ES2264932T3 - Metodo para obtener una planta con una resistencia perdurable a un patogeno. - Google Patents
Metodo para obtener una planta con una resistencia perdurable a un patogeno. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2264932T3 ES2264932T3 ES00923018T ES00923018T ES2264932T3 ES 2264932 T3 ES2264932 T3 ES 2264932T3 ES 00923018 T ES00923018 T ES 00923018T ES 00923018 T ES00923018 T ES 00923018T ES 2264932 T3 ES2264932 T3 ES 2264932T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- plant
- resistance genes
- resistance
- dna
- sativa
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
- C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/13—Plant traits
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Botany (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Un método para obtener una planta Lactuca sativa con dos o más genes de resistencia a Dm a Bremia lactucae, que comprende: a. proporcionar uno o más marcadores de DNA, ligados a uno o más genes de resistencia a Dm en una planta de lechuga silvestre; b. determinar la presencia de uno o más genes de resistencia a Dm en la planta de lechuga silvestre utilizando estos marcadores de DNA; c. cruzar la planta de lechuga silvestre que contiene uno o más genes de resistencia a Dm, con una planta de L. sativa; d. seleccionar de su progenie una planta con uno o más genes de resistencia a Dm, utilizando marcadores de DNA; e. cruzar la planta seleccionada que contiene uno o más genes de resistencia a Dm, con la planta de lechuga silvestre que contiene uno o más genes de resistencia a Dm; y f. seleccionar de su progenie una planta de L. sativa que contiene dos o más genes de resistencia a Dm; y g. opcionalmente, repetir las etapas (e) y (f) al menos una vez; donde la planta de lechuga silvestre es L. virosa, y donde el marcador de DNA se selecciona del grupo que consiste en los marcadores de DNA que contienen una secuencia de DNA como las mostradas en las figuras 1-6, o una secuencia de DNA que tiene al menos un 70%, preferiblemente al menos un 80%, más preferiblemente al menos un 90%, y más preferiblemente al menos un 95% de homología con la secuencias de DNA mostradas en las figuras 1-6
Description
Método para obtener una planta con una
resistencia perdurable a un patógeno.
La presente invención se refiere a un método
para obtener una planta con una resistencia perdurable a un
patógeno. La invención también se refiere a una planta en la que
están presentes dos o más genes de resistencia al patógeno, además
de en las semillas y la progenie de esta planta, y su progenie.
La invención se refiere particularmente a un
método para obtener una planta de lechuga (L. sativa) de
cultivo, que tiene dos o más genes de resistencia a Bremia
lactucae. La invención también se refiere a marcadores de DNA
que están ligados específicamente a un gen de resistencia a
Bremia lactucae. La invención además se refiere a una planta
de lechuga (L. sativa) de cultivo, en la que están presentes
dos o más genes de resistencia a Dm, y en las semillas de
esta planta.
La enfermedad causada por el hongo Bremia
lactucae Regel es conocida como Mildiu. El mildiu aparece en
todo el mundo y representa un gran problema tanto para el
rendimiento como para la calidad de la lechuga de cultivo. El hongo
puede infectar a la planta de lechuga en cualquier estado de
crecimiento, después de lo cual, los primeros síntomas del mildiu
consisten en la aparición de manchas amarillas cloróticas sobre la
superficie de la hoja. En las siguientes 24 a 48 horas se hace
visible el crecimiento de un hongo blanquecino algodonoso en la
parte inferior de la superficie de la hoja, como indicación de la
formación de esporas. Durante la infección las lesiones se hacen
cada vez mayores y más cloróticas, hasta que las hojas se vuelven
completamente marrones.
La Bremia lactucae es uno de los llamados
Oomicetos, una clase de hongos relativamente primitivos. Otros
hongos conocidos de este grupo son, por ejemplo, el Phytium
o la Phytophtora. El hongo B. lactucae contiene
diferentes especies fisiológicas ("fisios") y es específico de
huésped. La Bremia lactucae es conocida por ser un patógeno
muy variable. Nuevos fisios ocurren con relativa frecuencia, a
través de mutaciones de los genes de virulencia, durante la
formación de esporas que precede a la propagación de la B.
lactucae.
Dentro del género lactucae, a la que
pertenece la lechuga de cultivo (Lactuca sativa), hay
diferentes especies que son resistentes a la Bremia lactucae
Regel. La resistencia está basada en la mayoría de los casos en
genes cualitativos, conocidos como genes de resistencia a Dm
(Dm = Downy mildew -mildiu-). El mecanismo de resistencia se
conoce como un principio de trabajo
gen-por-gen, basado en la
interacción específica entre productos del gen de resistencia a
Dm y el gen de virulencia específico de patógeno, que da como
resultado la resistencia de la planta de lechuga (Michelmore et
al., Plant Pathology 33, 301-315, 1984). Este
mecanismo de resistencia también ha sido demostrado para otros
diversos genes de resistencia en otras especies de plantas
diferentes (Michelmore et al., Genome Research, 8,
1113-1130, 1998).
Un gran número de genes de resistencia a
Dm han sido ya identificado como capaces de conferir
resistencia a fisios específicos de la Bremia lactucae
Regel. La investigación genética ha mostrado que estos genes de
resistencia a Dm aparecen frecuentemente agrupados en grupos
sobre el mismo cromosoma. Se han demostrado cuatro de dichos grupos
de ligamiento localizados en diferentes cromosomas en el genoma de
la lechuga, que contienen diferentes genes de resistencia a
Dm (Farrara et al., Plant Pathology 36,
499-514, 1987). Los genes de resistencia a
Dm nuevamente identificados pueden clasificarse dentro de uno
de los grupos de ligamiento de genes de resistencia conocidos.
Un problema fundamental, sin embargo, es que los
fisios de Bremia lactucae continúan apareciendo, y rompen la
resistencia resultante de los genes de resistencia a Dm en
las presentes variedades de lechuga de cultivo. Esto implica que
aparecen fisios de Bremia lactucae a los que no hay
resistencia en las presentes variedades de lechuga de cultivo. Los
genes de resistencia pueden, sin embargo, encontrarse algunas veces
todavía en variedades de lechuga antiguas, pero particularmente en
especies de Lactucae silvestres relacionadas con la lechuga
de cultivo, tales como por ejemplo la L. virosa y la L.
serviola. Se han identificado un número de genes de resistencia
a Dm de amplio espectro, con resistencia a todos los fisios
de Bremia analizados.
Se han descrito métodos para mapear los genes
R17 y R18 de resistencia a Dm de la L. serriola,
utilizando marcadores de DNA (Maisonneuve et al., TAG 89,
96-104, 1994).
Los genes de resistencia a Dm procedentes
de especies de lechuga de cultivo antiguas o procedentes de especies
de lechuga silvestres, pueden cruzarse en la lechuga de cultivo,
para obtener otra vez la resistencia. El cruce de genes de
resistencia a Dm se ha demostrado de una forma convencional,
mediante un ensayo de enfermedad por Bremia lactucae
artificial. Para este propósito, se inoculan un número de círculos
cortados de hoja (diámetro 18-20 mm) o plántulas de
la planta de lechuga, con diferentes fisios de B. lactucae.
Después de 10 a 14 días, se examina el grado de desarrollo y
esporulación en los círculos cortados/plántulas. Sobre esta base es
posible juzgar si la planta de lechuga analizada o una línea
mejorada, es resistente o susceptible a los fisios de B.
lactucae ensayados.
Cuando se conoce que dos o más nuevos genes de
resistencia a Dm ocurren en dos diferentes grupos de
ligamiento, estos genes de resistencia pueden agruparse juntos
("amontonarse") en una planta de lechuga de cultivo mediante
entrecruzamiento, reduciendo así el peligro de que la resistencia se
rompa. El agrupamiento de una pluralidad de genes de resistencia a
Dm cualitativos de amplio espectro a partir de diferentes
grupos de ligamiento, puede sin embargo no ser detectado con el
ensayo convencional de enfermedad por Bremia lactucae porque,
cuando está presente un gen de resistencia a Dm cualitativo,
la resistencia total se detecta ya en el ensayo de la enfermedad, y
la posible presencia de un segundo gen de resistencia a Dm de
amplio espectro, no será por lo tanto detectado. No es por lo tanto
posible seleccionar precisamente aquellas plantas en las que están
presentes genes de resistencia a Dm de amplio espectro
cualitativos, y de esta forma obtener plantas con una resistencia
perdurable a la B. lactucae.
Es por lo tanto deseable un método a desarrollar
con el cual, después de cruzar los genes de resistencia cualitativos
en una planta, puedan ser identificadas y seleccionadas aquellas
plantas en las que están presentes dos o más genes de
resistencia.
El objetivo general de la presente invención es
por lo tanto proporcionar un método para obtener una planta con
resistencia perdurable a un patógeno. Un objetivo particular de la
presente invención es proporcionar un método para obtener una planta
de lechuga (L. sativa) de cultivo, con una resistencia
perdurable a B. lactucae.
La invención proporciona para este propósito un
método para obtener una planta con una resistencia perdurable a un
patógeno, que comprende la provisión de uno o más marcadores de DNA
ligados a uno o más genes de resistencia, que determinan la
presencia de uno o más genes de resistencia en una planta,
utilizando estos marcadores de DNA, cruzando posteriormente una
primera planta, que contiene uno o más genes de resistencia, con una
segunda planta que contiene uno o más genes de resistencia, y
seleccionar de la progenie una planta en la que están presentes dos
o más genes de resistencia, utilizando los marcadores de DNA.
La presente invención particularmente
proporciona un método para obtener una planta de lechuga (L.
sativa) de cultivo, con una resistencia perdurable a la
Bremia lactucae, que comprende proporcionar uno o más
marcadores de DNA específicos, ligados a uno o más genes de
resistencia a Dm, que determinan la presencia de uno o más
genes de resistencia a Dm en una planta de lechuga de cultivo
y/o en una planta de lechuga silvestre utilizando estos marcadores
de DNA, cruzando posteriormente una planta de lechuga de cultivo que
contiene al menos uno o más genes de resistencia a Dm, con
otra planta de lechuga de cultivo o una planta de lechuga silvestre
que contiene al menos uno o más genes de resistencia a Dm, y
seleccionando de su progenie una planta de lechuga de cultivo con
dos o más genes de resistencia a Dm, utilizando los
marcadores de DNA.
Con el método según la invención, pueden
obtenerse de forma fácil plantas, particularmente plantas de lechuga
de cultivo, que contienen dos o más genes de resistencia,
particularmente dos o más genes de resistencia a Dm, con una
resistencia perdurable a un patógeno, particularmente la Bremia
lactucae. La selección de plantas en las que están presentes
dos o más genes de resistencia cualitativos, pueden conseguirse
únicamente utilizando marcadores de DNA, que pueden demostrar los
genes específicos en el genoma de la planta de lechuga. Con los
ensayos de enfermedad convencionales no es posible demostrar la
presencia de dos o más genes de resistencia cualitativos en una
planta de lechuga de cultivo. El método según la invención también
puede utilizarse para genes de resistencia cualitativos.
Según la invención los genes de resistencia son
preferiblemente genes de resistencia cualitativos, y los genes de
resistencia están localizados preferiblemente en diferentes grupos
de ligamiento.
Para permitir la identificación y la selección
de una planta con dos o más genes de resistencia, se utilizan
marcadores moleculares específicos de DNA ligados a los genes de
resistencia. Pueden utilizarse aquí para ello diferentes marcadores
de DNA, tales como por ejemplo RAPD (DNA polimórfico amplificado al
azar), AFLP (fragmento amplificado de longitud polimórfica), SCAR
(región amplificada caracterizada por secuencia), etc. Los
marcadores de DNA específicos ligados a los genes de resistencia se
desarrollan de acuerdo con técnicas conocidas por sí mismas (Paran
et al., Genome 34, 1021-1027, 1991; Paran
et al., TAG 85, 985-993, 1993). La
aplicación de dichos marcadores de DNA para agrupar diferentes genes
de resistencia en una misma planta, en particular para combinar
diferentes genes de resistencia a Dm de amplio espectro en
una planta de lechuga (L. sativa), para obtener una planta,
particularmente una planta de lechuga de cultivo (L. sativa),
con una resistencia perdurable a un patógeno, particularmente a la
Bremia lactucae, no ha sido sin embargo previamente
descrita.
Según la presente invención, se han encontrado
marcadores de DNA para cuatro genes de resistencia a Dm,
particularmente genes de resistencia a Dm de amplio espectro
cualitativos de la familia Lactuca. Utilizando estos
marcadores de DNA, se ha establecido que los cuatro genes de
resistencia a Dm se localizan en grupos de ligamiento
separados, por lo que es posible el agrupamiento de los genes de
resistencia a Dm en la lechuga de cultivo (L.
sativa).
Hay diferentes métodos de demostrar si
diferentes genes de resistencia están presentes en el mismo o en
diferentes grupos de ligamiento. La posición de los marcadores de
DNA puede determinarse generando un así llamado mapa genético, o
estudiando la segregación dependiente o independiente de los
diferentes marcadores de DNA en relación los unos con los otros. En
la presente invención se ha determinado, estudiando la segregación
de los marcadores de DNA, que los marcadores de DNA específicos
ligados a los genes de resistencia a Dm se segregan
independientemente unos de otros y están por lo tanto localizados
en cuatro grupos de ligamiento diferentes.
En la investigación que ha dado lugar a la
presente invención, los individuos susceptibles y resistentes al
mismo fenotipo de B. lactucae de una población de plantas que
se segregan según la resistencia a B. lactucae, se ensayaron
con cebadores RAPD obtenibles comercialmente (OPA-01
a OPAN-20, Operon Technologies, Alameda, USA; UBC 1
a 800, University of British Columbia, Vancouver, Canada). El
análisis RAPD es una técnica conocida por si misma (Williams et
al., Nucleic Acid Research, 18, 6531-6535,
1990), basada en la utilización de cebadores con una secuencia al
azar, que tiene el propósito de amplificar fragmentos al azar del
DNA genómico. Entre los productos de amplificación pueden
demostrarse polimorfismos en un gel de agarosa y pueden utilizarse
como marcadores genéticos.
Para el estudio se utilizaron 1600 cebadores (de
Operon Technologies, y la Univeristy of British Columbia, UBC 1 a
800). El DNA de las plantas se mezcló con los cebadores en una
mezcla de amplificación adecuada y posteriormente se amplificó. Los
productos de amplificación se analizaron en gel de agarosa para la
presencia de marcadores de DNA adecuados.
Los marcadores moleculares de DNA
"candidatos", encontrados en el análisis RAPD, se ensayaron en
individuos de la población segregada, en la que después fue posible
establecer cual de estos marcadores de DNA estaba ligado
físicamente de una forma adecuada a los diferentes genes de
resistencia a Dm cualitativos estudiados. De esta forma se
han identificado los siguientes marcadores de DNA: marcador de DNA A
(cebador OPAF06, 451 pares de bases); marcador de DNA B (cebador
OPAM10, 555 pares de bases); marcador de DNA C1 (cebador OPW16, 750
pares de bases); marcador de DNA C2 (cebador OPL03, 276 pares de
bases); marcador de DNA C3 (cebador OPAE19, 675 pares de bases);
marcador de DNA C4 (cebador UBC711, 1083 pares de bases); y marcador
de DNA D1 (cebador OPW04, 520 pares de bases) y marcador de DNA D2
(cebador OPW19, 963 pares de bases). La secuencia de los marcadores
A, B, C2, C3, C4 y D2 se determinó, y se muestra en las figuras
1-6.
Los marcadores de DNA encontrados se utilizaron
posteriormente para seleccionar plantas de lechuga de cultivo con
dos o más genes de resistencia a Dm, después de la
introgresión de los genes de resistencia de especies de lechuga
silvestre, tales como por ejemplo Lactuca virosa y L.
serriola. El cruce en variedades de lechuga de cultivo de dos o
más genes de resistencia, particularmente genes de resistencia a
Dm de amplio espectro cualitativos, procedentes de especies
de lechuga silvestres, tales como por ejemplo la L. virosa,
no se ha descrito previamente.
Si el cruce de dos plantas de lechuga no tiene
éxito con los métodos normales, pueden utilizarse para el cruce de
los genes de resistencia a Dm en una planta de lechuga de
cultivo técnicas conocidas de biología celular, tales como el
rescate de embriones (Maisonneuve, Agronomie 7,
313-319, 1987) o la fusión de protoplastos
(Maisonneuve et al., Euphytica 85, 281-285,
1995). En la presente invención, los diferentes genes de resistencia
a Dm se cruzaron como se describe en el Ejemplo 2.
La introducción de un nuevo gen de resistencia a
Dm de amplio espectro en uno de los cuatro grupos de
ligamiento conocidos puede dar como resultado, como consecuencia de
procesos de recombinación, la salida de genes de resistencia a
Dm ya presentes en el grupo de ligamiento, y de otros genes
de resistencia o rasgos de horticultura con elevado valor. Para
prevenir esto, los nuevos genes de resistencia cualitativos con una
resistencia a Dm de amplio espectro, se introducen
preferiblemente en cada uno de los grupos de ligamiento
separados.
La planta de lechuga silvestre utilizada por el
método según la invención puede elegirse por ejemplo entre L.
saligna, L. altaica, L. aculeata, L. homblei, L. indica, L.
tenerrima, L. squarrosa, L. viminea, L. augustana, L. quercina, y L.
cacadensis. Sin embargo, otras plantas de lechuga silvestre
adecuadas pueden utilizarse también según la invención. La planta
de lechuga silvestre es preferiblemente L. virosa o L.
serviola, más preferiblemente L. virosa.
El método según la invención es utilizado
preferiblemente para proporcionar genes de resistencia cualitativos,
tal como los genes de resistencia a Dm, en lechugas de
cultivo (L. sativa). Éstas además incluyen, por ejemplo, las
variedades de lechuga con cabeza (L. sativa Lineaus
capitata), tales como la lechuga iceberg, la lechuga batavia y
la lechuga de cabeza de mantequilla, variedades de lechuga de hoja
para picar (L. sativa Lineaus acephala), tales como la
lechuga de hoja rizada y la lechuga de tallo, la lechuga cos (L.
sativa Lineaus romana), la lechuga de hoja para cortar (L.
sativa Lineaus secalina) y la lechuga espárrago (L. sativa
Lineaus angustana).
El método según la invención para obtener una
planta con una resistencia perdurable a un patógeno, tal como se ha
descrito para la lechuga de cultivo, puede utilizarse de forma
similar para otras plantas de cultivo, y para otros patógenos. Como
ejemplos no limitantes se mencionan por ejemplo, la obtención de una
resistencia perdurable a determinados nematodos, tales como
Meloidogyne javanica, M. arenaria, y M. incognita, o
al Oidium lycopersici en tomate, y obtener una resistencia
perdurable a potyvirus en el pimiento, mediante la introducción
mediante cruce de dos o más genes de resistencia a pvr (pvr =
resistencia a potyvirus).
La presente invención además proporciona
marcadores de DNA que están ligados específicamente a un gen de
resistencia a Dm, y que comprenden un fragmento de DNA con
una secuencia que es al menos un 70%, preferiblemente al menos un
80%, más preferiblemente al menos un 90%, y todavía más preferible
al menos un 95% homóloga a una secuencia como las que se muestran en
las figuras 1-6.
La invención además se refiere a una planta en
la que están presentes dos o más genes de resistencia a un patógeno,
generalmente, y particularmente a una planta de lechuga de cultivo
(L. sativa) en la que están presentes dos o más genes de
resistencia a Dm, y a las semillas y la progenie de la
planta, particularmente la planta de lechuga de cultivo, o su
progenie.
Una resistencia perdurable se entiende por lo
tanto que significa en la presente invención, que están presentes
en una planta al menos dos o más genes de resistencia, por ejemplo
dos o más genes de resistencia a Dm, a un patógeno. El
patógeno es por ejemplo B. lactucae, pero puede también ser
cualquier otro organismo capaz de producir enfermedad en plantas,
tal como por ejemplo hongos, virus, nematodos, bacterias, insectos
(parásitos), etc.
En una realización particularmente adecuada del
método según la invención, un gen de resistencia a Dm es un
gen de resistencia a Dm de amplio espectro, cualitativo al
hongo Bremia lactucae.
La invención se describe con mayor detalle con
referencia a los siguientes ejemplos y figuras no limitantes, en las
cuales:
Las figuras 1-6 muestran
respectivamente la secuencia de los marcadores de DNA A, B, C2, C3,
C4, D2; y
Las figuras 7-14 muestran ocho
marcadores de DNA según la invención, en 24 individuos F2
analizados. El marcador A fue identificado con el cebador OPAF6
(451 pares de bases); el marcador B fue identificado utilizando el
cebador OPAM10 (555 pares de bases); el marcador C1 utilizando el
cebador OPW16 (750 pares de bases);
el marcador C2 utilizando el cebador OPL03 (276
pares de bases); el marcador C3 utilizando el cebador OPAE19 (675
pares de bases) y el marcador C4 utilizando el cebador UBC711 (1083
pares de bases); el marcador D1 fue identificado con el cebador
OPW04 (520 pares de bases), y el marcador D2 con el cebador OPW19
(963 pares de bases).
\vskip1.000000\baselineskip
Las técnicas utilizadas para proporcionar
marcadores de DNA moleculares rápidos y dirigidos, cercanamente
asociados con los genes de resistencia a B. lactucae son conocidas
por sí mismas (Paran et al., Genome 34,
1021-1027, 1991; Paran et al., TAG 85,
985-993, 1993; Williams et al., Nucleic Acid
Research, 18, 6531-6535, 1990), y pueden utilizarse
de una forma similar para la identificación de marcadores de DNA en
otros cultivos.
De una población (véase esquema de cruce,
ejemplo 2) de más de 300 plantas que se segregan para resistencia a
B. lactucae, se agruparon separadamente los individuos
susceptibles y resistentes al mismo fenotipo de B. lactucae
(5 plantas por grupo). Estos grupos se examinaron utilizando 1600
cebadores RAPD disponibles comercialmente (Operon Technologies,
Alameda USA, OPA-01 a OPAN-20; y
University of British Columbia UBC 1 a 800). La mezcla de PCR para
los marcadores A, B, C1, C2, C3, C4, D1 y D2 se amplificó bajo
condiciones de RAPD estándar.
Después de determinar los marcadores de DNA
moleculares candidatos utilizando el análisis RAPD en los grupos de
DNA, estos marcadores de DNA se analizaron en individuos de la
población segregada, en la que después era posible determinar
cuales de estos marcadores de DNA estaban mejor ligados físicamente
al gen de resistencia a Dm cualitativo, con una resistencia
de amplio espectro a B. lactucae.
Para cada uno de los 4 genes examinados con una
resistencia de amplio espectro a Dm, los marcadores de DNA
moleculares mejor ligados se muestran en las Figuras
1-6. El marcador A fue identificado con el cebador
OPAF6 (451 pares de bases); el marcador B fue identificado
utilizando el cebador OPAM10 (555 pares de bases); el marcador C1
utilizando el cebador OPW16 (750 pares de bases); el marcador C2
utilizando el cebador OPL03 (276 pares de bases); el marcador C3
utilizando el cebador OPAE19 (675 pares de bases) y el marcador C4
utilizando el cebador UBC711 (1083 pares de bases); el marcador D1
fue identificado con el cebador OPW04 (520 pares de bases), y el
marcador D2 con el cebador OPW19 (963 pares de bases).
\vskip1.000000\baselineskip
En este ejemplo se muestran los esquemas de
cruce para cuatro poblaciones diferentes. Aquí se utilizan los
siguientes símbolos/caracteres:
* = planta resistente, que significa:
resistencia a todos los fisios de B. lactucae ensayados.
BC = "Cruce retrógrado"
Z = Auto-polinización, el número
de figuras después de Z indica cuantas veces ha tenido lugar la
auto-polinización.
\newpage
L. sativa X L.
virosa
(lechuga de tipo iceberg) CGN9365
(IVT1398)
\downarrow
rescate de
embriones
\downarrow
F1 X L. sativa (lechuga de
tipo
iceberg)
\downarrow
rescate de
embriones
\downarrow
planta BC1 resistente* X L.
sativa (lechuga de tipo
iceberg)
\downarrow
rescate de
embriones
\downarrow
planta BC2 resistente* X L.
sativa (lechuga de tipo iceberg)
(fértil)
\downarrow
auto-polinización
de la planta BC3
resistente*
La población BC3Z se analizó después, y se
identificó el marcador A. Plantas BC3Z individuales se
auto-polinizaron y se seleccionaron plantas BC3Z2
individuales, homozigotas para el gen A de las poblaciones BC3Z2.
Las plantas seleccionadas se utilizaron para análisis de ligamiento
de los diversos marcadores de DNA identificados
(Ejemplo 3).
(Ejemplo 3).
L. sativa (lechuga de tipo
cabeza de mantequilla) X L. virosa CGN4683
(IVT280)
\downarrow
rescate de
embriones
\downarrow
F1 X L. sativa (lechuga de
tipo cabeza de
mantequilla)
\downarrow
rescate de
embriones
\downarrow
planta BC1 resistente* X L.
sativa (lechuga de tipo cabeza de mantequilla)
(fértil)
\downarrow
planta BC2 resistente* X L.
sativa (lechuga de tipo cabeza de
mantequilla)
\downarrow
auto-polinización
de planta BC3
resistente*
\vskip1.000000\baselineskip
La población BC3Z se analizó, y se identificó el
marcador B. Plantas BC3Z individuales fueron
auto-polinizadas, y se seleccionaron las plantas
BC3Z2 individuales, homozigotas para el gen B de las poblaciones
BC3Z obtenidas, y se utilizaron para análisis de ligamiento de los
diversos marcadores de DNA identificados (Ejemplo 3).
L. sativa X L.
virosa (lechuga de tipo cabeza de mantequilla) CGN5148
(IVT1583)
\downarrow
rescate de
embriones
\downarrow
F1 X L. sativa (lechuga de
tipo cabeza de
mantequilla)
\downarrow
rescate de
embriones
\downarrow
planta BC1 resistente* X L.
sativa (lechuga de tipo cabeza de mantequilla)
(fértil)
\downarrow
planta BC2 resistente* X L.
sativa (lechuga de tipo cabeza de
mantequilla)
\downarrow
auto-polinización
de planta BC3
resistente*
La población BC3Z se analizó, y se identificaron
los marcadores C1, C2, C3 y C4. Las plantas BC3Z individuales se
auto-polinizaron, y se seleccionaron las plantas
BC3Z2 individuales homozigotas para el gen C, de las poblaciones
BC3Z2, y se utilizaron para análisis de ligamiento de los diversos
marcadores de DNA identificados (Ejemplo 3).
L. sativa (lechuga de tipo
cabeza de mantequilla) X L. serriola CGN5913 (IVT
1308)
\downarrow
F1 X L. sativa (lechuga de
tipo cabeza de
mantequilla)
\downarrow
planta BC1 resistente* X L.
sativa (lechuga de tipo cabeza de
mantequilla)
\downarrow
planta BC2 resistente* X L.
sativa (lechuga de tipo cabeza de
mantequilla)
\downarrow
auto-polinización
de la planta BC3
resistente*
La población BC3Z se analizó y se identificaron
los marcadores D1 y D2. Las plantas BC3Z individuales se
auto-polinizaron, y se seleccionaron las plantas
BC3Z2 individuales homozigotas para el gen D, de las poblaciones
BC3Z2, y se utilizaron para análisis de ligamiento de los diversos
marcadores de DNA identificados (Ejemplo 3).
Hay diferentes métodos de demostrar si los
diversos genes de resistencia cualitativos pueden estar situados en
el mismo o en diferentes grupos de ligamiento (cromosomas).
La determinación de la posición de los
marcadores de DNA puede llevarse a cabo generando un mapa genético
de los 9 cromosomas de la lechuga. Para generar un mapa genético en
el que se indique la posición de los diversos marcadores de DNA
moleculares, se realizan cruces entre plantas de lechuga que son
altamente polimórficas en relación la una con la otra, desde un
punto de vista genético. Para este tipo de cruces con un elevado
grado de polimorfismo, debe hacerse una distinción entre:
- cruce intraespecífico:
Este es un cruce entre, por ejemplo, la lechuga
cabeza de mantequilla y la lechuga iceberg, un cruce se hace dentro
de una especie (L. sativa).
- cruce interespecífico:
Este es un cruce entre dos especies
Lactuca, por ejemplo la lechuga cabeza de mantequilla (L.
sativa) con
L. virosa.
L. virosa.
Se genera una población F2 ó BC1 de ambos tipos
de cruce. Mediante el análisis de esta población F2 ó BC1 con, por
ejemplo, marcadores RAPD, todas las plantas pueden analizarse
individualmente para la presencia o ausencia de los marcadores de
DNA moleculares polimórficos. Mediante el análisis de los datos
obtenidos, utilizando un programa de ordenador tal como, por
ejemplo, JoinMap (Stam, Plant Journal 3, 739-744,
1993), pueden construirse grupos de ligamiento que colocan los
diversos marcadores de DNA analizados linealmente entre ellos,
separados por distancias de recombinación expresados en
centiMorgans. Si un gen de resistencia a Dm de amplio
espectro se segrega en la población F2 ó BC1 utilizada, el gen de
resistencia a Dm de amplio espectro puede, después de
ensayarse con B. lactucae, ser colocado dentro de uno de los
grupos de ligamiento mostrados en un mapa genético detallado de la
lechuga. Un mapa genético de lechuga con 9 grupos de ligamiento ha
sido descrito por Michelmore (Genetics 116, 331-337,
1987).
Cuando los marcadores de DNA moleculares
identificados según la presente invención son polimórficos en los
parentales utilizados para fabricar una población F2 ó BC1, estos
marcadores de DNA pueden situarse en el mapa genético, donde es
posible establecer si los marcadores de DNA se originan del mismo o
de diferentes grupos de ligamiento.
Otro método para determinar la posición de los
marcadores de DNA como los aplicados en la presente invención
ligados a los genes de resistencia, consiste en estudiar la
segregación dependiente o independiente de los diferentes
marcadores de DNA. Para este propósito, se seleccionaron de cuatro
poblaciones plantas individuales que son homozigotas para los genes
de resistencia a Dm de amplio espectro específicos, de las
poblaciones A, B, C o D respectivamente. Después se realizaron
cruces específicos para la generación de una población segregada F2,
en la que están presentes todos los genes de resistencia a Dm
y sus correspondientes marcadores de DNA.
\vskip1.000000\baselineskip
Una planta homozigota para el gen A de
resistencia a Dm (como se demuestra con el marcador A), se
cruzó con una planta homozigota para el gen B de resistencia a
Dm (marcador B). La planta individual F1 con ambos genes A y
B de resistencia a Dm (después del análisis con los
marcadores de DNA A y B), así como las plantas individuales de la
población F2, fueron posteriormente
auto-polinizadas. Se realizó una selección de las
poblaciones de plantas F3 que eran homozigotas para ambos, el gen A
de resistencia a Dm y el gen B de resistencia a Dm,
utilizando los marcadores de DNA específicos para los genes A y B
de resistencia a Dm.
Ser capaces de seleccionar una planta con los
genes A y B de resistencia a Dm cualitativos, teniendo cada
uno un amplio espectro de resistencia a Dm, significa que
ambos genes de resistencia están localizados en diferentes grupos
de ligamiento.
\vskip1.000000\baselineskip
Una planta homozigota para el gen C de
resistencia a Dm (como se ha demostrado con los marcadores
C1, C2, C3 ó C4), se cruzó con una planta homozigota para el gen D
de resistencia a Dm (marcadores D1 ó D2). La planta
individual F1 con ambos genes C y D de resistencia a Dm
(después de análisis con los marcadores de DNA C1, C2, C3 ó C4 y D1
ó D2), así como las plantas individuales de la población F2, se
auto-polinizaron posteriormente. Se hizo una
selección de la población F3, de plantas que eran homozigotas para
el gen C de resistencia a Dm y para el gen D de resistencia
a Dm, utilizando los marcadores de DNA específicos para los
genes C y D de resistencia a
Dm.
Dm.
Ser capaces de seleccionar una planta con los
genes C y D de resistencia a Dm cualitativos, teniendo cada
uno una resistencia a Dm de amplio espectro, significa que
ambos genes de resistencia están localizados en diferentes grupos de
ligamiento.
La planta seleccionada homozigota para los genes
A y B de resistencia a Dm se cruzó después con la planta
seleccionada homozigota para los genes C y D de resistencia a
Dm. Las plantas F1 heterozigotas para los genes A, B, C y D
de resistencia a Dm (como se determinó con los marcadores de
DNA específicos para estos genes), se
auto-polinizaron.
La población F2 se ensayó con el ensayo de
enfermedad por B. lactucae y se analizó con marcadores de DNA
para los 4 genes de resistencia a Dm de amplio espectro.
Para el ensayo de enfermedad, se cortaron con un
perforador de corcho, tres a seis círculos de hoja con una sección
de corte de 18 a 20 mm, de plantas de lechuga, para ensayar, o se
pusieron 50 semillas sobre un papel de filtro. Los círculos
cortados o los papeles de filtro con la semilla de lechuga se
colocaron en una bandeja sobre un papel de filtro grueso húmedo, y
se cubrieron con una placa de cristal hasta el momento de la
inoculación. Los círculos cortados se inocularon el mismo día o
unos pocos días después de cortarlos. Las semillas se dejaron
germinar y después se cultivaron en una celda climatizada a
12-16º C, con 16 horas de luz y 8 horas de
oscuridad, hasta que se extendieron las hojas de las semillas, y
después tuvo lugar la inoculación.
El inóculo de B. lactucae se preparó
mezclando un determinado fisio de B. lactucae (fresco o
congelado), que esporula en el material de las hojas, en una
pequeña cantidad medida de agua, y esparciendo después esta
solución. La concentración de esporas vivas se determinó después
por medio de un microscopio de fluorescencia, ajustándolo cuando
era necesario. La concentración óptima de esporas es de
10.000-50.000 esporas virulentas/ml de
agua.
agua.
El inóculo se aplicó a los círculos cortados o a
las plántulas con un pulverizador para plantas, hasta que los
círculos cortados estaban ligeramente humedecidos. La bandeja se
cubrió después de nuevo con una placa de cristal y se dejó estar a
12-16º C y con 16 horas de luz y 8 de oscuridad.
Después de 10 a 14 días era posible analizar los círculos cortados,
para el grado de desarrollo y esporulación, y era posible establecer
si una planta ensayada o un número de lechuga era resistente o
susceptible al fisio de B. lactucae ensayado.
El análisis de marcadores de DNA se realizó como
se describió en el Ejemplo 1.
De la población F2 fabricada, 24 plantas que
fueron ensayadas con el ensayo de enfermedad por B. lactucae,
y se analizaron con los marcadores RAPD, se muestran en la tabla 1
y en las figuras 7-14. De este ensayo, se encontró
que los ocho marcadores RAPD pueden segregarse independientemente
uno del otro y que por lo tanto pueden colocarse en cuatro grupos de
ligamiento diferentes.
Las figuras 7-14 muestran que
los marcadores de DNA ligados a los 4 genes de resistencia a
Dm de amplio espectro, se segregan independientemente el uno
de los otros, y por lo tanto pueden colocarse en los cuatro grupos
de ligamiento separados. De esta forma pueden seleccionarse las
plantas que tienen al menos 2, preferiblemente 3, y más
preferiblemente 4 genes de resistencia cualitativos (indicados con:
* en la tabla 1, más adelante), que tienen una resistencia a
Dm de amplio espectro, y que son por lo tanto valiosos para
procesarlos en una variedad de lechuga comercial.
Solamente la aplicación de los marcadores de DNA
según la invención, hace posible dicha selección, porque en el
ensayo de enfermedad por B. lactucae, no se puede hacer
distinción entre la presencia de uno o más genes de resistencia a
Dm de amplio espectro cualitativos.
Los resultados correspondientes se obtuvieron
con las otras especies de lechuga silvestres.
| F2 | Ensayo | Marca- | Marca- | Marca- | Marca- | Marca- | Marca- | Marca- | Marca- | Plantas con |
| Nº de | de | dor | dor | dor | dor | dor | dor | dor | dor | todos los |
| planta | enfermedad | A | B | C1 | C2 | C3 | C4 | D1 | D2 | marcadores |
| (*) | ||||||||||
| 1 | R | + | + | - | - | - | - | + | + | |
| 2 | R | - | + | - | - | - | - | - | - | |
| 3 | R | - | - | + | + | + | + | + | + | |
| 4 | R | + | + | + | + | + | + | + | + | * |
| 5 | R | + | - | + | + | + | + | + | + | |
| 6 | R | + | + | + | + | + | + | - | - | |
| 7 | R | + | + | - | - | - | - | - | - | |
| 8 | R | + | + | + | + | + | + | + | + | * |
| 9 | R | + | - | + | + | + | + | + | + | |
| 10 | R | + | + | + | + | + | + | + | + | |
| 11 | R | + | + | - | - | - | - | + | + | |
| 12 | R | + | + | + | + | + | + | - | - | |
| 13 | R | + | + | - | - | - | - | + | + | |
| 14 | R | + | + | - | - | - | - | + | + | |
| 15 | R | + | - | + | + | + | + | - | - | |
| 16 | R | + | + | + | + | + | + | + | + | * |
| 17 | R | + | - | + | + | + | + | - | - | |
| 18 | R | + | + | + | + | + | + | + | + | * |
| 19 | R | - | - | - | - | - | - | + | + | |
| 20 | R | + | - | + | + | + | + | + | + | |
| 21 | R | - | - | + | + | + | + | + | + | |
| 22 | R | + | - | + | + | + | + | - | - | |
| 23 | R | + | + | + | + | + | + | + | + | * |
| 24 | R | + | + | + | + | + | + | + | + | * |
| R = resistente | ||||||||||
| Marcador A = OPAF06/451 pares de bases | ||||||||||
| Marcador B = OPAM10/555 pares de bases | ||||||||||
| Marcador C1 = OPW16/750 pares de bases | ||||||||||
| Marcador C2 = OPL03/276 pares de bases | ||||||||||
| Marcador C3 = OPAE19/675 pares de bases | ||||||||||
| Marcador C4 = UBC711/1083 pares de bases | ||||||||||
| Marcador D1 = OPW04/520 pares de bases | ||||||||||
| Marcador D2 = OPW19/963 pares de bases |
<110> Enza Zaden, De Enkhuizer Zaadhandel
B.V.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> Método para obtener una planta con
una resistencia perdurable a un patógeno.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> enza5PCTseqlist
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<140> pct/n100/00241
\vskip0.400000\baselineskip
<141>
2000-04-13
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<150> NL 1011819
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
1999-04-16
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn Ver. 2.1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 451
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Lactuca sativa
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 555
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Lactuca sativa
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 276
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Lactuca sativa
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 675
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Lactuca sativa
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1083
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Lactuca sativa
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 963
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Lactuca sativa
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
Claims (7)
1. Un método para obtener una planta Lactuca
sativa con dos o más genes de resistencia a Dm a
Bremia lactucae, que comprende:
- a.
- proporcionar uno o más marcadores de DNA, ligados a uno o más genes de resistencia a Dm en una planta de lechuga silvestre;
- b.
- determinar la presencia de uno o más genes de resistencia a Dm en la planta de lechuga silvestre utilizando estos marcadores de DNA;
- c.
- cruzar la planta de lechuga silvestre que contiene uno o más genes de resistencia a Dm, con una planta de L. sativa;
- d.
- seleccionar de su progenie una planta con uno o más genes de resistencia a Dm, utilizando marcadores de DNA;
- e.
- cruzar la planta seleccionada que contiene uno o más genes de resistencia a Dm, con la planta de lechuga silvestre que contiene uno o más genes de resistencia a Dm; y
- f.
- seleccionar de su progenie una planta de L. sativa que contiene dos o más genes de resistencia a Dm; y
- g.
- opcionalmente, repetir las etapas (e) y (f) al menos una vez;
donde la planta de lechuga silvestre es L.
virosa, y donde el marcador de DNA se selecciona del grupo que
consiste en los marcadores de DNA que contienen una secuencia de DNA
como las mostradas en las figuras 1-6, o una
secuencia de DNA que tiene al menos un 70%, preferiblemente al menos
un 80%, más preferiblemente al menos un 90%, y más preferiblemente
al menos un 95% de homología con la secuencias de DNA mostradas en
las figuras 1-6.
2. Un método como el reivindicado en la
reivindicación 1, en el que la planta Lactuca sativa se
selecciona del grupo que consiste en L. sativa Lineaus capitata,
L. sativa Lineaus acephala, L. sativa Lineaus romana, L. sativa
Lineaus secalina, y L. sativa Lineaus angustana.
3. Una planta de Lactuca sativa que
contiene dos o más genes de resistencia a Dm derivados de
L. virosa, donde la presencia de dichos genes de resistencia
a Dm está ligada a los marcadores de DNA seleccionados del
grupo que consiste en los marcadores de DNA que contienen una
secuencia de DNA como las mostradas en las figuras
1-6.
4. Una planta de L. sativa como la
reivindicada en la reivindicación 3, donde la planta se selecciona
del grupo que consiste en L. sativa Lineaus capitata, L. sativa
Lineaus acephala, L. sativa Lineaus romana, L. sativa Lineaus
secalina, y L. sativa Lineaus angustana.
5. Las semillas de una planta de lechuga de
cultivo como la reivindicada en las reivindicaciones 3 ó 4.
6. Un marcador de DNA que contiene una
secuencia de DNA que es al menos un 70%, preferiblemente al menos un
80%, más preferiblemente al menos un 90%, más preferiblemente al
menos un 95% homóloga con cualquiera de las secuencias mostradas en
las figuras 1-6, en la que el marcador de DNA está
específicamente ligado a uno o más genes de resistencia a
Dm.
7. Un marcador de DNA, como el reivindicado en
la reivindicación 6, que contiene una secuencia de DNA como la
mostrada en las Figuras 1-6.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL1011819 | 1999-04-16 | ||
| NL1011819A NL1011819C2 (nl) | 1999-04-16 | 1999-04-16 | Werkwijze voor het verkrijgen van een plant met een duurzame resistentie tegen een pathogeen. |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2264932T3 true ES2264932T3 (es) | 2007-02-01 |
Family
ID=19769030
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES00923018T Expired - Lifetime ES2264932T3 (es) | 1999-04-16 | 2000-04-13 | Metodo para obtener una planta con una resistencia perdurable a un patogeno. |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US6903249B2 (es) |
| EP (1) | EP1179089B1 (es) |
| AT (1) | ATE330034T1 (es) |
| AU (1) | AU4320400A (es) |
| DE (1) | DE60028760T2 (es) |
| ES (1) | ES2264932T3 (es) |
| NL (1) | NL1011819C2 (es) |
| WO (1) | WO2000063432A1 (es) |
Families Citing this family (61)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2002221582A1 (en) * | 2000-12-19 | 2002-07-01 | Danmarks Jordbrugsforskning | A novel tissue specific plant promoter |
| NL1019596C2 (nl) * | 2001-12-18 | 2003-06-19 | Helmut Nellen | Cytoplasmatische resistentie tegen Bremia lactucae in sla (lactuca species). |
| CN101098965B (zh) * | 2004-06-16 | 2012-11-21 | 瑞克斯旺种苗集团公司 | 莴苣和菠菜中对病原体特别是卵菌如霜霉降低的易感性 |
| US7790962B2 (en) * | 2005-07-11 | 2010-09-07 | Rijk Zwaan Zaadteelt En Zaadhandel B.V. | Downy mildew resistant lettuce |
| US20100293673A1 (en) | 2006-08-15 | 2010-11-18 | Jason Bull | Compositions and Methods of Plant Breeding Using High Density Marker Information |
| EP2272328A1 (en) * | 2009-07-06 | 2011-01-12 | Syngenta Participations AG | Plant resistant to a pathogen |
| EA022553B1 (ru) | 2010-01-22 | 2016-01-29 | Байер Интеллектуэль Проперти Гмбх | Применение комбинации биологически активных веществ, набор и средство, содержащие комбинацию биологически активных веществ, для борьбы с вредителями животного происхождения и способ улучшения использования продукционного потенциала трансгенного растения |
| CA2815117A1 (en) | 2010-11-02 | 2012-05-10 | Bayer Intellectual Property Gmbh | N-hetarylmethyl pyrazolylcarboxamides |
| AR083875A1 (es) | 2010-11-15 | 2013-03-27 | Bayer Cropscience Ag | N-aril pirazol(tio)carboxamidas |
| US20130289077A1 (en) | 2010-12-29 | 2013-10-31 | Juergen Benting | Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives |
| US8766039B2 (en) | 2011-07-22 | 2014-07-01 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce cultivar Gaviota |
| US8692074B2 (en) | 2011-07-28 | 2014-04-08 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce cultivar Denali |
| IN2014DN00156A (es) | 2011-08-10 | 2015-05-22 | Bayer Ip Gmbh | |
| US8692075B2 (en) | 2011-09-28 | 2014-04-08 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce cultivar Borromini |
| US8772580B2 (en) | 2012-04-17 | 2014-07-08 | Enza Zaden Beheer B.V. | Cuervo lettuce variety |
| US8822763B2 (en) | 2012-05-02 | 2014-09-02 | Enza Zaden Beheer B.V. | Pommegranate crunch lettuce variety |
| US8847019B2 (en) | 2012-05-14 | 2014-09-30 | Enza Zaden Beheer B.V. | Capulin lettuce variety |
| US8957284B2 (en) | 2012-05-23 | 2015-02-17 | Enza Zaden Beheer B.V. | Holon lettuce variety |
| US8987559B2 (en) | 2012-06-11 | 2015-03-24 | Enza Zaden Beheer B.V. | Mirlo lettuce variety |
| US8987560B2 (en) | 2012-06-15 | 2015-03-24 | Enza Zaden Beheer B.V. | Poloma lettuce variety |
| US8962927B2 (en) | 2012-06-15 | 2015-02-24 | Enza Zaden Beheer B.V. | Ansar lettuce variety |
| US8993848B2 (en) | 2012-06-18 | 2015-03-31 | Enza Zaden Beheer B.V. | Poneloya lettuce variety |
| US9000268B2 (en) | 2012-07-30 | 2015-04-07 | Enza Zaden Beheer B.V. | Tamarindo lettuce variety |
| US8993849B2 (en) | 2012-07-31 | 2015-03-31 | Enza Zaden Beheer B.V. | Truchas lettuce variety |
| US8962928B2 (en) | 2012-08-16 | 2015-02-24 | Enza Zaden Beheer B.V. | Bandelier lettuce variety |
| NL1040073C2 (en) * | 2013-02-28 | 2014-09-01 | Agrisemen B V | Lactuca sativa with bremia lactucae (downy mildew) resistance. |
| US9113609B2 (en) | 2013-03-11 | 2015-08-25 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce variety ‘E01L.1937’ |
| US8993850B2 (en) | 2013-03-11 | 2015-03-31 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce variety ‘E01L.1935’ |
| US9179638B2 (en) | 2013-03-12 | 2015-11-10 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce variety ‘E01L30144’ |
| US9198394B2 (en) | 2013-03-14 | 2015-12-01 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce variety ‘ arroyo’ |
| US9277726B2 (en) | 2013-07-10 | 2016-03-08 | Enza Zaden Beheer B.V. | Pennylea lettuce variety |
| US9313994B2 (en) | 2013-12-16 | 2016-04-19 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce variety ‘E01K7719’ |
| US9332725B2 (en) | 2014-04-14 | 2016-05-10 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce variety ‘red mist’ |
| US9392765B2 (en) | 2014-06-25 | 2016-07-19 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce variety ‘Celinet’ |
| US9635828B2 (en) | 2014-12-03 | 2017-05-02 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce variety ‘Newham’ |
| US9572321B2 (en) | 2015-01-12 | 2017-02-21 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce varieties ‘Ezrilla’, ‘Analora’, and ‘Anandra’ |
| US9743633B2 (en) | 2015-10-12 | 2017-08-29 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce varieties ‘Tuolomne’, ‘Rainier’ and ‘E01G70048’ |
| US9961873B2 (en) | 2015-11-20 | 2018-05-08 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce varieties ‘mezquite’ and ‘clouny’ |
| US10582681B2 (en) | 2016-03-02 | 2020-03-10 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce varieties ‘Bayfield’ and ‘Pueblo’ |
| US10015948B2 (en) | 2016-03-09 | 2018-07-10 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce varieties ‘cristabel’, ‘crispinet’, and ‘fairly’ |
| US10506773B2 (en) | 2017-02-10 | 2019-12-17 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce variety ‘weaverville’ |
| US10542698B2 (en) | 2017-02-27 | 2020-01-28 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce variety ‘Brentwood’ |
| US10517248B2 (en) | 2017-03-03 | 2019-12-31 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce variety ‘Somerset’ |
| US10405510B2 (en) | 2017-04-19 | 2019-09-10 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce variety ‘Icemaker’ |
| US11089751B2 (en) | 2017-05-18 | 2021-08-17 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce varieties ‘Ezthana’ and ‘Eztron’ |
| US10757880B2 (en) | 2017-07-31 | 2020-09-01 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce variety ‘Cavendish’ |
| US10874071B2 (en) | 2017-12-21 | 2020-12-29 | Enza Zaden Beheer B.V. | Machine harvestable iceberg lettuce |
| US11102943B2 (en) | 2018-09-17 | 2021-08-31 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce variety ‘milagro’ |
| US11490579B2 (en) | 2019-08-08 | 2022-11-08 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce variety ‘Casey’ |
| EP3808170A1 (en) | 2019-10-17 | 2021-04-21 | Bejo Zaden B.V. | Lactuca sativa resistance to bremia lactucae |
| US11337390B2 (en) | 2020-02-14 | 2022-05-24 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce variety ‘Roscoe’ |
| US11678622B2 (en) | 2020-05-08 | 2023-06-20 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce variety ‘E01G11244’ |
| EP4175463B1 (en) * | 2020-07-06 | 2025-05-28 | Syngenta Crop Protection AG | Bremia lactucae resistance sg01 |
| US11778966B2 (en) | 2020-10-21 | 2023-10-10 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce variety ‘Marciano’ |
| US11864514B2 (en) | 2020-12-16 | 2024-01-09 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce variety ‘Kailua’ |
| WO2022128132A1 (en) * | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce plant resistant to downy mildew and resistance gene |
| US11944054B2 (en) | 2021-01-19 | 2024-04-02 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce variety ‘Newcastle’ |
| US11350584B1 (en) | 2021-02-03 | 2022-06-07 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce variety ‘Airton’ |
| US11559017B2 (en) | 2021-05-25 | 2023-01-24 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce variety ‘E01L.30617’ |
| US12089549B2 (en) | 2021-06-22 | 2024-09-17 | Enza Zaden Beheer B.V. | Lettuce variety ‘E01G.11092’ |
| EP4408163A1 (en) | 2021-09-29 | 2024-08-07 | Bejo Zaden B.V. | Lettuce plants with bremia-resistance providing genomic fragments from lactuca serriola |
-
1999
- 1999-04-16 NL NL1011819A patent/NL1011819C2/nl not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-04-13 AU AU43204/00A patent/AU4320400A/en not_active Abandoned
- 2000-04-13 WO PCT/NL2000/000241 patent/WO2000063432A1/en not_active Ceased
- 2000-04-13 US US09/959,037 patent/US6903249B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-13 ES ES00923018T patent/ES2264932T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-13 DE DE60028760T patent/DE60028760T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-13 AT AT00923018T patent/ATE330034T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-04-13 EP EP00923018A patent/EP1179089B1/en not_active Revoked
-
2005
- 2005-06-06 US US11/146,392 patent/US7501555B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2009
- 2009-01-30 US US12/362,556 patent/US7790948B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2010
- 2010-08-10 US US12/853,881 patent/US20100299777A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE60028760T2 (de) | 2007-05-24 |
| ATE330034T1 (de) | 2006-07-15 |
| WO2000063432A1 (en) | 2000-10-26 |
| EP1179089B1 (en) | 2006-06-14 |
| DE60028760D1 (de) | 2006-07-27 |
| US20100299777A1 (en) | 2010-11-25 |
| US7790948B2 (en) | 2010-09-07 |
| EP1179089A1 (en) | 2002-02-13 |
| US20060005272A1 (en) | 2006-01-05 |
| US20090271890A1 (en) | 2009-10-29 |
| US20040226060A1 (en) | 2004-11-11 |
| AU4320400A (en) | 2000-11-02 |
| US6903249B2 (en) | 2005-06-07 |
| NL1011819C2 (nl) | 2000-10-17 |
| US7501555B2 (en) | 2009-03-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2264932T3 (es) | Metodo para obtener una planta con una resistencia perdurable a un patogeno. | |
| JP6872307B2 (ja) | ホウレンソウにおけるペロノスポラ耐性のための組成物及び方法 | |
| Iruela et al. | Validation of a QTL for resistance to ascochyta blight linked to resistance to fusarium wilt race 5 in chickpea (Cicer arietinum L.) | |
| ES2739921T3 (es) | Nuevas plantas de brassica resistentes a enfermedades | |
| ES2996220T3 (en) | Xanthomonas campestris pv. campestris resistant brassica plant and preparation thereof | |
| ES3040231T3 (en) | Peronospora resistance in spinacia oleracea | |
| AU2008244709B8 (en) | Brassica oleracea plants with a resistance to albugo candida | |
| ES3003870T3 (en) | Bremia lactucae resistant plants | |
| ES2749964T3 (es) | Planta resistente a un patógeno | |
| ES2957171T3 (es) | Plantas resistentes al CVYV de la especie Cucumis melo | |
| ES3037819T3 (en) | Bremia lactucae resistance sg01 | |
| Kruppa et al. | Genotyping-by-sequencing uncovers a Thinopyrum 4StS· 1JvsS Robertsonian translocation linked to multiple stress tolerances in bread wheat | |
| ES2711627T3 (es) | Marcadores genéticos para resistencia a orobanca en girasol | |
| ES2352333T3 (es) | Resistencia a mildiú velloso de cebolla provocado por el hongo peronospora. | |
| JP7094681B2 (ja) | Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ抵抗性のＢｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ植物 | |
| US20210123070A1 (en) | Tomato plant resistant to tomato yellow leaf curl virus, powdery mildew, and nematodes | |
| Nugroho et al. | The use of molecular markers to analyze the genetic diversity of Indonesian pepper (Capsicum spp.) varieties based on anthracnose resistance | |
| KR20200138725A (ko) | 멜론의 흰 가루병 저항성을 위한 qtl | |
| KR20230019492A (ko) | 스캡병, 진딧물 및 흰가루병에 저항성이 있는 멜론 식물 | |
| KR20120001870A (ko) | 배추의 노균병 저항성 연관 ｒａｐｄ 분자표지 및 이를 이용한 저항성 배추 품종 선발 방법 | |
| Coelho et al. | Downy mildew resistance and genetic variability in a wild rocket germplasm collection | |
| Katoch | Genetics and mapping of anthracnose resistance gene (s) in common bean landrace KRC5 |