ES2276168T3

ES2276168T3 - Acidos (4s,8s)- y (4r,8r)-4-p-nitrobencil-8-metill-3,6,9-triaza-3n,6n,9n-tricarboximetil-1,11-undecanodioicos y sus derivados, procedimientos para su preparacion y su utilizacion para la preparacion de agentes farmaceuticos.

Info

Publication number: ES2276168T3
Application number: ES03815696T
Authority: ES
Inventors: Lutz Lehmann; Matthias Friebe; Thomas Brumby; Detlev Sulzle; Johannes Platzek
Original assignee: Bayer Schering Pharma AG
Current assignee: Bayer Pharma AG
Priority date: 2003-02-04
Filing date: 2003-12-22
Publication date: 2007-06-16
Anticipated expiration: 2023-12-22
Also published as: ATE352538T1; JP4878119B2; DE50306415D1; AR043021A1; DE10305463A1; DK1590317T3; EP1590317B1; AU2003296740A1; JP2006514081A; WO2004069787A1; EP1590317A1; PT1590317E

Abstract

Compuestos de las fórmulas generales VIIa y VIIb (Ver fórmula) en las que Z representa un átomo de hidrógeno o un equivalente a ion metálico de un elemento con el número atómico 2129, 31, 32, 37-39, 42-44, 46, 47, 49, 58-71, 75, 77, 82 ó 83, A representa un grupo -COO-. R representa un grupo nitro, un grupo amino, u otro grupo funcional, que se puede unir con una biomolécula, o representa un radical alquilo de C1 - C25 lineal o ramificado, saturado o insaturado, y eventualmente interrumpido por uno a seis átomos de O, o respectivamente grupos fenileno, -NHCO-, -CONH-, (Ver fórmula) y/o -NH-(C=S)-NH, que está sustituido eventualmente en un sitio arbitrario con uno a seis grupos carboxilo, grupos hidroxilo, grupos amino u otros grupos funcionales, así como sus sales con bases orgánicas e inorgánicas, con las condiciones de que el radical alquilo ha de contener por lo menos un grupo funcional, que se pueda unir con una biomolécula, y de que por lo menos dos grupos Z han de representar un equivalente a ion metálico.

Description

Ácidos (4S,8S)- y (4R,8R)-4-p-nitrobencil-8-metil-3,6,9-triaza-^{3}N,^{6}N,^{9}N-tricarboximetil-1,11-undecanodioicos y sus derivados, procedimientos para su preparación y su utilización para la preparación de agentes farmacéuticos.

El invento se refiere a los objetos caracterizados en las reivindicaciones, es decir a los ácidos (4S,8S)- y (4R,8R)-4-p-nitrobencil-8-metil-3,6,9-triaza-^{3}N,^{6}N,^{9}N-tricarboximetil-1,11-undecanodioicos y a sus derivados, a procedimientos para su preparación y a su utilización para la preparación de agentes farmacéuticos destinados al radiodiagnóstico, a la radioterapia o al diagnóstico por RMN.

La utilización de radiofármacos (agentes farmacéuticos radiológicos) para finalidades diagnósticas y terapéuticas se conoce desde hace mucho tiempo en el sector de la investigación biológica y médica. En particular, se utilizan radiofármacos para representar determinadas estructuras tales como, por ejemplo, el esqueleto, órganos o tejidos. La utilización en diagnóstico presupone el uso de agentes radiactivos que, después de su aplicación, se enriquecen específicamente en las estructuras en pacientes, que deben de ser examinados. Estos agentes radiactivos, que se enriquecen localmente, pueden ser rastreados, registrados o escintigrafiados luego por medio de detectores adecuados, tales como, por ejemplo, cámaras de escintilación u otros adecuados procedimientos de registro. La distribución y la intensidad relativa del agente radiactivo detectado caracteriza el lugar de una estructura, en el que se encuentra el agente radiactivo, y puede representar la presencia de anomalías en estructuras y funciones, alteraciones patológicas, etc.

De una manera similar se pueden administrar al paciente radiofármacos como agentes terapéuticos, a fin de irradiar determinados/as tejidos o zonas enfermos/as. Tal tratamiento requiere la preparación de agentes terapéuticos radiactivos que se enriquecen en determinadas/os estructuras, órganos o tejidos.

Un radiofármaco, desarrollado por la entidad IDEC Pharmaceuticals Corp. para la terapia del linfoma no de Hodgkin, lo constituye el Zevalin® (véase p.ej. la cita Cancer (2002) Feb. 15: 94, (4º Suplemento):1.349-57). El ion radiante es en este caso el ^{90}Y que emite rayos \beta, que está unido a un anticuerpo específico para tumores a través de un compuesto formador de quelatos (un derivado de ácido dietilen-triamina-penta-acético sustituido con metilo (MX-DTPA)).

La resonancia magnética nuclear (RMN) es hoy en día un método del diagnóstico médico aplicado ampliamente, que es aprovechado para la formación de imágenes in vivo, con el que se pueden representar vasos corporales y tejidos corporales (inclusive tumores) a través de la medición de las propiedades magnéticas de los protones en el agua corporal. Para esto, se emplean p.ej. agentes de contraste, que producen en las imágenes resultantes un refuerzo del contraste mediante la influencia sobre determinados parámetros de RMN de los protones corporales (p.ej. de los períodos de tiempo de relajación T^{1} y T^{2}), o respectivamente, que hacen legibles por primera vez estas imágenes. Sobre todo se utilizan compuestos complejos con iones paramagnéticos, tales como p.ej. compuestos complejos que contienen gadolinio (p.ej. Magnevist®) debido al efecto de los iones paramagnéticos sobre el acortamiento de los períodos de tiempo de relajación.

Tanto los iones paramagnéticos, tales como p.ej.: Gd^{3+}, Mn^{2+}, Cr^{3+}, Fe^{3+} y Cu^{2+} así como también muchos radionúclidos metálicos, no se pueden administrar en una forma libre como soluciones, puesto que son altamente tóxicos. A fin de hacer que estos iones sean adecuados para una aplicación in vivo, ellos se convierten, por regla general, en complejos con éstos. Por ejemplo, en el documento de solicitud de patente europea EP-A-0.071.564 se describen, entre otros compuestos, la sal de meglumina del complejo con gadolinio(III) del ácido dietilen-triamina-penta-acético (DTPA) como agente de contraste para la tomografía por RMN. Una formulación, que contiene este complejo, fue admitida mundialmente bajo el nombre Magnevist® como primer agente de contraste por RMN. Este agente de contraste se distribuye extracelularmente después de una aplicación por vía intravenosa y es segregado por vía renal mediante secreción glomerular. No se observa prácticamente ningún paso de éste a través de membranas celulares intactas. El Magnevist® es especialmente bien adecuado para la representación de zonas patológicas (p.ej. inflamaciones y tumores).

Sin embargo, los agentes radioterapéuticos y de contraste conocidos no se pueden emplear satisfactoriamente para todos los casos de aplicación. Así, muchos de estos agentes se distribuyen por todo el espacio extracelular del cuerpo. Con el fin de aumentar la eficiencia de estos agentes en el diagnóstico in vivo y en la terapia, se intenta aumentar su especificidad y su selectividad, por ejemplo, para células diana o para zonas y estructuras deseadas del cuerpo. Un mejoramiento de estas propiedades se puede conseguir, por ejemplo, mediante acoplamiento de los complejos metálicos con biomoléculas según el principio de la liberación dirigida del fármaco (en inglés "drug-targeting"). Como biomoléculas se recomiendan proteínas plasmáticas, anticuerpos, sus fragmentos, hormonas, factores de crecimiento y substratos de receptores y enzimas (véase p.ej. el documento de solicitud de patente internacional WO 97/12850, del Institut für Diagnostikforschung an der FU Berlin (Instituto para la Investigación Diagnóstica en la Universidad Libre de Berlin)). No obstante, hasta ahora la especificidad para tumores (el enriquecimiento en tumores) no es en muchos casos lo suficientemente alta, lo que constituye un objetivo importante especialmente en la terapia radiológica inmunológica.

Además, es deseable poner a disposición agentes para el diagnóstico y la terapia que, junto a una especificidad para dianas lo más alta que sea posible, posean una gran estabilidad in vivo para los iones metálicos covertidos en complejos, que en la mayoría de los casos son tóxicos.

Una misión del invento fue, por lo tanto, poner a disposición nuevos agentes para el diagnóstico radiológico y por RMN, así como para la radioterapia, que no tengan las desventajas mencionadas y que tengan en particular una alta estabilidad in vivo, una buena compatibilidad y sobre todo unas propiedades específicas para los órganos respectivos. Por una parte, la retención en los tejidos tumorales u órganos, que se han de examinar, ha de ser suficiente como para conseguir, con una dosificación pequeña, la calidad de imágenes que es necesaria para un diagnóstico y una terapia eficientes, y respectivamente una irradiación suficiente. Por otra parte, ha de ser posible a continuación una segregación lo más rápida y amplísimamente completa que sea posible de los metales desde el cuerpo. Además, los agentes de contraste para RMN deben de mostrar una alta relaxividad de protones y, por consiguiente, permitir una reducción de la dosis en el caso de un aumento de la intensidad de la señal.

Se emprendieron diferentes ensayos para mejorar las propiedades de derivados bioacoplables de DTPA mediante la introducción de sustituyentes.

Brechbiel y colaboradores describen p.je. una síntesis detallada de derivados de DTPA sustituidos con metilo, que se pueden acoplar, por ejemplo, con anticuerpos ("A Convenient Synthesis of Bifunctional Chelating Agents Based on Diethylentriaminepentaacetic Acid and Their Coordination Chemistry with Yttrium" [Una síntesis conveniente de agentes quelantes bifuncionales basados en el ácido dietilen-triamina-pentaacético y su química de coordinación con itrio], Bioconjugate Chemistry, (1991), 180-186. "Synthesis of (1-(p-isothiocyanatobenzyl) derivatives of DTPA and EDTA. Antibody Labeling and Tumor-Imaging Studies." (Síntesis de derivados con (1-(p-isotiocianato-bencilo) de DTPA y EDTA. Marcación con anticuerpos y estudios de formación de imágenes de tumores), Inorg. Chem. (1986), 25, 2.772-2.781). En la solicitud de patente internacional WO 88/01618, de Gansow y colaboradores, se divulga un DTPA, que está provisto de un sustituyente metilo en la posición 8 y de un sustituyente bencilo funcionalizado en para en la posición 4.

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El compuesto I se denominó MX-DTPA, mx-DTPA o también 1B4M-H_{5}DTPA.

La solicitud de patente internacional WO 01/41743 de la entidad IDEC Pharmaceuticals Corporation describe una síntesis regioselectiva del compuesto I, que parte de la (S)-p-nitrofenil-alanina protegida con Boc y de una diamina monoprotegida. El centro estereogénico en la posición 4 de este compuesto se describe como configurado (S); el centro estereogénico en la posición 8 no es definido.

Como ya se ha citado más arriba, el MX-DTPA es una parte componente de la formulación ZEVALIN® para el tratamiento del linfoma no de Hodgkin. Aquí también se emplea como ligando quelante la mezcla de (4S,8R)- y (4S,8S)-MX-DTPA.

McMurry y colaboradores (en J. Med. Chem., (1998), 41, 3.546-3.549) pudieron mostrar que unos DTPA's sustituidos con ciclohexilo, que están sustituidos con nitrobencilo, poseen una configuración preferida debido a la estructura rígida y voluminosa del anillo de ciclohexano. Así, el compuesto II tiene una estabilidad in vivo más alta que el compuesto III.

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A pesar de que el MX-DTPA (I) mostraba unas propiedades bien investigadas y aceptables - p.ej. una estabilidad aumentada del complejo, comparada con la del DTPA sin sustituir -, sigue siendo todavía deseable aumentar adicionalmente in vivo la estabilidad del complejo metálico y poner a disposición agentes para el diagnóstico y la terapia, que tengan una seguridad lo más alta que sea posible.

Se ha encontrado, por fin, que unos derivados de MX-DTPA, en los que el sustituyente metilo (en la posición 8), relativamente pequeño, ha sido introducido de una manera enantioselectiva, en el caso de presentar una configuración adecuada, de manera sorprendente tienen in vitro una estabilidad termodinámica manifiestamente más alta que la mezcla de diastereómeros (IV) (véase más abajo).

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En este caso, tal como se ha descubierto, la configuración de los sustituyentes metilo y bencilo debe de presentarse como (4S,8S) (véase el compuesto Va) o (4R,8R) (véase el compuesto Vb), a fin de alcanzar el efecto positivo descrito. Las configuraciones (4S,8R) o (4R,8S) (véase el compuesto VI a o respectivamente b) conducen, por el contrario, a una estabilidad disminuida del complejo. Un experimento expresivo dado a modo de ejemplo pudo mostrar que en una mezcla de, en cada caso, un equivalente de Va (R = -NO_{2}), de VIa (R = -NO_{2}) y de una sal de Gd(III), se forma casi exclusivamente el complejo con Gd del compuesto Va. Además, se pudo determinar la constante de estabilidad termodinámica para el compuesto Va con un valor de logK_{y} = 24,7 \pm 0,7, que, por lo tanto, está manifiestamente aumentada frente a la constante de estabilidad de la mezcla de diastereómeros IV (logK_{y} = 22,5 (véase J. Med. Chem. (1998), 41, 3.546-3.549)). Además, se ha encontrado que la radiotoxicidad del complejo metálico del compuesto Va in vivo está reducida en comparación con la del compuesto VIa.

Este resultado es inesperado y sorprendente, puesto que en el caso del sustituyente metilo en la posición 8 no se trata de una estructura rígida, "que organiza el espacio" o es exigente estéricamente, tal como es el caso con el sustituyente ciclohexilo de los compuestos II y III. Así, hubiera sido de esperar que la totalidad de los cuatro estereoisómeros tuviesen unas propiedades casi iguales de formación de complejos. Como ya se describe, se mostró no obstante que, en comparación, los compuestos Va y Vb conformes al invento poseen unas propiedades de formación de complejos manifiestamente mejores que los compuestos VIa y VIb.

Además de esto, los compuestos conformes al invento muestran una buena relaxividad y una buena solubilidad en agua, por lo que ellos se adecuan como agentes farmacéuticos en particular para el diagnóstico radiológico y por RMN, así como para la radioterapia.

El invento se refiere, por consiguiente, a compuestos de las fórmulas generales VIIa y VIIb

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en las que

Z: representa un átomo de hidrógeno o un equivalente a ion metálico de un elemento con el número atómico 21-29, 31, 32, 37-39, 42-44, 46, 47, 49, 58-71, 75, 77, 82 u 83,

A: representa un grupo -COO-.

R: representa un grupo nitro, un grupo amino, u otro grupo funcional, que se puede unir con una biomolécula, o representa un radical alquilo de C_{1} - C_{25} lineal o ramificado, saturado o insaturado, y eventualmente interrumpido por uno a seis átomos de O, o respectivamente grupos fenileno,

\quad: -NHCO-, -CONH-,

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y/o -NH-(C=S)-NH, que eventualmente está sustituido en un sitio arbitrario con uno a seis grupos carboxilo, grupos hidroxilo, grupos amino u otros grupos funcionales, así como a sus sales con bases orgánicas e inorgánicas, con las condiciones de que el radical alquilo ha de contener por lo menos un grupo funcional, que se pueda unir con una biomolécula, y de que por lo menos dos grupos Z han de representar un equivalente a ion metálico.

El radical R puede representar un radical alquilo con 1 - 25 átomos de carbono (conteniendo éste por lo menos un grupo funcional). Este radical alquilo puede ser lineal o ramificado, estar saturado o insaturado (p.ej.:

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y está provisto en un sitio arbitrario de uno a seis grupos carboxilo, hidroxilo y/o amino (p.ej.:

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o de por lo menos otro grupo de unión funcional, que se puede unir con una biomolécula - tal como p.ej. carboxilo, carboxilo activado, amino, nitro, isocianato, isotiocianato, hidrazino, semicarbazido, tiosemicarbazido, cloroacetamido, bromoacetamido, yodoacetamido, acrilo, acilamino, de anhídridos mixtos, azido, de cloruro de ácido, de hidróxido, de cloruro de sulfonilo, vinil-sulfono, carbodiimido, maleimido, dioxo u otro grupo de unión funcional (p.ej.

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El radical alquilo de C_{1} - C_{25} puede estar interrumpido eventualmente por uno a seis átomos de O, grupos fenileno,

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-NHCO-, -CONH-, -O-(CO)-NH-

y/o -NH-(C=S)-NH (p.ej.:

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R puede representar también un grupo funcional propiamente dicho, tal como p.ej. carboxilo, carboxilo activado, amino, nitro, isocianato, isotiocianato, hidrazino, semicarbazido, tiosemicarbazido, cloroacetamido, bromoacetamido, yodoacetamido acrilo, acilamino, de anhídridos mixtos, azido, de cloruro de ácido, de bromuro de ácido, de hidróxido, de cloruro de sulfonilo, vinil-sulfono, carbodiimido, maleimido o diazo (p.ej.:

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u otro grupo de unión funcional.

Un gran número de los sustituyentes R posibles, antes mencionados, permiten una reacción selectiva con grupos funcionales de las biomoléculas en el intervalo óptimo de pH, por ejemplo la reacción por adición con grupos -SH (cisteína en la biomolécula), y ciertamente de manera exclusiva de grupos -SH, p.ej. con maleimidas (compuestos de (2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-ilo), véase más arriba) o bromoacetamidas, cuando el acoplamiento tiene lugar en el intervalo de pH débilmente ácido.

Por un grupo carboxilo activado se entienden precedentemente los grupos carboxilo, que están derivatizados de tal manera que facilitan la reacción con una biomolécula. Se conoce qué grupos se pueden utilizar para la activación, y se puede remitir, por ejemplo, a la cita de M. y A. Bodanszky, "The Practice of Peptide Synthesis" (Práctica de la síntesis de péptidos), editorial Springer, 1984. Ejemplos de ellos son aductos del ácido carboxílico con carbodiimidas o ésteres activados, tales como p.ej. el éster hidroxibenzotriazólico. Se prefiere en particular el grupo carboxilo activado para X, escogido entre

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y

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Los ésteres activados de los compuestos precedentemente descritos se preparan tal como es conocido para un experto en la especialidad. Para el caso de isotiocianatos o de \alpha-halógenoacetatos, los correspondientes compuestos precursores de aminas terminales se hacen reaccionar, de acuerdo con métodos conocidos a partir de la bibliografía, con tiofosgeno o halogenuros de ácidos 2-halo-acéticos. También es posible la reacción con ésteres correspondientemente derivatizados de N-hidroxisuccinimida tales como, por ejemplo:

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.(Hal = halógeno).

Por lo general, para esta finalidad se pueden utilizar todos los métodos de activación usuales para ácidos carboxílicos, que son conocidos en el estado de la técnica. Si el sustituyente R contiene un grupo amido, entonces éste se prepara, por ejemplo, haciendo reaccionar un ácido carboxílico activado con una amina. La activación del ácido carboxílico se efectúa según los métodos usuales. Ejemplos de adecuados reactivos de activación son diciclohexil-carbodiimida (DCC), hidrocloruro de 1-etil-3-(3-dimetilamino-propil)-carbodiimida (EDC), hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi-tris(dimetilamino)-fosfonio (BOP) y hexafluorofosfato de O-(benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametil-uronio (HBTU), de manera preferida DCC. También es posible la adición de catalizadores nucleófilos en O, tales como p.ej. N-hidroxi-succinimida (NHS) o N-hidroxi-benzotriazol.

Si en los casos de los sustituyentes se trata de una función de ácido carboxílico, entonces ésta se puede emplear en una forma protegida (p.ej. en forma del éster bencílico); la separación del grupo protector se puede efectuar entonces hidrogenolíticamente.

Con el fin de unir esta función de ácido carboxílico con un grupo funcional adecuado de una biomolécula adecuada (acerca de la descripción de biomoléculas: véase más abajo), por regla general, ésta se debería activar primeramente. Preferiblemente, para esto se producen de manera intermedia ésteres activados, que luego son atacados por un grupo nucleófilo de la biomolécula. De esta manera, se forma un enlace covalente entre la biomolécula y el compuesto de la fórmula I. Ésteres activados preferidos son los ésteres de la N-hidroxi-succinimida, los ésteres del para-nitro-fenol o los ésteres del pentafluoro-fenol. Si el grupo funcional se debe de unir en forma de un isotiocianato con la biomolécula, entonces se utiliza preferiblemente en primer lugar una amina terminal, la cual, cuando sea necesario, puede ser provista de un grupo protector adecuado. Grupos protectores adecuados se conocen a partir de la química de los péptidos. Después de haber separado el grupo protector, mediante reacción de la amina primaria terminal con tiofosgeno, se puede producir el isotiocianato. Con éste pueden reaccionar por adición grupos nucleófilos de la biomolécula.

La síntesis de los conjugados se efectúa por regla general produciendo primeramente un ligando o un complejo de quelato derivatizado y funcionalizado, que luego se une con la biomolécula. Sin embargo, también es posible que, en el caso de la utilización de biomoléculas preparadas sintéticamante, el ligando o el complejo de quelato conforme al invento sea incorporado, durante la síntesis de la biomolécula, en ésta. Esto se puede efectuar, por ejemplo, durante la síntesis secuencial de oligopéptidos en un robot para realizar síntesis. Caso de que sea necesario, para esto, los grupos protectores usuales en la síntesis de la correspondiente biomolécula se pueden introducir en el compuesto conforme al invento. Éstos se pueden separar luego de nuevo, con arreglo a los algoritmos usuales de síntesis, en el aparato sintetizador.

Los compuestos conformes al invento contienen por lo menos dos centros de quiralidad (en las posiciones 4 y 8). También, R puede contener uno o varios centros adicionales de quiralidad, no diferenciándose ni en las memorias descriptivas ni en las reivindicaciones entre los diferentes enantiómeros, si bien los compuestos mencionados abarcan siempre a ambos enantiómeros y, en el caso de presentarse varios estereocentros, también abarcan a todos los diastereómeros posibles, así como a sus mezclas.

Por "una biomolécula" se entiende en el presente caso cualquier molécula, que o bien se presenta en la naturaleza, por ejemplo en el cuerpo, o se había preparado por síntesis con una estructura análoga. Además de esto, por este concepto se entienden aquellas moléculas que pueden entrar en interacción con una molécula que se presenta biológicamente, por ejemplo en el cuerpo, o con una estructura que se presenta allí, de tal manera que, por ejemplo, los conjugados se enriquecen en determinados lugares deseados del cuerpo. Por "un cuerpo" se entiende en el presente caso cualquier cuerpo vegetal o animal, prefiriéndose cuerpos de animales y en particular de seres humanos.

Las biomoléculas son en particular las moléculas que se presentan en seres vivos, que, como productos de una selección evolutiva, cumplen misiones específicas para el organismo por medio de una cooperación ordenada y compleja, y que constituyen el fundamento de sus funciones vitales (metabolismo y cambio de forma, procreación, balance energético). En las biomoléculas, en la mayoría de los casos, a partir de eslabones sencillos (aminoácidos, nucleobases, monosacáridos, ácidos grasos, etc.) se forman moléculas más grandes (proteínas, ácidos nucleicos, polisacáridos, lípidos, etc.). Las correspondientes macromoléculas se designan también como biopolímeros.

Ventajosamente, la biomolécula puede tener, por ejemplo, un entramado polipeptídico a base de aminoácidos con cadenas laterales, que pueden pasar a realizar una reacción con el grupo reactivo de los compuestos conformes al invento. Tales cadenas laterales incluyen, por ejemplo, los grupos carboxilo de radicales de ácido aspártico y ácido glutámico, los grupos amino de radicales de lisina, los grupos aromáticos de radicales de tirosina e histidina y los grupos sulfhidrilo de radicales de cisteína.

Una recopilación acerca de biomoléculas, acompañada de numerosos ejemplos, se encuentra en la obra "Chemie der Biomoleküle" (Química de las biomoléculas) de la TU-Graz (Universidad Técnica de Graz) (H. Berthold y colaboradores, Institut für Organische Chemie (Instituto de Química Orgánica), TU-Graz, 2001), que se puede examinar también a través del internet bajo la dirección www.orgc.tu-graz.ac.at. El contenido de este documento se recoge como referencia en la presente memoria descriptiva.

Para la formación de los conjugados conformes al invento son especialmente adecuadas las siguientes biomoléculas:

biopolímeros, proteínas, tales como proteínas, que tienen una función biológica, HSA (albúmina de suero humano), BSA (albúmina de suero bovino), etc., proteínas y péptidos, que se enriquecen en determinados sitios en el organismo (p.ej. junto a receptores, membranas celulares, canales, etc.), péptidos disociables por proteasas, péptidos con sitios sintéticos de rotura preestablecida (p.ej. ésteres, amidas lábiles (inestables), etc.), péptidos, que son disociados por metaloproteasas, péptidos con engarzadores fotodisociables, péptidos con grupos disociables con agentes oxidantes (oxidasas), péptidos con aminoácidos naturales y no naturales, glicoproteínas (glicopéptidos), proteínas señalizadoras, proteínas antivíricas y apoctosis, biopolímeros modificados sintéticamente, tales como biopolímeros derivatizados con engarzadores, metaloproteasas modificadas y oxidasas derivatizadas, etc., hidratos de carbono (desde mono- hasta poli-sacáridos), tales como azúcares derivatizados, azúcares disociables en el organismo, ciclodextrinas y sus derivados, aminoazúcares, quitosana, polisulfatos y derivados de ácido acetil-neuramínico, anticuerpos, tales como anticuerpos monoclonales, fragmentos de anticuerpos, anticuerpos policlonales, minicuerpos (en inglés minibodies), cadenas individuales (en inglés single chains) (también las que están unidas con engarzadores para formar múltiples fragmentos), glóbulos rojos sanguíneos y otros componentes de la sangre, marcadores de cáncer (p.ej. CAA) y sustancias de adhesión entre células (p.ej. Lewis X y derivados anti-Lewis X), fragmentos de ADN y ARN, tales como ADN's y ARN's derivatizados (p.ej. los que se encontraron por medio del procedimiento SELEX), ARN y ADN sintéticos (también con bases no naturales), PNA's (de Hoechst) y antisentido, \beta-aminoácidos (de Seebach), aminas vectoras para su introducción en la célula, aminas biogénicas, agentes farmacéuticos, formulaciones oncológicas, polímeros sintéticos, que están dirigidos hacia una diana biológica (p.ej. un receptor), esteroides (naturales y modificados), prostaglandinas, taxol y sus derivados, endotelinas, alcaloides, ácido fólico y sus derivados, lípidos bioactivos, grasas, ésteres de ácidos grasos, mono-, di- y tri-glicéridos modificados sintéticamente, liposomas, que están derivatizados junto a su superficie, micelas a base de ácidos grasos naturales o de compuestos perfluoroalquílicos, porfirinas, texafrinas, porfirinas ampliadas, citocromos, inhibidores, neuraminidasas, neuropéptidos, inmunomoduladores, tales como FK 506, CAPE y gliotoxina, endoglicosidasas, substratos, que son activados por enzimas tales como calmodulina cinasa, caseína-cinasa II, glutatión-S-transferasa, heparinasa, metaloproteasas de la matriz, cinasa de receptores de \beta-insulina, UDP-galactosa-4-epimerasa, fucosidasas, proteínas G, galactosidasas, glicosidasas, glicosil-transferasas y xilosidasa, antibióticos, vitaminas y compuestos análogos a vitaminas, hormonas, intercaladores de ADN, nucleósidos, nucleótidos, lectinas, vitamina B12, Lewis X y sustancias afines, psoralenos, antibióticos del tipo de dieno-trienos, carbaciclinas, VEGF (del inglés vascular endotelial growth factor = factor endotelial de crecimiento vascular), somatostatina y sus derivados, derivados de biotina, antihormonas, proteínas y productos sintéticos específicas/os para tumores, polímeros, que se enriquecen en zonas ácidas o básicas del cuerpo (distribución regulada por el pH), mioglobinas, apomioglobinas, etc., péptidos de neurotransmisores, factores de necrosis de tumores, péptidos, que se enriquecen en un tejido inflamado, reactivos Bloodpool (de agrupaciones de sangre), proteínas transportadoras de aniones y cationes, poliésteres (p.ej. del ácido láctico), poliamidas y polifosfatos.

La mayoría de las biomoléculas antes mencionadas se pueden adquirir comercialmente, por ejemplo, de las entidades Merck, Aldrich, Sigma, Calbiochem o Bachem.

Además, como biomoléculas se pueden emplear todos los "grupos de unión a proteínas plasmáticas" o respectivamente "grupos de unión a dianas", que se divulgan en los documentos WO 96/23526 y WO 01/08712. El contenido de estos dos documentos de publicación se recoge por su referencia en la presente memoria descriptiva.

El número de los compuestos conformes al invento de la fórmula VII a o VII b por cada biomolécula es, en principio, arbitrario, pero se prefiere una relación molecular de 0,3:1 a 11:1, en particular de 0,5:1 a 7:1.

Además, los compuestos de las fórmulas VIIa y b se adecuan para la conjugación con todas aquellas moléculas que se hacen reaccionar en el estado de la técnica con colorantes fluorescentes, con el fin de, por ejemplo, determinar su localización mediante microscopía de epifluorescencia dentro de la célula. También, los compuestos se pueden conjugar con medicamentos en principio arbitrarios, a fin de, después de la administración del medicamento, vigilar el transporte dentro del organismo mediante la técnica de RMN o de escintigrafía. Además, es posible que los conjugados conformes al invento a base de los compuestos de las fórmulas VII a y b y de las biomoléculas, contengan otras moléculas adicionales, que han sido conjugadas con las biomoléculas. Por el concepto de "biomolécula" se abarcan en el sentido del invento, por lo tanto, todas las moléculas que se presentan en sistemas biológicos, y todas las moléculas, que son biocompatibles (acerca de la definición de biomoléculas, véase más arriba).

La relaxividad de los complejos paramagnéticos conformes al invento es tan alta, que éstos se adecuan particularmente bien para el diagnóstico por RMN.

Los compuestos conformes al invento se fijan a proteínas. Esta propiedad les posibilita para que, fijados a proteínas plasmáticas, permanezcan durante más largo tiempo en el torrente sanguíneo, y hagan posible de esta manera una representación del espacio de los vasos sanguíneos. Además de esto, se hace posible también una representación de sitios con una permeabilidad aumentada, tal como se pueden hallar, por ejemplo, en tumores. Esta permeabilidad vascular aumentada constituye además el fundamento de la terapia de tumores con complejos metálicos radiactivos. El fármaco abandona el vaso sanguíneo dentro del tumor, permanece en el tejido y expone a a éste a su radiación terapéuticamente eficaz.

La fijación a proteínas plasmáticas hace posible también un diagnóstico por formación de imágenes para la localización de infartos o necrosis como consecuencia del enriquecimiento de las sustancias conformes al invento en el infarto o en la necrosis.

La detección, la localización y la vigilancia de necrosis o infartos es un sector importante en la medicina. Así, el infarto de miocardio no resulta inmediatamente en un tejido no apto para funcionar de manera irrecuperable, sino que inicia un proceso dinámico, que se extiende durante un largo período de tiempo (de semanas a meses). La enfermedad transcurre en aproximadamente tres fases, que no están separadas nítidamente entre ellas, sino que se solapan. La primera fase, el desarrollo del infarto de miocardio, abarca las 24 horas después del infarto, en las que la destrucción progresa como una onda de choque (fenómeno de frente de onda) desde el subendocardio al miocardio. La segunda fase, la del infarto ya existente, abarca la estabilización de la zona, en la que tiene lugar la formación de fibras (fibrosis) como un proceso de curación. La tercera fase, el infarto totalmente curado, comienza después de que todo el tejido destruido ha sido reemplazado por un tejido cicatricial fibroso. Durante este período tiene lugar una extensa reestructuración.

Para la evaluación de un infarto de miocardio tiene una importancia decisiva saber lo grande que es la porción del tejido perdido definitivamente durante el infarto y en qué sitio se efectuó la pérdida, puesto que el tipo de la terapia depende de este conocimiento.

Los infartos se efectúan no sólo en el miocardio, sino también en otros tejidos tales como el cerebro o en los riñones.

Mientras que el infarto es curable hasta cierto punto, en el caso de una necrosis, es decir la muerte tisular limitada localmente, sólo se pueden impedir o por lo menos aliviar las secuelas dañinas para el organismo restante. Las necrosis pueden resultar de muchas maneras por: heridas, agentes químicos, déficit de oxígeno o por una radiación. Como en el caso del infarto, el conocimiento de la extensión y del tipo de una necrosis es importante para el modo de proceder ulterior de los médicos.

La preparación de los compuestos conformes al invento de las fórmulas VIIa y b se efectúa, en los compuestos de las fórmulas generales VII'a y VII'b

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en las que Z' significa un grupo protector de carboxilo, separando de una manera en sí conocida los grupos protectores Z' y haciendo reaccionar los ácidos así obtenidos, de una manera en sí conocida, con por lo menos un óxido metálico o una sal metálica de un elemento con los números atómicos 21-29, 31, 32, 37-39, 42-44, 46, 47, 49, 58-71, 75, 77, 82 ó 83 y a continuación, caso de que se desee, los átomos de hidrógeno ácidos presentes se transforman, con compuestos inorgánicos y/u orgánicos o aminoácidos, en sales fisiológicamente compatibles.

Como grupo protector Z' de carboxilo entran en cuestión grupos alquilo, arilo y aralquilo inferiores, por ejemplo los grupos metilo, etilo, propilo, butilo, fenilo, bencilo, difenilmetilo, trifenilmetilo, bis(4-nitro-fenil)-metilo, así como trialquil-sililo.

La separación de los grupos protectores Z' se efectúa de una manera en sí conocida, por ejemplo, mediante hidrólisis, saponificación en condiciones alcalinas de los ésteres, de manera preferida con un álcali en una solución alcohólica-acuosa a unas temperaturas de 0ºC a 50ºC o, en el caso de ésteres bencílicos, mediante hidrogenación catalítica y, en el caso de los ésteres terc.-butílicos, mediante una hidrólisis en condiciones ácidas, por ejemplo, con ácido clorhídrico o trifluoroacético (véase la obra "Protective Groups in Organic Synthesis" (Grupos protectores en la síntesis orgánica), 2ª edición, T.W. Greene y P.G.M. Wutz, John Wiley & Sons, Inc. Nueva York, 1991).

La preparación de los compuestos conformes al invento de las fórmulas VII a y VII b se ilustra seguidamente con el Ejemplo del compuesto 1 escogido, en el que Z' es terc.-butilo.

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Mediante saponificación en condiciones alcalinas y un subsiguiente tratamiento con intercambiadores de iones, el compuesto 1 se puede transformar en el compuesto VII'a con ácidos carboxílicos libres.

El compuesto 1 se forma a partir de la triamina 2 mediante una reacción de alquilación con el éster terc.-butílico de ácido bromoacético en el seno de una mezcla de acetonitrilo y agua, con carbonato de potasio como base.

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El compuesto 2 es accesible mediante reducción de la amida 3 con un complejo de un borano con tetrahidrofurano. En este caso se siguen las condiciones,

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como se describen, por ejemplo, en J. Amer. Chem. Soc., (1990), 9.608.

La amida 3 se prepara, a partir de la diamina 4 doblemente protegida con Boc, mediante reacción con ácido trifluoroacético y diclorometano.

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La formación de la amida 4 se efectúa en este caso según métodos bien conocidos para un experto en la especialidad, por ejemplo de la activación con un ácido por medio de

- cloruro de oxalilo: J. Org. Chem., 29: 843 (1964)

- cloruro de tionilo: Helv., 42: 1.653 (1959)

- carbodiimidas: Helv. 46: 1.550 (1963)

- carbodiimidas/hidroxisuccinimida: J. Am. Chem. 86: 1.839 (1964), así como J. Org. Chem. 53: 3.583 (1988); Synthesis 453 (1972)

- el método de un anhídrido:, 2-etoxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina: J. Am. Chem. Soc. 90:1.651 (1986); Int. J. Pept. Prot. Res., 26:493 (1985); Am. Soc. 73: 3.547 (1951)

- el método del imidazoliduro: Am. Soc. 91: 2.691 (1969)

J. Med. Chem. 1996, 392.596; Tetrahedron Letters 1994, 35, 5.981; Bioorg. Med. Letters 1996, 6, 55; J. Chem. Soc. Commun. 1994, 201,

a partir del ácido 5 obtenible comercialmente y de la amina monoprotegida 6.

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El compuesto 6 se produce mediante reducción de la azida 7 con hidrógeno y Pd/C en acetato de etilo.

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El compuesto 7 resulta de la reacción de sustitución del mesilato 8 con aziduro de sodio.

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El mesilato 8 se puede obtener mediante reacción con el alcohol 9 y cloruro de ácido metanosulfónico.

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El alcohol 9 es el producto de una reacción de (S)-2-amino-1-propanol (10), obtenible comercialmente, y dicarbonato de di-terc.-butilo [(Boc)_{2}O] en tetrahidrofurano.

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El grupo nitro contenido en el compuesto 1 sirve, después de su transformación en el grupo amino, directamente como sitio de fijación para biomoléculas, por ejemplo, a través de una formación de una amida con ayuda de ésteres activados o de una aminación reductora con grupos carbonilo, o después de una transformación en grupos que reaccionan selectivamente. Estas reacciones de transformación son bien conocidas para un experto en la especia-
lidad.

Así, Gansow (en el documento EP 484.984) y Meares (en el documento de patente de los EE.UU. US 4.622.420) describen la preparación de halógeno-acetamidas de compuestos acíclicos formadores de complejos, que encuentran utilización para el acoplamiento con grupos -SH o -NH_{2}.

El grupo isotiocianato hace posible un acoplamiento selectivo con grupos amino. Su preparación y la reacción con aminas para dar las correspondientes tioureas se describe, por ejemplo, en el documento de patente US 4.680.338 de Immunomedics. La reacción con hidrazidas para dar las tio-semicarbazidas se expone en la solicitud de patente WO 95/15335 de Neorx Corp.

\newpage

Las maleimidas hacen posible una reacción selectiva con grupos -SH. Su preparación y conversión química se describen, por ejemplo, en los documentos de patentes US 5.273.743 y EP 446.071 de Hybritech o en el documento EP 345.723 de Nihon-Medi Physics.

La introducción de los deseados iones metálicos de complejos para la preparación de agentes de diagnóstico por RMN se puede efectuar tal como se ha divulgado en los documentos de patentes EP 71.564, EP 130.934 y de publicación de solicitud de patente alemana DE-OS 34.01.052. Para esto, el óxido metálico o una sal metálica (por ejemplo, un cloruro, nitrato, acetato, carbonato o sulfato) del elemento deseado se disuelve o suspende en agua y/o en un alcohol inferior (tal como metanol, etanol o isopropanol), y se hace reaccionar con la solución o suspensión de la cantidad equivalente del compuesto formador de complejos conforme al invento.

La neutralización de grupos carboxi libres, eventualmente presentes todavía, se efectúa con ayuda de bases inorgánicas (p.ej. hidróxidos, carbonatos o bicarbonatos) de p.ej. sodio, potasio, litio, magnesio o calcio y/o bases orgánicas tales como, entre otras, aminas primarias, secundarias y terciarias, tales como p.ej. etanolamina, morfolina, glucamina, N-metil- y N,N-dimetil-glucamina, así como de aminoácidos de carácter básico, tales como p.ej. lisina, arginina y ornitina, o de amidas de aminoácidos que originalmente son de carácter neutro o ácido.

Para la preparación de los compuestos complejos neutros se puede añadir, por ejemplo en sales de complejos de carácter ácido en una solución o suspensión acuosa, tanta cantidad de la base deseada, que se alcance el punto neutro. La solución obtenida se puede a continuación concentrar hasta sequedad por evaporación en vacío. Frecuentemente, es ventajoso precipitar las sales neutras que se han formado mediante adición de disolventes miscibles con agua, tales como p.ej. alcoholes inferiores (metanol, etanol, isopropanol y otros), cetonas inferiores (acetona y otras), éteres polares (tetrahidrofurano, dioxano, 1,2-dimetoxi-etano y otros), y obtener de esta manera materiales cristalizados fáciles de aislar y bien purificables. Se ha manifestado como especialmente ventajoso añadir la base deseada, ya durante la formación del complejo, a la mezcla de reacción, y ahorrarse de esta manera una etapa del procedimiento.

Si los compuestos formadores de complejos se deben de utilizar para la preparación de agentes de radiodiagnóstico o radioterapéuticos, la preparación de los complejos a partir de los compuestos formadores de complejos se puede efectuar según los métodos descritos en "Radiotracers for Medical Applications" (Trazadores radiológicos para aplicaciones médicas), volumen I, CRC Press, Boca Raton, Florida (1983).

Puede ser deseable preparar el complejo sólo tan sólo poco antes de su utilización, en particular, cuando éste se ha de emplear como un radiofármaco. Por lo tanto, el invento abarca también un estuche para la preparación de radiofármacos, que comprende un compuesto de la fórmula VIIa ó VIIb, en la que Z representa un radioisótopo.

Son objeto del invento, además, agentes farmacéuticos, que contienen por lo menos un compuesto fisiológicamente compatible de la fórmula general VIIa o VIIb, eventualmente con los aditivos usuales en la galénica.

La preparación de los agentes farmacéuticos conformes al invento se efectúa de una manera en sí conocida, suspendiendo o disolviendo los compuestos complejos conformes al invento - eventualmente mediando adición de los aditivos usuales en la galénica - en un medio acuoso, y a continuación esterilizando eventualmente la suspensión o solución. Aditivos adecuados son, por ejemplo, tampónes fisiológicamente inocuos (tales como p.ej. trometamina), adiciones de compuestos formadores de complejos o de complejos débiles (tales como p.ej. ácido dietilen-triamina-pentaacético o los compuestos de Ca correspondientes a los complejos metálicos conformes al invento) o - en caso de que sea necesario - electrólitos tales como p.ej. cloruro de sodio - o en caso de que sea necesario - antioxidantes tales como p.ej. ácido ascórbico.

Si para la administración por vía enteral, o para otras finalidades, se desean suspensiones o soluciones de los agentes conformes al invento en agua o en una solución salina fisiológica, éstos se mezclan con una o varias sustan-
cia(s) auxiliar(es) usual(es) en la galénica [p.ej. metil-celulosa, lactosa, manita] y/o con uno o varios agente(s) tensioactivo(s) ([p.ej. lecitinas, Tween®, Myrj®] y/o una o varias sustancia(s) aromatizante(s) para la corrección del sabor [p.ej. aceites etéricos esenciales].

En principio también es posible preparar los agentes farmacéuticos conformes al invento sin nigún aislamiento de las sales de complejos. En cualquier caso se debe de tener un cuidado especial de llevar a cabo la formación de los quelatos de tal manera que las sales y las soluciones de sales conformes al invento estén prácticamente exentas de iones metálicos no complejados, que tienen un efecto tóxico.

Esto se puede garantizar, por ejemplo, con ayuda de indicadores colorimétricos tales como anaranjado de xilenol mediante valoraciones de control durante el proceso de preparación. El invento se refiere, por lo tanto, también a un procedimiento para la preparación de los compuestos complejos y de sus sales. Como última seguridad queda una purificación de la sal de complejo que se ha aislado.

Los agentes farmacéuticos conformes al invento contienen de manera preferida 1 fmol - 1,3 mol/l de la sal de complejo y se añaden dosificadamente, por regla general, en unas cantidades de 0,5 pmol/kg-5 mmol/kg. Ellos están destinados a su aplicación por vía enteral o parenteral. Los compuestos complejos conformes al invento pasan a aplicarse

1.: para el diagnóstico por RMN en forma de sus complejos con los iones paramagnéticos de los elementos con los números atómicos 21-29, 42, 44 y 58-70. Iones adecuados son, por ejemplo, los iones de cromo(III), hierro(II), cobalto(II), níquel(II), cobre(II), praseodimio(III), neodimio(III), samario(III) e iterbio(III). A causa de su fuerte momento magnético, para el diagnóstico por RMN se prefieren especialmente los iones de gadolinio(III), terbio(III), disprosio(III), holmio(III), erbio(III), manganeso(II) y hierro(III).

2.: para el radiodiagnóstico y la radioterapia en forma de sus complejos con los radioisótopos de los elementos con los números atómicos 26, 27, 29, 31, 32, 37-39, 43, 46, 47, 49, 61, 62, 64, 67, 70, 71, 75, 77, 82 y 83.

Los agentes conformes al invento cumplen las múltiples y variadas premisas planteadas para la idoneidad como agentes de contraste para la tomografía de espín nuclear. Así, ellos son sobresalientemente adecuados, después de una aplicación por vía oral o parenteral, por medio de un aumento de la intensidad de la señal, para mejorar la imagen, obtenida con ayuda del tomógrafo de espin nuclear, en cuanto a su expresividad. Además, ellos manifiestan la alta actividad, que es necesaria a fin de cargar al cuerpo con unas cantidades lo más pequeñas que sean posibles de sustancias ajenas, y la buena compatibilidad, que es necesaria para mantener el carácter no invasivo de las investigaciones.

La buena solubilidad en agua y la pequeña osmolalidad de los agentes conformes al invento permite preparar soluciones muy concentradas, para que la carga con volumen de la circulación sanguínea se mantenga dentro de unos límites soportables y para compensar la dilución por medio del líquido corporal, es decir que los agentes de diagnóstico por RMN tienen que ser 100 a 1.000 veces mejor solubles en agua que para la espectroscopía para RMN. Además, los agentes conformes al invento no sólo tienen una alta estabilidad in vitro, sino también una estabilidad in vivo sorprendentemente alta, de tal manera que una liberación o un intercambio de los iones - en sí tóxicos - que no están unidos por enlaces covalentes en los complejos, sólo tiene lugar de manera extremadamente lenta, dentro del período de tiempo en el que los nuevos agentes de contraste son segregados de nuevo totalmente.

Por lo general, los agentes conformes al invento se añaden dosificadamente para la aplicación como agentes de diagnóstico por RMN, en unas cantidades de 0,0001-5 mmol/kg, preferiblemente de 0,005-0,5 mmol/kg. Detalles de la aplicación se discuten p.ej. en la cita de H.-J. Weinmann y colaboradores, Am. J. of Roentgenology 142, 619 (1984).

Unas dosificaciones bajas (por debajo de 1 mg/kg de peso corporal) de agentes de diagnóstico por RMN, específicos para órganos, se pueden emplear, por ejemplo, para la detección de tumores y de un infarto cardíaco. Unas dosificaciones especialmente bajas de los complejos conformes al invento son adecuadas para la aplicación en la radioterapia y en el radiodiagnóstico. Así, para finalidades tanto terapéuticas como también diagnósticas pasan a aplicarse unas dosificaciones de 0,5 pM/kg - 5 \muM/kg, de manera preferida de 50 pM/kg - 500 nmol/kg. Usualmente, en lo que respecta al ion metálico radiactivo, se utilizan unas concentraciones molares aproximadamente 100 - 100.000 veces más pequeñas que lo que se da el caso para los quelantes o respectivamente los bioconjugados con quelantes, por lo que los quelantes o respectivamente los bioconjugados con quelantes se presentan, por lo tanto, en un exceso.

Además, los compuestos complejos conformes al invento se pueden utilizar ventajosamente como reactivos de susceptibilidad y como reactivos de desplazamiento [en inglés "shift"] para la espectroscopia para RMN in vivo.

Los agentes conformes al invento, debido a sus ventajosas propiedades radiactivas y a la buena estabilidad de los compuestos complejos que están contenidos en ellos, son adecuados también como agentes radiodiagnósticos y radioterapéuticos. Detalles de su aplicación y dosificación se describen p.ej. en "Radiotracers for Medical Applications", CRC-Press, Boca Raton, Florida, 1983, así como en Eur. J. Nucl. Med. 17 (1990) 346-364 y Chem. Rev. 93 (1993) 1.137-1.156.

Los complejos son apropiados para la técnica de registro SPECT con los isótopos ^{111}In y ^{99m}Tc.

Otro método de formación de imágenes con radioisótopos es la tomografía de emisión de positrones, que utiliza isótopos emisores de protones tales como p.ej. ^{43}Sc, ^{44}Sc, ^{52}Fe, ^{55}Co, ^{68}Ga, ^{64}Cu, ^{86}Y y ^{94m}Tc (Heiss, W.D.: Phelps, M.E.: Positron Emission Tomography of Brain (Tomografía por emisión de positrones del cerebro), editorial Springer Berlín, Heidelberg, Nueva York, 1983).

Los compuestos conformes al invento se adecuan sorprendentemente también para la diferenciación entre tumores malignos y benignos en zonas que carecen de la barrera hematoencefálica.

Ellos se distinguen también por el hecho de que son eliminados totalmente desde el cuerpo y, por consiguiente, son bien compatibles.

Puesto que las sustancias conformes al invento se enriquecen en tumores malignos (no hay ninguna difusión en tejidos sanos, pero sí una alta permeabilidad de vasos tumorales), ellas pueden apoyar también a la radioterapia de tumores malignos. Ésta se diferencia del correspondiente diagnóstico sólo por la cantidad y el tipo del isótopo utilizado. El objetivo es, en este caso, la destrucción de células tumorales por medio de una radiación de onda corta rica en energía con un radio de acción lo más pequeño que sea posible. Para esto, se aprovechan interacciones de los metales contenidos en los complejos (tales como p.ej. hierro o gadolinio) con radiaciones ionizantes (p.ej. rayos X) o con rayos de neutrones. Por medio de este efecto se aumenta significativamente la dosis local de radiación en el sitio, en donde se encuentra el complejo metálico (p.ej. en tumores). Con el fin de producir la misma dosis de radiación en el tejido maligno, en el caso de la aplicación de tales complejos metálicos se puede reducir considerablemente la carga por radiaciones para tejidos sanos, y de esta manera se evitan efectos secundarios gravosos para los pacientes. Los conjugados de complejos metálicos conformes al invento se adecuan, por lo tanto, también como una sustancia radiosensibilizadora en el caso de la radioterapia de tumores malignos (p.ej. aprovechamiento de efectos de Mössbauer o en el caso de la terapia por captura de neutrones).

Adecuados iones emisores de radiación \beta son p.ej. ^{46}Sc, ^{47}Sc, ^{48}Sc, ^{72}Ga, ^{73}Ga, ^{90}Y, ^{67}Cu, ^{109}Pd, ^{111}Ag, ^{149}Pm, ^{153}Sm,Ho, ^{177}Lu, ^{186}Re y ^{188}Re, prefiriéndose ^{90}Y, ^{177}Lu, ^{72}Ga, ^{153}Sm y ^{67}Cu. Adecuados iones emisores de radiación \beta, que tienen unos cortos períodos de tiempo de semidesintegración, son p.ej. ^{211}At, ^{211}Bi, ^{212}Bi, ^{213}Bi y ^{214}Bi, siendo preferido el ^{212}Bi. Un apropiado ion que emite fotones y electrones es el ^{156}Gd, obtenible a partir de ^{157}Gd mediante captura de neutrones.

Si el agente conforme al invento está destinado a su aplicación en la variante de la radioterapia propuesta por R. L. Mills y colaboradores [en Nature volumen 336, (1988), página 787], el ion central se tiene que derivar de un isótopo de Mössbauer, tal como por ejemplo ^{57}Fe o ^{151}Eu.

En el caso de la aplicación in vivo de los agentes terapéuticos conformes al invento, éstos se pueden administrar en común con un soporte o vehículo adecuado, tal como p.ej. un suero o una solución fisiológica de cloruro de sodio, y en común con otra proteína tal como p.ej. una albúmina de suero humano. La dosificación es dependiente en este caso del tipo del trastorno celular, del ion metálico usado y del tipo del método de formación de imágenes.

Los agentes terapéuticos conformes al invento se aplican de manera preferida por vía parenteral, preferiblemente por vía i.v. (intravenosa).

Detalles de las aplicaciones de agentes radioterapéuticos se discuten p.ej. en la cita de R.W. Kozak y colaboradores TIBTEC, octubre de 1986, 262 (véase también Bioconjugate Chem. 12 (2001) 7-34).

En conjunto, se ha conseguido sintetizar nuevos compuestos formadores de complejos, complejos metálicos y sales de complejos metálicos, que abren posibilidades mejoradas en la medicina diagnóstica y terapéutica.

Los siguientes Ejemplos sirven para ilustrar más detalladamente el objeto del invento:

Los Ejemplos 10, 12 - 15, 18, 19, 20, 21, 28 - 31 describen conjugados con anticuerpos. Los conjugados con otras biomoléculas se pueden preparar según las siguientes prescripciones generales de trabajo:

En este caso, "PGT" representa la prescripción general de trabajo, "RP-18" designa una fase estacionaria de cromatografía de fase inversa (en inglés "reversed phase". El número de los complejos por cada biomolécula se determinó mediante escintigrafía o ICP (de inductively coupled plasma atomic emission spectroscopy = espectroscopia de emisión atómica con fuente de plasma acoplada inductivamente).

Prescripción general de trabajo (PGT) I: Conjugados de albúminas y amidas

3 mmol del ácido se disuelven en 15 ml de DMF (dimetilformamida), mediando enfriamiento con hielo se mezclan con 380 mg (3,3 mmol) de N-hidroxi-succinimida y 681 mg de diciclohexil-carbodiimida y se activan previamente durante 1 hora en hielo. La mezcla de ésteres activos se añade gota a gota en el transcurso de 30 minutos a una solución de 16,75 g (0,25 mmol) de albúmina de suero bovino (BSA) en 150 ml de un tampón de fosfato (de pH 7,4), y se agita durante 2 horas a la temperatura ambiente. La solución de partida se filtra, el material filtrado se ultrafiltra a través de un AMICON® YM30 (límite de exclusión [en inglés "cut off"] 30.000 Da), el material retenido se cromatografía a través de una columna de Sephadex® G50, y las fracciones con producto se liofilizan (secan por congelación).

Prescripción general de trabajo (PGT) II: Conjugados de albúminas y maleimidas

0,0438 mmol de la maleimida en 1 ml de DMF, se añaden a 0,84 g (0,0125 mmol) de albúmina de suero bovino (BSA), disuelta en 15 ml de un tampón fosfato (de pH 7,4), y se agita durante una hora a la temperatura ambiente. La solución de partida se filtra, el material filtrado se ultrafiltra a través de un AMICON® YM30 (límite de exclusión 30.000 Da), el material retenido se cromatografía a través de una columna de Sephadex® G50 y las fracciones con producto se liofilizan.

Prescripción general de trabajo (PGT) III: Preparación de conjugados de amidas

3 mmol del ácido se disuelven en 15 ml de DMF, mediando enfriamiento con hielo se mezclan con 380 mg (3,3 mmol) de N-hidroxi-succinimida y 681 mg de diciclohexil-carbodiimida, y se activan previamente durante 1 hora en hielo. La mezcla de ésteres activos se introduce gota a gota en una solución de 2,5 mmol del componente amínico en 15-150 ml de DMF y se agita durante una noche a la temperatura ambiente. La solución de partida se filtra y se cromatografía en gel de sílice.

Prescripción general de trabajo (PGT) IV: Preparación de conjugados de maleimido - SH

3 mmol de la maleimida en 15 ml de DMF se introducen gota a gota en 2,5 mmol del componente con SH en 15 -150 ml de DMF y se agita durante una hora a la temperatura ambiente. La solución de partida se filtra, el material filtrado se ultrafiltra a través de un AMICON® YM30 (límite de exclusión 30.000 Da), el material retenido se cromatografía a través de una columna de Sephadex® G50 y las fracciones con producto se liofilizan.

Prescripción general de trabajo (PGT) V: Preparación de conjugados de halógenoacetamidas y SH

3 mmol de la halógenoacetamida en 15 ml de DMF se introducen gota a gota en 2,5 mmol del componente con SH en 15 -150 ml de DMF, y se agita durante ocho horas a la temperatura ambiente. La solución de partida se filtra, el material filtrado se ultrafiltra a través de un AMICON® YM30 (límite de exclusión 30.000 Da), el material retenido se cromatografía a través de una columna de Sephadex® G50 y las fracciones con producto se liofilizan.

Ejemplo 1 a) (S)-Éster terc.-butílico de ácido (2-hidroxi-1-metil-etil)-carbámico

10,50 g (140 mmol) de (S)-(+)-2-amino-1-propanol se disolvieron en 110 ml de THF y se enfriaron a 0ºC. A esta solución agitada se le añadió gota a gota una solución de 30,2 g (139 mmol) de dicarbonato de di-terc.-butilo en 45 ml de THF. La mezcla de reacción se agitó durante 90 minutos a 25ºC y se concentró por evaporación en un evaporador rotatorio. El residuo se recogió en 300 ml de dietil-éter y a continuación se lavó con 90 ml de una solución 0,01 M de HCl. La fase orgánica se secó mediante sulfato de sodio y se concentró por evaporación en un evaporador rotatorio y en una bomba de aceite. El producto bruto (20,4 g) se empleó sin purificación adicional para la siguiente reacción.

b) (S)-Éster 2-terc.-butoxicarbonilamino-propílico de ácido metanosulfónico

20,3 g (116 mmol) del compuesto 1a se disolvieron en 125 ml de diclorometano y se mezclaron con 17,7 g (175 mmol) de trietilamina. A 0ºC se añadió gota a gota una solución de 14,7 g (128 mmol) de cloruro de ácido metanosulfónico en 30 ml de diclorometano. La solución de reacción se agitó a 0ºC durante 2 h y a continuación se mezcló con 300 ml de agua. La fase orgánica se separó. La fase acuosa se extrajo dos veces con 150 ml de diclorometano. Las fases orgánicas reunidas se lavaron una vez con 150 ml de una solución 0,1 M de HCl, dos veces, cada vez con 150 ml, de una solución al 5% de hidrógeno-carbonato de sodio y finalmente con 50 ml de una solución acuosa saturada de cloruro de sodio. La fase orgánica se secó con sulfato de sodio. La solución se concentró por evaporación y se separó por cristalización en un armario frigorífico. Los cristales se lavaron con hexano frío.

Resultaron 25,4 g (100 mmol) del producto deseado.

EM-FAB: 254 (M^{+} +1, 13).

c) (S)-Éster terc.-butílico de ácido (2-azido-1-metil-etil)-carbámico

Una solución de 20,3 g (100 mmol) del compuesto 1b en 155 ml de DMSO (dimetilsulfóxido) se mezclaron con 7,8 g (120 mmol) de aziduro de sodio, y se agitó durante 24 h a 45ºC. Se añadieron 250 ml de una mezcla de hielo y agua. La mezcla se extrajo múltiples veces con 200 ml de diclorometano. Las fases orgánicas reunidas se lavaron dos veces con 50 ml de una solución acuosa saturada de cloruro de sodio. La fase orgánica se concentró por evaporación. Resultaron 11,4 g de un producto bruto. El producto bruto se empleó sin purificación adicional para la siguiente reacción

EM-FAB: 201 (M^{+} +1, 23).

d) (S)-Éster terc.-butílico de ácido (2-amino-1-metil-etil)-carbámico

Una solución agitada de 11,4 g (57 mmol) del compuesto 1c en 165 ml de éster etílico de ácido acético se mezcló con 1,8 g de Pd/C (al 10%), y se sometíó durante 15 h a una atmósfera de hidrógeno de 4 bares. El catalizador se separó por filtración (a través de la denominada frita G4). El material filtrado se concentró por evaporación en un evaporador rotatorio y se purificó por cromatografía en columna (en SiO_{2} con un gradiente de diclorometano \rightarrow una mezcla de diclorometano: metanol 1:1). Resultó el producto deseado en un rendimiento de 73% (7,25 g: 42 mmol).

EM-FAB: 175 (M^{+} +1, 29).

e) (S,S)-Éster terc.-butílico de ácido {2-[2-terc.-butoxicarbonilamino-3-(4-nitro-fenil)-propionilamino]-1-metil-etil)-carbámico

Una solución agitada de 7,2 g (41 mmol) del compuesto 1d, 245 ml de agua y 245 ml de diclorometano se mezclaron con 12,9 g (42 mmol) de (S)-ácido 2-terc.-butoxicarbonilamino-3-(4-nitro-fenil)-propiónico obtenible comercialmente (de Bachem) y 6,4 g (42 mmol) de 1-hidroxibenzotriazol (HOBT) - H_{2}O. La solución se enfrió a 0ºC y se mezcló con 8,8 g (46 mmol) de 1-(dimetilaminopropil)-3-etil-carbodiimida (EDCI). La solución de reacción se agitó durante siete horas a 0ºC, durante 12 h a la temperatura ambiente y durante 24 horas a 60ºC. La solución se enfrió a la temperatura ambiente. La fase acuosa se separó y se extrajo múltiples veces con diclorometano. Las fases orgánicas reunidas se lavaron con una solución al 5% de hidrógeno-carbonato de sodio y con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio. Se secó con sulfato de sodio y se concentró por evaporación en un evaporador rotatorio. El residuo se mezcló con hexano, se trituró, se filtró con succión y se lavó posteriormente con hexano frío. El material sólido se secó en vacío a 30ºC. Resultó el producto 1e deseado con un rendimiento de 77% (14,9 g; 32 mmol).

EM-FAB: 467 (M^{+} +1, 38).

f) (S,S)-N-(2-amino-propil)-3-(4-nitro-fenil)-propano-1,2-diamina

14,9 g (32 mmol) del compuesto 1e se suspendieron en 180 ml de diclorometano. A continuación se añadieron gota a gota 54,2 g (475 mmol) de ácido trifluoroacético. La solución se agitó durante una hora y se concentró por evaporación en un evaporador rotatorio. Se añadió diclorometano y se concentró de nuevo por evaporación. Se añadió dietil-éter. El material sólido que había precipitado se separó y se lavó con dietil-éter frío. El material sólido se secó en vacío a 35ºC. A una solución agitada de este material sólido (17,7 g) en 225 ml de THF absoluto se le añadieron gota a gota 225 ml (1 M) de un complejo de un borano y tetrahidrofurano. La solución de reacción se calentó durante 6 h bajo reflujo y a continuación se agitó durante una noche a la temperatura ambiente. Se añadieron gota a gota con precaución 60 ml de metanol y se agitó durante otras 2 h. La solución se concentró por evaporación en un evaporador rotatorio y se mezcló con 150 ml de etanol. Se introdujo HCl gaseoso, de tal manera que precipitó un material sólido. Se concentró por evaporación y se mezcló con dietil-éter seco. El material sólido se separó, se lavó con dietil-éter frío y se secó en vacío a 40ºC. Resultaron 9,61 g (\sim26,6 mmol) del producto 1f deseado en forma del trihidrocloruro.

EM-FAB: 253 (M^{+} +1, 28).

g) (S,S)-Éster terc.-butílico de ácido {[2-{[2-(bis-terc.-butoxicarbonilmetil-amino)-propil]terc.-butoxicarbonilmetil-amino}-1-(4-nitro-bencil)-etil]-terc.-butoxicarbonilmetil-amino-acético

A una solución agitada de 9,6 g (27 mmol) del compuesto 1f en 290 ml de acetonitrilo y 60 ml de agua se le añadieron 43,8 g (317 mmol) de carbonato de potasio y 39 g (200 mmol) de éster terc.-butílico de ácido bromoacético. La solución se calentó durante \sim 7 h a 70ºC. Se añadieron 13,1 g (94 mmol) adicionales de carbonato de potasio y 8,8 ml (60 mmol) de éster terc.-butílico de ácido bromoacético. La solución se agitó durante \sim 7 h a 70ºC. Se añadieron 4,3 g (26 mmol) de yoduro de potasio. La solución se agitó durante \sim 7 h a 70ºC. La solución de reacción se concentró por evaporación en un evaporador rotatorio, se mezcló con agua y se extrajo tres veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas reunidas se lavaron con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio, se secaron con sulfato de sodio y se concentraron por evaporación. El residuo se purificó mediante una cromatografía en columna (en SiO_{2} con un gradiente de diclorometano \rightarrow una mezcla de diclorometano y metanol 98:2). Resultó el producto 1g deseado en un rendimiento de 54% (23,2 g; 42 mmol).

EM-FAB: 824 (M^{+} +1, 58).

h) (S,S)-Ácido {[2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-1-(4-nitro-bencil)-etil]-carboximetil- amino}-acético

A una solución agitada de 14,8 g (130 mmol) de ácido trifluoroacético, 25,5 g (300 mmol) de diclorometano y 2,9 g (25 mmol) de trietil-silano, se le añadieron 1,65 g (2 mmol) del compuesto 1 g. La mezcla de reacción se agitó durante 1 h y se concentró por evaporación en un evaporador rotatorio y en una bomba de aceite. El residuo se mezcló con dietil-éter. El material sólido se separó mediante filtración y se lavó con dietil-éter. Resultó el producto 1h deseado en un rendimiento de 99% (1,0 g, 1,99 mmol).

EM-FAB: 543 (M^{+} +1, 59).

Ejemplo 2 (S,S)-Éster terc.-butílico de ácido {[2-(4-amino-fenil)-1-({[2-(bis-terc.-butoxi-carbonilmetil-amino)-propil]-terc.- butoxicarbonilmetil-amino}-metil)-etil]-terc.-butoxicarbonilmetil-amino)-acético

A una solución de 0,5 g (0,6 mmol) del compuesto 1g en 10 ml de iso-propanol se le añadieron 0,2 g de Pd/C (al 10%). Se proveyó de hidrógeno a la atmósfera situada sobre la solución de reacción. La solución se agitó durante 5 h, se filtró y se concentró por evaporación. Resultó el producto 2 deseado en un rendimiento de 81% (397 mg; 0,5 mmol).

EM-FAB: 795 (M^{+} +1, 63).

Ejemplo 3 (S,S)-Ácido [(1-(4-amino-bencil)-2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-etil)-carboximetil- amino]-acético

Método A

A una solución de 0,5 g (0,9 mmol) del compuesto 1h en 10 ml de iso-propanol se le añadieron 0,2 g de Pd/C (al 10%). Se proveyó de hidrógeno a la atmósfera situada sobre la solución de reacción. La solución se agitó durante 5 h, se filtró y se concentró por evaporación. Resultó el producto 3 deseado en un rendimiento de 87% (410 mg; 0,78 mmol).

EM-FAB: 513 (M^{+} +1, 43).

Método B

A una solución agitada de 3,64 g (32 mmol) de ácido trifluoroacético, 6,38 mg (75 mmol) de diclorometano y 0,7 g (6 mmol) de trietil-silano se le añadieron 397 mg (0,5 mmol) del compuesto 2. La mezcla de reacción se agitó durante 1 h y se concentró por evaporación en un evaporador rotatorio y en una bomba de aceite. El residuo se mezcló con dietil-éter. El material sólido se separó por filtración y se lavó con dietil-éter. Resultó el producto 3 deseado con un rendimiento de 99% (253 mg; 0,5 mmol).

EM-FAB: 513 (M^{+} +1, 48).

Ejemplo 4 (S,S)-Ácido [(2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino)-1-{4-(3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1- il)-propionilamino]-bencil}-etil)-carboximetil-amino]-acético

A una solución agitada de 1,02 g (2 mmol) del compuesto 3 y 774 mg (6 mmol) de diisopropil-etil-amina en 20 ml de DMF se le añadieron a 0ºC 800 mg (3 mmol) de éster 2,5-dioxo-pirrolidin-1-ílico de ácido 3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propiónico (de Aldrich). La solución de reacción se agitó durante 4 horas a la temperatura ambiente. La solución se añadió gota a gota a 120 ml de dietil-éter agitado enérgicamente. La suspensión se agitó durante 30 minutos y se filtró. El residuo se secó en una bomba de aceite. Una parte del residuo se purificó mediante una RP-HPLC (cromatografía de fase líquida de alto rendimiento de fase inversa) semipreparativa.

EM-FAB: 664 (M^{+} +1, 24).

Ejemplo 5 (S,S)-Ácido [(1-(4-isotiocianato-bencil)-2-{(2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-etil)-carboxi- metil-amino]-acético

A un sistema de dos fases, agitado enérgicamente, a base de 0,51 g (1 mmol) del compuesto 3, 3 ml de agua, 605 mg (6 mmol) de trietil-amina y 3 ml de cloroformo se le añadieron gota a gota a 0ºC 114 mg (1 mmol) de tiofosgeno en un poco de cloroformo. La solución se agitó durante 3 horas. La fase orgánica se separó. La fase orgánica se lavó dos veces con agua. Las fases acuosas reunidas se lavaron con diclorometano, se diluyeron con agua y se liofilizaron. La sustancia se comprobó en cuanto a su pureza por medio de una HPLC: HyPurity C18 (5 \mum, 150 x 3,0 mm) con un gradiente de mezclas de acetonitrilo : agua : ácido trifluoroacético (3 : 96,9 : 0,1 \rightarrow 99,9 : 0 : 0,1). Resultó el producto 5 deseado con un rendimiento de 91% (505 mg, 910 mmol).

EM-FAB: 555 (M^{+} +1, 39).

Ejemplo 6 (S,S)-Ácido ({2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-1-[4-(2-bromo-acetilamino)-bencil]-etil}-carboximetil-amino)-acético

A una solución de 0,51 g (1 mmol) del compuesto 3 y 606 mg (6 mmol) de trietilamina en 10 ml de DMF se le añadieron a -20ºC 202 mg (1,1 mmol) de bromuro de ácido bromoacético. La solución de reacción se agitó durante una hora a la temperatura ambiente. La solución se vertió sobre dietil-éter agitado enérgicamente. El precipitado se separó por filtración, se recogió en agua y se liofilizó inmediatamente. La sustancia se comprobó en cuanto a su pureza mediante una HPLC: HyPurity C18 (5 \mum, 150 x 3,0 mm) con un gradiente de mezclas de acetonitrilo : agua : ácido trifluoroacético (3 : 96,9 : 0,1 \rightarrow 99,9 : 0 : 0,1). Resultó el producto 6 deseado con un rendimiento de 82% (520 mg, 820 \mumol).

EM-FAB: 634 (M^{+} +1, 46).

Ejemplo 7 (S,S)-Ácido ({2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-1-[4-(2-yodo-acetilamino)-bencil]-etil}- carboximetil-amino)-acético

A una solución de 0,51 g (1 mmol) del compuesto 3 y 606 mg (6 mmol) de trietilamina en 10 ml de DMF se le añadieron a -20ºC 274 mg (1,1 mmol) de bromuro de ácido yodoacético. La solución de reacción se agitó durante una hora a la temperatura ambiente. La solución se vertió sobre dietil-éter agitado enérgicamente. El precipitado se separó por filtración, se recogió en agua y se liofilizó inmediatamente. La sustancia se comprobó en cuanto a su pureza mediante una HPLC: HyPurity C18 (5 \mum, 150 x 3,0 mm) con un gradiente de mezclas de acetonitrilo : agua : ácido trifluoroacético (3 : 96,9 : 0,1 \rightarrow 99,9 : 0 : 0,1). Resultó el producto 7 deseado con un rendimiento de 88% (600 mg, 880 \mumol).

EM-FAB: 681 (M^{+} +1, 32).

Ejemplo 8 (S,S)-Ácido ({2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-1-[4-(2-cloro-acetilamino)-bencil]-etil}- carboximetil-amino)-acético

A una solución de 0,51 g (1 mmol) del compuesto 3 y 606 mg (6 mmol) de trietilamina en 10 ml de DMF se le añadieron a -20ºC 125 mg (1,1 mmol) de cloruro de ácido cloroacético. La solución de reacción se agitó durante una hora a la temperatura ambiente. La solución se vertió sobre dietil-éter agitado enérgicamente. El precipitado se separó por filtración, se recogió en agua y se liofilizó inmediatamente. La sustancia se comprobó en cuanto a su pureza mediante una HPLC: HyPurity C18 (5 \mum, 150 x 3,0 mm) con un gradiente de mezclas de acetonitrilo : agua : ácido trifluoroacético (3 : 96,9 : 0,1 \rightarrow 99,9 : 0 : 0,1). Resultó el producto 8 deseado con un rendimiento de 82% (520 mg, 820 \mumol).

EM-FAB: 590 (M^{+} +1, 31).

Ejemplo 9 (S,S)-Ácido ({2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-1-[4-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)- bencil]-etil}-carboximetil-amino)-acético

Apoyándose en la cita bibliográfica Tetrahedron Lett.: 38: 46; 1997; 8.089-8.092:

Una mezcla de aproximadamente 1 g de gel de sílice secado, 100 mg (1,0 mmol) de anhídrido de ácido maleico, 512 mg (1,0 mmol) del compuesto 3 y 35,6 mg (0,1 mmol) de cloruro de tántalo(V) se calentó en un horno de microondas (de 300 W) durante 5 min. El residuo se eluyó a través de una frita (cuerpo sinterizado) con metanol. El material filtrado se concentró por evaporación. El residuo se recogió en agua. La solución se liofilizó. Una parte del residuo se purificó por medio de una RP-HPLC semipreparativa, con una mezcla de acetonitrilo y agua (20:80). La sustancia se comprobó en cuanto a su pureza mediante una HPLC: HyPurity C18 (5 \mum, 150 x 3,0 mm) con un gradiente de mezclas de acetonitrilo : agua : ácido trifluoroacético (3 : 96,9 : 0,1 \rightarrow 99,9 : 0 : 0,1). Resultó el producto 9 deseado con 94 mg (0,16 mmol) en una pureza de 96%.

EM-FAB: 593 (M^{+} +1, 42).

Ejemplo 10 Conjugado con un anticuerpo del Ejemplo 4, a saber (S,S)-ácido ({2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-1-{4-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-bencil}-etil)-carboximetil-amino)-acético

200 \mug de un anticuerpo con grupos tiólicos libremente accesibles (p.ej. HuM195 (compárese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1.722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, EE.UU.) - si el anticuerpo no posee grupos tiólicos libremente accesibles, éstos se pueden generar mediante la utilización de 2-imino-tiolano \cdot HCl (véase p.ej. el documento EP 0.607.222 B1) - se diluyeron en 1,2 ml de un tampón de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 159 \mug (240 nmol) del producto del Ejemplo 4, disueltos en 50 \mul de un tampón de borato (véase más arriba), y se agitó durante 3 horas a 37ºC. Se purificó a través de una columna de NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvil: PBS).

Ejemplo 11 (S,S)-Ácido {[2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-1-[4-{3-[2-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-etil]-tioureido}-bencil)-etil]-carboximetil-amino}-acético

A una solución agitada de 555 mg (1 mmol) del compuesto 5 en 5 ml de DMF se le añadió gota a gota una solución de 154 mg (1,1 mmol) de 1-(2-amino-etil)-pirrol-2,5-diona en 2 ml de dioxano. La solución de reacción se agitó durante una noche y se añadíó gota a gota a 80 ml de dietil-éter agitado enérgicamente. El precipitado se separó por filtración y se recogió en agua. La solución se liofilizó. Una parte del residuo se purificó mediante una RP-HPLC semipreparativa, con una mezcla de acetonitrilo y agua (20:80). La sustancia se comprobó en cuanto a su pureza por medio de una HPLC: HyPurity C18 (5 \mum, 150 x 3,0 mm) con un gradiente de mezclas de acetonitrilo : agua : ácido trifluoroacético (3 : 96,9 : 0,1 \rightarrow 99,9 : 0 : 0,1). Resultó el producto 11 deseado con 0,104 g (0,15 mmol) en una alta pureza.

EM-FAB: 696 (M^{+} +1, 33).

Ejemplo 12 Complejo con indio del conjugado con un anticuerpo del Ejemplo 4, a saber (S,S)-ácido [(2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-1-{4-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-bencil}-etil)-carboximetil-amino)-acético

200 \mug de un anticuerpo con grupos tiólicos libremente accesibles (p.ej. HuM195 (compárese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1.722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, EE.UU.) - si el anticuerpo no posee grupos tiólicos libremente accesibles, éstos se pueden generar mediante la utilización de 2-imino-tiolano \cdot HCl (véase p.ej. el documento EP 0.607.222 B1) - se diluyeron en 1,2 ml de un tampón de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 159 \mug (240 nmol) del producto del Ejemplo 11, disueltos en 50 \mul del tampón de borato (véase más arriba), y se agitó durante 3 horas a 37ºC. La solución del tampón de borato se intercambió por un tampón de acetato, siendo ajustada la solución de muestra tres veces durante 1 h en el aparato Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWCO (procedimiento de diálisis) en cada caso frente a 200 ml de un tampón de NaOAc 0,1 M (de pH 6,0). Finalmente, se ajustó durante una noche frente a 400 ml de un tampón de NaOAc 0,1 M (de pH 6). La solución se mezcló con 80 \mul (HCl 0,05 M) de [^{111}In]InCl_{3} (27,88 MBq), y se agitó durante 30 min a la temperatura ambiente. Se purificó a través de una columna de NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvil: PBS).

Ejemplo 13 Complejo con itrio del conjugado con un anticuerpo de (1'R,2R,5S)-ácido 5-({[2-({1-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentil)-carboximetil-amino)-etil]-carboximetil-amino}-metil)-1-carboximetil- pirrolidina-2-carboxílico

200 \mug de un anticuerpo con grupos tiólicos libremente accesibles (p.ej. HuM195 (compárese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1.722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, EE.UU.) - si el anticuerpo no posee grupos tiólicos libremente accesibles, éstos se pueden generar mediante la utilización de 2-imino-tiolano \cdot HCl (véase p.ej. el documento EP 0.607.222 B1) - se diluyeron en 1,2 ml de un tampón de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 159 \mug (240 nmol) del producto del Ejemplo 11, disueltos en 50 \mul de un tampón de borato (véase más arriba), y se agitó durante 3 horas a 37ºC. La solución del tampón de borato se intercambió por un tampón de acetato, siendo ajustada la solución de muestra tres veces durante 1 h en el aparato Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWCO (procedimiento de diálisis) en cada caso frente a 200 ml de un tampón de NaOAc 0,1 M (de pH 6,0). Finalmente, se ajustó durante una noche frente a 400 ml de un tampón de NaOAc 0,1 M (de pH 6). La solución se mezcló con 50 MBq de [^{90}Y]YCl_{3} y se agitó durante 30 min a la temperatura ambiente. Se purificó a través de una columna de NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvil: PBS).

Ejemplo 14 Complejo con escandio del conjugado con un anticuerpo de (1'R,2R,5S)-ácido 5-({[2-({1-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentil}-carboximetil-amino)-etil]-carboximetil-amino}-metil)-1-carboximetil-pirrolidina-2-carboxílico

200 \mug de un anticuerpo con grupos tiólicos libremente accesibles (p.ej. HuM195 (compárese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1.722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, EE.UU.) - si el anticuerpo no posee grupos tiólicos libremente accesibles, éstos se pueden generar mediante la utilización de 2-imino-tiolano \cdot HCl (véase p.ej. el documento EP 0.607.222 B1) - se diluyeron en 1,2 ml de un tampón de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 159 \mug (240 nmol) del producto del Ejemplo 11, disueltos en 50 \mul de un tampón de borato (véase más arriba), y se agitó durante 3 horas a 37ºC. La solución del tampón de borato se intercambió por un tampón de acetato, siendo ajustada la solución de muestra tres veces durante 1 h en el aparato Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWCO (procedimiento de diálisis) en cada caso frente a 200 ml de un tampón de NaOAc 0,1 M (de pH 6,0). Finalmente, se ajustó durante una noche frente a 400 ml de un tampón de NaOAc 0,1 M (de pH 6). La solución se mezcló con 50 MBq de [^{47}Sc]ScCl_{3} y se agitó durante 30 min a la temperatura ambiente. Se purificó a través de una columna de NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvil: PBS).

Ejemplo 15 Complejo con lutecio del conjugado con un anticuerpo de (1'R,2R,5S)-ácido 5-({[2-({1-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentil}-carboximetil-amino)-etil]-carboximetil-amino}-metil)-1-carboximetil- pirrolidina-2-carboxílico

200 \mug de un anticuerpo con grupos tiólicos libremente accesibles (p.ej. HuM195 (compárese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1.722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, EE.UU.) - si el anticuerpo no posee grupos tiólicos libremente accesibles, éstos se pueden generar mediante la utilización de 2-imino-tiolano \cdot HCl (véase p.ej. el documento EP 0.607.222 B1) - se diluyeron en 1,2 ml de un tampón de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 159 \mug (240 nmol) del producto del Ejemplo 11, disueltos en 50 \mul del tampón de borato (véase más arriba), y se agitó durante 3 horas a 37ºC. La solución del tampón de borato se intercambió por un tampón de acetato, siendo ajustada la solución de muestra tres veces durante 1 h en el aparato Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWCO (procedimiento de diálisis) en cada caso frente a 200 ml de un tampón de NaOAc 0,1 M (de pH 6,0). Finalmente, se ajustó durante una noche frente a 400 ml de un tampón de NaOAc 0,1 M (de pH 6). La solución se mezcló con 50 MBq de [^{177}Lu]LuCl_{3} y se agitó durante 30 min a la temperatura ambiente. Se purificó a través de una columna de NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvil: PBS).

Ejemplo 16 a) (S)-Éster bencílico de ácido 6-benciloxicarbonilamino-2-(2-terc.-butoxicarbonilamino-acetilamino)-hexanoico

A una solución agitada de 2,15 g (12,28 mmol) de Boc-Gly-OH y de 4,08 ml (29,5 mmol) de trietil-amina en 50 ml de diclorometano se le añadieron 1,55 g (13,5 mmol) de N-hidroxi-succinimida. Después de 20 min se añadieron 5 g (12,3 mmol) de hidrocloruro de H-Lys-(Z)-OBzl, que se había diluido en algo de diclorometano, y 2,78 g (13,5 mmol) de diciclohexil-carbodiimida en algo de diclorometano. La solución se agitó durante tres días y se vertió sobre 250 ml de una mezcla de hielo y agua. La fase orgánica se separó. La fase acuosa se extrajo múltiples veces con diclorometano. Las fases orgánicas reunidas se lavaron con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio, se secaron con sulfato de sodio y se concentraron por evaporación. El residuo se purificó mediante una cromatografía en columna (en SiO_{2} con un gradiente de mezclas de hexano : acetato de etilo 4:1 \rightarrow de hexano : acetato de etilo 1:1). Resultó el producto 16a deseado en un rendimiento de 96% (6,2 g; 11,7 mmol).

EM-FAB: 528 (M^{+} +1, 75).

b) (S)-Éster bencílico de ácido 6-benciloxicarbonilamino-2-(2-{2-[2-(2-terc.-butoxicarbonilamino-acetilamino)-acetilamino]-acetilamino}-acetilamino)-hexanoico

A una solución de 6,2 g (11,7 mmol) del compuesto 16a en 30 ml de diclorometano se le añadieron gota a gota a 0ºC 30 ml de ácido trifluoroacético. La solución se agitó durante 2 h a la temperatura ambiente y se concentró por evaporación en un evaporador rotatorio. Se añadieron 50 ml de agua y 50 ml de tolueno, y éstos se eliminaron de nuevo en un evaporador rotatorio. La última etapa de trabajo se repitió tres veces. A continuación se concentró en una bomba de aceite.

A una solución agitada del residuo en 90 ml de diclorometano se le añadieron a 0ºC 2,37 g (18,3 mmol) de diisopropil-etil-diamina, 3,02 g (14,7 mmol) de diciclohexil-carbodiimida, disueltos en un poco de diclorometano, 1,69 g (14,7 mmol) de N-hidroxi-succinimida y 3,4 g (14,7 mmol) de Boc-Gly-Gly-OH. La suspensión se agitó durante tres días a la temperatura ambiente y se mezcló con 150 ml de una mezcla de hielo y agua. La fase orgánica se separó. La fase acuosa se extrajo múltiples veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas reunidas se lavaron con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio, se secaron con sulfato de sodio y se concentraron por evaporación. El residuo se purificó por cromatografía en columna (en SiO_{2} con un gradiente de acetato de etilo \rightarrow una mezcla de metanol : acetato de etilo 15:85). Resultó el producto 16b deseado en un rendimiento de 53% (4,18 g;
6,5 mmol).

EM-FAB: 643 (M^{+} +1, 56).

c) (S)-Ácido 2-{2-[2-(2-terc.-butoxicarbonilamino-acetilamino)-acetilamino]-acetilamino}-6-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-hexanoico

A una solución de 4,18 g (6,5 mmol) del compuesto 16b en 40 ml de isopropanol se le añadió 1 g de Pd/C (al 10%). La atmósfera situada sobre la solución agitada se saturó con hidrógeno. La solución de reacción se agitó durante 90 min, se filtró y se concentró por evaporación.

El residuo se mezcló a 0ºC con 20 ml de DMF, 1,5 g (12 mmol) de diisopropil-etil-amina y 2,4 mg (9 mmol) de éster 2,5-dioxo-pirrolidin-1-ílico de ácido 3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propiónico (de Aldrich). La solución de reacción se agitó durante 4 horas a la temperatura ambiente. La solución se añadió a una solución de HCl (de pH 4), y se extrajo múltiples veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas reunidas se lavaron con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio, se secaron con sulfato de sodio y se concentraron por evaporación. El residuo se purificó por cromatografía en columna (en SiO_{2} con un gradiente de acetato de etilo \rightarrow una mezcla de metanol : acetato de etilo 20:80). Resultó el producto 16c deseado en un rendimiento de 67% (2,5 g; 4,4 mmol).

EM-FAB: 570 (M^{+} +1, 31).

d) (1S,1'S,4S)-1-[4-{3-[({[({1-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)- propionilamino]-pentilcarbamoíl}- metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoíl)-metil]-tioureido}]-bencil-4-metil-DTPA

A una solución agitada de 570 mg (1 mmol) del compuesto 16c en 5 ml de diclorometano se le añadieron gota a gota a 0ºC 5 ml de ácido trifluoroacético. La solución se agitó durante 2 h a la temperatura ambiente y se concentró por evaporación en un evaporador rotatorio. El residuo se extrajo por agitación con dietil-éter. Finalmente, se concentró en una bomba de aceite.

El residuo se recogió en DMF con \sim 200 mg (\sim 2 mmol) de trietil-amina y 505 mg (0,9 mmol) del compuesto 5. La solución se agitó durante 3 h a 40ºC y se añadió gota a gota a dietil-éter agitado enérgicamente. El precipitado se separó por filtración y se purificó mediante una cromatografía en columna RP (de fase inversa).

EM-FAB: 1.016 (M^{+} +1, 31).

Ejemplo 17 Complejo con gadolinio de (S,S)-ácido [(1-(4-amino-bencil)-2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-etil)-carboximetil-amino]-acético

128,1 mg (0,25 mmol) del compuesto 3 se suspendieron en 4 ml de agua destilada, se calentaron a 80ºC y se disolvieron. Se mezcló en porciones con 45,3 mg (0,125 mmol) de Gd_{2}O_{3}. La suspensión se calentó a 80ºC y se agitó durante una hora. La solución se enfrió a la temperatura ambiente y se ajustó con una solución de hidróxido de sodio (1 M) a un pH = 7. Se eliminó el agua mediante liofilización. Resultó el producto deseado en una cantidad de 166,6 mg (0,25 mmol, 99,8%).

EM-FAB (M^{+} +1, 21): 668.

Ejemplo 18 Conjugado con un anticuerpo de (1S,1'S,4S)-1-[4-{3-[({[({1-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentilcarbamoíl}-metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoíl)-metil]-tioureido}]-bencil-4-metil-DTPA

200 \mug de un anticuerpo con grupos tiólicos libremente accesibles (p.ej. HuM195 (compárese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1.722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, EE.UU.) - si el anticuerpo no posee grupos tiólicos libremente accesibles, éstos se pueden generar mediante la utilización de 2-imino-tiolano \cdot HCl (véase p.ej. el documento EP 0.607.222 B1) - se diluyeron en 1,2 ml de un tampón de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 243 \mug (240 nmol) del producto del Ejemplo 16d, disueltos en 50 \mul del tampón de borato (véase más arriba), y se agitó durante 3 horas a 37ºC. Se purificó a través de una columna de NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvil: PBS).

Ejemplo 19 Complejo con itrio del conjugado con un anticuerpo de (1S,1'S,4S)-1-[4-{3-[({[({1-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentilcarbamoíl}-metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoíl)-metil]-tioureido}]-bencil-4- metil-DTPA

200 \mug de un anticuerpo con grupos tiólicos libremente accesibles (p.ej. HuM195 (compárese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1.722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, EE.UU.) - si el anticuerpo no posee grupos tiólicos libremente accesibles, éstos se pueden generar mediante la utilización de 2-imino-tiolano \cdot HCl (véase p.ej. el documento EP 0.607.222 B1) - se diluyeron en 1,2 ml de un tampón de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 243 \mug (240 nmol) del producto del Ejemplo 16d, disueltos en 50 \mul del tampón de borato (véase más arriba), y se agitó durante 3 horas a 37ºC. La solución del tampón de borato se intercambió por un tampón de acetato, siendo ajustada la solución de muestra tres veces durante 1 h en el aparato Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWCO (procedimiento de diálisis) en cada caso frente a 200 ml de un tampón de NaOAc 0,1 M (de pH 6,0). Finalmente, se ajustó durante una noche frente a 400 ml de un tampón de NaOAc 0,1 M (de pH 6). La solución se mezcló con 50 MBq de [^{90}Y]YCl_{3} y se agitó durante 30 min a la temperatura ambiente. Se purificó a través de una columna de NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvil: PBS).

Ejemplo 20 Complejo con escandio del conjugado con un anticuerpo de (1S,1'S,4S)-1-[4-{3-[({[({1-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentilcarbamoíl}-metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoíl)-metil]-tioureido}]-ben- cil-4-metil-DTPA

200 \mug de un anticuerpo con grupos tiólicos libremente accesibles (p.ej. HuM195 (compárese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1.722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, EE.UU.) - si el anticuerpo no posee grupos tiólicos libremente accesibles, éstos se pueden generar mediante la utilización de 2-imino-tiolano \cdot HCl (véase p.ej. el documento EP 0.607.222 B1) - se diluyeron en 1,2 ml de un tampón de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 243 \mug (240 nmol) del producto del Ejemplo 16d, disueltos en 50 \mul del tampón de borato (véase más arriba), y se agitó durante 3 horas a 37ºC. La solución del tampón de borato se intercambió por un tampón de acetato, siendo ajustada la solución de muestra tres veces durante 1 h en el aparato Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWCO (procedimiento de diálisis) en cada caso frente a 200 ml de un tampón de NaOAc 0,1 M (de pH 6,0). Finalmente, se ajustó durante una noche frente a 400 ml de un tampón de NaOAc 0,1 M (de pH 6). La solución se mezcló con 50 MBq de [^{47}Sc]ScCl_{3} y se agitó durante 30 min a la temperatura ambiente. Se purificó a través de una columna de NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvil: PBS).

Ejemplo 21 Complejo con lutecio del conjugado con un anticuerpo de (1S,1'S,4S)-1-[4-{3-[({[({1-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentilcarbamoíl}-metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoíl)-metil]-tioureido}]-bencil- 4-metil-DTPA

200 \mug de un anticuerpo con grupos tiólicos libremente accesibles (p.ej. HuM195 (compárese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1.722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, EE.UU.) - si el anticuerpo no posee grupos tiólicos libremente accesibles, éstos se pueden generar mediante la utilización de 2-imino-tiolano \cdot HCl (véase p.ej. el documento EP 0.607.222 B1) - se diluyeron en 1,2 ml de un tampón de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 243 \mug (240 nmol) del producto del Ejemplo 16d, disueltos en 50 \mul del tampón de borato (véase más arriba), y se agitó durante 3 horas a 37ºC. La solución del tampón de borato se intercambió por un tampón de acetato, siendo ajustada la solución de muestra tres veces durante 1 h en el aparato Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWCO (procedimiento de diálisis) en cada caso frente a 200 ml de un tampón de NaOAc 0,1 M (de pH 6,0). Finalmente, se ajustó durante una noche frente a 400 ml de un tampón de NaOAc 0,1 M (de pH 6). La solución se mezcló con 50 MBq de [^{177}Lu]LuCl_{3} y se agitó durante 30 min a la temperatura ambiente. Se purificó a través de una columna de NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvil: PBS).

Ejemplo 22 (R,R)-Ácido {[2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-1-(4-nitro-bencil)-etil]-carboximetil- amino}-acético

La síntesis del Ejemplo 22 se lleva a cabo análogamente al Ejemplo 1, con la diferencia de que no se emplea (S)- sino (R)-2-amino-1-propanol, y tampoco se había utilizado ácido 2-terc.-butoxicarbonil-amino-3-(4-nitro-fenil)-propiónico como eslabón. Resultó el producto 22 deseado con una alta pureza (>96%, RP-HPLC)

EM-FAB: 513 (M^{+} +1, 42).

Ejemplo 23 (R,R)-Ácido [(1-(4-amino-bencil)-2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-etil]-carboximetil-amino]-acético

La síntesis del Ejemplo 23 se lleva a cabo análogamente al Ejemplo 3 método A, con la diferencia de que como educto (producto de partida) no se empleó el compuesto 1h sino el 22. Resultó el producto 23 deseado con un rendimiento de 96%.

EM-FAB: 513 (M^{+} +1, 42).

Ejemplo 24 (R,R)-Éster terc.-butílico de ácido {[2-(4-amino-fenil)-1-({[2-(bis-terc.-butoxicarbonilmetil-amino)-propil]-terc.-bu- toxicarbonilmetil-amino}-metil-)etil]-terc.-butoxicarbonilmetil-amino}-acético

La síntesis del Ejemplo 24 se lleva a cabo análogamente al Ejemplo 2, con la diferencia de que como producto de partida no se empleó el compuesto 1g sino el correspondiente compuesto precursor procedente de la síntesis de 22. Resultó el producto 24 deseado con un rendimiento de 86%.

EM-FAB: 794 (M^{+} +1, 53).

Ejemplo 25 (R,R)-Ácido [(1-(4-isotiocianato-bencil)-2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-etil]-carboxi- metil-amino}-acético

La síntesis del Ejemplo 25 se lleva a cabo análogamente al Ejemplo 5, con la diferencia de que como producto de partida no se empleó el compuesto 3 sino el 23. Resultó el producto 25 deseado con un rendimiento de 74%.

EM-FAB: 555 (M^{+} +1, 33).

Ejemplo 26 (R,R)-Ácido ({2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-1-[4-(2-bromo-acetilamino)-bencil]-etil}-carboximetil-amino)-acético

La síntesis del Ejemplo 26 se lleva a cabo análogamente al Ejemplo 6, con la diferencia de que como producto de partida no se empleó el compuesto 3 sino el 23. Resultó el producto 23 deseado con un rendimiento de 71%.

EM-FAB: 590 (M^{+} +1, 48).

Ejemplo 27 a) Ácido N-[4-(2-(bis-carboximetil-amino)-3-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-propil)-fe- nil]-succinámico

A una solución de 793 mg (1 mmol) del compuesto 24 y 0,28 ml (\sim 2 mmol) de diisopropil-etil-amina en 20 ml de THF se le añadieron 200 mg (2 mmol) de anhídrido de ácido succínico. La solución se agitó durante 2 h a la temperatura ambiente. La solución se concentró por evaporación hasta un tercio de su volumen, se diluyó con diclorometano y se añadió a una solución acuosa (de pH = 4,5). La fase acuosa se separó y se extrajo múltiples veces con diclorometano. Las fases orgánicas reunidas se lavaron con una solución de cloruro de sodio. Se secó con sulfato de sodio y se concentró por evaporación en un evaporador rotatorio. El residuo se purificó por cromatografía en columna (con una mezcla de CH_{2}Cl_{2} y MeOH). Resultó el producto 27a deseado con un rendimiento de 85% (0,85 mmol).

EM-FAB: 613 (M^{+} +1, 58).

b) (1R,1'S,4R)-1-[4-{3-{[({[({1-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentilcarbamoíl}- metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoíl)-metil]-carbamoíl}-propionil)]-bencil-4-metil-DTPA

A una solución agitada de 570 mg (1 mmol) del compuesto 16c en 5 ml de diclorometano se le añadieron gota a gota a 0ºC 5 ml de ácido trifluoroacético. La solución se agitó durante 2 h a la temperatura ambiente y se concentró por evaporación en un evaporador rotatorio. El residuo se extrajo por agitación con dietil-éter. Finalmente se concentró en una bomba de aceite. El residuo se suspendió en diclorometano, se mezcló con 0,25 g (\sim 2 mmol) de la base de Hünig, 304 mg (2 mmol) de 1-hidroxibenzotriazol (HOBT) - H_{2}O y 122 mg (2 mmol) del compuesto 27a. La solución se enfrió a 0ºC y se mezcló con 419 mg (21 mmol) de 1-(dimetil-amino-propil)-3-etil-carbodiimida (EDCI). La solución se agitó durante 12 h y se vertió sobre una mezcla de hielo y agua. La fase acuosa se separó y se extrajo múltiples veces con diclorometano. Las fases orgánicas reunidas se lavaron con una solución de cloruro de sodio. Se secó con sulfato de sodio y se concentró por evaporación en un evaporador rotatorio. El residuo se purificó por cromatografía en columna (con una mezcla de CH_{2}Cl_{2} y acetonitrilo). Resultó el producto deseado con un rendimiento de 85% (0,85 mmol), el cual se recogió luego en 5 ml de diclorometano y 3 ml de anisol y se mezcló con 5 ml de ácido trifluoroacético a 0ºC. La solución se agitó durante 8 h, se concentró por evaporación y se extrajo por agitación con dietil-éter. Resultó el producto 27b deseado en un rendimiento de 90% (813,9 mg).

EM-FAB: 1.064 (M^{+} 1, 38).

Ejemplo 28 Conjugado con un anticuerpo de (1R,1'S,4R)-1-[4-{3-{[({[({1-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentilcarbamoíl}-metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoíl)-metil]-carbamoíl}-propionil)]-bencil-4-metil- DTPA

200 \mug de un anticuerpo con grupos tiólicos libremente accesibles (p.ej. HuM195 (compárese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1.722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, EE.UU.) - si el anticuerpo no posee grupos tiólicos libremente accesibles, éstos se pueden generar mediante la utilización de 2-imino-tiolano \cdot HCl (véase p.ej. el documento EP 0.607.222 B1) - se diluyeron en 1,2 ml de un tampón de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 255 \mug (240 nmol) del producto del Ejemplo 27b, disueltos en 50 \mul del tampón de borato (véase más arriba), y se agitó durante 3 horas a 37ºC. Se purificó a través de una columna de NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvil: PBS).

Ejemplo 29 Complejo con itrio del conjugado con un anticuerpo de (1R,1'S,4R)-1-[4-{3-{[({[({1-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentilcarbamoíl}-metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoíl)-metil]-carbamoíl}-propio- nil)]-bencil-4-metil-DTPA

200 \mug de un anticuerpo con grupos tiólicos libremente accesibles (p.ej. HuM195 (compárese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1.722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, EE.UU.) - si el anticuerpo no posee grupos tiólicos libremente accesibles, éstos se pueden generar mediante la utilización de 2-imino-tiolano \cdot HCl (véase p.ej. el documento EP 0.607.222 B1) - se diluyeron en 1,2 ml de un tampón de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 255 \mug (240 nmol) del producto del Ejemplo 27b, disueltos en 50 \mul del tampón de borato (véase más arriba), y se agitó durante 3 horas a 37ºC. La solución del tampón de borato se intercambió por un tampón de acetato, siendo ajustada la solución de muestra tres veces durante 1 h en el aparato Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWCO (procedimiento de diálisis) en cada caso frente a 200 ml de un tampón de NaOAc 0,1 M (de pH 6,0). Finalmente, se ajustó durante una noche frente a 400 ml de un tampón de NaOAc 0,1 M (de pH 6). La solución se mezcló con 50 MBq de [^{90}Y]YCl_{3} y se agitó durante 30 min a la temperatura ambiente. Se purificó a través de una columna de NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvil: PBS).

Ejemplo 30 Complejo con lutecio del conjugado con un anticuerpo de (1R,1'S,4R)-1-[4-{3-{[({[({1-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentilcarbamoíl}-metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoíl)-metil]-carbamoíl}-pro- pionil)]-bencil-4-metil-DTPA

200 \mug de un anticuerpo con grupos tiólicos libremente accesibles (p.ej. HuM195 (compárese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1.722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, EE.UU.) - si el anticuerpo no posee grupos tiólicos libremente accesibles, éstos se pueden generar mediante la utilización de 2-imino-tiolano \cdot HCl (véase p.ej. el documento EP 0.607.222 B1) - se diluyeron en 1,2 ml de un tampón de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 255 \mug (240 nmol) del producto del Ejemplo 27b, disueltos en 50 \mul del tampón de borato (véase más arriba), y se agitó durante 3 horas a 37ºC. La solución del tampón de borato se intercambió por un tampón de acetato, siendo ajustada la solución de muestra tres veces durante 1 h en el aparato Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWCO (procedimiento de diálisis) en cada caso frente a 200 ml de un tampón de NaOAc 0,1 M (de pH 6,0). Finalmente, se ajustó durante una noche frente a 400 ml de un tampón de NaOAc 0,1 M (de pH 6). La solución se mezcló con 50 MBq de [^{177}Lu]LuCl_{3} y se agitó durante 30 min a la temperatura ambiente. Se purificó a través de una columna de NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvil: PBS).

Ejemplo 31 Complejo con escandio del conjugado con un anticuerpo de (1R,1'S,4R)-1-[4-{3-{[({[({1-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentilcarbamoíl}-metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoíl)-metil]-carbamoíl}- propionil)]-bencil-4-metil-DTPA

200 \mug de un anticuerpo con grupos tiólicos libremente accesibles (p.ej. HuM195 (compárese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1.722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, EE.UU.) - si el anticuerpo no posee grupos tiólicos libremente accesibles, éstos se pueden generar mediante la utilización de 2-imino-tiolano \cdot HCl (véase p.ej. el documento EP 0.607.222 B1) - se diluyeron en 1,2 ml de un tampón de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 255 \mug (240 nmol) del producto del Ejemplo 27b, disueltos en 50 \mul del tampón de borato (véase más arriba), y se agitó durante 3 horas a 37ºC. La solución del tampón de borato se intercambió por un tampón de acetato, siendo ajustada la solución de muestra tres veces durante 1 h en el aparato Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWCO (procedimiento de diálisis) en cada caso frente a 200 ml de un tampón de NaOAc 0,1 M (de pH 6,0). Finalmente, se ajustó durante una noche frente a 400 ml de un tampón de NaOAc 0,1 M (de pH 6). La solución se mezcló con 50 MBq de [^{47}Sc]ScCl_{3} y se agitó durante 30 min a la temperatura ambiente. Se purificó a través de una columna de NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvil: PBS).

Claims

1. Compuestos de las fórmulas generales VIIa y VIIb

30

en las que

Z: representa un átomo de hidrógeno o un equivalente a ion metálico de un elemento con el número atómico 21-29, 31, 32, 37-39, 42-44, 46, 47, 49, 58-71, 75, 77, 82 ó 83,

A: representa un grupo -COO-.

\quad: -NHCO-, -CONH-,

31

y/o -NH-(C=S)-NH, que está sustituido eventualmente en un sitio arbitrario con uno a seis grupos carboxilo, grupos hidroxilo, grupos amino u otros grupos funcionales, así como sus sales con bases orgánicas e inorgánicas, con las condiciones de que el radical alquilo ha de contener por lo menos un grupo funcional, que se pueda unir con una biomolécula, y de que por lo menos dos grupos Z han de representar un equivalente a ion metálico.

2. Compuestos de acuerdo con la reivindicación 1, en los que por lo menos dos de los radicales Z representan un equivalente a ion metálico de un elemento paramagnético con los números atómicos 21-29, 42, 44 y 58-70.

3. Compuestos de acuerdo con la reivindicación 1, en los que por lo menos dos de los radicales Z representan un equivalente a ion metálico de un elemento radiactivo con los números atómicos 26, 27, 29, 31, 32, 37-39, 43, 46, 47, 49, 61, 62, 64, 70, 71, 75, 77, 82 y 83.

4. Compuestos de acuerdo con la reivindicación 1, en los que R representa un radical

32

33

34

35

5. Compuestos de acuerdo con la reivindicación 1, en los que R representa un radical

36

37

38

39

6. Compuestos de acuerdo con la reivindicación 1, en los que R representa un grupo funcional carboxilo, carboxilo activado, amino, nitro, isocianato, isotiocianato, hidrazino, semicarbazido, tiosemicarbazido, cloroacetamido, bromoacetamido, yodoacetamido, acrilo, acilamino, de anhídridos mixtos, azido, de cloruro de ácido, de bromuro de ácido, de hidróxido, de cloruro de sulfonilo, vinilsulfono, carbodiimido, maleimido o diazo.

7. Compuestos de acuerdo con la reivindicación 6, en los que el grupo carboxilo activado se escoge entre

40

y

41

8. Utilización de compuestos de la fórmula general VIIa o VIIb de acuerdo con la reivindicación 1 para la preparación de conjugados con una biomolécula.

9. Utilización de acuerdo con la reivindicación 8, en la que la biomolécula se escoge entre el conjunto que se compone de:

biopolímeros, proteínas, tales como proteínas, que tienen una función biológica, HSA, BSA, etc., proteínas y péptidos, que se enriquecen en determinados sitios en el organismo (p.ej. junto a receptores, membranas celulares, canales, etc.), péptidos disociables por proteasas, péptidos con sitios sintéticos de rotura preestablecida (p.ej. ésteres, amidas lábiles (inestables), etc.), péptidos, que son disociados por metaloproteasas, péptidos con engarzadores fotodisociables, péptidos con grupos disociables con agentes oxidantes (oxidasas), péptidos con aminoácidos naturales y no naturales, glicoproteínas (glicopéptidos), proteínas señalizadoras, proteínas antivíricas y apoctosis, biopolímeros modificados sintéticamente, tales como biopolímeros derivatizados con engarzadores, metaloproteasas modificadas y oxidasas derivatizadas, etc., hidratos de carbono (desde mono- hasta poli-sacáridos), tales como azúcares derivatizados, azúcares disociables en el organismo, ciclodextrinas y sus derivados, aminoazúcares, quitosana, polisulfatos y derivados de ácido acetil-neuramínico, anticuerpos, tales como anticuerpos monoclonales, fragmentos de anticuerpos, anticuerpos policlonales, minicuerpos (en inglés minibodies), cadenas individuales (en inglés single chains) (también las que están unidas con engarzadores para formar múltiples fragmentos), glóbulos rojos sanguíneos y otros componentes de la sangre, marcadores de cáncer (p.ej. CAA) y sustancias de adhesión entre células (p.ej. Lewis X y derivados anti-Lewis X), fragmentos de ADN y ARN, tales como ADN's y ARN's derivatizados (p.ej. los que se encontraron por medio del procedimiento SELEX), ARN y ADN sintéticos (también con bases no naturales), PNA's (de Hoechst) y antisentido, \beta-aminoácidos (de Seebach), aminas vectoras para su introducción en la célula, aminas biogénicas, agentes farmacéuticos, formulaciones oncológicas, polímeros sintéticos, que están dirigidos hacia una diana biológica (p.ej. un receptor), esteroides (naturales y modificados), prostaglandinas, taxol y sus derivados, endotelinas, alcaloides, ácido fólico y sus derivados, lípidos bioactivos, grasas, ésteres de ácidos grasos, mono-, di- y tri-glicéridos modificados sintéticamente, liposomas, que están derivatizados junto a su superficie, micelas a base de ácidos grasos naturales o de compuestos perfluoroalquílicos, porfirinas, texafrinas, porfirinas ampliadas, citocromos, inhibidores, neuraminidasas, neuropéptidos, inmunomoduladores, tales como FK 506, CAPE y gliotoxina, endoglicosidasas, substratos, que son activados por enzimas tales como calmodulina cinasa, caseína-cinasa II, glutatión-S-transferasa, heparinasa, metaloproteasas de la matriz, cinasa de receptores de \beta-insulina, UDP-galactosa-4-epimerasa, fucosidasas, proteínas G, galactosidasas, glicosidasas, glicosil-transferasas y xilosidasa, antibióticos, vitaminas y compuestos análogos a vitaminas, hormonas, intercaladores de ADN, nucleósidos, nucleótidos, lectinas, vitamina B12, Lewis X y sustancias afines, psoralenos, antibióticos del tipo de dieno-trieno, carbaciclinas, VEGF (del inglés vascular endotelial growth factor), somatostatina y sus derivados, derivados de biotina, antihormonas, proteínas y productos sintéticos específicas/os para tumores, polímeros, que se enriquecen en zonas ácidas o básicas del cuerpo (distribución regulada por el pH), mioglobinas, apomioglobinas, etc., péptidos de neurotransmisores, factores de necrosis de tumores, péptidos, que se enriquecen en un tejido inflamado, reactivos Bloodpool, proteínas transportadoras de aniones y cationes, poliésteres (p.ej. del ácido láctico), poliamidas y polifosfatos.

10. Procedimiento para la preparación de compuestos de las fórmulas VIIa y VIIb de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque, de manera en sí conocida, en compuestos de las fórmulas generales VII'a y VII'b

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en las que Z' significa un grupo protector de carboxilo, se separan los grupos protectores Z' y los ácidos así obtenidos se hacen reaccionar de manera en sí conocida con por lo menos un óxido metálico o una sal metálica de un elemento con los números atómicos 21-29, 31, 32, 37-39, 42-44, 46, 47, 49, 58-71, 75, 77, 82 ó 83, y a continuación, en caso deseado, los átomos de hidrógeno ácidos presentes se transforman, con compuestos inorgánicos y/u orgánicos o aminoácidos, en sales fisiológicamente compatibles.

11. Agentes farmacéuticos que contienen por lo menos un compuesto fisiológicamente compatible de acuerdo con la reivindicación 2.

12. Agentes farmacéuticos que contienen por lo menos un compuesto fisiológicamente compatible de acuerdo con la reivindicación 3.

13. Utilización de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 2 para la preparación de agentes para el diagnóstico por RMN.

14. Utilización de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 3 para la preparación de agentes para el radiodiagnóstico o la radioterapia.

15. Estuche para la preparación de radiofármacos, que comprende un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que Z es un átomo de hidrógeno, y un compuesto de un elemento radiactivo con los números atómicos 26, 27, 29, 31, 32, 37-39, 43, 46, 61, 62, 64, 67, 70, 71, 75, 77, 82 y 83.