ES2263674T3

ES2263674T3 - Disolucion de evaluacion y conservacion.

Info

Publication number: ES2263674T3
Application number: ES01982986T
Authority: ES
Inventors: Stig Steen
Original assignee: Vitrolife AB
Current assignee: Vitrolife AB
Priority date: 2000-11-03
Filing date: 2001-11-05
Publication date: 2006-12-16
Anticipated expiration: 2021-11-05
Also published as: AU2002214443B2; EP1339279B1; DE60121027D1; US8012677B2; DE60121027T2; US20110269112A1; HK1058610A1; US20040029096A1; CA2427765A1; EP1339279B2; EP1339279A1; CN100381048C; ES2263674T5; US7255983B2; US20080057488A1; US20150150240A1; ATE330468T1; US8980541B2; WO2002035929A1; CN1477926A

Abstract

Una solución de evaluación y conservación para órganos y tejidos humanos y animales, y partes de los mismos, caracterizada porque comprende albúmina de suero en una concentración de 55 a 105 g/L, un compuesto limpiador y de recubrimiento a una concentración de 1 a 55 g/L, y una concentración fisiológica en suero de sales y nutrientes en un medio aceptable fisiológicamente.

Description

Disolución de evaluación y conservación.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a una solución para evaluación y conservación para órganos y tejidos humanos y animales, y partes de los mismos, para trasplante, a métodos para la evaluación ex vivo y a la preparación de tales órganos y tejidos y partes de los mismos, y al uso de dicha solución.

Técnica de base

En el actual trasplante clínico de órganos, los riñones, el hígado, el corazón y los pulmones son los órganos más comúnmente trasplantados. El páncreas no se trasplanta aún con mucha frecuencia, y el trasplante de intestino delgado y otros órganos está todavía en etapa experimental. En cuanto a la conservación de riñones, hígados, corazones y pulmones, la regla de oro es la conservación isquémica en frío. Esto significa que el órgano que se ha de conservar se riega con una solución para conservación fría y, después de eso, el órgano se sumerge en la misma solución fría hasta que puede ser trasplantado. La solución de conservación de órganos más común usada en la actualidad es la solución de la Universidad de Wisconsin (UW). Para la conservación de riñones e hígados, la UW es la solución de conservación que se usa con más frecuencia. Incluso para corazones se usa cada vez más, pero para los corazones la solución de St. Thomas en distintas modificaciones es aún la solución más comúnmente usada. Una nueva solución utilizada en la conservación de corazones en los últimos años es Celsior, que es una solución muy similar a la UW, excepto que la concentración de potasio es mucho más baja. Para pulmones, la solución Euro-Collins es aún la solución usada con mayor frecuencia, pero la Perfadex se está usando cada vez más. Lo que tienen en común todas estas soluciones es lo que se estableció inicialmente, es decir, que los órganos se aclaran con una solución fría y después de ello se sumergen en la misma solución fría. Para riñones e hígados se obtiene clínicamente una buena conservación durante periodos de hasta 24 horas, para pulmones la mayoría de los cirujanos de trasplantes aceptan 6 horas y para corazones 4 horas de tiempo isquémico en frío. Los órganos a trasplantar han sido obtenidos hasta ahora de lo que se denominan donantes con muerte cerebral pero a corazón latiente, o de personas a corazón parado a los pocos minutos después del fallecimiento, cuando había posibilidades rápidas de extracción y de obtención de permiso para hacerlo de los parientes cercanos; tales casos son raros y no resuelven la escasez de donantes de órganos. Esto se acepta también para hígados y riñones. Sin embargo, si la donación de órganos de donantes a corazón parado va a ser un procedimiento clínico controlado, existe la necesidad de una solución de evaluación y conservación para órganos procedentes de donantes a corazón parado, pero hasta ahora no se han producido soluciones satisfactorias con este fin. Si pudiese resolverse este problema de la falta de una solución conveniente de este tipo, se dispondría para trasplante de un mayor número de órganos, y podría eliminarse sustancialmente el problema de la falta de órganos. Por el momento, miles de personas de todo el mundo están muriendo o sufriendo en espera de órganos para trasplante. Ninguna de las soluciones actualmente en uso para la conservación isquémica en frío podía usarse como solución de evaluación para órganos de un donante a corazón parado. La solución de la Universidad de Wisconsin y la solución Euro-Collins tienen un contenido de potasio intracelular que da espasmo vascular en normotermia, y lo mismo harán las St. Thomas y Celsior, aunque no en el mismo grado. El Perfadex, que es una solución baja en potasio-dextrano, y que podría usarse si se mezcla con eritrocitos, no tiene la presión oncótica necesaria para perfundir, p. ej., pulmones sin que se desarrolle un edema.

Objeto de la invención

El objeto de la presente invención es resolver el problema mencionado anteriormente de la falta de una solución que haga posible la evaluación y conservación de órganos y tejidos humanos y animales, y partes de los mismos, para trasplante, en particular procedentes de donantes a corazón parado.

Jacobson, I. A. describe la perfusión hipotérmica de riñones de conejos en Cryobiology (1978), 15 (3), 290-31 ("Continuous hypothermic perfusion of rabbit kidneys").

Pegg, D. E. et al. describe técnicas de perfusión hipotérmica en Cryobiology (1973), 10 (1), 56-66 ("Renal preservation by hypothermic perfusion. I. Importance of pressure control").

El documento SU1109110 (Dzhafarov AI et al.) describe la conservación de hígados en una solución que contiene albúmina para trasplante en condiciones hipotérmicas.

Este objeto se consigue mediante una solución de evaluación y conservación combinadas que es del tipo mencionado a título de introducción, y que se define en la parte de caracterización de la reivindicación independiente. Las realizaciones preferidas de la presente invención se definen en las reivindicaciones dependientes.

La presente invención se refiere también a una solución mixta lista para uso inmediato que comprende la solución de evaluación y conservación y glóbulos rojos.

La presente invención se refiere también a un método para la evaluación ex vivo de órganos y tejidos humanos y animales, y partes de los mismos, y a un método para preparar tales órganos, tejidos y partes de los mismos.

La presente invención se refiere también al uso de la solución de evaluación y conservación antes mencionada, para la evaluación y conservación de órganos, tejidos y partes de los mismos.

Descripción de los dibujos

La Fig. 1 muestra esquemáticamente una prueba de perfusión pulmonar con una solución para evaluación y conservación, que en relación con la prueba y dibujos se denomina solución de evaluación para corto plazo, que carece tanto de Dextrano 40 como de albúmina de suero, en función de la ganancia de peso del pulmón (expresada en kg) y del tiempo.

La Fig. 2 muestra esquemáticamente una prueba de perfusión pulmonar con una solución para evaluación con 50 g/L de Dextrano 40 pero sin albúmina de suero humana, en función de la ganancia de peso del pulmón (expresada en kg) y del tiempo.

La Fig. 3 muestra esquemáticamente una prueba de perfusión pulmonar con una solución para evaluación con 70 g/L de albúmina de suero humana pero sin Dextrano 40, en función de la ganancia de peso del pulmón (expresada en kg) y del tiempo.

La Fig. 4 muestra esquemáticamente una prueba de perfusión pulmonar con una solución para evaluación que contiene 35 g/L de albúmina de suero humana y 25 g/L de Dextrano 40, en función de la ganancia de peso del pulmón (expresada en kg) y del tiempo.

La Fig. 5 muestra esquemáticamente una prueba de perfusión pulmonar con una solución para evaluación que contiene 70 g/L de albúmina de suero humana y 5 g/L de Dextrano 40, en función de la ganancia de peso del pulmón (expresada en kg) y del tiempo.

Sumario de la invención

Después de amplios estudios y experimentos, el inventor ha llegado a la conclusión de que para poder perfundir órganos procedentes de un donante a corazón parado y evaluarlos en normotermia, la solución usada ha de tener una presión oncótica fisiológica. De no ser así se desarrollará edema. La concentración de tampones y electrolitos en esa solución han de ser similares a las del plasma y han de ser compatibles con los glóbulos rojos (la perfusión a 37ºC sin glóbulos rojos oxigenados destruiría el órgano debido a la isquemia caliente). Además, la solución debe contener también compuestos que abran la microcirculación capilar. Además, el inventor ha observado que se requiere la presencia de un compuesto que recubre el endotelio, que elimina sustancias indeseables y que tiene actividad destoxificante. Otro requerimiento es que la solución, después de la etapa de perfusión/evaluación del órgano o el tejido sea capaz de actuar como solución de conservación satisfactoria, de forma que pueda ser usada para almacenamiento isquémico en frío después de la evaluación, si esta fuese la forma más práctica de transportar el órgano hasta el receptor.

La solución de evaluación y conservación para órganos y tejidos humanos y 7 animales, y partes de los mismos, comprende albúmina de suero a concentraciones de 55 a 105 g/L, un compuesto limpiador y de recubrimiento, preferentemente moléculas de dextrano y derivados del mismo a una concentración de aproximadamente 1 a 55 g/L, junto con concentraciones fisiológicas en suero de sales y nutrientes en un medio fisiológicamente aceptable. Preferentemente, la solución de evaluación y conservación de acuerdo con la presente invención comprende de 65 a 85 g/L, lo más preferentemente aproximadamente 75 g/L, de albúmina de suero humana.

Preferentemente, la solución de evaluación y conservación de acuerdo con la presente invención comprende un compuesto de dextrano en una concentración de 2 a 20 g/L, lo más preferentemente 5 g/L, y el Dextrano 40 es el más preferido. Otros ejemplos de moléculas de dextrano útiles disponibles comercialmente son Dextrano 60 y Dextrano 70.

Las sales contenidas en la solución de acuerdo con la presente invención comprenden iones sodio, potasio, calcio, magnesio, fosfato, hidrógeno-carbonato y cloruro, y los nutrientes comprenden carbohidratos fisiológicamente aceptables, preferentemente glucosa; ácidos grasos, p. ej. ácidos grasos esenciales, y aminoácidos, p. ej. aminoácidos esenciales. La solución de acuerdo con la presente invención puede contener también un vasodilatador, preferentemente papaverina; antibióticos; componentes fibrinolíticos tales como Actilyse, también llamado "altepas" (activador del plasminógeno tisular humano), y bloqueantes del receptor de trombocitos, tales como Reopro, también llamado "abciximab". Para perfusión a largo plazo la solución de acuerdo con la presente invención puede contener hormonas, p. ej. tiroxina/triyodotironina, insulina, cortisona, hormona del crecimiento y esteroides anabólicos en concentraciones fisiológicas.

Los glóbulos rojos en una solución en suero se añaden por separado y se mezclan con la solución anteriormente descrita de acuerdo con la presente invención, justo antes de la etapa de perfusión. Esta solución mixta, también llamada "solución en suero artificial", basada en la solución de evaluación y conservación de acuerdo con la presente invención, y la solución que contiene glóbulos rojos, se perfunde en el órgano, el tejido o partes de los mismos que se han de evaluar y representa una realización de la presente invención, en adelante denominada "solución mixta lista para ser usada de acuerdo con la presente invención" o, abreviadamente, "solución lista para ser usada".

La concentración de los ingredientes presentes en la solución de evaluación y conservación de acuerdo con la presente invención se expresa en g/L de la solución a mezclar con la solución de suero que contiene glóbulos rojos. La concentración de los ingredientes presentes en la solución mixta lista para ser usada de acuerdo con la presente invención, es decir, la solución para aplicar directamente o para perfundir el órgano, el tejido o partes de los mismos a evaluar y opcionalmente conservar antes del trasplante, se expresa en g/L de la "solución en suero artificial". Cuando se mezcla la solución de evaluación y conservación de acuerdo con la presente invención con la solución en suero que contiene glóbulos rojos, la concentración de los ingredientes de la solución original de evaluación y conservación se reduce ligeramente debido a un pequeño efecto de dilución, como parece a partir de los datos de concentración presentados más adelante. Este efecto de dilución es generalmente aproximadamente el 8% y afecta en principio solamente a los valores más altos de los intervalos de concentración presentados.

La expresión "órganos, tejidos y partes de los mismos" usada a lo largo del texto de la solicitud significa todas las partes del cuerpo que pueden ser trasplantadas actualmente y en el futuro.

La expresión "donante a corazón parado" ("non-heart-beating donor") usada a lo largo del texto de la solicitud significa un paciente para el cual el corazón se ha detenido irreversiblemente y se ha asumido la muerte cerebral, es decir, un periodo de un mínimo de 10 minutos en normotermia después del diagnóstico de parada cardíaca irreversible.

La expresión "albúmina de suero" usada a lo largo del texto de la solicitud significa albúmina derivada o purificada de una fuente de suero humano o animal o albúmina de suero recombinante producida por ingeniería genética. Cualquier derivado y análogo de la misma que tenga esencialmente la misma acción física en la presente invención se considera que está incluida en esta expresión.

La expresión "concentración fisiológica en suero" usada en el texto de la presente solicitud significa concentraciones en suero de las sustancias en cuestión que corresponden exactamente o esencialmente a la concentración normal en suero en la sangre humana y animal.

El término "pulmón" o "pulmones" usado a lo largo del texto de la solicitud incluye el pulmón o los pulmones enteros incluyendo los bronquios y también sus lóbulos y segmentos.

La albúmina de suero es una proteína plasmática soluble en agua. Se produce en el hígado y es importante para la presión oncótica de la sangre, también llamada presión coloidosmótica, es decir, tiene la capacidad de mantener el plasma de la sangre dentro de los vasos. Actúa también como proteína de transporte para muchas sustancias, p. ej. ácidos grasos. La albúmina de suero está cargada negativamente y está rodeada por iones sodio. Por consiguiente, es muy difícil que la albúmina de suero pase a través de la pared de los capilares. La presión oncótica de la sangre se mantiene normalmente en un nivel de 25 mm de Hg. P. ej., la albúmina de suero humano, que tiene un peso molecular (Pm) de 69.000 es demasiado grande para pasar a través de las paredes semipermeables de los capilares, y la concentración de la misma es normalmente aproximadamente 45 g/L de sangre. Como está cargada negativamente, la albúmina de suero atrae iones sodio, y esto añade aproximadamente 7 mm de Hg a la presión osmótica (el llamado efecto Donan). La presión hidrostática en el extremo arterial de los capilares es normalmente aproximadamente 30 mm de Hg y la presión hidrostática en el extremo venoso de los capilares es normalmente aproximadamente de 10 a 15 mm de Hg. Como se indicó anteriormente, en los capilares existe una presión oncótica intermedia de aproximadamente 25 mm de Hg, que hace que el agua salga por el extremo arterial y vuelva por el extremo venoso.

Como la albúmina de suero es responsable del mantenimiento de la presión oncótica correcta, tiene una función importante como sustancia coloidosmóticamente activa, que proporciona aproximadamente el 70% de la presión oncótica. Si una solución que contiene una composición en electrolitos satisfactoria que imita la del plasma normal, pero sin sustancias activas coloidosmóticamente, inmediatamente crearía una ganancia de peso debido a la formación de edema en el órgano a trasplantar. Como el plasma humano normal contiene también gammaglobulinas y otras moléculas de proteína, que proporcionan aproximadamente el 30% de la presión oncótica, el presente inventor ha encontrado que la solución de acuerdo con la presente invención no sólo debe contener albúmina de suero, sino también en una cantidad creciente con miras a compensar la presión oncótica inducida normalmente por las gammaglobulinas y otras moléculas de proteína, que están ausentes en la solución de acuerdo con la presente invención. En una solución acuosa de ensayo que contiene concentraciones extracelulares normales de sodio, potasio, calcio, magnesio, cloro, hidrógeno-carbonato, fosfato y glucosa y que tiene una osmolaridad normal de aproximadamente 290, se han ensayado distintas concentraciones de albúmina de suero humana en pulmones. A una concentración de aproximadamente 70 g/L en la solución lista para ser usada se obtuvieron los mejores resultados, es decir, los pulmones fueron perfundidos sin formación de edema. La presión oncótica en esta solución de ensayo fue aproximadamente 25 mm de Hg, es decir, correspondiente a la presión oncótica en los capilares pulmonares normales. Pueden obtenerse resultados satisfactorios con una concentración de albúmina de suero de 50 a 100 g/L en la solución lista para ser usada, con lo que tiene lugar un aceptable grado de formación de edema ligero en el extremo inferior del intervalo. Se obtienen mejores resultados con una concentración de albúmina de suero de aproximadamente 60 a 80 g/L en la solución lista para ser usada, pero los resultados óptimos se obtienen con una concentración de 70 g/L, como se afirmó anteriormente. Si se aumenta a más de 70 g/L, puede usarse una presión de perfusión más alta sin formación de edema. Para conseguir un flujo de perfusión para probar los pulmones para trasplante es necesaria una presión de perfusión de, cómo máximo, 20 mm de Hg. Así, con miras a evitar la formación sustancial de edema durante tal perfusión, la presión oncótica de la solución ha de ser al menos 5 mm de Hg más alta que la presión hidrostática.

La solución de evaluación y conservación de acuerdo con la presente invención comprende también un compuesto limpiador y de recubrimiento, que preferentemente se elige entre el grupo que comprende moléculas de dextrano, p. ej. Dextrano 40, Dextrano 60 y Dextrano 70 disponibles comercialmente, y derivados del mismo que tienen esencialmente la misma estructura. El Dextrano 40 es el compuesto de limpieza y recubrimiento más preferido de la presente invención. También podrían usarse moléculas de dextrano que tienen otros pesos moleculares, p. ej. desde valores tan bajos como 1 hasta tan altos como 250 kDa, más preferentemente desde 20 y hasta 150 kDa. Sin embargo, cuando se usa dextrano de 1 kDa, es decir Dextrano 1, la concentración debe ser de 10 a 140 g/L. Alternativas al Dextrano 1 son lactobionato, rafinosa y manitol, todos ellos con un peso molecular por debajo de 1000 Da.

El compuesto limpiador y de recubrimiento tiene varias actividades al mismo tiempo, y actúa como sustancia de recubrimiento para el endotelio capilar del órgano a trasplantar, como limpiador de sustancias tóxicas y otras sustancias no deseadas, y como agente destoxificante. Por razones de simplicidad, este compuesto se denomina "compuesto limpiador y de recubrimiento" en la presente solicitud. Otros compuestos que son compuestos limpiadores y de recubrimiento de acuerdo con la definición que se da en el presente texto podrían también estar presentes en la solución de acuerdo con la presente invención en combinación con compuestos de dextrano. Sin embargo, también existen compuestos limpiadores puros, es decir, que no tienen ningún efecto de recubrimiento, o sólo escaso, que tienen un efecto de limpieza similar o mejor que los compuestos de dextrano per se, p. ej. alopurinol, vitamina C, vitamina E, didox, trimidox. Así, tal limpiador puro, o combinaciones con el mismo, puede estar presente en la solución en combinación con el compuesto de dextrano, obteniéndose así un efecto aditivo o sinérgico. Además, en la solución de acuerdo con la presente invención también pueden estar presentes compuestos que tienen solamente efectos de recubrimiento en el endotelio capilar, es decir sin efecto, o tan sólo con un escaso efecto, limpiador o destoxificante, en combinación con el compuesto de dextrano o el compuesto limpiador puro, obteniéndose así un efecto aditivo o
sinérgico.

Los compuestos de dextrano han resultado ser los más eficaces para los fines de la presente invención ya que presentan todas las actividades necesarias antes mencionados. Las moléculas de dextrano están compuestas de unidades de glucosa en una cadena larga, y también están provistas de cadenas laterales de glucosa. El Dextrano 40 tiene un peso molecular (Pm) de 40.000 Da, y en correspondencia el peso molecular para el Dextrano 60 y 70 es 60.000 y 70.000 Da, respectivamente. Cuanto más alto es el peso molecular, tanto más larga es la molécula de
dextrano.

Los capilares de los pulmones tienen grandes poros con un diámetro de aproximadamente 30 nm. Las gammaglobulinas son suficientemente pequeñas para pasar a través de estos poros con el fin de introducirse en el espacio intersticial del capilar para atacar a los microorganismos y luego ser transportadas al exterior a través del sistema linfático.

Las moléculas de dextrano no están cargadas eléctricamente y tienen la capacidad de pasar a través de los poros grandes como si fuesen gusanos, es decir, es el diámetro de la molécula de dextrano lo que es decisivo para el paso, y no su longitud ni su peso molecular.

Cuando se evalúa un órgano que ha sido expuesto a isquemia caliente, la formación de edema puede considerarse como un daño de reperfusión, que se reduce sustancialmente usando un compuesto limpiador y de recubrimiento, preferentemente compuestos de dextrano, en particular Dextrano 40, en la solución debido a su capacidad de recubrir las membranas de los capilares. En consecuencia, será difícil que los leucocitos se peguen al endotelio del capilar y pasen a través de los capilares recubiertos con las moléculas de dextrano. Sin embargo, las moléculas de dextrano como tales contribuyen en parte a la formación de edema cuando pasan a través de los poros de la membrana del capilar. Así, la concentración de moléculas de dextrano ha de ser óptima, es decir, la concentración no debe ser tan alta como para que la formación de edema sea perjudicial, pero tampoco tan baja como para que sea insuficiente el efecto beneficioso global de limpieza y recubrimiento.

Entre varias concentraciones de dextrano ensayadas para Dextrano 40, ha mostrado resultados satisfactorios una concentración en el intervalo de 1 a 50 g/L en la solución lista para ser usada, en particular en el intervalo de 2 a 20 g/L, y especialmente a una concentración de 5 g/L. Una prueba de evaluación de 3 horas de un pulmón a la última concentración de Dextrano 40 mencionada anteriormente no dio ganancia de peso del pulmón, y, como la solución de evaluación y conservación se recircula en el pulmón, contiene suficiente Dextrano 40 para conseguir el recubrimiento efectivo de la membrana del capilar. Después de la evaluación y conservación con una solución de evaluación y conservación de acuerdo con la presente invención, los pulmones trasplantados han demostrado que el efecto completo se consigue con 5 g/L de Dextrano 40 en la solución lista para ser usada. En estas pruebas se usó una concentración de albúmina de suero de 70 g/L.

Como se estableció anteriormente, otras moléculas de dextrano son también efectivas, pero la concentración óptima depende en cierto modo del peso molecular de la molécula de dextrano. Sin embargo la concentración óptima para, p. ej., Dextrano 60 y Dextrano 70 es la misma o esencialmente la misma que para el Dextrano 40.

También, otro compuesto que tiene una función similar a la de la albúmina de suero en este contexto es un producto particular basado en ácido hialurónico, p. ej. modificado químicamente, y variantes del mismo que tienen esencialmente la misma estructura que la albúmina. Este producto basado en ácido hialurónico ha sido producido por degradación enzimática de ácido hialurónico original, seguida por la agregación controlada de los fragmentos y modulación formando un producto de forma globular de ácido hialurónico original que tiene una carga negativa y un peso molecular de aproximadamente 69 kDa, es decir, un producto que tiene tamaño, forma y carga similares a las de la albúmina de suero. La producción de este producto basado en ácido hialurónico modificado químicamente se describe, p. ej., en los documentos EP-B-0 556 213, WO 00/46253 y WO 00/46252. Este producto puede reemplazar a la albúmina de suero de forma parcial, u opcionalmente completa, en la solución de acuerdo con la presente invención, dando aún el efecto deseado. Sin embargo, debido al efecto Donan discutido anteriormente, la concentración óptima del producto basado en ácido hialurónico puede variar en \pm15% en relación con la concentración de moléculas de Dextrano en las soluciones de acuerdo con la presente invención. Si estos dos compuestos están presentes en la solución al mismo tiempo, la suma de las concentraciones de los mismos no debe exceder de 115 g/L.

La propia sangre de la persona o animal muertos, de los que se ha donado el órgano o tejido a trasplantar, no sería satisfactoria como solución de evaluación y/o conservación. En experimentos con cerdos, la sangre del cerdo muerto mostró productos tóxicos poco tiempo después de la muerte. Cuando esta sangre se bombea a través de sistemas de oxigenadores y bombas en una maquina pulmón-corazón, el sistema del complemento se activa y se producen otros productos tóxicos, con lo que resulta imposible una evaluación del pulmón.

La misma activación del sistema del complemento ocurre si el plasma y los glóbulos rojos de un banco de sangre, aun teniendo, el grupo sanguíneo correcto, se mezclan en una solución. Sin embargo, para conseguir una evaluación efectiva se han de añadir glóbulos rojos a la solución de evaluación. Así, se añade una solución en suero que contiene glóbulos rojos como complemento a la solución de evaluación y conservación de acuerdo con la presente invención. Preferentemente se usan glóbulos rojos de un banco de sangre lavados o purificados, es decir filtrados los leucocitos y radiados. En este contexto, la sangre recogida de donantes se libera de plasma y plaquetas. Convencionalmente, se añade una solución de CPD (citrato/fosfato/dextrosa) de forma que la fracción en volumen (EVF), también llamada valor de hematocrito, para los glóbulos rojos sea el 50%. Los resultados de evaluación óptimos se obtienen si se añaden 300 ml de tal solución de CPD convencional que contiene glóbulos rojos por cada litro de solución de evaluación y conservación de acuerdo con la presente invención como se define en la reivindicación 1ª. Por ello, debido a un ligero efecto de dilución, en tal solución mixta lista para ser usada y para ser añadida directamente al órgano o al tejido, o partes de los mismos, que se han de evaluar, la concentración de albúmina de suero es de 50 a 100 g/L, preferentemente de 60 a 80 g/L, y lo más preferentemente 70 g/L. La concentración de compuesto limpiador y de recubrimiento en el caso de los compuestos de dextrano es de 1 a 50 g/L, preferentemente de 2 a 20 g/L, y lo más preferentemente 5 g/L en la solución lista para ser usada. Para uso ex vivo durante la etapa de evaluación se alcanza una EVF, que define la fracción en volumen de eritrocitos, de 15 \pm 5% en volumen para la solución mixta con la que hay que perfundir. Los glóbulos rojos son perfectamente compatibles con dicha solución, y su función de absorción de oxígeno y emisión de dióxido de carbono es completamente normal en esta solución. Además, debe observarse que la solución convencional que contiene glóbulos rojos no debe ser añadida a la solución de acuerdo con la presente invención más que aproximadamente 30 minutos antes de iniciarse la perfusión, debido a problemas de
estabilidad.

Preferentemente, el medio aceptable fisiológicamente comprendido en la solución de acuerdo con la presente invención es agua.

También debe observarse que el problema de la formación de edema descrito anteriormente en conexión con la perfusión durante la evaluación del pulmón, es particularmente pronunciado para los pulmones. El mismo problema surge en correspondencia para otros órganos y tejidos a trasplantar, pero en menor cuantía.

En cirugía de trasplantes de un paciente donante a corazón parado, p. ej. una persona que ha muerto en una parada cardíaca aguda, el órgano o tejido a trasplantar, p. ej. un pulmón, ha de ser enfriado cuando está aún presente en el cadáver en el plazo de dos horas, preferentemente una hora, desde el fallecimiento. Los pulmones del cuerpo del donante pueden enfriarse a una temperatura de 8 a 12ºC sin riesgo de daños las próximas 24 horas. Para obtener este enfriamiento de los pulmones, la pleura se infunde inicialmente con una solución convencional para este propósito, por ejemplo una solución de Perfadex.

A continuación, el pulmón se recoge del cuerpo del donante y se pone en una máquina corazón-pulmón que comprende una bomba, un suministro de oxígeno, un oxigenador y un respirador. Después se rellena el pulmón con la solución mixta de la solución de evaluación y conservación de acuerdo con la presente invención y la solución en suero que contiene los glóbulos rojos, que tiene una EVF de 15 \pm 5% en volumen. Después se evalúa el pulmón con miras a decidir si es aceptable para trasplante, es decir, se evalúan los gases sanguíneos, el cumplimiento, cualquier trastorno de ventilación/perfusión, el desprendimiento de gas, y la función tensioactiva. Si es aceptable, el pulmón es trasplantado al cuerpo del receptor y tiene todas sus funciones fisiológicas importantes, y dicho trasplante, es decir, un trasplante con éxito de un pulmón procedente de un donante a corazón parado y la evaluación en la forma descrita anteriormente nunca se ha realizado hasta ahora.

La solución de evaluación y conservación de acuerdo con la presente invención trabaja también para la evaluación ex vivo de todos los órganos y tejidos del cuerpo humano y animal, y también para todos los órganos y tejidos procedentes de los donantes tradicionales con muerte cerebral pero a corazón latiente, tanto de origen humano como animal, y da también mejores resultados que las demás soluciones correspondientes conocidas hasta ahora. Es útil para todos los órganos en el aspecto de la conservación, excepto el corazón. Si se usa para conservar el corazón para almacenamiento isquémico frío, la concentración de potasio se ha de subir a 16-30 mmoles/l, preferentemente de 20 a 26 mmoles/l, y lo más preferentemente 23 mmoles/l. Esta aplicación general para todos los órganos y tejidos puede explicarse por el hecho de que como la solución de acuerdo con la presente invención es altamente eficiente para la evaluación de pulmones, que se sabe que son los más sensibles de todos los órganos debido a los grandes poros de la membrana capilar, tiene entonces que ser efectiva en todos los demás órganos debido a que sus poros son más pequeños.

Para la evaluación del corazón, la concentración de potasio en la solución de acuerdo con la presente invención ha de aumentarse desde el nivel normal de aproximadamente 4,5 up hasta aproximadamente 23, alcanzándose así la cardioplejía.

Ejemplos no exhaustivos de órganos y tejidos del mayor interés para trasplantar, y por tanto evaluados primero, son los pulmones, corazones, hígados, riñones, páncreas, intestino delgado, extremidades corporales, etc.

La solución mixta lista para ser usada de acuerdo con la presente invención debe hacerse circular por medio de una bomba que da la presión de perfusión fisiológica en el órgano a trasplantar. Además, la solución debe pasar por un oxigenador para suministrar oxígeno a los glóbulos rojos y absorber el CO_{2}. Si se usa plasma con glóbulos rojos procedente de un banco de sangre en un circuito cerrado con oxigenadores y tubos de plástico, la activación del sistema del complemento, sustancias y otros sistemas tóxicos impide una perfusión estable.

Las soluciones de acuerdo con la presente invención carecen de propiedades tóxicas cuando se usan en un sistema de evaluación cerrado que incluye oxigenadores y bombas. De esta forma el órgano que va a trasplantarse puede ser perfundido durante 24 horas o más, tiempo durante el cual no tiene lugar isquemia. Durantes las pruebas los corazones han sido conservados con la solución mixta lista para ser usada de acuerdo con la presente invención (con una concentración de potasio de 23 mmol/l), que ha sido oxigenada mediante un oxigenador y bombeada a través del corazón durante 24 horas, seguido por el trasplante del corazón, que mostró una función perfecta desde el primer momento. Si la solución de conservación y evaluación de acuerdo con la presente invención se mezcla con glóbulos rojos a una EVF de 15 \pm 5% en volumen, los pulmones de donantes a corazón parado pueden ser evaluados y, después de la evaluación, los pulmones pueden ser conservados durante al menos 36 horas antes del trasplante mediante almacenamiento isquémico frío a 4ºC.

Ejemplos de dos soluciones de evaluación y conservación preferidas de acuerdo con la presente invención son los siguientes:

Una realización preferida de la solución de evaluación y conservación de acuerdo con la presente invención consiste en los componentes siguientes en la concentración que se indica.

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Componente	Concentración
Dextrano 40	5 g/L
Cloruro sódico	98 mmoles/L
Cloruro potásico	0,49 mmoles/L
Cloruro cálcico	1,4 mmoles/L
Sulfato de magnesio	1,2 mmoles/L
Dihidrógeno fosfato potásico	0,042 mmoles/L
Hidrógeno fosfato dipotásico anhidrato	0,84 mmoles/L
Hidrógeno fosfato disódico dihidrato	0,029 mmoles/L
Bicarbonato sódico	14 mmoles/L
Acetato potásico	2,9 mmoles/L
Albúmina Centeon (200 mg/ml)	64 g/L
Hidróxido sódico (1 M)
Agua estéril

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Los componentes se disuelven en agua estéril y el pH se ajusta en 7,4 con hidróxido sódico.

Otra realización preferida de la solución de evaluación y conservación de acuerdo con la presente invención consiste en los siguientes componentes en las concentraciones que se indican.

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Componente	Concentración
Dextrano 40	5 g/L
Cloruro sódico	86 mmoles/L
Cloruro potásico	4,6 mmoles/L
Cloruro cálcico dihidrato	1,5 mmoles/L
Dihidrógeno fosfato sódico dihidrato	1,2 mmoles/L
Bicarbonato sódico	15 mmoles/L
Dicloruro de magnesio hexahidrato	1,2 mmoles/L
D(+)-glucosa monohidrato	11 mmoles/L
Albúmina de suero humana	70 g/L
Hidróxido sódico (1 M)
Agua estéril

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Los componentes se disuelven en agua estéril y se ajusta el pH en 7,4 con hidróxido sódico. La solución mixta lista para ser usada de acuerdo con la presente invención se obtiene mezclando cada una de las dos soluciones de la realización preferida (1000 ml) con 300 ml de la solución de CPD anteriormente descrita.

La solución de evaluación y conservación de acuerdo con la presente invención más preferida para un corazón es similar a la de los pulmones, pero tiene una concentración de potasio más alta, como se definió antes.

Experimentos

Una ganancia de peso del pulmón durante la etapa de evaluación antes del trasplante es significativa de una formación de edema no deseada, que ocurre cuando se usa una solución de ensayo que no contiene las concentraciones correctas de albúmina de suero.

Se han realizado diferentes experimentos para soluciones de evaluación que contienen diferentes componentes durante la evaluación de un pulmón. La ganancia de peso (expresada en kg) se midió frente al tiempo durante un caudal de perfusión constante.

Una solución lista para ser usada que no contiene albúmina de suero ni compuesto limpiador ni de recubrimiento dio una ganancia de peso significativa, que indica la escasez de tal solución, como se muestra en la Fig. 1.

Una solución lista para ser usada que contiene Dextrano 40, pero que no contiene albúmina de suero humana, dio una ganancia de peso incluso más sustancial con el tiempo, como se muestra en la Fig. 2.

Una solución lista para ser usada que contiene 70 g/L de albúmina de suero humana, pero no Dextrano 40, dio una ganancia de peso con el tiempo insatisfactoria, como se muestra en la Fig. 3.

Una solución lista para ser usada que contiene 35 g/L de albúmina de suero humana y 25 g/L de Dextrano 40, dio una ganancia de peso con el tiempo insatisfactoria, como se muestra en la Fig. 4. Esta ganancia de peso depende de la concentración demasiado alta de Dextrano D 40, es decir 25 g/L y la concentración demasiado baja de albúmina, es decir 35 g/L.

Una solución lista para ser usada que contiene 70 g/L de albúmina de suero y 5 g/L de Dextrano 40 no dio ganancia de peso con el tiempo, como se muestra en la Fig. 5. Esta solución representa una solución mixta lista para ser usada de acuerdo con la presente invención, es decir tanto la albúmina de suero como el Dextrano 40 en concentraciones correctas.

La presente invención se refiere también a un método para evaluar ex vivo en condiciones normotérmicas un órgano o un tejido a trasplantar, en el que dicho órgano o tejido es perfundido con la solución de evaluación y conservación de acuerdo con la presente invención, mezclada con la solución en suero que contiene glóbulos rojos, seguido por la evaluación del órgano o el tejido, y la conservación opcional en la misma solución hasta el trasplante. Para pulmones, el caudal de perfusión durante la evaluación es aproximadamente 4 litros/minuto, la temperatura es aproximadamente 37ºC y la máxima presión de perfusión es aproximadamente 20 mm de Hg. El caudal de perfusión es más bajo cuando se perfunden otros órganos. Para la evaluación de un riñón, la presión de perfusión ha de ser tan alta como aproximadamente 90 mm de Hg.

La presente invención se refiere también a un método de preparación de un órgano, un tejido o una parte de los mismos, procedentes de un paciente para el cual el corazón se ha parado irreversiblemente y se asume la muerte cerebral, en el que el órgano, el tejido o parte de los mismos, que han sido previamente recogidos del cuerpo del paciente, se perfunde con la solución de evaluación y conservación mezclada con la solución de suero que contiene glóbulos rojos de acuerdo con la reivindicación 18ª, se evalúa el órgano, el tejido o la parte de los mismos, y, si el órgano, el tejido o la parte de los mismos son aceptables para trasplante, se conserva en dicha solución de evaluación y conservación. Preferentemente dicho órgano es un pulmón.

Debe observarse también que la solución de evaluación y conservación de acuerdo con la presente invención es aplicable a alo- y xeno-trasplantes.

Claims

1. Una solución de evaluación y conservación para órganos y tejidos humanos y animales, y partes de los mismos, caracterizada porque comprende albúmina de suero en una concentración de 55 a 105 g/L, un compuesto limpiador y de recubrimiento a una concentración de 1 a 55 g/L, y una concentración fisiológica en suero de sales y nutrientes en un medio aceptable fisiológicamente.

2. La solución según la reivindicación 1ª, en la que el compuesto de limpieza y de recubrimiento tiene un peso molecular entre 1 y hasta 250 kDa.

3. La solución según las reivindicaciones 1ª y 2ª, en la que el compuesto de limpieza y de recubrimiento tiene un peso molecular entre 20 y hasta 150 kDa.

4. La solución según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el compuesto de limpieza y de recubrimiento es dextrano y derivados del mismo que tienen esencialmente la misma estructura.

5. La solución según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el compuesto de limpieza y de recubrimiento es Dextrano 40.

6. La solución según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la concentración de albúmina de suero es 65 a 85 g/L, y la concentración del compuesto de limpieza y recubrimiento es de 2 a 20 g/L.

7. La solución según la reivindicación 6ª, en la que la concentración de albúmina de suero es 70 g/L, y la concentración del compuesto de limpieza y recubrimiento es de 5 g/L.

8. La solución según la reivindicación 1ª, en la que las sales comprenden uno o más de los iones sodio, potasio, calcio, magnesio, fosfato, hidrógeno-carbonato y cloruro; y los nutrientes comprenden uno o más carbohidratos, ácidos grasos y aminoácidos fisiológicamente aceptables.

9. La solución según la reivindicación 8ª, en la que el carbohidrato aceptable fisiológicamente es glucosa.

10. La solución según la reivindicación 1ª, que también contiene uno o más de los siguientes componentes: un vasodilatador, antibióticos, componentes fibrinolíticos, bloqueantes del receptor de trombocitos y hormonas.

11. La solución según la reivindicación 10ª, en la que el vasodilatador es papaverina, el compuesto fibrinolítico es altepas, el bloqueante del receptor de trombocitos es abciximab y las hormonas son tiroxina/triyodotironina, insulina, cortisona, hormona del crecimiento o esteroides anabólicos.

12. La solución según la reivindicación 1ª, que también contiene un compuesto limpiador puro, vitamina E, vitamina C, didox o trimidox; y/o un compuesto que tiene efecto de recubrimiento del endotelio.

13. La solución según la reivindicación 12ª, en la que el compuesto limpiador puro es alopurinol.

14. La solución según la reivindicación 1ª, en la que la albúmina de suero es humana o albúmina de suero animal o albúmina de suero recombinante producida por ingeniería genética.

15. La solución según la reivindicación 1ª, que también comprende un compuesto basado en ácido hialurónico que tiene un peso molecular de aproximadamente 69 kDa.

16. La solución según la reivindicación 1ª, en la que los órganos se eligen entre pulmones, corazones, riñones, hígados, páncreas o intestinos delgados.

17. La solución según la reivindicación 16ª, en la que los órganos son pulmones.

18. Una solución mixta lista para ser usada basada en una solución según una cualquiera de las reivindicaciones 1ª a 17ª, que también comprende glóbulos rojos y tiene una EVF (fracción en volumen de eritrocitos) de 15 \pm 5%, y en la que la concentración dee albúmina de suero es de 50 a 100 g/L de la solución lista para ser usada, y la concentración de los compuestos limpiador y de recubrimiento en el caso de compuestos de dextrano es de 1 a 50 g/L de la solución lista para ser usada.

19. La solución mixta según la reivindicación 18ª, en la que la concentración de albúmina de suero es de 60 a 80 g/L y la concentración de compuesto limpiador y de recubrimiento es de 2 a 20 g/L.

20. La solución mixta según la reivindicación 19ª, en la que la concentración de albúmina de suero es 70 g/L y la concentración de compuesto limpiador y de recubrimiento es 5 g/L.

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21. Un método para la evaluación ex vivo de órganos y tejidos humanos y animales, y partes de los mismos, para trasplante en condiciones normotérmicas, que comprende las etapas de perfundir el órgano, el tejido o las partes de los mismos, con la solución según la reivindicación 18ª, y medir los parámetros de evaluación.

22. Un método según la reivindicación 21ª, en el que un pulmón es perfundido, evaluado y opcionalmente conservado.

23. Un método para preparar un órgano, un tejido o una parte de los mismos, tomados de un paciente cuyo corazón se ha parado irreversiblemente y se ha asumido la muerte cerebral, en el que el órgano, el tejido o la parte de los mismos han sido previamente extraídos del cuerpo del paciente, se perfunde con la solución según la reivindicación 18ª, y se evalúa, y, si el órgano, el tejido o la parte de los mismos son aceptables para trasplante, se conserva opcionalmente en dicha solución.

24. Un método según la reivindicación 23ª, en el que el órgano, el tejido o parte de los mismos se van a alo- o xeno-trasplantar.

25. El uso de una solución según la reivindicación 1ª o 18ª para la evaluación de órganos y tejidos humanos y animales, y partes de los mismos tomados de un paciente, cuyo corazón se ha parado irreversiblemente y se ha asumido la muerte cerebral.