ES2242402T3

ES2242402T3 - Inhibidores de tace.

Info

Publication number: ES2242402T3
Application number: ES99933079T
Authority: ES
Inventors: Kim Francis Mcclure; Mark Carl Noe; Michael Anthony Letavic; Louis Stanley Chupak
Original assignee: Pfizer Products Inc
Current assignee: Pfizer Products Inc
Priority date: 1998-08-12
Filing date: 1999-08-05
Publication date: 2005-11-01
Anticipated expiration: 2019-08-05
Also published as: ATE297908T1; DE69925840D1; US20030181441A1; WO2000009492A1; CA2340182A1; TNSN99157A1; EP1104412B1; UY25992A1; BR9912944A; US20050215549A1; AU4925099A; PA8479901A1; MA26674A1; GT199900132A; JP2003526604A; EP1104412A1; JP3623448B2; DE69925840T2

Abstract

Un compuesto de **fórmula** o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que X es oxígeno, azufre, SO, SO2 o NR7; R1, R2, R3, R4, R5 y R6 se seleccionan del grupo constituido por hidrógeno, hidroxilo, -CN, alquilo (C1- C6), alquenilo (C2-C6), aril(C6-C10)alquenilo(C2-C6), heteroaril(C2-C9)alquenilo(C2-C6), alquinilo(C2-C6), aril(C6-C10)alquinilo(C2-C6), heteroaril(C2- C9)alquinilo(C2-C6), alquilamino(C1-C6), alquiltio(C1- C6), alcoxilo(C1-C6), perfluoroalquilo(C1-C6), arilo(C6- C10), heteroarilo(C2-C9), arilamino(C6-C10), ariltio(C6- C10), ariloxilo(C6-C10), heteroarilamino(C2-C9), heteroariltio(C2-C9), heteroariloxilo(C2-C9), cicloalquilo(C3-C6), alquil(C1-C6)(hidroximetileno), piperidilo, alquil(C1-C6) piperidilo, acilamino(C1-C6), aciltio(C1-C6), aciloxilo(C1-C6), alcoxi(C1-C6)-(C=O), - CO2H, alquil(C1-C6)-NH-(C=O)- y [alquil(C1-C6)]2-N-(C=O); en las que dicho alquilo (C1-C6) está opcionalmente sustituido por uno o dos grupos seleccionados entre alquiltio(C1-C6), alcoxilo(C1-C6), trifluorometilo, halo, -CN, arilo(C6-C10), heteroarilo(C2-C9), arilamino(C6- C10), ariltio(C6-C10), ariloxilo(C6-C10), heteroarilamino(C2-C9), heteroariltio(C2-C9), heteroariloxilo(C2-C9), aril(C6-C10)arilo(C6-C10), cicloalquilo(C3-C6), hidroxilo, piperazinilo, aril(C6- C10) alcoxilo(C1-C6), heteroaril(C2-C9)alcoxilo(C1-C6), acilamino(C1-C6), aciltio(C1-C6), aciloxilo(C1-C6), alquilsulfinilo(C1-C6), arilsulfinilo(C6-C10), alquilsulfonilo(C1-C6), arilsulfonilo(C6-C10), amino, alquilamino(C1-C6) o (alquil(C1-C6))2amino; con la condición de que cuando X es SO o SO2, y R3 y R4 son sustituyentes que comprenden un heteroátomo, el heteroátomo no puede estar unido al anillo; y con la condición de que al menos uno de R1-R6 debe ser alquilo(C1-C6); y con la condición de que cuando X es oxígeno o azufre y R3-R6 son cada uno hidrógeno, entonces R1 y R2 no pueden ser ambos metilo.

Description

Inhibidores de tace.

Antecedentes de la invención

La presente invención se refiere a derivados de hidroxamida heterocíclicos, y a composiciones farmacéuticas que comprenden tales derivados y al uso de tales derivados para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la artritis, cáncer y otras enfermedades.

Los compuestos de la presente invención son inhibidores de metaloendopeptidasas de cinc, especialmente aquellas que pertenecen a las subfamilias, metaloproteinasas de matriz (también denominadas MMP o matrixinas) y reprolisinas (también conocidas como adamilsinas) de las metcincinas (Rawlings y col., Methods in Enzymology, 248, 183-228 (1995) y Stocker y col., Protein Science, 4, 823-840 (1995)).

La subfamilia de enzimas MMP contiene actualmente 17 miembros (MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20). Las MMP son muy conocidas por su papel en la regulación de la renovación de las proteínas de matriz extracelular y como tal desempeñan papeles importantes en procesos fisiológicos normales tales como la reproducción, el desarrollo y la diferenciación. Además, las MMP se expresan en muchas situaciones patológicas en las que se produce una renovación anormal del tejido conectivo. Por ejemplo, la MMP-13, una enzima con una potente actividad en la degradación del colágeno de tipo II (el colágeno principal en el cartílago), se ha demostrado que se sobreexpresa en el cartílago artrósico (Mitchell y col., J. Clin. Invest., 97, 761 (1996)). Otras MMP (MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-12) también se sobreexpresan en el cartílago artrósico y la inhibición de algunas o todas estas MMP se espera que disminuya o bloquee la pérdida acelerada de cartílago típica de enfermedades de las articulaciones tales como artrosis o artritis reumatoide.

Las reprolisinas de mamíferos son conocidas como ADAM (desintegrina A y metaloproteinasa) (Wolfberg y col., J. Cell Biol., 131, 275-278 (1995)) y contienen un dominio desintegrina además de un dominio similar a metaloproteinasa. Hasta la fecha se han identificado veintitrés ADAM distintas.

La ADAM-17, también conocida como enzima conversora del factor de necrosis tumoral alfa (TACE), es la ADAM mejor conocida. La ADAM-17 (TACE) es responsable de la escisión del factor de necrosis tumoral alfa unido a la célula (TNF-\alpha, también conocido como caquectina). El TNF-\alpha es reconocido por estar implicado en muchas enfermedades autoinmunitarias e infecciosas (W. Friers, FEBS Letters, 285, 199 (1991)). Además, se ha demostrado que el TNF-\alpha es el mediador principal de la respuesta inflamatoria observada en la sepsis y en el choque séptico (Spooner y col., Clinical Immunology and Immunopathology, 62 S11 (1992)). Hay dos formas de TNF-\alpha, una proteína de membrana tipo II de masa molecular relativa 26.000 (26 kDa) y una forma soluble de 17 kDa generada a partir de la proteína unida a la célula por escisión proteolítica específica. La forma soluble de 17 kDa del TNF-\alpha es liberada por la célula y está asociada a los efectos deletéreos del TNF-\alpha. Esta forma del TNF-\alpha también es capaz de actuar en sitios distantes del sitio de síntesis. Así, los inhibidores de la TACE previenen la formación de TNF-\alpha soluble y previenen los efectos deletéreos del factor soluble (véase patente de Estados Unidos 5.830.742 expedida el 13 noviembre de 1998).

Los compuestos seleccionados de la invención son potentes inhibidores de la agrecanasa, una enzima importante en la degradación del agrecano del cartílago. También se cree que la agrecanasa es una ADAM. La pérdida de agrecano de matriz del cartílago es un factor importante en la progresión de enfermedades de las articulaciones tales como artrosis y artritis reumatoide y se espera que la inhibición de la agrecanasa disminuya o bloquee la pérdida de cartílago en estas enfermedades.

Otras ADAM que han presentado expresión en situaciones patológicas incluyen ADAM TS-1 (Kuno y col., J. Biol. Chem., 272, 556-562 (1997)) y las ADAM 10, 12 y 15 (Wu y col., Biochem. Biophys. Res. Comm., 235, 437-442, (1997)). A medida que aumenten los conocimientos de la expresión, de los sustratos fisiológicos y de la asociación a la enfermedad de las ADAM, se apreciará la importancia completa del papel de la inhibición de esta clase de enzimas.

Los compuestos de la invención son útiles en el tratamiento de la artritis (incluyendo artrosis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, enfisema, síndrome de insuficiencia respiratoria aguda, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad de Alzheimer, toxicidad por trasplante de órganos, caquexia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad por contacto alérgico, cáncer (tales como tumores cancerosos sólidos incluyendo cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de pulmón y cáncer de próstata y afecciones hematopoyéticas incluyendo leucemias y linfomas), ulceración tisular, restenosis, enfermedad periodontal, epidermolisis bulosa, osteoporosis, distensión de implantes articulares artificiales, ateroesclerosis (incluyendo rotura de la placa ateroesclerótica), aneurisma aórtico (incluyendo aneurisma aórtico abdominal y aneurisma aórtico cerebral), insuficiencia cardiaca congestiva, infarto de miocardio, accidente cerebrovascular, isquemia cerebral, traumatismo cráneoencefálico, lesión de la espina dorsal, trastornos neurodegenerativos (agudos y crónicos), trastornos autoinmunitarios, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía amiloide cerebral, mejora cognitiva o nootrópica, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, angiogénesis ocular, lesión de córnea, degeneración macular, curación anormal de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento tumoral, metástasis tumoral, cicatrización córnea, escleritis, SIDA, sepsis o choque séptico.

Los compuestos de la presente invención también son útiles en el tratamiento de enfermedades en las cuales la inhibición de las MMP y/o ADAM proporcionará un beneficio terapéutico, tales como aquellas caracterizadas por la expresión de ADAM o metaloproteinasas de matriz.

Los presentes inventores también han descubierto que es posible identificar inhibidores con actividad reprolisina y metaloproteasa diferencial (preferentemente actividad inhibidora de la TACE). Un grupo de inhibidores preferidos incluye aquellos que inhiben selectivamente la TACE de manera preferencial sobre la MMP-1. Otro grupo de inhibidores preferidos incluye aquellas moléculas que inhiben selectivamente la TACE y la metaloproteasa-13 de matriz (MMP-13) de manera preferencial sobre la MMP-1. Otro grupo de inhibidores preferidos incluye aquellas moléculas que inhiben selectivamente la agrecanasa y la metaloproteasa-13 de matriz (MMP-13) de manera preferencial sobre la MMP-1. Otro grupo de inhibidores preferidos incluye aquellas moléculas que inhiben selectivamente la agrecanasa y la TACE de manera preferencial sobre la MMP-1. Otro grupo de inhibidores preferidos incluye aquellas moléculas que inhiben selectivamente la MMP-13 de manera preferencial sobre la MMP-1. Otro grupo de inhibidores preferidos incluye aquellas moléculas que inhiben selectivamente la agrecanasa, la TACE y la MMP-13 de manera preferencial sobre la MMP-1.

Los inhibidores de la reprolisina y de las metaloproteinasas de matriz son muy conocidos en la bibliografía. Específicamente, la publicación de patente europea 606.046, publicada el 13 de julio de 1994, se refiere a ciertos inhibidores de las MMP heterocíclicos. La patente de Estados Unidos 5.861.510, expedida el 19 de enero de 1999, se refiere a ácidos arilsulfonilamino hidroxámicos cíclicos que son útiles como inhibidores de las MMP. La publicación PCT 98/34918, publicada el 13 de agosto de 1998, se refiere a ácidos hidroxámicos heterocíclicos que incluyen ciertos compuestos dialquilsustituidos que son útiles como inhibidores de las MMP. Las publicaciones PCT WO 96/27583 y WO 98/07697, publicadas el 7 de marzo de 1996 y el 26 de febrero de 1998, respectivamente, se refieren a ácidos arilsulfonilhidroxámicos. La publicación PCT WO 98/03516, publicada el 29 de enero de 1998 se refiere a fosfinatos con actividad MMP. La publicación PCT 98/33768, publicada el 6 de agosto de 1998, se refiere a ácidos arilsulfonilamino hidroxámicos no sustituidos en N. La publicación PCT WO 98/08825, publicada el 5 de marzo de 1998, se refiere a ciertos inhibidores de las MMP.

Resumen de la invención

La presente invención se refiere a un compuesto de fórmula:

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o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que

X es oxígeno, azufre, SO, SO_{2} o NR^{7};

R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4}, R^{5} y R^{6} se seleccionan del grupo constituido por hidrógeno, hidroxilo, alquilo (C_{1}-C_{6}), -CN, alquenilo (C_{2}-C_{6}), aril(C_{6}-C_{10})alquenilo(C_{2}-C_{6}), heteroaril(C_{2}-C_{9})alquenilo(C_{2}-C_{6}), alquinilo(C_{2}-C_{6}), aril(C_{6}-C_{10})alquinilo(C_{2}-C_{6}), heteroaril(C_{2}-C_{9})alquinilo(C_{2}-C_{6}), alquilamino(C_{1}-C_{6}), alquiltio(C_{1}-C_{6}), alcoxilo(C_{1}-C_{6}), perfluoroalquilo(C_{1}-C_{6}), arilo(C_{6}-C_{10}), heteroarilo(C_{2}-C_{9}), arilamino(C_{6}-C_{10}), ariltio(C_{6}-C_{10}), ariloxilo(C_{6}-C_{10}), heteroarilamino(C_{2}-C_{9}), heteroariltio(C_{2}-C_{9}), heteroariloxilo(C_{2}-C_{9}), cicloalquilo(C_{3}-C_{6}), alquil(C_{1}-C_{6})(hidroximetileno), piperidilo, alquil(C_{1}-C_{6}) piperidilo, acilamino(C_{1}-C_{6}), aciltio(C_{1}-C_{6}), aciloxilo(C_{1}-C_{6}), alcoxi(C_{1}-C_{6})-(C=O), -CO_{2}H, alquil(C_{1}-C_{6})-NH-(C=O)- y [alquil(C_{1}-C_{6})]_{2}-N-(C=O);

en las que dicho resto alquilo (C_{1}-C_{6}) está opcionalmente sustituido por uno o dos grupos seleccionados independientemente entre alquiltio(C_{1}-C_{6}), alcoxilo(C_{1}-C_{6}), trifluorometilo, halo, -CN, arilo(C_{6}-C_{10}), heteroarilo(C_{2}-C_{9}), arilamino(C_{6}-C_{10}), ariltio(C_{6}-C_{10}), ariloxilo(C_{6}-C_{10}), heteroarilamino(C_{2}-C_{9}), heteroariltio(C_{2}-C_{9}), heteroariloxilo(C_{2}-C_{9}), aril(C_{6}-C_{10})arilo(C_{6}-C_{10}), cicloalquilo(C_{3}-C_{6}), hidroxilo, piperazinilo, aril(C_{6}-C_{10}) alcoxilo(C_{1}-C_{6}), heteroaril(C_{2}-C_{9})alcoxilo(C_{1}-C_{6}), acilamino(C_{1}-C_{6}), aciltio(C_{1}-C_{6}), aciloxilo(C_{1}-C_{6}), alquilsulfinilo(C_{1}-C_{6}), arilsulfinilo(C_{6}-C_{10}), alquilsulfonilo(C_{1}-C_{6}), arilsulfonilo(C_{6}-C_{10}), amino, alquilamino(C_{1}-C_{6}) o (alquil(C_{1}-C_{6}))_{2}amino;

R^{7} es hidrógeno o alquilo (C_{1}-C_{6}) opcionalmente sustituido por uno o más de, hidroxilo, -CN, alquilamino(C_{1}-C_{6}), alquiltio(C_{1}-C_{6}), alcoxilo(C_{1}-C_{6}), perfluoroalquilo(C_{1}-C_{6}), arilo(C_{6}-C_{10}), ariltio(C_{6}-C_{10}), ariloxilo(C_{6}-C_{10}), heteroarilamino(C_{2}-C_{9}), cicloalquilo(C_{3}-C_{6}), alquil(C_{1}-C_{6})(hidroximetileno), piperidilo, alquil(C_{1}-C_{6}) piperidilo, acilamino(C_{1}-C_{6}), aciloxilo(C_{1}-C_{6}), alcoxi(C_{1}-C_{6})-(C=O), -CO_{2}H, alquil(C_{1}-C_{6})-NH-(C=O)- y [alquil(C_{1}-C_{6})]_{2}-N-(C=O); arilsulfonilo(C_{6}-C_{10}), alquilsulfonilo(C_{1}-C_{6}), alquil(C_{1}-C_{6})-NH-(C=O)-, alcoxi(C_{1}-C_{6})-(C=O), alquil(C_{1}-C_{6})(C=O)-, [alquil(C_{1}-C_{6})]_{2}-N-(C=O), (R^{8}R^{9}N)-(C=O) en la que R^{8} y R^{9} junto con el nitrógeno al cual están unidos para formar un azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, morfolinilo y tiomorfolilo;

Q es aril(C_{6}-C_{10})alcoxi(C_{1}-C_{6})arilo(C_{6}-C_{10}), aril(C_{6}-C_{10})alcoxi(C_{1}-C_{6})heteroarilo(C_{2}-C_{9}), heteroaril(C_{2}-C_{9})alcoxi(C_{1}-C_{6})arilo(C_{6}-C_{10}), heteroaril(C_{2}-C_{9})alcoxi(C_{1}-C_{6})heteroarilo(C_{2}-C_{9}), en las que cada uno de dichos grupos arilo(C_{6}-C_{10}) o heteroarilo(C_{2}-C_{9}) puede estar opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes, preferentemente de uno a tres sustituyentes por anillo, lo más preferentemente de uno a tres sustituyentes sobre el anillo terminal (es decir, el anillo más alejado del punto de unión) seleccionados independientemente del grupo constituido por halo, -CN, alquilo (C_{1}-C_{6}) opcionalmente sustituido con uno o más átomos de flúor (preferentemente de uno a tres átomos de flúor), hidroxilo, hidroxialquilo (C_{1}-C_{6}), alcoxilo (C_{1}-C_{6}) opcionalmente sustituido con uno o más átomos de flúor (preferentemente de uno a tres átomos de flúor), alcoxi(C_{1}-C_{6})alquilo(C_{1}-C_{6}), HO-(C=O)- alquil(C_{1}-C_{6})-O-(C=O)-, HO-(C=O)-alquilo(C_{1}-C_{6}), alquil(C_{1}-C_{6})-O-(C=O)-alquilo(C_{1}-C_{6})-, alquilo(C_{1}-C_{6})-(C=O)-O-, alquil(C_{1}-C_{6})-(C=O)-O-alquilo(C_{1}-C_{6})-, H(C=O)-, H(C=O)-alquilo(C_{1}-C_{6}), alquil(C_{1}-C_{6})-(C=O)-, alquil(C_{1}-C_{6})-(C=O)-alquilo(C_{1}-C_{6})-, NO_{2}, amino, alquilamino(C_{1}-C_{6}), [alquil(C_{1}-C_{6})]_{2}amino, aminoalquilo(C_{1}-C_{6}), alquilamino(C_{1}-C_{6})- alquilo(C_{1}-C_{6}), [alquil(C_{1}-C_{6})]_{2}amino-alquilo(C_{1}-C_{6}), H_{2}N-(C=O)-, alquil(C_{1}-C_{6})-NH-(C=O)-, [alquil(C_{1}-C_{6})]_{2}-N-(C=O)-, H_{2}N-(C=O)-alquilo(C_{1}-C_{6})-, alquil(C_{1}-C_{6})-NH-(C=O)-alquilo(C_{1}-C_{6})-, [alquil(C_{1}-C_{6})]_{2}-N-(C=O)-alquilo(C_{1}-C_{6})-, H(O=C)-NH-, alquilo(C_{1}-C_{6})-(C=O)-NH, alquil(C_{1}-C_{6})-(C=O)-[NH]-alquilo(C_{1}-C_{6})-, alquil(C_{1}-C_{6})-(C=O)-[N-alquil(C_{1}-C_{6})]-alquilo(C_{1}-C_{6}), alquil(C_{1}-C_{6})-S-, alquil(C_{1}-C_{6})-(S=O)-, alquil(C_{1}-C_{6})-SO_{2}-, alquil(C_{1}-C_{6})-SO_{2}-NH-, alquil(C_{1}-C_{6})-SO_{2}-[N-alquilo(C_{1}-C_{6})]-, H_{2}N-SO_{2}-, H_{2}N-SO_{2}-alquilo(C_{1}-C_{6}), alquil(C_{1}-C_{6})-NH-SO_{2}-alquilo(C_{1}-C_{6}), [alquil(C_{1}-C_{6})]_{2}-N-SO_{2}-alquilo(C_{1}-C_{6})-, CF_{3}SO_{3}-, alquil(C_{1}-C_{6})-SO_{3}-, fenilo, fenilalquilo(C_{1}-C_{6}), cicloalquilo(C_{3}-C_{10}), heterocicloalquilo(C_{2}-C_{9}) y heteroarilo(C_{2}-C_{9});

con la condición de que cuando X es SO o SO_{2}, y R^{3} y R^{4} son sustituyentes que comprenden un heteroátomo, el heteroátomo no puede estar unido al anillo

y con la condición de que al menos uno de R^{1}-R^{6} debe ser alquilo(C_{1}-C_{6});

y con la condición de que cuando X es oxígeno o azufre y R^{3}-R^{6} son cada uno hidrógeno, entonces R^{1} y R^{2} no pueden ser ambos metilo.

Compuestos preferidos de la presente invención son aquellos en los que X es NR^{7}, azufre u oxígeno.

Otros compuestos preferidos de la presente invención son aquellos en los que Q es aril(C_{6}-C_{10})alcoxi(C_{1}-C_{6})arilo(C_{6}-C_{10}), aril(C_{6}-C_{10})alcoxi(C_{1}-C_{6})heteroarilo(C_{2}-C_{9}), heteroaril(C_{2}-C_{9})alcoxi(C_{1}-C_{6})arilo(C_{6}-C_{10}) o heteroaril(C_{2}-C_{9})alcoxi(C_{1}-C_{6})heteroarilo(C_{2}-C_{9}) opcionalmente sustituido, en las que cada uno de los grupos arilo o heteroarilo anteriores puede estar opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes, preferentemente de uno a tres sustituyentes por anillo, lo más preferentemente de uno a tres sustituyentes sobre el anillo terminal, en los que dichos sustituyentes se seleccionan entre halo, alquilo(C_{1}-C_{6}), alcoxilo(C_{1}-C_{6}) o perfluoroalquilo(C_{1}-C_{3}).

Otros compuestos preferidos de la presente invención son aquellos en los que Q es aril(C_{6}-C_{10})metoxiarilo(C_{6}-C_{10}), aril(C_{6}-C_{10})metoxiheteroarilo(C_{2}-C_{9}), heteroaril(C_{2}-C_{9})metoxiarilo(C_{6}-C_{10}) o heteroaril(C_{2}-C_{9})metoxiheteroarilo(C_{2}-C_{9}) opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes, preferentemente de uno a tres sustituyentes por anillo, lo más preferentemente de uno a tres sustituyentes sobre el anillo terminal, en los que dichos sustituyentes se seleccionan entre halo, alquilo(C_{1}-C_{6}), alcoxilo(C_{1}-C_{6}) o perfluoroalquilo(C_{1}-C_{3}).

Compuestos más preferidos de la invención son aquellos en los que Q es aril(C_{6}-C_{10})metoxifenilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxipiridilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxifurilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxipiroilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxitienilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxiisotiazolilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxiimidazolilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxibencimidazolilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxitetrazolilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxipirazinilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxipirimidilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxiquinolilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxiisoquinolilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxibenzofurilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxiisobenzofurilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxibenzotienilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxipirazolilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxiindolilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxiisoindolilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxipurinilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxicarbazolilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxiisoxazolilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxitiazolilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxioxazolilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxibenzotiazolilo, aril(C_{6}-C_{10})metoxibenzoxazolilo,

piridilmetoxifenilo, furilmetoxifenilo, piroilmetoxifenilo, tienilmetoxifenilo, isotiazolilmetoxifenilo, imidazolilmetoxifenilo, bencimidazolilmetoxifenilo, tetrazolilmetoxifenilo, pirazinilmetoxifenilo, pirimidilmetoxifenilo, quinolilmetoxifenilo, isoquinolilmetoxifenilo, benzofurilmetoxifenilo, isobenzofurilmetoxifenilo, benzotienilmetoxifenilo, pirazolilmetoxifenilo, indolilmetoxifenilo, isoindolilmetoxifenilo, purinilmetoxifenilo, carbazolilmetoxifenilo, isoxazolilmetoxifenilo, tiazolilmetoxifenilo, oxazolilmetoxifenilo, benzotiazolilmetoxifenilo, benzoxazolilmetoxifenilo,

piridilmetoxipiridilo, piridilmetoxifurilo, piridilmetoxipiroilo, piridilmetoxitienilo, piridilmetoxiisotiazotilo, piridilmetoxiimidazolilo, piridilmetoxibencimidazolilo, piridilmetoxitetrazolilo, piridilmetoxipirazinilo, piridilmetoxipirimidilo, piridilmetoxiquinolilo, piridilmetoxiisoquinolilo, piridilmetoxibenzofurilo, piridilmetoxiisobenzofurilo, piridilmetoxibenzotienilo, piridilmetoxipirazolilo, piridilmetoxiindolilo, piridilmetoxiisoindolilo, piridilmetoxipurinilo, piridilmetoxicarbazolilo, piridilmetoxiisoxazolilo, piridilmetoxitiazolilo, piridilmetoxioxazolilo, piridilmetoxibenzotiazolilo, piridilmetoxibenzoxazolilo,

furilmetoxipiridilo, furilmetoxifurilo, furilmetoxipiroilo, furilmetoxitienilo, furilmetoxiisotiazotilo, furilmetoxiimidazolilo, furilmetoxibencimidazolilo, furilmetoxitetrazolilo, furilmetoxipirazinilo, furilmetoxipirimidilo, furilmetoxiquinolilo, furilmetoxiisoquinolilo, furilmetoxibenzofurilo, furilmetoxiisobenzofurilo, furilmetoxibenzotienilo, furilmetoxipirazolilo, furilmetoxiindolilo, furilmetoxiisoindolilo, furilmetoxipurinilo, furilmetoxicarbazolilo, furilmetoxiisoxazolilo, furilmetoxitiazolilo, furilmetoxioxazolilo, furilmetoxibenzotiazolilo, furilmetoxibenzoxazolilo,

pirroilmetoxipiridilo, pirroilmetoxifurilo, pirroilmetoxipiroilo, pirroilmetoxitienilo, pirroilmetoxiisotiazolilo, pir-
roilmetoxiimidazolilo, pirroilmetoxibencimidazolilo, pirroilmetoxitetrazolilo, pirroilmetoxipirazinilo, pirroilmetoxipirimidilo, pirroilmetoxiquinolilo, pirroilmetoxiisoquinotilo, pirroilmetoxibenzofurilo, pirroilmetoxiisobenzofurilo,
pirroilmetoxibenzotienilo, pirroilmetoxipirazolilo, pirroilmetoxiindolilo, pirroilmetoxiisoindolilo, pirroilmetoxipurinilo, pirroilmetoxicarbazolilo, pirroilmetoxiisoxazolilo, pirroilmetoxitiazolilo, pirroilmetoxioxazolilo, pirroilmetoxibenzotiazolilo, pirroilmetoxibenzoxazolilo,

tienilmetoxipiridilo, tienilmetoxifurilo, tienilmetoxipiroilo, tienilmetoxitienilo, tienilmetoxiisotiazolilo, tienilmetoxiimidazolilo, tienilmetoxibencimidazolilo, tienilmetoxitetrazolilo, tienilmetoxipirazinilo, tienilmetoxipirimidilo,
tienilmetoxiquinolilo, tienilmetoxiisoquinolilo, tienilmetoxibenzofurilo, tienilmetoxiisobenzofurilo, tienilmetoxibenzotienilo, tienilmetoxipirazolilo, tienilmetoxiindolilo, tienilmetoxiisoindolilo, tienilmetoxipurinilo, tienilmetoxicarbazolilo, tienilmetoxiisoxazolilo, tienilmetoxitiazolilo, tienilmetoxioxazolilo, tienilmetoxibenzotiazolilo, tienilmetoxibenzoxazolilo,

pirazinilmetoxipiridilo, pirarinilmetoxifurilo, pirazinilmetoxipiroilo, pirazinilmetoxitienilo, pirazinilmetoxiisotiazolilo, pirazinilmetoxiimidazolilo, pirazinilmetoxibencimidazolilo, pirazinilmetoxitetrazolilo, pirazinilmetoxipirazinilo, pirazinilmetoxipirimidilo, pirazinilmetoxiquinolilo, pirazinilmetoxiisoquinolilo, pirazinilmetoxibenzofurilo, pirazinilmetoxiisobenzofurilo, pirazinilmetoxibenzotienilo, pirazinilmetoxipirazolilo, pirazinilmetoxiindolilo, pirazinilmetoxiisoindolilo, pirazinilmetoxipurinilo, pirazinilmetoxicarbazolilo, pirazinilmetoxiisoxazolilo, pirazinilmetoxitiazolilo, pirazinilmetoxioxazolilo, pirazinilmetoxibenzotiazolilo, pirazinilmetoxibenzoxazolilo,

pirimidilmetoxipiridilo, pirimidilmetoxifurilo, pirimidilmetoxipiroilo, pirimidilmetoxitienilo, pirimidilmetoxiisotiazolilo, pirimidilmetoxiimidazolilo, pirimidilmetoxibencimidazolilo, pirimidilmetoxitetrazolilo, pirimidilmetoxipirazinilo, pirimidilmetoxipirimidilo, pirimidilmetoxiquinolilo, pirimidilmetoxiisoquinolilo, pirimidilmetoxibenzofurilo, pirimidilmetoxiisobenzofurilo, pirimidilmetoxibenzotienilo, pirimidilmetoxipirazolilo, pirimidilmetoxiindolilo, pirimidilmetoxiisoindolilo, pirimidilmetoxipurinilo, pirimidilmetoxicarbazolilo, pirimidilmetoxiisoxazolilo, pirimidilmetoxitiazolilo, pirimidilmetoxioxazolilo, pirimidilmetoxibenzotiazolilo, pirimidilmetoxibenzoxazolilo,

tiazolilmetoxipiridilo, tiazolilmetoxifurilo, tiazolilmetoxipiroilo, tiazolilmetoxitienilo, tiazolilmetoxiisotiazolilo, tiazolilmetoxiimidazolilo, tiarolilmetoxibencimidazolilo, tiazolilmetoxitetrazolilo, tiazolilmetoxipirazinilo, tiazolilmetoxipirimidilo, tiazolilmetoxiquinolilo, tiazolilmetoxiisoquinolilo, tiazolilmetoxibenzofurilo, tiazolilmetoxiisobenzofurilo, tiazolilmetoxibenzotienilo, tiazolilmetoxipirazolilo, tiazolilmetoxiindolilo, tiazolilmetoxiisoindolilo, tiazolilmetoxipurinilo, tiazolilmetoxicarbazolilo, tiazolilmetoxiisoxazolilo, tiazolilmetoxitiazolilo, tiazolilmetoxioxazolilo, tiazolilmetoxibenzotiazolilo, tiazolilmetoxibenzoxazolilo, y

oxazolilmetoxipiridilo, oxazolilmetoxifurilo, oxazolilmetoxipiroilo, oxazolilmetoxitienilo, oxazolilmetoxiisotiazolilo, oxazolilmetoxiimidazolilo, oxazolilmetoxibencimidazolilo, oxazolilmetoxitetrazolilo, oxazolilmetoxipirazinilo, oxazolilmetoxipirimidilo, oxazolilmetoxiquinolilo, oxazolilmetoxiisoquinolilo, oxazolilmetoxibenzofurilo, oxazolilmetoxiisobenzofurilo, oxazolilmetoxibenzotienilo, oxazolilmetoxipirazolilo, oxazolilmetoxiindolilo, oxazolilmetoxiisoindolilo, oxazolilmetoxipurinilo, oxazolilmetoxicarbazolilo, oxazolilmetoxiisoxazolilo, oxazolilmetoxitiazolilo, oxazolilmetoxioxazolilo, oxazolilmetoxibenzotiazolilo, oxazolilmetoxibenzoxazolilo opcionalmente sustituidos.

piridilmetoxifenilo, furilmetoxifenilo, piroilmetoxifenilo, tienilmetoxifenilo, isotiazolilmetoxifenilo, imidazolilmetoxifenilo, bencimidazolilmetoxifenilo, tetrazolilmetoxifenilo, pirazinilmetoxifenilo, pirimidilmetoxifenilo, quinolilmetoxifenilo, isoquinolilmetoxifenilo, benzofurilmetoxifenilo, isobenzofurilmetoxifenilo, benzotienilmetoxifenilo, pirazolilmetoxifenilo, indolilmetoxifenilo, isoindolilmetoxifenilo, purinilmetoxifenilo, carbazolilmetoxifenilo, isoxazolilmetoxifenilo, tiazolilmetoxifenilo, oxazolilmetoxifenilo, benzotiazolilmetoxifenilo, y benzoxazolilmetoxifenilo opcionalmente sustituidos.

Los compuestos más preferidos de la invención son aquellos en los que Q es aril(C_{6}-C_{10})metoxifenilo, piridilmetoxifenilo, tienilmetoxifenilo, pirazinilmetoxifenilo, pirimidilmetoxifenilo, piridazinilmetoxifenilo, tiazolilmetoxifenilo, oxazolilmetoxifenilo opcionalmente sustituidos.

Otros compuestos más preferidos de la presente invención son aquellos en los que Q es aril(C_{6}-C_{10})metoxiarilo(C_{6}-C_{10}) opcionalmente sustituidos por uno o más, preferentemente de uno a tres sustituyentes por anillo, lo más preferentemente de uno a tres sustituyentes sobre el anillo terminal, en los que dichos sustituyentes se seleccionan independientemente entre halo, alquilo(C_{1}-C_{6}), alcoxilo(C_{1}-C_{6}) o perfluoroalquilo(C_{1}-C_{3}).

Otros compuestos más preferidos de la presente invención son aquellos en los que Q es aril(C_{6}-C_{10})metoxiheteroarilo(C_{2}-C_{9}) opcionalmente sustituidos por uno o más, preferentemente de uno a tres sustituyentes por anillo, lo más preferentemente de uno a tres sustituyentes sobre el anillo terminal, en los que dichos sustituyentes se seleccionan independientemente entre halo, alquilo(C_{1}-C_{6}), alcoxilo(C_{1}-C_{6}) o perfluoroalquilo(C_{1}-C_{3}).

Otros compuestos más preferidos de la presente invención son aquellos en los que Q es heteroaril(C_{2}-C_{9})metoxiarilo(C_{6}) opcionalmente sustituidos por uno o más, preferentemente de uno a tres sustituyentes por anillo, lo más preferentemente de uno a tres sustituyentes sobre el anillo terminal, en los que dichos sustituyentes se seleccionan independientemente entre halo, alquilo(C_{1}-C_{6}), alcoxilo(C_{1}-C_{6}) o perfluoroalquilo(C_{1}-C_{3}).

Otros compuestos más preferidos de la presente invención son aquellos en los que Q es heteroaril(C_{2}-C_{9})metoxiheteroarilo(C_{2}-C_{9}) opcionalmente sustituidos por uno o más, preferentemente de uno a tres sustituyentes por anillo, lo más preferentemente de uno a tres sustituyentes sobre el anillo terminal, en los que dichos sustituyentes se seleccionan independientemente entre halo, alquilo(C_{1}-C_{6}), alcoxilo(C_{1}-C_{6}) o perfluoroalquilo(C_{1}-C_{3}).

Otros compuestos más preferidos de la presente invención son aquellos en los que R^{4} es hidrógeno.

Otros compuestos más preferidos de la presente invención son aquellos en los que R^{2} o R^{3} es hidrógeno.

Otros compuestos más preferidos de la presente invención son aquellos en los que al menos uno de R^{1}-R^{3} es alquilo(C_{1}-C_{6}), preferentemente en los que al menos uno de R^{1}-R^{3} es metilo, más preferentemente en los que R^{1} y R^{4} son cada uno metilo.

Otros compuestos más preferidos de la presente invención son aquellos en los que R^{1} y R^{2} son alquilo(C_{1}-C_{6}), y R^{3} o R^{6} es alquilo(C_{1}-C_{6}).

Otros compuestos más preferidos de la presente invención son aquellos en los que R^{1} y R^{2} son cada uno metilo, y R^{3} o R^{6} es alquilo(C_{1}-C_{6}).

Otros compuestos más preferidos de la presente invención son aquellos en los que al menos uno de R^{1}-R^{3} es metilo.

Otros compuestos más preferidos de la presente invención son aquellos en los que R^{1} es metilo y R^{2} es hidrógeno.

Otros compuestos más preferidos de la presente invención son aquellos en los que R^{1} es hidrógeno y R^{3} es metilo.

Otros compuestos más preferidos de la presente invención son aquellos en los que X es nitrógeno y R^{7} es alquilo(C_{1}-C_{6}).

Otros compuestos más preferidos de la presente invención son aquellos en los que X es nitrógeno y R^{7} es alquilsulfonilo(C_{1}-C_{6}).

Otros compuestos más preferidos de la presente invención son aquellos en los que X es nitrógeno y R^{7} es arilsulfonilo(C_{1}-C_{6}).

Otros compuestos más preferidos de la presente invención son aquellos en los que X es nitrógeno y R^{7} es [alquil(C_{1}-C_{6})]_{2}N-(C=O) o alquil(C_{1}-C_{6})NH-(C=O).

Otros compuestos más preferidos de la presente invención son aquellos en los que X es nitrógeno y R^{7} es alquil(C_{1}-C_{6})(C=O)-.

Los compuestos más preferidos de la presente invención se seleccionan del grupo constituido por:

Hidroxiamida del ácido (2S,3R)-4-[4-(3,5-difluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2-metil-tiomorfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (2S,3R)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2-metiltiomorfolin-3-carboxílico; hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-2,6-dimetil-4-[4-(2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido 4-(4-benciloxi-bencenosulfonil)-2-metil-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2,6-dimetil-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (3R,6S)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2,2,6-trimetil-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-6-etil-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2-metil-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (2R,3R,6S)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2,6-dimetil-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (2R,3R,6R)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2,6-dimetil-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-2,6-dimetil-4-[4-(piridin-4-ilmetoxi)-bencenosulfonil]-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-2,6-dimetil-4-[4-(piridin-2-ilmetoxi)-bencenosulfonil]-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-2,6-dimetil-4-[4-(piridin-3-ilmetoxi)-bencenosulfonil]-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-2,6-dimetil-4-[4-(2-metil-piridin-3-ilmetoxi)-bencenosulfonil]-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (3R,6S)-2,2,6-trimetil-4-[4-(2-trifluorometil-benciloxi)-bencenosulfonil]-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (2S,3R)-2,6,6-trimetil-4-[4-(piridin-4-ilmetoxi)-bencenosulfonil]-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (3R,6S)-2,2,6-trimetil-4-[4-(2-metil-piridin-3-ilmetoxi)-bencenosulfonil-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-[4-(2,5-dimetil-benciloxi)-bencenosulfonil]-2,6-dimetil-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-4-[4-(3,5-difluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2,6-dimetil-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-4-[4-(3-metoxi-benciloxi)-bencenosulfonil]-2,6-dimetil-morfolin-3-carboxílico,

hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-4-[4-(5-fluoro-2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-2,6-dimetilmorfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-4-[4-(furan-3-ilmetoxi)-bencenosulfonil]-2,6-dimetil-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-4-[4-(2-fluoro-3-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-2,6-dimetilmorfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (2S,3R)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2,6,6-trimetil-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (3R)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-6,6-dimetil-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (3R)-6,6-dimetil-4-[4-(piridin-4-ilmetoxi)-bencenosulfonil)-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (3R)-6,6-dimetil-4-[4-(2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-4-(4-ciclohexilmetoxi-bencenosulfonil)-2,6-dimetil-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (3R,6S)-4-[4-(2,5-dimetil-benciloxi)-bencenosulfonil]-2,2,6-trimetil-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (2S,3R)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-6-metoximetil-2-metil-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-4-[4-(3-cloro-benciloxi)-bencenosulfonil]-6-[(etil-metil-amino)-metil)-2-metil-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (2S,3R)-4-[4-(3-cloro-benciloxi)-bencenosulfonil]-6-metoxi-2-metil-morfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (2S,3R,6R)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-6-hidroximetil-2-metil-morfolin-3-carboxílico.

Otros compuestos de la invención incluyen:

Hidroxiamida del ácido 4-[4-(3-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2-metil-tiamorfolin-3-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-[4-(3-cloro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2-metil-tiomorfolin-3-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2-metil-1-oxo-tiomorfolin-3-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil-2-metil-1,1-dioxido-tiomorfolin-3-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-[4-(3,5-difluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2-metil-1-oxo-tiomorfolin-3-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-[4-(3,5-difluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2-metil-1,1-dioxido-tiomorfolin-3-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-[4-(3-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2-metil-1-oxo-tiomorfolin-3-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-[4-(3-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2-metil-1,1-dioxido-tiomorfolin-3-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-[4-(3-cloro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2-metil-1,1-dioxido-tiomorfolin-3-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-[4-(3-cloro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2-metil-1-oxo-tiomorfolin-3-carboxílico, hidroxiamida del ácido 3-metil-1-[4-(2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 1-(4-benciloxi-bencenosulfonil)-3-metil-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 3-metil-1-[4-(2-metil-piridin-3-ilmetoxi)-bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 3-metil-1-[4-(2-trifluorometil-benciloxi)-bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 1-[4-(5-fluoro-2-trifluorometil-benciloxi)-bencenosulfonil]-3-metil-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 1-[4-(5-fluoro-2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-3-metil-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 1-[4-(2,5-dimetil-benciloxi)-bencenosulfonil]-3-metil-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 3-metil-1-[4-(2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 1-[4-(2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil)-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-metil-1-[4-(2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 3,4-dimetil-1-[4-(2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 1-[4-(2,5-dimetil-benciloxi)-bencenosulfonil]-3,4-dimetil-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 1-[4-(5-fluoro-2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-3,4-dimetil-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 1-[4-(5-fluoro-2-trifluorometil-benciloxi)-bencenosulfonil]-3,4-dimetil-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 3,4-dimetil-1-[4-(2-trifluorometil-benciloxi)-bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 3,4-dimetil-1-[4-(2-metil-piridin-3-ilmetoxi)-bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-metanosulfonil-1-[4-(2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-metanosulfonil-1-[4-(2-trifluorometil-benciloxi)-bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 1-[4-(5-fluoro-2-trifluorometil-benciloxi)-bencenosulfonil]-4-metanosulfonil-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 1-[4-(2,5-dimetil-benciloxi-1-bencenosulfonil]-4-metanosulfonil-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 1-[4-(5-fluoro-2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-4-metanosulfonil-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-metanosulfonil-1-[4-(2-metil-piridin-3-ilmetoxi)-bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-acetil-1-[4-(2-trifluorometil-benciloxi)-bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-acetil-1-[4-(5-fluoro-2-trifluorometil-benciloxi)-bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-acetil-1-[4-(5-fluoro-2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-acetil-1-[4-(2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-acetil-1-[4-(2,5-dimetil-benciloxi)-bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-acetil-1-[4-(2-metil-piridin-3-ilmetoxi)-bencenosulfonil)-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-metil-1-[4-(2-metil-piridin-3-ilmetoxi)-bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 1-[4-(2,5-dimetil-benciloxi)-bencenosulfonil]-4-metil-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-acetil-3-metil-1-[4-(2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-acetil-1-[4-(2,5-dimetil-benciloxi)-bencenosulfoni]-3-metil-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-acetil-1-[4-(5-fluoro-2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-3-metil-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-acetil-1-[4-(5-fluoro-2-trifluorometil-benciloxi)-bencenosulfonil]-3-metil-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-acetil-3-metil-1-[4-(2-trifluorometil-benciloxi)bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-acetil-3-metil-1-[4-(2-metil-piridin-3-ilmetoxi)-bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-metanosulfonil-3-metil-1-[4-(2-metil-piridin-3-ilmetoxi)-bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-metanosulfonil-3-metil-1-[4-(2-trifluorometil-benciloxi)-bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 1-[4-(5-fluoro-2-trifluorometil-benciloxi)-bencenosulfonil]-4-metanosulfonil-3-metil-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 1-[4-(5-fluoro-2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-4-metanosulfonil-3-metilpiperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 1-[4-(2,5-dimetil-benciloxi)-bencenosulfonil]-4-metanosulfonil-3-metilpiperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-metanosulfonil-3-metil-1-[4-(2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 1-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-3-metil-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 1-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-3,4-dimetil-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-acetil-1-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-3-metil-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 1-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-4-metanosulfonil-3-metil-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 3,5-dimetil-1-[4-(2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico, hidroxiamida del ácido 3,3-dimetil-1-[4-(2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-metanosulfonil-3,3-dimetil-1-[4-(2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-piperazin-2-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 1-[4-benciloxi-bencenosulfonil)-4-(4-metoxi-bencenosulfonil)-3-metil-piperazin-2-carboxílico,

éster metílico del ácido 4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-3-hidroxicarbamoil-2-metil-piperazin-1-carboxílico,

1-dimetilamida 3-hidroxiamida del ácido 4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2-metil-piperazin-1,3-dicarboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-[4-(2-etil-benciloxi)-bencenosulfonil]-2,2,6-trimetil-morfolin-3-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-[4-(2-etil-benciloxi}-bencenosulfonil]-6-(2-hidroxi-2-metil-propil)-2,2-dimetil-morfolin-3-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-[4-(2-etil-benciloxi)-bencenosulfonil]-6-(2-hidroxi-2-metil-propil)-2-metil-morfolin-3-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-[4-(2-etil-benciloxi)-bencenosulfonil]-2,5-dimetil-morfolin-3-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-(4-Benciloxi-bencenosulfonil)-2,5,6-trimetil-morfolin-3-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-(4-benciloxi-bencenosulfonil)-2,2,5,6-tetrametil-morfolin-3-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-(4-benciloxi-bencenosulfonil)-5-hidroximetil-2,6-dimetil-morfolin-3-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-(4-benciloxi-bencenosulfonil)-2-metil-6-metilcarbamoilmetil-morfolin-3-carboxílico,

hidroxiamida del ácido 4-(4-benciloxi-bencenosulfonil)-2-isopropil-6-metilmorfolin-3-carboxílico, y

hidroxiamida del ácido 4-(5-benciloxi-piridin-2-sulfonil)-2,6-dimetil-morfolin-3-carboxílico.

El término "alquilo", como se usa en el presente documento, a menos que se indique otra cosa, incluye radicales hidrocarbonados monovalentes saturados que tienen restos lineales, ramificados o cíclicos o sus combinaciones.

El término "alcoxilo", como se usa en el presente documento, incluye grupos O-alquilo en las que "alquilo" se ha definido anteriormente.

El término "arilo", como se usa en el presente documento, a menos que se indique otra cosa, incluye un radical orgánico derivado de un hidrocarburo aromático por eliminación de un hidrógeno, tal como fenilo o naftilo, opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyentes adecuados tales como flúor, cloro, ciano, nitro, trifluorometilo, alcoxilo (C_{1}-C_{6}), ariloxilo (C_{6}-C_{10}), trifluorometoxilo, difluorometoxilo y alquilo (C_{1}-C_{6}).

El término "heteroarilo", como se usa en el presente documento, a menos que se indique otra cosa, incluye un radical orgánico derivado de un compuesto heterocíclico aromático por eliminación de un hidrógeno, tal como piridilo, furilo, piroilo, tienilo, isotiazolilo, imidazolilo, bencimidazolilo, tetrazolilo, pirazinilo, pirimidilo, quinolilo, isoquinolilo, benzofurilo, isobenzofurilo, benzotienilo, pirazolilo, indolilo, isoindolilo, purinilo, carbazolilo, isoxazolilo, tiazalilo, oxazolilo, benzotiazolilo o benzoxazolilo, opcionalmente sustituidos por 1 a 3 sustituyentes adecuados tales como flúor, cloro, trifluorometilo, alcoxilo (C_{1}-C_{6}), ariloxilo (C_{6}-C_{10}), trifluorometoxilo, difluorometoxilo y alquilo (C_{1}-C_{6}).

El término "acilo", como se usa en el presente documento, a menos que se indique otra cosa, incluye un radical de fórmula general RCO en la que R es alquilo, alcoxilo (tal como metiloxi carbonilo), arilo, arilalquilo o arilalquiloxilo y los términos "alquilo" o "arilo" son como se han definido anteriormente.

El término "aciloxilo", como se usa en el presente documento, incluye grupos O-acilo en los que "acilo" se ha definido anteriormente.

"Un sustituyente adecuado" está previsto que signifique un grupo funcional química y farmacéuticamente aceptable, es decir, un resto que no anule la actividad inhibidora de los compuestos de la invención. Dichos sustituyentes adecuados se pueden seleccionar de manera rutinaria por aquellos expertos en la materia. Los ejemplos ilustrativos de sustituyentes adecuados incluyen, pero no están limitados a, grupos alquilo, grupos hidroxilo, grupos oxo, grupos mercapto, grupos alquiltio, grupos alcoxilo, grupos arilo o heteroarilo, grupos aralquilo o heteroaralquilo, grupos aralcoxilo o heteroaralcoxilo, grupos carboxilo, grupos amino, grupos alquil- y dialquilamino, grupos carbamoilo, grupos alquilcarbonilo, grupos alcoxicarbonilo, grupos alquilaminocarbonilo, grupos dialquilaminocarbonilo, grupos arilcarbonilo, grupos ariloxicarbonilo, grupos alquilsulfonilo y grupos arilsulfonilo y similares.

El término "D- o L-aminoácido", como se usa en el presente documento, a menos que se indique otra cosa, incluye glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, asparragina, glutamina, triptófano, prolina, serina, treonina, tirosina, hidroxiprolina, cisteína, cistina, metionina, ácido aspártico, ácido glutámico, lisina, arginina o histidina.

Las posiciones sobre el anillo de fórmula I, como se usan en el presente documento, están definidas como sigue:

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El compuesto de fórmula I puede tener centros quirales y por tanto existir en diferentes formas enantioméricas. Esta invención se refiere a todos los isómeros, diasteroisómeros, atropisómeros, estereoisómeros y tautómeros ópticos de los compuestos de fórmula I y sus mezclas.

Una molécula pequeña como se usa en el presente documento no se refiere a moléculas de ADN, ARN, polipéptidos y anticuerpos monoclonales con un peso molecular inferior a 1000 AMV. Las moléculas pequeñas preferidas poseen un grupo ácido hidroxámico (-(C=O)(NH)OH), un grupo heterocíclico, un grupo sulfonamida, y/o un grupo
arilo.

Un "agente" como se usa en el presente documento (por ejemplo, agente que inhibe selectivamente el TNF-\alpha) se refiere a cualquier molécula química o farmacéutica que posea la actividad inhibidora reivindicada, tal como ADN, ARN, oligonucleótidos antisentido o sentido, anticuerpos monoclonales o policlonales o moléculas pequeñas.

La presente invención también se refiere a las sales de adición ácida farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula I. Los ácidos que se usan para preparar las sales de adición ácida farmacéuticamente aceptables de los compuestos básicos anteriormente mencionados de esta invención son aquellos que forman sales de adición ácida no tóxicas, es decir, sales que contienen aniones farmacológicamente aceptables, tales como sales de clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, nitrato, sulfato, bisulfato, fosfato, fosfato ácido, acetato, lactato, citrato, citrato ácido, tartrato, bitartrato, succinato, maleato, fumarato, gluconato, sacarato, benzoato, metanosulfonato, etanosulfonato, bencenosulfonato, p-toluensulfonato y pamoato [es decir, 1,1'-metilen-bis-(2-hidroxi-3-naftoato)].

La invención también se refiere a sales de adición básica de fórmula I. Las bases químicas que se pueden usar como reactivos para preparar sales básicas farmacéuticamente aceptables de aquellos compuestos de fórmula I que son ácidos en la naturaleza son aquellas que forman sales básicas no tóxicas con tales compuestos. Tales sales básicas no tóxicas incluyen, pero no están limitadas a aquellas derivadas de tales cationes farmacológicamente aceptables tales como cationes de metales alcalinos (por ejemplo, sodio y potasio) y cationes de metales alcalinotérreos (por ejemplo, calcio y magnesio), amonio o sales de adición de aminas solubles en agua tales como N-metilglucamina-(meglumina) y los alcanolamonio inferiores y otras sales básicas de aminas orgánicas farmacéuticamente aceptables.

La presente invención también incluye compuestos marcados isotópicamente, que son idénticos a aquellos enumerados en la Fórmula I, excepto por el hecho de que uno o más átomos se sustituye por un átomo que tiene un número másico o una masa atómica diferente del número másico o masa atómica encontrado normalmente en la naturaleza. Ejemplos de isótopos que se pueden incorporar en los compuestos de la invención incluyen isótopos del hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, tales como ^{2}H, ^{3}H, ^{13}C, ^{14}C, ^{15}N, ^{16}O, ^{17}O, ^{31}P, ^{32}P, ^{35}S, ^{18}F y ^{36}Cl, respectivamente. Los compuestos de la presente invención, sus profármacos y las sales farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos o de dichos profármacos que contienen los isótopos anteriormente mencionados y/u otros isótopos de otros átomos están dentro del alcance de esta invención. Ciertos compuestos de la presente invención marcados isotópicamente, por ejemplo aquellos en los que se incorporan isótopos radiactivos tales como ^{3}H y ^{14}C, son útiles en los experimentos de distribución tisular del sustrato y/o fármaco. Los isótopos tritiados, es decir, ^{3}H y de carbono 14, es decir, ^{14}C, son particularmente preferidos por su facilidad de preparación y detección. Además, la sustitución con isótopos más pesados tales como deuterio, es decir, ^{2}H, puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas como resultado de una estabilidad metabólica superior, por ejemplo el incremento de la semivida in vivo o los requerimientos de dosificación reducidos y, por tanto, se pueden preferir en algunas circunstancias. Los compuestos de Fórmula I de esta invención marcados isotópicamente y sus profármacos generalmente se pueden preparar llevando a cabo los procedimientos descritos en los Esquemas y/o en los Ejemplos y Preparaciones a continuación, sustituyendo un reactivo marcado isotópicamente fácilmente disponible por un reactivo no marcado
isotópicamente.

La presente invención también se refiere a una composición farmacéutica para el tratamiento de una dolencia seleccionada del grupo constituido por artritis (incluyendo artrosis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, enfisema, síndrome de insuficiencia respiratoria aguda, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad de Alzheimer, toxicidad por trasplante de órganos, caquexia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad por contacto alérgico, cáncer (tales como tumores cancerosos sólidos incluyendo cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de pulmón y cáncer de próstata y afecciones hematopoyéticas incluyendo leucemias y linfomas), ulceración tisular, restenosis, enfermedad periodontal, epidermolisis bulosa, osteoporosis, distensión de implantes articulares artificiales, ateroesclerosis (incluyendo rotura de la placa ateroesclerótica), aneurisma aórtico (incluyendo aneurisma aórtico abdominal y aneurisma aórtico cerebral), insuficiencia cardiaca congestiva, infarto de miocardio, accidente cerebrovascular, isquemia cerebral, traumatismo cráneoencefálico, lesión de la espina dorsal, trastornos neurodegenerativos (agudos y crónicos), trastornos autoinmunitarios, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía amiloide cerebral, mejora cognitiva o nootrópica, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, angiogénesis ocular, lesión de córnea, degeneración macular, curación anormal de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento tumoral, metástasis tumoral, cicatrización córnea, escleritis, SIDA, sepsis o choque séptico en un mamífero, incluyendo un humano, que comprende una cantidad de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo eficaz en tales tratamientos y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

La presente invención también se refiere al uso de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una dolencia seleccionada del grupo constituido por artritis (incluyendo artrosis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, enfisema, síndrome de insuficiencia respiratoria aguda, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad de Alzheimer, toxicidad por trasplante de órganos, caquexia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad por contacto alérgico, cáncer (tales como tumores cancerosos sólidos incluyendo cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de pulmón y cáncer de próstata y afecciones hematopoyéticas incluyendo leucemias y linfomas), ulceración tisular, restenosis, enfermedad periodontal, epidermolisis bulosa, osteoporosis, distensión de implantes articulares artificiales, ateroesclerosis (incluyendo rotura de la placa ateroesclerótica), aneurisma aórtico (incluyendo aneurisma aórtico abdominal y aneurisma aórtico cerebral), insuficiencia cardiaca congestiva, infarto de miocardio, accidente cerebrovascular, isquemia cerebral, traumatismo cráneoencefálico, lesión de la espina dorsal, trastornos neurodegenerativos (agudos y crónicos), trastornos autoinmunitarios, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía amiloide cerebral, mejora cognitiva o nootrópica, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, angiogénesis ocular, lesión de córnea, degeneración macular, curación anormal de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento tumoral, metástasis tumoral, cicatrización córnea, escleritis, SIDA, sepsis o choque séptico.

El término "tratar", como se usa en el presente documento, se refiere a la reversión, alivio, inhibición del progreso o prevención del trastorno o dolencia al cual se aplica tal término, o de uno o más síntomas de tal trastorno o dolencia. El término "tratamiento", como se usa en el presente documento, se refiere al acto de tratar, según como se ha definido "tratar" inmediatamente antes.

Los compuestos de fórmula I que tienen grupos amino, amido, hidroxilo o carboxílicos libres se pueden convertir en profármacos. Los profármacos incluyen compuestos en los que un residuo de aminoácido o una cadena polipeptídica de dos o más (por ejemplo, dos, tres o cuatro) residuos aminoácido que están unidos covalentemente a través de enlaces peptídicos a los grupos amino, amido, hidroxilo o ácido carboxílico libres de los compuestos de fórmula I. Los residuos aminoácido incluyen los 20 aminoácidos de origen natural designados frecuentemente mediante símbolos de tres letras y también incluyen, 4-hidroxiprolina, hidroxilisina, citrulina, homocisteína, homoserina, ornitina y metioninsulfona. Los profármacos también incluyen compuestos carbonatos, carbamatos, amidas y ésteres alquílicos que están unidos covalentemente a los sustituyentes de fórmula I anteriores a través del carbono carbonílico de la cadena lateral del profármaco.

Alguien con conocimientos ordinarios en la materia apreciará que los compuestos de la invención son útiles en el tratamiento de un conjunto diverso de enfermedades. Alguien con conocimientos ordinarios en la materia también apreciará que cuando los compuestos de la invención se usan en el tratamiento de una enfermedad específica, los compuestos de la invención se pueden combinar con diversos agentes terapéuticos existentes usados para esa enfer-
medad.

Para el tratamiento de la artritis reumatoide, los compuestos de la invención se pueden combinar con agentes tales como inhibidores del TNF-\alpha tales como anticuerpos monoclonales anti-TNF y moléculas de inmunoglobulinas para el receptor del TNF (tales como Enbrel®), inhibidores de la COX-2, bajas dosis de metotrexato, lefunimida, hidroxicloroquina, D-penicilamina, auranofina u oro parenteral u oral.

Los compuestos de la invención también se pueden usar en combinación con agentes terapéuticos existentes para el tratamiento de la artrosis. Los agentes adecuados a usar en combinación incluyen agentes antiinflamatorios no esteroideos convencionales (en lo sucesivo NSAID) tales como piroxicam, diclofenac, ácidos propiónicos tales como naproxeno, flubiprofeno, fenoprofeno, ketoprofeno e ibuprofeno, fenamatos tales como ácido mefenámico, indometacina, sulindac, apazona, pirazolonas tales como fenilbutazona, salicilatos tales como aspirina, inhibidores de la COX-2 tales como celecoxib y rofecoxib, analgésicos y terapias intraarticulares tales como corticoesteroides y ácidos hialurónicos tales como hialgan y sinvisc.

Los compuestos de la presente invención también se pueden usar en combinación con agentes anti-cancerígenos tales como endostatinas y angiostatinas o fármacos citotóxicos tales como adriamicina, daunomicina, cis-platino, etopósido, paclitaxel, taxotere y alcaloides, tales como vincristina, y antimetabolitos tales como metotrexato.

Los compuestos de la presente invención también se pueden usar en combinación con agentes cardiovasculares tales como bloqueantes de los canales de calcio, agentes para la disminución de lípidos tales como estatinas, fibratos, beta-bloqueantes, inhibidores de la ECA, antagonistas del receptor de la angiotensina-2 e inhibidores de la agregación de plaquetas.

Los compuestos de la presente invención también se pueden usar en combinación con agentes del SNC tales como antidepresivos (tal como la sertralina), fármacos anti-Parkinsonianos (tales como deprenil, L-dopa, requip, miratex, inhibidores del MAOB tales como selegina y rasagilina, inhibidores comP tales como Tasmar, inhibidores de la A-2, inhibidores de la recaptación de dopamina, antagonistas de la NMDA, agonistas de la nicotina, agonistas de la dopamina e inhibidores de la óxido nítrico sintasa neuronal), y fármacos anti-Alzheimer tales como donepezil, tacrina, inhibidores de la COX-2, propentofilina o metrifonato.

Los compuestos de la presente invención también se pueden usar en combinación con agentes para la osteoporosis tales como roloxifeno, droloxifeno o fosomax y agentes inmunosupresores tales como FK-506 y rapamicina.

Descripción detallada de la invención

Los siguientes Esquemas de reacción ilustran la preparación de los compuestos de la presente invención. A menos que se indique otra cosa, Q, X y R^{1}-R^{9} en los Esquemas de reacción y en la descripción que siguen están definidos como anteriormente.

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(Esquema pasa a página siguiente)

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Esquema 1

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Esquema 1 (continuación)

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Esquema 2

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Esquema 3

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Esquema 4

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El Esquema 1 se refiere a la preparación de compuestos de fórmula I. En referencia al Esquema 1, los compuestos de fórmula I se preparan a partir de compuestos de fórmula II mediante la activación del resto ácido carboxílico en los compuestos de fórmula II seguido por tratamiento del ácido activado con una hidroxilamina o un equivalente de la hidroxilamina protegido que a continuación se desprotege para formar el ácido hidroxámico. La activación del grupo carbonilo de fórmula II se consigue mediante la acción de un agente activante adecuado tal como dialquilcarbodiimidas, sales de benzotriazol-1-iloxi-tris(dialquilamino)-fosfonio o cloruro de oxalilo en presencia de una cantidad catalítica de N,N-dimetilformamida. Preferentemente el agente activante es hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi-tris(dialquilamino)-fosfonio. Generalmente, la hidroxilamina o el equivalente de la hidroxilamina protegido se generan in situ a partir de una sal, tal como clorhidrato de hidroxilamina, en presencia de una base amina tal como trietilamina o diisopropiletilamina. Las hidroxilaminas protegidas adecuadas incluyen O-terc-butilhidroxilamina, O-alilhidroxilamina, O-terc-butildimetilsililhidroxilamina, O-trimetilsililetilhidroxilamina, O-bencilhidroxilamina o N,O-bis-trimetilsililhidroxilamina. La eliminación del grupo protector se lleva a cabo por hidrogenolisis en el caso en el que se usa O-bencilhidroxilamina (el catalizador preferido es paladio sobre sulfato de bario al 5%) o por tratamiento con un ácido fuerte tal como ácido trifluoroacético en la situación en la que se usa O-terc-butildimetilsililhidroxilamina u O-trimetilsililetilhidroxilamina. Cuando se emplea O-alilhidroxilamina, el grupo alilo se elimina bien por tratamiento con formato de amonio en presencia de una cantidad catalítica de tetraquis(trifenilfosfina) de paladio (0) en acetonitrilo acuoso a 60ºC o por tratamiento con piperidina en presencia de una cantidad catalítica de cloruro de alilpaladio dimérico y difenilfosfinoetano en tetrahidrofurano a 23ºC. En el caso en el que se usa N,O-bis-trimetilsililhidroxilamina (preferentemente generada in situ a partir de cloruro de trimetilsililo y clorhidrato de hidroxilamina en piridina a 0ºC), los grupos protectores sililo se eliminan por tratamiento con ácido acuoso diluido tal como ácido clorhídrico 1 N. Los disolventes adecuados para las susodichas activación y reacción con hidroxilamina incluyen cloruro de metileno, N,N-dimetilformamida o tetrahidrofurano, preferentemente cloruro de metileno. Las susodichas activación y reacciones con hidroxilamina se llevan a cabo a temperaturas entre 0ºC aproximadamente y 60ºC aproximadamente (se prefiere 23ºC) durante periodos de tiempo entre 1 hora aproximadamente y 20 horas aproximadamente (se prefiere 4 horas).

Los compuestos de fórmula II se preparan a partir de compuestos de fórmula III por eliminación del grupo protector P para formar un ácido carboxílico. En el caso en el que el grupo protector P es terc-butilo, esta conversión se consigue mediante la acción de un ácido fuerte adecuado tal como ácido clorhídrico o ácido trifluoroacético (se prefiere ácido trifluoroacético). Preferentemente esta reacción se realiza en un disolvente tal como acetato de etilo, 1,4-dioxano o cloruro de metileno (se prefiere cloruro de metileno). En los casos en los que el grupo protector P es metilo o etilo, esta conversión se consigue por saponificación con una fuente adecuada de hidróxido tal como hidróxido de litio o de sodio (se prefiere hidróxido de litio). Preferentemente la saponificación se realiza con agitación, en una mezcla disolvente acuosa tal como tetrahidrofurano-metanol-agua o 1,4-dioxano-metanol-agua a una temperatura entre 0ºC aproximadamente y cercana al punto de ebullición del sistema disolvente (se prefiere 60ºC). En los casos en los que el grupo protector P es trialquilsililo, el grupo sililo se puede eliminar por tratamiento con ácido acuoso diluido tal como ácido clorhídrico diluido, en metanol acuoso o calentando en metanol a reflujo. En los casos en los que el grupo protector P es bencilo, la conversión se consigue por hidrogenolisis del grupo bencilo. La hidrogenolisis se lleva a cabo en un disolvente adecuado tal como etanol, metanol o acetato de etilo en atmósfera de hidrógeno, en presencia de un catalizador tal como paladio sobre carbón al 10%. Generalmente, las reacciones que implican la eliminación del grupo protector P se realizan durante periodos de tiempo entre 30 minutos aproximadamente y 8 horas aproximadamente, preferentemente 4 horas aproximadamente. A menos que se mencione otra cosa, las susodichas reacciones se realizan a una temperatura entre 0ºC aproximadamente y 25ºC aproximadamente, preferentemente 23ºC aproximadamente.

Alternativamente los compuestos de fórmula III se pueden convertir directamente a compuestos de fórmula I mediante la acción de la hidroxilamina. Preferentemente, el grupo protector P es metilo. Los disolventes adecuados incluyen metanol, etanol o 2-propanol, preferentemente metanol. Para esta reacción el procedimiento preferido para la generación de hidroxilamina es mediante el tratamiento de clorhidrato de hidroxilamina con hidróxido de potasio. La reacción se realiza a una temperatura entre 0ºC aproximadamente y 23ºC aproximadamente (se prefiere 0ºC) durante un periodo de tiempo entre 10 minutos aproximadamente y 4 horas aproximadamente (se prefiere 2 horas).

Los compuestos de fórmula III, es decir, tiomorfolinas, morfolinas o piperazinas, se preparan a partir de compuestos de fórmula IV, en la que Y es halo o hidroxilo por procedimientos de ciclación del anillo intramolecular específicos a la naturaleza del grupo Y. En los casos en los que Y es cloro o bromo el anillo se puede formar espontáneamente o por tratamiento con una base adecuada tal como diisopropiletilamina o un carbonato alcalinotérreo. Preferentemente este cierre se realiza en un disolvente tal como tetrahidrofurano, benceno, cloroformo o N,N-dimetilformamida (se prefiere tetrahidrofurano). La reacción preferentemente se agita a una temperatura entre temperatura ambiente aproximadamente (22ºC) y el punto de ebullición del disolvente usado durante un periodo de tiempo entre 30 minutos aproximadamente y 24 horas aproximadamente (se prefiere 12 horas). En los casos en los que Y es hidroxilo, el grupo hidroxilo se activa preferentemente mediante la acción de un complejo generado por la mezcla de una trialquilfosfina y un azodicarboxilato de dialquilo (se prefieren trifenilfosfina y azodicarboxilato de dimetilo) en un disolvente adecuado tal como tetrahidrofurano. La secuencia preferida implica la adición de compuestos de fórmula III al complejo preformado de trialquilfosfina y un azodicarboxilato de dialquilo. La reacción se agita a una temperatura entre 0ºC aproximadamente y 25ºC aproximadamente, preferentemente a 0ºC aproximadamente durante un periodo de tiempo entre 10 minutos aproximadamente y 4 horas aproximadamente, seguido de un periodo de 16 horas aproximadamente a 23ºC.

Los compuestos de fórmula IV se preparan mediante la reacción de un compuesto de fórmula VI con un compuesto de fórmula

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en la que R^{3}, R^{4}, R^{5}, R^{6} e Y son como se han definido anteriormente, y X es oxígeno, azufre o NR^{7}, en la que R^{7} se ha descrito anteriormente. Preferentemente la reacción se realiza en un disolvente adecuado tal como cloroformo, cloruro de metileno, tetrahidrofurano o benceno (se prefiere cloruro de metileno), en presencia de un catalizador tal como un ácido de Lewis, tal como cloruro de cinc, cloruro de magnesio, eterato de trifluoruro de boro (se prefiere eterato de trifluoruro de boro). La reacción se agita a una temperatura entre 0ºC aproximadamente y el punto de ebullición del disolvente usado, preferentemente a temperatura ambiente (22-23ºC), durante un periodo de tiempo entre 1 hora aproximadamente y 4 días aproximadamente, preferentemente 2 días aproximadamente.

Los compuestos de fórmula VI que contienen un anillo aziridina se preparan a partir de compuestos de fórmula VII mediante la activación del grupo hidroxilo, para formar un grupo saliente, seguido de ciclación intramolecular. Preferentemente está activación se consigue mediante la conversión del alcohol al éster sulfonato correspondiente (se prefiere mesilo), o mediante la acción de un complejo generado por la mezcla de una trialquilfosfina y un azodicarboxilato de dialquilo (se prefieren trifenilfosfina y azodicarboxilato de dimetilo) en un disolvente adecuado tal como tetrahidrofurano. En el caso del sulfonato anterior, el anillo aziridina preferentemente se forma por tratamiento posterior con una base tal como diisopropiletilamina o terc-butóxido de potasio. En este último caso, la secuencia preferida implica la adición de compuestos de fórmula VII al complejo preformado de trialquilfosfina y un azodicarboxilato de dialquilo. La reacción se agita a una temperatura entre 0ºC aproximadamente y 25ºC aproximadamente, preferentemente a 0ºC durante un periodo de tiempo entre 10 minutos aproximadamente y 4 horas aproximadamente, seguido de un periodo de 16 horas aproximadamente a 23ºC.

Los compuestos de fórmula VII, en la que P es metilo, etilo, terc-butilo, trialquilsililo o bencilo (se prefieren metilo y terc-butilo), se preparan haciendo reaccionar un aminoácido protegido de fórmula IX, en la que P es metilo, etilo, terc-butilo, trialquilsililo o bencilo (se prefieren metilo y terc-butilo), con un cloruro de sulfonilo de fórmula

VIIIQ ---

\melm{\delm{\dpara}{O}}{S}{\uelm{\dpara}{O}}

--- CI

en presencia de una base en un disolvente de reacción inerte. Los disolventes adecuados incluyen cloruro de metileno, tetrahidrofurano, N,N-dimetilformamida, o una mezcla de 1,4-dioxano y agua, o una mezcla de acetato de etilo y agua. Las bases adecuadas incluyen trietilamina, diisopropiletilamina o un hidróxido o carbonato alcalinotérreo. Se prefiere uso de cloruro de metileno como disolvente y diisopropiletilamina como base. La reacción se agita a una temperatura entre 0ºC aproximadamente y 25ºC aproximadamente, preferentemente a 0ºC, durante un periodo de tiempo entre 10 minutos aproximadamente y 1 día aproximadamente, preferentemente 12 horas aproximadamente.

Los compuestos de fórmula IX son aminoácidos protegidos y están disponibles comercialmente o se pueden preparar de formas muy conocidas por alguien con conocimientos ordinarios en la técnica mediante procedimientos que incluyen, pero no están limitados a aquellos descritos en Preparación 2, por Williams en "Synthesis of Optically Active \alpha-Amino Acids" Baldwin, J. E., Ed., Pergamon Press, Oxford, 1989, o por Coppola y Schuster en "Asymmetric Synthesis. Construction of Chiral Molecules Using Amino Acids", John Wiley & Son; Nueva York, 1987, y las referencias allí citadas.

Los compuestos de fórmula VIII están disponibles comercialmente o se pueden preparar según los procedimientos de la Preparación 2. Los compuestos de fórmula V están disponibles comercialmente o se pueden preparar por procedimientos muy conocidos por aquellos con conocimientos ordinarios en la materia. Los procedimientos para la preparación de compuestos de fórmula V incluyen los procedimientos descritos por Einhorn en "An Easy and Efficient Epoxide Opening to give Halohydrins using Tin(II) Halides" J. Chem. Soc. Chem. Comm., 1368-1369 (1986), por Cambie en "Reactions of Alkenes with Electrophilic Iodine in Tetramethylene Sulphone-Chloroform" J. Chem. Soc. Perkin Trans I, 226-230 (1986) y por Ciacco en "Dilithium Tetrachlorocuprate. A Reagent for Regioselective Cleavage of Epoxides to Chlorohydrins" Tetrahedron Lett., 27, 3697-3700 (1986). Se entiende por alguien experto en la materia que modificaciones químicas adicionales de los productos generados mediante los procedimientos descritos en las referencias anteriores pueden conducir a análogos adicionales de fórmula V.

El Esquema 2 se refiere a la preparación de compuestos de fórmula X. Los compuestos de fórmula X son compuestos de fórmula III, en el Esquema 1, en la que P es metilo. Los compuestos de fórmula III se pueden convertir a compuestos de fórmula I según los procedimientos del Esquema 1. En referencia al Esquema 2, los compuestos de fórmula X se preparan a partir de compuestos de fórmula XI mediante una reacción de ciclación. Alguien con conocimientos ordinarios en la materia apreciará que R^{3} en la fórmula XI puede ser cualquiera de los dos R^{3} o R^{4}, como resultado de lo cual, R^{3} y R^{4} en la fórmula X se representan sin estereoquímica. Preferentemente, esta reacción de ciclación se realiza mediante la activación o escisión oxidativa de la olefina. Se entiende por alguien con conocimientos ordinarios en la materia que la naturaleza de la activación de la olefina o de la escisión de la olefina, determinará la naturaleza de uno de cualquiera de los dos R^{3} o R^{4}. Alguien con conocimientos ordinarios en la materia también apreciará que en algunos casos el grupo X de la fórmula XI necesitará protección temporal antes de la activación de la olefina o la escisión oxidativa de la olefina mediante un grupo protector. Los procedimientos de activación de la olefina incluyen el tratamiento de compuestos de fórmula VIII con agentes electrófilos tales como ácidos fuertes, sales de mercurio, paladio (II), yodo, perácidos. Uno de tales procedimientos implica el tratamiento de compuestos de fórmula IX con una sal de mercurio (II). El complejo intermedio organomercurial resultante se puede tratar con una variedad de reactivos para dar los compuestos de fórmula X. Las sales de mercurio adecuadas incluyen acetato de mercurio (II) y trifluoroacetato de mercurio (II) (se prefiere trifluoroacetato de mercurio (II)). Preferentemente la susodicha reacción se realiza en presencia de una base tal como carbonato de potasio, en un disolvente tal como tetrahidrofurano, a una temperatura de -10ºC aproximadamente a 30ºC aproximadamente, preferentemente de 0ºC a 25ºC aproximadamente durante un periodo de 30 minutos aproximadamente a 2 horas aproximadamente, preferentemente 1 hora aproximadamente. Los reactivos adecuados para la transformación del complejo intermedio organomercurial a compuestos de fórmula X incluyen, pero no están limitados a, amalgama de sodio, borohidruro sódico, borohidruro sódico en presencia de trietilborano, borohidruro sódico en presencia de oxígeno y yodo. El uso de borohidruro sódico con trietilborano es el procedimiento preferido para sustituir el mercurio por un átomo de hidrógeno. El uso de borohidruro sódico en presencia de oxígeno es el procedimiento preferido para sustituir el mercurio por un grupo hidroxilo. El uso de yodo es el procedimiento preferido para sustituir el mercurio por yodo. Alguien con conocimientos ordinarios en la materia apreciará que los compuestos de fórmula X derivados de la sustitución del átomo de mercurio se pueden funcionalizar adicionalmente para dar compuestos adicionales de fórmula X. Las reacciones del complejo organomercurial se realizan en un disolvente tal como tetrahidrofurano o cloruro de metileno (se prefiere tetrahidrofurano) a una temperatura de -10ºC aproximadamente a 20ºC aproximadamente, durante un periodo de 30 minutos aproximadamente a 2 horas aproximadamente, preferentemente 1 hora aproximadamente. Alternativamente, la olefina se puede escindir oxidativamente por procedimientos que incluyen el tratamiento de los compuestos de fórmula XI con ozono, tetróxido de rutenio o tetróxido de osmio y metaperyodato de sodio para dar los compuestos de fórmula X. El procedimiento preferido de escisión de la olefina implica el uso de tetróxido de osmio y metaperyodato de sodio. Preferentemente la escisión de la olefina se realiza en una mezcla disolvente tal como tetracloruro de carbono y agua, una mezcla de dioxano y agua, y tetrahidrofurano y agua, durante un periodo de tiempo de 1 hora aproximadamente a 24 horas aproximadamente, se prefiere 12 horas.

Los compuestos de fórmula XI se preparan a partir de compuestos de fórmula XII por reacción con especies alílicas adecuadas tales como un haluro alílico, un éster sulfonato alílico o un acetato alílico. Alguien con conocimientos ordinarios en la materia entenderá que tales especies alílicas están disponibles comercialmente o se preparan fácilmente a partir de fuentes comerciales. Preferentemente la reacción de alilación se realiza en presencia de una base o catalizador adecuado. Las bases adecuadas incluyen trialquilaminas tales como diisopropiletilamina, carbonatos alcalinotérreos, e hidruro de sodio. Los catalizadores adecuados incluyen paladio (0), níquel (0), wolframio (0) o sales de molibdeno en presencia de ligandos tales como trialquilfosfinas, ciclooctadieno, dibencilidenacetona, monóxido de carbono y acetilacetonato. Preferentemente, las reacciones de alilación se realizan en un disolvente tal como N,N-dimetilformamida, tetrahidrofurano o cloruro de metileno. Alguien con conocimientos ordinarios en la materia también apreciará que en algunos casos el grupo X de la fórmula XII necesitará la protección temporal mediante un grupo protector antes de la alilación. La reacción de compuestos de fórmula XII con yoduro de alilo en presencia de carbonato de cesio, en N,N-dimetilformamida durante un periodo de tiempo de 1 hora aproximadamente a 24 horas (se prefiere 2,5 horas) a una temperatura de 0ºC aproximadamente a 60ºC aproximadamente (se prefiere 23ºC) es el procedimiento preferido para la reacción de alilación.

El compuesto de fórmula XII se prepara a partir de un compuesto de fórmula XIII mediante la formación del éster metílico correspondiente seguido de la reacción con un cloruro de arilsulfonilo de fórmula QSO_{2}Cl (en la que Q es como se ha definido anteriormente). El éster metílico se puede formar por tratamiento de compuestos de fórmula XIII con un ácido fuerte tal como ácido toluensulfónico, ácido clorhídrico o ácido sulfúrico en metanol. Se prefiere uso de ácido clorhídrico gaseoso anhidro o ácido clorhídrico generado mediante la adición de cloruro de tionilo a metanol. La susodicha reacción se realiza a una temperatura de 0ºC aproximadamente al punto de ebullición del metanol aproximadamente durante un periodo de 1 hora aproximadamente a 24 horas aproximadamente (se prefiere 14 horas). Preferentemente la reacción del cloruro de arilsulfonilo de fórmula QSO_{2}Cl con el éster metílico se lleva a cabo en un disolvente tal como cloruro de metileno, dioxano y agua, N,N-dimetilformamida o tetrahidrofurano (se prefiere cloruro de metileno), en presencia de una base tal como diisopropiletilamina o carbonato de potasio (se prefiere diisopropiletilamina), durante un periodo de 2 horas aproximadamente a 2 días aproximadamente (se prefiere 14 horas), a temperaturas en el intervalo de 0ºC aproximadamente a 60ºC aproximadamente (se prefiere 23ºC).

Los compuestos de fórmula XIII están disponibles comercialmente o se pueden preparar mediante procedimientos muy conocidos por aquellos con conocimientos ordinarios en la materia tales como los procedimientos descritos en la Preparación 1 y por Goodman en "An Enantiomeric Synthesis of allo-Threonine and \beta-Hydroxyvalines" J. Org. Chem., 61 2582-2583 (1996) y las referencias allí citadas. Los compuestos de fórmula QSO_{2}Cl se pueden preparar según los procedimientos descritos en la publicación PCT WO 98/07697, publicada el 26 de febrero de 1998, y la publicación PCT WO 98/33768 publicada el 6 de agosto de 1998.

El Esquema 3 se refiere a un procedimiento de introducción de diferentes grupos Q en compuestos de fórmula XIV. Los compuestos de fórmula XIV y XVI son los compuestos de fórmula III en el Esquema 1, en la que P es metilo. Los compuestos de fórmula XIV se pueden convertir a compuestos de fórmula I según los procedimientos del Esquema 1. En referencia al Esquema 3, los compuestos de fórmula XIV se pueden preparar mediante el tratamiento de un compuesto de fórmula XV con un haluro de aril(C_{1}-C_{6})alquilo(C_{1}-C_{6}) o un haluro de heteroaril(C_{2}-C_{9})alquilo(C_{1}-C_{6}) opcionalmente sustituidos (preferentemente un bromuro o cloruro) en presencia de una base tal como carbonato de cesio en un disolvente polar tal como N,N-dimetilformamida. La mezcla de reacción se agita a una temperatura de 0ºC aproximadamente a 60ºC aproximadamente, preferentemente a 40ºC aproximadamente durante un periodo de 30 minutos aproximadamente a 4 horas aproximadamente, preferentemente 1 hora aproximadamente.

El compuesto de fórmula XV se puede preparar a partir de un compuesto de fórmula XVI mediante un agente de escisión. Los agentes de escisión adecuados incluyen yoduro de trimetilsililo, tricloruro de boro y tribromuro de boro (se prefiere tribromuro de boro). Preferentemente la reacción de escisión se realiza en un disolvente adecuado tal como cloruro de metileno a una temperatura de -78ºC aproximadamente a 23ºC durante un período de tiempo de 1 hora aproximadamente a 8 horas aproximadamente. Alternativamente, la escisión se puede realizar por hidrogenolisis cuando X en la fórmula XV no es azufre. Preferentemente la hidrogenolisis se lleva a cabo en presencia de un catalizador adecuado tal como paladio sobre carbón al 10%, en un disolvente adecuado tal como metanol, etanol o acetato de etilo (se prefiere metanol), en atmósfera de hidrógeno gaseoso (se prefiere 241,32 kPa), a temperatura ambiente, durante un periodo de tiempo de 4 horas aproximadamente a 24 horas aproximadamente (se prefiere 12 horas).

El compuesto de fórmula XVI es un compuesto de fórmula III del Esquema 1, en la que P es metilo y Q termina en un grupo bencílico. Los haluros de aril(C_{1}-C_{6})alquilo(C_{1}-C_{6}) o haluros de heteroaril(C_{2}-C_{9})alquilo(C_{1}-C_{6}) opcionalmente sustituidos (preferentemente bromuro o cloruro) están disponibles comercialmente o se pueden preparar mediante procedimientos muy conocidos por aquellos con conocimientos ordinarios en la materia.

El Esquema 4 se refiere a la preparación de compuestos de fórmula I, en la que X es SO o SO_{2}, a partir de otros compuestos de fórmula I, en la que X es S. En referencia al Esquema 4, los compuestos de fórmula IB, en la que X es azufre se convierten a sulfóxidos (n = 1) o sulfonas (n = 2) de fórmula IA por oxidación selectiva del átomo de azufre. Preferentemente esta oxidación se realiza con un agente oxidante suave tal como "Oxone"™ (peroximonosulfato de potasio, Aldrich Chemical Co.), peryodato de sodio o perborato de sodio tetrahidratado (se prefiere Oxone). Preferentemente, la reacción de oxidación se realiza en un disolvente o mezcla disolvente adecuado, tal como metanol-agua, acetona-agua, tetrahidrofurano-metanol-agua o 1,4-dioxano-metanol-agua (se prefiere metanol-agua). La reacción se agita a una temperatura entre 0ºC aproximadamente y 25ºC aproximadamente, preferentemente a 22ºC durante un período de tiempo entre 5 minutos aproximadamente y 4 horas aproximadamente, preferentemente durante 30 minutos aproximadamente.

Los compuestos de fórmula IB se preparan según los procedimientos del Esquema 1.

La capacidad de los compuestos de fórmula I o sus sales farmacéuticamente aceptables (en lo sucesivo también denominados como los compuestos de la presente invención) para inhibir las metaloproteinasas o la reprolisina de mamíferos y, consecuentemente, demostrar su eficacia para el tratamiento de enfermedades caracterizadas por las metaloproteinasas o la producción del factor de necrosis tumoral se demuestra mediante las siguientes pruebas experimentales in vitro.

Experimento biológico Inhibición de la producción del TNF soluble

La capacidad de los compuestos o sus sales farmacéuticamente aceptables para inhibir la producción/liberación celular del TNF y, consecuentemente, demostrar su eficacia para el tratamiento de enfermedades que implican la desregulación del TNF se demuestra mediante el siguiente experimento in vitro:

Procedimiento para la evaluación de la actividad de la enzima conversora del TNF-\alpha recombinante Preparación de TACE recombinante

Un fragmento de ADN que codifica la secuencia señal, el prodominio y el dominio catalítico de la TACE (aminoácidos 1-473), se amplificó mediante reacción en cadena de la polimerasa usando una librería de ADNc de pulmón humano como molde. El fragmento amplificado se clonó en el vector pFastBac. La secuencia de ADN del injerto se confirmó para ambas cadenas. Se transfectó un bácmido preparado usando el pFastBac en E. coli DH10Bac en células de insecto SF9. Las partículas víricas se amplificaron a las etapas P1, P2, P3. El virus P3 se infectó en ambas células de insecto Sf9 y High Five y se cultivó a 27ºC durante 48 horas. El medio se recogió y se usó para los experimentos y la purificación posterior.

Preparación del sustrato fluorescente inactivado

Se preparó un modelo del sustrato de TNF-\alpha peptídico (LY-leucina-alanina-glutamina-alanina-valina-arginina-serina-serina-lisina-(CMTR)-arginina (LY = amarillo lucifer; CMTR = 5-carboxitetrametil Rodamina)) y la concentración se estimó por absorbancia a 560 nm (E_{560}, 60.000 M-1CM-1) según el procedimiento de Geoghegan, KF, "Improved method for converting an unmodified peptide to an energy-transfer substrate for a proteinase" Bioconjugate Chem., 7, 385-391 (1995). Este péptido abarca el sitio de escisión sobre el pro-TNF que se escinde in vivo mediante la TACE.

Reacción enzimática

La reacción, llevada a cabo en una placa de 96 pocillos (Dynatech), consistía en 70 \mul de disolución tampón (Hepes-HCI 25 mM, pH = 7,5, más ZnCl_{2} 20 \muM), 10 \mul de sustrato fluorescente inactivado 100 \muM, 10 \mul de una disolución del compuesto de prueba en DMSO (5%), y una cantidad de la enzima TACE que provocará una escisión del 50% en 60 minutos - en un volumen total de 100 \mul. La especificidad de la escisión enzimática en el enlace amida entre la alanina y la valina se verificó por HPLC y espectrometría de masas. Las velocidades de escisión iniciales se controlaron midiendo la velocidad del incremento de la fluorescencia a 530 nm (excitación a 409 nm) durante 30 minutos. El experimento se controló como sigue: 1) para la fluorescencia de fondo del sustrato; 2) para la fluorescencia del sustrato completamente escindido; 3) para la inactivación o aumento de la fluorescencia en disoluciones que contienen el compuesto de prueba.

Los datos se analizaron como sigue. Las velocidades de los compuestos no probados que contienen las reacciones "control" se promediaron para establecer el valor 100%. La velocidad de reacción en presencia del compuesto de prueba se comparó con aquella en ausencia del compuesto, y se tabuló como "porcentaje de compuesto no probado que contiene el control". Los resultados se representaron como "% del control" frente a log de la concentración del compuesto y se determinó la mitad del punto máximo o valor CI_{50}. El CI_{50} para el experimento anterior es una medida de la inhibición de la actividad proteolítica del TNF-\alpha de la TACE. El bloqueo de la unión del TNF-\alpha a la TACE como se usa en el presente documento es como se describe en la patente de Estados Unidos 5.830.742, expedida el 3 de noviembre de 1998.

Los compuestos preferidos de la invención son al menos 100 veces menos potentes contra la r-MMP-1 que en el experimento de la TACE anterior. La Tabla A informa de la actividad de compuestos representativos de la invención para la inhibición de la TACE, MMP-1 y MMP-13.

TABLA A

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Experimento con monocitos

Se aislaron células mononucleares humanas a partir de sangre humana anti-coagulada usando una técnica de separación con Ficoll-hypaque en un solo paso. (2) Las células mononucleares se lavaron tres veces en disolución salina equilibrada de Hanks (HBSS) con cationes divalentes y se resuspendieron a una densidad de 2 x 10^{6}/ml en HBSS que contenía BSA al 1%. Se determinaron las cuentas diferenciales usando el analizador Abbott Cell Dyn 3500 que indicó que los monocitos abarcaban entre el 17 y el 24% de las células totales en estas preparaciones.

Se alicuotó 180 ml de la suspensión celular en placas de 96 pocillos de fondo plano (Costar). Las adiciones de los compuestos y el LPS (concentración final de 100 ng/ml) dio un volumen final de 200 \mul. Todas las condiciones se realizaron por triplicado. Después de cuatro horas de incubación a 37ºC en un incubador de CO_{2}, se retiraron las placas y se centrifugaron (10 minutos a 250 x g aproximadamente) y se descartó el sobrenadante y se probó para el TNF-\alpha usando el kit de ELISA de R&D.

Experimentos con MMP

Los inhibidores selectivos de la colagenasa-3 (metaloproteinasa-13 de matriz) como se usan en el presente documento se refiere a agentes que presentan una selectividad de al menos 100 veces para la inhibición de la actividad de la enzima colagenasa-3 sobre la actividad de la enzima colagenasa-1 y una potencia inferior a 100 nM según se ha definido mediante los resultados del CI_{50} del experimento de fluorescencia de la MMP-13/MMP-1 descrito a continuación. Los inhibidores selectivos de la colagenasa-3 se pueden identificar controlando los inhibidores de la presente invención mediante los experimentos de fluorescencia de la MMP-13/MMP-1 descritos a continuación y seleccionando aquellos agentes con unas relaciones del CI_{50} de inhibición de la MMP-13/MMP-1 de 100 o superior y una potencia inferior a 100 nM.

Los inhibidores no selectivos de la colagenasa como se usa en el presente documento se refiere a agentes que presentan una selectividad inferior a 100 veces para la inhibición de la actividad de la enzima colagenasa-3 sobre la actividad de la enzima colagenasa-1 o una potencia superior a 100 nM como se ha definido mediante los resultados del CI_{50} de los experimentos de fluorescencia de la MMP-13/MMP-1 descrito a continuación.

La capacidad de los inhibidores de la colagenasa para inhibir la actividad colagenasa es muy conocida en la materia. Los siguientes experimentos se pueden usar para identificar inhibidores de las metaloproteinasas de matriz.

Inhibición de la colagenasa humana (MMP-1)

Se activó colagenasa recombinante humana con tripsina usando la siguiente relación: 10 \mug de tripsina por 100 \mug de colagenasa. La tripsina y la colagenasa se incubaron a temperatura ambiente durante 10 minutos y a continuación se añadió inhibidor de tripsina de soja en un exceso de cinco veces (50 \mug/10 \mug de tripsina).

Se prepararon disoluciones madre de inhibidores 10 mM en dimetilsulfóxido y a continuación se diluyeron usando el siguiente Esquema:

10 mM \rightarrow 120 \muM \rightarrow 12 \muM \rightarrow 1,2 \muM \rightarrow 0,12 \muM

A continuación se añadieron por triplicado 25 ml de cada concentración a los pocillos adecuados de una placa microfluor de 96 pocillos. La concentración final de inhibidor será de una dilución 1:4 después de la adición de la enzima y el sustrato. Los controles positivos (enzima, sin inhibidor) se colocan en los pocillos D1-D6 y los blancos (sin enzima, sin inhibidor) se colocan en los pocillos D7-D12.

La colagenasa se diluyó hasta 400 ng/ml y a continuación se añadió 25 \mul a los pocillos adecuados de la placa microfluor. La concentración final de colagenasa en el experimento es de 100 ng/ml.

El sustrato (DNP-Pro-Cha-Gly-Cys(Me)-His-Ala-Lys(NMA)-NH_{2}) se preparó como una disolución madre 5 mM en dimetilsulfóxido y a continuación se diluyó en el tampón de prueba hasta 20 \muM. El experimento se inició mediante la adición de 50 \mul de sustrato por pocillo de la placa microfluor para dar una concentración final de 10 \muM.

Las lecturas de fluorescencia (excitación a 360 nm, emisión a 460 nm) se tomaron a tiempo 0 y a intervalos de 20 minutos. El experimento se realizó a temperatura ambiente con un tiempo de experimentación típico de 3 horas.

A continuación se representó la fluorescencia frente a tiempo tanto para el blanco como para la colagenasa que contiene las muestras (se promediaron los datos de las determinaciones por triplicado). Se eligió un punto de tiempo que proporciona una buena señal (el blanco) y que no está en la parte lineal de la curva (normalmente alrededor de 120 minutos) para determinar los valores de CI_{50}. El tiempo 0 se usa como blanco para cada compuesto a cada concentración y estos valores se restan de los datos a los 120 minutos. Los datos se representaron como concentración de inhibidor vs % del control (fluorescencia del inhibidor dividida por la fluorescencia de la colagenasa sola x 100). Los CI_{50} se determinaron a partir de la concentración de inhibidor que da una señal que es el 50% del control.

Si se informa de que los CI_{50} son < 0,03 \muM, entonces los inhibidores se prueban a concentraciones de 0,3 \muM, 0,03 \muM, 0,03 \muM y 0,003 \muM.

Inhibición de la gelatinasa (MMP-2)

La inhibición de la actividad de gelatinasa se probó usando el sustrato Dnp-Pro-Cha-Gly-Cys(Me)-Hys-Ala-Lys(NMA)-NH_{2} (10 \muM) bajo las mismas condiciones que la inhibición de la colagenasa humana (MMP-1).

La gelatinasa de 72 kDa se activó con APMA 1 mM (acetato p-aminofenilmercúrico) durante 15 horas a 4ºC y se diluyó para dar una concentración final en el experimento de 100 mg/ml. Los inhibidores se diluyeron como para la inhibición de la colagenasa humana (MMP-1) para dar concentraciones finales en el experimento de 30 \muM, 3 \muM, 0,3 \muM y 0,03 \muM. Cada concentración se hizo por triplicado.

Las lecturas de fluorescencia (excitación a 360 nm, emisión a 460 nm) se tomaron a tiempo 0 y a intervalos de 20 minutos durante 4 horas.

Los CI_{50} se determinaron como para la inhibición de la colagenasa humana (MMP-1). Si se informa de que los CI_{50} son inferiores a 0,03 \muM, entonces los inhibidores se prueban a concentraciones finales de 0,3 \muM, 0,03 \muM, 0,003 \muM y 0,003 \muM.

Inhibición de la actividad estromelisina (MMP-3)

La inhibición de la actividad estromelisina se basa en un experimento espectrofotométrico modificado descrito por Weingarten y Feder (Weingarten, H. y Feder, J., Spectrophotometric Assay for Vertebrate Collagenase, Anal. Biochem., 147, 437-440 (1985)). La hidrólisis del sustrato tio-peptólido [AC-Pro-Leu-Gly-SCH[CH_{2}CH(CH_{3})_{2}]CO-Leu-Gly-OC_{2}H_{5}] da un fragmento mercaptano que se puede controlar en presencia del reactivo de Ellman.

La prostromelisina recombinante humana se activó con tripsina usando una relación de 1 \mul de una disolución madre de tripsina 10 mg/ml por 26 mg de estromelisina. La tripsina y la estromelisina se incuban a 37ºC durante 15 minutos seguido de 10 \mul de inhibidor de tripsina de soja 10 mg/ml durante 10 minutos a 37ºC para inactivar la actividad de la tripsina.

Los experimentos se realizaron en un volumen total de 250 ml de tampón de prueba (cloruro sódico 200 mM, MES 50 mM y cloruro de calcio 10 mM, pH = 6,0) en placas de microtitulación de 96 pocillos. La estromelisina activada se diluyó en tampón de prueba hasta 25 \mug/ml. El reactivo de Ellman (3-carboxi-4-nitrofenildisulfuro) se preparó como una disolución madre 1 M en dimetilformamida y se diluyó hasta 5 mM en tampón de prueba con 50 ml por pocillo dando una concentración final de 1 mM.

Las disoluciones madre de inhibidores 10 mM se prepararon en dimetilsulfóxido y se diluyeron seriadamente en tampón de prueba de manera que la adición de 50 \mul a los pocillos apropiados dio concentraciones finales de 3 \muM, 0,3 \muM, 0,003 \muM y 0,0003 \muM. Todas las condiciones se completaron por triplicado.

Una disolución madre 300 mM del sustrato peptídico en dimetilsulfóxido se diluyó hasta 15 mM en tampón de prueba y el experimento se inició mediante la adición de 50 \mul a cada pocillo para dar una concentración final de sustrato 3 mM. Los blancos consisten en el sustrato peptídico y el reactivo de Ellman sin la enzima. La formación del producto se controló a 405 nm con un lector de placas Molecular Devices UVmax.

Los valores CI_{50} se determinaron de la misma manera que para la colagenasa.

Inhibición de la MMP-13

La MMP-13 recombinante humana se activó con APMA 2 mM (acetato p-aminofenilmercúrico) durante 1,5 horas, a 37ºC y se diluyó hasta 400 mg/ml en tampón de prueba (Tris 50 mM, pH = 7,5, cloruro sódico 200 mM, cloruro de calcio 5 mM, cloruro de cinc 20 \muM, Brij al 0,02%). Se añadió 25 microlitros de enzima diluida por pocillo de una placa microfluor de 96 pocillos. A continuación la enzima se diluyó en una relación 1:4 en el experimento mediante la adición de inhibidor y sustrato para dar una concentración final en el experimento de 100 mg/ml.

Las disoluciones madre de inhibidores 10 mM se prepararon en dimetilsulfóxido y a continuación se diluyeron seriadamente en tampón de prueba como para el esquema de dilución del inhibidor para la inhibición de la colagenasa humana (MMP-1): se añadió 25 microlitros de cada concentración por triplicado en la placa microfluor. Las concentraciones finales en el experimento son de 30 \muM, 3 \muM, 0,3 \muM y 0,03 \muM.

El sustrato (DNP-Pro-Cha-Gly-Cys(Me)-His-Ala-Lys(NMA)-NH_{2}) se preparó como para la inhibición de la colagenasa humana (MMP-1) y se añadió 50 ml a cada pocillo para dar una concentración final en el experimento de 10 \muM. Las lecturas de fluorescencia (excitación a 360 nm, emisión a 460 nm) se tomaron a tiempo 0 y cada 5 minutos durante 1 hora.

Los controles positivos consisten en enzima y sustrato sin inhibidor y los blancos consisten solamente en sustrato.

Los CI_{50} se determinaron como para la inhibición de la colagenasa humana (MMP-1). Si se informa de que los CI_{50} son inferiores a 0,03 \muM, entonces los inhibidores se prueban a concentraciones finales de 0,3 \muM, 0,03 \muM, 0,003 \muM y 0,0003 \muM.

Experimento de la MMP-13 de película de colágeno

Se radiomarcó colágeno de rata tipo I con anhídrido acético ^{14}C (T.E. Cawston y A. J. Barrett, Anal. Biochem., 99, 340-345 (1979)) y se usó para preparar placas de 96 pocillos que contienen películas de colágeno radiomarcadas (Barbara Johnson-Wint, Anal. Biochem., 104, 175-181 (1980)). Cuando se añade al pocillo una disolución que contiene colagenasa, la enzima escinde el colágeno insoluble que se desenrolla y así se solubiliza. La actividad colagenasa es directamente proporcional a la cantidad de colágeno solubilizado, determinado por la proporción de radiactividad liberada en el sobrenadante como se mide en un contador de centelleo convencional. Los inhibidores de la colagenasa son, por tanto, compuestos que reducen las cuentas radiactivas liberadas con respecto a los controles sin inhibidor presente. Una forma de realización específica de este experimento se describe en detalle a continuación.

Para determinar la selectividad de los compuestos para la MMP-13 frente a la MMP-1 usando colágeno como sustrato, se usó el siguiente procedimiento. Se activó proMMP-1 o proMMP-13 recombinante humana según los procedimientos apuntados anteriormente. La MMP-1 o MMP-13 activada se diluyó hasta 0,6 \mug/ml con tampón (Tris 50 mM, pH = 7,5, NaCl 150 mM, CaCl_{2} 10 mM, ZnCl_{2} 1 \mum, Brij-35 al 0,05%, azida sódica al 0,02%).

Se prepararon disoluciones madre de los compuestos de prueba (10 mM) en dimetilsulfóxido. Se hicieron diluciones de los compuestos de prueba en el tampón Tris, anterior, a 0,2, 2,0, 20, 200, 2000 y 20.000 nM.

Se pipetearon 100 \mul de la dilución apropiada del fármaco y 100 \mul de la enzima diluida en los pocillos de una placa de 96 pocillos que contiene películas de colágeno marcadas con ^{14}C-colágeno. La concentración final de enzima es 0,3 \mug/ml mientras que la concentración final del fármaco es 0,1, 1,0, 10, 100, 1000 nM. Cada concentración del fármaco y del control se analizó por triplicado. Los controles también se analizaron por triplicado para las condiciones en las cuales no está presente la enzima y para la enzima en ausencia de cualquier compuesto.

Las placas se incubaron a 37ºC durante un periodo de tiempo de manera que el 30-50% del colágeno aproximadamente disponible se solubilizó - determinado contando los pocillos control adicionales a distintos puntos de tiempo. En la mayoría de los casos se requiere 9 horas de incubación aproximadamente. Cuando el experimento hubo progresado suficientemente, se retiró el sobrenadante de cada pocillo y se contó en un contador de centelleo. Las cuentas de fondo (determinadas por las cuentas en el pocillo sin enzima) se restaron de cada muestra y se calculó el % de liberación en relación a los pocillos sólo con enzima y sin inhibidor. Se promediaron los valores por triplicado de cada pocillo y los datos se representaron como porcentaje de liberación frente a la concentración de fármaco. Los CI_{50} se determinaron a partir del punto en el cual se obtiene el 50% de inhibición de la liberación de colágeno radiomarcado.

Para determinar la identidad de las colagenasas activas en el medio condicionado de cartílago, los experimentos se llevaron a cabo usando colágeno como sustrato, medio condicionado de cartílago que contiene actividad colagenasas e inhibidores de selectividad variable. El medio condicionado de cartílago se recogió durante el tiempo en el cual se produjo la degradación del colágeno y así es representativo de las colagenasas responsables de la ruptura del colágeno. Los experimentos se llevaron a cabo como se apunta anteriormente excepto que en lugar de usar MMP-1 o MMP-13 recombinante, la fuente de la enzima fue medio condicionado de cartílago.

Degradación del colágeno de cartílago de cartílago nasal bovino inducida por IL-1

Este experimento usa explantes de cartílago nasal bovino que se usa normalmente para probar la eficacia de diversos compuestos para inhibir la degradación del proteoglicano inducida por IL-1 o la degradación del colágeno inducida por IL-1. El cartílago nasal bovino es un tejido que es muy similar al cartílago articular, es decir, condrocitos rodeados por una matriz que principalmente es colágeno tipo II y agrecano. El tejido se usa debido a: (1) es muy similar al cartílago articular, (2) está disponible fácilmente, (3) es relativamente homogéneo y (4) se degrada con una cinética predecible después de la estimulación con IL-1.

Se han usado dos variaciones de este experimento con los compuestos de prueba. Ambas variaciones dan datos similares. Las dos variaciones se describen a continuación:

Variación 1

Se colocó tres tapones de cartílago nasal bovino (2 mm de diámetro x 1,5 mm de longitud aproximadamente) en cada pocillo de una placa de cultivo de tejidos de 24 pocillos. A continuación se añadió a cada pocillo un ml de medio sin suero. Los compuestos se prepararon como disoluciones madre 10 mM en DMSO y a continuación se diluyeron apropiadamente en medio sin suero hasta concentraciones finales, por ejemplo, de 50, 500 y 5000 nM. Cada concentración se probó por triplicado.

Se añadió IL-1\alpha recombinante humana (5 ng/ml) (IL-1) por triplicado a los pocillos control y a cada pocillo que contenía el fármaco. Los pocillos control también se pusieron por triplicado en los que no se añadió ni fármaco ni IL-1. El medio se retiró y se añadió medio fresco que contenía IL-1 y las concentraciones apropiadas del fármaco los días 6, 12, 18 y 24 o cada 3-4 días si fuese necesario. El medio retirado en cada punto del tiempo se almacenó a -20ºC para un análisis posterior. Cuando el cartílago en los pocillos de IL-1 sola se hubo reabsorbido casi completamente (día 21 aproximadamente), se detuvo el experimento. El medio, se retiró y se almacenó. Se combinaron las alícuotas (100 \mul) de cada pocillo para cada punto del tiempo, se digirieron con papaina y a continuación se analizaron para su contenido en hidroxiprolina. La hidroxiprolina de fondo (promedio de pocillos sin IL-1 y sin fármaco) se restó de cada punto de los datos y se calculó el promedio para cada triplicado. A continuación los datos se expresaron como porcentaje del valor promedio de la IL-1 sola y se representaron. A partir de esta gráfica se determinó el CI_{50}.

Variación 2

La disposición experimental es la misma que la apuntada anteriormente en la Variación 1, hasta el día 12. El día 12, el medio condicionado de cada pocillo se retiró y se congeló. A continuación se añadió a cada pocillo un ml de tampón fosfato salino (PBS) que contiene 0,5 \mug/ml de tripsina y se prosiguió con la incubación durante 48 horas más a 37ºC. Después de incubar 48 horas en tripsina, se retiró la disolución de PBS. Se combinaron las alícuotas (50 \mul) de la disolución de PBS/tripsina y de los dos puntos de tiempo previos (días 6 y 12), se hidrolizaron y se determinó su contenido en hidroxiprolina. La hidroxiprolina de fondo (promedio de pocillos sin IL-1 y sin fármaco) se restó de cada punto de los datos y se calculó el promedio para cada triplicado. A continuación los datos se expresaron como porcentaje del valor promedio de la IL-1 sola y se representaron. A partir de esta gráfica se determinó el CI_{50}. En esta variación, el curso de la duración del experimento se acorta considerablemente. La adición de tripsina durante 48 horas después de los 12 días de la estimulación con IL-1 probablemente libera cualquier colágeno de tipo II que haya sido dañado por la actividad colagenasa pero aún no liberado de matriz del cartílago. En ausencia de estimulación con IL-1, el tratamiento con tripsina sólo produce niveles de fondo de degradación del colágeno bajos en los explantes del cartílago.

Inhibición de la gelatinasa de 92 kDa humana (MMP-9)

Se probó la inhibición de la actividad de la gelatinasa de 92 kDa (MMP-9) usando el sustrato Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH_{2} (10 \muM) en condiciones similares a las descritas anteriormente para la inhibición de la colagenasa humana (MMP-1).

La gelatinasa de 92 kDa recombinante humana (MMP-9, gelatinasa B) se activó durante 2 horas con acetato p-aminofenilmercúrico 1 mM (de una disolución madre 100 mM en NaOH 0,2 N preparado de novo) a 37ºC.

Las disoluciones madre de inhibidores 10 mM en dimetilsulfóxido se diluyeron seriadamente en tampón de prueba (Tris 50 mM, pH = 7,5, NaCl 200 mM, CaCl_{2} 5 mM, ZnCl_{2} 20 \mum, Brij-35 al 0,02%, (vol/vol)) usando el esquema siguiente:

Se hicieron diluciones adicionales según lo necesario siguiendo este mismo esquema. Se realizaron un mínimo de 4 concentraciones de inhibidor para cada compuesto en cada experimento. A continuación se añadió 25 \mul de cada concentración a los pocillos duplicados de una placa microfluor negra de fondo en U de 96 pocillos. Como en el experimento final el volumen es de 100 \mul, las concentraciones de inhibidor finales son el resultado de una dilución adicional 1:4 (es decir, 30 \muM \rightarrow 3 \muM \rightarrow 0,3 \muM \rightarrow 0,03 \muM, etc.). También se preparó por triplicado un blanco (sin enzima, sin inhibidor) y el control positivo de la enzima (con enzima, sin inhibidor).

La enzima activada se diluyó hasta 100 ng/ml en tampón de prueba y se añadió 25 \mul por pocillo a los pocillos apropiados de la microplaca. La concentración final de enzima en el experimento es 25 ng/ml (0,27 nM).

Una disolución madre 5 mM de sustrato (Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH_{2}) en dimetilsulfóxido se diluyó en tampón de prueba hasta 20 \muM. El experimento se inició mediante la adición de 50 \muM del sustrato diluido dando una concentración final en el experimento de 10 \muM de sustrato. Se tomó inmediatamente una lectura de fluorescencia a tiempo 0 (excitación a 320; emisión a 390) y las lecturas posteriores se tomaron cada 15 minutos a temperatura ambiente con un PerSeptive Biosystems CytoFluor Multi-Well Plate Reader con la ganancia a 90 unidades.

El valor promedio de la fluorescencia de la enzima y del blanco se representó frente al tiempo. Se escogió un punto de tiempo temprano sobre la parte lineal de esta curva para las determinaciones del CI_{50}. El punto de tiempo 0 para cada compuesto a cada dilución se restó del último punto de tiempo y a continuación los datos se expresaron como porcentaje del control de la enzima (fluorescencia del inhibidor dividida por la fluorescencia del control positivo de la enzima x 100). Los datos se representaron como concentración del inhibidor frente al porcentaje del control de la enzima. El CI_{50} se ha definido como la concentración de inhibidor que da una señal que es el 50% del control positivo de la enzima.

Experimento de la agrecanasa

Se aislaron condrocitos porcinos primarios del cartílago articular por digestión secuencial con tripsina y colagenasa seguida de digestión con colagenasa durante la noche y se pusieron a 2 x 10^{5} células por pocillo en placas de 48 pocillos con 5 \muCi/ml de azufre ^{35}S (1000 Ci/mmol) en placas cubiertas de colágeno tipo I. Se dejó que las células incorporasen el marcador en su matriz de proteoglicano (una semana aproximadamente) a 37ºC, en atmósfera de CO_{2} al 5%.

La noche previa al inicio del experimento, las monocapas de condrocitos se lavaron dos veces en DMEM/PSF/G al 1% y a continuación se dejaron incubando en DMEM/FBS al 1% fresco durante la noche.

La mañana siguiente los condrocitos se lavaron una vez en DMEM/PSF/G al 1%. El lavado final se dejó asentar las placas en el incubador mientras se hacían las diluciones.

El medio y las diluciones se pueden preparar como se describe en la Tabla a continuación.

Medio de control	DMEM solo (medio de control)
Medio con IL-1	DMEM + IL-1 (5 ng/ml)
Diluciones del fármaco	Hacer disoluciones madre 10 mM de todos los compuestos en DMSO
	\begin{minipage}[t]{110mm}Hacer una disolución madre 100 \muM de cada compuesto en DMEM en una placa de 96 pocillos. Almacenar en el congelador durante la noche.\end{minipage}
	\begin{minipage}[t]{110mm}Al día siguiente realizar diluciones seriadas en DMEM con IL-1 a 5 \muM, 500 nM y 50 nM.\end{minipage}
	\begin{minipage}[t]{110mm}Aspirar el lavado final de los pocillos y añadir 50 \muM de compuesto de las diluciones anteriores a 450 \muM de medio con IL-1 en los pocillos apropiados de las placas de 48 pocillos.\end{minipage}
	\begin{minipage}[t]{110mm}Concentraciones del compuesto final igual a 500 nM, 50 nM y 5 nM. Todas las muestras se completaron por triplicado con el Control y la IL-1 sola en cada placa.\end{minipage}

Las placas se marcaron y sólo se usaron los 24 pocillos interiores de la placa. Sobre una de las placas, varias columnas se designaron como IL-1 (sin fármaco) y Control (sin IL-1, sin fármaco). Estas columnas control se contaron periódicamente para controlar la liberación de ^{35}S-proteoglicano. Se añadió medio de control y medio con IL-1 a los pocillos (450 \muM) seguido del compuesto (50 \muM) para iniciar así el experimento. Las placas se incubaron a 37ºC, con atmósfera de CO_{2} al 5%.

A una liberación del 40-50% (cuando el CPM del medio con IL-1 es 4-5 veces el medio de control) de las muestras de medio como se calcula por recuento por centelleo de líquidos (LSC), se detuvo el experimento (9-12 horas). El medio se retiró de todos los pocillos y se colocó en tubos de centelleo. Se añadió reactivo de centelleo y se obtuvieron las cuentas radiactivas (LSC). Para solubilizar las capas de células, se añadió 500 \mul de tampón de digestión de papaina (Tris 0,2 M, pH = 7,0, EDTA 5 mM, DTT 5 mM y papaina 1 mg/ml) a cada pocillo. Las placas con la disolución de digestión se incubaron a 60ºC durante la noche. Al día siguiente se retiró la capa de células de las placas y se colocaron en tubos de centelleo. A continuación se añadió el reactivo de centelleo y las muestras se contaron
(LSC).

Se determinó el porcentaje de cuentas liberadas de las totales presentes en cada pocillo. Se hicieron los promedios de los triplicados restando el fondo del control de cada pocillo. El porcentaje de inhibición del compuesto se basa en las muestras de IL-1 como inhibición al 0% (100% de las cuentas totales).

Los compuestos de la presente invención que se probaron tenían un CI_{50} inferior a 1 \muM, preferentemente inferior a 50 nm en al menos uno de los experimentos descritos anteriormente. Los compuestos de la presente invención también poseen actividad diferencial (es decir son selectivos) para uno o más de reprolisina o MMP. La selectividad como se usa en el presente documento se refiere a la relación del CI_{50} inhibidora que resulta de dos o más de los protocolos anteriores. Los compuestos de la invención que son selectivos poseen una relación de al menos 10. Los compuestos de la invención que poseen la potencia o la selectividad deseada se pueden identificar probando un compuesto de fórmula I según los protocolos descritos anteriormente y determinando la relación de la selectividad y el CI_{50}.

Un grupo de compuestos preferidos de fórmula I que se pueden identificar mediante los procedimientos de la presente invención incluyen aquellos que poseen actividad selectiva frente a la TACE sobre la MMP-1, preferentemente de al menos 40 veces, más preferentemente de al menos 100 veces, más selectiva para la TACE sobre la MMP-1, más preferentemente con un CI_{50} para la TACE inferior a 50 nM, lo más preferentemente inferior a 10 nM. Otro grupo de compuestos preferidos de fórmula I que se pueden identificar mediante los procedimientos de la presente invención incluye aquellos inhibidores que poseen actividad potente para la TACE y la MMP-13 (preferentemente un CI_{50} inferior a 100 nM, más preferentemente 50 nM, lo más preferentemente 10 nM), preferentemente en la que dicha actividad inhibidora de la TACE y la MMP-13 es un actividad preferencialmente selectiva para la TACE y la MMP-13 sobre la MMP-1, preferentemente tales compuestos son equipotentes para la inhibición para la TACE y la MMP-13 (CI_{50}) como se ha descrito en al menos uno de los experimentos para la TACE o la MMP-13 descritos anteriormente, más preferentemente en el que dichos compuestos poseen una selectividad de al menos 100 veces para la TACE y la MMP-13 sobre la MMP-1. Otro grupo de compuestos preferidos de fórmula I que se puede identificar mediante los procedimientos de la presente invención incluye aquellos inhibidores que poseen una actividad potente (preferentemente un CI_{50} inferior a 500 nM, más preferentemente a 100 nM, lo más preferentemente a 50 nM) para la TACE y la agrecanasa, en la que dicha actividad inhibidora para la TACE y la agrecanasa es una actividad preferencialmente selectiva para la TACE y la agrecanasa sobre la MMP-1, más preferentemente en la que dicha selectividad es 10 veces, lo más preferentemente 40 veces, superior para la TACE y la agrecanasa sobre la MMP-1.

Otro grupo de compuestos preferidos de fórmula I que se puede identificar mediante los procedimientos de la presente invención incluye aquellos inhibidores que poseen una actividad selectiva frente a la MMP-13 sobre la MMP-1, (preferentemente un CI_{50} inferior a 500 nM, más preferentemente a 100 nM, lo más preferentemente a 50 nM) para la MMP-13 con una selectividad de al menos 10 veces, preferentemente 40 veces, superior para la MMP-13 sobre la MMP-1.

Otro grupo de compuestos preferidos de fórmula I que se puede identificar mediante los procedimientos de la presente invención incluye aquellos inhibidores que poseen una actividad inhibidora potente (preferentemente un CI_{50} inferior a 500 nM, más preferentemente a 100 nM, lo más preferentemente a 50 nM) para la MMP-13 y la agrecanasa, preferentemente en la que dicha actividad inhibidora para la MMP-13 y la agrecanasa es una actividad selectiva para la MMP-13 y la agrecanasa sobre la MMP-1, preferentemente en la que dicha selectividad es al menos 10 veces, preferentemente 40 veces, superior para la MMP-13 y la agrecanasa sobre la MMP-1.

Otro grupo de compuestos preferidos de fórmula I que se puede identificar mediante los procedimientos de la presente invención incluye aquellos que poseen una actividad potente para la agrecanasa (preferentemente un CI_{50} inferior a 500 nM, más preferentemente a 100 nM, lo más preferentemente a 50 nM), preferentemente en la que dicha actividad inhibidora para la agrecanasa es una actividad selectiva para la agrecanasa sobre la MMP-1, preferentemente 10 veces, más preferentemente 40 veces, más selectiva para la agrecanasa sobre la MMP-1.

Otro grupo de compuestos preferidos de fórmula I que se puede identificar mediante los procedimientos de la presente invención incluye aquellos inhibidores que poseen una actividad potente contra la agrecanasa, la MMP-13 y la TACE (preferentemente un CI_{50} inferior a 500 nM, más preferentemente a 100 nM, lo más preferentemente a 50 nM) preferentemente en la que dicha actividad inhibidora para la agrecanasa, la MMP-13 y la TACE es una actividad selectiva para la agrecanasa, la MMP-13 y la TACE sobre la MMP-1, preferentemente 10 veces más selectiva para la agrecanasa, la MMP-13 y la TACE sobre la MMP-1.

Para la administración a mamíferos, incluyendo humanos, para la inhibición de las metaloproteinasas de matriz o la reprolisina de mamíferos (preferentemente de inhibición de la TACE), se pueden usar una variedad de vías convencionales incluyendo oral, parenteral y tópicamente. En general, el compuesto activo se administrará oral o parenteralmente a dosificaciones entre 0,1 a 25 mg/kg aproximadamente de peso corporal del sujeto a ser tratado por día, preferentemente entre 0,3 y 5 mg/kg aproximadamente. No obstante, necesariamente se producirán algunas variaciones en las dosificaciones dependiendo de la dolencia del sujeto tratado. La persona responsable de la administración determinará, en cualquier caso, la dosis apropiada para el sujeto individual.

Los compuestos de la presente invención se pueden administrar en una amplia variedad de formas de dosificación diferentes, en general, los compuestos terapéuticamente eficaces de esta invención están presentes en dichas formas de dosificación a niveles de concentración que abarcan entre el 5,0% aproximadamente y el 70% en peso aproximadamente.

Para la administración por vía oral, se pueden emplear comprimidos que contienen diversos excipientes tales como celulosa microcristalina, citrato sódico, carbonato de calcio, fosfato de dicalcio y glicina junto con diversos disgregantes tales como fécula (y preferentemente fécula de maíz, patata o tapioca), ácido algínico y ciertos silicatos complejos, junto con aglutinantes de granulación como polivinilpirrolidona, sacarosa, gelatina y goma arábiga. Adicionalmente, a menudo son muy útiles agentes lubricantes tales como estearato de magnesio, laurilsulfato sódico y talco para propósitos de formación de comprimidos. También se pueden emplear como cargas composiciones sólidas de un tipo similar en cápsulas de gelatina; con respecto a esto los materiales preferidos también incluyen lactosa o azúcar de la leche así como polietilenglicoles de elevado peso molecular. Cuando se desean suspensiones acuosas y/o elixires para la administración por vía oral, el principio activo se puede combinar con diversos agentes aromatizantes o edulcorantes, colorantes o tintes, y, si así se desea, agentes emulsionantes y/o de suspensión así como, junto con diluyentes tales como agua, etanol, propilenglicol, glicerina y diversas combinaciones similares.

Para la administración por vía parenteral (uso intramuscular, intraperitoneal, subcutánea e intravenoso) normalmente se prepara una disolución inyectable estéril del principio activo. Se pueden emplear disoluciones de un compuesto terapéutico de la presente invención en cualquiera de los dos aceite de cacahuete o sésamo o en propilenglicol acuoso. Las disoluciones acuosas se deberían ajustar y tamponar convenientemente, preferentemente a un pH superior a 8, si fuese necesario y el diluyente líquido volverse primero isotónico. Las disoluciones acuosas son adecuadas para propósitos de inyección intravenosa. La preparación de todas estas disoluciones en condiciones estériles se consigue fácilmente mediante técnicas farmacéuticas habituales muy conocidas por aquellos expertos en la materia.

Los siguientes Ejemplos ilustran la preparación de los compuestos de la presente invención. Los puntos de fusión están sin corregir. Los datos de RMN se presentan en partes por millón (\delta) y en referencia a la señal fija del deuterio del disolvente de muestra (dimetilsulfóxido deuterado a menos que se especifique otra cosa). Los reactivos comerciales se utilizan sin purificación adicional. El THF se refiere a tetrahidrofurano. El DMF se refiere a N,N-dimetilformamida. La cromatografía se refiere a cromatografía en columna realizada usando un gel de sílice de 32-63 mm y llevada a cabo en condiciones de presión de nitrógeno (cromatografía súbita). Temperatura ambiente se refiere a 20-25ºC. Todas las reacciones no acuosas se llevan a cabo en atmósfera de nitrógeno por comodidad y para maximizar los rendimientos. La concentración a presión reducida significa que se usa un evaporador rotatorio.

Ejemplo 1 Hidroxiamida del ácido (2S,3S)-4-[4-(3,5-disulfuro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2-metil-tiomorfolin-3-carboxílico

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(a) Se burbujeó ácido clorhídrico gaseoso a través de una suspensión agitada y fría (20ºC) de D-treonina (25 g, 21 mmol) en 150 ml de metanol durante 15 minutos. La mezcla resultante se calentó a reflujo durante 24 horas en atmósfera de nitrógeno. La mezcla se llevó a temperatura ambiente (23ºC) y se concentró hasta un aceite claro para dar el clorhidrato del éster metílico del ácido (2R,3S)-2-amino-3-hidroxi-butírico, que se usó en la etapa siguiente sin purificación.

(b) A una disolución agitada y fría (0ºC) del clorhidrato del éster metílico del ácido (2R,3S)-2-amino-3-hidroxi-butírico y diisopropiletilamina (16,5 ml, 94,3 mmol) en 95 ml de cloruro de metileno se añadió cloruro de 4-(3,5-difluoro-benciloxi)-bencenosulfonilo (15 g, 47,2 mmol) en 5 ml de cloruro de metileno en atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó durante 7,5 horas a 0ºC, a continuación se puso en un frigorífico (4ºC) durante 17 horas más. La mezcla se añadió a agua y se extrajo con acetato de etilo. Los extractos de acetato de etilo combinados se lavaron con carbonato sódico acuoso, ácido clorhídrico acuoso diluido, agua, salmuera y se secaron sobre sulfato sódico. Después de la filtración y la concentración del filtrado, el sólido en bruto se suspendió en éter dietílico y se agitó durante 16 horas. La filtración y el secado dio el éster metílico del ácido (2R,3S)-2-[4-(3,5-difluro-benciloxi)-bencenosulfonolamino]-3-hidroxi-butírico como un sólido rosa pálido.

(c) A una disolución agitada y fría (0ºC) de trifenilfosfina (2,1 g, 7,9 mmol) en 18 ml de tetrahidrofurano se añadió gota a gota 1,2 ml (7,6 mmol) de azodicarboxilato de dimetilo. Después de 20 minutos se añadió una disolución de éster metílico del ácido (2R,3S)-2-[4-(3,5-difluro-benciloxi)-bencenosulfonolamino]-3-hidroxi-butírico (3 g, 7,2 mmol) en 18 ml de tetrahidrofurano. La mezcla resultante se agitó durante 48 horas a temperatura ambiente (23ºC) en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se concentró y se purificó por cromatografía en gel de sílice (elución con hexanos/acetato de etilo 65:35) para dar el éster metílico del ácido (2R,3R)-1-[4-(3,5-difluro-benciloxi)-bencenosulfonil]-3-metil-aziridin-2-carboxílico como un aceite rosa pálido.

(d) A una disolución agitada del éster metílico del ácido (2R,3R)-1-[4-(3,5-difluro-benciloxi)-bencenosulfonil]-3-metil-aziridin-2-carboxílico (421 mg, 1,1 mmol) y 2-mercaptoetanol (3,7 ml, 52,9 mmol) en 2,6 ml de cloruro de metileno se añadió eterato de trifluoruro de boro (catalítico) a temperatura ambiente (23ºC) en atmósfera de nitrógeno. Después de 42,5 horas el material de reacción se añadió a tampón fosfato (pH = 7) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos conminados se secaron sobre sulfato sódico. Después de la filtración y la concentración del filtrado, el producto en bruto resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (elución con acetato de etilo/hexanos 5:3) para dar el éster metílico del ácido (2S,3S)-2-[4-(3,5-difluro-benciloxi)-bencenosulfonilamino]-3-(2-hidroxi-etilsulfonilo)-butírico como un sólido blanco.

(e) A una disolución agitada de trifenilfosfina (116 mg, 0,44 mmol) en 1,0 ml de tetrahidrofurano se añadió gota a gota azodicarboxilato de dimetilo (56 \mul, 420 \mumol). Después de 30 minutos se añadió gota a gota una disolución del éster metílico del ácido (2S,3S)-2-[4-(3,5-difluro-benciloxi)-bencenosulfonilamino]-3-(2-hidroxi-etilsulfonilo)-butírico (192 mg, 0,40 mmol) en 1,0 ml de tetrahidrofurano. La mezcla resultante se agitó durante 48 horas a temperatura ambiente (23ºC) en atmósfera de nitrógeno. El material de reacción se concentró y se purificó por cromatografía en gel de sílice (elución con hexanos/acetato de etilo 75:25) para dar el éster metílico del ácido (2S,3S)-4-[4-(3,5-difluro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2-metil-tiomorfolin-3-carboxílico como una espuma blanca.

(f) Una disolución agitada del éster metílico del ácido (2S,3S)-4-[4-(3,5-difluro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2-metil-tiomorfolin-3-carboxílico (113 mg, 0,25 mmol), hidróxido de litio monohidratado (41 mg, 0,99 mmol), 1,4-dioxano (6 ml), metanol (3 ml) y agua (7 ml) se calentó a 60ºC en atmósfera de nitrógeno durante 5 horas. La mezcla de reacción se añadió a ácido clorhídrico acuoso diluido. La fase acuosa se separó y se acidificó adicionalmente hasta un pH de 2,5 usando cloruro de hidrógeno acuoso 1 N y se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y el filtrado se concentró para dar el ácido (2S,3S)-4-[4-(3,5-difluro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2-metil-tiomorfolin-3-carboxílico, que se usó en la etapa posterior sin purificación.

(g) A una suspensión agitada del ácido (2S,3S)-4-[4-(3,5-difluro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2-metil-tiomorfolin-3-carboxílico (96 mg, 0,22 mmol) y dimetilformamida (0,3 \mul, 4 \mumol) en 900 \mul de cloruro de metileno, a 0ºC, se añadió gota a gota cloruro de oxalilo (21 \mul, 240 \mumol) mientras se agitaba en atmósfera de nitrógeno. Mientras tanto, se añadió gota a gota clorotrimetilsilano (83 \mul, 650 \mumol), a una disolución agitada y fría (0ºC) de clorhidrato de hidroxilamina (19,6 mg, 0,28 mmol) en 130 \mul de piridina. Ambas mezclas de reacción se calentaron a temperatura ambiente (23ºC). Después de 20 horas ambas mezclas de reacción se enfriaron a 0ºC y la disolución del cloruro de ácido se añadió a la suspensión agitada de la bis-(trimetilsilil) hidroxilamina mediante una cánula. La mezcla resultante se agitó durante 2 horas a 0ºC y durante 2 horas a 23ºC antes de que se añadiese 10 \mul de cloruro de hidrógeno acuoso 1 N y la reacción se agitó durante 4 horas más. La mezcla de reacción se añadió a agua y se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, se secaron con sulfato sódico, se filtraron y el filtrado se concentró. El material en bruto resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (elución con acetato de etilo/hexanos 1:1) para dar la hidroxiamida del ácido (2S,3S)-4-[4-(3,5-difluro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2-metil-tiomorfolin-3-carboxílico como un sólido amarillo pálido. Espectro de masas: m/z: 459 (M + H).

Ejemplo 2 Hidroxiamida del ácido (2S,3S)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2-metil-tiomorfolin-3-carboxílico

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La hidroxiamida del ácido (2S,3S)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2-metil-tiomorfolin-3-carboxílico se preparó de manera similar partiendo del éster metílico del ácido (2R,3S)-2-[4-(4-fluro-benciloxi)-bencenosulfonolamino]-3-hidroxi-butírico con la excepción de que se usó azodicarboxilato de diisopropilo en las etapas c y e. Espectro de masas: m/z: 441 (M + H).

Ejemplo 3 Hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-2,6-dimetil-4-[4-(2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-morfolin-3-carboxílico

Etapa 1

Preparación de la sulfonamida acíclica Éster metílico del ácido (2R,3S)-2-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonilamino]-3-hidroxi-butírico

Se añadió gota a gota cloruro de tionilo (26 ml) a metanol a temperatura ambiente. La disolución se enfrío a 0ºC y se añadió D-treonina (14,0 g, 118 mmol) en tres porciones durante 30 minutos. Después de agitar durante 1 hora a 0ºC, la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El disolvente se retiró a alto vacío durante 48 horas. El sólido blanco vítreo resultante se disolvió en acetato de etilo (170 ml) y agua (80 ml) a 0ºC. Se añadió secuencialmente carbonato de potasio (22,8 g, 165 mmol) y cloruro de 4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonilo (46,9 g, 118 mmol). La mezcla resultante se agitó a 0ºC durante 30 minutos y a continuación a temperatura ambiente durante 20 horas. Se añadió acetato de etilo (200 ml). La fase orgánica se separó, se extrajo con agua (3 x 20 ml) y salmuera (20 ml) y se secó sobre sulfato de magnesio. El disolvente se retiró en vacío para dar el compuesto del título (42,8 g, 91,3%).

Etapa 2

Alilación de la sulfonamida acíclica Éster metílico del ácido (2R,3S)-2-{alil-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-amino}-3-hidroxi-butírico

Se disolvió el éster metílico del ácido (2R,3S)-2-[4-(4-Fluoro-benciloxi)-bencenosulfonilamino]-3-hidroxi-butírico (20 g, 50,3 mmol) en dimetilformamida (100 ml). Se añadió secuencialmente yoduro de alilo (16,8 g, 100 mmol) y carbonato de cesio (17 g, 52,3 mmol). La disolución se agitó durante 2,5 horas a temperatura ambiente. Se añadió éter dietílico (800 ml) y se formó un precipitado. La fase líquida se retiró, se extrajo con agua (5 x 20 ml) y salmuera (2 x 20 ml) y se secó sobre sulfato de magnesio. El disolvente se retiró en vacío. El aceite resultante se sometió a cromatografía en gel de sílice (40 \muM) con acetato de etilo en hexanos para dar el compuesto del título (17 g, 77%).

Etapa 3

Ciclación Éster metílico del ácido (2R,3R,6S)-2-[4-(4-fluoro-benciloxi)-fenilsulfanil]-2,6-dimetil-morfolin-3-carboxílico

Se disolvió el éster metílico del ácido (2R,3S)-2-{alil-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-amino}-3-hidroxi-butírico (12,5 g, 28,6 mmol) en tetrahidrofurano (286 ml). Se añadió secuencialmente carbonato de potasio (4,7 g, 34,3 mmol) y trifluoroacetato de mercurio (II) (14,6 g, 34,3 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante 75 minutos a temperatura ambiente y a continuación se enfrío en un baño de éter dietílico en hielo seco. Se añadió trietilborano (1 M, 30 ml, 30 mmol) en hexanos. Después de 5 minutos, se añadió borohidruro sódico (1,1 g, 33,4 mmol). La reacción se agitó en el baño de enfriamiento durante 1 hora y a continuación se calentó a temperatura ambiente. Se añadió agua (100 ml) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (4 x 200 ml). Las porciones orgánicas se combinaron, se extrajeron con salmuera (25 ml) y se secaron sobre sulfato de magnesio. El disolvente se retiró en vacío para dar el compuesto del título (12,0 g, 96%).

Etapa 4

Desbencilación Éster metílico del ácido (2R,3R,6S)-4-(4-hidroxi- fenilsulfanil)-2,6-dimetil-morfolin-3-carboxílico

Se disolvió el éster metílico del ácido (2R,3R,6S)-2-[4-(4-fluoro-benciloxi)-fenilsulfanil]-2,6-dimetil-morfolin-3-carboxílico (2,0 g, 27,4 mmol) en metanol (75 ml) y se añadió paladio sobre carbón (1,5 g). La mezcla se agitó en hidrógeno (341,32 kPa) durante la noche. El catalizador se retiró por filtración y el disolvente se retiró en vacío para dar el compuesto del título (9,0 g, 99%).

Etapa 5

Bencilación Éster metílico del ácido (2R,3R,6S)-2,6-dimetil-4-[4-(2-metil-benciloxi)-fenilsulfanil]-morfolin-3-carboxílico

Se disolvió el éster metílico del ácido (2R,3R,6S)-4-(4-hidroxi-fenilsulfanil)-2,6-dimetil-morfolin-3-carboxílico (0,66 g, 2,0 mmol) en dimetilformamida (4 ml). Se añadió bromuro de 2-metilbencilo (0,407 g, 2,2 mmol) y carbonato de cesio (1,3 g, 4 mmol) a la mezcla de reacción. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas y se calentó a 40ºC durante 1 hora. Se añadió éter dietílico (75 ml) y acetato de etilo (25 ml) y se formó un precipitado. La fase líquida se retiró, se extrajo con ácido clorhídrico acuoso (1 N, 4 x 10 ml) y salmuera (1 x de ml) y se secó sobre sulfato de magnesio. El disolvente se retiró en vacío. El aceite resultante se sometió a cromatografía en gel de sílice con acetato de etilo en hexanos para dar el compuesto del título (0,42 g, 48%).

Etapa 6

Formación del hidroxamato Aliloxi-amida del ácido (2R,3R,6S)-2,6-dimetil-4-[4-(2-metil-benciloxi)-fenilsulfanil]-morfolin-3-carboxílico

Se combinó el éster metílico del ácido (2R,3R,6S)-2,6-dimetil-4-[4-(2-metil-benciloxi)-fenilsulfanil]-morfolin-3-carboxílico (0,42 g, 0,97 mmol) con hidróxido de litio monohidratado (420 mg, 10 mmol) en agua (5 ml), tetrahidrofurano (10 ml) y metanol (5 ml). La disolución se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadió acetato de etilo (100 ml), ácido clorhídrico acuoso (1 N, 25 ml) y cloruro sódico en exceso. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 25 ml). Las porciones orgánicas combinadas se extrajeron con salmuera (1 x 10 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y el disolvente se retiró en vacío. El ácido en bruto se combinó con clorhidrato de alilhidroxilamina (0,44 g, 4 mmol) e hidroxibenzotriazol (0,03 g, 0,2 mmol) en diclorometano (10 ml). Se añadió diisopropiletilamina (1,23 ml, 7 mmol). Se añadió 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0,575 g, 3,0 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadió acetato de etilo (100 ml) y la disolución se extrajo con ácido clorhídrico acuoso (1 N, 4 x 10 ml) y salmuera (100 ml). La porción orgánica se secó sobre sulfato de magnesio y el disolvente se retiró en vacío. El material en bruto se sometió a cromatografía en gel de sílice con acetato de etilo en hexanos para dar el compuesto del título (0,23 g, 50%).

Etapa 7

Desprotección del ácido hidroxámico Hidroxiamida del ácido (2R,3R,6S)-2,6-dimetil-4-[4-(2-metil-benciloxi)-fenilsulfanil]-morfolin-3-carboxílico

Se disolvió la aliloxi-amida del ácido (2R,3R,6S)-2,6-dimetil-4-[4-(2-metil-benciloxi)-fenilsulfanil]-morfolin-3-carboxílico (0,23 g, 0,48 mmol) en tetrahidrofurano (10 ml). Se añadió secuencialmente cloruro de alilpaladio dimérico (0,012 g, 0,033 mmol), bis-1,2-(difenilfosfino)etano (0,041, 0,1 mmol) y piperidina (50 ml, 0,5 mmol) a temperatura ambiente. El color cambió de pálido a amarillo brillante tras la adición de la amina. La reacción se agitó durante 2 horas, tiempo durante el cual viró lentamente a naranja. El tetrahidrofurano se retiró en vacío. Los sólidos se disolvieron en ácido clorhídrico acuoso (1 N, 10 ml) y acetato de etilo (100 ml). La mezcla se agitó al aire durante 30 minutos y las fases se separaron. La porción orgánica se extrajo con ácido clorhídrico acuoso (1 N, 2 x 10 ml) y salmuera (10 ml) y a continuación se secó sobre sulfato de magnesio. El disolvente se retiró en vacío y el material en bruto se sometió a cromatografía con una mezcla de acetato de etilo, hexano y ácido acético. El compuesto del título (0,108 g, 50%) se aisló como un sólido cuando se disolvió en éter dietílico y el disolvente se retiró por rotoevaporación.

Ejemplo 4 Hidroxiamida del ácido 4-(4-benciloxi-bencenosulfonil)-2-metil-morfolin-3-carboxílico Éster metílico del ácido 2-(4-benciloxi-bencenosulfonilamino)-3-hidroxi-butírico

El compuesto del título se preparó de una manera similar al éster metílico del ácido (2R,3R)-2-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonilamino]-3-hidroxi-butírico en la Etapa 1 del Ejemplo 3, excepto que se sustituyó el cloruro de 4-benciloxi-bencenosulfonilo por cloruro de 4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonilo.

Éster metílico del ácido 1-(4-benciloxi-bencenosulfonilo)-3-metil-aziridina-2-carboxílico

Se disolvió el éster metílico del ácido 2-(4-benciloxi-bencenosulfonilamino)-3-hidroxi-butírico (7 g, 18,5 mmol) en tetrahidrofurano (300 ml) y se añadió trifenilfosfina (7,27 g, 27,2 mmol). Se añadió gota a gota azodicarboxilato de dietilo (4,29 ml, 27,7 mmol) durante 5 minutos. La reacción se agitó durante 12 horas y se repartió entre acetato de etilo y agua. La porción orgánica se extrajo con salmuera y se secó sobre sulfato sódico. El disolvente se retiró en vacío y el material en bruto se sometió a cromatografía en gel de sílice con acetato de etilo en hexanos al 20% para dar el compuesto del título (4,2 g, 63%).

Éster metílico del ácido 2-(4-benciloxi-bencenosulfonilamino)-3-(2-bromo-etoxi)-butírico

Se combinó el éster metílico del ácido 1-(4-benciloxi-bencenosulfonil)-3-metil-aziridina-2-carboxílico (4 g, 11,08 mmol) con bromoetanol (10 ml) y eterato de trifluoruro de boro (1,85 ml) a temperatura ambiente. La reacción se agitó durante 12 horas y la porción volátil se retiró en vacío. El residuo se repartió entre acetato de etilo y agua. La porción orgánica se secó sobre sulfato sódico y el disolvente se retiró en vacío. El residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice con acetato de etilo en hexano al 20% para dar el compuesto del título (4 g, 84%).

Hidroxiamida del ácido 4-(4-benciloxi-bencenosulfonil)-2-metil-morfolin-3-carboxílico

Se disolvió el éster metílico del ácido 2-(4-benciloxi-bencenosulfonilamino)-3-(2-bromo-etoxi)-butírico (4,0 g, 11,1 mmol) en dimetilformamida (40 ml) y se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente con carbonato de potasio (4,0 g, 28,9 mmol). La reacción se repartió entre acetato de etilo y agua. La porción orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato sódico. El disolvente se retiró en vacío. Este material se convirtió al ácido hidroxámico en un procedimiento análogo al del Ejemplo 3.

Ejemplo 5 Hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2,6-dimetilmorfolin-3-carboxílico

El compuesto del título se preparó de manera similar al Ejemplo 3 excepto que se omitieron las etapas 4 y 5.

Ejemplo 6 Hidroxiamida del ácido (3R,6S)-4-(4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2,2,6-trimetil-morfolin-3-carboxílico

El compuesto del título se preparó de manera similar al Ejemplo 3 excepto que el ácido (2R)-2-amino-3-hidroxi-3-metil-butílico se sustituyó por D-treonina en la etapa 1 y se omitieron las etapas 4 y 5.

Ejemplo 7 Hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-6-ETIL-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2-metil-morfolin-3-carboxílico

El compuesto del título se preparó de manera similar al Ejemplo 3 excepto que se sustituyó una cantidad apropiada de bromuro de crotilo por yoduro de alilo en la etapa 2 y se omitieron las etapas 4 y 5.

Ejemplo 8 Hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2,6-dimetil-morfolin-3-carboxílico e hidroxiamida del ácido (2R,3R,6R)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2,6-dimetil-morfolin-3-carboxílico

Los compuestos del título se prepararon de manera similar al Ejemplo 3 excepto que se sustituyó la D-alo-treonina por D-treonina en la etapa 1 y se omitieron las etapas 4 y 5. Se obtuvo una mezcla de isómeros y se separaron por cromatografía en gel de sílice en la etapa 3 y la síntesis se llevó a término separadamente.

Ejemplos 9-12

Hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-2,6-dimetil-4-[4-(piridin-4-ilmetoxi)-bencenosulfonil]-morfolin-3-carboxílico; Hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-2,6-dimetil-4-[4-(piridin-2-ilmetoxi)-bencenosulfonil]-morfolin-3-carboxílico; Hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-2,6-dimetil-4-[4-(piridin-3-ilmetoxi)-bencenosulfonil]-morfolin-3-carboxílico; y Hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-2,6-dimetil-4-[4-(2-metil-piridin-3-ilmetoxi)-bencenosulfonil]-morfolin-3-carboxílico

Los compuestos del título se prepararon de manera similar al Ejemplo 3 excepto que se uso una cantidad apropiada del cloruro de piridilo necesario en la etapa 5. También, el ácido hidroxámico se formó directamente a partir del ácido como sigue:

Se disolvió ácido (2S,3R,6S)-2,6-dimetil-4-[4-(piridin-4-ilmetoxi)-bencenosulfonil]-morfolin-3-carboxílico (0,487 g, 1,2 mmol) en diclorometano (10 ml) y dimetilformamida (0,1 ml) y se enfrío a 0ºC. Se añadió lentamente cloruro de oxalilo (0,27 ml) y la reacción se agitó a 0ºC durante 1 hora. El disolvente se retiró en el evaporador rotatorio y el sólido en bruto se suspendió en el mínimo de tetrahidrofurano. Esta suspensión se añadió lentamente a una disolución de hidroxilamina acuosa (50%, 0,08 ml) en tetrahidrofurano (2 ml) a 0ºC. Después de agitar a 0ºC durante 1 hora, la reacción se repartió entre acetato de etilo y agua. El pH de la fase acuosa se ajustó a 8 mediante la adición de bicarbonato sódico. Las porciones orgánicas se secaron sobre sulfato sódico y el disolvente se retiró en vacío. El residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice con metanol (5%) y ácido acético (2%) en diclorometano para dar el compuesto del título como un sólido blanco.

Ejemplo 13 Hidroxiamida del ácido (3R,6S)-2,2,6-trimetil-4-[4-(2-trifluorometil-benciloxi)-bencenosulfonil]-morfolin-3-carboxílico

El compuesto del título se preparó de manera similar al Ejemplo 3 excepto que se uso una cantidad apropiada ácido (2R)-2-amino-3-hidroxi-3-metil-butírico en la etapa 1 y se usó una cantidad apropiada de cloruro de 4-(2-trifluorometil-benciloxi)-bencenosulfonilo en la etapa 5.

Ejemplo 14 Hidroxiamida del ácido (2S,3R)-2,6,6-trimetil-4-[4-(piridin-4-ilmetoxi)-bencenosulfonil]-morfolin-3-carboxílico

El ácido hidroxámico se preparó a partir de un éster de una manera similar al Ejemplo 9. El éster se obtuvo de una manera similar al Ejemplo 3 excepto que se usó una cantidad apropiada de 1-bromo-2-metilpropeno en lugar de yoduro de alilo en la etapa 2 y se usó 4-clorometil-piridina en la etapa 5. El compuesto del título se aisló por precipitación a partir de éter dietílico como su sal del ácido clorhídrico.

Ejemplo 15 Hidroxiamida del ácido 2,2,6-trimetil-4-[4-(2-metil-piridin-3-ilmetoxi)bencenosulfonil]-morfolin-3-carboxílico

El compuesto del título se preparó de manera similar al Ejemplo 12 excepto a partir de un derivado intermedio por sustitución de una cantidad apropiada de ácido (2R)-2-amino-3-hidroxi-3-metil-butírico por D-treonina en la etapa 1 del Ejemplo 3.

Ejemplos 16-21

Hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-[4-(2,5-dimetil-benciloxil-bencenosulfonil]-2,6-dimetil-morfolin-3-carboxílico; Hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-4-[4-(3,5-difluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2,6-dimetil-morfolin-3-carboxílico; Hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-4-[4-(3-metoxi-benciloxi)-bencenosulfonil]-2,6-dimetil-morfolin- carboxílico; Hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-4-[4-(5-fluoro-2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-2,6-dimetil-morfolin-3-carboxílico; Hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)4-[4-(furan-3-ilmetoxi)-bencenosulfonil]-2,6-dlmetilmorfolin-3-carboxílico; e Hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-4-[4-(2-fluoro-3-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-2,6-dimetil-morfolin-3-carboxílico

Los compuestos del título se prepararon de manera similar al Ejemplo 3 excepto que se uso una cantidad necesaria de cloruro o bromuro de arilo sustituido apropiadamente en la etapa 5.

Ejemplo 22 Hidroxiamida del ácido (2R,3R)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2,6,6-trimetil-morfolin-3-carboxílico

El compuesto del título se preparó de manera similar al Ejemplo 3 excepto que se sustituyó una cantidad apropiada de 1-bromo-2-metilpropeno en la etapa 2 y se omitieron las etapas 4 y 5.

Ejemplo 23 Hidroxiamida del ácido (3R)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-6,6-dimetil-morfolin-3-carboxílico

El compuesto del título se prepararó de manera similar al Ejemplo 3 excepto que se sustituyó una cantidad apropiada de D-serina por D-treonina en la etapa 1 y se sustituyó una cantidad apropiada de 1-bromo-2-metilpropeno en la etapa 2 y se omitieron las etapas 4 y 5.

Ejemplo 24 Hidroxiamida del ácido (3R)-6,6-dimetil-4-[4-(piridin-4-ilmetoxi)-bencenosulfonil]-morfolin-3-carboxílico

El compuesto del título se prepararó de manera similar al Ejemplo 9 excepto a partir de un derivado intermedio por sustitución de una cantidad apropiada de D-serina por D-treonina en la etapa 1 del Ejemplo 3.

Ejemplo 25 Hidroxiamida del ácido (3R)-6,6-dimetil-4-[4-(piridin-4-ilmetoxi)-bencenosulfonil]-morfolin-3-carboxílico

El compuesto del título se prepararó de manera similar al Ejemplo 3 excepto que se sustituyó una cantidad apropiada de D-serina por D-treonina en la etapa 1 y se usó una cantidad apropiada de bromuro de 2-metilbencilo en la etapa 5.

Ejemplo 26 Hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-4-(4-ciclohexilmetoxi-bencenosulfonil)-2,6-dimetil-morfolin-3-carboxílico

El compuesto del título se prepararó de manera similar al Ejemplo 3 excepto que se usó una cantidad apropiada de (bromometil)ciclohexano en la etapa 5 del Ejemplo 3.

Ejemplo 27 Hidroxiamida del ácido (3R,6S)-4-[4-(2,5-dimetil-benciloxi)-bencenosulfonil]-2,6,6-trimetil-morfolin-3-carboxílico

El compuesto del título se preparó de manera similar al Ejemplo 3 excepto que se sustituyó una cantidad apropiada de ácido (2R)-2-amino-3-hidroxi-3-metil-butírico por D-treonina en la etapa 1 y se usó bromuro de 2,5-dimetilbencilo en la etapa 5 del Ejemplo 3.

Ejemplo 28 Hidroxiamida del ácido (2S,3R,6R)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-6-metoximetil-2-metil-morfolin-3-carboxílico Éster metílico del ácido (2S,3R,6R)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-fenilsulfanil]-6-yodometil-2-metil-morfolin-3-carboxílico

Se disolvió el éster metílico del ácido (2R,3S)-2-{alil-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-amino}-3-hidroxi-butírico (1,14 g, 2,6 mmol) en tetrahidrofurano (28 ml). Se añadió secuencialmente carbonato de potasio (0,47 g, 3,43 mmol) y trifluoroacetato de mercurio (II) (1,46 g, 3,43 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante 75 minutos a temperatura ambiente y a continuación se añadió yodo (1,65 g, 6,5 mmol). Después de 1 hora, la reacción se repartió entre acetato de etilo y ácido clorhídrico acuoso (1 N). La porción orgánica se lavó con bisulfito sódico acuoso saturado y se secó sobre sulfato de magnesio. El disolvente se retiró en vacío y el residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice con acetato de etilo en hexanos al 30% para dar el compuesto del título (1,5 g,
60%).

Éster metílico del ácido (2S,3R,6R)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-fenilsulfanil]-6-metoximetil-2-metil-morfolin-3-carboxílico

Se disolvió el éster metílico del ácido (2S,3R,6R)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-fenilsulfanil]-6-yodometil-2-metil-morfolin-3-carboxílico (0,365 g, 0,65 mmol) en metanol (10 ml) y tetracloruro de carbono (10 ml) y se burbujeó una corriente constante de cloro gaseoso a través de la disolución durante 20 segundos. Después de agitar durante 5 minutos, se añadió acetato de etilo. La disolución se extrajo con bisulfito sódico y bicarbonato sódico y a continuación se secó sobre sulfato de magnesio. El disolvente se retiró en vacío y el residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice con acetato de etilo en hexanos al 30% para dar el compuesto del título (0,211 g, 69%).

Hidroxiamida del ácido (2S,3R,6R)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-6-metoximetil-2-metil-morfolin-3-carboxílico

El éster metílico del ácido (2S,3R,6R)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-fenilsulfanil]-6-metoximetil-2-metil-morfolin-3-carboxílico se transformó al ácido oxálico correspondiente de una manera similar a las etapas 6 y 7 para el Ejemplo 3.

Ejemplo 29 Hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-4-[4-(3-cloro-benciloxi)-bencenosulfonil]-6-[(etil-metil-amino)-metil)-2-metil-morfolin-3-carboxílico Éster metílico del ácido (2S,3R,6R)-4-[4-(3-cloro-benciloxi)-fenilsulfanil]-6-yodometil-2-metil-morfolin-3-carboxílico

El compuesto del título se preparó de manera similar al éster metílico del ácido (2S,3R,6R)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-fenilsulfanil]-6-yodometil-2-metil-morfolin-3-carboxílico en el Ejemplo 28.

Éster metílico del ácido (2S,3R,6S)-4-[4-(3-cloro-benciloxi)-fenilsulfanil]-6-[(etil-metil-amino)-metil]-2-metil- morfolin-3-carboxílico

Se disolvió el éster metílico del ácido (2S,3R,6R)-4-[4-(3-cloro-benciloxi)-fenilsulfanil]-6-yodometil-2-metil-morfolin-3-carboxílico (3,8 g, 6,6 mmol) en dimetilformamida (10 ml) y etilmetilamina (10 ml) y se agitó durante 12 horas a 60ºC. La reacción se repartió entre acetato de etilo y agua. La porción orgánica se secó sobre sulfato de magnesio y los disolventes se retiraron en vacío.

Hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-4-[4-(3-cloro-benciloxi)-bencenosulfonil]-6-[(etil-metil-amino)-metil]-2-metil-morfolin-3-carboxílico

Se suspendió clorhidrato de hidroxilamina (1,0 g, 14,4 mol) en metanol (8 ml). Se disolvió hidróxido de potasio (1,0 g, 17,8 mmol) en metanol (4 ml) y se añadió a la disolución de hidroxilamina. Después de que la reacción se hubo agitado durante 15 minutos, se añadió el éster metílico del ácido (2S,3R,6S)-4-[4-(3-cloro-benciloxi)-fenilsulfanil]-6-[(etil-metil-amino)-metil]-2-metil-morfolin-3-carboxílico (1,0 g, 1,96 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y a continuación el disolvente se retiró en vacío. El residuo se repartió entre acetato de etilo y ácido clorhídrico (1 N). La porción orgánica se secó sobre sulfato sódico y el disolvente se retiró en vacío. El compuesto del título (0,175 g, 17%) se aisló por cromatografía en gel de sílice con acetato de etilo en hexanos
al 80%.

Ejemplo 30 Hidroxiamida del ácido (2S,3R)-4-[4-(3-cloro-benciloxi)-bencenosulfonil]-6-metoxi-2-metil-morfolin-3-carboxílico Éster metílico del ácido 2-[[4-(3-cloro-benciloxi)-fenilsulfanil]-(3-metil-but-2-enil)-amino]-3-hidroxi-butírico

El compuesto del título se preparó de manera similar al éster metílico del ácido 2-{alil-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-amino}-3-hidroxi-butírico según la etapa 2 del Ejemplo 3.

Éster metílico del ácido 4-[4-(3-cloro-benciloxi)-fenilsulfanil]-6-metoxi-2-metil-morfolin-3-carboxílico

Se combinó el éster metílico del ácido 2-[[4-(3-cloro-benciloxi)-fenilsulfanil]-(3-metilo-but-2-enil)-amino]-3-hidroxi-butírico (1,5 g, 3,11 mmol), peryodato potásico (1,46 g, 6,8 mmol) y tetróxido de osmio (4% en agua, unas pocas gotas) en dioxano (30 ml) y agua (15 ml). Después de agitar durante la noche, la disolución se repartió entre acetato de etilo y agua. La porción orgánica se secó sobre sulfato sódico y el disolvente se retiró en vacío. El residuo y ácido toluensulfónico (catalítico) se disolvieron en metanol (100 ml) y se calentó a reflujo durante la noche. El disolvente se retiró en vacío y el residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice con acetato de etilo en hexanos para dar el compuesto del título (0,93 g, 64%).

Hidroxiamida del ácido 4-[4-(3-cloro-benciloxi)-bencenosulfonil]-6-metoxi-2-metil-morfolin-3-carboxílico

El compuesto del título se preparó por conversión del éster metílico del ácido 4-[4-(3-cloro-benciloxi)-fenilsulfanil]-6-metoxi-2-metil-morfolin-3-carboxílico directamente al ácido hidroxámico de manera similar a aquella usada para el Ejemplo 29.

Ejemplo 31 Hidroxiamida del ácido 4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-6-hidroximetil-2-metil-morfolin-3-carboxílico Éster metílico del ácido 2-{[4-(4-fluoro-benciloxi)-fenilsulfanil]-oxiranilmetil-amino}-3-hidroxi-butírico

Se disolvió el éster metílico del ácido 2-{alil-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-amino}-3-hidroxi-butírico (1,5 g, 3,43 mmol) en diclorometano (10 ml). Se añadió secuencialmente bicarbonato sódico (1,41 g, 16,7 mmol) y ácido m-cloroperoxibenzoico (0,785 g, 3,4 mmol). La reacción se agitó durante 14,5 horas a temperatura ambiente. Se añadió una porción adicional de m-cloroperoxibenzoico (0,4 g, 1,75 mmol). Después de agitar durante 4 horas se añadió éter dietílico (100 ml) y acetato de etilo (50 ml). Esta disolución se extrajo con bisulfito sódico (2 x 10 ml), bicarbonato sódico (4 x 10 ml) y salmuera (1 x 10 ml). La porción orgánica se secó sobre sulfato de magnesio y los disolventes se retiraron en vacío. El residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice (columna Biotage 40M) con acetato de etilo en hexanos al 50% para dar el compuesto del título (1,23 g, 79%).

Éster metílico del ácido 4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-fenilsulfanil]-6-hidroximetil-2-metil-morfolin-3-carboxílico

Se disolvió el éster metílico del ácido 2-{[4-(4-fluoro-benciloxi)-fenilsulfanil]-oxiranilmetil-amino}-3-hidroxi-butírico (1,15 g, 2,54 mmol) en diclorometano (20 ml) y se enfrió a 0ºC. Se añadió ácido p-toluensulfónico monohidratado (0,05 g, 0,26 mmol) y la reacción se agitó a 0ºC durante 2 horas. Se añadió bicarbonato sódico en exceso y la reacción se calentó hasta temperatura ambiente. Los sólidos se retiraron por filtración y el disolvente se retiró en vacío. El residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice (columna Biotage 40M) con acetato de etilo en diclorometano al 15% para dar los diastereómeros separados del compuesto del título (0,5 g de cada uno, 87%).

Éster metílico del ácido 6-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-fenilsulfanil]-2-metil-morfolin-3-carboxílico

Se añadió secuencialmente imidazol (0,4 g, 5,9 mmol) y cloruro de t-butildimetilsililo (0,4 g, 2,65 mmol) a diclorometano (10 ml). La disolución se agitó durante 5 minutos, tiempo durante el cual se formó un precipitado. Los sólidos se retiraron por filtración y la disolución se añadió al éster metílico del ácido 4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-fenilsulfanil]-6-hidroximetil-2-metil-morfolin-3-carboxílico (0,495 g, 1,09 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y a continuación se diluyó con éter dietílico. Esta disolución se extrajo con hidróxido sódico (1 N), ácido clorhídrico (1 N) y salmuera. La porción orgánica se secó sobre sulfato de magnesio y la porción orgánica se retiró en vacío. El residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice (columna Biotage 40S) con una mezcla de acetato de etilo y hexano para dar el compuesto del título (0,54 g, 87%).

Aliloxi-amida del ácido 6-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-fenilsulfanil]-2-metil-morfolin-3-carboxílico

El compuesto del título (0,230 g, 40%) se obtuvo a partir del éster metílico del ácido 6-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-fenilsulfanil]-2-metil-morfolin-3-carboxílico (0,54 g, 0,95 mmol) de una manera similar a aquella descrita en la etapa 6 del Ejemplo 3.

Hidroxiamida del ácido 4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-6-hidroximetil-2-metil-morfolin-3-carboxílico

El ácido hidroxámico se obtuvo a partir de la aliloxi-amida del ácido 6-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-fenilsulfanil]-2-metil-morfolin-3-carboxílico (0,23 g, 0,38 mmol) de una manera similar a aquella descrita en la etapa 7 del Ejemplo 3 y se usó sin purificación adicional. El ácido hidroxámico en bruto se disolvió en tetrahidrofurano (10 ml) y se enfrío a 0ºC. Se añadió fluoruro de tetra-n-butilamonio (1,0 mmol, 1 M en tetrahidrofurano) y la reacción se agitó a 0ºC durante 1 hora y a continuación a temperatura ambiente durante 2 horas. El tetrahidrofurano se retiró en el evaporador rotatorio y el residuo se repartió entre acetato de etilo y ácido clorhídrico (1 N). La porción orgánica se secó sobre sulfato de magnesio y el disolvente se retiró en vacío. El residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice (columna Biotage 40S) con ácido acético en acetato de etilo al 1% para dar el compuesto del título (0,068 g, 39%).

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Claims

1. Un compuesto de fórmula:

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o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que

X es oxígeno, azufre, SO, SO_{2} o NR^{7};

R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4}, R^{5} y R^{6} se seleccionan del grupo constituido por hidrógeno, hidroxilo, -CN, alquilo (C_{1}-C_{6}), alquenilo (C_{2}-C_{6}), aril(C_{6}-C_{10})alquenilo(C_{2}-C_{6}), heteroaril(C_{2}-C_{9})alquenilo(C_{2}-C_{6}), alquinilo(C_{2}-C_{6}), aril(C_{6}-C_{10})alquinilo(C_{2}-C_{6}), heteroaril(C_{2}-C_{9})alquinilo(C_{2}-C_{6}), alquilamino(C_{1}-C_{6}), alquiltio(C_{1}-C_{6}), alcoxilo(C_{1}-C_{6}), perfluoroalquilo(C_{1}-C_{6}), arilo(C_{6}-C_{10}), heteroarilo(C_{2}-C_{9}), arilamino(C_{6}-C_{10}), ariltio(C_{6}-C_{10}), ariloxilo(C_{6}-C_{10}), heteroarilamino(C_{2}-C_{9}), heteroariltio(C_{2}-C_{9}), heteroariloxilo(C_{2}-C_{9}), cicloalquilo(C_{3}-C_{6}), alquil(C_{1}-C_{6})(hidroximetileno), piperidilo, alquil(C_{1}-C_{6}) piperidilo, acilamino(C_{1}-C_{6}), aciltio(C_{1}-C_{6}), aciloxilo(C_{1}-C_{6}), alcoxi(C_{1}-C_{6})-(C=O), -CO_{2}H, alquil(C_{1}-C_{6})-NH-(C=O)- y [alquil(C_{1}-C_{6})]_{2}-N-(C=O);

en las que dicho alquilo (C_{1}-C_{6}) está opcionalmente sustituido por uno o dos grupos seleccionados entre alquiltio(C_{1}-C_{6}), alcoxilo(C_{1}-C_{6}), trifluorometilo, halo, -CN, arilo(C_{6}-C_{10}), heteroarilo(C_{2}-C_{9}), arilamino(C_{6}-C_{10}), ariltio(C_{6}-C_{10}), ariloxilo(C_{6}-C_{10}), heteroarilamino(C_{2}-C_{9}), heteroariltio(C_{2}-C_{9}), heteroariloxilo(C_{2}-C_{9}), aril(C_{6}-C_{10})arilo(C_{6}-C_{10}), cicloalquilo(C_{3}-C_{6}), hidroxilo, piperazinilo, aril(C_{6}-C_{10}) alcoxilo(C_{1}-C_{6}), heteroaril(C_{2}-C_{9})alcoxilo(C_{1}-C_{6}), acilamino(C_{1}-C_{6}), aciltio(C_{1}-C_{6}), aciloxilo(C_{1}-C_{6}), alquilsulfinilo(C_{1}-C_{6}), arilsulfinilo(C_{6}-C_{10}), alquilsulfonilo(C_{1}-C_{6}), arilsulfonilo(C_{6}-C_{10}), amino, alquilamino(C_{1}-C_{6}) o (alquil(C_{1}-C_{6}))_{2}amino;

Q es aril(C_{6}-C_{10})alcoxi(C_{1}-C_{6})arilo(C_{6}-C_{10}), aril(C_{6}-C_{10})alcoxi(C_{1}-C_{6})heteroarilo(C_{2}-C_{9}), heteroaril(C_{2}-C_{9})alcoxi(C_{1}-C_{6})arilo(C_{6}-C_{10}), heteroaril(C_{2}-C_{9})alcoxi(C_{1}-C_{6})heteroarilo(C_{2}-C_{9}), en las que cada uno de dichos grupos arilo(C_{6}-C_{10}) o heteroarilo(C_{2}-C_{9}) puede estar opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes, preferentemente de uno a tres sustituyentes por anillo, lo más preferentemente de uno a tres sustituyentes sobre el anillo terminal (es decir, el anillo más alejado del punto de unión) seleccionado independientemente del grupo constituido por halo, -CN, alquilo (C_{1}-C_{6}) opcionalmente sustituido con uno o más átomos de flúor (preferentemente de uno a tres átomos de flúor), hidroxilo, hidroxialquilo (C_{1}-C_{6}), alcoxilo (C_{1}-C_{6}) opcionalmente sustituido con uno o más átomos de flúor (preferentemente de uno a tres átomos de flúor), alcoxi(C_{1}-C_{6})alquilo(C_{1}-C_{6}), HO-(C=O)-, alquil(C_{1}-C_{6})-O-(C=O)-, HO-(C=O)-alquilo(C_{1}-C_{6}), alquil(C_{1}-C_{6})-O-(C=O)-alquilo(C_{1}-C_{6})-, alquil(C_{1}-C_{6})-(C=O)-O-, alquil(C_{1}-C_{6})-(C=O)-O-alquilo(C_{1}-C_{6})-, H(C=O)-, H(C=O)-alquilo(C_{1}-C_{6}), alquilo(C_{1}-C_{6})-(C=O)-, alquil(C_{1}-C_{6})-(C=O)-alquilo(C_{1}-C_{6})-, NO_{2}, amino, alquilamino(C_{1}-C_{6}), [alquil(C_{1}-C_{6})]_{2}amino, aminoalquilo(C_{1}-C_{6}), alquilamino(C_{1}-C_{6})- alquilo(C_{1}-C_{6}), [alquil(C_{1}-C_{6})]_{2}amino-alquilo(C_{1}-C_{6}), H_{2}N-(C=O)-, alquil(C_{1}-C_{6})-NH-(C=O)-, [alquil(C_{1}-C_{6})]_{2}-N-(C=O)-, H_{2}N-(C=O)-alquilo(C_{1}-C_{6})-, alquil(C_{1}-C_{6})-NH-(C=O)-alquilo(C_{1}-C_{6})-, [alquil(C_{1}-C_{6})]_{2}-N-(C=O)-alquilo(C_{1}-C_{6})-, H(O=C)-NH-, alquil(C_{1}-C_{6})-(C=O)-NH, alquil(C_{1}-C_{6})-(C=O)-[NH]-alquilo(C_{1}-C_{6})-, alquil(C_{1}-C_{6})-(C=O)-[N-alquil(C_{1}-C_{6})]-alquilo(C_{1}-C_{6}), alquil(C_{1}-C_{6})-S-, alquil(C_{1}-C_{6})-(S=O)-, alquil(C_{1}-C_{6})-SO_{2}-, alquil(C_{1}-C_{6})-SO_{2}-NH-, alquil(C_{1}-C_{6})-SO_{2}-[N-alquilo(C_{1}-C_{6})]-, H_{2}N-SO_{2}-, H_{2}N-SO_{2}-alquilo(C_{1}-C_{6}), alquil(C_{1}-C_{6})-NH-SO_{2}-alquilo(C_{1}-C_{6}), [alquil(C_{1}-C_{6})]_{2}-N-SO_{2}-alquilo(C_{1}-C_{6})-, CF_{3}SO_{3}-, alquil(C_{1}-C_{6})-SO_{3}-, fenilo, fenilalquilo(C_{1}-C_{6}), cicloalquilo(C_{3}-C_{10}), heterocicloalquilo(C_{2}-C_{9}) y heteroarilo(C_{2}-C_{9});

con la condición de que cuando X es SO o SO_{2}, y R^{3} y R^{4} son sustituyentes que comprenden un heteroátomo, el heteroátomo no puede estar unido al anillo;

2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que X es NR^{7}, azufre u oxígeno.

3. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que Q es aril(C_{6}-C_{10})alcoxi(C_{1}-C_{6})arilo(C_{6}-C_{10}), aril(C_{6}-C_{10})alcoxi(C_{1}-C_{6})heteroarilo(C_{2}-C_{9}), heteroaril(C_{2}-C_{9})alcoxi(C_{1}-C_{6})arilo(C_{6}-C_{10}) o heteroaril(C_{2}-C_{9})alcoxi(C_{1}-C_{6})heteroarilo(C_{2}-C_{9}) opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes, preferentemente de uno a tres sustituyentes por anillo, lo más preferentemente de uno a tres sustituyentes sobre el anillo terminal, en los que dichos sustituyentes se seleccionan entre halo, alquilo(C_{1}-C_{6}), alcoxilo(C_{1}-C_{6}) o perfluoroalquilo(C_{1}-C_{3}).

4. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que Q es aril(C_{6}-C_{10})metoxiarilo(C_{6}-C_{10}), aril(C_{6}-C_{10})metoxiheteroarilo(C_{2}-C_{9}), heteroaril(C_{2}-C_{9})metoxiarilo(C_{6}-C_{10}) o heteroaril(C_{2}-C_{9})metoxiheteroarilo(C_{2}-C_{9}) opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes, preferentemente de uno a tres sustituyentes por anillo, lo más preferentemente de uno a tres sustituyentes sobre el anillo terminal, en los que dichos sustituyentes se seleccionan entre halo, alquilo(C_{1}-C_{6}), alcoxilo(C_{1}-C_{6}) o perfluoroalquilo(C_{1}-C_{3}).

5. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que Q es aril(C_{6}-C_{10})metoxifenilo, piridilmetoxifenilo, furilmetoxifenilo, piroilmetoxifenilo, tienilmetoxifenilo, isotiazolilmetoxifenilo, imidazolilmetoxifenilo, bencimidazolilmetoxifenilo, tetrazolilmetoxifenilo, pirazinilmetoxifenilo, piramidilmetoxifenilo, quinolilmetoxifenilo, isoquinolilmetoxifenilo, benzofurilmetoxifenilo, isobenzofurilmetoxifenilo, benzotienilmetoxifenilo, pirazolilmetoxifenilo, indolilmetoxifenilo, isoindolilmetoxifenilo, purinilmetoxifenilo, carbazolilmetoxifenilo, isoxazolilmetoxifenilo, tiazolilmetoxifenilo, oxazolilmetoxifenilo, benzotiazolilmetoxifenilo, benzoxazolilmetoxifenilo.

6. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que Q es aril(C_{6}-C_{10})metoxiarilo(C_{6}) opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes, preferentemente de uno a tres sustituyentes por anillo, lo más preferentemente de uno a tres sustituyentes sobre el anillo terminal, en el que dichos sustituyentes se seleccionan entre halo, alquilo(C_{1}-C_{6}), alcoxilo(C_{1}-C_{6}) o perfluoroalquilo(C_{1}-C_{3}).

7. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que Q es aril(C_{6}-C_{10})metoxiheteroarilo(C_{2}-C_{9}) opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes, preferentemente de uno a tres sustituyentes por anillo, lo más preferentemente de uno a tres sustituyentes sobre el anillo terminal, en el que dichos sustituyentes se seleccionan entre halo, alquilo(C_{1}-C_{6}), alcoxilo(C_{1}-C_{6}) o perfluoroalquilo(C_{1}-C_{3}).

8. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que Q es heteroaril(C_{2}-C_{9})metoxiarilo(C_{6}) opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes, preferentemente de uno a tres sustituyentes por anillo, lo más preferentemente de uno a tres sustituyentes sobre el anillo terminal, en el que dichos sustituyentes se seleccionan entre halo, alquilo(C_{1}-C_{6}), alcoxilo(C_{1}-C_{6}) o perfluoroalquilo(C_{1}-C_{3}).

9. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que Q es heteroaril(C_{2}-C_{9})metoxiheteroarilo(C_{2}-C_{9})opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes, preferentemente de uno a tres sustituyentes por anillo, lo más preferentemente de uno a tres sustituyentes sobre el anillo terminal, en el que dichos sustituyentes se seleccionan entre halo, alquilo(C_{1}-C_{6}), alcoxilo(C_{1}-C_{6}) o perfluoroalquilo(C_{1}-C_{3}).

10. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{4} es hidrógeno.

11. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{2} o R^{3} son hidrógeno.

12. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que al menos uno de R^{2} o R^{3} es distinto de hidrógeno.

13. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que al menos uno de R^{1}-R^{3} es alquilo (C_{1}-C_{6}).

14. Un compuesto según la reivindicación 2, en el que al menos uno de R^{1}-R^{3} es alquilo (C_{1}-C_{6}).

15. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que al menos uno de R^{1}-R^{3} es alquilo (C_{1}-C_{6}).

16. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que al menos uno de R^{1}-R^{3} es metilo.

17. Un compuesto según la reivindicación 2, en el que al menos uno de R^{1}-R^{3} es metilo.

18. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que al menos uno de R^{1}-R^{3} es metilo.

19. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que R^{1} es alquilo (C_{1}-C_{6}).

20. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que R^{2} es alquilo (C_{1}-C_{6}).

21. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que R^{3} es alquilo (C_{1}-C_{6}).

22. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que R^{4} es alquilo (C_{1}-C_{6}).

23. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{1} y R^{4} son cada uno metilo.

24. Un compuesto según la reivindicación 2, en el que R^{1} y R^{4} son cada uno metilo.

25. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que R^{1} y R^{4} son cada uno metilo.

26. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{1} y R^{2} son cada uno alquilo (C_{1}-C_{6}).

27. Un compuesto según la reivindicación 2, en el que R^{1} y R^{2} son cada uno alquilo (C_{1}-C_{6}).

28. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que R^{1} y R^{2} son cada uno alquilo (C_{1}-C_{6}).

29. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{1} y R^{2} son cada uno metilo.

30. Un compuesto según la reivindicación 2, en el que R^{1} y R^{2} son cada uno metilo.

31. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que R^{1} y R^{2} son cada uno metilo.

32. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{1} es metilo y R^{2} es hidrógeno.

33. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{1} es hidrógeno y R^{3} es metilo.

34. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que R^{1} y R^{3} son cada uno metilo.

35. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que R^{1} y R^{4} son cada uno metilo.

36. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que R^{2} y R^{3} son cada uno metilo.

37. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que R^{2} y R^{4} son cada uno metilo.

38. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que R^{3} y R^{4} son cada uno metilo.

39. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que X es NR^{7}.

40. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que X es NR^{7}.

41. Un compuesto según la reivindicación 4, en el que X es NR^{7}.

42. Un compuesto según la reivindicación 5, en el que X es NR^{7}.

43. Un compuesto según la reivindicación 6, en el que X es NR^{7}.

44. Un compuesto según la reivindicación 13, en el que X es NR^{7}.

45. Un compuesto según la reivindicación 15, en el que X es NR^{7}.

46. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que X es nitrógeno y R^{7} es alquilo (C_{1}-C_{6}).

47. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que X es nitrógeno y R^{7} es alquilsulfonilo (C_{1}-C_{6}).

48. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que X es nitrógeno y R^{7} es arilsulfonilo (C_{1}-C_{6}).

49. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que X es nitrógeno y R^{7} es [alquil(C_{1}-C_{6})]_{2}-N-(C=O)- o alquilo(C_{1}-C_{6})-NH-(C=O)-.

50. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que X es nitrógeno y R^{7} es alquilo(C_{1}-C_{6})(C=O)-.

51. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que dicho compuesto se selecciona del grupo constituido por:

Hidroxiamida del ácido (2S,3S)-4-[4-(3,5-difluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2-metil-tiomorfolin-3-carboxílico;

hidroxiamida del ácido (2S,3S)-4-[4-(4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-2-metiltiomorfolin-3-carboxílico; hidroxiamida del ácido (2S,3R,6S)-2,6-dimetil-4-[4-(2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-morfolin-3-carboxílico;

52. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 51, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

53. Un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 51, para uso como medicamento.

54. El uso de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 51, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad seleccionada entre artritis, enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, enfisema, síndrome de insuficiencia respiratoria aguda, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad de Alzheimer, toxicidad por trasplante de órganos, caquexia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad por contacto alérgico, cáncer, ulceración tisular, restenosis, enfermedad periodontal, epidermolisis bulosa, osteoporosis, distensión de implantes articulares artificiales, ateroesclerosis, aneurisma aórtico, insuficiencia cardiaca congestiva, infarto de miocardio, accidente cerebrovascular, isquemia cerebral, traumatismo cráneoencefálico, lesión de la espina dorsal, trastornos neurodegenerativos, trastornos autoinmunitarios, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía amiloide cerebral, mejora cognitiva o nootrópica, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, angiogénesis ocular, lesión de córnea, degeneración macular, curación anormal de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento tumoral, metástasis tumoral, cicatrización córnea, escleritis, SIDA, sepsis o choque séptico.