ES2250671T3 - Conjugados de queladores mejorados. - Google Patents

Conjugados de queladores mejorados.

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Abstract

Un conjugado quelante de fórmula: donde: cada R1, R2 y R3 es independientemente un grupo R; Y es -(A)n-X-Z, donde: X es -NR4-, -CO2-, -N(C=S)-, -N(C=O)-, S- o -O-; Z es un resto de abordaje biológico, que representa los péptidos o análogos peptídicos 3-100-méricos, que pueden ser péptidos lineales o péptidos cíclicos o sus combinaciones; anticuerpos monoclonales o sus fragmentos; o substratos o inhibidores de enzimas; compuestos de unión de receptores sintéticos; oligonucleótidos o fragmentos de oligoADN u oligoARN; R4 es independientemente un grupo R; -(A)n- es un grupo de enlace, donde cada A es independientemente -CR2-, -CR=CR-, -C=C-, -NRCO-, -CONR-, -SO2NR-, -NRSO2-, -CR2OCR2-, -CR2SCR2-, -CR2NRCR2-, un grupo cicloheteroalquileno C488, un grupo cicloalquileno C4-8, un grupo arileno C5-12, un grupo heteroarileno C3-12 o un resto de polialquilenglicol, ácido poliláctico o ácido poliglicólico; n es un número entero con un valor de 0 a 10; cada grupo R es independientemente H o alquilo C1-10, alquilarilo C3-10, alcoxialquilo C2-10, hidroxialquilo C1-10 o fluoroalquilo C1-10, o 2 o más grupos R, junto con el átomo al que están unidos, forman un anillo carbocíclico o heterocíclico saturado o insaturado.

Description

Conjugados de queladores mejorados.
Campo de la invención
La presente invención se relaciona con conjugados quelantes mejorados con moléculas de abordaje biológico, adecuados para formar complejos metálicos con radiometales. Los complejos de radiometales son útiles en productos radiofarmacéuticos, especialmente con ^{99m}Tc.
Antecedentes de la invención
Las diaminadioximas son una clase conocida de agentes quelantes, que se ha visto que forman
1
Q = -(CH_{2})_{3}-, es decir, oxima de propilenamina o PnAO;
Q = -(CH_{2})_{4}-, es decir, oxima de butilenamina o BnAO;
Q = -(CH_{2})_{5}-, es decir, oxima de pentilenamina o PentAO;
complejos con el radiometal ^{99m}Tc.
El ligando PentAO fue descrito por primera vez por S. Jurisson y col. [Inorg. Chem., 26, 3576-82 (1987)], quienes mostraron que este complejo metálico con el radiometal de larga vida ^{99}Tc era neutro, con un núcleo de Tc(V) dioxo (es decir, TcO_{2}^{+}). J-M Lo y col. [Appl. Rad. Inst. 44, 1139-46 (1993)] describieron la síntesis de PentAO y su acomplejación con ^{99m}Tc.
EE.UU. 5688487 describe conjugados quelantes de diaminadioximas que tienen un puente de alquileno C_{2-5} con moléculas de abordaje biológico de nitroimidazol para la imagen de la hipoxia. Se describe la conjugación del nitroimidazol en la posición C1 (metilo de la oxima).
WO 95/04552 describe conjugados de nitroimidazol de BnAO y PentAO. El Ejemplo muestra la conjugación en la posición C1 (metilo de la oxima).
WO 95/19187 describe conjugados de péptidos sintéticos 3-50-méricos lineales o cíclicos con agentes quelantes polidentados unidos al extremo carboxilo del péptido para uso como agentes radiofarmacéuticos. Se describen diaminadioximas, tales como PnAO, BnAO y PentAO, como agentes quelantes adecuados.
WO 99/60018 describe conjugados quelantes de diaminadioxima de ligandos de diaminadioxima con péptidos para la imagen de trombos. Se dice que uno de tales quelantes preferido es una diaminadioxima con Q = -(CH_{2})_{2}NR
(CH_{2})_{2}-.
La presente invención
Los conjugados quelantes de diaminadioximas-péptidos de WO 99/60018 de Fórmula I:
2
donde T = N e Y = -CH_{2}CH_{2}NH-[péptido] sufren, sin embargo, de inconvenientes significativos. Así, al quelarse con ^{99m}Tc, esta azadiaminadioxima forma varias especies de tecnecio, que pueden ser separadas y detectadas por cromatografía. A temperatura ambiente, las especies radiomarcadas iniciales (intermediarios) se convierten a lo largo del tiempo (2-3 horas) en un producto estable. Esta conversión intermediario-producto puede ser promovida mediante el uso de un mayor pH (> pH 8) y calentamiento. Estas condiciones no son ideales en una radiofarmacia hospitalaria, por lo que es deseable un quelante con menos intermediarios y/o una velocidad de conversión intermediario-producto más rápida. Claramente, no es deseable la necesidad de calentamiento y posiblemente un pH relativamente alto para conseguir una pureza radioquímica (PRQ) adecuada de la especie de ^{99m}Tc deseada, ya que dicho calentamiento puede degradar la molécula o péptido de abordaje biológico unidos. Otro problema de los quelantes de azadiaminadioxima de Fórmula I es que el nitrógeno de la amina terciaria de la posición en cabeza de puente es relativamente básico. Esto significa que, al formarse el correspondiente complejo de ^{99m}Tc en solución acuosa, la amina terciaria se protona al menos parcialmente, con el resultado de que se carga el conjugado. Esta carga puede limitar las aplicaciones del resto de abordaje biológico marcado, ya que la carga puede hacer más difícil que el conjugado radiomarcado cruce las membranas celulares.
La presente invención proporciona un sistema quelante alternativo (Fórmula I donde T = C), que resuelve estos problemas de la técnica anterior y proporciona conjugados que pueden ser radiomarcados para dar una buena PRQ a temperatura ambiente en condiciones acuosas a pH casi neutro. Los complejos radiometálicos tienen una buena estabilidad. Los quelantes bifuncionales que contienen tiol N_{2}S_{2} y N_{3}S de la técnica anterior sufren del inconveniente de que los tioles son sensibles al aire, oxidándose rápidamente en aire a los correspondientes disulfuros en condiciones de neutras a básicas. Se les debe mantener, por lo tanto, en una atmósfera inerte antes de su uso en una matriz protectora. Alternativamente, pueden ser usados como especies protegidas, tales como tioacetato o un tetrahidropiranilhemitiocetal, pero ello necesita eliminar los grupos protectores antes de su uso con ácido o base y calentar. Todas estas características reducen la conveniencia de estos quelantes en comparación con los quelantes de la presente invención, Por ello, los presentes quelantes son útiles para conjugación y radiomarcaje de una amplia gama de restos de abordaje biológico.
Descripción detallada de la invención
En un primer aspecto, la presente invención proporciona un conjugado quelante de un ligando de diaminadioxima con un resto de abordaje biológico. El término "conjugado quelante" un compuesto en el que un agente quelante de metales está covalentemente unido ("conjugado") a un resto de abordaje biológico. El conjugado quelante tiene la Fórmula II:
3
donde:
cada R^{1}, R^{2} y R^{3} es independientemente un grupo R;
Y es -(A)_{n}-X-Z,
donde:
X es -NR^{4}-, -CO_{2}-, -N(C=S)-, -N(C=O)-, -S- o -O-;
Z es un resto de abordaje biológico;
R^{4} es independientemente un grupo R;
-(A)_{n}- es un grupo de enlace, donde cada A es independientemente -CR_{2}-, -CR=CR-, -C=C-, -NRCO-, -CONR-, -SO_{2}NR-, -NRSO_{2}-, -CR_{2}OCR_{2}-, -CR_{2}SCR_{2}-, -CR_{2}NRCR_{2}-, un grupo cicloheteroalquileno C_{4-8}, un grupo cicloalquileno C_{4-8}, un grupo arileno C_{5-12}, un grupo heteroarileno C_{3-12} o un resto de polialquilenglicol, ácido poliláctico o ácido poliglicólico;
n es un número entero con un valor de 0 a 10;
cada grupo R es independientemente H o alquilo C_{1-10}, alquilarilo C_{3-10}, alcoxialquilo C_{2-10}, hidroxialquilo C_{1-10} o fluoroalquilo C_{1-10}, o 2 o más grupos R, junto con el átomo al que están unidos, forman un anillo carbocíclico o heterocíclico saturado o insaturado.
Mediante el término "resto de abordaje biológico" se quiere decir: péptido o análogos de péptidos 3-100-méricos que pueden ser péptidos lineales o péptidos cíclicos o sus combinaciones; anticuerpos monoclonales o fragmentos de los mismos; o substratos o inhibidores de enzimas; compuestos de unión a receptores sintéticos; oligonucleótidos o fragmentos de oligo-ADN u oligo-ARN. El resto de abordaje biológico puede ser de origen sintético o natural, pero es preferiblemente sintético. Son restos preferidos de abordaje biológico los péptidos 3-20-méricos, que pueden ser de origen sintético o natural, pero preferiblemente sintéticos. Mediante el término "péptido cíclico", se quiere decir una secuencia de 5 a 15 aminoácidos en la que los dos aminoácidos terminales se unen entre sí mediante un enlace covalente, que puede ser un enlace peptídico o disulfuro o un enlace no peptídico sintético, tal como un enlace tioéter, fosfodiéster, disiloxano o uretano.
Mediante el término "aminoácido", se quiere decir un L- o D-aminoácido, análogo de aminoácido o mimético de aminoácido que puede ser de origen natural o puramente sintético y que puede ser ópticamente puro, es decir, un solo enantiómero, y por ello quiral, o una mezcla de enantiómeros. Preferiblemente, los aminoácidos de la presente invención son ópticamente puros. Mediante el término "mimético de aminoácido", se quiere decir análogos sintéticos de aminoácidos naturales que son isósteros, es decir, que han sido diseñados para imitar la estructura estérica y electrónica del compuesto natural. Dichos isósteros son bien conocidos para los expertos en la técnica e incluyen, aunque sin limitación, depsipéptidos, péptidos retroinversos, tioamidas, cicloalcanos o tetrazoles 1,5-disubstituidos [véase M. Goodman, Biopolymers, 24, 137 (1985)].
Como péptidos adecuados para uso en la presente invención, se incluyen:
-
somatostatina, octreótido y análogos;
-
péptidos que se unen al receptor ST, donde ST se refiere a la toxina termoestable producida por E. coli y otros microorganismos;
-
fragmentos de laminina, v.g. YIGSR, PDSGR, IKVAV, LRE y KCQAGTFALRGDPQG;
-
péptidos N-formílicos para abordar sitios de acumulación de leucocitos;
-
Factor plaquetario 4 (PF4) y sus fragmentos;
-
péptidos que contienen RGD;
-
fragmentos peptídicos de \alpha_{2}-antiplasmina, fibronectina o beta-caseína, fibrinógeno o trombospondina. Las secuencias de aminoácidos de la \alpha_{2}-antiplasmina, la fibronectina, la beta-caseína, el fibrinógeno y la trombospondina pueden encontrarse en las siguientes referencias: precursor de \alpha_{2}-antiplasmina [M. Tone y col., J. Biochem., 102, 1033 (1987)], beta-caseína [L. Hansson y col., Gene, 139, 193 (1994)], fibronectina [A. Gutman y col., FEBS Lett., 207, 145 (1996)], precursor de trombospondina-1 [V. Dixit y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 83, 5449 (1986)], R.F. Doolittle, Ann. Rev. Biochem., 53, 195 (1984).
Preferiblemente, los péptidos de la presente invención tienen una secuencia de aminoácidos tomada desde el extremo N de:
(i)
\alpha_{2}-antiplasmina, es decir, NH_{2}-Asn-Gln-Glu-Gln-Val-Ser-Pro-Leu-Thr-Leu-Thr-Leu-Leu-Lys-OH o variantes de ésta, donde uno o más aminoácidos han sido intercambiados, añadidos o eliminados, tales como:
NH_{2}-Asn-Gln-Glu-Gln-Val-Ser-Pro-Leu-Thr-Leu-Thr-Leu-Leu-Lys-Gly-OH,
NH_{2}-Asn-Gln-Glu-Ala-Val-Ser-Pro-Leu-Thr-Leu-Thr-Leu-Leu-Lys-Gly-OH,
NH_{2}-Asn-Gln-Glu-Gln-Val-Gly-OH, o
(ii)
caseína, es decir, Ac-Leu-Gly-Pro-Gly-Gln-Ser-Lys-Val-Ile-Gly.
Se pueden obtener los péptidos sintéticos de la presente invención por síntesis en fase sólida convencional, según se describe en P. Lloyd-Williams, F. Albericio y E. Girald, Chemical Approaches to The Synthesis of Peptides and Proteins, CRC Press, 1997.
Como anticuerpos monoclonales adecuados o fragmentos de los mismos para uso en la presente invención, se incluyen: anticuerpos para el antígeno CD-20 expresado sobre la superficie de las células B, anticuerpos anti-leucocitos o anti-granulocitos; anticuerpos anti-miosina o anticuerpos para el antígeno carcinoembrionario ("CEA").
Como substratos o inhibidores enzimáticos adecuados, se incluyen glucosa y análogos de glucosa, tales como la fluorodesoxiglucosa, ácidos grasos o inhibidores de la elastasa.
Como compuestos de unión a receptores sintéticos adecuados, se incluyen estradiol, estrógeno, progestina, progesterona y otras hormonas esteroideas; ligandos para el receptor de dopamina D-1 o D-2 o el transportador de dopamina, tales como los tropanos, y ligandos para el receptor de serotonina.
Mediante el término "fluoroalquilo", se quiere decir un grupo alquilo con al menos un substituyente de fluoro, es decir, que el término incluye grupos desde monofluoroalquilo (v.g. -CH_{2}F) hasta perfluoroalquilo (v.g. CF_{3}).
En los quelantes de diaminadioxima de la presente invención, R^{3} es preferiblemente H. También se prefiere que al menos un grupo R^{2} sea H, más preferiblemente que todos los grupos R^{2} sean H. Cada R^{1} es preferiblemente alquilo C_{1-3}, alcoxialquilo C_{2-4}, hidroxialquilo C_{1-3} o fluoroalquilo C_{1-3} y más preferiblemente alquilo C_{1-3} o fluoroalquilo C_{1-3}. Se prefiere más especialmente que todos los grupos R^{1} sean CH_{3}.
Los conjugados quelantes preferidos de Fórmula II donde dos o más grupos R que, junto con los átomos a los que están unidos, forman un anillo carbocíclico, heterocíclico, saturado o insaturado, comprenden dichos anillos, que tienen de 3 a 6 miembros, especialmente 5 ó 6 miembros. Son más preferidos entre dichos anillos los anillos carbocíclicos saturados. Son anillos carbocíclicos preferidos aquéllos en los que dos grupos R^{1} unidos al mismo átomo de carbono o a átomos de carbono adyacentes se combinan para formar anillos saturados de 3 a 6 miembros, especialmente de 5 ó 6 miembros.
Se contempla que la función del grupo de enlace -(A)_{n} es distanciar el complejo radiometálico relativamente voluminoso que resulta de la coordinación metálica del sitio activo del resto de abordaje biológico, de tal forma que, v.g., no se altere la unión a receptores. Se puede conseguir esto mediante una combinación de flexibilidad (v.g., cadenas de alquilo simples), de tal forma que el grupo voluminoso tenga libertad para situarse lejos del sitio activo, y/o rigidez, tal como un espaciador cicloalquílico o arílico que orienta el complejo metálico lejos del sitio activo. La naturaleza del grupo de enlace puede ser también usada para modificar la biodistribución del complejo radiometálico resultante del conjugado. Así, por ejemplo, la introducción de grupos éter en el enlace ayudará a minimizar la unión a las proteínas plasmáticas. Los grupos de enlace -(A)_{n} preferidos tienen una cadena de esqueleto de átomos unidos que constituyen el resto -(A)_{n}, que contiene de 2 a 10 átomos, más preferiblemente de 2 a 5 átomos, siendo especialmente preferidos 2 ó 3 átomos. Una cadena de esqueleto de grupo de enlace mínima de 2 átomos confiere la ventaja de que el quelante está bien separado del resto de abordaje biológico, de tal forma que se minimiza cualquier interacción. Otra ventaja es que el tamaño potencial del anillo quelante de los grupos X y Z es tan grande (al menos 8 para una cadena de esqueleto de 2 átomos) que no es probable que estos grupos compitan con efectividad con la coordinación del quelante a un radiometal. De esta forma, tanto las características de abordaje biológico del resto de abordaje biológico como la capacidad de acomplejación de metales del quelante de diaminadioxima se mantienen en conjugados de este tipo.
Los grupos de enlace no peptídicos, tales como grupos alquileno o grupos arileno, tienen la ventaja de que no hay interacciones significativas de enlaces de hidrógeno con el resto de abordaje biológico conjugado, de tal forma que el enlace no se enrolla alrededor del resto de abordaje biológico. Los grupos espaciadores de alquileno preferidos son -(CH_{2})_{n}, donde n es de 2 a 5. Los espaciadores de arileno preferidos son de la fórmula:
4
donde a y b son independientemente 0, 1 ó 2.
Un grupo Y preferido es, por lo tanto, -CH_{2}CH_{2}-X-Z, más preferiblemente -CH_{2}CH_{2}-NR^{4}-Z, siendo especialmente preferido Y = -CH_{2}CH_{2}-NH-Z. Esta agrupación tiene la ventaja adicional de que surge del intermediario R^{3}C(CH_{2}CH_{2}NH_{2})_{3}, preferiblemente del intermediario HC(CH_{2}CH_{2}NH_{2})_{3}, que, siendo simétricos, son mucho más fáciles de sintetizar, ya que las triaminas que tienen diferentes longitudes de cadena requerirían el uso de estrategias sintéticas para distinguir químicamente las diversas aminas (v.g., por medio de grupos protectores).
El grupo X es un grupo funcional que permite la fácil conjugación del agente quelante con el resto de abordaje biológico Z. Como la mayoría de los péptidos y proteínas tienen sitios carboxilo o amino disponibles para la funcionalización, los grupos X preferidos cuando Z es un péptido o proteína son -NR^{4}- y -CO_{2}-, ya que éstos permiten la fácil conjugación a través de enlaces amida. Los péptidos y proteínas que contienen cisteína pueden tener grupos tiol libres; los grupos X preferidos cuando Z es un péptido o proteína que contiene cisteína son grupos tiolfílicos, tales como maleimida y acrilamida, ya que éstos permiten una fácil conjugación a través de enlaces tioéter.
Los quelantes de diaminadioxima preferidos de la presente invención son simétricos, es decir, que los dos substituyentes -CR^{2}_{2}R^{2}_{2}NHCR^{1}_{2}C(=N-OH)R^{1} sobre el resto -CY(R^{3})- son seleccionados de forma que sean los mismos. Esto tiene la ventaja de que el quelante no contiene un centro quiral, ya que dichos centros pueden generar complejos radiometálicos diastereoméricos y requerir posiblemente la purificación de isómeros particulares.
Los conjugados quelantes de Fórmula II pueden ser eventualmente usados en forma de sal de ácido, es decir, donde se protonan una o más aminas del grupo donante de la diaminadioxima o del grupo Y con un ácido biocompatible. Dichas sales pueden ser obtenidas directamente, v.g. por purificación por HPLC empleando dichos ácidos en la fase móvil (v.g. ácido acético o trifluoroacético), o por adición del ácido biocompatible a una solución del conjugado quelante. La forma salina puede ser útil para ayudar a la purificación (v.g. por precipitación o recristalización), o puede facilitar la disolución en medios acuosos (después de lo cual se puede ajustar fácilmente el pH si es
necesario).
Los conjugados quelantes de la presente invención pueden ser preparados por reacción de un quelato bifuncional de Fórmula III con el resto de abordaje biológico:
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donde:
cada R^{1}, R^{2} y R^{3} es independientemente un grupo R;
E es -(A)_{n}J,
donde:
J es un grupo funcional adecuado para conjugación a Z;
-(A)_{n} es un grupo de enlace donde cada A es independientemente -CR_{2}-, -CR=CR-, -C\equivC-, -NRCO-, -CONR-, -SO_{2}NR-, -NRSO_{2}-, -CR_{2}OCR_{2}-, -CR_{2}SCR_{2}-, -CR_{2}NRCR_{2}-, un grupo cicloheteroalquileno C_{4-8}, un grupo cicloalquileno C_{4-8}, un grupo arileno C_{5-12}, un grupo heteroarileno C_{3-12} o un resto de polialquilenglicol, ácido poliláctico o ácido poliglicólico;
n es un número entero con un valor de 0 a 10;
cada grupo R es independientemente H o alquilo C_{1-10}, alquilarilo C_{3-10}, alcoxialquilo C_{2-10}, hidroxialquilo C_{1-10} o fluoroalquilo C_{1-10}, o dos o más grupos R, junto con los átomos a los que están unidos, forman un anillo carbocíclico, heterocíclico, saturado o insaturado.
Mediante el término "grupo funcional adecuado para conjugación", se quiere decir un grupo funcional que reaccionará con un grupo funcional correspondiente de Z (típicamente, un grupo amina, carboxilo o tiol) para enlazar químicamente el quelante de diaminadioxima a Z. Son grupos funcionales de este tipo preferidos para conjugación: -NR^{5}R^{6}, -CO_{2}M, -NCS, -NCO, -SM^{1}, -OM^{1}, maleimida o acrilamida, donde R^{5} y R^{6} son independientemente un grupo R o P^{G}; M es H, un catión, P^{G} o un éster activo; M^{1} es H o P^{G}, y P^{G} es un grupo protector. El catión es adecuadamente un contraión cargado positivamente, tal como un ion metálico o un ion amonio (NH_{4}^{+}) o amonio cuaternario o fosfonio. Preferiblemente, el catión es un catión biocompatible. Los términos "catión biocompatible", "éster activo" y "grupo protector" son como se define a continuación. Cuando el grupo funcional es -NR^{5}R^{6}, al menos uno y preferiblemente ambos de R^{5} y R^{6} son H.
Mediante el término "grupo protector", se quiere decir un grupo que inhibe o suprime las reacciones químicas indeseables, pero que está diseñado para ser suficientemente reactivo como para escindirse del grupo funcional en cuestión en condiciones lo suficientemente suaves como para no modificar el resto de la molécula. Tras la desprotección, el grupo en cuestión puede ser usado para conjugar el quelato bifuncional de Fórmula III con el resto de abordaje biológico.
Los grupos protectores son bien conocidos para los expertos en la técnica y son adecuadamente seleccionados entre, cuando J es -NR^{5}R^{6}: Boc (donde Boc es terc-butoxicarbonilo), Fmoc (donde Fmoc es fluorenilmetoxicarbonilo), trifluoroacetilo, alquiloxicarbonilo, Dde [es decir, 1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)etilo] o Npys (es decir, 3-nitro-2-piridinasulfenilo), y, cuando J es -CO_{2}P^{G}: éster metílico, éster terc-butílico y éster bencílico; cuando J es -OP^{G}, son grupos protectores adecuados: acetilo, benzoílo, tritilo (Trt) o tetrabutildimetilsililo. Cuando J es -SP^{G}, son grupos protectores adecuados: Tritilo y 4-metoxibencilo. El uso de otros grupos protectores está descrito en "Protective Groups in Organic Synthesis", Theodora W. Greene y Peter G.M. Wuts (John Wiley & Sons, 1991).
Mediante el término "catión biocompatible", se quiere decir un contraión cargado positivamente que forma una sal con un ionizador, grupo cargado negativamente, donde dicho contraión cargado positivamente es también no tóxico y por ello adecuado para administración al organismo de un mamífero, especialmente al organismo humano. Como ejemplos de cationes biocompatibles adecuados, se incluyen: los metales alcalinos (v.g., sodio o potasio), los metales alcalinotérreos (v.g., calcio o magnesio) y el ion amonio. Un catión biocompatible preferido es el ion sodio (Na^{+}).
Mediante el término "éster activo", se quiere decir un derivado éster del ácido carboxílico que está diseñado para ser un mejor grupo saliente, y por ello permitir una reacción más fácil con los nucleófilos presentes sobre el resto de abordaje biológico, tales como aminas. Son ejemplos de ésteres activos adecuados: N-hidroxisuccinimida (NHS), pentafluorofenol, pentafluorotiofenol, para-nitrofenol e hidroxibenzotriazol.
Los quelantes amina-funcionalizados de Fórmula III (es decir, J = -NR^{5}R^{6}) pueden así conjugarse con el/los grupo(s) carboxilo de un resto de abordaje biológico a través de enlaces amida. Esta copulación puede ser llevada a cabo directamente (v.g., usando síntesis peptídica en fase sólida) o en presencia de un agente activador adecuado, tal como BOP [es decir, benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino)fosfonio] o N,N'-diciclohexilcar-bodiimida (DCCI). La copulación puede ser también realizada mediante intermediarios apropiados, tal como es sabido en la técnica, tales como ésteres activados del grupo carboxilo del resto de abordaje biológico. Alternativamente, el grupo amina pendiente del quelante bifuncional puede ser primeramente convertido en un grupo isotiocianato (-NCS) o isocianato (-NCO), que permiten la conjugación con los restos de abordaje biológico que contienen aminas por formación de uniones tiourea y urea, respectivamente. Alternativamente, el grupo amina pendiente del quelante bifuncional puede reaccionar con un diácido para introducir un grupo carboxilo terminal a través de un grupo de enlace. Se puede usar un quelante bifuncional portador de una función carboxilo (es decir, J = -CO_{2}M) de una forma similar para copularse directamente con restos de abordaje biológicos que contienen aminas por medio de un enlace amida. El quelante bifuncional puede también llevar un grupo diseñado para reaccionar con grupos tiol sobre el resto de abordaje biológico y formar uniones tioéter estables. Son ejemplos de dichos grupos las maleimidas (que pueden ser preparadas por reacción de anhídrido maleico con la correspondiente amina, seguida de calentamiento con anhídrido acético) y las acrilamidas (que pueden ser preparadas por reacción de cloruro de acrililo con la amina).
En un segundo aspecto, la presente invención proporciona complejos radiometálicos del conjugado quelante descrito anteriormente. Los radiometales adecuados pueden ser o bien emisores de positrones, tales como ^{64}Cu, ^{48}V, ^{52}Fe, ^{55}Co, ^{94m}Tc o ^{68}Ga, o bien emisores \gamma, tales como ^{99m}Tc, ^{111}In, ^{113m}In o ^{67}Ga. Los radiometales más preferidos para imagen diagnóstica son emisores \gamma, especialmente ^{99m}Tc. Los complejos metálicos de ciertos radionúclidos pueden ser útiles como agentes radiofarmacéuticos para la radioterapia de diversas enfermedades, tales como el cáncer, el tratamiento de la trombosis o de la re-estenosis. Como radioisótopos útiles para dichas aplicaciones radioterapéuticas, se incluyen: ^{90}Y, ^{89}Sr, ^{67}Cu, ^{103}Pd, ^{186}Re, ^{188}Re, ^{169}Er, ^{153}Sm y ^{198}Au. Es muy preferible que el resto de abordaje biológico Z esté unido al quelante de tal forma que la unión no sufra un fácil metabolismo en la sangre, lo que daría lugar a que el complejo metálico se escindiera antes de que el resto de abordaje biológico marcado alcanzara el sitio diana deseado in vivo. El resto de abordaje biológico está, por lo tanto, preferiblemente unido de forma covalente a los complejos metálicos de la presente invención por uniones que no se metabolizan fácilmente (como son, v.g., las uniones éster).
Los complejos radiometálicos preferidos de la presente invención son simétricos, es decir, que los dos substituyentes -CR^{2}_{2}R^{2}_{2}NHCR^{1}_{2}C(=N-OH)R^{1} sobre el resto -CY(R^{3})- son seleccionados de forma que sean los mismos. Esto tiene la ventaja de que el complejo radiometálico no contiene un centro quiral, ya que dichos centros pueden generar complejos radiometálicos diastereoméricos y requerir posiblemente la purificación de isómeros particulares. También se prefiere que el complejo radiometálico del conjugado quelante sea eléctricamente neutro.
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Se cree que los complejos ^{99m}Tc de los quelantes de la presente invención son
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complejos Tc(V) dioxo neutros, como se ha mostrado anteriormente.
En los complejos de ^{99m}Tc-diaminadioxima de la presente invención, R^{3} es preferiblemente H. También se prefiere que al menos un grupo R^{2} sea H, más preferiblemente que todos los grupos R^{2} sean H. Cada R^{1} es preferiblemente alquilo C_{1-3}, alcoxialquilo C_{2-4}, hidroxialquilo C_{1-3} o fluoroalquilo C_{1-3}, y es más preferiblemente alquilo C_{1-3} o fluoroalquilo C_{1-3}. Se prefiere más especialmente que todos los grupos R^{1} sean CH_{3}. Los grupos Y preferidos para el complejo de ^{99m}Tc son como se ha descrito antes para el conjugado quelante.
Los complejos radiometálicos preferidos de la presente invención en los que dos o más grupos R que, junto con los átomos a los cuales están unidos, forman un anillo carbocíclico, heterocíclico, saturado o insaturado, comprenden dichos anillos de 3 a 6 miembros, especialmente de 5 ó 6 miembros. Son más preferidos entre dichos anillos los anillos carbocíclicos saturados. Son anillos carbocíclicos preferidos aquéllos en los que dos grupos R^{1} unidos a los mismos átomos de carbono o a átomos de carbono adyacentes se combinan para formar anillos saturados de 3 a 6 miembros, especialmente de 5 ó 6 miembros.
Los complejos radiometálicos de la presente invención pueden ser preparados por reacción de una solución del radiometal en el estado de oxidación apropiado con el conjugado de quelato al pH apropiado. La solución puede contener preferiblemente un ligando que se acompleja fácilmente con el metal (tal como gluconato o citrato), es decir, que el complejo radiometálico es preparado por intercambio o transquelación de ligando. Dichas condiciones son útiles para suprimir reacciones colaterales indeseables, tales como la hidrólisis del ion metálico. Cuando el ion radiometálico es ^{99m}Tc, el material de partida habitual es pertecnetato de sodio de un generador de ^{99}Mo. El tecnecio está presente en el pertecnetato de ^{99m}Tc en el estado de oxidación Tc(VII), que es relativamente no reactivo. La preparación de complejos de tecnecio de estado de oxidación inferior Tc(I) a Tc(V) requiere habitualmente, por lo tanto, la adición de un agente reductor farmacéuticamente aceptable adecuado, tal como ditionito de sodio, bisulfito de sodio, ácido ascórbico, formamidina, ácido sulfínico, ion estannoso, Fe(II) o Cu(I), para facilitar la acomplejación. El agente reductor farmacéuticamente aceptable es preferiblemente una sal estannosa, más preferiblemente cloruro estannoso, fluoruro estannoso o tartrato estannoso.
En un tercer aspecto, la presente invención proporciona agentes radiofarmacéuticos que contienen los complejos radiometálicos anteriores de los conjugados quelantes en una forma estéril adecuada para administración a humanos. Dichos agentes radiofarmacéuticos son adecuadamente suministrados en un recipiente que está provisto de un sello adecuado para punción única o múltiple con una aguja hipodérmica (v.g., un cierre de sello con septo plegado), manteniendo al mismo tiempo la integridad estéril. Dichos recipientes pueden contener dosis únicas o múltiples para los pacientes. Los recipientes preferidos de dosis múltiples consisten en un solo vial voluminoso (v.g., de 10 a 30 cm^{3} de volumen) que contiene múltiples dosis para los pacientes, mediante lo cual se pueden retirar así dosis individuales para los pacientes en jeringas de grado clínico a diversos intervalos de tiempo durante la vida útil viable de la preparación para adecuarse a la situación clínica. Las jeringas pre-llenadas están diseñadas para contener una sola dosis para humanos y son, por lo tanto, preferiblemente una jeringa desechable u otra jeringa adecuada para uso clínico. La jeringa pre-llenada puede estar eventualmente provista de un escudo de jeringa para proteger al operador de la dosis radiactiva. Se conocen en la técnica escudos de jeringa radiofarmacéuticos adecuados de este tipo y preferiblemente contienen plomo o tungsteno.
Un contenido en radiactividad de ^{99m}Tc adecuado para un agente radiofarmacéutico de imagen diagnóstica está dentro del margen de 180 a 1.500 MBq, dependiendo del sitio del que se ha de sacar la imagen in vivo, de la captación y de la razón de la diana al fondo. Para la imagen cardíaca con un agente radiofarmacéutico de ^{99m}Tc, se pueden usar aproximadamente 1.110 MBq (30 mCi) para un estudio de estrés y aproximadamente 350 MBq (10 mCi) para un estudio de reposo.
En un cuarto aspecto, la presente invención proporciona kits no radiactivos para la preparación de la composición radiofarmacéutica de ^{99m}Tc. Dichos kits están diseñados para dar productos radiofarmacéuticos estériles adecuados para administración a humanos, v.g., por inyección directa en el torrente sanguíneo. Para el ^{99m}Tc, el kit es preferiblemente liofilizado y está diseñado para su reconstitución con pertecnetato de ^{99m}Tc estéril (TcO_{4}^{-}) a partir de un generador de radioisótopos de ^{99m}Tc, para obtener una solución adecuada para administración humana sin mayor manipulación. Los kits adecuados incluyen un recipiente (v.g., un vial con sello de septo) que contiene el conjugado quelante de la Fórmula II en forma de base libre o de sal de ácido, junto con un agente reductor farmacéuticamente aceptable, tal como ditionito de sodio, bisulfito de sodio, ácido ascórbico, formamidina, ácido sulfínico, ion estannoso, Fe(II) o Cu(I). El agente reductor farmacéuticamente aceptable es preferiblemente una sal estannosa, tal como cloruro estannoso o tartrato estannoso. Alternativamente, el kit puede contener eventualmente un complejo metálico que, tras adición del radiometal, sufra transmetalización (es decir, intercambio metálico), dando el producto deseado.
Los kits no radiactivos pueden incluir además eventualmente componentes adicionales, tales como un transquelante, un radioprotector, un conservante antimicrobiano, un agente ajustador del pH o un rellenante. El "transquelante" es un compuesto que reacciona rápidamente para formar un complejo débil con tecnecio y es desplazado luego por la diaminadioxima. Esto minimiza el riesgo de formación de tecnecio hidrolizado reducido ("RHT") debido a la rápida reducción del pertecnetato que compite con la acomplejación del tecnecio. Los transquelantes adecuados de este tipo son sales de un ácido orgánico débil, es decir, un ácido orgánico que tiene un pKa de 3 a 7, con un catión biocompatible. Son ácidos orgánicos débiles adecuados de este tipo el ácido acético, el ácido cítrico, el ácido tartárico, el ácido glucónico, el ácido glucoheptónico, el ácido benzoico, los fenoles o los ácidos fosfónicos. Por ello, son sales adecuadas los acetatos, los citratos, los tartratos, los gluconatos, los glucoheptonatos, benzoatos, los fenolatos o los fosfonatos. Son sales preferidas de este tipo los tartratos, gluconatos, glucoheptonatos, benzoatos o fosfonatos, más preferiblemente los fosfonatos y más especialmente los difosfonatos. Un transquelante preferido de este tipo es una sal de MDP, es decir, de ácido metilendifosfónico, con un catión biocompatible.
Mediante el término "radioprotector", se quiere decir un compuesto que inhibe las reacciones de degradación, tales como los procesos redox, atrapando los radicales libres altamente reactivos, tales como los radicales libres que contienen oxígeno que surgen de la radiolisis del agua. Los radioprotectores de la presente invención son adecuadamente seleccionados entre: ácido ascórbico, ácido para-aminobenzoico (es decir, ácido 4-aminobenzoico), ácido gentísico (es decir, ácido 2,5-dihidroxibenzoico) y sus sales con un catión biocompatible como se ha descrito anteriormente.
Mediante el término "conservante antimicrobiano", se quiere decir un agente que inhibe el crecimiento de microorganismos potencialmente perjudiciales, tales como bacterias, levaduras o mohos. El conservante antimicrobiano puede también exhibir algunas propiedades bactericidas, dependiendo de la dosis. La principal función del/de los conservan-
te(s) antimicrobiano(s) de la presente invención es inhibir el crecimiento de cualquiera de tales microorganismos en la composición radiofarmacéutica después de la reconstitución, es decir, en el propio producto de diagnóstico radiactivo. El conservante antimicrobiano puede, sin embargo, ser también eventualmente utilizado para inhibir el crecimiento de microorganismos potencialmente perjudiciales en uno o más componentes del kit no radiactivo de la presente invención antes de la reconstitución. Como conservante(s) antimicrobiano(s) adecuado(s), se incluyen: los parabenes, es decir, el metil-, etil-, propil- o butilparabén, o sus mezclas; alcohol bencílico; fenol; cresol; cetrimida, y tiomersal. El/los conservante(s) antimicrobiano(s) preferido(s) son los parabenes.
El término "agente ajustador del pH" significa un compuesto o mezcla de compuestos útiles para asegurar que el pH del kit reconstituido esté dentro de límites aceptables (aproximadamente pH 4,0 a 10,5) para administración a humanos o a mamíferos. Como agentes ajustadores del pH de este tipo adecuados, se incluyen tampones farmacéuticamente aceptables, tales como tricina, fosfato o TRIS [es decir, tris(hidroximetil)aminometano], y bases farmacéuticamente aceptables, tales como carbonato de sodio, bicarbonato de sodio o sus mezclas. Cuando se emplea el conjugado de Fórmula II en forma de sal de ácido, el agente ajustador del pH puede ser eventualmente provisto en un vial o recipiente aparte, de tal forma que el usuario del kit pueda ajustar el pH como parte de un procedimiento de múltiples etapas.
Mediante el término "rellenante", se quiere decir un agente de masa farmacéuticamente aceptable que puede facilitar la manipulación del material durante la producción y la liofilización. Como rellenantes adecuados, se incluyen sales inorgánicas, tales como cloruro de sodio, y azúcares hidrosolubles, tales como sacarosa, maltosa o trehalosa.
En un quinto aspecto, la presente invención proporciona quelantes de diaminadioxima bifuncionales de Fórmula III útiles para preparar conjugados de quelantes-restos de abordaje biológico:
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donde:
cada R^{1}, R^{2} y R^{3} es independientemente un grupo R;
E es -(A)_{n}J,
donde:
J es un grupo funcional adecuado para conjugación a Z;
-(A)_{n} es un grupo de enlace donde cada A es independientemente -CR_{2}-, -CR=CR-, -C\equivC-, -NRCO-, -CONR-, -SO_{2}NR-, -NRSO_{2}-, -CR_{2}OCR_{2}-, -CR_{2}SCR_{2}-, -CR_{2}NRCR_{2}-, un grupo cicloheteroalquileno C_{4-8}, un grupo cicloalquileno C_{4-8}, un grupo arileno C_{5-12}, un grupo heteroarileno C_{3-12} o un resto de polialquilenglicol, ácido poliláctico o ácido poliglicólico;
n es un número entero con un valor de 0 a 10;
cada grupo R es independientemente H o alquilo C_{1-10}, alquilarilo C_{3-10}, alcoxialquilo C_{2-10}, hidroxialquilo C_{1-10} o fluoroalquilo C_{1-10}, o dos o más grupos R, junto con los átomos a los que están unidos, forman un anillo carbocíclico, heterocíclico, saturado o insaturado.
Mediante el término "grupo funcional adecuado para conjugación", se quiere decir un grupo funcional que reaccionará con un grupo funcional correspondiente de Z (típicamente, un grupo amina, carboxilo o tiol) para unir químicamente el quelante de diaminadioxima a Z. Son grupos funcionales de este tipo preferidos adecuados para conjugación: -NR^{5}R^{6}, -CO_{2}M, -NCS, -NCO, -SM^{1}, -OM^{1}, maleimida o acrilamida, donde R^{5} y R^{6} son independientemente un grupo R o P^{G}; M es H, un catión, P^{G} o un éster activo; M^{1} es H o P^{G}, y P^{G} es un grupo protector. El catión es adecuadamente un contraión cargado positivamente, tal como un ion metálico, un ion amonio (NH_{4}^{+}) o amonio cuaternario o fosfonio. Preferiblemente, el catión es un catión biocompatible. Los términos "catión biocompatible", "éster activo" y "grupo protector" son como se ha definido anteriormente. Cuando el grupo funcional es -NR^{5}R^{6}, al menos uno y preferiblemente ambos de R^{5} y R^{6} son H.
En los quelantes bifuncionales de Fórmula III de la presente invención, R^{3} es preferiblemente H. También se prefiere que al menos un grupo R^{2} sea H, más preferiblemente que todos los grupos R^{2} sean H. Cada R^{1} es preferiblemente alquilo C_{1-3}, alcoxialquilo C_{2-4}, hidroxialquilo C_{1-3} o fluoroalquilo C_{1-3} y más preferiblemente alquilo C_{1-3} o fluoroalquilo C_{1-3}. Se prefiere más especialmente que todos los grupos R^{1} sean CH_{3}.
Los quelantes bifuncionales preferidos donde dos o más grupos R que, junto con los átomos a los que están unidos, forman un anillo carbocíclico, heterocíclico, saturado o insaturado, comprenden dichos anillos, que tienen de 3 a 6 miembros, especialmente 5 ó 6 miembros. Son más preferidos entre dichos anillos los anillos carbocíclicos saturados. Son anillos carbocíclicos preferidos aquéllos en los que dos grupos R^{1} unidos al mismo átomo de carbono o a átomos de carbono adyacentes se combinan para formar anillos saturados de 3 a 6 miembros, especialmente de 5 ó 6 miembros.
Los conjugados quelantes de Fórmula III pueden ser eventualmente usados en forma de sal de ácido, es decir, donde una o más aminas del conjunto donante de diaminadioxima o del grupo Y se protonan con un ácido biocompatible. Dichas sales pueden ser obtenidas directamente, por ejemplo, por purificación por HPLC empleando dichos ácidos en la fase móvil (v.g., ácido acético o trifluoroacético), o por adición del ácido biocompatible a una solución del conjugado quelante. La forma salina puede ser útil para ayudar a la purificación (v.g., por precipitación o recristalización), o puede facilitar la disolución en medios acuosos (después de lo cual el pH puede ser fácilmente ajustado, de ser necesario).
Los grupos de enlace -(A)_{n} preferidos del quelante bifuncional tienen una cadena de esqueleto de átomos unidos que constituyen el resto -(A)_{n}, que contiene de 2 a 10 átomos, más preferiblemente de 2 a 5 átomos, siendo especialmente preferidos 2 ó 3 átomos. Una cadena de esqueleto de grupo de enlace mínima de 2 átomos confiere la ventaja de que, tras la conjugación, el quelante está bien separado del resto de abordaje biológico, de tal forma que se minimiza cualquier interacción. Otra ventaja es que el tamaño potencial del anillo quelante de los grupos X y Z es tan grande (al menos 8 para una cadena de esqueleto de 2 átomos) que no es probable que estos grupos compitan con efectividad con la coordinación del quelante a un radiometal.
Los grupos de enlace no peptídicos, tales como grupos alquileno o grupos arileno, tienen la ventaja de que no hay interacciones significativas de enlaces de hidrógeno con el resto de abordaje biológico conjugado, de tal forma que el enlace no se enrolla alrededor del resto de abordaje biológico. Los grupos espaciadores de alquileno preferidos son -(CH_{2})_{n}, donde n es de 2 a 5. Los espaciadores de arileno preferidos son de la fórmula:
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donde a y b son independientemente 0, 1 ó 2.
Un grupo E preferido es, por lo tanto, -CH_{2}CH_{2}-J, más preferiblemente -CH_{2}CH_{2}-NHR^{5} o -CH_{2}CH_{2}-CO_{2}H o sus ésteres activos, siendo especialmente preferido E = -CH_{2}CH_{2}-NH_{2}. El ácido puede también convertirse en un anhídrido mixto, v.g., por reacción con cloroformiato de isobutilo y base. El anhídrido mixto también reacciona con nucleófilos, tales como aminas. El agrupamiento E = -CH_{2}CH_{2}-NH_{2} tiene la ventaja adicional de que surge del intermediario R^{3}C(CH_{2}CH_{2}NH_{2})_{3}, preferiblemente del intermediario HC(CH_{2}CH_{2}NH_{2})_{3}, que, siendo simétrico, es mucho más fácil de sintetizar, ya que las triaminas que tienen diferentes longitudes de cadena requerirían el uso de estrategias sintéticas para distinguir químicamente las diversas aminas (v.g., por medio de grupos protectores).
Los quelantes de diaminadioxima bifuncionales preferidos de Fórmula III de la presente invención son asimétricos, es decir, que los dos substituyentes -C(R^{2})_{2}(R^{2})_{2}NHCR^{1}_{2}C(=N-OH)R^{1} sobre el resto -CY(R^{3})- son seleccionados de forma que sean los mismos. Esto tiene la ventaja de que el quelante no contiene un centro quiral, ya que dichos centros pueden generar complejos radiometálicos diastereoméricos y requerir posiblemente la purificación de isómeros particulares. Un quelante de diaminadioxima bifuncional especialmente preferido tiene la fórmula:
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Las sales de ácidos de este compuesto están también dentro del alcance de la presente invención.
Los quelantes de diaminadioxima bifuncionales de la presente invención pueden ser adecuadamente preparados por alquilación de un compuesto de Fórmula IV:
10
donde A, J, R^{2}, R^{3} y n son como se ha definido en la Fórmula III anterior, con cualquiera de:
(i) el derivado cloronitroso apropiado Cl-C(R^{1})_{2}-CH(NO)R^{1},
(ii) una alfa-clorooxima de fórmula Cl-C(R^{1})_{2}-C(=NOH)R^{1} o
(iii) una alfa-bromocetona de fórmula Br-C(R^{1})_{2}-C(=O)R^{1}, seguido de conversión del producto diaminadicetona en la diaminadioxima con hidroxilamina.
La ruta (i) está descrita por S. Jurisson y col. [Inorg. Chem., 26, 3576-82 (1987)]. Los compuestos cloronitrosos pueden ser obtenidos por tratamiento del alqueno apropiado con cloruro de nitrosilo (NOCl), como se describe en el Ejemplo 3. Se dan más detalles sintéticos de compuestos cloronitrosos por parte de: Ramalingam, K. y col., Synth. Commun. (1995), 25(5), 743-52; Glasser y col., J. Org. Chem. (1996), 61(3), 1047-48; Clapp, Leallyn B. y col., J. Org. Chem. (1971), 36(8), 1169-70; Salto, Giulichi y col., Shizen Kagaku (1995), 47, 41-9, y Schulz, Manfred Z., Chem. (1981), 21(11), 404-5. La ruta (iii) está descrita en amplios términos por Nowotnik y col. [Tetrahedron, 50(29), pp. 8617-8632 (1994)]. Se pueden obtener alfa-clorooximas por oximación de la correspondiente alfa-clorocetona o aldehído, que pueden ser adquiridos comercialmente. Las alfa-bromocetonas pueden ser adquiridas comercialmente.
Cuando J es -NH_{2}, la triamina de Fórmula IV puede ser eventualmente monoprotegida en primer lugar, de tal forma que se protege la amina primaria del grupo J. Se prepara entonces la diaminadioxima según las rutas (i), (ii) o (iii) anteriores y se elimina luego el grupo protector. Los grupos protectores adecuados son conocidos en la técnica e incluyen BOC (es decir, terc-butoxicarbonilo) o Fmoc, como se ha descrito antes.
Los compuestos de Fórmula IV son adecuadamente preparados a partir de HC(CH_{2}CH_{2}OAc)_{3} por hidrólisis de uno o más de los ésteres de acetato a un alcohol(es) primario(s) y conversión en un grupo saliente, tal como un éster de metanosulfonato, con cloruro de metanosulfonilo y piridina. Este grupo saliente puede ser entonces desplazado con un nucleófilo adecuado, que puede convertirse en la funcionalidad deseada. Para generar un ácido carboxílico (es decir, J = -CO_{2}H), se usaría un anión cianuro. La hidrólisis ácida del cianuro generaría el ácido carboxílico deseado. Para generar una amina, se usaría un nucleófilo de azida para generar una alquilazida. La hidrogenación de la alquilazida produciría una amina. Para generar un tiol (es decir, J = -SH), el desplazamiento del grupo saliente con anión de ácido tioacético daría un tioacetato, que, por hidrólisis ácida, produciría el tiol.
En otro aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula V:
Fórmula VHC(CH_{2}CH_{2}NR^{7}R^{8})_{3}
donde R^{7} y R^{8} son independientemente H o P^{G}, o R^{7} y R^{8} juntos forman P^{G}, o una sal del mismo.
P^{G} es un grupo protector como se ha definido antes. Los compuestos de Fórmula V son precursores útiles en una variedad de quelantes bifuncionales de la presente invención. Un compuesto preferido de Fórmula V es HC(CH_{2}CH_{2}NH_{2})_{2} (CH_{2}CH_{2}NR^{7}R^{8}), es decir, una triamina monoprotegida como se ha descrito antes. Más preferiblemente, todos los grupos R^{7} y R^{8} son H, es decir, el compuesto HC(CH_{2}CH_{2}NH_{2})_{3}, o una sal de ácido del mismo, que es un compuesto preferido de la presente invención.
La Figura 1 muestra las estructuras químicas de los Compuestos 1 a 6. La Figura 2 muestra la estructura química del Compuesto 5 en su totalidad. La Figura 3 muestra el esquema de reacción para la síntesis de azida de 1,1',1-tris(2-aminoetil)amina del Ejemplo 1. La Figura 4 muestra el esquema de reacción para la síntesis alternativa de 1,1,1-tris(2-aminoetil)amina del Ejemplo 2.
La invención es ilustrada por los Ejemplos no limitativos detallados a continuación. El Ejemplo 1 describe la síntesis del nuevo compuesto 1,1,1-tris(2-aminoetil)metano. El Ejemplo 2 proporciona una síntesis alternativa de 1,1,1-tris(2-aminoetil)metano que evita el uso de intermediarios de azida potencialmente peligrosos. El Ejemplo 3 describe la síntesis de varios precursores de cloronitrosoalcano. El Ejemplo 4 describe la síntesis de una diaminadioxima bifuncional amina-substituida preferida de la presente invención (Compuesto 1). El Ejemplo 5 describe la síntesis de un conjugado de benzamida (Compuesto 2) del Compuesto 1. El Ejemplo 6 muestra cómo se puede introducir un grupo espaciador que convierte con efectividad la función amina terminal del quelante bifuncional en una función carboxilo terminal. El Ejemplo 7 describe la síntesis en fase sólida de un péptido de abordaje de trombos. El Ejemplo 8 proporciona una síntesis del Compuesto 5, es decir, un conjugado del Compuesto 1 con un péptido de abordaje. El Ejemplo 9 descri-
be la síntesis de los Compuestos 7 y 8, que son análogos de diaminadioxima que incorporan estructuras de anillo.
El Ejemplo 10 compara el radiomarcaje con ^{99m}Tc del Compuesto 2 con el del análogo aza quelante de la técnica anterior (Compuesto 3) y muestra que los quelantes de la presente invención dan un marcaje mucho más eficiente y rápido en condiciones suaves, es decir, a temperatura ambiente y a pH menos alcalino. Así, el quelante de la técnica anterior requiere pH 10 y un tiempo de al menos 120 min. a temperatura ambiente para dar PRQ de más del 80%, mientras que se marca con una PRQ de más del 95% en 15 minutos. El Ejemplo 11 muestra que el Compuesto 5 se marca con ^{99m}Tc para dar una preparación de elevada pureza radioquímica. El Ejemplo 12 muestra que el Compuesto 5 marcado con ^{99m}Tc exhibe una captación de coágulos sanguíneos in vitro comparable a la del compuesto de la técnica anterior ^{99m}Tc-Compuesto 6 y que, por ello, las propiedades de abordaje biológico del péptido se conservan cuando se conjuga a los quelantes de diaminadioxima de la presente invención. El Ejemplo 13 muestra el radiomarcaje con ^{99m}Tc en condiciones suaves del Compuesto 9, que es un conjugado del Compuesto 1 con un péptido cíclico que tiene enlaces disulfuro relativamente sensibles.
Ejemplo 1 Síntesis de 1,1,1-tris(2-aminoetil)metano
Etapa 1(a)
Éster dimetílico del ácido 3-(metoxicarbonilmetilen)glutárico
Se trató carbometoximetilentrifenilfosforano (167 g, 0,5 mol) en tolueno (600 ml) con 3-oxoglutarato de dimetilo (87 g, 0,5 mol) y se calentó la reacción a 100ºC en un baño de aceite a 120ºC bajo una atmósfera de nitrógeno durante 36 h. Se concentró entones la reacción a vacío y se trituró el residuo oleoso con éter de petróleo/éter dietílico 40/60 1:1, 600 ml. Precipitó óxido de trifenilfosfina y se decantó/filtró el líquido sobrenadante. Se realizó una destilación de Kugelrohr del residuo de la evaporación a vacío bajo Bpt de elevado vacío (temperatura del horno 180-200ºC a 26,66 Pa, es decir, 0,2 torr), para obtener éster dimetílico del ácido 3-(metoxicarbonilmetilen)glutárico (89,08 g, 53%).
^{1}H RMN (CDCl_{3}): \delta 3,31 (2H, s, CH_{2}), 3,7 (9H, s, 3xOCH_{3}), 3,87 (2H, s, CH_{2}), 5,79 (1H, s, =CH) ppm.
^{13}C RMN (CDCl_{3}): \delta 36-56, CH_{3}, 48,7, 2xCH_{3}, 52,09 y 52,5 (2xCH_{2}), 122,3 y 146,16, C=CH, 165,9, 170,0 y 170,5, 3xCOO ppm.
Etapa 1(b)
Hidrogenación del éster dimetílico del ácido 3-(metoxicarbonilmetilen)glutárico
Se agitó éster dimetílico del ácido 3-(metoxicarbonilmetilen)glutárico (89 g, 267 mmol) en metanol (200 ml) con (paladio al 10% sobre carbón: 50% de agua) (9 g) bajo una atmósfera de hidrógeno gaseoso (3,5 x 10^{5} Pa o 3,5 bares) durante (30 h). Se filtró la solución a través de kieselguhr y se concentró a vacío, para obtener éster dimetílico del ácido 3-(metoxicarbonilmetil)glutárico como un aceite; rendimiento (84,9 g, 94%).
^{1}H RMN (CDCl_{3}): \delta 2,48 (6H, d, J=8Hz, 3xCH_{2}), 2,78 (1H, hextet., J=8Hz, CH), 3,7 (9H, s, 3xCH_{3}).
^{13}C RMN (CDCl_{3}): \delta 28,6, CH, 37,50, 3xCH_{3}, 51,6, 3xCH_{2}, 172,28, 3xCOO.
Etapa 1(c)
Reducción y esterificación del éster trimetílico al triacetato
Bajo una atmósfera de nitrógeno en un matriz de fondo redondo de 2 L y 3 cuellos, se trató hidruro de litio y aluminio (20 g, 588 mmol) en tetrahidrofurano (400 ml) con precaución con tris(metiloxicarbonilmetil)-metano (40 g, 212 mmol) en tetrahidrofurano (200 ml) a lo largo de 1 h. Se produjo una reacción fuertemente exotérmica, haciendo que el solvente llegara al reflujo fuertemente. Se calentó la reacción en un baño de aceite a 90ºC a reflujo durante 3 días. Se detuvo la reacción por adición cuidadosa gota a gota de ácido acético (100 ml) hasta que cesó el desprendimiento de hidrógeno. Se trató la mezcla de reacción agitada con cuidado con una solución de anhídrido acético (500 ml) a un ritmo tal que causara un suave reflujo. Se equipó al matraz para destilación y se agitó y luego calentó a 90ºC (temperatura del baño de aceite) para destilar el tetrahidrofurano. Se añadió otra porción de anhídrido acético (300 ml), se devolvió la reacción a la configuración de reflujo y se agitó y calentó en un baño de aceite a 140ºC durante 5 h. Se dejó que la reacción se enfriara y se filtró. Se lavó el precipitado de óxido de aluminio con acetato de etilo y se concentraron los filtrados combinados en un evaporador rotatorio a una temperatura de baño de agua de 50ºC a vacío (666,6 Pa o 5 mmHg), para obtener un aceite. Se recogió el aceite en acetato de etilo (500 ml) y se lavó con una solución acuosa saturada de carbonato de potasio. Se separó la solución de acetato de etilo, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró a vacío, para obtener un aceite. Se hizo una destilación de Kugelrohr del aceite a alto vacío, para obtener tris(2-acetoxietil)metano (45,3 g, 95,9%) como un aceite. P.e. 220ºC a 13,33 Pa, es decir, 0,1 mmHg.
^{1}H RMN (CDCl_{3}): \delta 1,66 (7H, m, 3xCH_{2}, CH), 2,08 (1H, s, 3xCH_{3}), 4,1 (6H, t, 3xCH_{2}O).
^{13}C RMN (CDCl_{3}): \delta 20,9, CH_{3}, 29,34, CH, 32,17, CH_{2}, 62,15, CH_{2}O, 171, CO.
Etapa 1(d)
Eliminación de los grupos acetato del triacetato
Se calentó tris(2-acetoxietil)metano (45,3 g, 165 mM) en metanol (200 ml) y amoníaco 880 (100 ml) en un baño de aceite a 80ºC durante 2 días. Se trató la reacción con otra porción de amoníaco 880 (50 ml) y se calentó a 80ºC en un baño de aceite durante 24 h. Se añadió otra porción de amoníaco 880 (50 ml) y se calentó la reacción a 80ºC durante 24 h. Se concentró entonces la reacción a vacío para eliminar todos los solventes y obtener un aceite. Se recogió éste en amoníaco 880 (150 ml) y se calentó a 80ºC durante 24 h. Se concentró después la reacción a vacío para eliminar todos los solventes y obtener un aceite. La destilación de Kugelrohr dio acetamida, p.e. 170-180, 26,66 Pa (0,2 mmHg). Se limpiaron por lavado las ampollas que contenían la acetamida y se continuó la destilación. El tris(2-hidroxietil)metano (22,53 g, 92%) destiló a p.e. 220ºC, 26,66 Pa (0,2 mmHg).
^{1}H RMN (CDCl_{3}): \delta 1,45 (6H, c, 3xCH_{2}), 2,2 (1H, quintete, CH), 3,7 (6H, t, 3xCH_{2}OH), 5,5 (3H, s amplio, 3xOH).
^{13}C RMN (CDCl_{3}): \delta 22,13, CH, 33,95, 3xCH_{2}, 57,8, 3xCH_{2}OH.
Etapa 1(e)
Conversión del triol en el tris(metanosulfonato)
A una solución helada agitada de tris(2-hidroxietil)metano (10 g, 0,0676 mol) en diclorometano (50 ml), se añadió lentamente por goteo una solución de cloruro de metanosulfonilo (40 g, 0,349 mol) en diclorometano (50 ml) bajo nitrógeno a un ritmo tal que la temperatura no subiera por encima de 15ºC. Se añadió entonces piridina (21,4 g, 0,27 mol, 4 eq.) disuelta en diclorometano gota a gota a un ritmo tal que la temperatura no subiera por encima de 15ºC, reacción exotérmica. Se dejó agitar a la reacción a temperatura ambiente durante 24 h y se trató después con una solución de ácido clorhídrico 5N (80 ml) y se separaron las capas. Se extrajo la capa acuosa con más diclorometano (50 ml) y se combinaron los extractos orgánicos, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vacío, para obtener tris[2-(metilsulfoniloxi)etil]metano contaminado con un exceso de cloruro de metanosulfonilo. El rendimiento teórico era de 25,8 g.
^{1}H RMN (CDCl_{3}): \delta 4,3 (6H, t, 2xCH_{2}), 3,0 (9H, s, 3xCH_{3}), 2 (1H, hextet., CH), 1,85 (6H, c, 3xCH_{2}).
Etapa 1(f)
Preparación de 1,1,1-tris(2-azidoetil)metano
Se trató una solución agitada de tris[2-(metilsulfoniloxi)etil]metano [de la Etapa 1(e), contaminado con un exceso de cloruro de metilsulfonilo] (25,8 g, 67 mmol, teórico) en DMF seca (250 ml) bajo nitrógeno con azida sódica (30,7 g, 0,47 mol) por porciones a lo largo de 15 minutos. Se observó una exotermia y se enfrió la reacción sobre un baño de hielo. Al cabo de 30 minutos, se calentó la mezcla de reacción en un baño de aceite a 50ºC durante 24 h. La reacción se volvió de color marrón. Se dejó que la reacción se enfriara, se trató con una solución diluida de carbonato de potasio (200 ml) y se extrajo tres veces con éter de petróleo/éter dietílico 40/60 10:1 (3x150 ml). Se lavaron los extractos orgánicos con agua (2x150 ml), se secaron sobre sulfato de sodio y se filtraron. Se añadió etanol (200 ml) a la solución de petróleo/éter para mantener la triazida en solución y se redujo el volumen a vacío a no menos de 200 ml. Se añadió etanol (200 ml) y se reconcentró a vacío para eliminar las últimas trazas de petróleo, dejando no menos de 200 ml de solución etanólica. Se usó la solución etanólica de triazida directamente en la Etapa 1(g).
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Precaución: no eliminar todo el solvente, ya que la azida es potencialmente explosiva y debe ser mantenida en solución diluida en todo momento.
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Se evaporaron menos de 0,2 ml de la solución a vacío para eliminar el etanol y se realizó una RMN sobre esta pequeña muestra.
^{1}H RMN (CDCl_{3}): \delta 3,35 (6H, t, 3xCH_{2}), 1,8 (1H, septete, CH), 1,6 (6H, c, 3xCH_{2}).
Etapa 1(g)
Preparación de 1,1,1-tris(2-aminoetil)metano
Se trató tris(2-azidoetil)metano (15,06 g, 0,0676 mol) (suponiendo un 100% de rendimiento de la reacción previa) en etanol (200 ml) con paladio al 10% sobre carbón (2 g, 50% de agua) y se hidrogenó durante 12 h. Se evacuó el recipiente de reacción cada 2 horas para eliminar el nitrógeno desprendido de la reacción y se volvió a llenar con hidrógeno. Se tomó una muestra para análisis de RMN para confirmar la completa conversión de la triazida en la triamina.
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Precaución: la azida no reaccionada podría explotar en la destilación.
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Se filtró la reacción a través de una almohadilla de celita para eliminar el catalizador y se concentró a vacío para obtener tris(2-aminoetil)metano como un aceite. Se purificó aún éste por destilación de Kugelrohr, p.e. 180-200ºC a 53,32 Pa o 0,4 mmHg, para obtener un aceite incoloro (8,1 g, 82,7% de rendimiento global a partir del triol).
^{1}H RMN (CDCl_{3}): 2,72 (6H, t, 3xCH_{2}N), 1,41 (H, septete, CH), 1,39 (6H, c, 3xCH_{2}).
^{13}C RMN (CDCl_{3}): \delta 39,8 (CH_{2}NH_{2}), 38,2 (CH_{2}), 31,0 (CH).
Ejemplo 2 Preparación alternativa de 1,1,1-tris(2-aminoetil)metano
Etapa 2(a)
Amidación del éster trimetílico con p-metoxi-bencilamina
Se disolvió tris(metiloxicarbonilmetil)metano [2 g, 8,4 mmol, preparado como en la Etapa 1(b) anterior] en p-metoxibencilamina (25 g, 178,6 mmol). Se ajustó el aparato para destilación y se calentó a 120ºC durante 24 h bajo un flujo de nitrógeno. Se monitorizó el progreso de la reacción por la cantidad de metanol recogida. Se enfrió la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se añadieron 30 ml de acetato de etilo y se agitó entonces la triamida producto precipitada durante 30 min. Se aisló la triamida por filtración y se lavó la torta del filtro varias veces con cantidades suficientes de acetato de etilo para eliminar el exceso de p-metoxibencilamina. Después de secar, se obtuvieron 4,6 g, 100%, de un polvo blanco. Se usó el producto altamente insoluble directamente en la etapa siguiente sin mayor purificación o caracterización.
Etapa 2(b)
Preparación de 1,1,1-tris[2-(p-metoxibencil-amino)etil]metano
En un matraz de fondo redondo de 1.000 ml y 3 cuellos enfriado en un baño de hielo-agua, se añadió cuidadosamente la triamida de la etapa 2(a) (10 g, 17,89 mmol) a 250 ml de una solución 1M de borano (3,5 g, 244,3 mmol). Tras completarse la adición, se retiró el baño de hielo-agua y se calentó la mezcla de reacción lentamente a 60ºC. Se agitó la mezcla de reacción a 60ºC durante 20 h. Se retiró una muestra de la mezcla de reacción (1 ml) y se mezcló con 0,5 ml de HCl 5N y se dejó reposar durante 30 min. Se añadieron a la mezcla 0,5 ml de NaOH 50, seguido de 2 ml de agua, y se agitó la solución hasta disolverse todo el precipitado blanco. Se extrajo la solución con éter (5 ml) y se evaporó. Se disolvió el residuo en acetonitrilo a una concentración de 1 mg/ml y se analizó por MS. De verse mono- y diamida (M+H/z = 520 y 534) en el espectro MS, la reacción no se hubo completado. Para completar la reacción, se añadieron otros 100 ml de solución en THF de borano 1M y se agitó la mezcla de reacción durante 6 horas más a 60ºC y se retiró una nueva mezcla siguiendo el procedimiento de toma de muestras previo. Se continuó con más adición de solución 1M de borano en THF según fuera necesario hasta haber una completa conversión en la triamina.
Se enfrió la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se añadió lentamente HCl 5N [Precaución: ¡se produjo una vigorosa formación de espuma!]. Se añadió HCl hasta que no se observó más desprendimiento de gas. Se agitó la mezcla durante 30 min. y se evaporó después. Se suspendió la torta en una solución acuosa de NaOH (20-40%, 1:2 p/v) y se agitó durante 30 minutos. Se diluyó entonces la mezcla con agua (3 volúmenes). Se extrajo luego la mezcla con éter dietílico (2 x 150 ml) [Precaución: no se deben usar solventes halogenados]. Se lavaron entonces las fases orgánicas combinadas con agua (1 x 200 ml) y salmuera (150 ml) y se secaron sobre sulfato de magnesio. Rendimiento tras la evaporación: 7,6 g, 84% como aceite.
^{1}H RMN (CDCl_{3}): \delta 1,45 (6H, m, 3xCH_{2}, 1,54 (1H, septete, CH), 2,60 (6H, t, 3xCH_{2}N), 3,68 (6H, s, ArCH_{2}), 3,78 (9H, s, 3xCH_{3}O), 6,94 (6H, d, 6xAr), 7,20 (6H, d, 6xAr).
^{13}C RMN (CDCl_{3}): \delta 32,17, CH, 34,44, CH_{2}, 47,00, CH_{2}, 53,56, ArCH_{2}, 55,25, CH_{3}O, 113,78, Ar, 129,29, Ar, 132,61, Ar, 158,60, Ar.
Etapa 2(c)
Preparación de 1,1,1-tris(2-aminoetil)metano
Se disolvió 1,1,1-tris[2-(p-metoxibencilami-no)etil]metano (20,0 gramos, 0,036 mol) en metanol (100 ml) y se añadió Pd(OH)_{2} (5,0 gramos). Se hidrogenó la mezcla (3 x 10^{5} Pa o 3 bares, 100ºC, en un autoclave) y se agitó durante 5 horas. Se añadió Pd(OH)_{2} en dos porciones más (2 x 5 gramos) después de 10 y 15 horas, respectivamente. Se filtró la mezcla de reacción y se lavó el filtrado con metanol. Se evaporó la fase orgánica combinada y se destiló el residuo a vacío (1 x 10^{-2}, 110ºC), para obtener 2,60 gramos (50%) de 1,1,1-tris(2-aminoetil)metano idéntico al del Ejemplo 1 previamente descrito.
Ejemplo 3 Preparación de 3-cloro-3-metil-2-nitrosobutano
Se enfrió una mezcla de 2-metilbut-2-eno (147 ml, 1,4 mol) y nitrito de isoamilo (156 ml, 1,16 mol) a -30ºC en un baño de "cardice" y metanol y se agitó vigorosamente con un agitador de aire de posición superior y se trató gota a gota con ácido clorhídrico concentrado (140 ml, 1,68 mol) a un ritmo tal que la temperatura se mantuviera por debajo de -20ºC. Esto requiere aproximadamente 1 h, ya que se produce una exotermia significativa y hay que tener cuidado de prevenir el sobrecalentamiento. Se añadió etanol (100 ml) para reducir la viscosidad de la suspensión que se había formado al final de la adición y se agitó la reacción a una temperatura de -20 a -10ºC durante 2 h más para completar la reacción. Se recogió el precipitado por filtración a vacío y se lavó con 4x30 ml de etanol frío (-20ºC) y 100 ml de agua helada y se secó a vacío, para obtener 3-cloro-3-metil-2-nitrosobutano como un sólido blanco. Se combinaron el filtrado etanólico y los lavados y se diluyeron con agua (200 ml), se enfriaron y se dejaron reposar durante 1 h a -10ºC, momento en el cual cristalizó otra cosecha de 3-cloro-3-metil-2-nitrosobutano. Se recogió el precipitado por filtración y se lavó con la mínima cantidad de agua y se secó a vacío, para obtener un rendimiento total de 3-cloro-3-metil-2-nitrosobutano (115 g, 0,85 mol, 73%) >98% puro por RMN.
^{1}H RMN (CDCl_{3}). Como una mezcla de isómeros (isómero 1, 90%), 1,5, d, (2H, CH_{3}), 1,65, d, (4H, 2xCH_{3}), 5,85, c, y 5,95, c, juntos 1H; (isómero 2, 10%), 1,76, s, (6H, 2xCH_{3}), 2,07 (3H, CH_{3}).
Se preparó 1-cloro-1-(1-nitrosoetil)ciclopentano de una forma análoga a partir de etilidenciclopentano (rendimiento 55%) [J. Org. Chem., 36(8), pp. 1169-70].
Se preparó 1-cloro-1-(1-nitrosoetil)ciclohexano de una forma análoga a partir de etilidenciclohexano (rendimiento 63%) [J. Org. Chem., 36(8), pp. 1169-70].
\delta_{H} (CDCl_{3}, 270 MHz), 1,52 (3H, d, J_{HH}, 7Hz, CH_{3}), 1,48-2,20 (10H, m, CH_{2}x5), 5,96 (1H, c, J_{HH}, 7Hz, CH).
Se preparó 1-cloro-1-metil-2-nitrosociclohexano de una forma análoga a partir de 1-metil-1-ciclohexeno (rendimiento 57%)[Ind. J. Chem. Sect. B (1978), 16B(10), 917-20; Z. Chem. (1981), 21(11), 404-5; J. Pract. Chem. (1978), 320(3), 433-51].
\delta_{H} (CDCl_{3}, 270 MHz), 1,41-2,28 (11H, m, CH_{3}, CH_{2}x4), 5,72-5,79 (1H, m, CH).
Ejemplo 4 Síntesis de bis[N-(1,1-dimetil-2-N-hidroxi-imidapropil)-2-aminoetil]-(2-aminoetilmetano (Compuesto 1)
A una solución de tris(2-aminoetil)metano (4,047 g, 27,9 mmol) en etanol seco (30 ml), se añadió carbonato de potasio anhidro (7,7 g, 55,8 mmol, 2 eq.) a temperatura ambiente con agitación vigorosa bajo una atmósfera de nitrógeno. Se disolvió una solución de 3-cloro-3-metil-2-nitrosobutano (7,56 g, 55,8 mol, 2 eq.) en etanol seco (100 ml) y se añadieron lentamente por goteo 75 ml de esta solución a la mezcla de reacción. Se siguió la reacción por TLC en sílice [se realizaron las placas con diclorometano, metanol, amoníaco concentrado (0,88 sg) 100/30/5 y se reveló la placa de TLC por pulverización con ninhidrina y calentamiento]. Se vieron los productos mono-, di- y trialquilados con RF crecientes en ese orden. Se realizó la HPLC usando una columna de fase invertida RPR en un gradiente de un 7,5 a un 75% de acetonitrilo en amoníaco acuoso al 3%. Se concentró la reacción a vacío para eliminar el etanol y se resuspendió en agua (110 ml). Se extrajo la suspensión acuosa con éter (100 ml) para eliminar parte del compuesto trialquilado y las impurezas lipofílicas, dejando el producto mono- y el dialquilado deseado en la capa acuosa. Se tamponó la solución acuosa con acetato de amonio (2 eq., 4,3 g, 55,8 mmol) para asegurar una buena cromatografía. Se guardó la solución acuosa a 4ºC durante la noche antes de purificarla por HPLC preparatoria automatizada.
Rendimiento (2,2 g, 6,4 mmol, 23%).
Espectro de masas: Ion positivo, voltaje de cono 10 V. Encontrado: 344; calculado M+H = 344.
^{1}H RMN (CDCl_{3}): \delta 1,24 (6H, s, 2xCH_{3}), 1,3 (6H, s, 2xCH_{3}), 1,25-1,75 (7H, m, 3xCH_{2}, CH), (3H, s, 2xCH_{2}), 2,58(4H, m, CH_{2}N), 2,88 (2H, t, CH_{2}N_{2}), 5,0 (6H, s, NH_{2}, 2xNH, 2xOH).
^{1}H RMN ((CD_{3})_{2}SO): \delta 1,1, 4xCH, 1,29, 3xCH_{2}, 2,1 (4H, t, 2xCH_{2}).
^{13}C RMN ((CD_{3})_{2}SO): \delta 9,0 (4xCH_{3}), 25,8 (2xCH_{3}), 31,0, 2xCH_{2}, 34,6, CH_{2}, 56,8, 2xCH_{2}N, 160,3, C=N.
Condiciones de HPLC: velocidad de flujo 8 ml/min. usando una columna PRP de 25 mm.
A = Solución de amoníaco al 3% (gr. sp. = 0,88)/agua.
B = Acetonitrilo.
\newpage
Tiempo % B
0 7,5
15 75,0
20 75,0
22 7,5
30 7,5
Se cargan 3 ml de solución acuosa por ciclo y se recoge en una ventana de tiempo de 12,5-13,5 min.
Ejemplo 5 La preparación del Compuesto 2 - el conjugado de benzamida del Compuesto 1
Se enfrió el Compuesto 1 (0,5 g, 1,45 mmol) en acetonitrilo seco (50 ml) y trietilamina (150 mg, 1,45 mmol) bajo una atmósfera de nitrógeno en un baño de hielo a 0ºC. Se añadió anhídrido benzoico (330 mg, 1,45 mmol) a la reacción agitada y se dejó calentar hasta la temperatura ambiente y se dejó agitar durante la noche. Se eliminó el acetonitrilo a vacío y se redisolvió el residuo en 50 ml de diclorometano, se lavó con carbonato de potasio acuoso (2 x 50 ml), se separó y se secó sobre sulfato de sodio. Se extrajo la solución de carbonato de potasio acuosa con diclorometano (2 x 50 ml), se secó sobre sulfato de sodio y se concentraron los extractos diclorometánicos combinados a vacío hasta obtener una goma. La HPLC analítica indicó que el producto no era tan puro como se requería y se purificó, por lo tanto, el material por HPLC preparatoria automatizada, obteniéndose el Compuesto 2. El producto fue analizado como una mancha por TLC y por HPLC analítica.
Condiciones de HPLC: velocidad de flujo de 8 ml/min. usando una columna PRP de 150 mm x 25 mm.
Muestra cargada en 2 ml de etanol al 30% en agua por ciclo.
A = Solución de amoníaco al 3% (gr. Sp. = 0,88)/agua.
B = Acetonitrilo.
Tiempo % B
0 7,5
15 75,0
20 75,0
22 7,5
30 7,5
El producto requerido eluyó a los 15,25-16,5 min. Se evaporó la solución de producto a vacío para obtener (304 mg, 0,68 mmol, 47%) de una espuma vítrea incolora, p.f. 55ºC.
^{1}H RMN (CDCl_{3}): 1,26 (12H, s, 4xCH_{3}), 1,43 (2H, m, CH_{2}), 1,57 (4H, m, CH_{2}), 1,75 (1H, m, CH), 1,823 (6H, s, 2xCH_{3}), 2,58 (4H, m, 2xCH_{2}N), 3,56 (2H, m, CH_{2}NHCO), 6,95 (1H, m, NHCO), 7,42 (3H, m, 3xArH), 7,79 (2H, d, ArH).
^{13}C RMN (CDCl_{3}): 10,09, 25,7, 26,1, 28,5, 32,8, 33,3, 37,93, 57,57, 127,0, 128,4, 131,4, 158,98, 168,15.
M/S C_{24}H_{41}N_{5}O_{3} M+H = 448. Encontrado 448.
RF: 0,8 en CH_{2}Cl_{2}:MeOH:Amoníaco 880 100:30:5, visualizado con ninhidrina.
\newpage
Ejemplo 6 Síntesis de bis[(1,1-dimetil-2-N-hidroxiimina-propil)-2-aminoetil]-(2-(glutarilamida)etil)metano [Compuesto 4: el derivado glutarilamida del Compuesto 1]
Se enfrió el Compuesto 1 (0,5 g, 1,45 mmol) en acetonitrilo seco (50 ml) y trietilamina (150 mg, 1,45 mmol) bajo una atmósfera de nitrógeno en un baño de hielo a 0ºC. Se añadió anhídrido glutárico (165 mg, 1,45 mmol) a la reacción agitada y se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se dejó agitar durante la noche. Se recogió el precipitado formado durante la noche por filtración y se secó a vacío, para obtener una muestra impura del compuesto del título (267 mg, 0,583 mmol, 40%). Se concentró el filtrado a vacío para obtener un cristal incoloro, que junto con el precipitado que había sido recogido, fue redisuelto en amoníaco 0,880 sg al 5% y agua (50 ml) y purificado por HPLC preparatoria automatizada.
Condiciones de HPLC: velocidad de flujo 8 ml/min. usando una columna PRP de 150 mm x 25 mm.
Se cargó la muestra en 2 ml de solución por ciclo.
A = Solución de amoníaco al 3% (gr. sp. = 0,88)/agua.
B = Acetonitrilo.
Tiempo % B
0 7,5
15 75,0
20 75,0
22 7,5
31 7,5
El producto requerido eluyó a los 15,25-16,5 min. Se evaporó la solución de producto a vacío para obtener (304 mg, 0,68 mmol, 47%) de una espuma vítrea incolora, p.f. 54,8ºC. El producto fue analizado como una mancha tanto por TLC como por HPLC analítica.
^{1}H RMN (DMSO): 0,7 (12H, s, 4xCH_{3}), 0,85 (4H, m, 2xCH_{2}), 1,0 (1H, m, CH), 1,3 (6H, s, 2xCH_{3}), 1,3 (4H, m, 2xCH_{2}), 1,6 (2H, m, CH_{2}), 1,75 (6, m, 3xCH_{2}), 2,6 (2, m, 2xOH), 3,2 (2H, t, NH), 7,3 (1H, t, NH).
^{13}C RMN (CD_{3}SO): 8,97, 20,51, 20,91, 25,09, 25,60, 31,06, 33,41, 33,86, 56,89, 66,99, 160,07, 1712,34, 174,35, 174,56.
M/S C_{22}H_{43}N_{5}O_{5} M+H = 457. Encontrado 457,6.
Ejemplo 7 Síntesis del péptido Ac-NQEQVSP(3-I)YTLLKG protegido
Se organizó el péptido protegido Ac-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Gln(Trt)-Val-Ser(tBu)-Pro-Tyr(3I)-Thr(tBu)-Leu-Leu-Lys(Boc)-Gly-OH sobre una resina de fase sólida de 2-clorotritilo anclando Fmoc-Gly- a la resina y luego con ciclos sucesivos de desprotecciones/copulación con los aminoácidos protegidos apropiados y los reactivos copulantes DCCI y HOBt. Se aciló la asparraguina terminal, se escindió de la resina usando TFA al 0,5% y se usó el péptido sin mayor purificación.
Ejemplo 8 Síntesis del Compuesto 5 - Un conjugado peptídico del Compuesto 1
Se escindió el péptido Ac-NQEQVSPY(3I)TLLKG protegido del Ejemplo 7 de la resina de fase sólida y se copuló después con el Compuesto 1 en solución usando hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitrispirrolidino-fosfonio y 1-hidroxibenzotriazol como agentes copulantes. Se obtuvo el Compuesto 5 por desprotección en reactivo K (el reactivo K es TFA al 82,5%, fenol al 5%, agua procesada al 5%, tioanisol al 5% y etanoditiol al 2,5%). Se purificó primeramente el péptido bruto por RP-HPLC usando TFA, seguido de una segunda purificación y de intercambio salino con ácido acético, liofilización, filtración con un filtro de 0,22 \mu y una liofilización final, para obtener el Compuesto 5.
Se preparó el conjugado de quelato aza-diaminadioxima de la técnica anterior (Compuesto 6 - véase la Figura 1) del mismo péptido, es decir, Ac-NQEQVSPY(3I)TLLKG, del mismo modo con fines comparativos.
Ejemplo 9 Preparación de 1-(1-{3-(2-aminoetil)-5-[1-(1-hidroxiiminoetil)ciclohexilamino]pentilamino}ciclohexil)-etanona dioxima [Compuesto 7]
11
A una solución de 1,1,1-tris(2-amino-etil)metano (0,96 g, 6,6 mmol) en etanol seco (7,5 ml), se añadieron carbonato de potasio (anhidro) (1,8 g, 13 mmol) y trietilamina (1,33 g, 13 mmol) a temperatura ambiente con agitación vigorosa bajo una atmósfera de nitrógeno. Se añadió gota a gota una solución de 1-cloro-1-(1-nitrosoetil)ciclohexano (2,3 g, 13 mmol) en diclorometano (30 ml) a lo largo de 1 h. Se dejó entonces la mezcla en agitación a temperatura ambiente durante 18 h. Se eliminó luego el solvente a presión reducida. Se añadieron entonces agua (30 ml) y éter (25 ml) al residuo de reacción. Se separaron después la fase acuosa y la fase orgánica.
HPLC:
ISOCRÁTICA: 90% de B (MeOH) y 10% (NH_{3} al 3%). Extracto etérico: la HPLC mostró dos bandas mayores - primera banda: dioxima, segunda banda: trioxima. Dioxima: (0,55 g, 20%), FAB m/z 424 (M+H), HRMS: Encontrado: 424,3642, calculado: 424,3652 (C_{23}H_{45}N_{5}O_{2}).
RMN:
\delta_{H} (CDCl_{3}, 270 MHz), 1,34-1,72 (33H, m, CH, CH_{2} x 13, CH_{3} x 2), 2,18-2,33 (4H, m, NCH_{2} x 2), 2,56-2,69 (2H, m, NCH_{2}).
Se preparó el compuesto 1-(1-{3-(2-amino-etil)-5-[1-(1-hidroxiiminoetil)ciclohexilamino]pentilamino}ciclohexil)etanona dioxima [Compuesto 8] de un modo análogo:
12
FAB m/z 396 (M+H), HRMS: Encontrado: 396,3322, calculado: 396,3339 (C_{21}H_{42}N_{5}O_{3}).
Ejemplo 10 Radiomarcaje comparativo con ^{99m}Tc del Compuesto 2 frente al correspondiente análogo aza (Compuesto 3, técnica anterior)
Se preparó una formulación liofilizada que contenía:
23 \mug de Compuesto 2 (el derivado benzamida del Compuesto 1 - véase el Ejemplo 3),
36 \mug de cloruro estannoso dihidrato,
90 \mug de medronato trisódico y
4,0 mg de acetato de sodio,
sellada bajo nitrógeno gaseoso (USP/NF) en un vial de vidrio de 10 ml.
Se reconstituyó ésta con pertecnetato de ^{99m}Tc en solución salina de un generador de ^{99m}Tc a temperatura ambiente y se estudió la PRQ por HPLC e ITLC (cromatografía en capa fina instantánea). Se compararon los resultados con los del Compuesto 3 y se muestran en las Tablas 1 y 2:
TABLA 1
Resultados de la pureza radioquímica por ITLC (%):
Compuesto 3 Compuesto 3 Compuesto 2
(técnica (técnica
anterior) anterior)
Tiempo post- pH 9 pH 10 pH 9
reconstitución
(min.)
15 13,2 37,0 96,5
12,8 36,4
30 28,4 55,3 96,3
24,3 53,4
60 47,8 69,5 97,0
44,4 71,0
120 77,4 85,0
71,1 82,7
TABLA 2 Resultados de la pureza radioquímica por ITLC y HPLC para el Compuesto 2 (%):
Compuesto 2
Tiempo post-reconstitución pH 9
(min.)
15 ITLC 95 (5% RHT)
15 HPLC 97,7
donde RHT = tecnecio hidrolizado reducido.
Ejemplo 11 Marcaje con ^{99m}Tc del Compuesto 5 - Un conjugado peptídico del Compuesto 1
Se selló una formulación liofilizada que contenía:
50 \mug de PABA (ácido para-aminobenzoico),
30 \mug de SnCl_{2},
90 \mug de MDP (ácido metilendifosfónico),
1,32 mg de NaHCO_{3},
98 \mug de Na_{2}CO_{3} y
4 mg de NaOAc
bajo nitrógeno gaseoso en un vial de vidrio de 10 ml. Se retiró el vial del almacenamiento en congelador y se dejó a temperatura ambiente durante 15 minutos y se reconstituyó después con 100 \mul de una solución que contenía Compuesto 5, es decir, el conjugado quelante peptídico Ac-Asn-Gln-Glu-Gln-Val-Ser-Pro-(I-Tyr)-Thr-Leu-Leu-Lys-Gly-[Compuesto 1] (2 mg en 2 ml de agua), y X ml de pertecnetato de ^{99m}Tc en solución salina, con una concentración radiactiva de 0,5 GBq/ml, procedente de un generador de ^{99m}Tc Amertec II, a temperatura ambiente. Se midió la actividad usando una cámara de iones. Se midió la PRQ usando ITLC y HPLC. En la Tabla 3 se muestran los resultados para diferentes valores de X:
TABLA 3
Resultados de la pureza radioquímica por ITLC y HPLC para el Compuesto 5 (%)
Prep. Volumen de Actividad Tiempo post- PRQ (%) PRQ (%)
reconstitución (GBq) reconstitución (HPLC) (ITLC)
X (ml) (min.)
1 2 1,04 15 99,4
255 86,8 99,2
2 2 1 15 83,0 99,3
60 85,2
3 5 2,47 15 86,5 99,3
150 87,6
4 2 1,02 15 99,1
140 86,6
Ejemplo 12 Captación in vitro por los coágulos de Compuesto 5 marcado con ^{99m}Tc frente a la del Compuesto 6 marcado con ^{99m}Tc (técnica anterior)
Se llevó a cabo el radiomarcaje con ^{99m}Tc según el Ejemplo 10.
Se retiraron plasma (5 ml por artículo de ensayo) y trombina (100 unidades\cdotml^{-1}) del almacenamiento (-20ºC) y se dejó que se descongelaran hasta la temperatura ambiente. Se observó el plasma antes de su uso para asegurarse de que no había evidencia de formación de coágulos o de degradación de la muestra.
Se añadieron 10 \mul de ^{99m}Tc-Compuesto 5 o de ^{99m}Tc-Compuesto 6 a un vial de 5 ml de plasma (rata, conejo, perro y humano). Se añadieron 10 \mul de ^{99m}Tc-DTPA a un segundo vial que contenía 5 ml de plasma en paralelo como control negativo. Se produjeron mezclas de incubación formadoras de coágulos por adición de 800 \mul de tampón tris calcio y 40 \mul de solución de trombina bovina a cuatro viales (tampón formador de coágulos rico en calcio/trombina). Para la incubación sin formación de coágulos, se produjeron las mezclas de ensayo de unión de fondo por adición de 800 \mul de solución salina tamponada con tris a 40 \mul de agua AnalaR (tampón no formador de coágulos deficiente en calcio/trombina).
Se añadieron 400 \mul de plasma humano al que se había añadido artículo de ensayo (^{99m}Tc-Compuesto 5 o ^{99m}Tc-Compuesto 6) o de control negativo radiomarcado (^{99m}Tc-DTPA) cada uno por cuadruplicado a las dos mezclas de incubación rica en calcio/trombina y deficiente en calcio/trombina. Se añadió una sola varilla desfibrinadora a cada vial para facilitar la coagulación del plasma. Se incubaron los viales de ensayo a temperatura ambiente durante 1 hora. Se finalizó la reacción por adición de 1 ml de una solución de EDTA 0,4M a cada vial P7.
Se determinó la radiactividad total presente (por cuadruplicado) añadiendo muestras de 400 \mul de plasma al que previamente se había añadido artículo de ensayo y de controles negativos a viales de centelleo de vidrio individuales. Se determinó la radiactividad asociada a estos patrones por escintigrafía de yoduro de sodio. Se decantaron los contenidos de cada vial P7 sobre filtros de nitrocelulosa bloqueados con BSA individuales sobre un colector de vacío. Se aclaró cada vial P7 con 2 ml de solución de TBST. Se aclaró entonces cada filtro con cuatro lavados de 5 ml de solución de TBST. Se secaron los coágulos durante 1 hora sobre el colector de vacío. Se transfirieron entonces los papeles de filtro a viales de centelleo individuales y se determinó la radiactividad presente.
Se factorizó la unión no específica del artículo de ensayo al filtro de nitrocelulosa restando la radiactividad total presente en la mezcla formadora de coágulos de la radiactividad total presente en la mezcla no formadora de coágulos. Se expresó la captación en el coágulo solo (específica y no específica) como porcentaje de captación del artículo de ensayo en el plasma dividiendo la radiactividad presente en el coágulo solo por la radiactividad media presente en los patrones de plasma y multiplicando luego por 100:
% Captación = % captación en un coágulo, sobre un filtro - % captación sobre un filtro x 100 (corrección de fondo)
Se determinó el porcentaje de unión específica como la captación radiactiva únicamente debida al Factor XIIIa, que formó enlaces covalentes isopeptídicos entre la fibrina y el artículo de ensayo. La unión específica fue calculada restando el porcentaje de captación con corrección de fondo (filtro de nitrocelulosa) del control negativo radiomarcado (^{99m}Tc-DTPA), que no tenía afinidad por FXIIIa, del porcentaje de captación con corrección de fondo (filtro de nitrocelulosa) del artículo de ensayo radiomarcado.
Unión específica del artículo de ensayo = % captación del artículo de ensayo - % captación de DTPA {}\hskip1.2cm (al coágulo) 
\hskip3.7cm
(en el coágulo) 
\hskip2.2cm
(en el coágulo) Efectos sobre la eficacia in vitro
Los datos compararon la captación de ^{99m}Tc-Compuesto 5 y de ^{99m}Tc-Compuesto 6 en un coágulo de plasma en formación in vitro. No hubo diferencia significativa (p>0,05) en la eficacia de estas dos moléculas (30,66 \pm 5,01 en comparación con 29,69 \pm 6,33) en este modelo de coagulación.
Ejemplo 13 Marcaje con ^{99m}Tc del Compuesto 9
13
El Compuesto 9 es el conjugado del Compuesto 1 con el péptido cíclico mostrado, es decir, [Compuesto 1]-Cys-Cys-Glu-Leu-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Ala-Cys-Tyr-OH.
El Compuesto 9 fue preparado de un modo análogo a los Ejemplos 7 y 8 y se marcó con ^{99m}Tc en solución (Preparación 1) o mediante un kit liofilizado según el Ejemplo 10 (Preparación 2).
Para la Preparación 1, se disolvieron 100 \mug de Compuesto 9 en 1 ml de tampón borato a pH 8,5. Se transfirió éste a un vial P6 y se selló. Se añadió 1 ml de pertecnetato de ^{99m}Tc en solución salina (1,0 GBq/ml, de un generador Amertec II) a temperatura ambiente junto con 0,1 ml de solución de SnCl_{2} (10 mg de SnCl_{2} en 100 ml de solución salina purgada con N_{2}). Se midió la radiactividad usando una cámara de iones. Se midió la PRQ usando ITLC y HPLC.
La Preparación 1 mostró una PRQ del 96% por ITLC y la Preparación 2 una PRQ del 82% por HPLC.

Claims (30)

1. Un conjugado quelante de fórmula:
\vskip1.000000\baselineskip
14 
\vskip1.000000\baselineskip
donde:
cada R^{1}, R^{2} y R^{3} es independientemente un grupo R;
Y es -(A)_{n}-X-Z,
donde:
X es -NR^{4}-, -CO_{2}-, -N(C=S)-, -N(C=O)-, -S- o -O-;
Z es un resto de abordaje biológico, que representa los péptidos o análogos peptídicos 3-100-méricos, que pueden ser péptidos lineales o péptidos cíclicos o sus combinaciones; anticuerpos monoclonales o sus fragmentos; o substratos o inhibidores de enzimas; compuestos de unión de receptores sintéticos; oligonucleótidos o fragmentos de oligoADN u oligoARN;
R^{4} es independientemente un grupo R;
-(A)_{n}- es un grupo de enlace, donde cada A es independientemente -CR_{2}-, -CR=CR-, -C=C-, -NRCO-, -CONR-, -SO_{2}NR-, -NRSO_{2}-, -CR_{2}OCR_{2}-, -CR_{2}SCR_{2}-, -CR_{2}NRCR_{2}-, un grupo cicloheteroalquileno C_{4-8}, un grupo cicloalquileno C_{4-8}, un grupo arileno C_{5-12}, un grupo heteroarileno C_{3-12} o un resto de polialquilenglicol, ácido poliláctico o ácido poliglicólico;
n es un número entero con un valor de 0 a 10;
cada grupo R es independientemente H o alquilo C_{1-10}, alquilarilo C_{3-10}, alcoxialquilo C_{2-10}, hidroxialquilo C_{1-10} o fluoroalquilo C_{1-10}, o 2 o más grupos R, junto con el átomo al que están unidos, forman un anillo carbocíclico o heterocíclico saturado o insaturado.
2. El conjugado quelante de la reivindicación 1, donde R^{3} es H.
3. El conjugado de las reivindicaciones 1 y 2, donde cada R^{2} es H.
4. El conjugado de las reivindicaciones 1 a 3, donde x es -NR^{4}- o -CO_{2}-.
5. El conjugado de las reivindicaciones 1 a 4, donde -(A)_{n}- consiste en una cadena de esqueleto de 2 a 10 átomos.
6. El conjugado de las reivindicaciones 1 a 5, donde Y es -CH_{2}CH_{2}-X-Z.
7. El conjugado de las reivindicaciones 1 a 6, donde R^{1} es alquilo C_{1-3}, alcoxialquilo C_{2-4}, hidroxialquilo C_{1-3} o fluoroalquilo C_{1-3}.
\newpage
8. El conjugado de las reivindicaciones 1 a 7, de fórmula:
15
donde cada R^{1} es independientemente alquilo C_{1-3} o fluoroalquilo C_{1-3}.
9. El conjugado quelante de la reivindicación 8, donde los grupos R^{1} son todos CH_{3}.
10. El conjugado de las reivindicaciones 1 a 9, donde Z es un péptido 3-20-mérico.
11. Un complejo radiometálico del conjugado quelante de las reivindicaciones 1 a 10.
12. El complejo radiometálico de la reivindicación 11, donde el complejo radiometálico es eléctricamente neutro.
13. El complejo radiometálico de las reivindicaciones 11 y 12, donde el radiometal es ^{99m}Tc.
14. Un agente radiofarmacéutico que comprende el complejo radiometálico de las reivindicaciones 11 a 13 en una forma adecuada para administración a humanos.
15. El agente radiofarmacéutico de la reivindicación 14, donde el radiometal es ^{99m}Tc.
16. Un kit para la preparación del agente radiofarmacéutico de ^{99m}Tc de la reivindicación 15, que incluye:
(i)
el conjugado quelante de las reivindicaciones 1 a 10 y
(ii)
un agente reductor biocompatible.
17. El kit de la reivindicación 16, donde el agente reductor biocompatible es estannoso.
18. Un compuesto de fórmula:
16
donde:
cada R^{1}, R^{2} y R^{3} es independientemente un grupo R;
E es -(A)_{n}J,
\newpage
donde:
J es un grupo funcional adecuado para conjugación a Z;
-(A)_{n} es un grupo de enlace donde cada A es independientemente -CR^{2}-, -CR=CR-, -C\equivC-, -NRCO-, -CONR-, -SO_{2}NR-, -NRSO_{2}-, -CR_{2}OCR_{2}-, -CR_{2}SCR_{2}-, -CR_{2}NRCR_{2}-, un grupo cicloheteroalquileno C_{4-8}, un grupo cicloalquileno C_{4-8}, un grupo arileno C_{5-12}, un grupo heteroarileno C_{3-12} o un resto de polialquilenglicol, ácido poliláctico o ácido poliglicólico;
n es un número entero con un valor de 0 a 10;
cada grupo R es independientemente H o alquilo C_{1-10}, alquilarilo C_{3-10}, alcoxialquilo C_{2-10}, hidroxialquilo C_{1-10} o fluoroalquilo C_{1-10}, o dos o más grupos R, junto con los átomos a los que están unidos, forman un anillo carbocíclico, heterocíclico, saturado o insaturado.
19. El compuesto de la reivindicación 18, donde J es -NR^{5}R^{6}, -CO_{2}M, -NCS, -NCO, -SM^{1}, -OM^{1}, maleimida o acrilamida,
donde R^{5} y R^{6} son independientemente un grupo R o P^{G};
M es H, un catión, P^{G} o un éster activo;
M^{1} es H o P^{G}, y
P^{G} es un grupo protector.
20. El compuesto de las reivindicaciones 18 ó 19, donde R^{3} es H.
21. El compuesto de las reivindicaciones 18 a 20, donde cada R^{2} es H.
22. El compuesto de las reivindicaciones 18 a 21, donde R^{1} es alquilo C_{1-3}, alcoxialquilo C_{2-4}, hidroxialquilo C_{1-3} o fluoroalquilo C_{1-3}.
23. El compuesto de las reivindicaciones 18 a 22, donde -(A)_{n}- consiste en una cadena de esqueleto de 2 a 10 átomos.
24. El compuesto de las reivindicaciones 18 a 23, donde E es -CH_{2}CH_{2}-J.
25. El compuesto de la reivindicación 24, donde J es -NHR^{5} y R^{5} es H o alquilo C_{1-3}.
26. El compuesto
\vskip1.000000\baselineskip
17 
\vskip1.000000\baselineskip
27. Un compuesto de fórmula
HC(CH_{2}CH_{2}NR^{7}R^{8})_{3}
donde R^{7} y R^{8} son independientemente H o P^{G}, o R^{7} y R^{8} juntos forman P^{G}, donde P^{G} es un grupo protector, o una sal del mismo.
28. El compuesto HC(CH_{2}CH_{2}NH_{2})_{3}.
\newpage
29. Un procedimiento para la preparación del compuesto de la reivindicación 18, que consiste en la alquilación de un compuesto de Fórmula IV:
18
con cualquiera de:
(i) un compuesto cloronitroso de fórmula Cl-C(R^{1})_{2}-CH(NO)R^{1}, o
(ii) una alfa-clorooxima de fórmula Cl-C(R^{1})_{2}-C(=NOH)R^{1} o
(iii) una alfa-bromocetona de fórmula Br-C(R^{1})_{2}-C(=O)R^{1}, seguido de conversión del producto diaminadicetona en la diaminadioxima con hidroxilamina,
donde A, J, R^{1}, R^{2}, R^{3} y n son como se ha definido en la reivindicación 18.
30. Un procedimiento para la preparación del compuesto de la reivindicación 26, que consiste en la alquilación de HC(CH_{2}CH_{2}NH_{2})_{3} con cualquiera de:
(i) un derivado cloronitroso de fórmula Cl-C(CH_{3})_{2}-CH(NO)CH_{3}, o
(ii) una alfa-clorooxima de fórmula Cl-C(CH_{3})_{2}-C(=NOH)CH_{3} o
(iii) una alfa-bromocetona de fórmula Br-C(CH_{3})_{2}-C(=O)CH_{3}, seguido de conversión del producto diaminadicetona en la diaminadioxima con hidroxilamina.
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Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1379885A4 (en) * 2001-01-05 2005-07-06 Univ Duke CONTRAST REINFORCING AGENT FOR MAGNETIC RESONANCE IMAGING
HU230901B1 (hu) * 2001-07-10 2019-01-28 Ge Healthcare Limited Peptidalapú vegyületek és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények
NO20030115D0 (no) * 2003-01-09 2003-01-09 Amersham Health As Kontrastmiddel
US7785566B2 (en) 2003-11-06 2010-08-31 Ge Healthcare, Inc. Pharmaceutical compounds
GB0416062D0 (en) * 2004-07-19 2004-08-18 Amersham Plc Improved N4 chelator conjugates
US7431914B2 (en) 2003-11-24 2008-10-07 Ge Healthcare As Contrast agent
US7763234B2 (en) * 2004-03-04 2010-07-27 Ge Healthcare As Pharmaceutical compounds
JP5116480B2 (ja) * 2004-11-22 2013-01-09 ジーイー・ヘルスケア・アクスイェ・セルスカプ 造影剤
GB0427392D0 (en) * 2004-12-15 2005-01-19 Amersham Plc Stabilised 99mTc compositions
ES2380680T3 (es) * 2005-06-08 2012-05-17 Ge Healthcare Limited Procedimiento de uso de monóxido de carbono [11C] en la síntesis de marcaje interno de ésteres marcados con 11C mediante carbonilación fotoinducida de radicales libres sensitizados
GB0515974D0 (en) * 2005-08-03 2005-09-07 Ge Healthcare Ltd Compounds and imaging methods
US8124806B2 (en) 2006-02-15 2012-02-28 Ge Healthcare As Contrast agents
US7943117B2 (en) * 2006-06-08 2011-05-17 Atomic Energy Council—Institute of Nuclear Research Method for testing radiochemical purity of Tc-99m-TRODAT-1
JP2010512310A (ja) * 2006-12-11 2010-04-22 ジーイー・ヘルスケア・アクスイェ・セルスカプ 放射性標識ペプチド系化合物及びその使用
CN102300866B (zh) 2008-12-02 2015-08-26 墨尔本大学 作为放射性药物的含氮大环共轭物
GB0922014D0 (en) 2009-12-17 2010-02-03 Ge Healthcare Ltd Novel integrin binders
ES2804509T3 (es) * 2010-07-27 2021-02-08 Serac Healthcare Ltd Composiciones radiofarmacéuticas
GB201103696D0 (en) * 2011-03-04 2011-04-20 Ge Healthcare Ltd Technetium labelled peptides
GB201110767D0 (en) 2011-06-24 2011-08-10 Ge Healthcare Ltd Infection imaging
US20130195756A1 (en) 2012-01-31 2013-08-01 General Electric Company 99mTc IMAGING AGENTS AND METHODS OF USE
CN105377287A (zh) * 2013-02-15 2016-03-02 托马斯杰弗逊大学 用于肿瘤成像的试剂盒
GB201314936D0 (en) 2013-08-21 2013-10-02 Ge Healthcare Ltd Radiolabelling method
GB201322456D0 (en) 2013-12-18 2014-02-05 Ge Healthcare Ltd Radiotracer compositions and methods
EP3131585B1 (en) 2014-03-19 2020-07-15 Universität Zürich Multidentate bifunctional chelating agents for radionuclide complexation in diagnostics and therapy
WO2019217571A1 (en) * 2018-05-08 2019-11-14 University Of Miami Materials and methods for the delivery of therapeutic nucleic acids to tissues
CN112105393A (zh) 2018-05-16 2020-12-18 爱默蕾大学 苯乙烯基苯并噻唑衍生物及在成像中的用途
CN111548275A (zh) * 2020-05-27 2020-08-18 龙曦宁（上海）医药科技有限公司 一种2-（氨基甲基）-n1,n1-二甲基丙烷-1,3-二胺三盐酸盐的合成方法

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1588978A (en) * 1977-07-19 1981-05-07 Ici Ltd Coating processes
DE3930674A1 (de) * 1989-09-11 1991-03-21 Diagnostikforschung Inst Bifunktionelle chelatbildner zur komplexierung von tc- und re-isotopen, verfahren zu ihrer herstellung und darstellung von konjugaten daraus sowie deren verwendung in diagnostik und therapie
US5849261A (en) * 1991-02-08 1998-12-15 Diatide, Inc. Radiolabeled vasoactive intestinal peptides for diagnosis and therapy
US5808091A (en) * 1991-10-29 1998-09-15 Bracco International B.V. Rhenium and technetium complexes containing a hypoxia localizing moiety
JP3083157B2 (ja) * 1993-08-04 2000-09-04 アマーシャム・インターナショナル・ピーエルシー 酸素欠乏性組織に局在する放射性金属錯体
CA2156605A1 (en) * 1994-01-12 1995-07-20 Bracco International B.V. Ligands and metal complexes thereof
CA2179990A1 (en) * 1994-01-12 1995-07-20 Gary Robert Bower Biological targeting agents
HUP0102154A3 (en) * 1998-05-15 2009-01-28 Ge Healthcare Ltd Labelled glutamine and lysine analogues
US6783711B2 (en) * 2000-05-23 2004-08-31 Ge Osmonics, Inc. Process for preparing a sulfonamide polymer matrix
JP4009198B2 (ja) 2001-03-08 2007-11-14 松下電器産業株式会社 インクジェット記録用インク、該インクの製造方法、並びに該インクを備えたインクカートリッジ及び記録装置

Also Published As

Publication number Publication date
US8852550B2 (en) 2014-10-07
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CA2450690A1 (en) 2003-01-23
CN100509061C (zh) 2009-07-08

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