ES2253930T3

ES2253930T3 - 4-aminopirrolopirimidinas como inhibidores de quinasa.

Info

Publication number: ES2253930T3
Application number: ES99969414T
Authority: ES
Inventors: David Calderwood; Lee D. Arnold; Hormoz Mazdiyasni; Gavin Hirst; Bojuan B. Deng; Helen L. Twigger; Rainer Munschauer; Paul Rafferty; Gerald B. Tometzki; David N. Johnston
Original assignee: Abbott GmbH and Co KG
Current assignee: Abbott GmbH and Co KG
Priority date: 1998-09-18
Filing date: 1999-09-17
Publication date: 2006-06-01
Anticipated expiration: 2019-09-17
Also published as: EP1114052A1; HK1039325B; KR20010085822A; HUP0200355A2; WO2000017202A1; NO20011357D0; EP1114052B1; IL141867A0; SK3852001A3; ATE310001T1; CN1326457A; NZ510587A; HUP0200355A3; CA2344262A1; AU752474B2; DE69928414D1; TR200101395T2; JP2002527359A; NO20011357L; BR9913888A

Abstract

Un compuesto representado por la siguiente **fórmula** o sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en la que: el Anillo A es fenilo que está sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre F, Cl y nitro; L es uno de los siguientes engarces: -S-; -S(O)2-; - S(O)2-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -NCSO2RH -CH2O; -CH2S-; - CH2N(R); -CH(NR)-; -CH2N(C(O)R))-; -CH2N(C(O)OR)-; - CH2N(SO2R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R-; -CH(NHSO2R)-; - CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; - C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; - NHC(O)R-; -N(R)S(O)-; -N(R)S(O)2-; -NHSO2R-; -OC(O)N(R)-; - N(R)C(O)N(R); -NRC(O)O-; -S(O)N(R); -S(O)2N(R)-; - N(C(O)R)S(O)-; -N(C(O)R)S(O)2-; -N(R)S(O)N(R)-; - N(R)S(O)2N(R)-; -C(O)N(R)C(O)-; -S(O)N(R)C(O)-; - S(O)2N(R)C(O)-; -OS(O)N(R)-; -OS(O)2N(R)-; -N(R)S(O)O-; - N(R)S(O)C(O)-; -N(R)S(O)C(O)-; -SON(CCO)R)-; -N(R)SON(R)-; -N(R)SO2N(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(OR¿)O-; -N(R)P(OR)-; - N(R)P(O)(OR¿)O-; -N(R)P(O)(OR¿)-; -N(C(O)R)P(OR¿)O-; - N(C(O)R)P(OR¿)-; -N(C(O)R)P(O)(OR¿)O- o -N(C(O)R)P(OR¿)-, donde cada uno de R y R¿ es, independientemente, -H, un grupo acilo, un grupo alifático sustituido o no sustituido, un grupo aromático sustituido o no sustituido, un grupo heteroaromático sustituido o no sustituido o un grupo cicloalquilo sustituido o no sustituido; o L es -RbN(R)S(O)2-, -RbN(R)P(O)- o -RbN(R)P(O)O-, donde Rb es un grupo alquileno que cuando se toma junto con el grupo sulfonamida, fosfinamida o fosfonamida al que está unido forma un anillo de cinco o seis miembros condensado al anillo A.

Description

4-aminopirrolopirimidinas como inhibidores de quinasa.

Antecedentes de la invención

Existen al menos 400 enzimas identificadas como proteína quinasas. Estas enzimas catalizan la fosforilación de sustratos proteicos diana. La fosforilación es normalmente una reacción de transferencia de un grupo fosfato de ATP al sustrato proteico. La estructura específica en el sustrato diana a la cual se transfiere el fosfato es un resto tirosina, serina o treonina. Como estos restos aminoácidos son las estructuras diana para la transferencia de fosforilo, normalmente se hace referencia a estas enzimas proteína quinasas como tirosina quinasas o serina/treonina quinasas.

Las reacciones de fosforilación, y las reacciones que contrarrestan la fosfatasa en los restos tirosina, serina y treonina están implicadas en incontables procesos celulares que están detrás de respuestas a diversas señales intracelulares (mediadas típicamente a través de receptores celulares), regulación de funciones celulares, y activación o desactivación de procesos celulares. A menudo una cascada de proteína quinasas participa en la transducción de señales intracelulares y es necesaria para la realización de estos procesos celulares. Dado su ubicuidad en estos procesos, las proteína quinasas pueden encontrarse como parte integral de la membrana de plasma o como enzimas citoplásmicas o pueden localizarse en el núcleo, a menudo como componentes de complejos de enzimas. En muchos casos, estas proteína quinasas son un elemento esencial de los complejos proteicos enzimáticos y estructurales que determinan dónde y cuando ocurre un proceso celular en una célula.

Proteínas Tirosina Quinasas. Las proteínas tirosina quinasas (PTK) son enzimas que catalizan la fosforilación de restos tirosina específicos en las proteínas celulares. Esta modificación post-traduccional de estas proteínas de sustrato, que a menudo son también enzimas, actúa como un interruptor molecular que regula la proliferación, la activación o la diferenciación celular (para un análisis, véase Schlessinger y Ulrich, 1992, Neuron 9:383-391). Se ha observado una actividad aberrante o excesiva de las PTK en muchos estados de enfermedad incluyendo trastornos proliferativos benignos y malignos así como enfermedades que resultan e la activación inapropiada del sistema inmune (por ejemplo, trastornos autoinmunes), rechazo de aloinjertos, y enfermedad de injerto contra hospedador. Además las PTK de receptores específicas de células endoteliales tales como KDR y Tie-2 median el proceso angiogénico, y de esta forma están implicadas en la progresión de cánceres y otras enfermedades que implican una vascularización inapropiada (por ejemplo, retinopatía diabética, neovascularización coroidal debida a degeneración macular relacionada con la edad, psoriasis, artritis, hemangiomas infantiles).

Las proteína quinasas pueden ser de tipo receptor (con dominios extracelular, transmembrana e intracelular) o del tipo no receptor (siendo completamente intracelular).

Tirosina Quinasas de Receptores (RTK). Las RTK comprenden una gran familia de receptores transmembrana con diversas actividades biológicas. En la actualidad, se han identificado al menos diecinueve (19) subfamilias de RTK distintas. La familia de la tirosina quinasa de receptores (RTK) incluye receptores que son cruciales para el crecimiento y la diferenciación de diversos de tipos de células (Yarden y Ullrich, Ann. Rev. Biochem. 57:433-478, 1988; Ullrich y Schlessinger, Cell 61:243-254, 1990). La función intrínseca de las RTK se activa tras la unión del ligando, lo que da lugar a la fosforilación del receptor y múltiples sustratos celulares, y posteriormente a diversas respuestas celulares (Ullrich & Schlessinger, 1990, Cell 61:203-212). De esta forma, la transducción de señales mediadas por la tirosina quinasa de receptores se inicia por la interacción extracelular con un factor de crecimiento específico (ligando), seguido típicamente de dimerización del receptor, estimulación de la actividad proteína tirosina quinasa intrínseca y trans-fosforilación del receptor. De esta forma, se crean sitios de unión para las moléculas de transducción de señales intracelulares y conducen a la formación de complejos con un espectro de moléculas de señalización citoplasmática que facilita la respuesta celular apropiada. (Por ejemplo, división celular, diferenciación, efectos metabólicos, cambios en el microentorno extracelular) véase Schlessinger y Ullrich, 1992, Neuron 9:1-20).

Las proteínas con dominios SH2 (homología src -2) o unión fosfotirosina (PTB) unen receptores de tirosina quinasa y sus sustratos con una afinidad alta para propagar señales en las células. Ambos dominios reconocen la fosfotirosina (Fantl et al., 1992, Cell, 69:413-123; Songyang et al., 1994, Mol. Cell. Biol. 14:2777-2785; Songyang et al., 1993, Cell 72:767-778; y Koch et al., 1991, Science 252:668-678; Shoelson, Curr. Opin. Chem. Biol. (1997), 1(2), 227-234; Cowburn, Curr. Opin. Struct. Bio. (1997), 7(6), 835-838). Se han identificado varias proteínas de sustrato intracelular que se asocian con tirosina quinasas de receptores (RTK). Pueden dividirse en dos grupos principales: (1) sustratos que tienen un dominio catalítico; y (2) sustratos que carecen de tal dominio pero que sirven como adaptadores y se asocian con moléculas catalíticamente activas (Songyang et al., 1993, Cell 72:767-778). La especificidad de las interacciones entre receptores o proteínas y dominios SH2 o PTB de sus sustratos se determina con los restos aminoacídicos que rodean inmediatamente el resto tirosina fosforilado. Por ejemplo, las diferencias en las afinidades de unión entre dominios SH2 y las secuencias de aminoácidos que rodean los restos fosfotirosina en los receptores particulares se correlacionan con las diferencias observadas en sus perfiles de fosforilación de sustrato (Songyang et al., 1993, Cell 72:767-778). Las observaciones sugieren que la función de cada tirosina quinasa de receptores se determina no sólo por su patrón de expresión y disponibilidad de ligando sino también por el conjunto de rutas de transducción de señales corriente abajo que se activan por un receptor particular así como por el tiempo y duración de estos estímulos. De esta forma, la fosforilación proporciona una etapa reguladora importante que determina la selectividad de las rutas de señalización reclu-
tadas por receptores de factores de crecimiento específicos, así como receptores de factores de diferenciación.

Se ha sugerido que varias tirosina quinasas de receptores tales como FGFR-1, PDGFR, TIE-2 y c-Met, y factores de crecimiento que se unen a ellas juegan un papel en la angiogénesis, aunque algunas pueden promover la angiogénesis indirectamente (Mustonen y Alitalo, J. Cell. Bio. 129:895-898, 1995). Un receptor tirosina quinasa tal, conocido como "quinasa 1 de hígado fetal" (KLK-1), es miembro de la subclase de tipo III de RTK. Una denominación alternativa para la FLK-1 humana es "receptor con dominio de inserción de quinasa" (KDR) (Terman et al., Oncogene 6:1677-83, 1991). Otra denominación alternativa para FLK-1/KDR es "receptor 2 del factor de crecimiento de células endoteliales vasculares" (VEGFR-2) ya que une VEGF con alta afinidad. La versión murina de FLK-1/VEGFR-2 se ha llamado también NYK (Oelrichs et al., Oncogene 8(1):11-15, 1993). Se han aislado ADN que codifican la FLK-1 en ratones, ratas y seres humanos, y se ha informado del nucleótido y secuencias de aminoácidos codificadas (Matthews et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU.; 88:9026-30, 1991; Terman et al., 1991, supra; Terman et al., Biochem. Biophys, Res. Comm. 187:1579-86, 1992; Sarzani et al., supra; y Millauer et al., Cell 72:835-846, 1993). Numerosos estudios tales como los presentados en Millauer et al., supra, sugieren que VEGF y FLK-1/KDR/VEGFR-2 son un par ligando-receptor que juegan un papel importante en la proliferación de células endoteliales vasculares, y en la formación y ramificación de vasos sanguíneos, denominado como vasculogénesis y angiogénesis respectivamente.

Otra subclase de tipo III de RTK designada "tirosina quinasa-1 similar a fms" (Flt-1) está relacionada con FLK-1/KDR (DeVries et al. Science 255; 989-991, 1992; Shibuya et al., Oncogene 5:519-524, 1990). Una designación alternativa para Flt-1 es "receptor 1 del factor de crecimiento de células endoteliales vasculares" (VEGFR-1). Hasta la fecha, se han encontrado miembros de las subfamilias FLK-1/KDR/VEGFE-2 y Flt-1/VEGFR1 expresadas principalmente en células endoteliales. Estos miembros de subclases se estimulan específicamente por miembros de la familia de ligandos de factor de crecimiento de células endoteliales vasculares (VEGF) (Kalgsburn y D'Amore, Cyotkine & Growth Factor Reviews 7:259-270, 1996). El factor de crecimiento de células endoteliales vasculares (VEGF) se une a Flt-1 con mayor afinidad que a FLK-1/KDR y es mitogénico hacia células endoteliales vasculares (Terman et al., 1992, supra; Mustonen et al. supra; DeVries et al., supra). Se cree que Flt-1 es esencial para la organización endotelial durante el desarrollo vascular. La expresión de Flt-1 se asocia con el desarrollo vascular temprano en embriones de ratón, y con la neovascularización durante la cura de heridas (Mustonen y Alitalo, supra). La expresión de Flt-1 en monocitos, osteoclastos y osteoblastos, así como en tejidos adultos tales como en los glomérulos renales sugiere una función adicional para este receptor que no está relacionada con el crecimiento celular (Mustonen y Alitalo, supra).

Como se ha afirmado previamente, pruebas recientes sugieren que VEGF juega un papel en la estimulación de tanto la angiogénesis normal como patológica (Jakeman et al., Endocrinology 133: 848-859, 1993; Koch et al., Breast Cancer Research and Treatment 36: 139-155, 1995; Ferrara et al, Endocrine Reviews 18(1); 4-25, 1997; Ferrara et al., Regulation of Angiogenesis (ed. L. D. Goldberg y E. M. Rosen), 209-232, 1997). Además, la VEGF se ha implicado en el control y mejora de la permeabilidad vascular (Connolly et al., J. Biol. Chem. 264: 20017-20024, 1989; Brown et al., Regulation of Angiogenesis (ed. L. D. Goldberg y E.M. Rosen), 233-269, 1997). Se ha informado de diferentes formas de VEGF que surgen de sitios de corte y empalme alternativos de ARNm, incluyendo las cuatro especies descritas por Ferrara et al. (J. Cell. Biochem. 47:211-218, 1991). Ferrar et al. supra han identificado especies asociadas predominantemente a células y secretadas, y se sabe que la proteína existe en forma de dímeros unidos con enlaces disulfuro.

Recientemente se han identificado varios homólogos de VEGF relacionados. Sin embargo, sus funciones en los procesos fisiológicos y de enfermedad no se han aclarado. Además, los miembros de la familia VEGF están a menudo coexpresados con VEGF en varios tejidos y son, en general, capaces de formar heterodímeros con VEGF. Esta propiedad altera probablemente la especificidad del receptor y los efectos biológicos de los heterodímeros y complica adicionalmente la aclaración de sus funciones específicas como se ilustra a continuación (Korpelainen y Alitalo, Curr. Opin. Cell. Biol., 159-164, 1998 y referencias citadas en ese documento).

El factor de crecimiento de la placenta (PIGF) tiene una secuencia de aminoácidos que muestra una homología significativa con la de la secuencia de VEGF (Park et al., J. Biol. Chem. 269:25646-54, 1994; Maglione et al. Oncogene 8:925-31, 1993). Como con VEGF, surgen distintas especies de PIGF a partir de sitios de corte y empalme alternativo de ARNm, y la proteína existe en forma dimérica (Park et al., supra). PIGF-1 y PIGF-2 se unen a Flt-1 con alta afinidad, y PIGF-2 además se une ávidamente a neuropilina-1 (Migdal et al., J. Biol. Chem. 273 (35): 22272-22278), pero no se use a FLK1/KDR (Park et al, supra). Se ha informado de que PIGF potencia tanto la permeabilidad vascular como el efecto mitogénico de VEGF en las células endoteliales cuando VEGF está presente a bajas concentraciones(pretendidamente debido a la formación del heterodímero) (Park et al., supra).

VEGF-B se produce como dos isoformas (restos 167 y 185) que también parecen unirse a Flt-1/VEGFR-1. Puede tener un papel en la regulación de la degradación de la matriz extracelular, adhesión celular, y migración a través de la modulación de la expresión y actividad del activador de plasminógeno tipo uroquinasa y del inhibidor 1 del activador de plasminógeno (Pepper et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. (1998), 95(20): 11709-11714).

VEGF-C se clonó originariamente como un ligando para VEGFR-3/Flt-4 que se expresa principalmente en células endoteliales linfáticas. En su forma totalmente procesada, VEGF-C puede unirse también a KDR/VEGFR-2 y estimular la proliferación y migración de células endoteliales in vitro y angiogénesis en modelos in vivo (Lymboussaki et al, Am. J. Pathol. (1998), 153(2): 195-403; Witzenbichler et al, Am. J. Pathol. (1998), 153(2), 381-394). La sobreexpresión transgénica de VEGF-C causa la proliferación y aumento de solamente los vasos linfáticos, mientras que los vasos sanguíneos permanecen inafectados. Al contrario que VEGF, la expresión de VEGF-C no está inducida por la hipoxia (Ristimake et al., J. Biol. Chem. (1998), 273(14), 8413-8418).

El VEGF-D descubierto más recientemente es estructuralmente muy similar a VEGF-C. Se ha informado de que VEGF-D se une y activa al menos dos VEGFR, VEGFR-3/Flt-4 y KDR/VEGFR-2. Se clonó originariamente como un mitógeno inducible con c-fos para fibroblastos y se expresa de forma más destacada en las células mesenquimales del pulmón y de la piel (Achen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. (1998), 95(2), 548-553 y las referencias en ese documento).

Se ha reivindicado que VEGF, VEGF-C y VEGF-D inducen aumentos en la permeabilidad vascular in vivo en un ensayo Miles cuando se inyectan en el tejido cutáneo (documentos PCT/US97/14696; WO98/07832, Witzenbichler et al., supra). El papel fisiológico y la importancia de estos ligandos en la modulación de la hiperpermeabilidad vascular y las respuestas endoteliales en los tejidos donde se expresan siguen sin conocerse.

Recientemente se ha informado de un tipo nuevo viralmente codificado de factor de crecimiento endotelial vascular, VEGF-E (NZ-7 VEGF), que utiliza preferentemente el receptor KDR/FlK-1 y tiene una actividad mitótica potente sin el dominio de unión a heparina (Meyer et al, EMBO J. (1999), 18(2), 363-374; Ogawa et al, J. Biol. Chem. (1998), 273(47), 31273-31282). Las secuencias de VEGF-E poseen un 25% de homología con respecto a VEGF de mamífero y se codifican mediante el virus parapoxvirus Orf (OV). Este parapoxvirus que afecta a las ovejas y a las cabras y ocasionalmente a los seres humanos genera lesiones con angiogénesis. VEGF-E es un dímero de aproximadamente 20 kDa sin dominio básico ni afinidad por la heparina, pero tiene el motivo nodal de cisteína característico presente en todos los VEGF de mamífero y sorprendentemente se descubrió que poseían potencia y bioactividades similares a las de la isoforma VEGF165 que se une a heparina de VEGF-A, es decir ambos factores estimulan la liberación del factor de tejidos (TF), la proliferación, quimiotaxis y ramificaciones de células endoteliales vasculares cultivadas in vitro y angiogénesis in vivo. Como VEGF165, se descubrió que VEGF-E se unía con alta afinidad al receptor VEGF-2 (KDR) dando como resultado la autofosforilación del receptor y un aumento bifásico en concentraciones de Ca2+ intracelulares libres, mientras que al contrario que VEGF165, VEGF-E no se unía al receptor VEGF-1 (Flt-1).

Basándose en los descubrimientos emergentes de otros homólogos de VEGF y VEGFR y los precedentes para ligandos y heterodimerización de receptores, las acciones de tales homólogos de VEGF pueden implicar la formación de heterodímeros de ligandos VEFG y/o heterodimerización de receptores, o la unión a un VEGFR sin descubrir todavía (Witzenbichler et al., supra). Además, informes recientes sugieren que la neuropilina-1 (Migdal et al, supra) o VEGFR-3/Flt-4 (Witzenbichler et al., supra), u otros receptores distintos de KDR/VEGFR-2 pueden estar implicados en la inducción de la permeabilidad vascular (Stacker, S.A., Vitali, A., Domagala, T., Nice, E., y Wilks, A.F., "Angiogenesis and Cancer", Conference, Amer. Assoc. Cancer. Res., Enero 1998, Orlando, FL; Williams Diabetologia 40:S118-120 (1997)).

Tie-2 (TEK) es un miembro de una familia recientemente descubierta de tirosina quinasas de receptores específicas de células endoteliales que está implicado en los procesos angiogénicos críticos, tales como bifurcación, ramificación, remodelado, maduración y estabilidad de los vasos. Tie-2 es la primera tirosina quinasa de receptores de mamífero para la que se han identificado tanto el(los) ligando(s) agonista(s) (por ejemplo, Angiopoyetina1 ("Ang1"), que estimulan la autofosforilación del receptor y la transducción de señales) como el(los) ligando(s) antagonista(s) (por ejemplo, Angiopoyetina2 ("Ang2")). La manipulación knock-out y transgénica de la expresión Tie-2 y sus ligandos indica un control espacial y temporal fuerte de la señalización de Tie-2 que es esencial para el desarrollo adecuado de nueva vasculatura. El actual modelo sugiere que la estimulación de la quinasa de Tie-2 mediante ligando Ang1 está implicada directamente en la bifurcación, ramificación y extensión de nuevos vasos, y en el reclutamiento e interacción de células de soporte periendoterial importantes en el mantenimiento de la integridad de los vasos y en la inducción de la quiescencia. La ausencia de la estimulación por Ang1 de Tie-2 o de la inhibición de la autofosforilación de Tie-2 por Ang2, que se produce a altos niveles en sitios de regresión vascular, puede provocar una pérdida en la estructura vascular y contactos de matriz que tienen como resultado la muerte de células endoteliales, especialmente en ausencia de estímulos de crecimiento/supervivencia. Sin embargo, la situación es más compleja, ya que se ha informado recientemente de al menos dos ligandos de Tie-2 adicionales (Ang3 y Ang4), y se ha demostrado la capacidad para la heterooligomerización de las diversas angiopoyetinas agonistas y antagonistas, modificando por lo tanto su actividad. De esta forma, las interacciones diana del ligando-receptor de Tie-2 como enfoque terapéutico angiogénico están menos favorecidas y se prefiere la estrategia inhibidora de quinasa.

El dominio extracelular soluble de Tie-2 ("ExTek") puede actuar para interrumpir el establecimiento de la vasculatura tumoral en un xenoinjerto de tumor de mama y modelos de metástasis pulmonar y en la neovascularización ocular mediada por células tumorales. Mediante la infección adenoviral, la producción in vivo de niveles en mg/ml de ExTek en roedores puede conseguirse durante 7-10 días sin efectos secundarios adversos. Estos resultados sugieren que la interrupción de las rutas de señalización de Tie-2 en animales sanos normales puede tolerarse bien. Estas respuestas inhibidoras de Tie-2 a ExTek pueden ser una consecuencia de la complejación de ligando(s) y/o generación de un heterodímero no productivo con Tie-2 de longitud completa.

Recientemente, se ha descubierto una regulación positiva significativa de la expresión de Tie-2 en el pannus sinovial vascular de articulaciones artríticas de seres humanos, coherente con un papel en la neovascularización inapropiada. Este descubrimiento sugiere que Tie-2 desempeña un papel en la progresión de la artritis reumatoide. Se han identificado mutaciones puntuales que producen formas constitutivamente activadas de Tie-2 en asociación con trastornos de malformación venosa en seres humanos. Los inhibidores de Tie-2 son, por lo tanto, útiles en el tratamiento de tales trastornos y en otras situaciones de neovascularización inapropiada.

Las Tirosina Quinasas de no Receptores. Las tirosina quinasas de no receptores representan un grupo de enzimas celulares que carecen de secuencias extracelulares y transmembrana. En la actualidad, se han identificado más de veinticuatro tirosina quinasas de no receptores individuales, que comprenden once (11) subfamilias (Src, Frk, Btk, Csk, Abl, Zap70, Fes/Fps, Fak, Jak, Ack, y LIMK). En la actualidad, la subfamilia Src de tirosina quinasas de no receptores se compone del mayor número de PTK e incluyen Src, Yes, Fyn, Lyn, Lck, Blk, Hck, Fgr, e Yrk. La subfamilia Src de enzimas se ha relacionado con la oncogénesis y respuestas inmunes. En Bolen, 1993, Oncogene 8:2025-2031 se proporciona un análisis más detallado de tirosina quinasas de no receptores.

Se ha descubierto que muchas de las tirosina quinasas, ya sea una RTK o tirosina quinasas de no receptores, están implicadas en las rutas de señalización celular implicadas en varias afecciones o respuestas hiper-inmunes.

Desarrollo de Compuestos para Modular las PTK. En vista de la supuesta importancia de PTK para controlar, regular, y modular la proliferación celular, las enfermedades y trastornos asociados con la proliferación celular anormal, se han hecho muchos intentos para identificar "inhibidores" de tirosina quinasa de receptores y de no receptores usando diversos enfoques, incluyendo el uso de ligandos mutantes (Solicitud de Estados Unidos Nº 4.966.849), receptores solubles y anticuerpos (Solicitud Nº WO 94/10202; Kendall & Thomas, 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. 90:10705-09; Kim et al., 1993, Nature 362:841-844), ligandos de ARN (Jellinek, et al., Biochemistry 33:10450-56; Takano et al, 1993 Mol. Bio. Cell 4:358A; Kinsella, et al., 1992, Exp. Cell. Res. 199:56-62; Wright, et al., 1992 J. Cellular Phys. 152:448-57) e inhibidores de tirosina quinasa (documentos WO 94/03427; WO 92/21660; WO 91/15495; WO 94/14808; Patente de Estados Unidos Nº 5.330.990; Mariani, et al., 1994, Proc. Am. Assoc. Cancer. Res. 35:2268).

Más recientemente, se han intentado identificar pequeñas moléculas que actúan como inhibidores de tirosina quinasa. Por ejemplo, se han descrito de forma general compuestos de arilo bis monocíclico, bicíclico o heterocíclico (documento PCT WO 92/2062) y derivados de vinileno-azaindol (documento PCT WO 94/14808) como inhibidores de tirosina quinasa. Se han descrito compuestos de estirilo (Patente de Estados Unidos Nº 5.217.999), compuestos de estirilo sustituidos con piridilo (Patente de Estados Unidos Nº 5.302.606) ciertos derivados de quinazolina (Solicitud de Patente Europea Nº 0 566 266 A1; Expert Opin. Ther. Pat. (1998), 8(4): 475-478), selenoindoles y seleniuros (documento PCT WO 94/03427), compuestos polihidroxílicos tricíclicos (documento PCT WO 92/21660) y compuestos de ácido bencilfosfónico (documento PCT WO 91/15495) como compuestos para uso como inhibidores de tirosina quinasa para uso en el tratamiento del cáncer. Se han descrito Anilinocinolinas (documento PCT WO 97/34876) y compuestos derivados de quinazolina (documentos PCT WO97/22596; y PCT WO97/42187) como inhibidores de angiogénesis y permeabilidad vascular.

Además, se han hecho intentos para identificar pequeñas moléculas que actúan como inhibidores de serina/treonina quinasa. Por ejemplo, se han descrito compuestos de bis(indolilmaleimida) como que inhiben isoformas de serina/treonina PKC particulares cuya función de transducción de señales se asocia con una permeabilidad vascular alterada en enfermedades relacionadas con VEGF (documentos PCT WO97/40830; PCT WO97/40831).

Inhibidores de quinasa de Plk-1

Plk-1 es una serina/treonina quinasa que es un regulador importante de la progresión del ciclo celular. Desempeña papeles vitales en la unión y en la función dinámica del aparato del huso mitótico. También se ha demostrado que Plk-1 y quinasas relacionadas están muy implicadas en la activación e inactivación de otros reguladores del ciclo celular, tales como quinasas dependientes de ciclina. Se asocian altos niveles del la expresión de Plk-1 con actividades de proliferación celular. Se suele encontrar en tumores malignos de diversos orígenes. Se espera que los inhibidores de Plk-1 bloqueen la proliferación de células cancerosas interrumpiendo los procesos que implican husos mitóticos y las quinasas dependientes de ciclinas activadas de forma inapropiada.

Inhibidores de quinasa de Cdc2/ciclina B (Cdc2 también se conoce como cdk1)

Cdc2/ciclina B es otra enzima de serina/treonina quinasa que pertenece a la familia de quinasa dependiente de ciclina (cdks). Estas enzimas están implicadas en la transición crítica entre diversas fases de la progresión del ciclo celular. Se cree que la proliferación celular descontrolada, que es el indicativo de un cáncer depende de actividades elevadas de cdk en estas células. La inhibición de actividades elevadas de cdk en células cancerosas por inhibidores de quinasa de cdc2/ciclina B podría suprimir la proliferación y puede restaurar el control normal de la progresión del ciclo celular.

La regulación de la activación de CDK es compleja, pero requiere la asociación de la CDK con un miembro de la familia ciclina de subunidades reguladoras (Draetta, Trends in Cell Biology, 3:287-289 (1993)); Murray y Kirschener, Nature, 339:275-280 (1989); Solomon et al., Molecular Biology of the cell, 3:13-27 (1992)). Un nivel más de regulación se produce a través de la activación e inactivación de las fosforilaciones de la subunidad de CDK (Dretta, Trends in Cell Biology, 3:287-289 (1993)); Murray y Kirschner, Natura, 339:275-280 (1989); Solomon et al., Molecular Biology of the Cell, 3:13-27 (1992); Ducommun et al., EMBO Jounal, 10:3311-3319 81991); Gautier et al., Nature 339:626-629 (1989); Gould y Nurse, Nature, 342:39-45 (1989); Krek y Nigg, EMBO Journal, 10:3331-3341 (1991); Solomon et al., Cell, 63:1013-1024 (1990)). La activación e inactivación coordinada de diferentes complejos ciclina/CDK es necesaria para la progresión normal a través de ciclo celular (Pines, Trends in Biochemical Sciences, 18:195-197 (1993)); Sherr, Cell, 73:1059-1065 (1993)). Las transiciones críticas G1-S y G 2-M se controlan por la activación de diferentes actividades de ciclina/CDK. En G1, se cree que tanto la ciclina D/CDK4 como la ciclina E/CDK2 median el comienzo de la fase S (Matsushima et al., Molecular & Cellular Biology, 14:2066-2076 (1994); Ohtsubo y Roberts, Science, 259:1908-1912 (1993); Quelle et al., Genes & Development; 7:1559-1571 (1993); Resnitzky et al., Molecular & Cellular Biology, 14:1669-1679 (1994)). La progresión a través de la fase S requiere la actividad de la ciclina A/CDK2 (Girad et al., Cell, 67:1169-1179 81991); Pagano et al., EMBO Journal, 11:961-971 (1992); Rosenblatt et al., Proceedings of the National Academy of Science USA, 89:2824-2828 81992); Walker y Maller, Nature, 354:314-317 (1991); Zindy et al., Biochemical & Biophisical Research Communications, 182:1144-1154 (1992)) mientras que la activación de la ciclina A/cdc2 (CDK1) y de la ciclina B/cdc2 se requieren para el comienzo de la metafase (Draetta, Trends in Cell Biology, 3:287-289 (1993)); Murray y Kirschner, Nature, 339:275-280 81989); Solomon et al., Molecular Biology of the Cell, 3:13-27 (1992); Girard et al., Cell, 67:1169-1179 (1991); Pagano et al., EMBO Journal, 11:961-971 (1992); Rosenblatt et al., Proceedings of the National Academy of Science USA, 89:2824-2828 (1992); Walker y Maller, Nature, 354:314-317 (1991); Zindy et al., biochemical & Biophysical Research Communications, 182:1144-154 (1992)). Por lo tanto, no es de sorprender que la pérdida de control de la regulación de CDK sea un evento frecuente en enfermedades hiperproliferativas y en el cáncer. (Pines, Current Opinion in Cell Biology, 4:144-148 81992); Lees, Current Opinion in Cell Biology, 7:773-780 (1995); Hunter y Pines, Cell, 79:573-582 81994)).

Los inhibidores de quinasas implicados en la medicación o mantenimiento de estados de enfermedad representan nuevas terapias para estos trastornos. Los ejemplos de tales quinasas incluyen, pero sin limitación (1) inhibición de c-Sr (Brickell, Critical Reviews in Oncogenesis, 3:401-406 (1992); Courtneidge, Seminars in Cancer Biology, 5:236-246 (1994), raf (Powis, Pharmacology & Therapeutics, 62:57-95 (1994)) y las quinasas dependientes de ciclina (CDK) 1, 2 y 4 en cáncer (Pines, Current Opinion in Cell Biology, 4:144-148 (1992); Lees, Current Opinion in Cell Biology, 7:773-780 (1995); Hunter y Pines, Cell, 79:573-582 (1994)), (2) inhibición de quinasa de CDK2 o PDGF-R en reestenosis (Buchdunger et al., Proceedings of the National Academy of Science USA, 92:2258-2262 (1995)), (3) inhibición de quinasas de CDK5 y GSD3 en el Alzheimer (Hosoi et al., Journal of Biochemistry (Tokio), 117:741-749 81995); Aplin et al., Journal of Neurochemistri, 67:699-707 81996), (4) inhibición de quinasa de c-Src quinasa en osteoporosis (Tanaka et al., Nature, 383:528-531 (1996), (5) inhibición de quinasa de GSK-3 quinasa en diabetes de tipo 2 (Borthwick et al., Biochemical & Biophysical Research Communications, 210:738-745 81995), (6) inhibición de la p38 quinasa en la inflamación (Badger et al., The Journal Of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 279:1453-1461 (1996)), (7) inhibición de quinasas de VEGF-R 1-3 y TIE-1 y 2 en enfermedades que implican angiogénesis (Shawver et al., Drug Discovery Today, 2:50-63 81997)), (8) inhibición de la quinasa de UL97 en infecciones virales (He et al., Journal of Virology, 71:405-411 (1997)), (9) inhibición de la quinasa de CSF-1R en enfermedades óseas y hematopoyéticas (Myers et al, Bioorganic & Medical Chemistry Letters, 7:421-424 (1997), y (10) inhibición de la quinasa de Lck en enfermedades autoinmunes y en el rechazo de transplantes (Myers et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 7:417-420 (1997)).

Es adicionalmente posible que los inhibidores de ciertas quinasas puedan tener utilidad en el tratamiento de enfermedades cuando la quinasa no está mal regulada, pero sin embargo es esencial para el mantenimiento del estado de la enfermedad. En este caso, la inhibición de la actividad de quinasa actuaría como un sistema curativo o paliativo para estas enfermedades. Por ejemplo, muchos virus tales como el virus de papiloma humano, interrumpen el ciclo celular y conducen a las células en la fase S del ciclo celular (Vousden, FASEB Journal, 7:8720879 (1993)). Evitar que las células entren en la síntesis de ADN después de la infección viral mediante la inhibición de actividades que inician la fase S esencial tales como CDK2, puede interrumpir el ciclo de vida del virus evitando la replicación del virus. Este mismo principio puede usarse para proteger células normales del cuerpo de la toxicidad de agentes quimioterapéuticos específicos del ciclo (Stone et al., Cancer Research, 56:3199-3202 81996); Kohn et al., Journal of Cellular Biochemistry, 54:44-452 (1994)). La inhibición de CDK 2 ó 4 prevendrá la progresión en el ciclo en células normales y limitará la toxicidad de agentes citotóxicos que actúan en la fase S, G2 o mitosis. Además, se ha demostrado que la actividad de CDK2/ciclina E regula NF-kB. La inhibición de la actividad de CDK2 estimula la expresión génica dependiente de NF-kB, un evento mediado a través de interacciones con un coactivador p300 (Perkins et al., Science, 275:523-527 (1997)). NF-kB regula genes implicados en respuestas inflamatorias (tales como factores de crecimiento hematopoyéticos, quimioquinas y moléculas de adhesión de leucocitos) (Baeuerle y Henkel, Annual Review of Inmmunology, 12:141-179 (1994)) y pueden estar implicados en la supresión de señales apoptóticas en la célula (Beg y Baltimore, Science, 274:782-784 (1996); Wang et al., Science, 274:784-787 (1996); Van Antwerp et al., Science, 274:787-789 (1996)). De esta forma, la inhibición de CDK2 puede suprimir la apoptosis inducida por fármacos citotóxicos mediante un mecanismo que implica NF-kB. Por lo tanto, esto sugiere que la inhibición de la actividad de CDK2 también puede tener utilidad en otros casos cuando la regulación de NF-kB desempeña un papel en la etiología de la enfermedad. Un ejemplo adicional puede tomarse de las infecciones fúngicas: Aspergillosis es una infección común en pacientes inmuno-comprometidos (Armstrong, Clinical Infectious Disease, 16:1-7 (1993)). Inhibición de la quinasas Cdc2/CDC28 de Aspergillus o Nim A (Osmani et al., EMBO Journal, 10:2669-2679) (1991); Osmami et al., Cell, 67:283-291 (1991)) puede causar la detención o muerte en los hongos, mejorando el resultado terapéutico para pacientes con estas infecciones.

Por tanto, es deseable la identificación de compuestos pequeños eficaces que inhiben específicamente la transducción de señales y la proliferación celular modulando la actividad de tirosina y serina/treonina quinasa de receptores y de no receptores para regular y modular una proliferación, diferenciación o metabolismo celular anormal o inapropiado. En particular, sería beneficioso la identificación de métodos y compuestos que inhiben específicamente la función de una tirosina quinasa que es esencial para procesos angiogénicos o para la formación de hiperpermeabilidad vascular que conduce a edemas, ascitis, efusiones, exudados, y extravasación macromolecular y deposición de la matriz, así como a trastornos asociados.

El documento WO 98/41525 describe ciertas pirrolo[2,3-d]pirimidinas y su uso como inhibidores de tirosina quinasa.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona compuestos de fórmula I

1

y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

En la Fórmula I, el Anillo A es fenilo que está sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre F, Cl y nitro.

L es uno de los siguientes engarces: -S-; -S(O)_{2}-; -S(O)_{2}-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -NCSO_{2}RH-CH_{2}O; -CH_{2}S-;
-CH_{2}N(R); -CH(NR)-; -CH_{2}N(C(O)R))-; -CH_{2}N(C(O)OR)-; -CH_{2}N(SO_{2}R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R-; -CH(NHSO_{2}R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-;
-C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -NHC(O)R-; -N(R)S(O)-; -N(R)S(O)_{2}-; -NHSO_{2}R-; -OC(O)N(R)-; -N(R)C(O)N(R); -NRC(O)O-; -S(O)N(R); -S(O)_{2}N(R)-; -N(C(O)R)S(O)-; -N(C(O)R)S(O)_{2}-; -N(R)S(O)N(R)-; -N(R)S(O)_{2}N(R)-; -C(O)N(R)C(O)-; -S(O)N(R)C(O)-; -S(O)_{2}N(R)C(O)-; -OS(O)N(R)-; -OS(O)_{2}N(R)-; -N(R)S(O)O-; -N(R)S(O)C(O)-; -N(R)S(O)C(O)-; -SON(CCO)R)-; -N(R)SON(R)-; -N(R)SO_{2}N(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(OR')O-; -N(R)P(OR)-; -N(R)P(O)(OR')O-; -N(R)P(O)(OR')-; -N(C(O)R)P(OR')O-; -N(C(O)R)P(OR')-; -N(C(O)R)P(O)(OR')O- o -N(C(O)R)P(OR')-, donde cada uno de R y R' es, independientemente, -H, un grupo acilo, un grupo alifático sustituido o no sustituido, un grupo aromático sustituido o no sustituido, un grupo heteroaromático sustituido o no sustituido o un grupo cicloalquilo sustituido o no sustituido.

Como alternativa, L es -R_{b}N(R)S(O)_{2}-, -R_{b}N(R)P(O)- o -R_{b}N(R)P(O)O-, donde R_{b} es un grupo alquileno que cuando se toma junto con el grupo sulfonamida, fosfinamida o fosfonamida al que está unido forma un anillo de cinco o seis miembros condensado al anillo A.

Como alternativa, L está representado por una de las siguientes fórmulas estructurales:

2

en las que R_{85} tomado junto con la fosfinamida o fosfonamida es un sistema de anillos aromático, heteroaromático o heterocicloalquilo de 5, 6 ó 7 miembros;

En la Fórmula I, R_{1} es -H, 2-fenil-1,3-dioxan-5-ilo, un grupo alquilo C_{1}-C_{6}, un grupo cicloalquilo C_{3}-C_{8}, un grupo cicloalquenilo C_{5}-C_{7} o un grupo fenil(alquilo C_{1}-C_{6}) opcionalmente sustituido, donde los grupos alquilo, cicloalquilo y cicloalquenilo están opcionalmente sustituidos con uno o más grupos de fórmula -OR^{a}; con la condición de que -OR^{a} no se localice sobre el carbono unido al nitrógeno; R^{a} es -H o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} o un grupo C_{3}-C_{6} cicloalquilo.

En la Fórmula I, R_{2} es -H, un grupo alifático sustituido o no sustituido, un grupo sustituido o no sustituido, un halógeno, -OH, ciano, un grupo aromático sustituido o no sustituido, un grupo heteroaromático sustituido o no sustituido, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, un aralquilo sustituido o no sustituido, un heteroaralquilo sustituido o no sustituido, -NR_{4}R_{5} o -C(O)NR_{4}R_{5}.

En la Fórmula I, R_{3} es un grupo sustituido o no sustituido, un grupo aromático sustituido o no sustituido, un grupo heteroaromático sustituido o no sustituido o un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido. Cuando L es -NRSO_{2}-, -NRC(O)-, -NRC(O)O-, -S(O)_{2}NR-, -C(O)NR- o -OC(O)NR-, R_{3} puede ser además alquilo sustituido o no sustituido, alquenilo sustituido o no sustituido o aralquilo sustituido o no sustituido.

En la Fórmula I, R_{4}, R_{5} y el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido de 3, 4, 5, 6 ó 7 miembros, un heterobicicloalquilo sustituido o no sustituido o un grupo heteroaromático sustituido o no sustituido.

Como alternativa, cada uno de R_{4} y R_{5} es independientemente -H, azabicicloalquilo, un grupo alquilo sustituido o no sustituido o Y-Z;

Y es -C(O)-, -(CH_{2})_{p}-, -S(O)_{2}-, -C(O)O-, -SO_{2}NH-, -CONH-, (CH_{2})_{p}O-, -(CH_{2})_{p}NH-, -(CH_{2})_{p}S-, -(CH_{2})_{p}S(O)-, o -(CH_{2})S(O)_{2}-.

p es un número entero de 0 a 6.

Z es un grupo alquilo sustituido o no sustituido, amino sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido o heterocicloalquilo sustituido o no sustituido.

j es un número entero de 0 a 6.

Sin embargo, cuando L es -CH_{2}NR-, -C(O)NR- o -NRC(O) y R_{3} es azacicloalquilo o azaheteroarilo, j es 0.

Los compuestos de esta invención son útiles como inhibidores de serina/treonina y tirosina quinasas. En particular, los compuestos de esta invención son útiles como inhibidores de tirosina quinasas que son importantes en enfermedades hiperproliferativas, especialmente en el cáncer y en el proceso de la angiogénesis. Por ejemplo, ciertos de estos compuestos son inhibidores de quinasas receptoras tales como KDR, Flt-1, FGFR, PDGFR, c-Met, TIE-2 o
IGF-1-R. Como ciertos de estos compuestos son anti-angiogénicos, son sustancias importantes para inhibir la progresión de estados de enfermedad en los que la angiogénesis es un componente importante. Ciertos compuestos de la invención son eficaces como inhibidores de tales serina/treonina quinasas como PKCs, erk, quinasas MAP, MAP quinasa quinasas, MAP quinasa quinasa quinasas, cdks, Plk-1 o Raf-1. Estos compuestos son útiles en el tratamiento del cáncer y de trastornos hiperproliferativos. Además, ciertos compuestos son inhibidores eficaces de quinasas no receptoras tales como las de las familias Src (por ejemplo, Ick, blk y lyn), Tec, Csk, Jak, Map, Nik y Syk. Estos compuestos son útiles en el tratamiento del cáncer, trastornos hiperproliferativos y enfermedades inmunológicas.

Ciertos compuestos de esta invención son inhibidores selectivos de TIE-2 quinasa que pueden ser anti-angiogénicos (especialmente en una combinación con uno o más inhibidores de VETFR) o pro-angiogénicos, cuando se emplean en presencia de, o junto con, un estímulo relacionado con VEGF. De esta manera, tales inhibidores pueden usarse en la promoción de la angiogénesis terapéutica para tratar, por ejemplo, la isquemia, infarto u oclusión, o para promover la curación de heridas.

La presente invención proporciona un procedimiento para inhibir la actividad de quinasa de tirosina quinasas y serina/treonina quinasas que comprende la administración de un compuesto representado por la fórmula I a dicha quinasa en una concentración suficiente para inhibir la actividad enzimática de dicha quinasa.

La presente invención incluye además el uso de estos compuestos en composiciones farmacéuticas con una cantidad farmacéuticamente eficaz de los compuestos descritos anteriormente y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable. Estas composiciones farmacéuticas pueden administrarse a individuos para ralentizar o interrumpir el proceso de angiogénesis y otras afecciones asociadas con la hiperpermeabilidad vascular. Ciertas composiciones farmacéuticas pueden administrarse a individuos para tratar el cáncer y trastornos hiperproliferativos inhibiendo serina/treonina quinasas tales como cdk, Plk-1, erk, etc.

Descripción detallada de la invención

A continuación se dan los valores de los sustituyentes en un primer grupo preferido de compuestos de fórmula I.

Preferiblemente, L es -N(R)S(O)_{2}-, -S(O)_{2}N(R)-, -N(R)C(O)-, -C(O)N(R)- o -NH-.

Preferiblemente, R_{3} es fenilo un sustituido o no sustituido, un naftilo sustituido o no sustituido, un piridilo sustituido o no sustituido, un tienilo sustituido o no sustituido, un benzotriazol sustituido o no sustituido, un tetrahidropiranilo sustituido o no sustituido, un tetrahidrofuranoílo sustituido o no sustituido, un dioxano sustituido o no sustituido, un dioxolano sustituido o no sustituido, una quinolina sustituida o no sustituida, un tiazol sustituido o no sustituido, isoxazol sustituido o no sustituido, ciclopentilo sustituido o no sustituido, un benzofurano sustituido o no sustituido, benzotiofeno sustituido o no sustituido, imidazol sustituido o no sustituido, pirrol sustituido o no sustituido, pirimidinilo sustituido o no sustituido, indolinilo sustituido o no sustituido, bencisoxazol sustituido o no sustituido, bencisotiazol sustituido o no sustituido, benzotiazol sustituido o no sustituido, benzoxazol sustituido o no sustituido, bencimidazol sustituido o no sustituido, benzoxadiazol sustituido o no sustituido, benzotiadiazol sustituido o no sustituido, isoquinolinilo sustituido o no sustituido, quinoxalinilo sustituido o no sustituido, indol sustituido o no sustituido o pirazol sustituido o no sustituido, fenoxi sustituido o no sustituido, piridiloxi sustituido o no sustituido. En una realización, R_{3} es un fenilo sustituido o no sustituido.

R_{3} puede estar sustituido con uno o más sustituyentes. Los sustituyentes preferidos para R_{3} son F, Cl, Br, I, CH_{3}, NO_{2}, OCF_{3}, OCH_{3}, CN, -CHO, CO_{2}CH_{3}, CF_{3}, t-butilo, piridilo, piridiloxi, oxazolilo sustituido o no sustituido, tiazolilo sustituido o no sustituido, bencilo sustituido o no sustituido, bencenosulfonilo sustituido o no sustituido, fenoxi sustituido o no sustituido, fenilo sustituido o no sustituido, amino sustituido o no sustituido, carboxilo, tetrazolilo sustituido o no sustituido, estirilo, -S(O)_{x}-(arilo sustituido o no sustituido), -S(O)_{x} donde x = 0,1,2-(heteroarilo sustituido o no sustituido), heteroarilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, alquinilo,
-C(O)NR_{f}R_{g}, R_{c} y CH_{2}OR_{c}.

R_{f}, R_{g} y el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido de 3, 4, 5, 6 ó 7 miembros, heterobicicloalquilo sustituido o no sustituido o un grupo heteroaromático sustituido o no sustituido.

Como alternativa, cada uno de R_{f} y R_{g} es independientemente, -H, un grupo alifático sustituido o no sustituido o un grupo aromático sustituido o no sustituido.

R_{c} es hidrógeno, o alquilo sustituido o no sustituido o arilo sustituido o no sustituido, -W-(CH_{2})_{t}-NR_{d}R_{e}, -W-
(CH_{2})_{t}-O-alquilo, -W-(CH_{2})_{t}-S-alquilo, -W-(CH_{2})_{t}-OH o -W-(CH_{2})_{t}NH-C(O)R_{f}

t es un número entero de 0 a aproximadamente 6.

W es un enlace o -O-, -S-, -S(O)-, -S(O)_{2}-, o -NR_{k}-.

R_{k} es -H o alquilo.

R_{f}, R_{g} y el átomo de nitrógeno al que están unidos forman juntos un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido de 3, 4, 5, 6 ó 7 miembros o un grupo heterobicíclico sustituido o no sustituido.

Como alternativa, cada uno de R_{d} y R_{e} es independientemente, -H, alquilo, alcanoílo o -K-D.

K es -S(O)_{2}-, -C(O)-, -C(O)NH-, -C(O)_{2}-, o un enlace directo.

D es un arilo sustituido o no sustituido, un heteroarilo sustituido o no sustituido, un aralquilo sustituido o no sustituido, un heteroaralquilo heteroaromático sustituido o no sustituido, un cicloalquilo sustituido o no sustituido, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, un amino sustituido o no sustituido, un aminoalquilo sustituido o no sustituido, un aminocicloalquilo sustituido o no sustituido, COOR_{i} o alquilo sustituido o no sustituido.

R_{i} es un grupo alifático sustituido o no sustituido o un grupo aromático sustituido o no sustituido.

Los sustituyentes más preferidos para R_{3} son F, Cl, Br, I, ciano, nitro, OCF_{3}, CH_{3} y CF_{3}.

R_{2} es preferiblemente un hidrógeno.

Preferiblemente, R_{1} es un grupo ciclopentilo o un isopropilo.

Como se usa en este documento, los grupos aromáticos incluyen sistemas de anillos carbocíclicos (por ejemplo, bencilo y cinnamilo) y sistemas de anillos aromáticos, policíclicos, condensados (por ejemplo, naftilo y 1,2,3,4-tetrahidronaftilo). Un grupo arilo, como se usa en este documento, se refiere a un grupo aromático.

Los grupos heteroaromáticos, como se usan en este documento, incluyen sistemas de anillos heteroarilo (por ejemplo, tienilo, piridilo, pirazol, isoxazolilo, tiadiazolilo, oxadiazolilo, indazolilo, furanos, pirroles, imidazoles, pirazoles, triazoles, pirrolidinas, pirazinas, tiazoles, isoxazoles, isotiazoles, tetrazoles u oxadiazoles) y sistemas de anillos heteroarilo en los que un anillo aromático carbocíclico, un anillo no aromático carbocíclico o un anillo heteroarilo se condensa a uno o más de otros anillos heteroarilo (por ejemplo, benzo(b)tienilo, bencimidazol, benzoxazolilo, benzotiazolilo, benzotiadiozolilo, benzoxadiazolilo, indol, tetrahidroindol, azaindol, indazol, quinolina, imidazopiridina, purina, pirrolo[2,3-d]pirimidina, pirazolo[3,4-d]pirimidina) y sus N-óxidos.

Un grupo aralquilo, como se usa en este documento, es un sustituyente aromático que se une a un compuesto mediante un grupo alifático que tiene de uno a aproximadamente seis átomos de carbono.

Un grupo heteroaralquilo, como se usa en este documento, es un sustituyente heteroaromático que se une a un compuesto mediante un grupo alifático que tiene de uno a aproximadamente seis átomos de carbono.

Un grupo heterocicloalquilo, como se usa en este documento, es un sistema de anillos no aromático que tiene de 3 a 8 átomos e incluye al menos un heteroátomo, tal como nitrógeno, oxígeno o azufre.

Un grupo acilo, como se usa en este documento, es un -C(O)NR_{x}Rz, -C(O)ORx, -C(O)Rx, donde cada uno de Rx y Rz es independientemente, -H, un grupo alifático sustituido o no sustituido o un grupo aromático sustituido o no sustituido.

Como se usa en este documento, los grupos alifáticos incluyen hidrocarburos C_{1}-C_{8} de cadena lineal, ramificada o cíclica que están completamente saturados o que contienen una o más unidades de insaturación. Un "grupo alquilo inferior" es un grupo alifático saturado que tiene de 1 a 6 átomos de carbono.

Los compuestos de fórmula I pueden existir en forma de sales con ácidos farmacéuticamente aceptables. La presente invención incluye tales sales. Los ejemplos de tales sales incluyen clorhidratos, bromhidratos, sulfatos, metanosulfonatos, nitratos, maleatos, acetatos, citratos, fumaratos, tartratos [por ejemplo, (+)-tartratos, (-)-tartratos o mezclas de los mismos incluyendo mezclas racémicas], succinatos, benzoatos y sales con aminoácidos tales como ácido glutámico. Estas sales pueden prepararse mediante procesos conocidos por los especialistas en la técnica.

Ciertos compuestos de fórmula I que tienen sustituyentes ácidos puede existir en forma de sales con bases farmacéuticamente aceptables. La presente invención incluye estas sales. Los ejemplos de tales sales incluyen sales de sodio, sales de potasio, sales de lisina y sales de arginina. Estas sales pueden prepararse mediante procesos conocidos por los especialistas en la técnica.

Ciertos compuestos de fórmula I y sus sales pueden existir en más de una forma cristalina y la presente invención incluye cada forma cristalina y mezclas de las mismas.

Ciertos compuestos de fórmula I y sus sales también pueden existir en forma de solvatos, por ejemplo hidratos y la presente invención incluye cada solvato y mezclas de los mismos.

Ciertos compuestos de fórmula I pueden contener uno o más centros quirales y pueden existir en diferentes formas ópticamente activas. Cuando los compuestos de fórmula I contienen un centro quiral, los compuestos existen en dos formas enantioméricas y la presente invención incluye ambos enantiómeros y mezclas de enantiómeros, tales como mezclas racémicas. Los enantiómeros pueden resolverse mediante procesos conocidos por los especialistas en la técnica, por ejemplo por formación de sales diastereoisoméricas que pueden separarse, por ejemplo, por cristalización, cromatografía de gas-líquido o líquida; reacción selectiva de un enantiómero con un reactivo específico del enantiómero, por ejemplo esterificación enzimática; o cromatografía de gas-líquido o líquida en un medio quiral, por ejemplo sobre un soporte quiral, por ejemplo sílice con un ligando de unión quiral o en presencia de un disolvente quiral. Se entenderá que cuando el enantiómero deseado se convierte en otra entidad química mediante uno de los procesos de separación descritos anteriormente, se requiere una etapa más para liberar la forma enantiomérica deseada. Como alternativa, pueden sintetizarse enantiómeros específicos por síntesis asimétrica usando reactivos ópticamente activos, sustratos, catalizadores o disolventes, o convirtiendo un enantiómero en otro por transformación asimétrica.

Cuando un compuesto de fórmula I contiene más de un centro quiral, éste puede existir en formas diastereoisoméricas. Los pares diastereoisoméricos pueden separarse mediante procesos conocidos por los especialistas en la técnica, por ejemplo cromatografía o cristalización y los enantiómeros individuales dentro de cada par pueden separarse como se ha descrito anteriormente. La presente invención incluye cada diastereoisómero de los compuestos de fórmula I y mezclas de los mismos.

Ciertos compuestos de fórmula I pueden existir en diferentes formas tautoméricas o en forma de diferentes isómeros geométricos, y la presente invención incluye cada tautómero y/o isómero geométrico de los compuestos de fórmula I y mezclas de los mismos.

Ciertos compuestos de fórmula I pueden existir en diferentes formas conformacionales estables que son separables. La asimetría torsional debida a la rotación restringida alrededor un enlace sencillo asimétrico, por ejemplo a causa de una obstaculización estérica o variedad de anillo, puede permitir la separación de los diferentes confórmeros. La presente invención incluye cada isómero conformacional de los compuestos de fórmula I y mezclas de los mismos.

Ciertos compuestos de fórmula I pueden existir en forma zwitteriónica y la presente invención incluye cada forma zwitteriónica de los compuestos de fórmula I y mezclas de los mismos.

Los compuestos preferidos de fórmula I incluyen los siguientes: N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2-(trifluorometoxi)-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil)-2-cloro-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil)-2-fluoro-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil)-2-cloro-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil)-3-fluoro-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-animo-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-nitrofenil)-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil)-3-(trifluorometil)-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil)-4-cloro-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil)-2-ciano-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2-nitro-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2,6-difluoro-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2,3,4-trifluoro-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-4-bromo-2-fluoro-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2,5-difluoro-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-3,4-difluoro-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2-bromo-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2,6-dicloro-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2,4,6-tricloro-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2,4-dicloro-1-bencenosulfonamida, N-{4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2-cloro-4-fluoro-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2,4-difluoro-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2-yodo-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2,3-dicloro-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-4-bromo-2,5-difluoro-1-bencenosulfonamida, N-{4-{4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2-cloro-4-ciano-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2-cloro-6-metil-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-3-cloro-2-metil-1-bencenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-4,5-dibromo-2-tiofenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-5-bromo-2-tiofenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-3-bromo-5-cloro-2-tiofenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2,5-dicloro-3-tiofenosulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2,1,3-benzotiadiazol-4-sulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2,1,3-benzoxadiazol-4-sulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-7-cloro-2,13-benzoxadiazol-4-sulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-7-metil-2,1,3-benzotiadiazol-4-sulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-5-metil-2,1,3-benzotiadiazol-4-sulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-5-cloro-2,1,3-benzotiadiazol-4-sulfonamida, N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-(2-nitrofenil)metanosulfonamida y N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2,5-dibromo-3,6-difluoro-1-bencenosulfonamida.

Los compuestos de esta invención tienen propiedades antiangiogénicas. Estas propiedades antiangiogénicas se deben al menos en parte a la inhibición de las proteínas tirosina quinasas esenciales para los procesos angiogénicos. Por esta razón, estos compuestos pueden usarse como agentes activos contra enfermedades tales como artritis, aterosclerosis, reestenosis, psoriasis, hemangiomas, angiogénesis miocárdica, colaterales coronarios y cerebrales, angiogénesis en extremidades isquémicas, lesión por isquemia/reperfusión, curación de heridas, enfermedades relacionadas con la úlcera péptica producida por Helicobacter, trastornos angiogénicos inducidos viralmente, fracturas, síndrome de Crow-Fukase (POEMS), preeclampsia, menometrorragia, fiebre causada por arañazos de gato, rubeosis, glaucoma neovascular, y retinopatías tales como las asociadas con retinopatía diabética, retinopatía de la premadurez o degeneración macular relacionada con la edad. Además, algunos de estos compuestos pueden usarse como agentes activos contra tumores sólidos, ascitis maligna, enfermedad de von Piel Lindau, cánceres hematopoyéticos, y trastornos hiperproliferativos tales como hiperplasia tiroidea, (especialmente enfermedad de Grave) y quistes tales como hipervascularidad del estroma del ovario característica del síndrome de ovario poliquístico (síndrome de Stein-Leventhal) y enfermedad renal poliquística.

Además, algunos de estos compuestos pueden usarse como agentes activos contra quemaduras, enfermedad crónica de pulmón, apoplejía, pólipos, anafilaxis, inflamación crónica y alérgica, hipersensibilidad de tipo retrasada, síndrome de hiperestimulación ovárica, edema cerebral asociado con tumor cerebral, edema pulmonar o cerebral inducido por la alta altitud, traumatismo o hipoxia, edema ocular y macular, ascitis, glomerulonefritis y otras enfermedades en las que la hiperpermeabilidad vascular, efusiones, exudados, extravasación proteica, o edema es una manifestación de la enfermedad. Los compuestos también serán útiles en el tratamiento de trastornos en los que la extravasación proteica conduce a la deposición de fibrina y matriz extracelular, promoviendo la proliferación del estroma (por ejemplo fibrosis queloide, cirrosis, y síndrome de túnel carpiano). El aumento de la producción de VEGF potencia procesos inflamatorios tales como reclutamiento y activación de monocitos. Los compuestos de esta invención también serán útiles en el tratamiento de trastornos inflamatorios tales como enfermedad inflamatoria del intestino (IBD) y enfermedad de Crohn.

Los VEGF son únicos en el sentido de que son los únicos factores de crecimiento angiogénico que se sabe que contribuyen a la hiperpermeabilidad vascular y a la formación de edemas. De hecho, la hiperpermeabilidad vascular y el edema que se asocian con la expresión o administración de muchos otros factores de crecimiento parecen estar mediados por la producción de VEGF. Las citoquinas estimuladoras estimulan la producción de VEGF. La hipoxia da lugar a una regulación positiva marcada de VEGF en numerosos tejidos, de ahí que las situaciones que implican infartos, oclusión, isquemia, anemia o impedimento circulatorio inducen típicamente respuestas mediadas por VEGF/VPF. La hiperpermeabilidad vascular, edema asociado, intercambio transendotelial alterado y la extravasación molecular, que suele ir acompañada de diapédesis, pueden dar lugar a una deposición de matriz excesiva, proliferación aberrante del estroma, fibrosis, etc. Por tanto, la hiperpermeabilidad mediada por VEGF puede contribuir significativamente a trastornos con estas características etiológicas.

Como la implantación de blastocitos, desarrollo de placenta y ambriogénesis dependen de la angiogénesis, ciertos compuestos de la invención son útiles como agentes anticonceptivos y agentes antiinfertilidad.

Se prevé que los trastornos enumerados anteriormente estén mediados en gran medida por la actividad de la proteína tirosina quinasa que implica las tirosina quinasas KDR/VEGFR-2 y/o Flt-1/VEGFR-1 y/o TIE-2. Inhibiendo la actividad de estas tirosina quinasas, se inhibe la progresión de los trastornos enumerados porque el componente angiogénico o de hiperpermeabilidad vascular del estado de la enfermedad se restringe seriamente. La acción de algunos compuestos de esta invención, por su selectividad por tirosina quinasas específicas, da lugar a una minimización de efectos secundarios que ocurrirían si se usaran tirosina quinasas menos selectivas. Algunos compuestos de la invención también son inhibidores eficaces de FGFR, PDGFR, c-Met e IGF-1-R. Estas quinasas de receptores pueden potenciar directa o indirectamente respuestas angiogénicas e hiperproliferativas en diversos trastornos, de ahí que su inhibición pueda impedir la progresión de la enfermedad.

Los compuestos de esta invención tienen actividad inhibidora de proteína quinasas. Es decir, estos compuestos modulan la transducción de señales mediante proteína quinasas. Los compuestos de esta invención inhiben proteína quinasas de las clases de tirosina y de serina/treonina quinasas. En particular, estos compuestos inhiben selectivamente la actividad de las tirosina quinasas KDR/FLK-1/VEGFR-2. Ciertos compuestos de esta invención también inhiben la actividad de tirosina quinasas adicionales tales como Flt-1/VEGFR-1, tie-2, FGFR, PDGFR, IGF-1R, c-Met, quinasas de la subfamilia Src tales como Lck, Src, fyn, yes, etc. Adicionalmente, algunos compuestos de esta invención inhiben significativamente las serina/treonina quinasas tales como CDK, MPA quinasas, erk, CDK, Plk-1 o Raf-1 que tienen un papel esencial en la proliferación celular en la progresión del ciclo celular. La potencia y especificidad de los compuestos genéricos de esta invención con respecto a una proteína quinasa particular a menudo pueden alterarse y optimizarse mediante variaciones en la naturaleza, cantidad y disposición de los sustituyentes (es decir, R_{1}, R_{2}, R_{3}, A y anillo 1) y de las restricciones conformacionales. Además, los metabolitos de ciertos compuestos también poseen una actividad inhibidora de proteína quinasas significativa.

Los compuestos de esta invención, cuando se administran a individuos que necesitan tales compuestos, inhiben la hiperpermeabilidad vascular y la formación de edemas en estos individuos. Se cree que estos compuestos actúan inhibiendo la actividad de la tirosina quinasa de KDR que está implicada en el proceso de hiperpermeabilidad vascular y de formación de edemas. También se puede hacer referencia a la tirosina quinasa de KDR como tirosina quinasa de FLK-1, tirosina quinasa de NYK, o tirosina quinasa de VEGFR-2. La tirosina quinasa de KDR se activa cuando el factor de crecimiento de células endoteliales vasculares (VEGF) u otro ligando de activación (tal como VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E o proteína Tat de VIH) se une a un receptor de tirosina quinasa de KDR que yace en la superficie de las células endoteliales vasculares. Después de la activación de la tirosina quinasa de KDR, se produce una hiperpermeabilidad de los vasos sanguíneos y el líquido se desplaza desde el torrente circulatorio a través de los vasos en los espacios intersticiales, formando por lo tanto un área de edema. A menudo la diapédesis acompaña a esta respuesta. De forma similar, la hiperpermeabilidad vascular excesiva puede interrumpir el intercambio molecular normal a través del endotelio en tejidos y órganos críticos (por ejemplo, pulmón y riñón), causando de esta forma extravasación y deposición macromolecular. Después de esta respuesta aguda a la estimulación de KDR que se cree que facilita el proceso angiogénico posterior, la estimulación prolongada de tirosina quinasa de KDR da lugar a la proliferación y quimiotaxia de células endoteliales vasculares y a la formación de nuevos vasos. Inhibiendo la actividad de la tirosina quinasa de KDR, bloqueando la producción del ligando activador, bloqueando la unión del ligando activador al receptor de tirosina quinasa de KDR, evitando la dimerización del receptor y la transfosforilización, inhibiendo la actividad enzimática de la tirosina quinasa de KDR (inhibiendo la función de fosforilización de la enzima) o mediante algún otro mecanismo que interrumpe la señalización corriente abajo (D. Mukhopedhyay et al., Cancer Res. 58:1278-1284 (1998) y las referencias contenidas en ese documento), puede inhibirse y minimizarse la hiperpermeabilidad, así como la extravasación asociada, la posterior formación de edemas y la deposición de matriz, y las respuestas angiogénicas.

Un grupo de compuestos preferidos de esta invención tiene la propiedad de inhibir la actividad de la tirosina quinasa de KDR sin inhibir significativamente la actividad de la tirosina quinasa de Flt-1 (también se hace referencia a la tirosina quinasa de Flt-1 como tirosina quinasa de VEGFR-1). Tanto la tirosina quinasa de KDR como la tirosina quinasa de Flt-1 se activan mediante la unión de VEGF a los receptores de tirosina quinasa de KDR y a los receptores de tirosina quinasa de Flt-1, respectivamente. Ciertos compuestos preferidos de esta invención son únicos porque inhiben la actividad de una tirosina quinasa de receptores de VEGF (KDR) que se activa activando ligandos pero que no inhibe otras tirosina quinasas de receptores, tales como Flt-1, que también se activan mediante ciertos ligandos de activación. De esta forma, algunos compuestos preferidos de esta invención son, por lo tanto, selectivos en su actividad inhibidora de tirosina quinasa.

En una realización, la presente invención proporciona un método para tratar una afección mediada por proteína quinasa en un paciente, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz de uno o más compuestos de Formula I.

Una "afección mediada por proteína quinasa" es una afección médica, tal como una enfermedad u otra afección física no deseable, cuya génesis o progresión depende, al menos en parte, de la actividad de al menos una proteína quinasa. La proteína quinasa puede ser, por ejemplo, una proteína tirosina quinasa o una proteína serina/treonina quinasa.

El paciente a tratar puede ser cualquier animal, y es preferiblemente un mamífero, tal como un animal doméstico o ganado. Más preferiblemente el paciente es un ser humano.

Una "cantidad terapéuticamente eficaz" es una cantidad de un compuesto de formula I o una combinación de dos o más de tales compuestos, que inhibe, total o parcialmente, la progresión de la afección o alivia, al menos parcialmente, uno o más síntomas de la afección. Una cantidad terapéuticamente eficaz también puede ser una cantidad que sea fisiológicamente eficaz. La cantidad que es terapéuticamente eficaz dependerá del tamaño y género del paciente, la afección a tratar, la gravedad de la afección y el resultado pretendido. Para un paciente dado, una cantidad terapéuticamente eficaz puede determinarse mediante métodos conocidos para los especialistas en la técnica.

El método de la presente invención es útil en el tratamiento de afecciones mediadas por proteína quinasa, tales como cualquiera de las afecciones descritas anteriormente. En una realización, la afección mediada por proteína quinasa se caracteriza por angiogénesis, edema o deposición de estroma no deseada. Por ejemplo, la afección puede ser una o más ulceras, tales como ulceras provocadas por infecciones bacterianas o fúngicas, úlceras de Mooren y colitis ulcerosa. La afección también puede ser debida a una infección microbiana, tal como enfermedad de
Lyme, sepsis, choque séptico o infecciones por Herpes simple, Herpes Zoster, virus de la inmunodeficiencia humana, protozoos, toxoplasmosis o parapoxvirus; trastornos angiogénicos, tales como enfermedad de Hippel Lindau, enfermedad renal poliquística, pénfigo, enfermedad de Paget y psoriasis; una afección reproductora, tal como endometriosis, síndrome de hiperestimulación de ovarios, preeclampsia o menometrorragia; una afección fibrótica o edémica, tal como sarcoidosis, fibrosis, cirrosis, tiroiditis, síndrome de hiperviscosidad, enfermedad de Osler-Weber-Rendu, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, asma, edema después de quemaduras, traumatismo, radiación, apoplejía, hipoxia o isquemia; o una afección inflamatoria/inmunológica, tal como lupus sistémico, inflamación crónica, glomerulonefritis, sinovitis, enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, artritis reumatoide, osteoartritis, esclerosis múltiple y rechazo del injerto. Las afecciones adecuadas mediadas por proteína quinasa también incluyen anemia drepanocítica, osteoporosis, osteopeptrosis, hipercalcemia inducida por tumor y metástasis ósea. Otras afecciones mediadas por proteína quinasa que pueden tratarse mediante el método de la presente invención incluyen afecciones oculares, tales como edema ocular y macular, enfermedad neovascular ocular, escleritis, queratotomía radial, uveítis, vitritis, miopía, fosetas papilares, desprendimiento de retina crónico, complicaciones después de láser, conjuntivitis, enfermedad de Stargardt y enfermedad de Eales, además de retinopatía y degeneración
macular.

Los compuestos de la presente invención también son útiles en un tratamiento de afecciones cardiovasculares tales como aterosclerosis, reestenosis, oclusión vascular y enfermedad obstructiva de la carótida.

Los compuestos de la presente invención son también útiles en el tratamiento de indicaciones relacionadas con cáncer tales como tumores sólidos, sarcomas (especialmente sarcoma de Ewing y osteosarcoma), retinoblastoma, rabdomiosarcomas, neuroblastoma, cánceres hematopoyéticos, incluyendo leucemia y linfoma, efusiones pleurales o pericárdicas inducidas por tumor y ascitis maligna.

Los compuestos de la presente invención también son útiles en el tratamiento del síndrome de Crow-Fukase (POEMS) y de afecciones diabéticas tales como glaucoma, retinopatía diabética y microangiopatía.

Las familias Src, Tec, Jak, Mpa, Csk, NFkB y Syk de quinasas desempeñan papeles vitales en la regulación de la función inmune. La familia Src incluye recientemente Fyn, Lck, Fgr, Fes, Lyn, Src, Yrk, Fyk, Yes, Hck, y Blk. La familia Syk se entiende actualmente como que incluye sólo Zap y Syk. La familia Tec incluye Tec, Btk, Rlk e Itk. La familia Janus de quinasas está implicada en la transducción del factor de crecimiento y señales de citoquina proinflamatorias a través de diversos receptores. Aunque BTK e ITK, miembros de la familia Tec de quinasas, desempeñan un papel menos comprendido en la inmunobiología, su modulación por un inhibidor puede probarse terapéuticamente beneficiosa. Se entiende actualmente que la familia Csk incluye Csk y Chk. Las quinasas RIP,
IRAK-1, IRAK-2, NIK, p38 MAP quinasas, Jnk, IKK-1 e IKK-2 están implicadas en las rutas de transducción de señales para citoquinas proinflamatorias claves, tales como TNF e IL-1. En virtud de su capacidad para inhibir una o más de estas quinasas, los compuestos de formula I pueden funcionar como agentes inmunomodulares útiles para el mantenimiento de aloinjertos, el tratamiento de trastornos autoinmunes y el tratamiento de sepsis y choque séptico. A través de su capacidad para regular la migración o activación de células T, células B, mastocitos, monocitos y neutrófilos, estos compuestos podrían usarse para tratar tales enfermedades autoinmunes y sepsis. La prevención del rechazo de transplante, ya sea de hospedador contra injerto para órganos sólidos o injerto contra hospedador para médula ósea, está limitada por la toxicidad de agentes inmunosupresores actualmente disponibles y se beneficiaría de un fármaco eficaz con mejor índice terapéutico. Los experimentos dirigidos a genes han demostrado el papel esencial de Src en la biología de osteoclastos, las células responsables de la resorción del hueso. Los compuestos de formula I, a través de su capacidad para regular Src, también pueden ser útiles en el tratamiento de la osteoporosis, osteopetrosis, enfermedad de Paget, hipercalcemia inducida por tumor y en el tratamiento de
metástasis óseas.

Se ha demostrado que diversas proteína quinasas son protooncogenes. La ruptura de cromosoma (en el punto de ruptura de la quinasa ltk en el cromosoma 5) translocación como en el caso del gen Abl con BCR (cromosoma Filadelfia), truncado en casos tales como c-Kit o EGFR, o mutación (por ejemplo Met) que dan lugar a la creación de proteínas desreguladas que las convierten de protooncogenes a productos oncogénicos. En otros tumores la oncogénesis está conducida por las interacciones entre un ligando autocrino o paracrino y un receptor de factor de crecimiento. Los miembros de la familia Src de quinasas están implicados típicamente en la transducción de señales corriente abajo potenciando de esta forma la oncogénesis y ellos mismos pueden volverse oncogénicos por la sobreexposición o mutación. Inhibiendo la actividad de proteína quinasa de estas proteínas, el proceso de la enfermedad puede interrumpirse. La reestenosis vascular puede implicar la proliferación de células endoteliales y del músculo liso promovida por FGF y/o PDGF. La estimulación de ligandos de FGFR, PDGFR, IGF1-R y c-Met in vivo es proangiogénica, y potencia los trastornos dependientes de angiogénesis. La inhibición de las actividades de quinasa de FGFr, PDGFr,
c-Met o IGF1-R individualmente o en combinación pueden ser una estrategia eficaz para inhibir estos fenómenos. De esta forma, lo compuestos de formula I que inhiben la actividad quinasa de miembros de la familia c-kit. c-met, c-fms, src normales o aberrantes, EGFr, erbB2, erbB4, BCR-Abl, PDGFr, FGFr, IGF1-R y otros receptores o tirosina quinasas citosólicas también pueden ser de gran valor en le tratamiento de enfermedades proliferativas neoplásicas y
benignas.

En muchas afecciones patológicas (por ejemplo, tumores primarios sólidos y metástasis, sarcoma de Kaposi, artritis reumatoide, ceguera debida a una neovascularización ocular inapropiada, psoriasis y aterosclerosis) la progresión de la enfermedad depende de la angiogénesis persistente. Los factores de crecimiento polipeptídico suelen producirse mediante el tejido de la enfermedad o células inflamatorias asociadas, y sus tirosinas quinasas del receptor específico de células endoteliales correspondientes (por ejemplo, KDR/VEGFR-2, Flt-1/VEGFR-1, Tie-2/Tek y Tie) son esenciales para la estimulación del crecimiento de células endoteliales, migración, organización, diferenciación y establecimiento de la nueva vasculatura funcional requerida. Como resultado de la actividad del factor de permeabilidad vascular de VEGF en la mediación de la hiperpermeabilidad vascular, también se cree que la estimulación de VEGF de una quinasa de VEGFR desempeña un papel importante en la formación de ascitis tumoral, edema cerebral y pulmonar, efusiones pleurales y pericárdicas, reacciones de hipersensibilidad de tipo retrasada, edema tisular y disfunción de órganos después de traumatismo, quemadura, isquemia, complicaciones diabéticas, endometriosis, síndrome de insuficiencia respiratoria en adultos (ARDS), hipotensión relacionada con bypass post-cardiopulmonar e hiperpermeabilidad, edema ocular que conduce a glaucoma o ceguera debido a una neovascularización inapropiada. Además de VEGF, VEGF-C y VEGF-D recientemente identificados, y VEGF-E codificada viralmente o la proteína Tat de VIH también puede provocar una respuesta de hiperpermeabilidad vascular a través de la estimulación de una quinasa de VEGFR. KDR/VEGFR-2 y/o Tie-2 también se expresan en una población selecta de células troncales hematopoyéticas. Ciertos miembros de esta población son pluripotentes en la naturaleza y pueden estimularse con factores de crecimiento para la diferenciación en células endoteliales y participar en los procesos angiogénicos vasculogenéticos. Por esta razón se han denominado Células Progenitoras Endoteliales (EPC) (J. Clin. Investig. 103:1231-1236 (1999)). En algunos progenitores, Tie-2 puede desempeñar un papel en su reclutamiento, adhesión, regulación y diferenciación (Blood, 4317-4323 (1997)). Ciertos agentes de acuerdo con la formula I capaces de bloquear la actividad quinasa de quinasas específicas de células endoteliales podrían inhibir la progresión de la enfermedad que implica estas
situaciones.

Se cree que la desestabilización vascular del ligando antagonista de Ti-2 (Ang2) induce un estado "plástico" inestable en el endotelio. En presencia de niveles altos de VEGF, puede producirse una respuesta angiogénica fuerte; sin embargo, en ausencia de VEGF o de un estímulo relacionado con VEGF, puede producirse la regresión franca de vasos y apoptosis endotelial (Genes y Devel. 13: 1055-1066 (1999)). De una manera análoga un inhibidor de quinasa de Tie-2 puede ser proangiogénico o antiangiogénico en presencia o esencia de un estímulo relacionado con VEGF, respectivamente. Por lo tanto, lo inhibidores de Tie-2 pueden emplearse con estímulos proangiogénicos apropiados, tales como VGEGF, para promover la angiogénesis terapéutica en situaciones tales como curación de heridas, infarto e isquemia.

Los compuestos de Formula I o una sal de los mismos o composiciones farmacéuticas que contienen una cantidad terapéuticamente eficaz de los mismos pueden usarse en el tratamiento de afecciones mediadas por proteína quinasa, tales como enfermedades proliferativas benignas y neoplásicas y trastornos del sistema inmune, como se ha descrito anteriormente. Por ejemplo, tales enfermedades incluyen enfermedades autoinmunes, tales como artritis reumatoide, tiroiditis, diabetes de tipo 1, esclerosis múltiple, sarcoidosis, enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, miastenia grave y lupus sistémico eritematoso; psoriasis, rechazo de transplante de órganos (por ejemplo, rechazo de riñón, enfermedad de injerto contra hospedador), enfermedades proliferativas benignas y neoplásicas, cánceres humanos tales como cáncer de pulmón, de mama, de estómago, de vejiga, de colon, de páncreas, de ovario, de próstata y rectal y tumores hematopoyéticos (leucemia y linfoma), y enfermedades que implican vascularización inapropiada por ejemplo retinopatía diabética, retinopatía de premadurez, neovascularización coroidal debida a la degeneración macular relacionada con la edad y hemangiomas infantiles en seres humanos. Además, tales inhibidores pueden ser útiles en el tratamiento de trastornos que implican edema, ascitis, efusión, y exudados mediados por VEGF, incluyendo por ejemplo edema macular, edema cerebral, lesión pulmonar aguda y síndrome de insuficiencia respiratoria en adultos (ARDS).

Los compuestos de la presente invención también pueden ser útiles en la profilaxis de las enfermedades ante-
riores.

Se prevé que los trastornos indicados anteriormente están mediados hasta cierto punto por la actividad de proteína tirosina quinasa que implica los receptores VEGF (por ejemplo KDR, Flt-1 y/o Tie-2). Inhibiendo la actividad de estas tirosina quinasas de receptores, la progresión de los trastornos indicados se inhibe por que el componente angiogénico del estado de la enfermedad se reduce gravemente. La acción de los compuestos de esta invención, por su selectividad por tirosina quinasas específicas, da como resultado la minimización de efectos secundarios que se producirían si se usasen menos inhibidores de tirosina quinasa selectivos.

En otro aspecto, la invención proporciona compuestos de fórmula I como se ha definido inicialmente para uso como medicamentos, particularmente como inhibidores de la actividad de proteína quinasa, por ejemplo la actividad tirosina quinasa, la actividad de serina quinasa y la actividad de treonina quinasa. En otro aspecto más la presente invención proporciona el uso de compuestos de fórmula I como se ha definido anteriormente en la fabricación de un medicamento para uso en la inhibición de la actividad de proteína quinasa.

En esta invención, pueden aplicarse las siguientes definiciones:

"Sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a aquellas sales que retienen la eficacia biológica y propiedades de las bases libres y que se obtienen por reacción con ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, o ácidos orgánicos tales como ácido sulfónico, ácido carboxílico, ácido fosfórico orgánico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido p-toluenosulfónico, ácido salicílico, ácido láctico, ácido tartárico, ácido maleico y similares.

"Alquilo" se refiere a un hidrocarburo alifático saturado, incluyendo grupos de cadena lineal y de cadena ramificada que tienen de 1 a 4 carbonos.

"Alcoxi" se refiere a un grupo "O-alquilo" donde alquilo se define como se ha descrito anteriormente.

Formulaciones Farmacéuticas

Los compuestos de esta invención pueden administrarse a un paciente humano por sí solos o en composiciones farmacéuticas en las que se mezclan con vehículos o excipiente(s) a dosis para tratar o mejorar la hiperpermeabilidad vascular, edema y trastornos asociados. También pueden administrarse al paciente mezclas de estos compuestos en forma de una mezcla sencilla o en composiciones farmacéuticas formuladas adecuadas. Una dosis terapéuticamente eficaz se refiere además a la cantidad de compuesto o compuestos suficiente para producir la prevención o atenuación de una neovascularización inapropiada, progresión de trastornos hiperproliferativos, edema, hiperpermeabilidad asociada con VEGF y/o hipotensión relacionada con VEGF. Pueden encontrarse técnicas para la formulación y administración de los compuestos de la presente solicitud en "Remington's Pharmaceutical Sciences," Mack Publishing Co., Easton, PA, última edición.

Vías de Administración

Las vías adecuadas de administración pueden incluir, por ejemplo, administración oral, gotas oculares, rectal, transmucosa, tópica, o intestinal; administración parenteral, incluyendo intramuscular, subcutánea, inyecciones intramedulares, así como inyección intratecal, intraventricular directa, intravenosa, intraperitoneal, intranasal o intra-
ocular.

Como alternativa, el compuesto puede administrarse de forma local en vez de sistémica, por ejemplo, mediante inyección del compuesto directamente en un lugar edematoso, normalmente en una formulación de liberación en depósito o sostenida.

Además, el fármaco puede administrarse en un sistema de administración del fármaco dirigido, por ejemplo, en un liposoma recubierto con un anticuerpo específico de célula endotelial.

Composición/Formulación

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden fabricarse de una manera conocida, por ejemplo, mediante procesos convencionales de mezcla, disolución, granulación, fabricación de grageas, levigación, emulsión, encapsulación, inclusión o liofilización.

De esta forma, las composiciones farmacéuticas para uso de acuerdo con la presente invención pueden formularse de una manera convencional usando uno o más vehículos fisiológicamente aceptables que comprenden excipientes y auxiliares que facilitan el procesamiento de los compuestos activos en preparaciones que pueden usarse farmacéuticamente. La formulación adecuada depende de la vía de administración seleccionada.

Para la inyección, los agentes de la invención pueden formularse en soluciones acuosas, preferiblemente en tampones fisiológicamente compatibles tales como solución de Hanks, solución de Ringer, o tampón de solución salina fisiológico. Para la administración transmucosa, en la formulación se usan penetrantes apropiados para que la barrera sea penetrada. Tales penetrantes generalmente se conocen en la técnica.

Para la administración oral, los compuestos pueden formularse fácilmente combinando los compuestos activos con vehículos farmacéuticamente aceptables bien conocidos en la técnica. Tales vehículos permiten que los compuestos de la invención se formulen en forma de comprimidos, píldoras, grageas, cápsulas, líquidos, geles, jarabes, pastas, suspensiones, y similares, para la ingestión oral por parte de un paciente a tratar. Las preparaciones farmacéuticas para uso oral pueden obtenerse combinando el compuesto activo con un excipiente sólido, moliendo opcionalmente la mezcla resultante, y procesando la mezcla de gránulos, añadiendo después auxiliares adecuados, si se desea, para obtener comprimidos o núcleos de grageas. Son excipientes adecuados, en particular, agentes de carga tales como azúcares, incluyendo lactosa, sacarosa, manitol o sorbitol; preparaciones de celulosa tales como, por ejemplo, almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de patata, gelatina, goma de tragacanto, metilcelulosa, hidroxipropilmetil-celulosa, carboximetilcelulosa sódica, y/o polivinilpirrolidona (PVP). Si se desea, pueden añadirse agentes disgregan-
tes, tales como polivinilpirrolidona reticulada, agar, o ácido algínico, o una sal del mismo tal como alginato sódico.

Los núcleos de grageas se proporcionan con recubrimientos adecuados. Para este propósito, se pueden usar soluciones de azúcar concentrado, que pueden contener opcionalmente goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, gel de carbopol, polietilenglicol, y/o dióxido de titanio, soluciones de laca, y disolventes orgánicos adecuados o mezclas de disolventes. Pueden añadirse tintes o pigmentos a los comprimidos o a los recubrimientos de grageas para su identificación o para caracterizar diferentes combinaciones de dosis de compuesto activo.

Las preparaciones farmacéuticas que pueden usarse por vía oral incluyen cápsulas de ajuste por presión hechas de gelatina, así como cápsulas blandas cerradas herméticamente hechas de gelatina y un plastificante, tal como glicerol o sorbitol. Las cápsulas de ajuste por presión pueden contener los ingredientes activos mezclados con cargas tales como lactosa, aglutinantes tales como almidones y/o lubricantes tales como talco o estearato de magnesio, y, opcionalmente, estabilizantes. En las cápsulas blandas, los agentes activos pueden disolverse o suspenderse en líquidos adecuados, tales como aceites grasos, parafina líquida o polietilenglicoles líquidos. Además, pueden añadirse estabilizantes. Todas las formulaciones para administración oral deben estar en dosis adecuadas para tal administración.

Para la administración bucal, las composiciones pueden tomar la forma de comprimidos o grageas formuladas de manera convencional.

Para la administración por inhalación, los compuestos para uso de acuerdo con la presente invención se administran convenientemente en forma de una presentación en pulverización por aerosol desde envases presurizados o un nebulizador, con el uso de un propulsor adecuado, por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosificación puede determinarse proporcionando una válvula para liberar una cantidad medida. Las cápsulas y cartuchos de, por ejemplo, gelatina para uso en un inhalador o insuflador pueden formularse conteniendo una mezcla en polvo del compuesto y una base en polvo adecuada tal como lactosa o almidón.

Los compuestos pueden formularse para administración parenteral por inyección, por ejemplo, por inyección en embolada o infusión continua. Las formulaciones para inyección pueden presentarse en una forma de dosificación unitaria, por ejemplo, en ampollas o recipientes multi-dosis, con un conservante añadido. Las composiciones pueden tomar formas tales como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilización y/o dispersión.

Las formulaciones farmacéuticas para administración parenteral incluyen soluciones acuosas de los compuestos activos en forma soluble en agua. Además, las suspensiones de los agentes activos pueden prepararse como suspensiones oleosas para inyección. Los disolventes o vehículos lipófilos adecuados incluyen aceites grasos tales como aceite de sésamo o ésteres sintéticos de ácidos grasos, tales como oleato de etilo o triglicéridos, o liposomas. Las suspensiones acuosas para inyección pueden contener sustancias que aumentan la viscosidad de la suspensión, tales como carboximetilcelulosa sódica, sorbitol o dextrano. Opcionalmente, la suspensión también puede contener estabilizantes o agentes adecuados que aumenten la solubilidad de los compuestos permitiendo la preparación de soluciones altamente concentradas.

Como alternativa, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo para la constitución con un vehículo adecuado, por ejemplo agua estéril sin pirógenos, antes de su uso.

Los compuestos también pueden formularse en composiciones rectales tales como supositorios o enemas de retención, por ejemplo, conteniendo bases de supositorio convencionales tales como manteca de cacao u otros glicéridos.

Además de las formulaciones descritas previamente, los compuestos también pueden formularse en forma de una preparación de liberación prolongada. Tales formulaciones de larga actuación pueden administrarse por implantación (por ejemplo, por vía subcutánea o intramuscular) o por inyección intramuscular. De esta manera, por ejemplo, los compuestos pueden formularse con materiales poliméricos o hidrófobos adecuados (por ejemplo, en forma de una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio iónico, o en forma de derivados poco solubles, por ejemplo, en forma de una sal poco soluble.

Un ejemplo de un vehículo farmacéutico para los compuestos hidrófobos de la invención es un sistema co-disolvente que comprende alcohol bencílico, un tensioactivo no polar, un polímero orgánico miscible en agua y una fase acuosa. El sistema co-disolvente puede ser el sistema co-disolvente VPD. VPD es una solución de alcohol bencílico al 3% p/v, 8% p/v del tensioactivo no polar polisorbato 80, y polietilenglicol 300 al 65% p/v, enrasada un volumen en etanol absoluto. El sistema co-disolvente VPD (VPD:5W) contiene VPD diluido 1:1 con dextrosa al 5% en solución acuosa. Este sistema co-disolvente disuelve bien compuestos hidrófobos, y produce por sí mismo una baja toxicidad después de la administración sistémica. Naturalmente, las proporciones de un sistema co-disolvente pueden variar considerablemente sin destruir sus características de solubilidad y toxicidad. Además, la identidad de los componentes co-disolventes puede variar; por ejemplo, pueden usarse otros tensioactivos no polares de baja toxicidad en lugar de polisorbato 80; el tamaño de la fracción del polietilenglicol puede variar; otros polímeros biocompatibles pueden reemplazar al poli-
etilenglicol, por ejemplo, polivinilpirrolidona; y otros azúcares o la dextrosa pueden sustituirse por polisacáridos.

Como alternativa, pueden emplearse otros sistemas de liberación para compuestos farmacéuticos hidrófobos. Los liposomas y emulsiones son ejemplos bien conocidos de vehículos o excipientes de liberación para fármacos hidrófobos. También pueden emplearse ciertos disolventes orgánicos tales como dimetilsulfóxido, aunque normalmente a costa de una mayor toxicidad. Además, los compuestos pueden liberarse usando un sistema de liberación sostenida, tal como matrices semipermeables de polímeros hidrófobos sólidos que contienen el agente terapéutico. Se han establecido diversos materiales de liberación sostenida y se conocen bien por parte de los especialistas en la técnica. Las cápsulas de liberación sostenida pueden, dependiendo de su naturaleza química, liberar los compuestos durante unas semanas hasta más de 100 días. Dependiendo de la naturaleza química y de la estabilidad biológica del reactivo terapéutico, pueden emplearse otras estrategias para la estabilización de proteínas.

Las composiciones farmacéuticas también pueden comprender vehículos o excipientes de fase sólida o gel adecuados. Los ejemplos de tales vehículos o excipientes incluyen carbonato cálcico, fosfato cálcico, diversos azúcares, almidones, derivados de celulosa, gelatina y polímeros tales como polietilenglicoles.

Muchos de los compuestos de la invención pueden proporcionarse en forma de sales con contraiones farmacéuticamente compatibles. Las sales farmacéuticamente compatibles pueden formularse con muchos ácidos, incluyendo clorhídrico, sulfúrico, acético, láctico, tartárico, málico, succínico, etc. Las sales tienden a ser más solubles en disolventes acuosos u otros disolventes protónicos que en las formas de base libre correspondientes.

Dosificación Eficaz

Las composiciones farmacéuticas adecuadas para uso en la presente invención incluyen composiciones en las que están contenidos los ingredientes activos en una cantidad eficaz para conseguir su propósito deseado. Más específicamente, una cantidad terapéuticamente eficaz significa una cantidad eficaz para prevenir el desarrollo de o para aliviar los síntomas existentes del sujeto a tratar. La determinación de las cantidades eficaces está dentro de la capacidad de los especialistas en la técnica.

Para cualquier compuesto usado en el método de la invención, la dosis terapéuticamente eficaz puede estimarse inicialmente a partir de ensayos celulares. Por ejemplo, puede formularse una dosis en modelos celulares o animales para conseguir un intervalo de concentración circulante que incluye el nivel de IC_{50} como se determina en análisis celulares (es decir, la concentración del compuesto de ensayo que consigue la mitad de la inhibición semimáxima de una actividad de proteína quinasa dada). En algunos casos es apropiado determinar el nivel de IC_{50} en presencia de albúmina de suero al 3-5% ya que dicha determinación se aproxima a los efectos de unión de la proteína plasmática en el compuesto. Tal información puede usarse para determinar con más exactitud dosis útiles en seres humanos. Además, los compuestos más preferidos para la administración sistémica inhiben eficazmente la señalización de la proteína quinasa en células intactas a niveles que se pueden conseguir bien en el plasma.

Una dosis terapéuticamente eficaz se refiere a la cantidad de compuesto que da lugar a una mejora de los síntomas en un paciente. La toxicidad y la eficacia terapéutica de tales compuestos pueden determinarse mediante procedimientos farmacéuticos convencionales en cultivos celulares o animales de experimentación, por ejemplo, para determinar la dosis máxima tolerada (MTD) y la ED_{50} (dosis eficaz para el 50% de respuesta máxima). La relación de dosis entre efectos tóxicos y terapéuticos es el índice terapéutico y puede expresarse como la relación entre MTD y ED_{50}. Se prefieren compuestos que muestran altos índices terapéuticos. Los datos obtenidos de estos ensayos de cultivos celulares y estudios con animales pueden usarse para formular un intervalo de dosificación para uso en seres humanos. La dosificación de tales compuestos reside preferiblemente en un intervalo de concentraciones circulantes que incluyen la ED_{50} con poca o ninguna toxicidad. La dosificación puede variar dentro de este intervalo dependiendo de la forma de dosificación empleada y de la vía de administración utilizada. La formulación exacta, vía de administración y dosificación pueden elegirse por parte del médico particular en vista de la afección del paciente (Véase por ejemplo Fingl et al., 1975, en "The Pharmacological Basis of Therapeutics", Capítulo 1. pág. 1). En el tratamiento de crisis, puede ser necesaria la administración de un bolo agudo o de una infusión que se aproxime a la MTD para obtener una respuesta rápida.

La cantidad e intervalo de dosificación pueden ajustarse individualmente para proporcionar niveles en plasma del resto activo que son suficientes para mantener los efectos moduladores de quinasa, o una concentración mínima eficaz (MEC). La MEC variará para cada compuesto pero puede calcularse a partir de los datos in vitro; por ejemplo, la concentración necesaria para conseguir un 50-90% de inhibición de proteína quinasa usando los ensayos descritos en este documento. Las dosificaciones necesarias para conseguir la MEC dependerán de las características individuales y de la vía de administración. Sin embargo, pueden usarse ensayos o bioensayos de HPLC para calcular las concentraciones en plasma.

Los intervalos de dosificación también pueden calcularse usando el valor de MEC. Los compuestos deben administrarse siguiendo un régimen que mantiene los niveles en plasma por encima de MEC para el 10-90% de las veces, preferiblemente entre el 30-90% y más preferiblemente entre el 50-90% hasta que se consigue la mejora deseada de los síntomas. En casos de administración local o absorción selectiva, la concentración local eficaz del fármaco puede no estar relacionada con la concentración en plasma.

La cantidad de composición administrada dependerá, por supuesto, del sujeto a tratar, del peso del sujeto, de la gravedad de la aflicción, de la vía de administración y del juicio del médico encargado.

Envasado

Si se desea, las composiciones pueden presentarse en un envase o dispositivo dispensador que puede contener una o más formas de dosificación unitaria que contienen el ingrediente activo. El envase puede constar por ejemplo de una lámina de metal o de plástico, tal como un envase de blíster. El envase o dispositivo dispensador puede ir acompañado de instrucciones para la administración. También pueden prepararse composiciones que comprenden un compuesto de la invención formulado con un vehículo farmacéuticamente aceptable, pueden colocarse en un recipiente adecuado, y etiquetarse para el tratamiento de una enfermedad indicada.

En algunas formulaciones puede ser beneficioso usar los compuestos de la presente invención en forma de partículas de tamaño muy pequeño, por ejemplo como las obtenidas moliendo por energía líquida.

El uso de compuestos de la presente invención en la fabricación de composiciones farmacéuticas se ilustra mediante la siguiente descripción. En esta descripción la expresión "compuesto activo" indica cualquier compuesto de la invención pero particularmente cualquier compuesto que sea el producto final de uno de los Ejemplos anteriores.

a) Cápsulas

En la preparación de cápsulas, se mezclan y desagregan 10 partes en peso de compuesto activo y 240 partes en peso de lactosa. La mezcla puede cargarse en cápsulas de gelatina dura, conteniendo cada cápsula una dosis unitaria o parte de una dosis unitaria de compuesto activo.

b) Comprimidos

Los comprimidos pueden prepararse con los siguientes ingredientes.

	Partes en peso
Compuesto activo	10
Lactosa	190
Almidón de Maíz	22
Polivinilpirrolidona	10
Estearato de Magnesio	3

Se mezclan y desagregan el compuesto activo, la lactosa y parte del almidón y la mezcla resultante puede granularse con una solución de polivinilpirrolidona en etanol. El granulado seco puede mezclarse con el estearato de magnesio y el resto del almidón. Después, la mezcla se comprime en una máquina de comprimidos que contienen cada uno una dosis unitaria o parte de una dosis unitaria de compuesto activo.

c) Comprimidos entéricos recubiertos

Pueden prepararse comprimidos por el método descrito anteriormente en (b). Los comprimidos pueden recubrirse entéricamente de una forma convencional usando una solución de acetato ftalato de celulosa al 20% y ftalato de dietilo al 3% en etanol:diclorometano (1:1).

d) Supositorios

En la preparación de supositorios, pueden incorporarse 100 partes en peso de compuesto activo en 1300 partes en peso de base de supositorio de triglicérido y la mezcla puede formarse en supositorios que contienen cada uno una cantidad eficaz de ingrediente activo.

Si se desea, en las composiciones de la presente invención el compuesto activo puede asociarse con otros ingredientes compatibles farmacológicamente activos. Por ejemplo, los compuestos de esta invención pueden administrarse en combinación con uno o más agentes farmacéuticos adicionales que inhiben o previenen la producción de VEGF o angiopoyetinas, atenúan las respuestas intracelulares a VEGF o angiopoyetinas, bloquean la transducción de señales intracelulares, inhiben la hiperpermeabilidad vascular, reducen la inflamación, o inhiben o previenen la formación de edemas o neovascularización. Los compuestos de la invención pueden administrarse antes de, después de, o simultáneamente con el agente farmacéutico adicional, sea cual sea la vía de administración apropiada. Los agentes farmacéuticos adicionales incluyen pero sin limitación esteroides anti-inflamatorios o anti-edémicos, AINE, inhibidores de ras, agentes anti-TNF, agentes anti-IL1, antihistaminas, antagonistas de PAF, inhibidores de COX-1, inhibidores de COX-2, inhibidores de NO sintasa, inhibidores de Akt/PTB, inhibidores de IGF-1R, inhibidores de PKC e inhibidores de PI3 quinasa. Los compuestos de la invención y los agentes farmacéuticos adicionales actúan aditiva o sinérgicamente. De esta forma, la administración de tal combinación de sustancias que inhiben la angiogénesis, hiperpermeabilidad vascular y/o inhiben la formación de edemas puede proporcionar un mayor alivio de los efectos perjudiciales de un trastorno hiperproliferativo, angiogénesis, hiperpermeabilidad vascular o un edema que la administración de la sustancia por separado. En el tratamiento de trastornos malignos se anticipan combinaciones con quimioterapias antiproliferativas o citotóxicas, hipertermia, hiperoxia o radiación.

La presente invención también comprende el uso de un compuesto de fórmula I como un medicamento.

Un aspecto adicional de la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula I o una sal del mismo en la fabricación de un medicamento para tratar hiperpermeabilidad vascular, trastornos dependientes de angiogénesis, trastornos proliferativos y/o trastornos del sistema inmune en mamíferos, particularmente seres humanos.

La presente invención también proporciona un método para tratar hiperpermeabilidad vascular, neovascularización inapropiada, enfermedades y/o trastornos proliferativos del sistema inmune que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I a un mamífero, particularmente un ser humano, en necesidad del mismo.

La potencia in vitro de los compuestos en la inhibición de estas proteína quinasas puede determinarse por los procedimientos descritos a continuación.

La potencia de los compuestos puede determinarse mediante la cantidad de inhibición de la fosforilación de un sustrato exógeno (por ejemplo, péptido sintético (Z. Songyang et al., Nature. 373:536-539) mediante un compuesto de ensayo relativo al control.

Producción de Tirosina Quinasa de KDR Usando un Sistema de Baculovirus

La secuencia de codificación para el dominio intra-celular de KDR humano (aa789-1354) se generó a través de PCR usando ADNc aislados de células HUVEC. También se introdujo una secuencia poly-His6 en el extremo N de esta proteína. Este fragmento se clonó en un vector de transfección pVL1393 en el sitio Xba1 y Not 1. Se generó un baculovirus recombinante (BV) a través de co-transfección usando el reactivo de Transfección BaculoGold
(PharMingen). El BV recombinante se purificó en placas y se verificó a través de un análisis de Western. Para la producción de proteínas, se cultivaron células SF-9 en medio SF-900-II a 2 x 106/ml, y se infectaron a 0,5 unidades formadoras de placas por célula (MOI). Las células se recogieron 48 horas después de la infección.

Purificación de KDR

Las células SF-9 que expresan (His)_{6}KDR(aa789-1354) se lisaron añadiendo 50 ml de tampón de lisis Triton
X-100 (Tris 20 mM, pH 8,0, NaCl 137 mM, glicerol al 10%, Triton X-100 al 1%, PMSF 1 mM, 10 \mug/ml de aprotinina, 1 \mug/ml de leupeptina) al sedimento celular de 1 l de cultivo celular. El lisado se centrifugó a 19.000 rpm en un rotor Sorval SS-34 durante 30 minutos a 4ºC. El lisado celular se aplicó a una columna Sepharose quelante de 5 ml de NiCl_{2}, equilibrada con HEPES 50 mM, pH 7,5, NaCl 0,3 M. KDR se eluyó usando el mismo tampón que contenía imidazol 0,25 M. Las fracciones de la columna se analizaron usando SDS-PAGE y un ensayo ELISA (más adelante) que mide la actividad de quinasa. El KDR purificado se intercambió en tampón HEPES 25 mM, pH 7,7, NaCl 25 mM, DTT 5mM y se almacenó a -80ºC.

Producción y Purificación de Quinasa de Tie-2 Humana

La secuencia de codificación del dominio intra-celular de Tie-2 humana (aa775-1124) se generó con PCR usando ADNc aislados de la placenta humana como plantilla. Se introdujo una secuencia poly-His_{6} en el extremo N y esta construcción se clonó en un vector de transfección pVL1939 en el sitio Xba1 y Not 1. Se generó un BV recombinante a través de co-transfección usando el reactivo de Transfección BaculoGold (PharMingen). El BV recombinante se purificó en placas y se verificó a través de un análisis de Western. Para la producción de proteínas, se cultivaron células de insecto SF-9 en medio SF-900-II a 2 x 106/ml, y se infectaron a MOI de 0,5. La purificación de la quinasa de señal de His usada en la selección fue análoga a la descrita para KDR.

Producción y Purificación de Tirosina Quinasa de Flt-1 Humana

Se usó el vector de transfección baculoviral pVL1393 (PharMingen, Los Ángeles, CA). Se colocó una secuencia de nucleótidos que codificaba poly-His6 en la posición 5' con respecto a la región de nucleótidos que codifican todo el dominio intracelular quinasa de la Flt-1 humana (aminoácidos 786-1338). La secuencia de nucleótidos que codifica el dominio quinasa se generó a través de PCR usando bibliotecas de ADNc aisladas de células HUVEC. Los restos histidina permitieron una purificación por afinidad de la proteína de una manera análoga a la de KDR y AP70. Se infectaron células de insecto SF-9 a una multiplicidad de 0,5 y se recogieron 48 horas después de la infección.

Fuente de Tirosina Quinasa de EGFR

EGFR se adquirió en Sigma (Cat Nº E-3641); 500 unidades/50 \mul) y el ligando EGF se adquirió en Oncogene Research Products/Calbiochem (Cat. Nº PF011-100).

Expresión de ZAP70

El vector baculoviral usado fue pVL1393 (PharMingen, Los Ángeles, CA). La secuencia de nucleótidos que codifica aminoácidos M(H)6 LVPR_{9}S se colocó en la posición 5' con respecto a la región que codifica todo el ZAP70 (aminoácidos 1-619). La secuencia de nucleótidos que codifica la región codificante de ZAP70 se generó a través de PCR usando bibliotecas de ADNc aisladas de células T Jurkat inmortalizadas. Los restos histidina permitieron una purificación por afinidad de la proteína (véase más adelante). El puente LVPR_{9}S constituye una secuencia de reconocimiento para la escisión proteolítica mediante trombina, permitiendo retirar la señal de afinidad de la enzima. Se infectaron
células de insecto SF-9 a una multiplicidad de infección de 0,5 y se recogieron 48 horas después de la infección.

Extracción y purificación de ZAP70

Las células SF-9 se lisaron en un tampón compuesto por Tris 20 mM, pH 8,0, NaCl 137 mM, glicerol al 10%, Triton X-100 al 1%, PMSF 1 mM, 1 \mug/ml de leupeptina, 10 \mug/ml de aprotinina, y ortovanadato sódico 1 mM. El lisado soluble se aplicó a una columna Sepharose quelante HiTrap (Pharmacia) equilibrada en HEPES 50 mM, pH 7,5, NaCl 0,3 M. La proteína de fusión se eluyó con imidazol 0,25 M. La enzima se almacenó en tampón que contenía HEPES 50 mM, pH 7,5, NaCl 50 mM y DTT 5 mM.

Fuente de Proteína Quinasa

Lck, Fyn, Src, Blk, Csk y Lyn, y formas truncadas de las mismas pueden obtenerse comercialmente (por ejemplo en Upstate Biotechnology Inc. (Saranc Lake, N.Y.) y Santa Cruz Biotechnology Inc. (Santa Cruz, Ca.)) o pueden purificarse a partir de fuentes conocidas naturales o recombinantes usando métodos convencionales

Ensayo Inmunoabsorbente Ligado a Enzimas (ELISA) para PTK

Se usaron ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISA) para detectar y medir la presencia de actividad de tirosina quinasa. Los ensayos por ELISA se realizaron de acuerdo con protocolos conocidos que se describen por ejemplo, en Voller, et al., 1980, "Enzyme-Linked Imunosorbent Assay," en Manual of Clinical Immunology, 2ª ed, editado por Rose y Friedman, páginas 359-371 Am. Soc. of Microbiology, Washington, D.C.

El protocolo descrito se adaptó para calcular la actividad con respecto a una PTK específica. Por ejemplo, se proporcionan a continuación protocolos preferidos para realizar los experimentos ELISA. La adaptación de estos protocolos para determinar una actividad de un compuesto para otros miembros de la familia PTK de receptores, así como tirosina quinasas de no receptores, están dentro de la capacidad de los especialistas en la técnica. Para los propósitos de determinar la selectividad inhibidora, se empleó un sustrato de PTK universal (por ejemplo, un copolímero aleatorio de poli(Glu_{4}Tyr), con un peso molecular de 20.000-50.000) junto con ATP (típicamente 5 \muM) a concentraciones aproximadamente dos veces la Km aparente en el ensayo.

Se usó el siguiente procedimiento para ensayar el efecto inhibidor de compuestos de esta invención en la actividad de tirosina quinasa de KDR, Flt-1, Tie-2, EGFR y ZAP70.

Tampones y Soluciones

PGTPoly(Glu, Tyr) 4:1

Almacenar el polvo a -20ºC. Disolver el polvo en solución salina tamponada con fosfato (PBS) para una solución de 50 mg/ml. Almacenar 1 ml de alícuotas a -20ºC. Al fabricar las placas, diluir a 250 \mug/ml en PBS Gibco.

Tampón de Reacción: Hepes 100 mM, MgCl_{2} 20 mM, MnCl_{2} 4 mM, DTT 5mM, BSA al 0,02%, NaVO_{4} 200 \muM, pH 7,10

ATP: Almacenar en alícuotas de 100 mM a -20ºC. Diluir a 20 \muM en agua

Tampón de Lavado: PBS con Tween 20 al 0,1%

Tampón de Dilución de Anticuerpos: Albúmina de suero bovino al 0,1% (BSA) en PBS.

Sustrato de TMB: mezclar el sustrato de TMB y soluciones de Peróxido 9:1 justo antes del uso o usar Sustrato
K-Blue de Neogen.

Solución de Parada: Ácido fosfórico 1 M.

Procedimiento 1. Preparación de placas

Diluir la solución madre de PGT (50 mg/ml, congelado) en PBS a 250 mg/ml. Añadir 125 \mul por pocillo de placas ELISA de alta afinidad de fondo plano Corning modificadas (Corning Nº 25805-96). Añadir 125 \mul de PBS a los pocillos blanco. Cubrir con cinta para cierre hermético e incubar durante una noche a 37ºC. Lavar 1 x con
250 \mul tampón de lavado y secar durante aproximadamente 2 horas en un incubador seco a 37ºC. Almacenar las placas recubiertas en una bolsa cerrada herméticamente a 4ºC hasta su uso.

2. Reacción de la Tirosina Quinasa

Preparar soluciones inhibidoras a una concentración 4x en DMSO al 20% en agua.

Preparar el tampón de reacción.

Preparar la solución enzimática de tal forma que las unidades deseadas estén en 50 \mul, por ejemplo para KDR, preparar a 1 ng/\mul para un total de 50 ng por pocillo en las reacciones. Almacenar en hielo.

Fabricar 4x solución de ATP para 20 \muM de solución madre 100 mM en agua. Almacenar en hielo.

Añadir 50 \mul de la solución enzimática por pocillo (típicamente 5-50 ng enzima/pocillo dependiendo de la actividad específica de la quinasa)

Añadir 25 \mul 4x inhibidor

Añadir 25 \mul 4X ATP para el ensayo inhibidor

Incubar durante 10 minutos a temperatura ambiente

Interrumpir la reacción añadiendo 50 \mul de HCl 0,5 N por pocillo

Lavar la placa

** Concentraciones Finales para la Reacción: ATP 5 \muM, DMSO al 5%.

3. Unión de Anticuerpos

Diluir una alícuota de 1 mg/ml de anticuerpo PY20-HRP (Pierce) (un anticuerpo de fosfotirosina) a 50 ng/ml en BSA al 0,1% en PBS mediante una dilución en 2 etapas (100x, después 200x).

Añadir 100 \mul de Ab por pocillo. Incubar durante 1 hora a temperatura ambiente. Incubar durante 1 hora a 4ºC.

Lavar la placa cuatro veces.

4. Reacción de Color

Preparar el sustrato de TMB y añadir 100 \mul por pocillo

Controlar la OD a 650 nm hasta que se alcance 0,6

Interrumpir con ácido fosfórico 1 M. Agitar en el lector de placas.

Leer inmediatamente la OD 450 nm.

Los tiempos de incubación óptimos y las condiciones de reacción enzimática pueden variar ligeramente con las preparaciones enzimáticas y se determinan empíricamente para cada lote.

Para Lck, el tampón de reacción utilizado fue MOPSO 100 mM, pH 6,5 MnCl_{2} 4 mM, MgCl_{2} 20 mM, DTT 5 mM, BSA al 0,2%, NaVO_{4} 200 mM, a condiciones de ensayo análogas.

Los compuestos de fórmula I pueden tener utilidad terapéutica en el tratamiento de enfermedades que implican proteínas tirosina quinasas identificadas, incluyendo las que no se han mencionado en este documento, y las proteínas tirosina quinasas no identificadas que se inhiben por compuestos de fórmula I. Todos los compuestos ilustrados en este documento inhiben significativamente FGFR, PDGFR, KDR, Tie-2, Lck, Fyn, Blk, Lyn o Src a concentraciones de 50 micromoles o menos. Algunos compuestos de esta invención también inhiben significativamente otras tirosina o serina/treonina quinasas tales como cdc2 (cdk1) a concentraciones de 50 micromoles o menos.

Fuente de Cdc2

La enzima humana recombinante y el tampón de ensayo pueden obtenerse comercialmente (New England Biolabs, Beverly, MA. EE.UU.), o purificarse a partir de fuentes naturales o recombinantes conocidas usando métodos convencionales.

Ensayo de Cdc2

El protocolo usado fue el proporcionado con los reactivos adquiridos con modificaciones menores. En resumen, la reacción se realizó en un tampón compuesto por Tris 50 mM, pH 7,5, NaCl 100 mM, EGTA 1 mM, DTT 2 mM, Brij al 0,15%, DMSO al 5% y MgCl_{2} 10 mM (tampón comercial) suplementado con concentraciones finales de ATP reciente 300 \muM (31 \muCi/ml) y 300 \muM de histona de tipo IIIss. Se realizó un volumen de reacción de 80 \mul, que contenía unidades de enzima, durante 20 minutos a 25ºC en presencia o ausencia de un inhibidor. La reacción se terminó añadiendo 120 \mul de ácido acético al 10%. El sustrato se separó del marcador no incorporado salpicando la mezcla sobre papel de fosfocelulosa, seguido de 3 lavados de 5 minutos cada uno con ácido fosfórico 75 mM. Los recuentos se midieron mediante un contador beta en presencia de un líquido de centelleo.

Ciertos compuestos de esta invención inhiben significativamente cdc2 a concentraciones por debajo de 50 \muM.

Fuente de quinasa de PKC

La subunidad catalítica de PKC puede obtenerse comercialmente (Calbiochem)

Ensayo de quinasa de PKC

Se empleó un ensayo radiactivo de quinasa siguiendo un procedimiento publicado (Yasuda, I. Kirshimoto, A., Tanaka, S., Tominaga, M., Sakurai, A., Nishizuka, Y. Biochemical and Biophysical Research Communication 3:166, 1220-1227 (1990)). En resumen, todas las reacciones se realizaron en tampón quinasa que constaba de Tris-HCl 50 mM, pH 7,5, MgCl_{2} 10 mM, DTT 2 mM, EGTA 1 mM, ATP 100 \muM, péptido 8 \muM, DMSO al 5% y ^{33}P ATP (8 Ci/mM). El compuesto y la enzima se mezclaron en el recipiente de reacción y la reacción se inició mediante la adición de la mezcla de ATP y sustrato. Después de finalizar la reacción mediante la adición de 10 \mul de tampón de parada (ATP 5 mM en ácido fosfórico 75 mM), se salpicó una porción de la mezcla sobre filtros de fosfocelulosa. Las muestras salpicadas se lavaron 3 veces en ácido fosfórico 75 mM a temperatura ambiente durante un período de 5 a 15 minutos. La incorporación del radiomarcador se cuantificó por recuento por centelleo líquido.

Fuente de la enzima Erk2

La enzima recombinante murina y el tampón de ensayo pueden obtenerse comercialmente (New England Biolabs, Beverly, Ma. EE.UU.) o purificarse de fuentes naturales o recombinantes conocidas usando métodos convencionales.

Ensayo de la enzima Erk2

En resumen, la reacción se realizó en un tampón compuesto por Tris 50 mM, pH 7,5, EGTA 1 mM, DTT 2 mM, Brij al 0,01%, DMSO al 5% y MgCl_{2} 10 mM (solución tampón comercial) suplementado con ATP reciente 100 \muM (31 \muCi/ml) y 30 \muM de proteína básica de mielina en las condiciones recomendadas por el proveedor. Los volúmenes y métodos para ensayar la radiactividad incorporada fueron como se ha descrito para el ensayo de PKC. (véase anteriormente).

Modelos In Vitro para la Activación de Células T

Después de la activación por mitógenos o antígenos, las células T son inducidas a secretar IL-2, un factor de crecimiento que apoya su fase proliferativa posterior. Por lo tanto, se puede medir la producción de IL-2 a partir de, o la proliferación celular de, células T primarias o líneas de células T apropiadas como un sustituto para la activación de células T. Ambos ensayos se describen bien en la bibliografía y sus parámetros están bien documentados (en Current Protocols in Immunology, Vol 2, 7.10.1-7.11.2).

En resumen, las células T pueden activarse mediante un co-cultivo con células estimuladoras alogénicas, un proceso designado como reacción de linfocitos mezclados de una vía. Las células mononucleares de sangre periférica estimuladoras y respondedoras se purifican mediante el gradiente Ficoll-Hypaque (Pharmacia) siguiendo las instrucciones del fabricante. Las células estimuladoras se inactivan mitóticamente mediante tratamiento con mitomicina C (Sigma) o irradiación gamma. Las células respondedoras y estimuladoras se co-cultivan en una relación de dos a uno en presencia o ausencia del compuesto de ensayo. Típicamente, se mezclan 10^{5} respondedoras con 5 x 10^{4} estimuladoras y se colocan en una placa (200 \mul de volumen) en una placa de microtitulación con fondo U (Costar Scientific). Las células se cultivan en RPMI 1640 suplementado con suero bovino fetal inactivado con calor (Hyclone Laboratories), o en suero AB humano reunido de donantes masculinos, 2-mercaptoetanol 5 x 10^{-5} M y DMSO al 5%. Los cultivos se someten a pulsos con 0,5 \muCi de ^{3}H timidina (Amersham) un día antes de la recogida (normalmente el día tres). Los cultivos se recogen (recolector Betaplate, Wallac) y se evalúa la absorción de isótopos mediante centelleo líquido (Betaplate, Wallac).

El mismo sistema de cultivo puede usarse para evaluar la activación de células T midiendo la producción de IL-2. Los sobrenadantes se retiran de ocho a veinticuatro horas después del inicio del cultivo y se mide la concentración de IL-2 mediante ELISA (Sistemas R y D) siguiendo las instrucciones del fabricante.

Modelos In vivo de Activación de Células T

La eficacia in vivo de los compuestos puede ensayarse en modelos animales que se sabe que miden directamente la activación de células T o para los que se ha probado que las células T son efectoras. Las células T pueden activarse in vivo mediante la unión de la porción constante del receptor de células T con un anticuerpo monoclonal anti-CD3 (Ab). En este modelo, se administra a ratones BALB/c 10 \mug de Ab anti-CD3 por vía intraperitoneal dos horas antes de la extracción de sangre. Los animales que van a recibir un fármaco de ensayo se pre-tratan con una dosis única del compuesto una hora antes de la administración de Ab anti-CD3. Se miden mediante ELISA los niveles en suero de las citoquinas proinflamatorias interferón-\gamma (IFN-\gamma) y del factor de necrosis tumoral \alpha (TNF-\alpha), indicadores de la activación de células T. Un modelo similar emplea el cebado de células T in vivo con un antígeno específico tal como hemocianina de lapa californiana (KLH) seguido de una exposición in vivo de células de ganglios linfáticos drenantes con el mismo antígeno. Como se ha descrito previamente, se usa la medición de la producción de citoquina para evaluar el estado de activación de las células cultivadas. En resumen, los ratones C57BL/6 se inmunizan por vía subcutánea con 100 mg de KLH emulsionada en adyuvante completo de Freund (CFA) en el día cero. Los animales se pretratan con el compuesto un día antes de la inmunización y posteriormente en el día uno, dos, y tres después de la inmunización. Los ganglios linfáticos drenantes se recogen en el día 4 y sus células se cultivan a 6 x 10^{6} por ml en medio de cultivo tisular (RPMI 1640 suplementado con suero bovino fetal inactivado con calor (Hyclone Laboratories), 2-mercaptoetanol 5 x 10^{-5} M y DMSO al 0,5%) durante 24 y 48 horas. Después, los sobrenadantes de cultivo se evalúan mediante ELISA con respecto al factor de crecimiento de células T autocrinas Interleuquina-2 (IL-2) y/o niveles de IFN-\gamma.

Los compuestos de plomo también pueden ensayarse en modelos animales de enfermedades humanas. Estos se ilustran mediante encefalomielitis auto-inmune experimental (EAE) y artritis inducida por colágeno (CIA). Los modelos de EAE que imitan aspectos de la esclerosis múltiple en seres humanos se han descrito tanto en ratas como en ratones (analizado por FASEB J., 5:2560-566, 1991; murine model: Lab. Invest. 4(3): 278, 1981; rodent model: J. Immunol 146(4):1163-8, 1191). En resumen, las ratas o ratones se inmunizan con una emulsión de proteína básica de mielina (MBP) o derivados de péptidos neurogénicos de la misma, y CFA. Puede inducirse una enfermedad aguda con la adición de toxinas bacterianas tales como bordetella pertussis. La enfermedad de recaída/remitente se induce por transferencia adoptiva de células T de animales inmunizados con MBP/péptido.

Puede inducirse CIA en ratones DBA/1 por inmunización con colágeno de tipo II (J. Immunol:142(7):2239-2243). Los ratones desarrollarán signos de artritis tan pronto como 10 días después de la exposición a antígenos y pueden valorarse hasta noventa días después de la inmunización. En los modelos de EAE y CIA, puede administrarse un compuesto profilácticamente o en el momento del comienzo de la enfermedad. Los fármacos eficaces deberían reducir la gravedad y/o la incidencia.

Ciertos compuestos de esta invención que inhiben uno o más PTK de receptores angiogénicos, y/o una proteína quinasa tal como lck implicada en la mediación de las respuestas inflamatorias pueden reducir la gravedad y la incidencia de la artritis en estos modelos.

Los compuestos también pueden ensayarse en modelos de aloinjertos en ratones, de la piel (revisado en Ann. Rev. Immunol., 10:333-58, 1992; Transplantation: 57(12): 1701-17D6, 1994) o del corazón (Am. J. Anat.: 113:273, 1963). En resumen, se transplantan injertos de piel de grosor completo de ratones C57BL/6 a ratones BALB/c. Los injertos pueden examinarse diariamente, empezando el día seis, para las evidencias de rechazo. En el modelo de transplante cardíaco de neonato de ratones, los corazones de neonatos se transplantan de forma ectópica de ratones C57BL/6 a la pinna de la oreja de ratones adultos CBA/J. Los corazones empiezan a latir de cuatro a siete días después del transplante y el rechazo puede evaluarse visualmente usando un microscopio de disección para determinar el cese del latido.

Ensayos Celulares de Receptores PTK

Se usó el siguiente ensayo celular para determinar el nivel de actividad y el efecto de los distintos compuestos de la presente invención en KDR/VEGFR2. Pueden diseñarse ensayos similares del receptor PTK junto con las mismas líneas que para otras tirosina quinasas usando métodos bien conocidos en la técnica.

Fosforilación de KDR Inducida por VEGF en Células Endoteliales de Vena Umbilical Humanas (HUVEC) Medida por Transferencias de Western

1. Se adquirieron células HUVEC (de varios donantes) de Clonetics (San Diego, CA) y se cultivaron de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Sólo se utilizaron los primeros pasos (3-8) para este ensayo. Las células se cultivaron en placas de 100 mm (Falcon para cultivos de tejido; Becton Dickinson; Plymouth, Inglaterra) usando medio EBM completo (Clonetics).

2. Para evaluar una actividad inhibidora de un compuesto, las células se trataron con tripsina y se sembraron a 0,5-1,0 x 10^{5} células/pocillo en cada pocillo de grupos de placas de 6 pocillos (Costar; Cambridge, MA).

3. 3-4 días después de la siembra, las placas eran confluentes al 90-100%. El medio se retiró de todos los pocillos, las células se aclararon con 5-10 ml de PBS y se incubaron 18-24 horas con 5 ml de medio de base EBM sin añadir ningún suplemento (es decir, sin suero).

4. Se añadieron diluciones en serie de inhibidores en 1 ml de medio EBM (concentraciones finales de 25 \muM, 5 \muM, o 1 \muM) a células y se incubaron durante una hora a 37ºC. Después se añadió VEGF_{165} humano recombinante (R&D Systems) a todos los pocillos en 2 ml de medio EBM a una concentración final de 50 ng/ml y se incubó a 37ºC durante 10 minutos. Las células de control no tratadas o tratadas con VEGF se usaron solamente para evaluar la fosforilación basal y la inducción de fosforilación por VEGF.

Después, todos los pocillos se aclararon con 5-10 ml de PBS frío que contenía Ortovanadato Sódico 1 mM (Sigma) y las células se lisaron y se rasparon en 200 \mul de tampón RIPA (Tris-HCl 50 mM, pH 7, NaCl 150 mM, NP-40 al 1%, desoxicolato sódico al 0,25%, EDTA 1 mM) que contenía inhibidores de proteasa (PMSF 1 mM, 1 \mug/ml de aprotinina, 1 \mug/ml de pepstatina, 1 \mug/ml de leupeptina, vanadato sódico 1 mM, fluoruro sódico 1 mM), y 1 \mug/ml de Dnasa (todos los agentes químicos de Sigma Chemical Company, St Louis, MO). El lisado se centrifugó a 14.000 rpm durante 30 minutos, para eliminar los núcleos.

Después, se precipitaron cantidades iguales de proteínas por adición de Etanol frío (-20ºC) (2 volúmenes) durante un mínimo de 1 hora o un máximo de una noche. Los sedimentos se reconstituyeron en tampón de muestra Laemli que contenía mercaptoetanol al 5% (BioRad; Hercules, CA) y se hirvió durante 5 minutos. Las proteínas se resolvieron por electroforesis de gel de poliacrilamida (6%, 1,5 mm Novex, San Diego, CA) y se trasfirieron a una membrana de nitrocelulosa usando el sistema Novex. Después de bloquear con albúmina de suero bovino (3%), las proteínas se trataron con una sonda durante una noche con anticuerpo policlonal anti-KDR (C20, Santa Cruz Biotechnology; Santa Cruz, CA) o con anticuerpo monoclonal anti-fosfotirosina (4G10, Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY) a 4ºC. Después de lavar e incubar durante 1 hora con F(ab)_{2} conjugado con HRP de IgG de cabra anti-conejo o de cabra anti-ratón, las bandas se visualizaron usando el sistema de quimioluminiscencia de emisión (ECL) (Amersham Life Sciences, Arlington Height, IL). Algunos ejemplos de la presente invención inhiben significativamente la fosforilación celular de tirosina quinasa de KDR inducida por VEGF a concentraciones de menos de 50 \muM.

Modelo In Vivo de Edema Uterino

Este ensayo mide la capacidad de los compuestos para inhibir el gran aumento del peso uterino en ratones que se produce en las primeras horas después de la estimulación con estrógenos. Se sabe que este comienzo temprano del aumento del peso uterino se debe a un edema causado por una mayor permeabilidad de la vasculatura uterina. Cullinan-Bove y Koss (Endocrinology (1993), 133:829-837) demostraron una relación temporal cercana del edema uterino estimulado con estrógenos con un aumento de la expresión de ARNm de VEGF en el útero. Estos resultados se han confirmado con el uso de anticuerpos monoclonales neutralizantes contra VEGF que redujeron significativamente el gran aumento del peso uterino después de la estimulación con estrógenos (documento WO 97/42187). Por tanto, este sistema puede servir como modelo para la inhibición in vivo de la señalización de VEGF y la hiperpermeabilidad y edemas asociados.

Materiales

Todas las hormonas se adquirieron en Sigma (St. Louis, NO) o Cal Biochem (La Jolla, CA) en forma de polvos liofilizados y se prepararon de acuerdo con las instrucciones del proveedor.

Los componentes del vehículo (DMSO, Cremaphor EL) se adquirieron en Sigma (St. Louis, MO).

Los ratones (Balb/c, de 8-12 semanas de edad) se adquirieron en Taconic (Germantown, NY) y se introdujeron en una instalación para animales sin patógenos de acuerdo con las Institucional Animal Care and Use Comitee Guidelines.

Método

Día 1: A ratones BALB/C se les administró una inyección intaperitoneal (i.p) de 12,5 unidades de gonadotropina de suero de yegua preñada (PMSG)

Día 3: Los ratones recibieron 15 unidades de gonadotropina coriónica humana (hCG) i.p.

Día 4: Los ratones se seleccionaron de forma aleatoria y se dividieron en grupos de 5-10. Los compuestos de ensayo se administraron por vía i.p, i.v. o p.o. dependiendo de la solubilidad y del vehículo a dosis que variaban de 1-100 mg/kg. El grupo de control de vehículo recibió sólo vehículo y otros dos grupos no se trataron.

Treinta minutos después, al grupo experimental, del vehículo y 1 de los grupos no tratados se les administró una inyección de 17 estradiol (500 \mug/kg). Después de 2-3 horas, los animales se sacrificaron mediante inhalación de CO_{2}. Después de una incisión en la línea media, cada útero se aisló y se retiró cortando justo por debajo del cuello uterino y en las uniones del útero y los oviductos. El tejido graso y conectivo se retiró con cuidado de no dañar la integridad del útero antes de pesarlo (peso en húmedo). Los úteros se secaron para retirar el líquido presionando entre dos láminas de papel de filtro con un frasco de vidrio de un litro cargado con agua. Los úteros se pesaron después del secado (peso en seco). La diferencia entre los pesos en húmedo y en seco se consideró como el contenido líquido del útero. Se comparó el contenido líquido medio de grupos tratados con el de los grupos no tratados o tratados sólo con el vehículo. El significado se determinó mediante el ensayo de Student. El grupo de control no estimulado se usó para controlar la respuesta al estradiol.

Los resultados demuestran que ciertos compuestos de la presente invención inhiben la formación de edemas cuando se administran sistémicamente mediante diversas vías.

Ciertos compuestos de esta invención que son inhibidores de receptores angiogénicos de tirosina quinasas también pueden mostrarse activos en un modelo de implante Matrigel de neovascularización. El modelo de neovascularización Matrigel implica la formación de nuevos vasos sanguíneos dentro de una "canica" transparente de matriz extracelular implantada por vía subcutánea que se induce por la presencia de un factor proangiogénico que produce células tumorales (para ejemplos véase: Passaniti, A., et al, Lab. Investig. (1992), 67(4), 519-528; Anat. Rec. (1997), 249(1), 63-73; Int. J. Cancer (1995), 63(5), 694-701; Vasc. Biol (1995), 15(11), 1857-6). El modelo se realiza preferiblemente durante 3-4 días y los puntos finales incluyen valoración macroscópica visual/imagen de neovascularización, determinaciones microscópicas de densidad de los microvasos, y cuantificación de hemoglobina (método Drabkin) después de retirar el implante frente a controles de animales no tratados con inhibidores. El modelo puede emplear alternativamente bFGF o HGF como estímulo.

Ciertos compuestos de esta invención que inhiben una o más proteína quinasas oncogénicas, protooncogénicas, o dependientes de proliferación, o receptores PTK angiogénicos también inhiben el crecimiento de tumores de xenoinjertos primarios murinos, de ratas o de seres humanos en ratones, o inhiben la metástasis en modelos murinos.

Ejemplos

Ahora se describirán los procesos para la preparación de compuestos de fórmula I. Estos procesos forman un aspecto más de la presente invención. Los procesos se realizan preferiblemente a presión atmosférica.

Los compuestos de fórmula I pueden prepararse condensando un compuesto de fórmula

100

en la que R_{1}, R_{2}, R_{3}, L y el anillo A son como se han definido anteriormente, con formamida a una temperatura en el intervalo de 50 a 250ºC opcionalmente en presencia de un catalizador por ejemplo 4-dimetilaminopiridina.

Los compuestos de fórmula I pueden prepararse haciendo reaccionar un compuesto de fórmula (III)

3

en la que R_{x} es bromo o yodo con uno de los siguientes compuestos:

R_{3}B(OH)_{2}, R_{3}SnCH_{3} o un compuesto representado por la fórmula III

4

en la que R_{3} es como se ha definido anteriormente, en presencia de un catalizador por ejemplo compuestos de paladio (0) por ejemplo Pd(PPh_{3})_{4}.

Los compuestos de fórmula I en la que R, representa un grupo alquilo o un grupo aralquilo pueden prepararse alquilando un compuesto de fórmula (IV)

5

en la que R_{2} y R_{3} son como se han definido anteriormente con un compuesto de fórmula R_{1}X' en la que R_{1} representa un grupo alquilo o un grupo aralquilo y X' representa un grupo saliente, por ejemplo halo, mesiloxi o tosiloxi.

Los compuestos de fórmula I en la que R_{1} representa un éter cíclico opcionalmente sustituido, tal como tetrahidrofurilo o tetrahidropiranilo, pueden prepararse alquilando un compuesto de fórmula IV

6

en la que R_{2} y R_{3} son como se han definido anteriormente con un compuesto de fórmula R_{1}X' en la que X' es como se ha definido anteriormente y R_{1} es un éter cíclico opcionalmente sustituido.

Los compuestos de fórmula I en la que R_{1} representa un éter cíclico, tal como tetrahidrofurilo o tetrahidropiranilo, opcionalmente sustituido con formilo pueden prepararse alquilando un compuesto de fórmula IV con un compuesto R_{1}X donde R_{1} representa un éter cíclico sustituido con un grupo formilo que se ha protegido mediante un procedimiento conocido por los especialistas en la técnica, por ejemplo mediante un acetal (véase por ejemplo Tet. Letts. 30 (46) 1989, 6259-6262) seguido de desprotección. Los compuestos en los que R_{1} representa un éter cíclico, tal como tetrahidrofurilo o tetrahidropiranilo, sustituido con un grupo (amino opcionalmente sustituido)metilo pueden prepararse por aminación reductora de un compuesto en el que R_{1} representa un éter cíclico sustituido con formilo.

Los compuestos de fórmula I en la que R_{1} representa furilo, tienilo o pirrolilo opcionalmente sustituido pueden prepararse haciendo reaccionar 4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina con el ácido heteroarilbórico apropiado en presencia de un catalizador de sal de cobre, por ejemplo acetato de cobre (II) en presencia de un disolvente para los reactivos, por ejemplo un disolvente halogenado, por ejemplo diclorometano, en presencia de un agente secante, por ejemplo tamices moleculares 4 \ring{A}, en presencia de una base orgánica, por ejemplo trietilamina o piridina, a una temperatura en el intervalo de 0-50ºC, preferiblemente a temperatura ambiente. (Para las condiciones véase Tet. Letts. (1998), volumen 59: 2942-2944 y las referencias citadas en ese documento. Esta referencia se incorpora en este documento como referencia). Estos compuestos pueden formularse mediante procesos conocidos por los especialistas en la técnica, dando compuestos en los que R_{1} representa furilo, tienilo o pirrolilo sustituido con formilo. El grupo formilo de estos compuestos puede aminarse productivamente mediante procesos conocidos por los especialistas en la técnica, dando compuestos en los que R_{1} representa furilo, tienilo o pirrolilo sustituido con grupos aminometilo. Como alternativa, los intermedios en los que R_{1} representa furilo, tienilo o pirrolilo pueden someterse a una reacción de Mannich, dando intermedios en los que R_{1} representa furilo, tienilo o pirrolilo sustituido con un grupo
aminometilo.

Los compuestos de fórmula I pueden prepararse haciendo reaccionar un compuesto de fórmula V

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7

en la que R_{1}, R_{2}, R_{3}, L y el anillo A son como se han definido anteriormente y R_{y} representa un grupo saliente, por ejemplo halo o fenoxi, con amoniaco o una sal amónica, por ejemplo acetato amónico, a una temperatura en el intervalo de 15-250ºC, preferiblemente en un recipiente a presión.

Los compuestos de fórmula I en la que R_{2} representa cloro, bromo o yodo pueden prepararse haciendo reaccionar un compuesto de fórmula VI

8

en la que R_{1}, R_{3}, L y el anillo A son como se han definido anteriormente con una gente halogenante por ejemplo un agente yodante, por ejemplo N-yodosuccinimida, o un agente de bromación, por ejemplo N-bromosuccinimida, o un agente de cloración, por ejemplo N-clorosuccinimida.

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Los compuestos de fórmula 1 en la que -L-R_{3} representa -NHC(O)R_{3} pueden prepararse haciendo reaccionar un compuesto de fórmula VII

9

en la que R_{1}, R_{2} y el anillo A son como se han definido anteriormente e Y representa una amina protegida, con un compuesto de fórmula R_{3}COR_{x} en la que R_{x} representa un grupo saliente, por ejemplo cloro. Como alternativa, los compuestos de fórmula VII en la que Y representa halo, por ejemplo cloro, pueden hacerse reaccionar con un compuesto de fórmula R_{3}COR_{x} y el producto hacerse reaccionar con amoniaco, dando un compuesto de fórmula I. Pueden usarse procesos análogos para preparar compuestos de fórmula I en la que -L-R_{3} es -NRSO_{2}R_{3}. Pueden usarse procesos análogos para preparar un compuesto de fórmula I en la que -L-R_{3} es -NRCO_{2}-R_{3} o -NRCONR'. R y R' son como se han definido anteriormente.

Los compuestos de fórmula I en la que -L-R_{3} es -OSO_{2}- pueden prepararse haciendo reaccionar un compuesto de fórmula VIII

10

en la que R_{1}, R_{2} y el anillo A son como se han definido anteriormente con un compuesto de fórmula R_{4}SO_{2}R_{x}.

Después, los compuestos de fórmula I pueden prepararse a partir de tales intermedios siguiendo el Esquema 2 o la alternativa para el Esquema 2, que se describe a continuación.

Los compuestos de fórmula II pueden prepararse como se muestra en el Esquema 1 en el que IPA representa propan-2-ol.

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Esquema 1

11

Los especialistas en la técnica entenderán que los compuestos de fórmula I pueden convertirse en otros compuestos de fórmula I mediante reacciones químicas conocidas. Por ejemplo, un grupo alcoxi puede escindirse para dar hidroxi, los grupos nitro pueden reducirse en aminas, las aminas pueden acilarse o fosforilarse y los compuestos N-acilo pueden hidrolizarse en aminas. Los compuestos de fórmula I en la que -L- es S pueden oxidarse, dando compuestos de fórmula I en la que -L- representa SO y SO_{2}, respectivamente, mediante procesos conocidos por los especialistas en la técnica.

Los compuestos de fórmula III están disponibles en el mercado o pueden prepararse mediante procesos conocidos por los especialistas en la técnica.

Los compuestos de fórmula IV en la que R_{2} representa hidrógeno pueden prepararse como se muestra en el Esquema 2. El grupo amino puede protegerse antes de la etapa final y posteriormente desprotegerse después de la etapa final del esquema 2 mediante procesos conocidos por los especialistas en la técnica. Los compuestos de fórmula IV en la que R_{2} es diferente de hidrógeno pueden prepararse mediante procesos análogos, (véase J. Med. Chem. (1990), 33, 1984).

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Esquema 2

12

Como alternativa en el Esquema 2, puede acoplarse primero (anillo A)-L-R_{3}, antes de la aminación. Como alternativa, un sustituyente R_{1} como se ha definido anteriormente puede estar presente antes de realizar cualquier procedimiento.

Los compuestos de fórmula V pueden prepararse como se muestra en el Esquema 3.

Esquema 3

13

Los compuestos en los que (anillo A)-L-R_{3} está ausente pueden prepararse como en el Esquema 4 y como se describe en J. Med. Chem., (1988), 31: 390 y en las referencias citadas en ese documento. Los compuestos en los que (anillo A)-L-R_{3} es diferente de hidrógeno pueden prepararse mediante procesos análogos.

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Esquema 4

14

Los compuestos de fórmula VII pueden prepararse acoplando un compuesto 5-yodo de una manera análoga a la descrita para la preparación de compuestos de fórmula IV.

Los especialistas en la técnica entenderán que en los casos en los que un sustituyente es idéntico a, o similar a, un grupo funcional que se ha modificado en uno de los procesos anteriores, estos sustituyentes requerirán protección antes de que se realice el procedimiento, seguido de desprotección después del procedimiento. De lo contrario, pueden producirse reacciones secundarias conflictivas. Como alternativa, puede usarse otro de los procesos descritos anteriormente, donde el sustituyente no interfiere. Los ejemplos de grupos protectores adecuados y procesos para su adición y retirada pueden encontrarse en el libro de texto "Protective Groups in Organic Synthesis" de T. W. Green, John Wiley y Sons, 1981. Por ejemplo, los grupos protectores adecuados para aminas son formilo o acetilo.

Los siguientes ejemplos se prepararon usando los procesos de preparación general resumidos anteriormente; los ejemplos marcados con un asterisco (*) no forman parte de la invención y se incluyen para propósitos ilustrativos.

Ejemplo 1 N-[4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil]-4-ciano-1-bencenosulfonamida* a)N-(4-bromo-2-metoxifenil)carbamato de terc-butilo

Una mezcla de 4-bromo-2-metoxianilina (34,0 g, 0,17 mol) y dicarbonato de di-terc-butilo (44,5 g, 0,20 mol) en tetrahidrofurano (350 ml) se calentó a reflujo durante 22 h. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y el disolvente se retiró a presión reducida. El residuo se disolvió en acetato de etilo (350 ml) y se lavó con ácido cítrico 1 N (200 ml), se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó, dando N-(4-bromo-2-metoxifenil)carbamato de terc-butilo en forma de un aceite amarillo (puro al 80%, 57,10 g, 0,15 mol): ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 8,01 (s, 1H), 7,63 (d, 1H), 7,17 (d, 1H), 7,07 (dd, 1H), 3,82 (s, 3H), 1,45 (s, 9H); TLC (n-heptano/acetato de etilo = 2:1) R_{f} 0,67.

b)N-[2-metoxi-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil]-carbamato de terc-butilo

Una mezcla de N-(4-bromo-2-metoxifenil)carbamato de terc-butilo (puro al 80%) (6,25 g, 16,56 mmol), éster pinacol diboro (5,05 g, 19,88 mmol), [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) complejo con diclorometano (1:1) (0,41 g, 0,50 mmol) y acetato potásico (4,88 g, 49,80 mmol) en N,N-dimetilformamida (100 ml) se calentó a 80ºC en una atmósfera de nitrógeno durante una noche. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y después la mayor parte del disolvente se retiró a presión reducida. Al residuo se le añadió diclorometano (100 ml) y los sólidos resultantes se retiraron por filtración a través de una capa de celite. El filtrado se concentró, dejando un aceite oscuro que se purificó por cromatografía ultrarrápida en columna sobre sílice usando diclorometano/n-heptano (1:2) con trietilamina al 2,5% como fase móvil, dando N-[2-metoxi-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil]carbamato de terc-butilo en forma de sólidos blancos (puro al 65%, 4,25 g, 7,92 mmol): ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 7,93 (s, 1H), 7,83 (d, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,16 (s, 1H), 3,83 (s, 3H), 1,46 (s, 9H), 1,30 (s, 12H); RP-HPLC (Hypersil C18, 5 \mum, 200 A, 25 cm; acetonitrilo al 50%-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) R_{f} 18,28 min.

c)N-[4-(4-Cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxi-fenil]carbamato de terc-butilo

Una mezcla de agua (25 ml) y N-[2-metoxi-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil]carbamato de terc-butilo (puro al 65%) (4,25 g, 7,92 mmol) se congeló y se sometió a vacío seguido de rellenado con nitrógeno mientras se descongelaba. Se añadieron 4-cloro-7-ciclopentil-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (1,83 g, 5,28 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (0,37 g, 0,32 mmol), carbonato sódico (1,40 g, 13,20 mmol) y éter dimetílico de etilenglicol (50 ml) y la mezcla resultante se calentó a 80ºC en una atmósfera de nitrógeno durante una noche. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y el disolvente se retiró a presión reducida, dando un residuo que se repartió entre agua y acetato de etilo. La capa orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo de nuevo dos veces con acetato de etilo. Los extractos de acetato de etilo combinados se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron, dando un aceite oscuro que se purificó por cromatografía ultrarrápida en columna sobre sílice usando n-heptano/acetato de etilo (3:1) con trietilamina al 2% como fase móvil. Las fracciones apropiadas se recogieron, se combinaron y se concentraron, dando N-[4-(4-cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil]carbamato de terc-butilo en forma de sólidos blancos (1,90 g, 4,29 mmol): ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 8,65 (s, 1H), 7,94 (s, 2H), 7,74 (d, 1H), 7,19 (d, 1H), 7,07 (dd, 1H), 5,22 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 2,19 (m, 2H), 1,99 (m, 2H), 1,91 (m, 2H), 1,73 (m, 2H), 1,48 (s, 9H); TLC (n-heptano/acetato de etilo = 1:1) R_{f} 0,58.

d) 4-(4-cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxianilina

A una solución de N-[4-(4-cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil]carbamato de terc-butilo (0,58 g, 1,31 mmol) se le añadió gota a gota ácido trifluoroacético (2 ml) en diclorometano (20 ml) a 0ºC. El baño de hielo se retiró y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mayor parte del ácido trifluoroacético y del diclorometano se retiraron a presión reducida. El residuo se redisolvió en diclorometano y se lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó, dando 4-(4-cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxianilina en forma de sólidos blancos (0,45 g, 1,31 mmol): ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 8,61 (s, 1H), 7,78 (s, 1H), 6,97 (d, 1H), 6,85 (dd, 1H), 6,67 (d, 1H), 5,20 (m, 1H), 4,78 (ancho, 2H), 3,81 (s, 3H), 2,18 (m, 2H), 1,88-2,00 (m, 4H), 1,72 (m, 2H); MH^{+} 343.

e) 5-(4-Amino-3-metoxifenil)-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina

Se calentó una mezcla de 4-(4-cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxianilina (0,45 g, 1,31 mmol), amoniaco (15 ml, SG 0,88) y 1,4-dioxano (15 ml) y se agitó a 120ºC en un recipiente a presión durante una noche. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y el disolvente se retiró a presión reducida, dando un residuo que se repartió entre agua y acetato de etilo. La capa orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo de nuevo dos veces con acetato de etilo. Los extractos de acetato de etilo combinados se lavaron con una solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó, dando 5-{4-amino-3-metoxifenil)-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina en forma de sólidos pardos (0,32 g, 0,99 mmol): ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 8,09 (s, 1H), 7,24 (s, 1H), 6,88 (d, 1H), 6,79 (dd, 1H), 6,71 (d, 1H), 6,01 (ancho, 2H), 5,06 (m, 1H), 4,79 (ancho, 2H), 3,81 (s, 3H), 2,10 (m, 2H), 1,87-1,92 (m, 4H), 1,68 (m, 2H); MH^{+} 324.

f)N-[4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil)-4-ciano-1-bencenosulfonamida

Una mezcla de 5-(4-amino-3-metoxifenil)-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (0,026 g, 0,08 mmol), cloruro de 4-cianobencenosulfonilo (0,019 g, 0,10 mmol) y piridina (0,40 ml) se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mayor parte de la piridina se retiró a presión reducida y el residuo se purificó por RP-HPLC preparativa (Rainin C18, 8 \mum, 300 A, 25 cm; acetonitrilo al 25%-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 21 ml/min), dando N-[4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxi-fenil]-4-ciano-1-bencenosulfonamida en forma de un sólido amarillo (0,018 g, 0,04 mmol): ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 9,91 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 8,05 (d, 2H), 7,89 (d, 2H), 7,44 (s, 1H), 7,27 (d, 1H), 7,00 (dd, 1H), 6,98 (d, 1H), 6,07 (ancho, 2H), 5,07 (m, 1H), 3,49 (s, 3H), 2,11 (m, 2H), 1,88 (m, 4H), 1,69 (m, 2H); MH^{+} 489; TLC (acetato de etilo/metanol = 9:1) R_{f} 0,49; RP-HPLC (Hypersil C18, 5 \mum, 200 A, 25 cm; acetonitrilo al 25%-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) R_{t} 14,65 min.

Ejemplo 2 N-[4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil]-4-(trifluorometil)-1-bencenosulfonamida

El Ejemplo 2 se sintetizó usando el mismo procedimiento que para N-[4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[23-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil]-4-ciano-1-bencenosulfonamida.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 9,90 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,96 (s, 4H), 7,55 (m, 1H), 7,29 (d, 2H), 7,01 (m, 2H), 5,09 (m, 1H), 3,49 (s, 3H), 2,10 (m, 2H), 1,90 (m, 4H), 1,69 (m, 2H); MH^{+} 530; TLC (acetato de etilo/metanol = 9:1) R_{f} 0,64; RP-HPLC (Hypersil C18, 5 \mum, 200 A, 25 cm; acetonitrilo al 25%-98%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) R_{t} 17,78 min.

Ejemplo 3 N-[4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil]-4-(trifluorometoxil)-1-bencenosulfonamida*

El Ejemplo 3 se sintetizó usando el mismo procedimiento que para N-[4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil]-4-ciano-1-bencenosulfonamida.

^{1}H RMN (CDCl_{3}, 400 MHz) \delta 8,30 (s, 1H), 7,86 (d, 2H), 7,59 (d, 1H), 7,27 (d, 2H), 7,13 (ancho, 1H), 7,05 (dd, 1H), 7,00 (s, 1H), 6,86 (d, 1H), 5,26 (s, 2H), 5,19 (m, 1H), 3,68 (s, 3H), 2,26 (m, 2H), 1,89 (m, 4H), 1,79 (m, 2H); MH^{+} 548; TLC (acetato de etilo) R_{f} 0,34; RP-HPLC (Hypersil C18, 5 \mum, 200 A, 25 cm; acetonitrilo al 25%-98%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) R_{t} 18,18 min.

Ejemplo 4 N-[4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil]-2-piridinasulfonamida*

a) Se preparó cloruro de 2-piridinsulfonilo como se describe en Heterocicles, 1989, 28, 1115. Se burbujeó gas cloro en la solución de 2-piridinatiol (2,00 g, 17,99 mmol) en ácido clorhídrico concentrado (30 ml) a 0ºC durante 3 h. La mezcla de reacción se vertió en agua enfriada con hielo (40 ml) y el precipitado resultante se recogió por filtración. El precipitado se lavó de nuevo con agua enfriada con hielo y después se secó sobre pentóxido de fósforo al vacío a 0ºC durante 2 h, proporcionando cloruro de 2-piridinasulfonilo en forma de sólidos blancos (2,00 g, 11,26 mmol).

b) N2-[4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil]-2-piridinasulfonamida. Una mezcla de 5-(4-amino-3-metoxifenil)-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (0,040 g, 0,12 mmol), cloruro de 2-piridinasulfonilo (0,026 g, 0,15 mmol) y piridina (0,40 ml) se agitó a 0ºC durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó con éter y la solución resultante se lavó sucesivamente con ácido clorhídrico 2 N, agua y una solución acuosa saturada de cloruro sódico. La capa orgánica se concentró, dejando un residuo que se purificó por RP-HPLC preparativa (Rainin C18,8 mm, 300 A, 25 cm; acetonitrilo al 25%-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 21 ml/min), dando N2-[4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil]-2-piridinasulfonamida en forma de un sólido blanco (0,022 g, 0,05 mmol): ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 400 MHz) \delta 8,71 (d, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,01 (d, 1H), 7,87 (m, 1H), 7,64 (d, 1H), 7,47 (m, 1H), 7,41 (m, 1H), 6,99 (m, 2H), 6,87 (s, 1H), 5,19 (m, 1H), 5,07 (s, 2H), 3,79 (s, 3H), 2,23 (m, 2H), 1,76-1,88 (m, 4H), 1,63 (m, 2H); MH^{+} 465; RP-HPLC (Hypersil C18, 5 \mum, 200 A, 25 cm; acetonitrilo al 25%-98%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) R_{f} 12,65 min.

Ejemplo 5 N3-[4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil]-3-piridinasulfonamida*

a) Se preparó cloruro de 3-piridinsulfonilo como se describe en J. Heterocyclo. Chem. 1992, 29, 61. Una mezcla de ácido 3-piridinasulfónico (1,45 g, 9,01 mmol) y pentacloruro de fósforo (2,00 g, 9,62 mmol) se calentó a 110ºC durante 3 h. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y se destiló (p.e. 60-65ºC) a presión reducida (0,1 mm de Hg), proporcionando cloruro de 3-piridinasulfonilo en forma de sólidos blancos (1,12 g, 6,31 mmol) que se usaron directamente sin purificación adicional.

b) N3-[4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil]-3-piridinasulfonamida. Una mezcla de 5-(4-amino-3-metoxifenil)-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (0,040 g, 0,12 mmol), cloruro de 3-piridinasulfonilo (0,030 g, 0,17 mmol) y piridina (0,40 ml) se agitó a 0ºC durante 0,5 h. A la mezcla de reacción se le añadió agua seguido de la retirada de la mayor parte de la piridina y el agua a presión reducida. El residuo se purificó por RP-HPLC preparativa (Rainin C18, 8 \mum, 300 A, 25 cm; acetonitrilo al 25%-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 21 ml/min), dando N3-[4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil)-3-piridinasulfonamida en forma de sólidos blancos (0,020 g, 0,04 mmol): ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 400 MHz) \delta 8,97 (d, 1H), 8,76 (d, 1H), 8,29 (s, 1H), 8,10 (dd, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,40 (m, 1H), 7,05 (d, 1H), 7,00 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 5,31 (ancho, 2H), 5,20 (m, 1H), 3,68 (s, 3H), 2,26 (m, 2H), 1,80-2,00 (m, 6H); MH^{+} 465; RP-HPLC (Hypersil C18, 5 \mum, 200 A, 25 cm; acetonitrilo al 25%-98%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) R_{f} 12,23 min.

Ejemplo 6 N-[5-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-(trifluorometil)fenil]-1-bencenosulfonamida* a)N-[4-bromo-2-(trifluorometil)fenil]-1-bencenosulfonamida

Se añadió gota a gota cloruro de bencenosulfonilo (1,06 g, 6,00 mmol) a una solución en agitación de 4-bromo-2-(trifluorometil)-anilina (1,20 g, 5,00 mmol) y piridina (1,98 g, 25,0 mmol) en diclorometano (10 ml) a 0ºC en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas. La mezcla se diluyó con acetato de etilo (35 ml), después se lavó con agua (3 x 10 ml), ácido cítrico 2 N (3 x 10 ml) y salmuera (10 ml) y después se evaporó al vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida en columna sobre gel de sílice usando 3:2 de heptano:cloruro de metileno como eluyente, dando N-[4-bromo-2-(trifluorometil)fenil]-1-bencenosulfonamida (1,3 g) en forma de un sólido blanco. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 10,10 (1H, s), 7,60-8,16 (7H, m), 6,9 (1H, dd); t_{R} = 24,27 min (RP-HPLC, acetonitrilo al 5-100%-TFA al 0,1%, 30 min).

b)N-[5-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-(trifluorometil)fenil)-1-bencenosulfonamida

Una mezcla de N-[4-bromo-2-(trifluorometil)fenil]-1-bencenosulfonamida (0,5 g, 1,31 mmol), bis(pinacolato)diboro (0,402 g, 1,58 mmol), acetato potásico (0,387 g, 3,95 mmol) y [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) (32 mg, 0,040 mmol) en DMF (10 ml) se calentó en una atmósfera de nitrógeno a 100ºC durante 17 horas. La mezcla se enfrió, se añadió [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) (32 mg, 0,040 mmol) y después el calentamiento a 100ºC se continuó durante 24 horas más. Después, el disolvente se retiró al vacío y el residuo se trituró con 25 ml de 4:1 de heptano:cloruro de metileno y los sólidos se retiraron por filtración a través de una capa de celite. La retirada del disolvente al vacío dio como resultado un residuo gomoso (0,42 g) que (123 mg, 0,28 mmol) se añadió a una mezcla de 1,2-dimetoxietano (2,5 ml) y agua (1,25 ml). A la mezcla se le añadieron carbonato sódico (39 mg, 0,36 mmol), 4-cloro-7-ciclopentil-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (50 mg, 0,144 mmol) y tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (9,0 mg, 0,008 mol) y después se calentó a reflujo en una atmósfera de nitrógeno durante 16 horas, se enfrió y el disolvente se retiró al vacío. El residuo se repartió entre acetato de etilo (10 ml) y agua (6 ml). La fase acuosa se separó y se lavó con acetato de etilo (10 ml). Los extractos orgánicos combinados se evaporaron, el residuo se disolvió en 1,4-dioxano (5 ml) e hidróxido amónico acuoso concentrado (5 ml) y después se calentó a 120ºC en un tubo cerrado herméticamente durante 16 horas. Los disolventes se retiraron al vacío y la purificación por MPLC en fase inversa usando una columna C18 y acetonitrilo al 25-75%-TFA al 0,1%, 25 min como eluyente seguido de liofilización proporcionaron N-[5-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-(trifluorometil)fenil]-1-bencenosulfonamida (9 mg) en forma de un sólido amorfo castaño. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 10,05 (1H, s a), 8,38 (1H,s), 7,57-7,87 (10H, m), 7,09 (1H, d), 5,11 (1H, m), 2,14 (2H, m), 1,95 (4H, m), 1,7(2H, m); MS de baja resolución, m/e (MH^{+}), 502; t_{R} = 16,78 min (RP-HPLC, acetonitrilo al 25-100%-TFA al 0,1%,
25 min).

Ejemplo 7 N-[4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fenil-fenil]-1-bencenosulfonamida* a) 2-Amino-5-bromobifenilo

Se añadió en porciones 2,4,4,6-tetrabromo-2,5-ciclohexadien-1-ona (12,1 g, 29,55 mmol) a una solución de 2-aminobifenilo (5,0 g, 29,55 mmol) en cloruro de metileno (65 ml) mientras se mantenía la temperatura entre -5ºC y -10ºC. La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 20 horas. La solución se extrajo dos veces con hidróxido sódico 1 N (1 x 50 ml, 1 x 20 ml), después se secó sobre MgSO_{4}, se trató con carbono activado, se filtró a través de celite y se evaporó, dando 2-amino-5-bromobifenilo (7,2 g) en forma de un aceite negro que solidificó tras un periodo de reposo. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 7,36-7,48 (5H, m), 7,2 (1H, dd), 7,08 (1H, d), 6,7 (1H, d), 4,95 (2H, s a); MS de baja resolución m/e 249 (MH^{+}); t_{R} = 16,03 min (RP-HPLC, acetonitrilo al 25-100%-TFA al 0,1%, 25 min); ^{13}C RMN (DMSO-d_{6}, 100 MHz) \delta 144,5, 138,2, 131,9, 130,6, 128,8, 128,5, 127,7, 127,3, 117,1, 107,1.

b) 1-(4-Bromo-2-fenil-fenil)-1-bencenosulfonamida

Se añadió gota a gota cloruro de bencenosulfonilo (1,71 g, 9,67 mmol) en una atmósfera de nitrógeno a una solución en agitación de 2-amino-5-bromo-bifenilo (2,0 g, 8,06 mmol) y piridina (3,19 g, 40,3 mmol) en cloruro de metileno (20 ml) a <0ºC. La mezcla se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas. Después, la mezcla se diluyó con acetato de etilo (75 ml) y se lavó con agua (3 x 15 ml), ácido cítrico acuoso 2 N (3 x 15 ml) y salmuera (15 ml), se secó sobre MgSO_{4}, se trató con carbono y se filtró a través de celite. La evaporación del disolvente al vacío proporcionó N-(4-bromo-2-fenilbenceno)-1-bencenosulfonamida (2,9 g) en forma de un sólido pardo. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 9,62 (1H, s), 7,34-8,07 (10H, m), 7,19 (2H, m), 7,01 (1H, d); MS de baja resolución m/e 388 (MH^{+}); t_{R} = 21,2 min (RP-HPLC, acetonitrilo al 25-100%-TFA al 0,1%, 25 min).

c)N-[2-fenil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-fenil]-1-bencenosulfonamida

Una mezcla de la N-(4-bromo-2-fenilbenceno)-1-bencenosulfonamida (0,388 g, 1,00 mmol), bis(pinacolato)diboro (0,305 g, 1,20 mmol), acetato potásico (0,294 g, 3,00 mmol) y [1,1'-bis(difenilfosfino) ferroceno]dicloropaladio (II) (25 mg, 0,030 mmol) en DMF (10 ml) se calentó en una atmósfera de nitrógeno a 100ºC durante 16,5 horas. La DMF se evaporó al vacío y el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice usando cloruro de 7:3 de metileno/heptano más trietilamina al 2%, proporcionando N-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,2,3-dioxaborolan-2-il)-2-fenilbenceno]-1-bencenosulfonamida (0,135 g) en forma de un aceite. t_{R} = 23,13 min (RP-HPLC, acetonitrilo al 25-100%-TFA al 0,1%, 25 min); MS de baja resolución m/e 434 (M-H^{+}).

d)N-[4-(4-Cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fenil-fenil]-1-bencenosulfonamida

Una mezcla de carbonato sódico (57 mg, 0,54 mmol), 4-cloro-7-ciclopentil-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (75 mg, 0,216 mmol), N-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-2-fenilbenceno]-1-bencenosulfonamida (135 mg, 0,269 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (12,5 mg, 0,0108 mmol), agua (1,25 ml) y DME (2,5 ml) se calentó a reflujo en una atmósfera de nitrógeno durante 16 horas, se enfrió y el disolvente se retiró al vacío. El residuo se repartió entre acetato de etilo (10 ml) y agua (5 ml). La capa orgánica se evaporó y el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice, dando N-[4-(2-benceno-4-cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-fenil]-1-bencenosulfonamida (55 mg) en forma de un sólido castaño. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 9,56 (1H, s), 8,65 (1H, s), 8,03 (1H, s), 7,3-7,65 (12H, m), 7,08 (1H, d), 5,21 (1H, m), 2,17 (2H, m), 1,92 (4H, m), 1,71 (2H, m); t_{R} = 23,77 min (RP-HPLC, acetonitrilo al 25-100%-TFA al 0,1%, 25 min).

e)N-[4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fenil-fenil]-1-bencenosulfonamida

Una mezcla de la N-[4-(2-benceno-4-cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-fenil]-1-bencenosulfonamida (55 mg, 0,104 mmol), hidróxido amónico acuoso concentrado (5 ml) y 1,4-dioxano (5 ml) se calentó a 120ºC en un tubo cerrado herméticamente durante 16 horas. La solución se enfrió a temperatura ambiente y el disolvente se retiró al vacío. La purificación por MPLC usando una columna C18 y acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 N, 25 min como eluyente seguido de liofilización proporcionó N-[4-(4-amino-2-benceno-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-fenil]-1-bencenosulfonamida (14 mg) en forma de un sólido castaño. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 9,56 (1H, s), 8,13 (1H, s), 7,31-7,65 (13H, m), 7,1 (1H, d), 6,08 (2H, s), 5,07 (1H, m), 2,08 (2H, m), 1,9 (4H, m), 1,67 (2H, m); MS de baja resolución m/e 510 (MH^{+}); t_{R} = 19,22 min (RP-HPLC, acetonitrilo al 25-100%-0, amonio acetato 1 N, 25 min).

Ejemplo 8 7-Ciclopentil-5-[1-(fenilsulfonil)-2,3-dihidro-1H-5-indolil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina* a) 5-Bromo-1-(fenilsulfonil)indolina

Se añadió gota a gota cloruro de bencenosulfonilo (1,85 g, 10,53 mmol) en una atmósfera de nitrógeno a una solución agitada de 5-bromoindolina (2,0 g, 8,77 mmol) y piridina (3,47 g, 43,9 mmol) en cloruro de metileno (30 ml) a <0ºC. La mezcla se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas. Después, la mezcla se diluyó con cloruro de metileno (30 ml) y se lavó con ácido cítrico acuoso 2 N (3 x 20 ml) y salmuera (20 ml), se secó sobre MgSO_{4}, se trató con carbono y se filtró a través de celite. La evaporación del disolvente al vacío proporcionó 5-bromo-1-(fenilsulfonil)indolina (3,2 g). ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 7,83 (2H, d), 7,68 (1H, t), 7,61 (2H, t), 7,31-7,43 (3H, m), 3,93 (2H, t), 2,92 (2H, t); t_{R} = 19,30 min (RP-HPLC, acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 N, 25 min).

b) 1-(Fenilsulfonil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)indolina

Una mezcla de la 5-bromo-1-(fenilsulfonil)indolina (1,0 g, 3,07 mmol), bis(pinacolato)diboro (0,935 g, 3,68 mmol), acetato potásico (0,902 g, 9,202 mmol) y [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) (88 mg, 0,092 mmol) en DMF (20 ml) se calentó en una atmósfera de nitrógeno a 100ºC durante 16 horas. La DMF se evaporó al vacío y el residuo se trituró con tolueno (20 ml) y después los sólidos se retiraron por filtración a través de celite. El filtrado se lavó con agua (3 x 15 ml), después se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se evaporó hasta un residuo que se usó bruto en la siguiente etapa. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 7,83 (2H, d), 7,43-7,68 (6H, m), 3,94 (2H, t), 2,94 (2H, t), 1,26 (12H, s); t_{R} = 21,23 min (RP-HPLC, acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 N, 25 min.

c) 7-Ciclopentil-5-[1-(fenilsulfonil)-23-dihidro-1H-5-indolil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina

Una mezcla de carbonato sódico (92 mg, 0,087 mmol), 4-cloro-7-ciclopentil-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirrolidina (100 mg, 0,288 mmol), 1-(fenilsulfonil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)indolina (200 mg, 0,431 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (17 mg, 0,0144 mmol), agua (3 ml) y DME (6 ml) se calentó a reflujo en una atmósfera de nitrógeno durante 16 horas, se enfrió y el disolvente se retiró al vacío. El residuo se repartió entre acetato de etilo (10 ml) y agua (5 ml). La capa orgánica se evaporó y el residuo se disolvió en 1,4-dioxano (6 ml) e hidróxido amónico acuoso concentrado (6 ml) y después se calentó a 120ºC en un tubo cerrado herméticamente durante 16 horas. La solución se enfrió y el disolvente se retiró al vacío. La purificación por MPLC en fase inversa usando una columna C18 y acetonitrilo al 25-75%-acetato amónico 0,1 N, 25 min como eluyente seguido de liofilización dio 7-ciclopentil-5-[1-(fenilsulfonil)-23-dihidro-1H-5-indolil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (23 mg) en forma de un sólido castaño. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 8,11 (1H, d), 7,85 (2H, d), 7,70 (1H, t), 7,54-7,61 (3H, m), 7,25-7,33 (3H, m), 6,0 (2H, s), 5,06 (1H, m), 3,96 (2H, t), 2,95 (2H, t), 2,11 (2H, m), 1,90 (4 H, m), 1,67 (2H,m); t_{R} = 16,37 min (RP-HPLC, acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 N, 25 min).

Ejemplo 9 N-[4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil]-N-metil-1-bencenosulfonamida a)N-(4-Bromo-2-clorofenil)-1-bencenosulfonamida

Se añadió gota a gota cloruro de bencenosulfonilo (2,11 g, 12,0 mmol) en una atmósfera de nitrógeno a una solución en agitación de 4-bromo-2-cloroanilina (2,06 g, 10,0 mmol), piridina (3,95 g, 50 mmol) y cloruro de metileno (15 ml). La mezcla se agitó durante 3 horas, después se diluyó con acetato de etilo (75 ml) y se lavó con agua (3 x 20 ml) y salmuera (20 ml) y después se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se evaporó, dando 3,2 g (92%) de N-(4-bromo-2-clorofenil)-1-bencenosulfonamida en forma de un sólido naranja. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 10,10 (1H, s), 7,7 (2H, d), 7,53-7,65 (4H, m), 7,46 (1H, d), 7,18 (1H, d); ^{13}C RMN (DMSO-d_{6}, 100 MHz) \delta 140,0, 131,1, 133,0, 132,0, 130,8, 130,3, 129,2, 128,8, 126,6, 119,0; MS de baja resolución m/e 346 (M-H^{+}).

b)N-(4-Bromo-2-clorofenil)-N-metil-1-bencenosulfonamida

Se añadió la N-(4-bromo-2-clorofenil)-1-bencenosulfonamida (1,0 g, 2,89 mmol) en DMF (8 ml) en una atmósfera de nitrógeno a una mezcla de hidruro sódico (0,14 g de una dispersión al 60% en aceite mineral, 3,47 mmol) en DMF (7 ml) a 0ºC. Después, la mezcla se trató con yodometano (0,452 g, 3,18 mmol) mientras se mantenía la temperatura a <0ºC. La mezcla se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 16 horas y después se añadió agua (100 ml). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 ml) y las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua (3 x 20 ml), se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se evaporaron, dando N-(4-bromo-2-clorofenil)-N-metil-1-bencenosulfonamida (0,55 g). ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 7,87 (1H, s), 7,55-7,80 (6H, m), 7,00 (1H, d), 3,11 (3H, s); t_{R} = 19,58 min (RP-HPLC, acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 N, 25 min).

c)N-[2-Cloro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil]-N-metil-1-bencenosulfonamida

Una mezcla de la N-(4-bromo-2-clorofenil)-N-metil-1-bencenosulfonamida (0,5 g, 1,389 mmol), bis(pinacolato)diboro (0,423 g, 1,66 mmol), acetato potásico (0,408 g, 4,167 mmol) y [1,1'-bis(difenilfosfino) ferroceno]dicloropaladio (II) (34 mg, 0,042 mmol) en DMF (20 ml) se calentó en una atmósfera de nitrógeno a 100ºC durante 16 horas. La DMF se evaporó al vacío y el residuo se trituró con tolueno (15 ml) y después se filtró a través de celite, dando N-[2-cloro-4-{4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil]-N-metil-1-bencenosulfonamida (0,25 g) en forma de un aceite oscuro que se usó bruto en la siguiente etapa. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 7,93 (2H, d), 7,57-7,75 (5H, m), 7,07 (1H, d), 3,12 (3H, s), 1,29 (12H, s).

d)N-[4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil]-N-metil-1-bencenosulfonamida

Una mezcla de carbonato sódico (92 mg, 0,087 mmol), 4-cloro-7-ciclopentil-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (100 mg, 0,288 mmol), N-[2-cloro-4,4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil]-N-metil-1-bencenosulfonamida (244 mg (pura al 72% en peso), 0,432 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (17 mg, 0,0144 mmol), agua (3 ml) y DME (6 ml) se calentó a reflujo en una atmósfera de nitrógeno durante 16 horas, se enfrió y el disolvente se retiró al vacío. El residuo se repartió entre acetato de etilo (20 ml) y agua (10 ml). La capa orgánica se evaporó, el residuo se disolvió en 1,4-dioxano (7 ml) y hidróxido amónico acuoso concentrado (7 ml) y después se calentó a 120ºC en un tubo cerrado herméticamente durante 16 horas. La solución se enfrió y el disolvente se retiró al vacío. La purificación por MPLC en fase inversa usando una columna C18 y acetonitrilo al 25-75%-acetato amónico 0,1 N, 25 min como eluyente seguido de liofilización dio N-[4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil]-N-metil-1-bencenosulfonamida (20 mg) en forma de un sólido castaño. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 8,15 (1H, s), 7,74-7,80 (3H, m), 7,64-7,66 (2H, m), 7,60 (1H, s), 7,39 (1H, d), 7,08 (1H, d), 6,20 (2H, s), 3,16 (3H, s), 2,14 (2H, m), 1,91 (4H, m), 1,69 (2H, m); MS de baja resolución m/e 481 (M-H); t_{R} = 22,45 min (RP-HPLC, acetonitrilo al 25-75%-acetato amónico 0,1 N, 25 min).

Ejemplo 10 N-[5-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-piridil]-1-bencenosulfonamida* a)N-(5-bromo-2-piridil)carbamato de terc-butilo

Una mezcla de 5-bromo-2-piridinamina (4,0 g, 23,1 mmol) y dicarbonato de di-terc-butilo (6,31 g, 28,9 mmol) en tetrahidrofurano (50 ml) se calentó a reflujo durante 20 horas. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y el disolvente se retiró a presión reducida. Se añadieron cloruro de metileno (30 ml) y acetato de etilo (30 ml) y la mezcla se extrajo con bicarbonato sódico acuoso saturado (25 ml). La capa orgánica se evaporó al vacío y se purificó aproximadamente un cuarto del residuo por cromatografía ultrarrápida en columna sobre gel de sílice usando 95:5 de n-heptano/acetato de etilo como eluyente, dando N-(5-bromo-2-piridil)carbamato de terc-butilo (0,61 g) en forma de un aceite. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 9,96 (1H,s), 8,34 (1H, d), 7,93 (1H, dd), 7,77 (1H, d), 1,47 (9H, s).

b)N-[5-(1,1,1-Trimetilestanil)-2-piridil]carbamato de terc-butilo

Una mezcla de N-(5-bromo-2-piridil)carbamato de terc-butilo (0,5 g, 1,83 mmol), hexametildiestaño (0,6 g, 1,832 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (130 mg, 0,107 mmol) y dimetoxietano (10 ml) se calentó a 80ºC en una atmósfera de nitrógeno durante 15 horas. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y después el disolvente se retiró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida en columna sobre sílice usando heptano/acetato de etilo (95:5 como eluyente, dando N-[5-(1,1,1-trimetilestanil)-2-piridil]carbamato de terc-butilo (242 mg) en forma de un aceite: ^{1}H RMN (DMSO-d_{6} 400 MHz) \delta 9,31 (1H, s), 8,15 (1H, s), 7,65-7,72 (2H, m), 1,44 (9H, s), 0,24 (9H, s); MS de baja resolución m/e 481.

c)N-[5-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-piridil]carbamato de terc-butilo

Una mezcla de N-[5-(1,1,1-trimetilestanil)-2-piridil]carbamato de terc-butilo (230 mg, 0,644 mmol), 4-cloro-7-ciclopentil-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (225 mg, 0,644 mmol), tris(dibencilidenoacetona)dipaladio (0) (30 mg, 0,0322 mmol), trifenilarsina (50 mg, 0,161 mmol) y DMF (8 ml) se calentó a 80ºC en una atmósfera de nitrógeno durante 18 horas. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y el disolvente se retiró a presión reducida, dando un residuo que se repartió entre agua (5 ml) y acetato de etilo (20 ml). La capa orgánica se separó y la capa orgánica se extrajo de nuevo con agua (5 ml) y salmuera (5 ml), se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se evaporó, dando un residuo que se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice usando heptano/acetato de etilo (8:2) como eluyente, dando N-[5-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-piridil]carbamato de terc-butilo (170 mg) en forma de un sólido castaño.; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 9,66 (1H, s), 8,58 (1H, s), 8,35 (1H, s), 7,89 (1H, s), 7,82 (2H, m), 5,2 (1H, m), 2,16 (2H, m), 1,92 (4H, m), 1,71 (2H, m), 1,47 (9H, s).

d) 5-(4-Cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-piridinamina

Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (2 ml) a una solución de N-[5-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-piridil]carbamato de terc-butilo (165 mg, 0,4 mmol) en diclorometano (7 ml) a 0ºC. El baño de hielo se retiró y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 h. Los disolventes se retiraron al vacío y después el residuo se redisolvió en acetato de etilo (55 ml) y se lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (10 ml), se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó, dando 5-(4-cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-piridinamina (133 mg): ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 8,63 (1H, s), 8,05 (1H, dd), 7,86 (1H, d), 7,55 (1H, d), 6,52 (1H, d), 6,06 (2H, s a), 5,20 (2H, m), 2,16 (2H, m), 1,97 ( 4H, m), 1,72 (2H, m); MS de baja resolución, m/e (MH^{+}) 314.

e)N-[5-(4-Cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-piridil]-1-bencenosulfonamida

Se añadió cloruro de bencenosulfonilo (366 mg, 2,07 mmol) en una atmósfera de nitrógeno a una solución agitada de la 5-(4-cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-piridinamina (125 mg, 0,4 mmol) y piridina (294 mg, 3,7 mmol) en cloruro de metileno (10 ml). La mezcla se calentó a 80ºC durante 20 horas en un tubo cerrado herméticamente. La mezcla se enfrió y los disolventes se evaporaron al vacío. El residuo se redisolvió en cloruro de metileno (50 ml) y se lavó con bicarbonato sódico saturado (15 ml), se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se evaporó hasta un residuo que se purificó por cromatografía ultrarrápida en columna sobre gel de sílice usando heptano/acetato de etilo como eluyente, dando N-[5-(4-cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-piridil]-1-bencenosulfonamida (90 mg) en forma de un sólido castaño. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 11,3 (1H, s a), 8,66 (1H, s), 8,2 (1H, s a), 7,89-7,99 (4H, m), 7,54-7,62 (3H, m), 7,2 (1H, s a), 5,2 (1H, m), 2,16 (2H, m), 1,92 (4H, m), 1,71 (2H, m); MS de baja resolución, m/e (MET) 454.

f)N-[5-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-piridil]-1-bencenosulfonamida

Una mezcla de la N-[5-(4-cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-piridil]-1-bencenosulfonamida (90 mg), hidróxido amónico acuoso concentrado (5 ml) y 1,4-dioxano (5 ml) se calentó a 120ºC en un tubo cerrado herméticamente durante 16 horas. La solución se enfrió a temperatura ambiente y el disolvente se retiró al vacío. La purificación por MPLC usando una columna C18 y acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 N,25 min como eluyente seguido de liofilización proporcionó N-[5-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-piridil]-1-bencenosulfonamida (20 mg) en forma de un sólido castaño. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 8,12 (1H, s), 8,08 (1H, s a), 7,92 (2H, d), 7,79 (2H, d), 7,60 (3H, m), 7,44 (1H, s), 7,23 (1H, d), 6,19 (2H, s a), 5,05 (1H, m), 2,10 (2H, m), 1,91 (4H, m), 1,67 (2H, m); MS de baja resolución m/e 435 (MH^{+}).

Ejemplo 11 N-[4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d)pirimidin-5-il)-2-clorofenil]-2-ciano-1-bencenosulfonamida a) 5-(4-Amino-3-clorofenil)-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina

El Ejemplo 11 se preparó usando el mismo procedimiento que para 5-(4-amino-3-metoxifenil)-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 8,10 (s, 1H), 7,29 (s, 2H), 7,12 (dd, 1H), 6,88 (d, 1H), 6,00 (ancho, 2H), 5,41 (s, 2H), 5,06 (m, 1H), 2,09 (m, 2H), 1,87 (m, 4H), 1,68 (m, 2H); MH^{+} 329; TLC (acetato de etilo) R_{f} 0,27; RP-HPLC (Hypersil C18, 5 \mum, 200 A, 25 cm; acetonitrilo al 25%-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) R_{t} 14,02 min.

b)N-[4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil]-2-ciano-1-bencenosulfonamida

Una mezcla de 5-(4-amino-3-clorofenil)-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (0,098 g, 0,30 mmol), cloruro de 2-cianobencenosulfonilo (0,072 g, 0,36 mmol) y piridina (0,98 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La mayor parte de la piridina se retiró a presión reducida y el residuo se purificó por RP-HPLC preparativa (Rainin C18, 8 mm, 300 A, 25 cm; acetonitrilo al 25%-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 21 ml/min), dando N-[4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil]-2-ciano-1-bencenosulfonamida en forma de un sólido blanco (0,025 g, 0,05 mmol): ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 400 MHz) \delta 8,31 (s, 1H), 8,17 (d, 1H), 7,70-7,82 (m, 5H), 7,44 (s, 1H), 7,40(dd, 1H), 7,00 (s, 1H), 5,27 (ancho, 2H), 5,00 (m, 1H), 2,23 (m, 2H), 1,79-1,90 (m, 6H); NH^{+} 493; TLC (acetato de etilo) R_{f} 0,30; RP-HPLC (Hypersil C18, 5 \mum, 200 A, 25 cm; acetonitrilo al 25%-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) R_{t} 15,27 min.

Ejemplo 12 N-[4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil]-3-ciano-1-bencenosulfonamida

El Ejemplo 12 se preparó usando el mismo procedimiento que para N-[4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil]-2-ciano-1-bencenosulfonamida (Ejemplo 11).

^{1}H RMN (CDCl_{3}, 400 MHz) \delta 8,30 (s, 1H), 8,07 (m, 2H), 7,86 (d, 1H), 7,73 (d, 1H), 7,65 (dd, 1H), 7,43 (s, 2H), 7,05 (s, 1H), 5,30 (ancho, 2H), 5,20 (m, 1H), 2,44 (m, 2H), 1,77-1,89 (m, 6H); MH^{+} 493; RP-HPLC
(Hypersil C18, 5 \mum, 200 A, 25 cm; acetonitrilo al 25%-98%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) R_{t} 15,52 min.

Ejemplo 13 N-[4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil]-3-piridinasulfonamida

El Ejemplo 13 se preparó usando el mismo procedimiento que para N-[4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil]-2-ciano-1-bencenosulfonamida I (Ejemplo 11).

^{1}H RMN (CDCl_{3}, 400 MHz) \delta 8,97 (s, 1H), 8,81 (dd, 1H), 8,33 (s, 1H), 8,13 (dd, 1H), 7,77 (d, 1H), 7,44 (m, 3H), 7,02 (s, 1H), 5,21 (m, 1H), 5,06 (ancho, 2H), 2,24 (m, 2H), 1,78-1,89 (m, 6H); MH^{+} 469; RP-HPLC (Hypersil C18, 5 \mum, 200 A, 25 cm; acetonitrilo al 25%-98%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) R_{t} 13,03 min.

Ejemplo 14 N-[4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil]-2-trifluorometil-1-bencenosulfonamida

El Ejemplo 14 se preparó usando el mismo procedimiento que para N-[4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil]-2-ciano-1-bencenosulfonamida (Ejemplo 11).

^{1}H RMN (CDCl_{3}, 400 MHz) \delta 8,33 (s, 1H), 8,09 (d, 1H), 7,92 (d, 1H), 7,72 (m, 2H), 7,64 (m, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,36 (d, 1H), 7,00 (s, 1H), 5,21 (múltiple, 1H), 5,01 (ancho, 2H), 2,25 (m, 2H), 1,77-1,91 (m, 6H); MH^{+} 536; RP-HPLC (Hypersil C18, 5 \mum, 200 A, 25 cm; acetonitrilo al 25%-98%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) R_{t} 18,15 min.

Ejemplo 15 N-[4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil]-3-trifluorometil-1-bencenosulfonamida

El Ejemplo 15 se preparó usando el mismo procedimiento que para N-[4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil]-2-ciano-1-bencenosulfonamida (Ejemplo 11).

^{1}H RMN (CDCl_{3}, 400 MHz) \delta 8,29 (s, 1H), 8,04 (d, 2H), 7,85 (d, 1H), 7,77 (d, 1H), 7,65 (m, 1H), 7,38 (m, 2H), 7,07 (s, 1H), 6,01 (ancho, 2H), 5,20 (m, 1H), 2,27 (m, 2H), 1,79-1,90 (m, 6H); MH^{+} 536; RP-HPLC (Hypersil C18, 5 \mum, 200 A, 25 cm; acetonitrilo al 25%-98%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) R, 18,43 min.

Ejemplo 16 N-4-[4-Amino-7-(3-hidroxiciclopentil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il]-2-clorofenil-1-bencenosulfonamida a) 4-(4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-ciclopenten-1-ol

Se desgasificó dimetilsulfóxido (3,5 ml) y después se agitó en una atmósfera de nitrógeno. El recipiente de reacción se protegió de la luz y después se añadieron 4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (570 mg, 2,03 mmol) y tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (0,05 g, 0,041 mmol). La mezcla se agitó durante 2 minutos y después se enfrió a 0ºC. Después, la mezcla se trató con el 2,4a-dihidro-1aH-ciclopenta[b]oxireno (200 mg, 2,44 mmol) que se disolvió en tetrahidrofurano (3,5 mi) y se añadió gota a gota durante aproximadamente 15 minutos. La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante tres horas, después se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 15 horas. Después, la mezcla se trató con una porción más de epóxido (85 mg, 1,04 mmol) y tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (0,025 g, 0,020 mmol) y la agitación se continuó durante 24 horas más. Después, la mezcla se repartió entre acetato de etilo (20 ml) y agua (20 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se lavó con cloruro de metileno (3 x 20 ml). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con agua (20 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se evaporaron. La purificación del residuo por MPLC en fase inversa usando una columna C18 y acetonitrilo al 25-50%-acetato amónico 0,1 N, 15 min como eluyente seguido de por evaporación del acetonitrilo y recolección de los sólidos resultantes por filtración proporcionó 4-(4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-ciclopenten-1-ol (365 mg) en forma de un sólido castaño. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 8,66 (1H, s), 7,87 (1H, s), 6,20 (1H, m), 5,93 (1H, m), 5,77 (1H, m), 5,27 (1H, d), 4,72 (1H, m), 2,89 (1H, m), 1,62 (1H, m); ^{13}C RMN (DMSO-d_{6}, 100 MHz) \delta 150,9, 150,4, 149,9, 139,7, 133,8, 130,9, 116,2, 73,5, 57,8, 52,2, 41,1; MS de baja resolución m/e 362 (MH^{+}).

b)N-2-Cloro-4-[4-cloro-7-(4-hidroxi-2-ciclopentenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il]fenil-1-bencenosulfonamida

Una mezcla de carbonato sódico (130 mg, 1,213 mmol), 4-(4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-ciclopenten-1-ol (175 mg, 0,485 mmol), N-[2-cloro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil]-1-bencenosulfonamida (475 mg, 0,727 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (30 mg, 0,024 mmol), agua (4 ml) y DME (8 ml) se calentó a reflujo en una atmósfera de nitrógeno durante 16 horas, se enfrió y el disolvente se retiró al vacío. El residuo se repartió entre acetato de etilo (20 ml) y agua (5 ml). La fase acuosa se lavó de nuevo con acetato de etilo (20 ml) y cloruro de metileno (2 x 20 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se evaporaron, dando un aceite que solidificó después de un periodo de reposo. La purificación por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice usando heptano/acetato de etilo (7:3) como eluyente proporcionó la N-2-cloro-4-[4-cloro-7-(4-hidroxi-2-ciclopentenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il]fenil-1-bencenosulfonamida (45 mg) en forma de un sólido castaño. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 10,06 (1H, s), 8,69 (1H, s), 7,29-7,80 (9H, m), 6,19 (1H, m), 5,96 (1H, m), 5,85 (1H, m), 5,22 (1H, d), 2,92 (1H, m), 1,68 (1H, m); MS de baja resolución m/e 501 (MH^{+}); t_{R} = 14,82 min (RP-HPLC, acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 N, 25 min).

c)N-[4-Amino-7-(4-hidroxi-2-ciclopentenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il]-2-clorofenil-1-bencenosulfonamida

La N-2-cloro-4-[4-cloro-7-(4-hidroxi-2-ciclopentenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il]fenil-1-bencenosulfonamida (45 mg) se disolvió en 1,4-dioxano (7 ml) y hidróxido amónico acuoso concentrado (7 ml) y después calentó a 120ºC en un tubo cerrado herméticamente durante 16 horas. La solución se enfrió y el disolvente se retiró al vacío, dando la N-[4-amino-7-(4-hidroxi-2-ciclopentenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il]-2-clorofenil-1-bencenosulfonamida que se usó sin purificación adicional en la siguiente etapa, MS de baja resolución m/e 482 (MH^{+}); t_{R} =10,75 min (RP-HPLC, acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 N, 25 min).

d)N-[4-Amino-7-(3-hidroxiciclopentil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il]-2-clorofenil-1-bencenosulfonamida

Una mezcla de alqueno (45 mg) y paladio al 10% sobre carbono (25 mg) se agitó en una atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente y a presión atmosférica durante 19 horas, después se filtró a través de un filtro de cartucho de 0,2 mm y el disolvente se retiró al vacío. La purificación por MPLC en fase inversa usando una columna C18 y acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 N, 25 min como eluyente seguido de liofilización proporcionó N-4-[4-amino-7-(3-hidroxiciclopentil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il]-2-clorofenil-1-bencenosulfonamida (20 mg) en forma de un sólido castaño. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 10,03 (1H, s a), 8,15 (1H, s), 7,77 (2H, d), 7,29-7,67 (7H, m), 6,12 (1H, s a), 5,14 (1H, m), 4,98 (1H, d), 4,23 (1H, d), 2,37 (1H, m), 2,02-2,12 (2H, m), 1,77 (3H, m); MS de baja resolución m/e 484(MH^{+}); t_{R} = 11,00 min (RP-HPLC, acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 N, 25 min).

Ejemplo 17 N-[4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil)carbamato de neopentilo*

Se añadió gota a gota cloroformiato de neopentilo (28 \mul, 0,186 mmol) a una solución en agitación de 5-(4-amino-3-metoxifenil)-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (50 mg, 0,155 mmol) en piridina (1 ml) y diclorometano (1 ml) en atmósfera de nitrógeno a 0ºC. Después de 10 minutos, el baño de agua enfriada con hielo se retiró y la mezcla resultante se agitó durante 4 horas. El disolvente se evaporó y el residuo se recogió en acetato de etilo. La capa orgánica se lavó, se secó y se evaporó. El sólido se purificó por TLC preparativa usando diclorometano/metanol (95:5) como fase móvil, dando N-[4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil]carbamato de neopentilo. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 1,00 (s 9H), 1,78 (m, 2H), 1,90 (m, 4H), 2,26 (m, 2H), 3,91 (s, 2H), 3,94 (s, 3H), 5,22 (m, 3H), 6,22 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 7,08 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,25 (s, 1H), 8,17 (d a, 1H), 8,32 (s, 1H); LC/MS (MH^{+} = 438).

Ejemplo 18 N-(4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil)carbamato de 3-piridilmetilo* a) (3-Piridilmetil)carbonato de 4-nitrofenilo

Se añadió gota a gota N-metilmorfolina (2,0 ml, 18,5 mmol) a una solución de cloroformiato de p-nitrofenilo (2,49 g, 12,3 mmol) en diclorometano (20 ml) con agitación en atmósfera de nitrógeno a 0ºC. Después de 20 minutos, el baño de agua enfriada con hielo se retiró y la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente. A la mezcla se le añadió 3-piridilcarbinol (1,0 ml, 10,3 mmol) y la solución resultante se agitó durante 30 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y se lavó con agua, bicarbonato sódico saturado y salmuera. La capa orgánica se secó (MgSO_{4}), se filtró y se evaporó, dando n sólido pardo oscuro. El sólido se recristalizó en acetato de etilo y heptano, dando (3-piridilmetil)carbonato de 4-nitrofenilo. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 5,32 (s, 2H), 7,38 (m, 3H), 7,79 (m 1H), 7,28 (m, 2H), 8,66 (d, J = 4 Hz, 1H), 8,72 (s, 1H).

b)N-[4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil]carbamato de 3-piridilmetilo

Se añadió (3-piridilmetil)carbonato de 4-nitrofenilo (111 mg, 0,405 mmol) a una solución de 5-(4-amino-3-metoxifenil)-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (79 mg, 0,244 mmol) en piridina (1 ml) seguido de una cantidad catalítica de N,N-dimetilpiridina. La mezcla resultante se agitó en atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente durante 2 días. El disolvente se evaporó y el residuo se recogió en acetato de etilo. La capa orgánica se lavó, se secó y se evaporó. El sólido se purificó por TLC preparativa usando diclorometano/metanol (95:5) como fase móvil, dando N-[4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil]carbamato de 3-piridilmetilo. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 1,78 (m, 2H), 1,90 (m, 4H), 2,26 (m, 2H), 3,91 (s, 3H), 5,25 (m, 5H), 6,98 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 7,09 (d, J = 8 Hz, 1H) 7,32 (m, 1H), 7,77 (d, J = 8 Hz, 1H), 8,20 (d a, 1H), 8,32 (s, 1H), 8,64 (m, 1H), 8,70 (s, 1H); LC/MS (MH^{+} = 459).

c) Clorhidrato de N-[4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil]carbamato de 3-piridilmetilo

Se disolvió N-[4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil]carbamato de 3-piridilmetilo (50 mg, 0,109 mmol) en acetato de etilo (3,0 ml). La mezcla se enfrió a 0ºC y se pasó a través de ella gas cloruro de hidrógeno durante medio minuto. Se formó inmediatamente un precipitado. El matraz se tapó y la solución se agitó durante 10 minutos más a 0ºC. El sólido se recogió por filtración, dando clorhidrato de N-[4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil]carbamato de 3-piridilmetilo. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta 1,72 (m, 2H), 1,93 (m, 4H), 2,16 (m, 2H), 3,87 (s, 3H), 5,15 (m, 1H), 5,26 (s, 1H), 7,06 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,14 (s, 1H), 7,64 (d, J = 5 Hz, 1H) 7,81 (m, 2H), 8,10 (d, J = 8 Hz, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,66 (d, J = 5 Hz, 1H), 8,78 (s, 1H), 8,87 (s, 1H); LC/MS (MH^{+} = 459).

Ejemplo 19 N-(4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil)carbamato de 3-clorociclohexilo*

Se añadió gota a gota 3-clorociclohexilcloroformiato (34 mg, 0,186 mmol) a una solución en agitación de 5-(4-amino-3-metoxifenil)-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (50 mg, 0,155 mmol) en piridina (1 ml) y diclorometano (1 ml) en atmósfera de nitrógeno a 0ºC. Después de 10 minutos, el baño de agua enfriada con hielo se retiró y la mezcla resultante se agitó durante 4 horas. El disolvente se evaporó y el residuo se recogió en acetato de etilo. La capa orgánica se lavó, se secó y se evaporó. El sólido se purificó por TLC preparativa usando diclorometano/metanol (95:5) como fase móvil, dando N-[4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil]carbamato de 3-clorociclohexilo. ^{1}H RMN(CDCl_{3}) \delta 1,46 (m, 2H), 1,78 (m, 4H), 1,88 (m, 4H), 2,00 (m, 2H), 2,28 (m, 4H), 3,93 (m, 4H), 4,84 (m, 1H), 5,22 (m, 1H), 5,27 (s, 2H), 6,97 (s, 1H), 7,03 (s, 1H), 7,08 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,31 (s, 1H), 8,18 (d a, 1H), 8,32 (s, 1H); LC/MS (MH^{+} = 484).

Ejemplo 20 N-(4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil)-N'-bencilurea*

Se añadió gota a gota isocianato de bencilo (24 ml, 0,194 mmol) en diclorometano (1 ml) a una solución en agitación de 5-(4-amino-3-metoxifenil)-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (50 mg, 0,155 mmol) en N,N-diisopropiletilamina (153 ml, 0,881 mmol) y cloruro de metileno (2 ml) en atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó durante 24 horas. El disolvente se evaporó y el sólido se purificó por TLC preparativa usando diclorometano/metanol (95:5) como fase móvil, dando N-(4-(4-amino-7-ciclopropil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil)-N'-bencilurea. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 1,78 (m, 2H), 1,90 (m, 4H), 2,26 (m, 2H), 3,86 (s, 3H), 4,48 (d, J = 6 Hz, 3H), 5,24 (m, 4H), 6,93 (s, 1H), 6,98 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 7,04 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,29 (m, 5H), 8,17 (d, J = 8 Hz, 1H), 8,31 (s, 1H); LC/MS (MH^{+} = 457).

Ejemplo 21 N-[4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil]carbamato de bencilo*

Una mezcla de 5-(4-amino-3-metoxifenil)-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (0,025 g, 0,08 mmol), cloroformiato de bencilo (0,016 g, 0,09 mmol), piridina (0,50 ml) y diclorometano (0,50 ml) se agitó a temperatura ambiente durante el fin de semana y se vertió en agua. El precipitado resultante se recogió por filtración y se purificó por cromatografía ultrarrápida en columna sobre sílice usando acetato de etilo/n-heptano (9:1) como fase móvil, dando N-[4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil]carbamato de bencilo en forma de un sólido blanco (0,002 g, 0,004 mmol): ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 8,64 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 7,74 (d, 1H), 7,34-7,45 (m, 6H), 7,10 (d, 1H), 7,02 (dd, 1H), 6,08 (ancho, 2H), 5,16 (s, 2H), 5,08 (m, 1H), 3,86 (s, 3H), 2,11 (m, 2H), 1,91 (m, 4H), 1,69 (m, 2H); MH^{+} 458; TLC (acetato de etilo) R_{f} 0,32; RP-HPLC (Hypersil C18, 5 \mum, 200 A, 25 cm; acetonitrilo al 25%-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) R_{t} 19,00 min.

Ejemplo 22 N-[5-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil]carbamato de bencilo* a) 5-Bromo-2-metoxianilina

Una mezcla de 4-bromo-1-metoxi-2-nitrobenceno (3,0 g, 12,9 mmol) y ácido acético glacial (25 ml) se calentó a 100ºC en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió polvo de hierro (2,2 g, 38,8 mmol) y la mezcla se agitó durante una hora a una temperatura de 100ºC. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, después se añadió agua (100 ml) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 25 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con bicarbonato sódico acuoso saturado (3 x 25 ml) y después con salmuera. La solución orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida, dando un residuo. La purificación del material por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice usando heptano/acetato de etilo (6:4) como eluyente proporcionó 5-bromo-2-metoxianilina (2,0 g): ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 6,76 (s, 1H), 6,71 (d, 1H), 6,61 (d, 1H), 4,99 (s a, 2H), 3,74 (s, 3H); (TLC (heptano/acetato de etilo 1:1) R_{f} 0,5; RP-HPLC (Hypersil HyPurity Elite C18, 5 \mum, 200 A, 250 x 4,6 mm; acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) t_{R} = 13,33 min; MS: MH^{+} 443.

b)N-(5-Bromo-2-metoxifenil)carbamato de terc-butilo

Una mezcla de 5-bromo-2-metoxianilina (1,50 g, 7,43 mmol) y dicarbonato de di-terc-butilo (1,95 g, 8,91 mmol) en THF (20 ml) se calentó a reflujo durante 20 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y después el disolvente se retiró a presión reducida. El aceite resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice usando acetato de etilo/heptano (1:9) como eluyente, produciendo N-(5-bromo-2-metoxifenil)carbamato de terc-butilo (2,19 g) en forma de un aceite incoloro: ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 8,05 (s, 1H), 7,93 (d, 1H), 7,16 (d, 1H), 6,95 (d, 1H), 3,8 (s, 1H), 1,47 (s, 9H); TLC (acetato de etilo/heptano 2:8) R_{f} 0,4; RP-HPLC (Hypersil HyPurity Elite C18, 5 \mum, 200 A, 250 x 4,6 mm; acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) t_{R} = 21,8 min.

c)N-[2-Metoxi-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil]carbamato de terc-butilo

Una mezcla de N-(5-bromo-2-metoxifenil)carbamato de terc-butilo (1,10 g, 3,64 mmol) diboro pinacol éster (1,11 g, 4,37 mmol), [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) complejo con diclorometano (1:1) (0,09 g, 0,11 mol) y acetato potásico (1,07 g, 10,9 mol) en N,N-dimetilformamida (20 ml) se calentó a 80ºC en una atmósfera de nitrógeno durante 16 horas. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y el disolvente se retiró a presión reducida. Al residuo se le añadió diclorometano (20 ml) y el sólido resultante se retiró por filtración a través de una capa de celite. El filtrado se concentró, dejando un aceite amarillo que se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre sílice usando acetato de etilo/heptano (2:8) como fase móvil, produciendo N-[2-metoxi-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil]carbamato de terc-butilo (0,96 g): ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 8,03 (s, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,35 (d, 1H), 7,0 (d, 1H), 3,82 (s, 3H), 1,46 (s, 9H), 1,28 (s, 12H); TLC (acetato de etilo/heptano 2:8) R_{f} = 0,35; RP-HPLC (Hypersil HyPurity Elite C18, 5 \mum, 200A, 250 x 4,6 mm; acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) t_{R} = 22,8 min.

d)N-(5-(Cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil)carbamato de terc-butilo

Una mezcla de 4-cloro-7-ciclopentil-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (0,35 g, 1,0 mmol), N-[2-metoxi-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil]carbamato de terc-butilo (0,524 g, 1,5 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0,07 g, 0,06 mmol) y carbonato sódico (0,265 g, 2,5 mmol) se calentó en una mezcla de éter dimetílico de etilenglicol (10 ml) y agua (5 ml) a 80ºC durante 18 horas en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y los disolventes se retiraron a presión reducida. El residuo se repartió entre agua (15 ml) y acetato de etilo (25 ml), la capa orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (2 x 25 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (3 x 20 ml) después se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y el filtrado se concentró hasta un residuo oleoso a presión reducida. El material se purificó por cromatografía ultrarrápida en columna sobre sílice usando heptano/acetato de etilo (5:1) como eluyente, dando N-(5-(cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil)carbamato de terc-butilo (0,325 g): ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 8,64 (s, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,87 (m, 2H), 7,17 (d, 1H), 7,06 (d, 1H), 5,21 (m, 1H), 3,86 (s, 3H), 1,65-2,25 (m, 8H), 1,45 (s, 9H); RP-HPLC (Hypersil HyPurity Elite C18, 5 \mum, 200A, 250 x 4,6 mm; acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) t_{R} = 24,25 min. MS: MH^{+} 443.

e) 5-(3-Amino-4-metoxifenil)-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina

Una solución de N-(5-(cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil)carbamato de terc-butilo (0,325 g, 0,735 mmol) en diclorometano (14 ml) se enfrió a 0ºC y después se trató con ácido trifluoroacético (1,4 ml). La solución se agitó a 0ºC durante 5 min y después se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas más. Los disolventes se evaporaron a presión reducida y después el residuo se repartió entre diclorometano (30 ml) y bicarbonato sódico acuoso saturado (10 ml). La solución orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida hasta una espuma. Después, el material se disolvió en dioxano (4 ml) e hidróxido amónico concentrado (4 ml) (al 28-30%) y la solución resultante se calentó a 120ºC en un tubo a presión cerrado herméticamente durante 20 horas. Los disolventes se evaporaron y el residuo se purificó por RP-HPLC C18 preparativa dando, después de la liofilización, 5-(3-amino-4-metoxifenil)-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (85 mg): ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 8,10 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 6,87 (d, 1H), 6,74 (s, 1H), 6,58 (d, 1H), 5,06 (1H, m), 4,87 (s a, 2H), 3,8 (s, 3H), 1,6-2,2 (m, 8H); RP-HPLC (Hypersil HyPurity Elite C18, 5 \mum, 200A, 250 x 4,6 mm; acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) t_{R} = 11,87 min;
MS: MH^{+} 324.

f)N-[5-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil]carbamato de bencilo

Una solución de 5-(3-amino-4-metoxifenil)-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (40 mg, 0,124 mmol) en diclorometano (1 ml) y piridina (1 ml) se enfrió a 0ºC y después se trató con cloroformiato de bencilo (32 mg, 0,186 mmol) mientras se mantenía una temperatura de menos de 5ºC. La solución se agitó durante 1 hora más a 0ºC y después los disolventes se retiraron a presión reducida. La purificación por RP-HPLC C-18 preparativa y después la liofilización proporcionaron N-[5-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-metoxifenil]carbamato de bencilo (25 mg) en forma de un polvo blanco: ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 8,75 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,1-7,4 (m, 8H), 6,2 (s a, 2H), 5,15 (s, 2H), 5,07 (m, 1H), 3,8 (s 3H), 1,6-2,2 (m, 8H), RP-HPLC (Hypersil HyPurity Elite C18, 5 \mum, 200A, 250 x 4,6 mm; acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) t_{R} = 18,63 min; MS: MH^{+} 458.

Ejemplo 23 N-[5-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-piridil]carbamato de bencilo* a)N-(5-Bromo-2-piridil)carbamato de terc-butilo

El compuesto se preparó a partir de 5-bromo-2-piridinamina de la manera que se ha descrito para el compuesto (2): ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 9,96 (s, 1H), 8,49 (d, 1H), 7,93 (dd, 1H), 7,78 (d, 1H), 1,47 (s, 9H); TLC (5:95 de acetato de etilo/heptano) R_{f} 0,28; RP-HPLC (Hypersil HyPurity Elite C18, 5 \mum, 200A, 250 x 4,6 mm; acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) t_{R} = 18,50 min.

b)N-[5-(1,1,1-Trimetilestanil)-2-piridil)carbamato de terc-butilo

Una mezcla de N-(5-bromo-2-piridil)carbamato de terc-butilo (1,67 g, 6,12 mmol), hexametildiestaño (2,0 g, 6,12 mmol) y tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0,424 g, 0,367 mmol) en éter dimetílico de etilenglicol (30 ml) se calentó a 80ºC en una atmósfera de nitrógeno durante 15 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y después el disolvente se retiró a presión reducida. El material resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice usando heptano/acetato de etilo (95:5) como eluyente para producir N-[5-(1,1,1-trimetilestanil)-2-piridil)carbamato de terc-butilo (1,11 g): ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 9,98 (s, 1H), 8,2 (t, 1H), 7,74 (m, 2H), 1,47 (s, 9H), 0,30 (t, 9H); TLC (95:5 de heptano/acetato de etilo) R_{f} 0,2; MS: MH^{+} 359.

c)N-[5-(4-Cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-piridil]carbamato de terc-butilo

Una mezcla de 4-cloro-7-ciclopentil-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (0,25 g, 0,72 mmol), N-[5-(1,1,1-trimetilestanil)-2-piridil)carbamato de terc-butilo (0,386 g, 1,08 mmol), trans(dibencilidenoacetona)dipaladio (0) (0,033 g, 0,076 mmol) y trifenilarsina (0,055 g, 0,18 mmol) en N,N-dimetilformamida (8 ml) se calentó a 65ºC en una atmósfera de nitrógeno durante 18 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y después el disolvente se retiró a presión reducida. El material resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice usando heptano/acetato de etilo (75:25) como eluyente para producir N-[5-(4-cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-piridil]carbamato de terc-butilo (0,13 g): ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 9,83 (s, 1H), 8,68 (s, 1H), 8,40 (d, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,85-7,93 (m, 2H), 5,21 (m, 1H), 1,65-2,25 (m, 8H), 1,49 (s, 9H); TLC (8:2 de heptano/acetato de etilo) R_{f} 0,18; RP-HPLC (Hypersil HyPurity Elite C18, 5 \mum, 200A, 250 x 4,6 mm; acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) t_{R} = 21,68 min.

d) 5-(4-Cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-piridin-4-amina

Una solución de N-[5-(4-cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-piridil]carbamato de terc-butilo (0,13 g, 0,315 mmol) en diclorometano (5,5 ml) se enfrió a 0ºC y después se trató con ácido trifluoroacético (0,6 ml). La solución se agitó a 0ºC durante 5 minutos y después se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 18 horas más. Los disolventes se evaporaron a presión reducida y después el residuo se repartió entre diclorometano (30 ml) y bicarbonato sódico acuoso saturado (10 ml). La solución orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida, dando 5-(4-cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-piridin-4-amina (92 mg): RP-HPLC (Hypersil HyPurity Elite C18, 5 \mum, 200A, 250 x 4,6 mm; acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) t_{R} = 10,73 min; MS: MH^{+} 314.

e) 5-(6-Amino-3-piridil)-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina

La 5-(4-cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-piridin-4-amina (92 mg, 0,291 mmol) se disolvió en dioxano (2 ml) e hidróxido amónico concentrado(al 28-30%) (2 ml) y la solución resultante se calentó a 120ºC en un tubo a presión cerrado herméticamente durante 24 horas. Los disolventes se evaporaron, dando 5-(6-amino-3-piridil)-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (105 mg): RP-HPLC (Hypersil HyPurity Elite C18, 5 \mumm, 200A, 250 x 4,6 mm; acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) t_{R} = 6,33 min; MS: MH^{+} 295.

f)N-[5-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-piridil]carbamato

Una solución de 5-(6-amino-3-piridil)-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (105 mg, 0,29 mmol) en diclorometano (1,5 ml) y piridina (1,5 ml) se enfrió a 0ºC y después se trató con cloroformiato de bencilo (75 mg, 0,44 mmol) mientras se mantenía una temperatura de menos de 5ºC. La solución se calentó a temperatura ambiente y después se agitó durante 3 horas. Se añadió cloroformiato de bencilo (75 mg, 0,44 mmol) y la mezcla se agitó durante 18 horas, se añadió más cloroformiato de bencilo (75 mg, 0,44 mmol) y la mezcla se agitó durante 24 horas más. Se añadieron cloroformiato de bencilo (150 mg, 0,88 mmol) y piridina (1 ml) y la mezcla se agitó durante 24 horas más. Los disolventes se evaporaron a presión reducida y después el residuo se repartió entre acetato de etilo (25 ml) y agua (10 ml). La solución orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida, dando un residuo. La purificación por RP-HPLC C-18 preparativa y después la trituración con éter dietílico proporcionaron N-[5-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-piridil]carbamato (21 mg) en forma de un polvo blanco. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 10,33 (s, 1H), 8,36 (d, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,91 (d, 1H), 7,84 (d, 1H), 7,33-7,47 (m, 6H), 6,11 (s a, 2H), 5,2 (s, 2H), 5,06 (m, 1H), 1,6-2,2 (m, 8H); RP-HPLC (Hypeisil HyPurity Elite C18, 5 \mum, 200A, 250 x 4,6 mm; acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) t_{R} = 16,22 min; MS: MH^{+} 429.

Ejemplo 24 N-[4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-3-metoxifenil]carbamato de bencilo* a) 4-Bromo-3-metoxianilina

Una mezcla de 1-bromo-2-metoxi-4-nitrobenceno (3,0 g, 12,9 mmol) y ácido acético glacial (25 ml) se calentó a 100ºC en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió polvo de hierro (2,2 g, 38,8 mmol) y la mezcla se agitó durante una hora a una temperatura de 100ºC. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se añadió agua (100 ml) y después la mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 25 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con bicarbonato sódico acuoso saturado (3 x 25 ml) y después con salmuera. La solución orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida, dando un residuo. La purificación del material por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice usando heptano/acetato de etilo (6:4) como eluyente proporcionó 4-bromo-3-metoxianilina (1,22 g): ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 7,1 (d, 1H), 6,31 (s, 1H), 6,1 (d, 1H), 5,27 (s a, 2H), 3,72 (s, 3H); TLC (1:1 de heptano/acetato de etilo) R_{f} 0,33; RP-HPLC (Hypersil HyPurity Elite C18, 5 \mum, 200A, 250 x 4,6 mm; acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) t_{R} = 11,05 min.

b)N-(4-Bromo-3-metoxifenil)carbamato de terc-butilo

El compuesto se preparó a partir de 4-bromo-3-metoxianilina de la manera que se ha descrito para el compuesto (2): ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 9,46 (s, 1H), 7,4 (d, 1H), 7,35 (s, 1H), 6,95 (d, 1H), 3,78 (s, 3H), 1,48 (s, 9H); TLC (8:2 de heptano/acetato de etilo) R_{f} 0,37; RP-HPLC (Hypersil HyPurity Elite C18, 5 \mum, 200A, 250 x 4,6 mm; acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) t_{R} = 18,60 min.

c)N-[3-Metoxi-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil]carbamato de terc-butilo

El compuesto se preparó a partir de N-(4-bromo-3-metoxifenil)carbamato de terc-butilo de la manera que se ha descrito para el compuesto (3): ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 9,44 (s, 1H), 7,41 (d, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,01 (d, 1H), 3,68 (s, 3H), 1,48 (s, 9H), 1,24 (s, 12 H); TLC (8:2 de heptano/acetato de etilo) R_{f} 0,28; RP-HPLC (Hypersil HyPurity Elite C18, 5 \mum, 200A, 250 x 4,6 mm; acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) t_{R} = 18,83 min.

d)N-[4-(4-(Cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-3-metoxifenil)carbamato de terc-butilo

El compuesto se preparó a partir de N-[3-metoxi-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxoborolan-2-il)fenil]carbamato de terc-butilo y 4-cloro-7-ciclopentil-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-]pirimidina de la manera que se ha descrito para el compuesto (4) ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 9,41 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,15 (d, 1H), 7,04 (d, 1H), 5,17 (m, 1H), 3,66 (s, 3H), 1,6-2,2 (m, 3H), 1,49 (s, 9H); RP-HPLC (Hypersil HyPurity Elite C18, 5 \mum, 200A, 250 x 4,6 mm; acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) t_{R} = 21,22 min; MS: MH^{+} 443.

e)N-[4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-3-metoxifenil]carbamato de bencilo

El compuesto se preparó a partir de N-[4-(4-(cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-3-metoxifenil)carbamato de terc-butilo de la manera que se ha descrito para la conversión del compuesto (4) en el compuesto (6): ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz) \delta 9,87 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,34-7,45 (m, 6H), 7,09-7,18 (m, 3H), 5,79 (s a, 2H), 5,18 (s, 2H), 5,04 (m, 1H), 3,7 (s, 3H), 1,6-2,2 (m, 8H); RP-HPLC (Hypersil HyPurity Elite C18, 5 \mum, 200A, 250 x 4,6 mm; acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 M durante 25 min, 1 ml/min) t_{R} = 16,87 min; MS: MET 458.

Ejemplo 25 N-[4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil]carbamato de bencilo a) Resina 4-[{[7-Ciclopentil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino}(2,4-dimetoxifenil)metil]fenoxi

La resina de amida de Rink, [resina 4-(2',4'-dimetoxifenil-Fmoc-aminometil)-fenoxi con una carga de 0,66 mmol/g] (6,55 g, 4,32 mmol) se desprotegió lavándose con N,N-dimetilformamida (2 x 2 min), piperidina al 20% en N,N-dimetilformamida (1 x 5 min, 1 x 15 min), N,N-dimetilformamida (5 x 2 min), diclorometano (3 x 2 min) y después metanol (3 x 2 min). La resina se secó a una temperatura de 40ºC a presión reducida. La resina desprotegida, 4-cloro-7-ciclopentil-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (1,80 g, 5,19 mmol), dimetilosulfóxido (100 ml) y N,N-diisopropiletilamina (4,5 ml) se calentaron a 100ºC durante 3 días, se enfriaron a temperatura ambiente y después la resina se recogió por filtración y se lavó con N,N-dimetilformamida. Después, la resina se agitó durante 30 min con ácido acético (0,13 g, 2,16 mmol), tetrafluoroborato de O-benzotiazol-1-il-N,N,N',N'-tetrametiluronio (0,69 g, 2,16 mmol), N,N-diisopropiletilamina (0,56 g, 4,32 mmol) y N,N-dimetilformamida (30 ml). La resina se recogió por filtración y se lavó con N,N-dimetilformamida, diclorometano y metanol. La resina se secó hasta un peso constante (6,25 g) a presión reducida. La resina, diboro pinacol éster (1,11 g, 4,37 mmol), acetato potásico (0,822 g, 8,39 mmol) y tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0,24 g, 0,21 mmol) en dimetilosulfóxido (125 ml) se calentaron a 85ºC en una atmósfera de nitrógeno durante 17 horas. La resina se recogió por filtración y después se lavó con N,N-dimetilformamida, diclorometano, acetato de etilo y después éter. La resina se secó a presión reducida hasta un peso de 5,49 gramos,

b)N-[4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil]carbamato de bencilo

Una mezcla de resina 4-[{[7-ciclopentil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino}(2,4-dimetoxifenil)metil]fenoxi (0,5 g, 0,254 mmol), 4-bromo-2-fluoroanilina (0,484 g, 2,54 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0,044 g, 0,038 mmol), fosfato potásico acuoso 2 M (1,27 ml, 2,54 mmol) y dimetilosulfóxido (10 ml) se calentó a 85ºC durante 18 horas. La mezcla se enfrió y la resina se recogió por filtración y después se lavó con N,N-dimetilformamida y diclorometano. Después, la resina se sometió una segunda vez a las condiciones de acoplamiento descritas anteriormente. La resina se suspendió en diclorometano (2 ml) y piridina (2 ml) y después la mezcla se enfrió a 0ºC y se trató con cloroformiato de bencilo (0,44 g, 2,6 mmol). Después de agitar a 0ºC durante una hora, la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente durante 18 horas. La resina se recogió por filtración y después se trató con ácido trifluoroacético al 5% en diclorometano (10 ml) durante 30 minutos. La retirada de la resina por filtración proporcionó un filtrado que se evaporó a presión reducida para producir un residuo que se purificó por RP-HPLC C-18 preparativa, dando N-[4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil]carbamato de bencilo (\sim10 mg): RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 \mum, 100A, 250 x 4,6 mm; acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 M durante 10 min, 1 ml/min) t_{R} = 1,47 min; MS: MH^{+} 446.

Ejemplo 26 N-[4-(4-Amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil]carbamato de bencilo a) Resina 4-[{[7-Ciclopentil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino}(2,4-dimetoxifenil)metil]fenoxi

La resina de amida de Rink [resina 4-(2,4'-dimetoxifenil-Fmoc-aminometil)-fenoxi con una carga de 0,66 mmol/g] (6,55 g, 4,32 mmol) se desprotegió lavándose con N,N-dimetilformamida (2 x 2 min), piperidina al 20% en N,N-dimetilformamida (1 x 5 min, 1 x 15 min), N,N-dimetilformamida (5 x 2 min), diclorometano (3 x 2 min) y después metanol (3 x 2 min). La resina se secó a una temperatura de 40ºC a presión reducida. La resina desprotegida, 4-cloro-7-ciclopentil-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (1,80 g, 5,19 mmol), dimetilosulfóxido (100 ml) y N,N-diisopropiletilamina (4,5 ml) se calentaron a 100ºC durante 3 días, se enfriaron a temperatura ambiente y después la resina se recogió por filtración y se lavó con N,N-dimetilformamida. Después, la resina se agitó durante 30 min con ácido acético (0,13 g, 2,16 mmol), tetrafluoroborato de O-benzotiazol-1-il-N,N,N',N'-tetrametiluronio (0,69 g, 2,16 mmol), N,N-diisopropiletilamina (0,56 g, 4,32 mmol) y N,N-dimetilformamida (30 ml). La resina se recogió por filtración y se lavó con N,N-dimetilformamida, diclorometano y metanol. La resina se secó hasta un peso constante (6,25 g) a presión reducida. La resina, diboro pinacol éster (1,11 g, 4,37 mmol), acetato potásico (0,822 g, 8,39 mmol) y tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0,24 g, 0,21 mmol) en dimetilosulfóxido (125 ml) se calentó a 85ºC en una atmósfera de nitrógeno durante 17 horas. La resina se recogió por filtración y después se lavó con N,N-dimetilformamida, diclorometano, acetato de etilo y después éter. La resina se secó a presión reducida hasta un peso de 5,49 gramos.

Una mezcla de resina 4-[{[7-ciclopentil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino} (2,4-dimetoxifenil)metil]fenoxi (0,5 g, 0,254 mmol), 4-bromo-2-fluoroanilina (0,484 g, 2,54 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0,044 g, 0,038 mmol), fosfato potásico acuoso 2 M (1,27 ml, 2,54 mmol) y dimetilosulfóxido (10 ml) se calentó a 85ºC durante 18 horas. La mezcla se enfrió y la resina se recogió por filtración y después se lavó N,N-dimetilformamida y diclorometano. Después, la resina se sometió una segunda vez a las condiciones de acoplamiento anteriores. La resina se suspendió en diclorometano (2 ml) y piridina (2 ml) y después la mezcla se enfrió a 0ºC y se trató con cloroformiato de bencilo (0,44 g, 2,6 mmol). Después de agitar a 0ºC durante una hora, la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente durante 18 horas. La resina se recogió por filtración y después se trató con ácido trifluoroacético al 5% en diclorometano (10 ml) durante 30 minutos. La retirada de la resina por filtración proporcionó un filtrado que se evaporó a presión reducida para producir un residuo que se purificó por RP-HPLC C18 preparativa, dando N-[4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil]carbamato de bencilo (\sim10 mg): RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 \mum, 100A, 250 x 4,6 mm; acetonitrilo al 25-100%-acetato amónico 0,1 M durante 10 min, 1 ml/min) t_{R} = 11,47 min; MS: MH^{+} 446.

Procedimiento general para preparar pirrolopirimidina arilsulfonamidas: A una solución 0,225 M de 5-(4-amino-3-fluorofenil-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d] pirimidin-4-amino en piridina se le añadió un equivalente de cloruro de arilsulfonilo sustituido. Esta mezcla se calentó con mezclado a 45ºC durante 24 h. El producto se purificó de la mezcla de reacción por RP-HPLC preparativa (Hypersil BDS C18, (relleno de 5 \mum; 100 x 21,2 mm) usando un gradiente de acetato amónico acuoso 0,05 M, pH 4,5/acetonitrilo (0-100% durante 12,5 min, a 25 ml/min).

Los Ejemplos 27-88 se prepararon mediante el procedimiento general descrito anteriormente. El peso molecular se determinó por espectrometría de masas (MH+) y los tiempos de retención de HPLC (RT) en minutos se muestran con cada ejemplo.

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Síntesis general para los Ejemplos 89-94

A una solución 0,225 M de 5-(4-amino-3-metoxifenil)-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (o 5-(4-amino-3-fluorofenil)-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina o 5-(4-amino-3-clorofenil)-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina) en piridina se le añadió un equivalente de cloruro de arilsulfonilo sustituido. Esta mezcla se calentó con mezcla a 45ºC durante 24 h. El producto se purificó de la mezcla de reacción por RP-HPLC C18 preparativa. Los Rt de la RP-HPLC analítica indicados en la tabla se obtuvieron en una columna Hypersil HyPurity Elite C18 ((5 \mum, 200A) 250 x 4,6 mm) usando un gradiente lineal de acetonitrilo al 25-100%/acetato amónico 0,1 M durante 25 min a 1 ml/min.

Obsérvese que puede requerirse manipulación del grupo protector adecuado cuando se introducen sustituyentes reactivos.

Los compuestos 89-94 se prepararon mediante el procedimiento general descrito anteriormente. El peso molecular se determinó por espectrometría de masas (MH+) y los tiempos de retención de HPLC (RT) en minutos se indican con cada ejemplo.

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Los compuestos 95 a 98 se sintetizaron usando los siguientes métodos.

Vía 1

a) Una mezcla de la bromoarilsulfonamida apropiada (0,735 mmol), bispinacolatodiborano (0,225 g, 0,88 mmol), complejo [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) con diclorometano (1:1) (2 mg, 0,002 mol) y acetato potásico (0,216 g, 2,205 mol) en AOM-dimetilformamida (5 ml) se calentó a 100ºC en una atmósfera de nitrógeno durante 16 horas. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y el disolvente se retiró a presión reducida. Al residuo se le añadió diclorometano (20 ml) y el sólido resultante se retiró por filtración a través de una capa de celite. El filtrado se concentró, dejando un aceite amarillo que se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice para producir el sulfonamido aril borato.

b) Una mezcla de 4-cloro-7-ciclopentil-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (0,35 g, 1,0 mmol), el sulfonamido aril borato (1,5 mmol; de 1(a) anterior), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0,07 g, 0,06 mmol) y carbonato sódico (0,265 g, 2,5 mmol) se calentó en una mezcla de éter dimetílico de etilenglicol (10 ml) y agua (5 ml) a 80ºC durante 18 horas en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y los disolventes se retiraron a presión reducida. El residuo se repartió entre agua (15 ml) y acetato de etilo (25 ml), la capa orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (2 x 25 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (3 x 20 ml), después se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y el filtrado se concentró hasta un residuo oleoso a presión reducida que se purificó por cromatografía ultrarrápida en columna sobre gel de sílice, proporcionando la sulfonamidoarilo 4-cloro-pirrolo[2,3-d]pirimidina correspondiente.

c) La 4-cloro-pirrolo[2,3-d]pirimidina (típicamente 10-20 mmol; de 1(b) anterior) se mezcló con dioxano (100 ml) e hidróxido amónico concentrado (100 ml) en un recipiente a presión. La mezcla se calentó a 120ºC durante una noche. El disolvente se retiró y el residuo se purificó por RP-HPLC, dando el compuesto final 4-amino-pirrolo[2,3-d]pirimidina deseado.

Vía 2

a) Una mezcla de la bromoanilina apropiada (2,4 mmol), bispinacolatodiborano (0,735 g, 2,88 mmol), [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) complejo con diclorometano (1:1) (59 mg, 0,072 mol) y acetato potásico (0,707 g, 7,205 mol) en N,N-dimetilformamida (15 ml) se calentó a 100ºC en una atmósfera de nitrógeno durante 16 horas. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y el disolvente se retiró a presión reducida. Se añadió tolueno (20 ml) y la mezcla se lavó con agua (2 x 15 ml). La capa orgánicas se secaron sobre MgSO_{4}, se concentraron al vacío y se purificaron por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice, produciendo el borato de anilino.

b) Una mezcla del borato de anilino (1,01 mmol; de 2(a) anterior), 4-cloro-7-ciclopentil-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (0,24 g, 0,67 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0,04 g, 0,033 mmol) y carbonato sódico (0,215 g, 2,03 mmol) se calentó en una mezcla de éter dimetílico de etilenglicol (10 ml) y agua (5 ml) a 80ºC durante 18 horas en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y los disolventes se retiraron a presión reducida. El residuo se repartió entre agua (15 ml) y acetato de etilo (25 ml), la capa orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (2 x 25 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (3 x 20 ml) después se secaron sobre sulfato de magnesio y se filtraron. El filtrado se concentró hasta un residuo oleoso a presión reducida que se purificó por cromatografía ultrarrápida en columna sobre gel de sílice, dando la 4-cloro-7-ciclopentil-5-(4-aminofenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina deseada.

c) Una mezcla de la 4-cloro-7-ciclopentil-5-(4-aminofenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (0,201 mmol; de 2(b) anterior), el cloruro de arilsulfonilo (0,402 mmol) y piridina (1,005 mmol) en cloruro de metileno se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Los disolventes se retiraron por filtración y el compuesto sulfonamido-4-cloro-pirrolopirimidina se purificó por RP-HPLC.

d) La sulfonamido-4-cloro-pirrolo[2,3-d]pirimidina (típicamente 10-20 mmol; de 2(c) anterior) se mezcló con dioxano (100 ml) e hidróxido amónico concentrado (100 ml) en un recipiente a presión. La mezcla se calentó a 120ºC durante una noche. El disolvente se retiró y el residuo se purificó por RP-HPLC, dando el compuesto final sulfonamido-4-amino-pirrolo[2,3-d]pirimidina deseado.

Los RT de la RP-HPLC analítica indicados en la tabla se obtuvieron en una columna Hypersil HyPurity Elite C18 ((5 \mum, 200A) 250 x 4,6 mm) usando un gradiente lineal de acetonitrilo al 25-100%/acetato amónico 0,1 M durante 25 min a 1 ml/min.

Obsérvese que puede requerirse manipulación del grupo protector apropiado cuando se introducen sustituyentes reactivos.

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Los siguientes compuestos también se prepararon usando el procedimiento general que se ha descrito para los Ejemplos 27-88.

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Claims

1. Un compuesto representado por la siguiente fórmula estructural:

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o sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en la que:

el Anillo A es fenilo que está sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre F, Cl y nitro;

L es uno de los siguientes engarces: -S-; -S(O)_{2}-; -S(O)_{2}-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -NCSO_{2}RH-CH_{2}O; -CH_{2}S-;
-CH_{2}N(R); -CH(NR)-; -CH_{2}N(C(O)R))-; -CH_{2}N(C(O)OR)-; -CH_{2}N(SO_{2}R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R-; -CH(NHSO_{2}R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-;
-C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -NHC(O)R-; -N(R)S(O)-; -N(R)S(O)_{2}-; -NHSO_{2}R-; -OC(O)N(R)-; -N(R)C(O)N(R); -NRC(O)O-; -S(O)N(R); -S(O)_{2}N(R)-; -N(C(O)R)S(O)-; -N(C(O)R)S(O)_{2}-; -N(R)S(O)N(R)-; -N(R)S(O)_{2}N(R)-; -C(O)N(R)C(O)-; -S(O)N(R)C(O)-; -S(O)_{2}N(R)C(O)-; -OS(O)N(R)-; -OS(O)_{2}N(R)-; -N(R)S(O)O-; -N(R)S(O)C(O)-; -N(R)S(O)C(O)-; -SON(CCO)R)-; -N(R)SON(R)-; -N(R)SO_{2}N(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(OR')O-; -N(R)P(OR)-; -N(R)P(O)(OR')O-; -N(R)P(O)(OR')-; -N(C(O)R)P(OR')O-; -N(C(O)R)P(OR')-; -N(C(O)R)P(O)(OR')O- o -N(C(O)R)P(OR')-, donde cada uno de R y R' es, independientemente, -H, un grupo acilo, un grupo alifático sustituido o no sustituido, un grupo aromático sustituido o no sustituido, un grupo heteroaromático sustituido o no sustituido o un grupo cicloalquilo sustituido o no sustituido; o

L es -R_{b}N(R)S(O)_{2}-, -R_{b}N(R)P(O)- o -R_{b}N(R)P(O)O-, donde R_{b} es un grupo alquileno que cuando se toma junto con el grupo sulfonamida, fosfinamida o fosfonamida al que está unido forma un anillo de cinco o seis miembros condensado al anillo A; o

L está representado por una de las siguientes fórmulas estructurales:

72

R_{1} es -H, 2-fenil-1,3-dioxan-5-ilo, un grupo alquilo C_{1}-C_{6}, un grupo cicloalquilo C_{3}-C_{8}, un grupo cicloalquenilo C_{5}-C_{7} o un grupo fenil(alquilo C_{1}-C_{6}) opcionalmente sustituido, donde los grupos alquilo, cicloalquilo y cicloalquenilo están opcionalmente sustituidos con uno o más grupos de fórmula -OR^{a}; con la condición de que -OR^{a} no se localice sobre el carbono unido al nitrógeno;

R^{a} es -H o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} o un grupo C_{3}-C_{6} cicloalquilo;

R_{2} es -H, un grupo alifático sustituido o no sustituido, un grupo sustituido o no sustituido, un halógeno, -OH, ciano, un grupo aromático sustituido o no sustituido, un grupo heteroaromático sustituido o no sustituido, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, un aralquilo sustituido o no sustituido, un heteroaralquilo sustituido o no sustituido, -NR_{4}R_{5} o -C(O)NR_{4}R_{5};

R_{3} es un grupo sustituido o no sustituido, un grupo aromático sustituido o no sustituido, un grupo heteroaromático sustituido o no sustituido o un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido. Cuando L es -NRSO_{2}-, -NRC(O)-,
-NRC(O)O-, -S(O)_{2}NR-, -C(O)NR- o -OC(O)NR-, R_{3} puede ser además alquilo sustituido o no sustituido, alquenilo sustituido o no sustituido o aralquilo sustituido o no sustituido; con la condición de que j sea 0 cuando L es -CH_{2}NR-, -C(O)NR- o -NRC(O) y R_{3} es azacicloalquilo o azaheteroarilo; y

R_{4}, R_{5} y el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido de 3, 4, 5, 6 ó 7 miembros, un heterobicicloalquilo sustituido o no sustituido o un grupo heteroaromático sustituido o no sustituido; o

cada uno de R_{4} y R_{5} es independientemente -H, azabicicloalquilo, un grupo alquilo sustituido o no sustituido o Y-Z;

Y se selecciona entre el grupo compuesto por -C(O)-, -(CH_{2})_{p}-, -S(O)_{2}-, -C(O)O-, -SO_{2}NH-, -CONH-, (CH_{2})_{p}O-, -(CH_{2})_{p}NH-, -(CH_{2})_{p}S-, -(CH_{2})_{p}S(O)-, o -(CH_{2})S(O)_{2}-;

p es un número entero de 0 a 6;

Z es un grupo alquilo sustituido o no sustituido, amino sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido o heterocicloalquilo sustituido o no sustituido; y

j es un número entero de 0 a 6.

2. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{3} se selecciona entre el grupo compuesto por un fenilo sustituido o no sustituido, un naftilo sustituido o no sustituido, un piridilo sustituido o no sustituido, un tienilo sustituido o no sustituido, un benzotriazol sustituido o no sustituido, un tetrahidropiranilo sustituido o no sustituido, un tetrahidrofuranoílo sustituido o no sustituido, un dioxano sustituido o no sustituido, un dioxolano sustituido o no sustituido, una quinolina sustituida o no sustituida, un tiazol sustituido o no sustituido, isoxazol sustituido o no sustituido, ciclopentilo sustituido o no sustituido, un benzofurano sustituido o no sustituido, benzotiofeno sustituido o no sustituido, bencisoxazol sustituido o no sustituido, bencisotiazol sustituido o no sustituido, benzotiazol sustituido o no sustituido, benzoxazol sustituido o no sustituido, bencimidazol sustituido o no sustituido, benzoxadiazol sustituido o no sustituido, benzotiadiazol sustituido o no sustituido, isoquinolina sustituida o no sustituida, quinozalina sustituida o no sustituida, indol sustituido o no sustituido o pirazol sustituido o no sustituido.

3. El compuesto de la reivindicación 2 en el que R_{3} está sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo compuesto por F, Cl, Br, I, CH_{3}, NO_{2}, OCF_{3}, OCH_{3}, CN, -CHO, CO_{2}CH_{3}, CF_{3}, t-butilo, piridilo, oxazolilo sustituido o no sustituido, bencilo sustituido o no sustituido, bencenosulfonilo sustituido o no sustituido, fenoxi sustituido o no sustituido, fenilo sustituido o no sustituido, amino sustituido o no sustituido, carboxilo, tetrazolilo sustituido o no sustituido, estirilo, -S-(arilo sustituido o no sustituido), -S-(heteroarilo sustituido o no sustituido), heteroarilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, alquinilo, -C(O)NR_{f}R_{g}, R_{c} y CH_{2}OR_{c};

R_{f}, R_{g} y el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido de 3, 4, 5, 6 ó 7 miembros, heterobicicloalquilo sustituido o no sustituido o un grupo heteroaromático sustituido o no sustituido; o cada uno de R_{f} y R_{g} es independientemente, -H, un grupo alifático sustituido o no sustituido o un grupo aromático sustituido o no sustituido; y

R_{c} es hidrógeno, o alquilo sustituido o no sustituido o arilo sustituido o no sustituido, -W-(CH_{2})_{t}-NR_{d}R_{e}, -W-(CH_{2})_{t}
-O-alquilo, W-(CH_{2})_{t}-S-alquilo, o -W-(CH_{2})_{t}-OH;

t es un número entero de 0 a 6;

W es un enlace o -O-, -S-, -S(O)-, -S(O)_{2}-, o -NR_{k}-;

R_{k} es -H o alquilo; y

R_{d}, R_{e} y el átomo de nitrógeno al que están unidos forman juntos un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido de 3, 4, 5, 6 ó 7 miembros o un grupo heterobicíclico sustituido o no sustituido; o

cada uno de R_{d} y R_{e} es independientemente, -H, alquilo, alcanoílo o -K-D;

K es -S(O)_{2}-, -C(O)-, -C(O)NH-, -C(O)_{2}-, o un enlace directo;

D es un arilo sustituido o no sustituido, un heteroarilo sustituido o no sustituido, un aralquilo sustituido o no sustituido, un grupo heteroaromático sustituido o no sustituido, un heteroaralquilo sustituido o no sustituido, un cicloalquilo sustituido o no sustituido, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, un amino sustituido o no sustituido, un aminoalquilo sustituido o no sustituido, un aminocicloalquilo sustituido o no sustituido, COOR_{i} o alquilo sustituido o no sustituido; y

4. El compuesto de la reivindicación 3, en el que R_{3} es un fenilo, tienilo, benzoxadiazolilo, o benzotiadiazolilo sustituido o no sustituido.

5. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{1} es un grupo ciclopentilo, un hidroxiciclopenteilo o un isopropilo.

6. Un compuesto seleccionado entre el grupo compuesto por

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2-(trifluorometoxi)-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil)-2-cloro-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil)-2-fluoro-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil)-3-fluoro-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-animo-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-nitrofenil)-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil)-3-(trifluorometil)-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil)-4-cloro-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-clorofenil)-2-ciano-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2-nitro-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2,6-difluoro-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2,3,4-trifluoro-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-4-bromo-2-fluoro-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2,5-difluoro-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-3,4-difluoro-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2-bromo-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2,6-dicloro-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2,4,6-tricloro-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2,4-dicloro-1-bencenosulfonamida;

N-{4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2-cloro-4-fluoro-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2,4-difluoro-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2-yodo-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2,3-dicloro-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-4-bromo-2,5-difluoro-1-bencenosulfonamida;

N-{4-{4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2-cloro-4-ciano-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2-cloro-6-metil-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-3-cloro-2-metil-1-bencenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-4,5-dibromo-2-tiofenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-5-bromo-2-tiofenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-3-bromo-5-cloro-2-tiofenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2,5-dicloro-3-tiofenosulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2,1,3-benzotiadiazol-4-sulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2,1,3-benzoxadiazol-4-sulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-7-cloro-2,13-benzoxadiazol-4-sulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-7-metil-2,1,3-benzotiadiazol-4-sulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-5-metil-2,1,3-benzotiadiazol-4-sulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-5-cloro-2,1,3-benzotiadiazol-4-sulfonamida;

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-(2-nitrofenil)metanosulfonamida; y

N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2,5-dibromo-3,6-difluoro-1-bencenosulfonamida

y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

7. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{2} es -H.

8. El compuesto de la reivindicación 1, en el que L es -NHSO_{2}R-, -NHC(O)O-, o -NHC(O)R-.

9. El uso de un compuesto de la reivindicación 1 o una sal fisiológicamente aceptable o metabolito biológicamente activo del mismo para preparar una composición farmacéutica para inhibir la actividad de proteína quinasa.

10. El uso de la reivindicación 9 en el que dicha proteína quinasa se selecciona entre el grupo compuesto por KDR, FGFR-1, PDGFR\beta, PDGFR\alpha, IGF-IR, c-Met, Flt-1, TIE-2, Lck, Src, fyn, Lyn, Blk, y yes.

11. El uso de la reivindicación 9 en el que la actividad de dicha proteína quinasa afecta a trastornos hiperproliferativos.

12. El uso de la reivindicación 9 en el que la actividad de dicha proteína quinasa afecta a la angiogénesis, permeabilidad vascular, respuestas inmunes o inflamación.

13. El uso de un compuesto de formula I como se define en la reivindicación 1 o una sal fisiológicamente aceptable o metabolito biológicamente activo del mismo para preparar una composición farmacéutica para tratar a un paciente que padece una afección que está mediada por la actividad de proteína quinasa.

14. El uso de la reivindicación 13 en el que dicha proteína quinasa se selecciona por el grupo compuesto por KDR, Flt-1, PDGFR\beta, PDGFR\alpha, IGF-1R, c-Met, TIE-2, Lck, Src, fyn, Lyn, Blk, y yes.

15. El uso de la reivindicación 13 en el que la afección mediada por la actividad de proteína quinasa es un trastorno hiperproliferativo.

16. El uso de la reivindicación 13 en el que la actividad de dicha proteína quinasa afecta a la angiogénesis, permeabilidad vascular, respuestas inmunes o inflamación.

17. El uso de la reivindicación 13 en el que la actividad de dicha proteína quinasa afecta a la angiogénesis o permeabilidad vascular.

18. El uso de la reivindicación 13 en el que la proteína quinasa es una proteína serina/treonina quinasa o una proteína tirosina quinasa.

19. El uso de la reivindicación 13 en el que la afección medida por la actividad de proteína quinasa es una o más úlceras.

20. El uso de la reivindicación 19 en el que la úlcera o úlceras están provocadas por una infección bacteriana o fúngica; o la úlcera o úlceras son úlceras de Mooren; o la úlcera o úlceras son un síntoma de colitis ulcerosa.

21. El uso de la reivindicación 13 en el que la afección mediada por la actividad de proteína quinasa es enfermedad de Lyme, sepsis o infección por infección de herpes simple, herpes zoster o virus de la inmunodeficiencia humana, parapoxvirus, protozoos o toxoplamoxis.

22. El uso de la reivindicación 13 en el que la afección mediada por la actividad de la proteína quinasa es la enfermedad de von Hippel Lindau, pénfigo, psoriasis, enfermedad de Paget o enfermedad renal poliquística.

23. El uso de la reivindicación 13 en el que la afección mediada por la actividad de la proteína quinasa es fibrosis, sarcoidosis, cirrosis, tiroiditis, síndrome de hiperviscosidad, enfermedad de Osler-Weber-Rendu, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, asma, exudados, ascitis, efusiones pleurales, efusiones pericárdicas, edema pulmonar, edema cerebral o edema después de quemaduras, traumatismo, radiación, apoplejía, hipoxia o isquemia.

24. El uso de la reivindicación 13 en el que la afección mediada por la actividad de proteína quinasa es síndrome de hiperestimulación de ovarios, preeclampsia, monometrorragia o endometriosis.

25. El uso de la reivindicación 13 en el que la afección mediada por la actividad de proteína quinasa es inflamación crónica, lupus sistémico, glomerulonefritis, sinovitis, enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, glomerulonefritis, artritis reumatoide y osteoartritis, esclerosis múltiple o rechazo de injerto.

26. El uso de la reivindicación 13 en el que la afección mediada por la actividad de proteína quinasa es anemia drepanocítica.

27. El uso de la reivindicación 13 en el que la afección mediada por la actividad de proteína quinasa es una afección ocular.

28. El uso de la reivindicación 27 en el que la afección ocular es edema ocular o macular, enfermedad neovascular ocular, escleritis, queratotomía radial, uveítis, vitritis, miopía, fosetas papilares, desprendimiento de retina crónico, complicaciones de tratamiento después de láser, conjuntivitis, enfermedad de Stargardt, enfermedad de Eales, retinopatía o degeneración macular.

29. El uso de la reivindicación 13 en el que la afección mediada por la actividad de proteína quinasa es una afección cardiovascular.

30. El uso de la reivindicación 29 en el que la afección mediada por la actividad de proteína quinasa es aterosclerosis, reestenosis, lesión por isquemia/reperfusión, oclusión vascular, malformación venosa o enfermedad obstructiva de la carótida.

31. El uso de la reivindicación 13 en el que la afección mediada por la actividad de proteína quinasa es cáncer.

32. El uso de la reivindicación 31 en el que el cáncer es un tumor sólido, un sarcoma, fibrosarcoma, osteoma, melanoma, retinoblastoma o rabdomiosarcoma, gliobastoma, neuroblastoma, teratocarcinoma, un tumor hematopoyético y ascitis maligna.

33. El uso de la reivindicación 30 en el que el cáncer es sarcoma de Kaposi, enfermedad de Hodgkin, linfoma, mieloma, o leucemia.

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34. El uso de la reivindicación 13 en el que la afección mediada por la actividad de proteína quinasa es síndrome de Crow-Fukase (POEMS) o una afección diabética.

35. El uso de la reivindicación 34 en el que la afección diabética es diabetes mellitus dependiente de insulina, glaucoma, retinopatía diabética o microangiopatía.

36. El uso de un compuesto de formula I como se difiere en la reivindicación 1 o una sal fisiológicamente aceptable o metabolito biológicamente activo del mismo, para preparar una composición farmacéutica para disminuir la fertilidad.

37. El uso de la reivindicación 13 en el que el compuesto de formula I o una sal fisiológicamente aceptable o metabolito biológicamente activo del mismo se administra en una cantidad eficaz para fomentar la angiogénesis o vasculogénesis.

38. El uso de la reivindicación 37 en el que la proteína quinasa es Tie-2.

39. El uso de la reivindicación 37 en el que el compuesto de formula I, o sal fisiológicamente aceptable o metabolito biológicamente activo del mismo, se administra en combinación con un factor de crecimiento pro-angiogénico.

40. El uso de la reivindicación 39 en el que el factor de crecimiento pro-angiogénico se selecciona entre el grupo compuesto por VEGF, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, HGF, FGF-1, FGF-2, derivados de los mismo y anticuerpos antiidiotípicos.

41. El uso de la reivindicación 37 en el que la afección mediada por proteína quinasa es anemia, isquemia, infarto, rechazo de transplante, una herida, gangrena o necrosis.

42. El uso de la reivindicación 13 en el que la actividad de proteína quinasa está implicada en la activación de células T, activación de células B, desgranulación de mastocitos, activación de monocitos, la potenciación de una respuesta inflamatoria o una combinación de los mismos.

43. Una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de una o cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y uno o más vehículos fisiológicamente aceptables.

44. El compuesto N-(4-(4-amino-7-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)-2-fluorofenil)-2-(trifluorometoxi)-1-bencenosulfonamida.