientes investigaciones.

Ejemplo

Estimulación de la trombopoyesis por medio de HCC-1 después de un tratamiento con Busulfan de ratones Balb/C.

Materiales y métodos

A ratones Balb/C (hembras, de 6-8 semanas de edad, peso corporal 17 g) se les aplica una vez en el día 0 Busulfan en una dosificación de 20 mg/kg por vía intraperitoneal. Como solubilizante para el Busulfan sirve Cremophor EL. Comenzando con el día 1 hasta el día 15 se les administra a los animales por vía intraperitoneal, una vez por día, HCC-1 en una mezcla de PBS y BSA al 1% como disolvente. Las dosis aplicadas se sitúan entre 0,01 y 10 \mug/ratón. Los animales testigos reciben sólo el disolvente, mezcla de PBS y BSA al 1%, una vez por día i.p. (por vía intraperitoneal). En los momentos indicados, se les extraen a los animales por vía retrobulbar 20 \mul de sangre entera y se determinan los diferentes parámetros de la sangre en un analizador de sangre (Contraves Autolyzer 801).

Resultado

Después de la aplicación del agente citostático Busulfan, se induce una trombocitopenia transitoria en ratones con una dosificación apropiada (véanse las citas de Morley y Blake, Oyekan y Onabanjo). La evolución de los números de plaquetas en la sangre periférica de ratones Balb/C después de una administración en una vez de 20 mg/kg se registra en función del tiempo. A partir de la representación gráfica se puede reconocer que, comenzando con el día 8 después de la inyección, los números de plaquetas disminuyen en el testigo con Busulfan y alcanzan su nadir ya entre el día 11 y el día 13. La reducción de los valores de PLT es en este caso de aproximadamente 60%. Hasta el día 21 aumentan luego de nuevo los números de plaquetas; no se observa ningún fenómeno de rebote. Hasta el día 35 los valores de PLT en el grupo con Busulfan permanecen por debajo de los testigos no tratados y ya no alcanzan el nivel de partida.

Después de la administración de Busulfan y de una subsiguiente aplicación diaria de HCC-1, se llega asimismo a partir del día 8 a una disminución de los números de plaquetas. Los valores alcanzados para el nadir se sitúan, no obstante, en todas las dosificaciones de HCC-1 por encima de los del testigo con Busulfan. Además de esto, se acorta manifiestamente el período de tiempo hasta llegar al aumento renovado de los números de plaquetas, de tal manera que en el grupo con 1 \mug de HCC-1 / ratón se pueden medir ya en el día 15 de nuevo unos valores de PLT situados en torno a 800 x 10^{6}/ml. En el transcurso ulterior del experimento, los números de PLT se sitúan en el caso de los grupos tratados con HCC-1 por encima de los del testigo con Busulfan, y a partir de aproximadamente el día 30 alcanzan de nuevo el nivel de los animales testigos no tratados. Si como límite se establece el de 700 x 10^{6} de PLT/ml, la duración y la extensión de la trombopenia (medida como el área de la superficie situada por debajo de la curva) se reduce hasta un 70% mediante la aplicación de HCC-1 en comparación con el testigo con Busulfan.

TABLA 1 Influencia de HCC-1 sobre la extensión de la trombopenia en ratones Balb/C tratados con Busulfan

Busulfan	Terapia	Dosis	Trombopenia*
		[por ratón]	[%]	% de reducción
+	PBS-BSA	-	100	-
+	HCC-1	10 \mug	45	55
+	HCC-1	1 \mug	30	70
+	HCC-1	0,1 \mug	35	65
+	HCC-1	0,01 \mug	58	42
\begin{minipage}[t]{145mm} * = el comienzo de la trombopenia se estableció en 700 x 10^{6} de PLT/ml y se determinó el área de la superficie situada por debajo de la curva para cada grupo de terapia (n = 8 animales / grupo)\end{minipage}

Claims (6)

1. Utilización del polipéptido HCC-1 para la producción de medicamentos destinados al tratamiento de enfermedades, que van acompañadas de una disminución patológica de la formación de plaquetas.

2. Utilización de acuerdo con la reivindicación 1 para el tratamiento de enfermedades, que van acompañadas de una disminución de la megacariopoyesis.

3. Utilización de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2 para el tratamiento de trombopenias.

4. Utilización de acuerdo con la reivindicación 3 para el tratamiento de trombopenias, que habían sido provocadas por una quimioterapia o una irradiación.

5. Utilización de acuerdo con la reivindicación 3 para el tratamiento de trombopenias, que están en conexión con trasplantes de médula ósea, infecciones víricas o retrovíricas, enfermedades autoinmunitarias y anemias.

6. Utilización de acuerdo con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizada porque el polipéptido es el HCC-1 acoplado con un polietilenglicol.