ES2248322T3

ES2248322T3 - Esteres polisacaridos de derivados n- del acido glutamico.

Info

Publication number: ES2248322T3
Application number: ES01931536T
Authority: ES
Inventors: Giuliana Miglierini; Luca Stucchi; Alessandro Rastrelli
Original assignee: Eurand Pharmaceuticals Ltd
Current assignee: Allergan Pharmaceuticals Holdings Ireland ULC
Priority date: 2000-03-17
Filing date: 2001-03-16
Publication date: 2006-03-16
Anticipated expiration: 2021-03-16
Also published as: EP1274446A1; BR0109294A; IT1318403B1; ITMI20000559A1; DE60113398T2; MXPA02009057A; US20030158125A1; KR20020093845A; EP1274446B1; AU784655B2; JP2003526720A; ZA200208299B; AU5828601A; CA2403063A1; IL151696A0; CN1418103A; ATE304363T1; CN1203071C; ITMI20000559A0; US6844328B2

Abstract

Éster polisacárido del compuesto de fórmula (I) en la que: - R2 y R4, que son independientes entre sí, se seleccionan del grupo compuesto por: -NH2, -OH, , -OCH3, aquilo C1C5, =O, y el anillo de 6 miembros, que contiene los dos átomos de nitrógeno, es opcionalmente aromático; - X e Y se seleccionan del grupo compuesto por: -C(R5)=, -CH(R5), -NH-, -N=, donde R5 representa: -H, alquilo C1-C5, y el anillo, que comprende X e Y, es opcionalmente aromático; - Z se selecciona del grupo compuesto por: -O-, -CH(R10)-, -N(R10)-, donde R10 representa: -H, alquilo C1-C5, alquenilo C1-C5, alquinilo C1-C5, un anillo heterocíclico de 5-6 miembros con 1-3 heteroátomos seleccionados del grupo compuesto por nitrógeno, azufre y oxígeno; - Ar es 1, 4-fenilo, opcionalmente condensado con uno o varios anillos aromáticos de 5-6 miembros, opcionalmente heterocíclicos, opcionalmente sustituidos con R2 según lo descrito anteriormente; caracterizado porque únicamente los grupos hidroxi primarios, que se encuentran enlas unidades monosacáridas del polisacárido, están parcial o totalmente esterificados con el grupo y-carboxílico de los compuestos de fórmula (I).

Description

Ésteres polisacáridos de derivados N- del ácido glutámico.

La presente invención se refiere a nuevos productos, concretamente, a ésteres polisacáridos de derivados N- del ácido glutámico (N-GA). En este documento se describe su uso farmacéutico como antiproliferativos.

Técnica anterior

Se han descrito varios polisacáridos modificados en la técnica anterior. Éstos se obtuvieron por modificación química de algunos grupos presentes en la cadena polisacárida, como, por ejemplo, los grupos carboxílicos, los grupos amina, o los grupos hidroxi con la formación de ésteres, amidas, éteres. Los campos de aplicación son diversos e incluyen, por ejemplo, la alimentación, los barnices, la química analítica, cosmética y farmacia.

En el ámbito farmacéutico, los polisacáridos son considerados como compuestos apropiados para la preparación de compuestos que liberan de forma controlada el principio activo. Son de hecho unos compuestos muy bien tolerados por el organismo debido a que, como por ejemplo el ácido hialurónico y las heparinas, forman parte del mis-
mo.

Los polisacáridos utilizados para la liberación controlada de moléculas farmacéuticamente activas pueden estar mezclados con el fármaco (WO 99/02151) o unidos por enlace covalente al fármaco (US 4851521 y US 5733891), por ejemplo, mediante un enlace éster o uno amida.

Sin embargo, además de su función como portadores, algunos polisacáridos presentan ellos mismos una actividad biológica o son componentes del organismo: por ejemplo, las heparinas son anticoagulantes; el ácido hialurónico es el componente más importante del humor vítreo y del líquido sinovial y se utiliza además frecuentemente en la medicina clínica para el tratamiento de osteopatías y artropatías. El escleroglucano (Sizofiran®), que es otro polisacárido, se utiliza en el tratamiento de tumores. Otros polisacáridos sulfatados resultaron ser efectivos en el tratamiento de la artritis reumatoide, la retinitis y la psoriasis.

Se ha descrito en la literatura (Goodman & Gilman, The Pharmacological basis of Therapeutics, McGraw-Hill, 1996, pág. 1253) el uso farmacéutico de derivados N- del ácido glutámico con actividad inhibidora de la enzima dehidrofolato reductasa (DHFR). La enzima DHFR es responsable del reciclado del 7,8-dihidrofolato convirtiéndolo en la forma reducida y fisiológicamente activa de 6(R)-tetrahidro. La disponibilidad de folatos reducidos es esencial para reforzar la multiplicación de células que proliferan activamente. Se ha atribuido la disminución del conjunto intracelular de folatos reducidos al efecto citotóxico de los derivados N- del ácido glutámico que actúan como inhibidores potentes del DHFR. Estos fármacos se utilizan frecuentemente como antiproliferativos en varios tipos de patologías, como neoplasias, psoriasis y artritis reumatoide. Su uso terapéutico es, no obstante, muy limitado debido a su elevada toxicidad sistémica, siendo por tanto muy deseable poder disponer de sistemas o formulaciones más específicas que permitan la administración de dosis más pequeñas del fármaco, reduciéndose por consiguiente la toxi-
cidad.

Se han enlazado algunos de estos derivados N-GA con otras moléculas, en particular, con macromoléculas, como las de seroalbúmina, o polímeros sintéticos, gelatinas y algunos polisacáridos. Por ejemplo, se ha preparado polimetotrexatedextrano utilizando un condensante (imidazol de carbonilo) (CA 2.009.695). Este último procedimiento reactivo no permite la preparación de un producto estructuralmente bien definido debido a los distintos tipos de grupos hidroxi y carboxílicos que reaccionan aleatoriamente. La estructura de este producto no puede describirse del todo, caracterizándose por tanto la estructura únicamente por la cantidad de metotrexato que se encuentra en el material separado de la mezcla de reacción. De hecho, no se dispone de ningún dato sobre la posición de sustitución en el polisacárido. El mismo tipo de procedimiento reactivo se ha utilizado también para la preparación de otros derivados polisacáridos que permiten a su vez la preparación de polímeros sustituidos aleatoriamente (US 5.554.386). Otro intento para introducir metotrexato en un polímero, con el fin de preparar un sistema farmacológicamente activo, consiste en una reacción de conjugación entre el polisacárido dextrano y el principio activo, realizándose la reacción mediante un grupo espaciador. De todos modos, antes de dicha conjugación, se altera el dextrano con periodato, destruyéndose por tanto su estructura sacárida original formándose un polímero distinto (Dang et al., Cancer Res., 54, 1729, 1994). En algunas de las reacciones utilizadas en la técnica anterior, se teme la posibilidad de que se produzcan reacciones de entrecruzamiento indeseadas entre los grupos carboxílicos y amino del metotrexa-
to.

Sumario

Un tipo de ésteres polisacáridos de los compuestos de fórmula (I), conocidos comúnmente como N-GA (derivados N- del ácido glutámico), constituyen el objetivo de la presente invención.

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Estos compuestos N-GA presentan la fórmula general:

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en la que:

- R_{2} y R_{4} representan: -NH_{2}, -OH, -OCH_{3}, alquilo C_{1}-C_{5}, =O, y el anillo de 6 miembros, que contiene los dos átomos de nitrógeno, es opcionalmente aromático;

- X e Y representan: -C(R_{5})=, -N=, y el anillo que los contiene es opcionalmente aromático, o representan: -CH(R_{5})-, o -NH-, y el anillo que los contiene es alifático;

- R_{5} representa: -H, alquilo C_{1}-C_{5};

- Z representa: -CH(R_{10})-, -N(R_{10})-, -O-;

- R_{10} representa: -H, alquilo C_{1}-C_{5}, alquenilo C_{1}-C_{5}, alquinilo C_{1}-C_{5}, un anillo heterocíclico de 5-6 miembros con 1-3 heteroátomos seleccionados del grupo compuesto por nitrógeno, azufre y oxígeno;

- Ar representa un grupo 1,4-fenilo opcionalmente condensado con uno o varios anillos aromáticos de 5-6 miembros, posiblemente heterocíclicos y posiblemente sustituidos con R_{2}.

Los polisacáridos utilizados para la preparación de los ésteres polisacáridos se obtienen a partir de fuentes naturales, estando únicamente los grupos hidroxi primarios, que se encuentran en las unidades monosacáridas, total o parcialmente esterificados con el grupo \gamma-carboxílico de los compuestos de fórmula (I).

Los productos de la presente invención pueden utilizarse en el ámbito farmacéutico como inhibidores de la proliferación celular. Son, por consiguiente, útiles para la preparación de medicamentos para el tratamiento de enfermedades neoplásicas, inflamatorias o autoinmunitarias.

La presente invención comprende además nuevas composiciones farmacéuticas, que contienen dichos ésteres polisacáridos como componentes activos en combinación con solventes y/o excipientes farmacéuticamente aceptables, y el uso de dichas composiciones en el tratamiento y la prevención de enfermedades caracterizadas por hiperproliferación celular.

Descripción detallada de la invención

El objetivo de la presente invención se refiere a un tipo de ésteres polisacáridos de los compuestos de fórmula (I) comúnmente conocidos como N-GA (derivados N- del ácido glutámico).

Estos compuestos N-GA presentan la siguiente fórmula general:

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2

en la que:

- R_{2} y R_{4} representan: -NH_{2}, -OH, -OCH_{3}, alquilo C_{1}-C_{5}, =O, y el anillo de 6 miembros, al que están unidos R2 y R4, es opcionalmente aromático;

- X e Y se seleccionan del grupo compuesto por: -C(R_{5})=, -CH(R_{5})-, -NH-, -N=,

donde R_{5} representa: -H, alquilo C_{1}-C_{5} y el anillo que incluye X e Y es opcionalmente aromático;

- R_{5} representa: -H, alquilo C_{1}-C_{5};

- Z representa: -CH(R_{10})-, -N(R_{10})-, -O-;

- R_{10} representa: -H, alquilo C_{1}-C_{5}, alquenilo C_{1}-C_{5}, alquinilo C_{1}-C_{5}, anillo heterocíclico de 5-6 miembros con 1-3 heteroátomos seleccionados del grupo compuesto por nitrógeno, azufre y oxígeno;

- Ar representa: 1,4-fenilo condensado opcionalmente con uno o varios anillos aromáticos de 5-6 miembros, pudiendo ser los anillos opcionalmente heterocíclicos y estar opcionalmente sustituidos con R_{2}.

Según sean los anillos aromáticos o no, pueden darse en la fórmula (I) las siguientes situaciones:

1) si el anillo de 6 miembros, que contiene los dos átomos de nitrógeno, es aromático, entonces los dos átomos de nitrógeno son -N= y los átomos de carbono sustituidos por R_{2} y R_{4} son respectivamente: -C(R_{2})= y -C(R_{4})=, y R_{2} y R_{4} son distintos de =O; además, los átomos unidos a X e Y e comunes a los dos anillos son, respectivamente: -C(X)= y -C(Y)=;

2) si el anillo de 6 miembros, que contiene los dos átomos de nitrógeno, no es aromático, entonces los dos átomos de nitrógeno son de la forma -NH-, y los átomos de carbono sustituidos por R_{2} y R_{4} son respectivamente: -CH(R_{2})- y -CH(R_{4})-, o si R_{2} y/o R_{4} son =O, el átomo de carbono correspondiente no está sustituido por H y: a) los átomos de carbono unidos a X e Y son: -CH(X)- y -CH(Y)-, cuando el anillo, que contiene X e Y, no es aromático; o b) dichos átomos son -C(X)= y -C(Y)=, cuando el anillo, que contiene X e Y, es aromático;

3) si el anillo, que contiene X e Y, es aromático, entonces X e Y son: -C(R_{5})=, -N=, y los átomos de carbono unidos a X e Y y comunes a los dos anillos son -C(X)= y -C(Y)=, y el átomo de carbono unido a X y a -CH_{2}-Z- no está sustituido por -H, y el átomo de carbono restante, que está unido a Y, es -CH=;

4) si el anillo, que contiene X e Y, no es aromático, entonces X e Y son: -CH(R_{5})-, -NH-, y: a) los átomos de carbono unidos a X e Y (y que pertenecen también al anillo que contiene N) son -C(X)= y -C(Y)= cuando dicho anillo que contiene dos N es aromático, o b) dichos átomos son -CH(X)= y -CH(Y)= cuando dicho anillo que contiene N no es aromático, y el átomo de carbono unido a X y a -CH_{2}-Z- está sustituido por -H, y el átomo de carbono restante, que está unido a Y, es -CH_{2}-.

En los ésteres polisacáridos según la presente invención, únicamente los grupos hidroxi primarios del polisacando están parcial o totalmente esterificados con el grupo \gamma-carboxílico de los compuestos de fórmula (I). El grupo \gamma-carboxílico de N-GA es el que está directamente unido a -(CH_{2})_{2}-.

Según una primera forma de realización preferida de la presente invención, cuando R_{2} y R_{4} son -NH_{2} u -OH, y R_{5}, si es que está presente, representa: -H, -CH_{3}, el anillo de 6 miembros, que contiene los dos átomos de nitrógeno (-N=), es aromático; Z se selecciona del grupo compuesto por: -CH(R_{10})-, -N(R_{10})-, donde R_{10} representa: -H, alquilo C_{1}-C_{5}, alquenilo C_{1}-C_{5}, alquinilo C_{1}-C_{5}.

En una segunda forma de realización preferida, cuando R_{2} es =O y R_{4} es -NH_{2}, el anillo de 6 miembros, que contiene los dos átomos de nitrógeno, no es aromático; X e Y son átomos de nitrógeno (-N=) y el anillo que los contiene es aromático; Z es -N(R_{10})-, donde R_{10} representa: -H o -CH_{3}; Ar es 1,4 fenilo.

En una tercera forma de realización preferida, cuando R_{2} y R_{4} son -NH_{2}, el anillo de 6 miembros, que contiene los dos átomos de nitrógeno (-N=), es aromático; X e Y son átomos de nitrógeno (-N=) y el anillo que los contiene es aromático; además, Z es -N(R_{10})-, donde R_{10} es -CH_{3} o -H y Ar es 1,4 fenilo.

En una cuarta forma de realización preferida, cuando R_{2} y R_{4} son -NH_{2}, el anillo de 6 miembros, que contiene los dos átomos de nitrógeno (-N=), es aromático; X e Y son átomos de nitrógeno (-N=) y el anillo que los contiene es aromático, Z es -CH(C_{2}H_{5})- y Ar es 1,4 fenilo. La esterificación entre los compuestos de fórmula (I) y el polisacárido se produce entre los grupos hidroxi primarios de las unidades monosacáridas del polisacárido y los grupos \gamma-carboxílicos del compuesto de fórmula (I) (N-GA).

El grado de sustitución de estos ésteres polisacáridos es mayor que 0 y como máximo igual 1, y está preferentemente comprendido entre 0,005 y 1. El término "grado de sustitución" (GS) indica el número de moles de compuestos de fórmula (I) (N-GA) por número de moles de unidades monosacáridas que contienen un grupo hidroxi primario. Un grado de sustitución igual a 1 representa un producto que tiene todos los grupos hidroxi primarios esterificados con N-GA.

Los polisacáridos utilizados en la presente invención son aniónicos o neutrales, conteniendo por lo menos algunas de sus unidades monosacáridas grupos hidroxi primarios.

Los polisacáridos se aíslan de distintas fuentes: animales, humanos, plantas, microorganismos, y su peso molecular natural promedio en peso (pm) está comprendido entre 1 x 10^{3} y 2 x 10^{6}.

Los polisacáridos presentan una estructura lineal o ramificada, y están compuestos de unidades monosacáridas como: D-glucosa, D-xilosa, D-arabinosa, D- y L-manosa, D-galactosa, L-fucosa, D-fructosa, L-ramnosa, ácido D-glucurónico, ácido D-manurónico, ácido L-gulurónico, ácido L-idurónico, ácido D-galacturónico, N-acetil-D-glucosamina, N-acetil-D-galactosamina, 3,6-anhidro-D-galactosa, N-acetil-D-galactosamina, 3,6-anhidro-D-galactosa, 3,6-anhidro-L-galactosa. Estos monosacáridos pueden comprender opcionalmente grupos sulfato o acetilo.

La cadena polisacárida principal presenta una estructura \beta-(1\rightarrow3)- o \beta-(1\rightarrow2)- o \beta-(1\rightarrow4)-D-glicosídica o \alpha-(1\rightarrow3)-, \alpha-(1\rightarrow4)-, \alpha-(1\rightarrow6)-glicosídica; siendo la configuración \beta la preferida. Las cadenas laterales constan preferentemente de unidades D-glicosil unidas mediante enlaces \beta-(1\rightarrow2), \beta-(1\rightarrow3)-, \beta-(1\rightarrow4), \beta-(1\rightarrow6), o \alpha-(1\rightarrow4), \alpha-(1\rightarrow6)-, o, con más preferencia, mediante enlaces \beta-(1\rightarrow6).

Cuando el polisacárido es neutro, éste consiste preferentemente en un glucano (un polisacárido de glucosa) aislado de algas, hongos, plantas, bacterias o levadura. Los polisacáridos neutros preferidos pertenecen a la clase de los \beta-(1\rightarrow3)-D-glucanos (polisacáridos de \beta-(1\rightarrow3)-D-glucosa) y son lineales o ramificados. Ejemplos preferidos de glucanos, que pueden utilizarse en la presente invención, son: escleroglucano, lentinano, chizofilano, pachimarano, curdlano, laminarano, pululano. Las algas, levadura y hongos producen dichos polisacáridos en grandes cantidades. El escleroglucano es de todos ellos el más preferido. El escleroglucano es un \beta-(1\rightarrow3)-D-glucano con una cadena lateral compuesta por una unidad de \beta-(1\rightarrow6)-D-glucosa junto a cada tres glucosas de la cadena principal. Este polisacárido se extrae principalmente de hongos, como los sclerotium glucanicum o s. rolfsii. La fermentación micótica es otra forma útil para producirlos.

Cuando el polisacárido es aniónico, se utilizan polisacáridos carboxilados, como el ácido hialurónico o sus sales (unidad dimérica compuesta de N-acetil-D-glucosamina y ácido D-glucurónico).

La pectina es otro ejemplo de polisacárido aniónico. La pectina es un polisacárido compuesto de D-galacturónico y D-galactosa, en el que los grupos carboxílicos pueden encontrarse parcialmente esterificados con grupos metilo. Otra clase de polisacáridos aniónicos utilizados en los ésteres de la presente invención consisten en polisacáridos sulfatados, como, por ejemplo, heparinas, sulfato de condroitina o sulfato de dermatano. Otros ejemplos de polisacáridos sulfatados, que son útiles para la preparación de los ésteres de la presente invención, se aíslan de algas de las especies grateloupia dorifora o g. filicina tal como se describe en el documento WO 98/23648. También pueden utilizarse provechosamente otros polisacáridos sulfatados que se aíslan de distintas algas pertenecientes a las familias grateloupiaceae o codiaceae o de otros microorganismos.

En el caso de los polisacáridos aniónicos, los ésteres de la presente invención se salifican opcionalmente con metales alcalinos (preferentemente Na y K), metales alcalinotérreos (preferentemente Ca y Mg), metales de transición (preferentemente Cu, Zn, Ag, Au, Co). Los polisacáridos derivatizados, como los obtenidos por salificación del compuesto de la presente invención, se obtienen mediante procedimientos bien conocidos por los expertos en la materia.

Los grupos hidroxi, que puedan encontrarse libres en las unidades monosacáridas de los ésteres polisacáridos de la presente invención, pueden modificarse opcional y adicionalmente mediante la introducción de un o varios sustituyentes seleccionados del grupo compuesto por: alquilos inferiores C_{1}-C_{6}, -COOH, NH_{2}, -NH-COCH_{3}, -SO_{3}H,
-OPO_{3}H_{2}, -COO-(CH_{2})_{n}-COOH, -COOR, -COR, -OR, -O-(CH_{2})_{n}-OCOR, donde n=1-4 y R es un alquilo C_{1}-C_{10}. Estas sustituciones pueden realizarse fácilmente utilizando procedimientos bien conocidos en la técnica y escogidos, por ejemplo, con el fin de modificar el carácter hidrofílico de los ésteres polisacáridos modulando su solubilidad.

Los ésteres polisacáridos de la presente invención presentan características químicas peculiares, consistiendo éstas en la presencia de una regioselectividad doble y en el mantenimiento de la estructura polisacárida natural. Además, no hay ningún brazo espaciador o grupo químico entre el N-GA y el polisacárido.

En lo que se refiere a la regioselectividad doble, el término "doble" hace referencia a una selectividad que actúa tanto respecto al polisacárido como respecto al N-GA. El derivado resultante es por consiguiente único. De hecho, de entre los distintos grupos hidroxi que se encuentran en el polisacárido, sólo se esterifican con N-GA los grupos hidroxi primarios de las unidades monosacáridas. En cuanto a la selectividad con respecto a N-GA, si bien esta molécula contiene dos grupos carboxílicos reactivos, que presentan una reactividad química bastante similar, los derivados de la presente invención se refieren a los productos en cuya reacción está implicado únicamente un ácido carboxílico concreto, en particular, el ácido \gamma-carboxílico, como confirman, por ejemplo, los resultados obtenidos mediante espectroscopia de RMN. Por consiguiente, los derivados de la presente invención presentan una estructura tridimensional que es muy regular y que está muy bien definida. Esta característica proporciona, a nivel farmacológico, una ventaja indudable sobre los derivados sustituidos aleatoriamente de la técnica anterior. De hecho, la sustitución aleatoria de los posibles grupos hidroxi libres, ya sea primarios o secundarios, proporciona unos productos con actividad variable en función del tipo de sustitución.

Además, a diferencia de los derivados macromoleculares de N-GA de la técnica anterior, los polisacáridos de los ésteres de la presente invención mantienen su estructura química natural de origen. El polisacárido inicial se modifica en la presente invención en el sentido de que se introducen nuevos grupos en las unidades monosacáridas, pero la identidad estructural de la unidad monosacárida no sufre ninguna modificación. Se conserva por tanto la integridad de los polisacáridos con la ventaja de que se producen únicamente metabolitos biocompatibles conocidos (polisacáridos naturales como el glucano o el hialuronano) tras la hidrólisis in vivo del enlace éster. Según otra forma de realización, la presente invención está relacionada con el procedimiento para la preparación de ésteres polisacáridos de
N-GA.

El procedimiento de esterificación de los compuestos de fórmula (I) con los polisacáridos se produce por reacción regioselectiva de los grupos hidroxi primarios activados de las unidades monosacáridas del polisacárido con el grupo \gamma-carboxilo de N-GA. Escogiendo cantidades apropiadas de reactivos, se obtienen ésteres polisacáridos con distintos grados de sustitución. El procedimiento comprende las siguientes etapas:

a) activación por halogenación de los grupos hidroxi primarios de las unidades monosacáridas del polisacárido con obtención de polisacáridos halogenados regioselectivos;

b) formación de enlaces éster entre los polisacáridos halogenados de la etapa a) y los grupos carboxilo de N-GA por desplazamiento de los átomos de halógeno.

La etapa a) se efectúa suspendiendo el polisacárido en un solvente orgánico apropiado mientras se agita durante 1-5 horas a 25-100ºC, realizándose seguidamente la activación de los grupos hidroxi primarios en presencia de un haluro de alquilo o arilo disuelto en un solvente orgánico a una temperatura comprendida entre -20ºC y 70ºC mientras se agita durante 1-18 horas; haluros apropiados son el bromuro de metanosulfonilo, bromuro de p-toluenosulfonilo, cloruro de metanosulfonilo, cloruro de p-toluenosulfonilo; solventes apropiados son la dimetilformamida, el dimetilsulfóxido, la N-metilpirolidona. Esta mezcla de reacción puede alcalinizarse opcionalmente hasta alcanzar un pH comprendido entre 9 y 11. Al final de la halogenación, se neutraliza la mezcla y se recupera el polisacárido halogenado utilizando técnicas bien conocidas como la precipitación, el secado y la liofilización. Cuando el polisacárido es aniónico, puede utilizarse en su forma salificada o libre, preferentemente en la forma salificada.

La etapa b) se realiza suspendiendo el polisacárido halogenado obtenido en la etapa a) en un solvente orgánico o en una mezcla de éstos, agregando seguidamente N-GA en el mismo solvente aprótico orgánico de la mezcla de los mismos, en presencia de un agente básico. La reacción se realiza a temperatura ambiente y con agitación durante 0,5-3 días.

Solventes apropiados son la dimetilformamida, el dimetilsulfóxido, y la N-metilpirolidona. Al final de la reacción, se recupera el éster polisacárido de derivados N- del ácido glutámico utilizando técnicas bien conocidas como la precipitación, el secado y la liofilización.

Detalles adicionales sobre la halogenación de los polisacáridos (etapa a) del procedimiento de la presente invención pueden encontrarse en el documento WO 99/18133, pudiéndose aplicar las condiciones descritas en el presente documento tanto a los polisacáridos aniónicos como a los neutros.

También pueden emplearse otras reacciones de esterificación de polisacáridos con los compuestos de fórmula (I) que permiten la regioselectividad doble, tales como las reacciones que comprenden protección y desprotección de los grupos químicos específicos en los que se produce la derivatización selectiva.

Los ésteres de la presente invención inhiben la hiperproliferación celular y presentan una toxicidad sistémica sorprendentemente baja.

En particular, los productos de la presente invención son activos en el tratamiento de todos aquellos trastornos y enfermedades que se caracterizan por la hiperproliferación celular, tales como las enfermedades inflamatorias, autoinmunitarias o neoplásicas, y, en particular, las enfermedades inflamatorias susceptibles de degeneración neoplásica, como las enfermedades inflamatorias del intestino, p. ej., diverticulitis, la enfermedad de Crohn, inflamación del colon, colitis ulcerosa, según lo descrito en el artículo de Levin et al. (J. Cell. Biochem. Suppl., 1992, 16G:47-50). Los ésteres polisacáridos de la presente invención se utilizan también en el tratamiento de la proliferación de células sinoviales que lleva a la degeneración del cartílago articular, de huesos o tendones, según lo descrito en el artículo de Echanet et al. (J. Immunol., 1993, 151(9) 4908-4917). Dicha degeneración se da frecuentemente en enfermedades articulares, como, por ejemplo, la artritis reumatoide, la artritis juvenil y la artropatía psoriásica. Los compuestos según la presente invención se utilizan también en enfermedades cutáneas caracterizadas por una proliferación anormal de células e incluso en el control de proliferaciones celulares secundarias, como, por ejemplo, en la inserción quirúrgica de dispositivos protésicos (por ejemplo, endoprótesis cardiovasculares, u otros dispositivos auxiliares), o en enfermedades vasculares o ataques asmáticos, infartos de miocardio o hipertensión pulmo-
nar.

En lo que respecta a las enfermedades antineoplásicas, el producto de la presente invención puede resultar útil en el tratamiento de varios tipos de tumores en humanos, como, por ejemplo, carcinomas ováricos, leucemia linfoblástica, linfomas, coriocarcinomas, cáncer de mama, carcinomas escamosos, osteosarcomas.

En otra forma de realización, la presente invención proporciona unas composiciones farmacéuticas que contienen los derivados de éster de la presente invención en combinación con excipientes y/o diluyentes farmacéuticamente apropiados. En dichas composiciones, los ésteres polisacáridos de la presente invención pueden comprender opcionalmente otro fármaco conocido con actividad antiproliferativa.

Las composiciones farmacéuticas según la presente invención son apropiadas para la administración parenteral, oral o tópica. Los modos preferidos de administración parenteral son la vía intravenosa, intramuscular, intrarticular, y subcutánea. Cuando su formulación es líquida, las composiciones pueden presentar la forma de una solución o suspensión en un medio acuoso o no acuoso. Las composiciones pueden formularse también alternativamente en una forma sólida, en cuyo caso el producto liofilizado o secado se disuelve o suspende mediante la adición de un medio líquido apropiado justo antes de la administración. Las composiciones farmacéuticas en forma sólida o semisólida consisten en insertos, geles, cremas, gránulos, polvos, comprimidos, cápsulas, píldoras o formas microencapsuladas. Se pueden elaborar otros tipos de preparación utilizando técnicas bien conocidas por cualquier experto en la materia.

Las dosis de los derivados de éster según la presente invención pueden variar en función del tipo y de la gravedad de la enfermedad y en función de la edad, el peso y el estado general del paciente.

Parte experimental Ejemplo 1 Procedimientos para determinar el peso molecular promedio en peso (Mw)

Se analizó mediante HP-SEC (cromatografía de alta resolución por exclusión de tamaño) el peso molecular de los reactivos polisacáridos. Las condiciones de análisis eran:

Cromatógrafo: HPLC Jasco PU-980 con inyector de reodina 9125.

Columna: TSK Pwxl G6000+G5000+G3000 (TosoHaas) 300 mm x 7,8 mm ID, 13, 10, 6 \mum tamaño de partículas; temperatura 40ºC.

Fase móvil: NaCl 0,15 M.

Flujo: 0,8 ml/min.

Detector: LALLS CMX-100 (TSP Chromatix), Po = 150 mV; índice de refracción diferencial 410 (Waters), sensibilidad 128x; temperatura 32ºC.

Volumen inyectado: 100 \mul.

Se solubilizaron las muestras a analizar en 0,15 M de NaCl a una concentración de aprox. 1,0 mg/ml y se dejaron en agitación durante 12 horas. A continuación, se filtraron las soluciones con un filtro de porosidad de 0,45 \mum (Milipore) y se inyectaron finalmente en el cromatógrafo. El análisis permite medir el Mw (peso molecular promedio en peso), el Mn (peso molecular promedio en número), la Pl (polidispersidad). La concentración de las soluciones de las muestras poliméricas se controló por medio de la integral del índice de refracción.

Ejemplo 2 Preparación del escleroglucano halogenado

Se calentaron 160 ml de DMF anhidro a 80ºC y se agitó durante 1 hora bajo atmósfera de nitrógeno. Se agregó 1 g de escleroglucano, que presentaba un peso molecular promediado en peso de 60000 (determinado tal como se describe en el ej. 1), y se mezcló el sistema durante tres horas. Se enfrió la solución a la temperatura ambiente. A continuación, se agregaron 9,8 g de bromuro de metanosulfonilo a 0ºC a la solución. La mezcla de la reacción se mantuvo bajo agitación durante otros 20 minutos y se calentó seguidamente a 80ºC durante 16 horas. Se enfrió la mezcla a la temperatura ambiente y se detuvo la reacción agregando 30 ml de agua Milli-Q. La mezcla se neutralizó con NaOH 3N, se concentró seguidamente a presión reducida y se vertió finalmente en 800 ml de acetona. Se recogió el producto por filtración, se lavó con acetona, se suspendió en agua destilada y se dializó. Se filtró la mezcla y se secó el material sólido en un horno al vacío a temperatura ambiente. Peso del material sólido: 1 g.

Se analizó el producto mediante espectroscopia de ^{13}C RMN (DEPT) en DMSO-d_{6}/TFA a 50ºC. La señal de CH_{2}-O (C6) del polisacárido involucrado en la halogenación se produce a 34,5 ppm, mientras que el mismo grupo del polisacárido sin derivatizar proporciona una señal a 61 ppm. La variación en el desplazamiento químico constituye una prue-
ba de que se ha producido la reacción de halogenación en los grupos hidroxi primarios de los residuos de glucosa.

Ejemplo 3 Esterificación del escleroglucano con el compuesto MT

Se esterificó con el escleroglucano halogenado el compuesto MT de fórmula (I) que llevaba los siguientes sustituyentes: R_{2} y R_{4}: -NH_{2}, el anillo de 6 miembros, que contenía los dos átomos de nitrógeno, era aromático; X e Y eran -N= y el anillo que los contenía era aromático; Z era -N(CH_{3})-; Ar era 1,4-fenilo.

Se disolvieron 150 mg de escleroglucano halogenado, obtenido según el ejemplo 2, en 15 ml de DMSO a 80ºC. Transcurridas 3 horas, se enfrió la solución a la temperatura ambiente y se agregaron 512 mg de MT disueltos en 10 ml de DMSO. La mezcla de la reacción se mantuvo bajo agitación, durante 48 horas, a la temperatura ambiente y protegida de la luz, en presencia de un agente básico y bajo atmósfera de nitrógeno. A continuación, se precipitó el producto en 250 ml de acetona, se recogió por filtración, se lavó con acetona, se suspendió en agua destilada, se neutralizó con 0,2 N HCl, y se volvió a precipitar con acetona. Se secó el material sólido en un horno al vacío a temperatura ambiente. Peso del material sólido: 80 mg.

Análisis del producto: espectroscopia FT-IR (Perkin-Elmer mod. 1750): banda en 1730 cm^{-1} (pastillas de KBr) típica del enlace éster.

Espectroscopia de ^{1}H RMN (RMN Varian Inova 500 - 500 MHz): los experimentos de difusión con productos disueltos en DMSO-d_{6}/TFA a 23ºC evidenciaron la presencia de MT unido por enlace covalente al polisacárido. Se analizó el producto mediante espectroscopia de ^{1}H RMN en DMSO-d_{6}/TFA a 50ºC. El análisis del espectro evidencia la variación de las señales debidas al grupo \gamma-metileno de MT: los protones no son equivalentes y se desdoblan en dos multipletes (2,35 y 2,45 ppm), mientras que el grupo correspondiente del MT inicial (el MT no enlazado al polisacárido) se caracterizaba por una señal con forma de triplete. La no equivalencia de los protones \gamma, que se debe a la esterificación del ácido carboxílico, queda confirmada por el espectro heterobinuclear ^{1}H-^{13}C HSQC (señal de ^{13}C a 32 ppm).

Ejemplo 4 Preparación del escleroglucano halogenado

Se suspendieron 300 mg de escleroglucano, que presentaba un peso molecular promedio en peso de 995000 (determinado tal como se describe en el ejemplo 1), en 40 ml de DMF anhidro a 80ºC y se mantuvo la mezcla bajo agitación y atmósfera de nitrógeno durante 1 hora. Se enfrió la mezcla a la temperatura ambiente y se agregaron seguidamente 2,9 g de bromuro de metanosulfonilo a 0ºC. La mezcla de la reacción se mantuvo bajo agitación durante otros 30 minutos y, a continuación, se calentó a 80ºC durante 16 horas. Se enfrió la mezcla hasta alcanzar la temperatura ambiente y se detuvo la reacción agregando 8 ml de agua Milli-Q. Se neutralizó la mezcla con NaOH 0,1 N, se concentró a presión reducida, y se vertió en 200 ml de acetona. Se recogió el producto por filtración, se lavó con acetona, se suspendió en agua destilada, y se dializó seguidamente contra agua destilada, y, a continuación, se liofilizó. Peso del material sólido: 290 mg.

Se analizó el producto mediante espectroscopia de ^{13}C RMN, demostrándose que se había producido la reacción de halogenación en los grupos hidroxi primarios tal como se describe en el ejemplo 2.

Ejemplo 5 Esterificación del escleroglucano con MT

Se suspendieron 90 mg de escleroglucano halogenado, que se había obtenido según el ejemplo 4, en 20 ml de DMSO a 80ºC. Transcurridas 4 horas, se enfrió la mezcla a la temperatura ambiente y se agregaron 293 mg de MT disueltos en 20 ml de DMSO. La mezcla de la reacción se mantuvo bajo agitación, durante 48 horas, a la temperatura ambiente y protegida de la luz, en presencia de un agente básico y bajo atmósfera de nitrógeno. A continuación, se vertió la mezcla en 250 ml de acetona. Se recogió el producto por filtración, se lavó a fondo con MeOH, se filtró y, finalmente, se secó en un horno al vacío a temperatura ambiente. Peso del material sólido: 90 mg.

Se analizó el producto mediante espectroscopia de ^{1}H RMN en DMSO-d_{6}/TFA, demostrándose la presencia de MT unido por enlace covalente al polisacárido según lo descrito en el ejemplo 3.

Ejemplo 6 Preparación de escleroglucano halogenado

Se suspendieron 600 mg de escleroglucano, que presentaba un peso molecular promedio en peso de 140000 (determinado tal como se describe en el ej. 1), en 40 ml de DMF anhidro a 80ºC, manteniendo la mezcla bajo agitación y bajo atmósfera de nitrógeno durante 1 hora. Se enfrió la mezcla a la temperatura ambiente y se agregaron seguidamente 5,9 g de bromuro de metanosulfonilo a 0ºC. La mezcla de la reacción se mantuvo bajo agitación durante 30 minutos y, a continuación, se calentó a 80ºC durante 16 horas. Se enfrió la mezcla a temperatura ambiente y se detuvo la reacción agregando 8 ml de agua Milli-Q. Se neutralizó la mezcla con NaOH 0,1 N, se concentró a presión reducida, y se precipitó en 200 ml de acetona. Se recogió el producto por filtración, se lavó con acetona, se suspendió en agua destilada, y se dializó seguidamente contra agua destilada, y, a continuación, se procedió a liofilizarlo. Peso: 710 mg.

Se analizó el producto mediante espectroscopia de ^{13}C RMN, demostrándose que se había producido la reacción de halogenación en los grupos hidroxi primarios tal como se observó con los compuestos descritos en el ejemplo 2.

Ejemplo 7 Esterificación del escleroglucano con MT

Se suspendieron 500 mg del escleroglucano halogenado, que se había obtenido en el ejemplo 6, en 110 ml de DMSO a 80ºC. Transcurridas 4 horas, se enfrió la mezcla a la temperatura ambiente y se agregaron 1,63 g de MT disueltos en 33 ml de DMSO. La mezcla de la reacción se mantuvo bajo agitación, durante 48 horas, a la temperatura ambiente y protegida de la luz, en presencia de un agente básico y bajo atmósfera de nitrógeno. A continuación, se precipitó el producto en 250 ml de acetona, se recogió por filtración, se lavó con acetona, se suspendió en agua destilada y se neutralizó con 0,2N HCl, y se volvió a precipitar con acetona. Peso del producto (RG4900): 470 mg.

Se analizó el producto mediante espectroscopia de ^{1}H RMN en DMSO-d_{6}/TFA, demostrándose la presencia de MT unido por enlace covalente al polisacárido tal como se describe en el ejemplo 3.

Ejemplo 8 Preparación de hialuronano halogenado

Se suspendió 1 g de sal de tetrabutilamonio del ácido hialurónico, que presentaba un peso molecular promedio en peso de 120000 (determinado tal como se describe en el ej. 1), en 50 ml de DMF anhidro a 80ºC, manteniendo el sistema bajo agitación y bajo atmósfera de nitrógeno durante aprox. 1 hora. Se enfrió la mezcla hasta alcanzar la temperatura ambiente y se agregaron seguidamente 1,28 g de bromuro de metanosulfonilo a 0ºC. La mezcla de la reacción se mantuvo bajo agitación durante otros 30 minutos y, a continuación, se calentó a 80ºC durante 16 horas. Se enfrió la mezcla a temperatura ambiente y se detuvo la reacción agregando aprox. 10 ml de agua Milli-Q. Se neutralizó la mezcla con NaOH 0,1 N, se concentró a presión reducida, y se vertió en 200 ml de acetona.

Se recogió el producto por filtración, se lavó con acetona, se suspendió en agua destilada y, a continuación, se dializó contra agua destilada y se procedió a liofilizarlo. Peso del material sólido: 480 mg.

Se analizó el producto mediante espectroscopia de ^{13}C RMN (DEPT) en DMSO-d_{6}/TFA a 50ºC. La señal de CH_{2}-O (C6) del polisacárido involucrado en la halogenación se produce a 34,5 ppm, mientras que el mismo grupo del polisacárido sin derivatizar proporciona una señal a 61 ppm. La variación en el desplazamiento químico constituye una prueba de que se ha producido la reacción de halogenación en los grupos hidroxi primarios de los residuos de glucosa.

Ejemplo 9 Esterificación del hialuronano con MT

Se suspendieron 50 mg del hialuronano, que se había obtenido según el ejemplo 8, en 5 ml de DMSO a 80ºC. Transcurridas una 2-3 horas, se enfrió la mezcla a la temperatura ambiente y se agregaron 59 mg de MT disueltos en 2 ml de DMSO. La mezcla de la reacción se mantuvo bajo agitación, durante 48 horas, a la temperatura ambiente y protegida de la luz, en presencia de un agente básico y bajo atmósfera de nitrógeno. A continuación, se vertió la mezcla en 50 ml de acetona. Se recogió el producto por filtración, se lavó a fondo con MeOH, se filtró y, finalmente, se secó en un horno al vacío y a temperatura ambiente. Peso del material sólido: 70 mg.

Se analizó el producto mediante espectroscopia de ^{1}H RMN en DMSO-d_{6}/TFA, demostrándose la presencia de MT unido por enlace covalente al polisacárido.

Ejemplo 10 Efecto del compuesto de la presente invención sobre la actividad del dehidrofolato reductasa

Se agregaron reactivos y muestras de ensayo al volumen requerido de agua destilada en cubetas desechables de 3 ml siguiendo el orden siguiente: H_{2}O (0,1-0 ml), solución tampón de Na-acetato 1,5 M (1 ml), KCl 1,8 M (1 ml), NADPH 3 mM (0,15 ml), solución de prueba en PBS (0-0,1 ml), dehidrofolato reductasa (DHFR) (aprox. 0,01 U\mul) (5 \mul). Todos los reactivos se adquirieron de la empresa Sigma. El DHFR se introdujo, se mezcló y se incubó a 30ºC durante 2 min. Se inició la reacción agregando ácido dihidrofólico (3 mM, 0,15 ml), y se realizó un seguimiento temporal de la disminución de la absorbancia a 340 nm. Las soluciones de prueba contenían: a) MT (definido en el ejemplo 3) 2,2 x 10^{-5} M, b) el compuesto de la presente invención, obtenido según el ejemplo 7 (RG4900), en la cantidad correspondiente a MT 2 x 10^{-5} M equivalente.

Se incluyó una reacción de control que comprendía 0,1 ml de PBS como solución de prueba.

La concentración de MT de 2,2 x 10^{-5} M, que se utilizó en el ensayo, inhibió completamente la actividad del dehidrofolato dehidrogenasa. La concentración equimolar, referida a MT, del compuesto RG4900 no inhibió la actividad del DHFR, como demuestra el \DeltaA_{340} idéntico al de la reacción de control. Se ha observado, no obstante, que la disminución en la absorbancia es, al principio de la reacción, algo más lenta en presencia del compuesto que en la reacción de control. Este efecto inhibitorio residual del compuesto RG4900 sobre la DHFR puede deberse a la presencia de una pequeña cantidad de MT libre en la preparación. En conclusión, la mayor parte de la actividad inhibitoria sobre la DHFR se debe al MT, una vez liberado del profármaco tras la hidrólisis del enlace éster en el compartimento celular apropiado.

Se estudiaron las condiciones de hidrólisis de ésteres se estudió realizando varios experimentos con pH distintos. Las pruebas de inhibición de DHFR realizadas tras la hidrólisis permitieron evidenciar la actividad inhibidora del sistema hidrolizado.

Ejemplo 11 Ensayo in vitro de la actividad antiproliferativa de los compuestos de la presente invención

La actividad antiproliferativa del éster polisacárido del compuesto RG4900 de la presente invención se probó con varias estirpes celulares tumorales, como: SK-OV-3 (estirpe celular humana): células de carcinoma ovárico, células de carcinoma de colon HT29 (estirpe celular humana), células de carcinoma pulmonar NIH-H460 (estirpe celular humana) células de leucemia L1210 (estirpe celular murina). Estas estirpes celulares se cultivaron en forma de monocapas en un medio RPMI-1640 (Sigma Chemical Co., St Louis) complementado con FCS al 10%, a una concentración fisiológica de folato (2 nM), dentro de una botella de plástico de 50 cm^{2} (Corning Industries, Corning, NY) que se mantuvo a la temperatura de 37ºC, y bajo una atmósfera húmeda que contenía 5% de CO_{2}. Dichas estirpes se sometieron semanalmente a un medio fresco. Justo antes de empezar las pruebas experimentales, se sacaron de la botella las células, que se encontraban en la fase de crecimiento exponencial, de la botella utilizando una solución de tripsina. Se sembraron seguidamente las células en bandejas de 6 pocillos (30.000 células/placa), en un medio de RPMI-1640 complementado con FCS al 10%. Se dejó que las células proliferaran durante 24 horas a fin de favorecer la adhesión, y se extrajo seguidamente el medio reemplazándolo por el medio experimental. Se incubaron las células durante 72 ó 120 horas. El medio experimental se preparó diluyendo en un medio de RPMI-1640 complementado con FCS al 10% una solución madre diluida en una disolución tampón de PBS del éster polisacárido de la presente invención en distintas concentraciones finales comprendidas entre 0-5000 \mug/ml de N-GA equivalente. Se realizó una prueba comparativa con el N-GA correspondiente en la gama de concentraciones de 0 - 100 \mug/ml. La actividad antiproliferativa se determinó por medio del ensayo colorimétrico con azul de tripano, siendo ésta proporcional al número de células viables.

La tabla 1 muestra el porcentaje de crecimiento de la estirpe celular SK-OV-3 (carcinoma ovárico) en presencia del compuesto del ejemplo 7 (RG4900) tras 72 y 120 horas de tratamiento. Los valores indicados son el promedio de 4 pruebas distintas. Las concentraciones de los compuestos analizados están referidas a la cantidad de MT que había en el compuesto correspondiente. Los experimentos se realizaron con una densidad celular de 30.000 células/placa.

TABLA 1

Compuesto	Concentración	Supervivencia	Supervivencia
	(ng/ml)	% (72 h)	% (120 h)
RG4900	0	100	100,0
''	2,28	s.d.	106,5
''	6,58	83	76,0
''	20,5	84,5	45,0
''	60	55	13,0
''	185	46,5	5,5
''	550	38,5	3,0
''	1670	38,5	2,0
''	5000	32,5	1,0

Los datos de la tabla indican claramente que los ésteres polisacáridos según la presente invención presentan una actividad antiproliferativa intensa que depende del tiempo y de la dosis.

La tabla 2 describe el efecto sobre la tasa de supervivencia celular del carcinoma ovárico SK-OV-3 que presentan el éster polisacárido y el polisacárido sin derivatizar correspondiente (escleroglucano, SC con MW: 140000). Las pruebas se realizaron tras 72 y 120 horas de incubación y a una concentración del éster polisacárrido que correspondía a una concentración de MT de 5 \mug/ml.

TABLA 2

Compuesto	Concentración	Supervivencia %
	(\mug/ml)
RG4900 (72 h)	0,34	32,5
(120 h)	0,34	1,0
SC (72 h)	0,34	95
SC (120 h)	0,34	99

De los datos arriba indicados se deduce que no hay ningún efecto apreciable debido al polímero sin derivatizar (SC).

La tabla 3 presenta los valores de IC_{50} (concentración necesaria para reducir la proliferación celular al 50% de la proliferación de control) de los ésteres polisacáridos de la presente invención y de un compuesto (AB1) preparado por derivatización de escleroglucano según la técnica anterior.

El recuento de las muestras celulares de distintas estirpes de células tumorales se realizó al cabo de 120 h de tratamiento. Las concentraciones de los ésteres de la presente invención se han expresado como cantidades de MT presentes en el éster polisacárido (ng/ml).

TABLA 3

Estirpe celular	Compuesto RG4900	Compuesto AB1
	(ng/ml)	(ng/ml)
SK-OV-3	18	800
L1210	24	820
HT29	20	410
NIH-H460	430	S.d.

Los datos de la tabla 3 demuestran que el escleroglucano MT sustituido aleatoriamente (AB1), que se preparó según el ejemplo 3 de la patente US 5.554.386 y que se utilizó en el ensayo con fines comparativos, presenta un IC_{50} muy elevado en comparación con los compuestos de la presente invención. Este hecho indica claramente que la sustitución selectiva de N-GA permite obtener un efecto marcado y positivo sobre la actividad antiproliferativa de los compuestos de la presente invención.

Claims

1. Éster polisacárido del compuesto de fórmula (I)

1

en la que:

- R_{2} y R_{4}, que son independientes entre sí, se seleccionan del grupo compuesto por: -NH_{2}, -OH, -OCH_{3}, aquilo C_{1}-C_{5}, =O, y el anillo de 6 miembros, que contiene los dos átomos de nitrógeno, es opcionalmente aromático;

- X e Y se seleccionan del grupo compuesto por: -C(R_{5})=, -CH(R_{5}), -NH-, -N=, donde R_{5} representa: -H, alquilo C_{1}-C_{5}, y el anillo, que comprende X e Y, es opcionalmente aromático;

- Z se selecciona del grupo compuesto por: -O-, -CH(R_{10})-, -N(R_{10})-, donde R_{10} representa: -H, alquilo C_{1}-C_{5}, alquenilo C_{1}- C_{5}, alquinilo C_{1}-C_{5}, un anillo heterocíclico de 5-6 miembros con 1-3 heteroátomos seleccionados del grupo compuesto por nitrógeno, azufre y oxígeno;

- Ar es 1,4-fenilo, opcionalmente condensado con uno o varios anillos aromáticos de 5-6 miembros, opcionalmente heterocíclicos, opcionalmente sustituidos con R_{2} según lo descrito anteriormente;

caracterizado porque únicamente los grupos hidroxi primarios, que se encuentran en las unidades monosacáridas del polisacárido, están parcial o totalmente esterificados con el grupo \gamma-carboxílico de los compuestos de fórmula (I).

2. Éster polisacárido del compuesto de fórmula (I)

2

en la que:

- Z se selecciona del grupo compuesto por: -O-, -CH(R_{10})-, -N(R_{10})-, donde R_{10} representa: -H, alquilo C_{1}-C_{5}, alquenilo C_{1}-C_{5}, alquinilo C_{1}-C_{5}, un anillo heterocíclico de 5-6 miembros con 1-3 heteroátomos seleccionados del grupo compuesto por nitrógeno, azufre y oxígeno;

- Ar es 1,4-fenilo, opcionalmente condensado con uno o varios anillos aromáticos de 5-6 miembros, opcionalmente heterocíclicos, opcionalmente sustituidos con R_{2} según lo descrito anteriormente; caracterizado porque únicamente los grupos hidroxi primarios, que se encuentran en las unidades monosacáridas del polisacárido, están parcial o totalmente esterificados con el grupo \gamma-carboxílico de los compuestos de fórmula (I) de uso farmacéutico.

3. Éster polisacárido según la reivindicación 1, en el que:

- R_{2} y R_{4}, que son independientes entre sí, se seleccionan del grupo compuesto por: -NH_{2}, -OH, y el anillo de 6 miembros, que contiene los dos átomos de nitrógeno, es aromático;

- R_{5} representa: -H, -CH_{3};

- Z se selecciona del grupo compuesto por: -CH(R_{10})-, -N(R_{10})-, donde R_{10} representa -H, alquilo C_{1}-C_{5}, alquenilo C_{1}-C_{5}, alquinilo C_{1}-C_{5}.

4. Éster polisacárido según la reivindicación 1, en el que:

- R_{2} y R_{4}, que son independientes entre sí, se seleccionan del grupo compuesto por: -NH_{2}, =O, y el anillo de 6 miembros, que contiene dos átomos de nitrógeno, no es aromático;

- R_{5}, si existe, representa: -H, -CH_{3};

5. Éster polisacárido según la reivindicación 1, en el que:

- R_{2} es =O, R_{4} es -NH_{2} y el anillo de 6 miembros, que contiene dos átomos de nitrógeno, no es aromático;

- X e Y son -N= y el anillo que los contiene es aromático;

- Z es -N(R_{10})- donde R_{10} representa: -H o -CH_{3};

- Ar es 1,4-fenilo.

6. Éster polisacárido según la reivindicación 1, en el que:

- R_{2} y R_{4} son -NH_{2} y el anillo de 6 miembros que contiene dos átomos de hidrógeno es aromático;

- X e Y son N = y el anillo que los contiene es aromático;

- Z es -N(R_{10}), donde R_{10} representa -CH_{3} o -H;

- Ar es 1,4 fenilo.

7. Éster polisacárido según la reivindicación 1, en el que:

- X e Y son N = y el anillo que los contiene es aromático;

- Z es -CH (C_{2}H_{5})-;

- Ar es 1,4 fenilo

8. Éster polisacárido según cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que el polisacárido es neutro o aniónico.

9. Éster polisacárido según la reivindicación 8, en el que el polisacárido es lineal o ramificado y consta de unidades monosacáridos seleccionadas del grupo compuesto por: D-glucosa, D-xilosa, L-ramnosa, ácido D-galacturónico, ácido D-glucurónico, ácido D-manurónico, ácido L-gulurónico, ácido L-idurónico, D-fructosa, N-acetil-D-glucosamina, N-acetil-L-galactosamina, 3,6-anhidro-D-galactosa, 3,6-anhidro-L-galactosa.

10. Éster polisacárido según cualquiera de las reivindicaciones 8-9, en el que la cadena principal de dicho polisacárido presenta una estructura \beta-(1\rightarrow3), \beta-(1\rightarrow2), \beta-(1\rightarrow4)-D-glicosídica o una estructura \alpha-(1\rightarrow3), \alpha-(1\rightarrow4), \alpha-(1\rightarrow6)-glicosídica, y las posibles cadenas laterales están compuestas por monosacáridos unidos con la configuración \beta-(1\rightarrow2), \beta-(1\rightarrow3), \beta-(1\rightarrow>4), \beta-(1\rightarrow6), \alpha-(1\rightarrow4), o \alpha-(1\rightarrow6).

11. Éster polisacárido según la reivindicación 10, en el que dicho polisacárido es un \beta-(1\rightarrow3)-D-glucano.

\newpage

12. Éster polisacárido según la reivindicación 11, en el que dicho polisacárido se selecciona del grupo compuesto por escleroglucano, lentinano, esquizofilano, pachimarano, curdlano, lamirano.

13. Éster polisacárido según la reivindicación 10, en el que dicho polisacárido es el ácido hialurónico o sus sa-
les.

14. Éster polisacárido según la reivindicación 10, en el que dicho polisacárido es un polisacárido sulfatado.

15. Éster polisacárido según la reivindicación 14, en el que dicho polisacárido sulfatado se extrae de algas de las familias grateloupiaceae o codiaceae.

16. Éster polisacárido según cualquiera de las reivindicaciones 1-15, en el que por lo menos un grupo hidroxi de la unidad monosacárida del polisacárido se sustituye por un residuo seleccionado del grupo compuesto por: alquilo C_{1}-C_{6}, -COOH, NH_{2}, -NH-COCH_{3}, -SO_{3}H, -OPO_{3}H_{2}, -COO-(CH_{2})_{n}-COOH, -COOR, -COR, -OR, -O-(CH_{2})_{n}-OCOR, y donde n=1-4 y R = es alquilo C_{1}-C_{10}.

17. Composiciones farmacéuticas que comprenden como compuesto activo los ésteres polisacáridos según cualquiera de las reivindicaciones 1-16, en combinación con excipientes y/o diluyentes apropiados y farmacéuticamente aceptables.

18. Composiciones farmacéuticas según la reivindicación 17, en forma de soluciones o suspensiones.

19. Composiciones farmacéuticas según la reivindicación 17 para la administración parenteral, oral o tópica.

20. Composiciones farmacéuticas según cualquiera de las reivindicaciones 17-19, realizándose la administración parenteral por vía intravenosa, intramuscular, intrarticular y subcutánea.

21. Composiciones farmacéuticas según cualquiera de las reivindicaciones 17-20 en forma de gel, crema, polvos, polvos granulosos, comprimidos, píldoras, cápsulas o insertos.

22. Utilización del éster polisacárido según cualquiera de las reivindicaciones 1-16 para la preparación de un medicamento para el tratamiento y la prevención de enfermedades caracterizadas por hiperproliferación celular.

23. Utilización del éster polisacárido según la reivindicación 22 para la preparación de un medicamento para el tratamiento y la prevención de enfermedades autoinmunitarias o inflamatorias.

24. Utilización del éster polisacárido según la reivindicación 22 para la preparación de un medicamento para el tratamiento y la prevención de la artritis reumatoide.

25. Utilización del éster polisacárido según la reivindicación 22 para la preparación de un medicamento para el tratamiento y la prevención de enfermedades cutáneas.

26. Utilización del éster polisacárido según la reivindicación 25, consistiendo dicha enfermedad cutánea en la psoriasis.

27. Utilización del éster polisacárido según la reivindicación 22 para la preparación de un medicamento para el tratamiento y la prevención de tumores.

28. Utilización del éster polisacárido según la reivindicación 23 para la preparación de un medicamento para el tratamiento y la prevención de enfermedades inflamatorias del intestino.

29. Procedimiento para la preparación de los ésteres polisacáridos según las reivindicaciones 1-16, comprendiendo el procedimiento las siguientes etapas:

a) obtención de un polisacárido halogenado regioselectivo por activación de los grupos hidroxi primarios de las unidades monosacáridas del polisacárido;

b) formación de enlaces éster entre el polisacárido halogenado regioselectivo y el grupo carboxilo de compuesto de fórmula (I) por desplazamiento de los átomos de halógeno.

30. Procedimiento según la reivindicación 29, realizándose dicha activación de la etapa a) por halogenación del polisacárido.

31. Procedimiento según la reivindicación 30, realizándose dicha halogenación en un solvente orgánico que comprende asimismo un haluro de alquilo o arilo.

32. Procedimiento según la reivindicación 31, en el que dicho haluro de alquilo o arilo se selecciona del grupo compuesto por: bromuro de metanosulfonilo, bromuro de p-toluenosulfonilo, cloruro de metanosulfonilo, cloruro de p-toluenosulfonilo.

33. Procedimiento según la reivindicación 29, en el que, en la etapa b), el polisacárido halogenado obtenido en la etapa a) se suspende en un disolvente orgánico y se mezcla seguidamente, en presencia de un agente básico, con el compuesto de fórmula (I) que se ha suspendido en el mismo disolvente orgánico.

34. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 31 y 33, en el que dicho disolvente orgánico se selecciona del grupo compuesto por: dimetilformamida, dimetilsulfóxido, N-metilpirolidona.