ES2267873T3 - Derivados de 4-aminotiazol, su preparacion y uso como inhibidores de kinasas dependientes de ciclina. - Google Patents

Abstract

Un compuesto de la Fórmula I: en la que R1 se selecciona entre: y R2 es una estructura de anillo sustituído o insustituído, carbocíclico o heterocíclico, monocíclico o policíclico fusionado o no fusionado; en el que cada sustituyente opcional para R2 es independientemente un halógeno, oxígeno, haloalquilo, alquilo C1-6-, alquenilo C1-6-, alquinilo C1-6-, hidroxilo, alcoxilo C1-6-, cicloalquilo carbocíclico o heterocíclico, monocíclico o policíclico fusionado o no fusionado; arilo carbocíclico o heterocíclico, monocíclico o policíclico fusionado o no fusionado; amino, nitro, tiol, tioéter, imina, ciano, amido, fosfonato, fosfina, carboxilo, tiocarbonilo, sulfonilo, sulfonamida, cetona, aldehído, o éster o una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de la Fórmula I.

Description

Derivados de 4-aminotiazol, su preparación y uso como inhibidores de kinasas dependientes de ciclina.

Referencia cruzada con solicitudes relacionadas

Esta solicitud regular reivindica prioridad de la Solicitud Provisional U.S. No. 60/063,634, presentada el 27 de octubre de 1997, y de la Solicitud Provisional U.S. No. 60/063,666, archivada el 28 de octubre de 1997.

Campo de la invención

Esta Invención está dirigida a composiciones farmacéuticas que contienen compuestos de aminotiazol para inhibir kinasas dependientes de ciclina (CDKs), tales como CDK1, CDK2, CDK4, y CDK6. La invención también está dirigida al uso terapéutico o profiláctico de composiciones farmacéuticas que contienen tales compuestos y a procedimientos para tratar enfermedades malignas y otros trastornos administrando cantidades eficaces de tales compuestos.

Antecedentes de la invención

La proliferación celular incontrolada es el distintivo del cáncer. La proliferación celular en respuesta a diversos estímulos se manifiesta mediante una desregulación del ciclo de división celular, el proceso por el cual las células se multiplican y dividen. Las células tumorales típicamente tienen daños en los genes que regulan directa o indirectamente la progresión a través del ciclo de división celular. Las CDKs constituyen una clase de enzimas que juegan papeles críticos regulando las transiciones entre distintas fases del ciclo celular, tales como la progresión desde un estado quiescente en G_{1} (el intervalo entre la mitosis y el comienzo de la replicación de DNA para una nueva secuencia de división celular) hasta S (el periodo de síntesis de DNA activo), o la progresión desde G_{2} hasta la fase M, en la que ocurren la mitosis activa y división celular. Ver, p.ej., los artículos recopilados en Science, vol. 274 (1996), pp. 1643-1677; y Ann. Rev. Cell Dev. Biol., vol. 13 (1997), pp. 261-291. Los complejos CDK se forman a través de la asociación de una subunidad ciclina reguladora (p.ej., ciclina A, B1, B2, D1, D2, D3, y E) y una subunidad kinasa catalizadora (p.ej., cdc2 (CDK1), CDK2, CDK4, CDK5, y CDK6). Como denota el nombre, las CDKs muestran una dependencia absoluta de la subunidad ciclina para fosforilar sus sustratos diana, y distintos pares kinasa/ciclina funcionan para regular la progresión a través de porciones específicas del ciclo celular.

Las ciclinas D son sensibles a señales de crecimiento extracelulares y se vuelven activadas en respuesta a mitógenos durante la fase G_{1} del ciclo celular. CDK4/ciclina D desempeña un papel importante en la progresión del ciclo celular fosforilando, y de este modo inactivando, la proteína de retinoblastoma (Rb). La Rb hipofosforilada se une a una familia de reguladores transcriptores, pero tras la hiperfosforilación de la Rb por CDK4/ciclina D, estos factores de transcripción se liberan para activar genes cuyos productos son responsables de la progresión de la fase S. La fosforilación e inactivación de la Rb por CDK4/ciclina D permite el paso de la célula más allá del punto de restricción de la fase G_{1}, con lo que se pierde la sensibilidad al crecimiento extracelular o a señales inhibidoras y la célula queda destinada a la división celular. Durante la G_{1} tardía, la Rb también es fosforilada e inactivada por CDK2/ciclina E, y pruebas recientes indican que CDK2/ciclina E también puede regular la progresión a la fase S a través de una ruta paralela que es independiente de la fosforilación de la Rb (ver Lukas et al., "Cyclin E-induced S Phase Without Activation of the pRb/E2F Pathway", Genes and Dev., vol. 11 (1997), pp. 1479-1492).

La progresión de G_{1} a la fase S, lograda mediante la acción de CDK4/ciclina D y CDK2/ciclina E, está sujeta a una variedad de mecanismos reguladores del crecimiento, tanto negativos como positivos. Estímulos del crecimiento, tales como mitógenos, causan un incremento de la síntesis de ciclina D1 y por tanto un incremento de CDK4 funcional. En contraste, el crecimiento celular se puede "gobernar", en respuesta al daño del DNA o a estímulos de crecimiento negativos, mediante la inducción de proteínas endógenas inhibidoras. Estos inhibidores proteicos de ocurrencia natural incluyen las familias p21^{WAF1/CIP1}, p27^{KIP1} y p^{16INK4}, la última de las cuales inhibe exclusivamente la CDK4 (ver Harper, "Cyclin Dependent Kinase Inhibitors", Cancer Surv., vol. 29 (1997), pp.91-107). Las aberraciones en este sistema de control, particularmente aquellas que afectan a la función de CDK4 y CDK2, están implicadas en el progreso de células hacia el estado altamente proliferativo característico de enfermedades malignas, tales como melanomas familiares, carcinomas esofágicos, y cánceres pancreáticos (ver, p.ej., Hall and Peters, "Genetic Alterations of Cyclins, Cyclin-Dependent Kinases, and CDK Inhibitors in Human Cancer", Adv. Cancer Res., vol. 68 (1996), pp. 67-108; y Kamb et al., "A Cell Cycle Regulator Potentially Involved in Genesis of Many Tumor Types", Science, vol. 264 (1994), pp. 436-440). La sobreexpresión de ciclina D1 está ligada a carcinomas esofágicos, pectorales y de células escamosas (ver, p.ej., DelSal et al., "Cell Cycle and Cancer: Critical Events at the G_{1} Restriction Point", Critical Rev. Oncogenesis, vol. 71 (1996), pp. 127-142). Los genes que codifican para los inhibidores específicos de CDK4 de la familia p16 frecuentemente tienen deleciones y mutaciones en melanoma familial, gliomas, leucemias, sarcomas, y carcinomas pancreáticos, pulmonares de células no pequeñas, de cabeza y de cuello. (ver Nobori et al., "Deletions of the Cyclin-Dependent Kinase-4 Inhibitor Gene in Multiple Human Cancers", Nature, vol. 368 (1994), pp. 753-756). La amplificación y/o sobreexpresión de ciclina E se ha observado también en una amplia variedad de tumores sólidos, y se han correlacionado niveles elevados de ciclina E con prognosis pobre. Además, los niveles celulares del inhibidor p27 de CDK, que actúa como sustrato e inhibidor de CDK2/ciclina E, son anormalmente bajos en cánceres de pecho, colon y próstata, y los niveles de expresión de p27 están inversamente correlacionados con la etapa de la enfermedad (ver Loda et al., "Increased Proteasome-depenent Degradation of the Cyclin-Dependent Kinase Inhibitor p27 in Aggressive Colorectal Carcinomas", Nature Medicine, vol. 3 (1997) pp. 231-234). Las proteínas p21 también parecer transmitir la señal de supresión tumoral p53 a las CDKs; por tanto, la mutación de p53 en aproximadamente el 50% de todos los cánceres humanos puede provocar indirectamente la desregulación de la actividad de la CDK.

Los datos recientes proporcionan una fuerte validación para el uso de compuestos que inhiben las CDKs, y la CDK4 y CDK2 en particular, como agentes terapéuticos anti-proliferativos. Se han propuesto ciertas biomoléculas para este objeto. Por ejemplo, la Patente U.S. No. 5,621,082 para Xiong et al. revela ácido nucleico que codifica para un inhibidor de la CDK6, y la Publicación de Patente Europea No. 0 666 270 A2 describe péptidos y análogos de péptido que actúan como inhibidores de CDK1 y CDK2. Se han identificado varias moléculas pequeñas como inhibidores de CDK (para una revisión reciente, ver Webster, "The Therapeutic Potential of Targeting the Cell Cycle", Exp. Opin. Invest. Drugs, vol. 7 (1998), pp. 865-887). El flavopiridol de flavona muestra selectividad modesta para la inhibición de CDKs sobre otras kinasas, pero inhibe a CDK4, CDK2 y CDK1 equipotencialmente, con IC_{50}s en el intervalo de 0,1-0,3 \muM. El flavopiridol está habitualmente en pruebas clínicas de Fase II como quimioterapéutico oncológico (Sedlacek et al., "Flavopiridol (L86-8275; NSC 649890), A New Kinase Inhibitor for Tumor Therapy", Int. J. Oncol., vol. 9 (1996), pp. 1143-1168). Son sujeto de otras publicaciones análogos del flavopiridol, por ejemplo, la Patente U.S. No. 5,733,920 para Mansuri et al. (Publicación Internacional No. WO 97/16447) y las Publicaciones Internacionales Nos. WO 97/42949, y WO 98/17662. Los resultados con derivados basados en la purina se describen en Schow et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., vol. 7 (1997), pp. 2697-2702; Grant et al., Proc. Amer. Assoc. Cancer Res., vol. 39 (1998), Abst. 1207; Legravend et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., vol. 8 (1998), pp. 793-798; Gray et al., Science, vol. 281 (1998), pp. 533-538; and Furet et al., 216th ACS Natl. Mtg. (Aug 23-27, 1998, Boston), Abst. MEDI-218. Además, las siguientes publicaciones revelan ciertas pirimidinas que inhiben kinasas dependientes de ciclina y kinasas mediadas por factor de crecimiento: Publicación Internacional No. WO 98/33798; Rutes et al., Proc. Amer. Assoc. Cancer Res., vol. 39 (1998), Abst. 3796; y Meyer et al., Proc. Amer. Assoc. Cancer Res., vol. 39 (1998), Abst. 3794.

Todavía hay una necesidad, sin embargo, de compuestos de moléculas pequeñas que se pueden sintetizar fácilmente y son inhibidores potentes de una o más CDKs o complejos CDK/ciclina. Como la CDK4 puede servir como un activador general de la división celular en la mayoría de las células, y como los complejos de CDK4/ciclina D y CDK2/ciclina E gobiernan la fase G_{1} temprana del ciclo celular, hay una necesidad de inhibidores específicos y eficaces de CDK4 y/o CDK2 para tratar uno o más tipos de tumor.

Resumen de la invención

En consecuencia, un objetivo de la invención es conseguir compuestos y composiciones de fármaco que inhiban la actividad de una o más CDKs, tales como CDK2, CDK4, y/o CDK6, o complejos de ciclina de los mismos. Un objetivo adicional es proporcionar un procedimiento eficaz para tratar los indicios de cáncer mediante inhibición de la CDK, preferiblemente mediante inhibición de la CDK4 o de complejos CDK4/ciclina de tipo-D y/o CDK2 o complejos CDK2/ciclina de tipo-E. Otro objetivo es conseguir composiciones farmacéuticas que contengan compuestos eficaces para bloquear la transición de células cancerosas a su fase proliferativa. Estos u otros objetivos y ventajas de la invención, que se volverán aparentes a la luz de la descripción detallada en lo que sigue, se consiguen a través de agentes de control del ciclo celular de la invención descrita en lo que sigue.

En un aspecto general, la invención se relaciona con composiciones farmacéuticas que comprenden:

(a) un agente de control del ciclo celular seleccionado entre:

(i)

compuestos de la Fórmula I:

1

en la que:

R^{1} se selecciona entre:

2

3

\vskip1.000000\baselineskip

4

\vskip1.000000\baselineskip

R^{2} es una estructura de anillo sustituido o insustituido, carbocíclico o heterocíclico, monocíclico o policíclico fusionado o no fusionado; en el que cada sustituyente para R^{2} es independientemente un halógeno (p.ej., cloro, yodo, bromo o flúor); oxígeno (=O); haloalquilo (p.ej., trifluorometilo); alquilo C_{1-6}-; alquenilo C_{1-6}-; alquinilo C_{1-6}-; hidroxilo; alcoxilo C_{1-6}-; cicloalquilo carbocíclico, que puede ser monocíclico o policíclico fusionado o no fusionado (p.ej., ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, o ciclohexilo), o un heterocicloalquilo, que puede ser monocíclico o policíclico fusionado o no fusionado (p.ej., pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, morfolinilo, o tiazinilo); arilo carbocíclico o heterocíclico, monocíclico o policíclico fusionado o no fusionado (p.ej., fenilo, naftilo, pirrolilo, indolilo, furanilo, tiofenilo, imidazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, triazolilo, tetrazolilo, pirazolilo, piridinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, acridinilo, pirazinilo, piridazinilo, pirimidinilo, benzimidazolilo, benzotiofenilo, o benzofuranilo); amino (primario, secundario o terciario); nitro; tiol; tioéter; imina; ciano; amido; fosfonato; fosfina; carboxilo; tiocarbonilo; sulfonilo; sulfonamida; cetona; aldehído; o éster;

(ii)

sales de compuestos de la Fórmula I farmacéuticamente aceptables;

y

(iii)

profármacos y metabolitos de compuestos de la Fórmula I farmacéuticamente activos o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos; y

(b) un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Tales composiciones son útiles como inhibidores de complejos de CDK/ciclina de mamíferos, CDK de insectos o complejos de CDK de hongos. Tales composiciones son también útiles para controlar la proliferación, diferenciación y/o apoptosis. Por tanto, en un aspecto general, la invención se dirige a composiciones farmacéuticas que contienen cantidades farmacéuticamente eficaces de agentes de control del ciclo celular.

En una forma de realización preferida, la invención está dirigida a agentes de control del ciclo celular potentes en los que R^{2} en la Fórmula I es una estructura de anillo arilo orto-sustituido (p.ej., fenilo o-sustituido). Se prefieren particularmente entre tales agentes aquellos en los que R^{2} es un fenilo o-disustituido.

La invención se relaciona además con procedimientos para usar agentes de control del ciclo celular para tratar enfermedades o trastornos mediados por inhibición de la CDK, especialmente aquellos mediados por inhibición de la CDK4 y/o CDK2. Más particularmente, la invención está dirigida a procedimientos para tratar enfermedades malignas o trastornos de tipo canceroso administrando una composición farmacéutica que comprenda un agente de control del ciclo celular. Adicionalmente, la invención se relaciona con el uso de agentes de control del ciclo celular para prevenir o tratar infecciones micóticas.

Otros aspectos, ventajas, y rasgos preferidos de la invención se volverán aparentes a partir de la descripción detallada en lo que sigue.

Descripción detallada y formas de realización preferidas de la invención

En una forma de realización general, la invención se relaciona con composiciones farmacéuticas cada una de las cuales comprende:

(a) una cantidad de un agente de control del ciclo celular eficaz para inhibir una CDK, siendo el agente de control del ciclo celular:

(i)

un compuesto de la Fórmula I:

5

en la que:

R^{1} es un grupo sustituido o insustituido seleccionado entre: sulfonilo; y

R^{2} es una estructura de anillo sustituido o insustituido, carbocíclico o heterocíclico, monocíclico o policíclico fusionado o no fusionado;

Donde cada sustituyente opcional para R^{1} y R^{2} es independientemente un halógeno; haloalquilo; C_{1-6}-alquilo; C_{1-6}-alquenilo; C_{1-6}-alquinilo; hidroxilo; C_{1-6}-alcoxilo; amino; nitro; tiol; tioéter; imina; ciano; amido; fosfonato; fosfina; carboxilo; tiocarbonilo; sulfonilo; sulfonamida; cetona; aldehído; o éster;

(ii)

una sal de un compuesto de la Fórmula I farmacéuticamente aceptable; o

(iii)

un profármaco o metabolito de un compuesto de la Fórmula I farmacéuticamente activo o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable; y

(b) un vehículo farmacéuticamente aceptable.

En otra forma de realización general, cada sustituyente opcional para R^{1} y R^{2} puede seleccionarse independientemente entre, además de los grupos identificados anteriormente, los siguientes grupos: oxígeno; cicloalquilo carbocíclico o heterocíclico, monocíclico o policíclico fusionado o no fusionado; y arilo carbocíclico o heterocíclico, monocíclico o policíclico fusionado o no fusionado. Tales sustituyentes pueden además sustituirse opcionalmente con un sustituyente seleccionado entre tales grupos.

Otros grupos R^{1} particularmente preferidos incluyen grupos fenilo sustituidos con restos carbonilo o sulfonamida, en los que el carbono carbonilo y nitrógeno sulfonamida además se sustituyen opcionalmente. Los siguientes ejemplos son grupos R^{1} preferidos:

6

\vskip1.000000\baselineskip

7

en los que R^{3} se selecciona entre C_{1-6}-alquilo, C_{1-6}-alcoxi, arilo, ariloxi, y amina.

En formas de realización preferidas, R^{2} en la Fórmula I es un grupo voluminoso tal como un monociclo carbocíclico o heterocíclico sustituido o insustituido, policiclo carbocíclico o heterocíclico sustituido o insustituido fusionado o no fusionado. Más preferiblemente, R^{2} es un monociclo o policiclo (carbo o poli) sustituido; incluso más preferiblemente, R^{2} es tal que una estructura de anillo cíclico que lleva un sustituyente en la posición adyacente o vecina al punto de unión (a la estructura nuclear).

Por ejemplo, especies preferidas para R^{2} incluyen una estructura de anillo aromático orto-sustituido tal como un fenilo o tienilo o-sustituido, o una estructura de anillo cicloalquilo o cicloalquenilo 1,2-sustituido tal como ciclopent-1-enilo 1,2-sustituido. Ejemplos particularmente preferidos para el resto R^{2} incluyen: o-halofenilo (p.ej., o-fluorofenilo, o-clorofenilo, o-yodofenilo, u o-bromofenilo), o-nitrofenilo, o-aminofenilo, o-C_{1-6}-alquilfenilo, o-C_{1-6}-alcoxifenilo (p.ej., o-metoxifenilo u o-etoxifenilo), o-C_{1-6}-alcoxibenzotiofenilo, o-metiltiofenilo, benzonitrilo, y carboxibencilo. Ejemplos particularmente preferidos para el resto R^{2} también incluyen arilos orto-disustituidos, por ejemplo, 2,6-dihalofenilo (p.ej., 2,6-difluorofenilo) y 2-halo-6-trifluorometilfenilo (p.ej., 2-fluoro-6- trifluorometilfenilo). Compuestos de la Fórmula I en la que R^{2} es una estructura de anillo cíclico 1,2-sustituido, tal como un arilo orto-sustituido que tenga otro sustituyente en la posición para, han resultado ser sorprendentemente potentes inhibidores de la CDK.

Los ejemplos de compuestos de la Fórmula I particularmente preferidos incluyen:

8

9

Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención pueden, alternativamente o junto con un compuesto de la Fórmula I, comprender como ingrediente activo una sal de un compuesto de la Fórmula I farmacéuticamente aceptable, o un profármaco o metabolito de tal compuesto o sal farmacéuticamente activo. Tales compuestos, sales, profármacos y metabolitos son a veces aquí referidos colectivamente como "agentes de control del ciclo celular".

Las composiciones de acuerdo con la invención inhiben la actividad kinasa de los complejos CDK/ciclina, tal como aquellos activos en la etapa G_{0} o G_{1} del ciclo celular, p.ej., complejos de CDK2, CDK4, y/o CDK6. Composiciones preferidas de la invención contienen agentes de control del ciclo celular que tienen una constante de inhibición contra la CDK4 o un complejo de CDK4/ciclina de tipo-D de aproximadamente 1 \muM o menos, más preferiblemente de aproximadamente 500 nM o menos, incluso más preferiblemente de aproximadamente 200 nM o menos, y lo más preferiblemente de aproximadamente 100 nM o menos. Los compuestos especialmente preferidos de la invención incluyen aquellos que tienen una constante de inhibición de CDK4/ciclina D3 (K_{i} CDK4/D3) de aproximadamente 100 nM o menos. Otras composiciones preferidas de la invención contienen agentes de control del ciclo celular que tienen una constante de inhibición contra la CDK2 o un complejo de CDK2/ciclina de tipo-E de aproximadamente 1 \muM o menos, más preferiblemente de aproximadamente 500 nM o menos, incluso más preferiblemente de aproximadamente 200 nM o menos, y lo más preferiblemente de aproximadamente 100 nM o menos.

Ciertos compuestos de la Fórmula I pueden existir en diversas formas esteroisoméricas o tautoméricas. La presente invención abarca todos los mencionados compuestos inhibidores de CDK, incluyendo compuestos activos en la forma de enantiómeros principalmente puros, mezclas racémicas, y tautómeros.

El término "farmacéuticamente aceptable" significa aceptable farmacológicamente y sustancialmente no tóxico para el sujeto al que se administra el agente de control del ciclo celular.

Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales de adición ácida o de adición básica convencionales formadas a partir de ácidos orgánicos o inorgánicos o bases inorgánicas no tóxicos. Las sales de adición ácida ejemplares incluyen aquellas derivadas de ácidos inorgánicos tales como ácido hidroclórico, ácido hidrobrómico, ácido hidroyódico, ácido sulfúrico, ácido sulfámico, ácido fosfórico y ácido nítrico, y aquellos derivados de ácidos orgánicos tales como ácido toluenosulfónico, ácido metanosulfónico, ácido etano-disulfónico, ácido isetiónico, ácido oxálico, ácidop-bromofenilsulfónico, ácido carbónico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido 2-acetoxibenzoico, ácido acético, ácido fenilacético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido esteárico, ácido láctico, ácido málico, ácido tartárico, ácido ascórbico, ácido maleico, ácido hidroximaleico, ácido glutámico, ácido salicílico, ácido sulfanílico y ácido fumárico. Las sales de adición básica ejemplares incluyen aquellas derivadas de hidróxidos de amonio (p.ej., un hidróxido de amonio cuaternario tal como el hidróxido de tetrametilamonio), aquellas derivadas de bases inorgánicas tal como hidróxidos de alcali o metal terrestre alcalino (p.ej., sodio, potasio, litio, calcio o magnesio), y aquellas derivadas de bases orgánicas tales como carbonatos, bicarbonatos, aminas, bencilaminas, piperidinas, y pirrolidinas.

El término "profármaco" se refiere a un precursor metabólico de un compuesto de la Fórmula I (o una sal del mismo) que es farmacéuticamente aceptable. Un profármaco puede estar inactivo cuando se administra a un sujeto pero se convierte in vivo en un compuesto activo de la Fórmula I. El término "metabolito activo" se refiere a un producto metabólico de un compuesto de la Fórmula I que es farmacéuticamente aceptable y eficaz. Los profármacos y metabolitos activos de los compuestos de la Fórmula I pueden determinarse usando mecanismos conocidos en la técnica.

Los agentes de control celular de acuerdo con la invención son útiles farmacéuticos para tratar trastornos proliferativos en mamíferos, especialmente humanos, marcados mediante proliferación indeseada de tejido endógeno. Los compuestos de la Fórmula I se pueden usar para tratar a sujetos que tienen un trastorno asociado con excesiva proliferación celular, p.ej., cánceres, soriasis, trastornos inmunológicos que implican proliferación indeseada de leucocitos, y restenosis y otros trastornos del músculo liso. Además, tales compuestos pueden usarse para evitar la desdiferenciación de tejido y/o células post-mitóticos.

Las composiciones o preparaciones farmacéuticas de la invención comprenden un vehículo farmacéuticamente aceptable y una cantidad eficaz de al menos un agente de control celular. El término "cantidad eficaz" significa una cantidad que inhibe significativamente la proliferación y/o evita la desdiferenciación de una célula eucariótica, p.ej., una célula de mamífero, insecto, planta u hongo, y es eficaz para la utilidad indicada, p.ej., tratamiento terapéutico específico.

La cantidad de dosis específica e un agente de control celular que se administre para obtener efectos terapéuticos o inhibidores, por supuesto, se puede determinar de una manera conocida en la técnica de acuerdo con las circunstancias particulares que rodeen al caso, incluyendo, p.ej., el agente específico administrado, la vía de administración, la afección tratada, y el sujeto o paciente tratado. Una dosis total diaria ejemplar de un agente de control el ciclo celular, que se puede administrar en dosis sencillas o múltiples, contiene un nivel de dosis desde aproximadamente 0,01 mg/kg de peso corporal hasta aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal.

Los agentes de control del ciclo celular de la invención se pueden administrar mediante cualquiera de de una variedad de vías adecuadas, tales como oralmente, rectalmente, transdérmicamente, subcutáneamente, intravenosamente, intramuscularmente o intranasalmente. Los agentes de control del ciclo celular se formulan preferiblemente en composiciones adecuadas para las vías deseadas antes de ser administrados.

Una composición o preparación farmacéutica de acuerdo con la invención comprende una cantidad eficaz de agente de control del ciclo celular y un vehículo farmacéuticamente aceptable, tal como un diluyente o excipiente para el agente. Cuando el vehículo sirve como diluyente, puede ser un material sólido, semi-sólido o líquido que actúe como vehículo, excipiente o medio para el/los ingrediente(s) activo(s). Las composiciones de acuerdo con la invención pueden elaborarse mezclando el/los ingrediente(s) activo(s) con un vehículo, o diluyéndolo con un vehículo, o encerrándolo o encapsulándolo dentro de un vehículo, que puede estar en forma de cápsula, sobre, envase de papel, o similares. Los ingredientes ejemplares, además de uno o más agentes de control del ciclo celular y cualquier otro ingrediente activo, incluyen Avicel (celulosa microcristalina), almidón, lactosa, dihidruro de sulfato de calcio, terra alba, sucrosa, talco, gelatina, agar, pectina, acacia, estearato de magnesio, ácido esteárico, aceite de cacahuete, aceite de oliva, monoestearato de glicerilo, Tween 80 (polisorbato 80), 1,3-butanodiol, manteca de cacao, cera de abejas, polietilenglicol, propilenglicol, monoestearato de sorbitan, polisorbato 60, 2-octildodecanol, bencilalcohol, glicina, ácido sórbico, sorbato de potasio, hidrogenofosfato disódico, cloruro de sodio, y agua.

Las composiciones se pueden preparar en cualquiera de una variedad de formas adecuadas para el modo de administración deseado. Por ejemplo, las composiciones farmacéuticas se pueden preparar en forma de comprimidos, píldoras, polvos, pastillas, sobres, cachets, elixires, suspensiones, emulsiones, soluciones, jarabes, aerosoles (como sólidos o en medios líquidos), cápsulas de gel suave o fuerte, supositorios, soluciones estériles inyectables, polvos estériles empaquetados, y similares.

Una composición farmacéutica de acuerdo con la invención comprende un agente de control del ciclo celular y, opcionalmente, uno o más ingredientes activos, tales como un agente antiproliferativo conocido que es compatible con el agente de control del ciclo celular y adecuado para la indicación que está siendo tratada. En una forma de realización preferida, una composición farmacéutica de la invención incluye una cantidad eficaz de un agente de control del ciclo celular de la Fórmula I como ingrediente activo.

Los compuestos de acuerdo con la invención pueden prepararse de formas análogas a aquellos descritos específicamente en lo que sigue, con los prefijos de los ejemplos deletreados (p.ej., A, B, C, D, E, F, G, H, J, K, L, M y N) que designan esquemas de síntesis generales.

Ejemplos

\bullet Ejemplo C(33)

4-[4-Amino-5-(2,4-dimetoxi-benzoil)-tiazol-2-ilamino]-bencenosulfonamida

10

El compuesto del título se preparó principalmente según se describe para el Ejemplo C(1). La 4-Isotiocianato-bencenosulfonamida y 2-Bromo-2',4'-dimetoxiacetofenona proporcionaron un 75% de rendimiento de polvo amarillo, con mp de 249-250ºC.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 10,93 (1H, bs), 7,93 (2H, bs), 7,75 (4H, bs), 7,25 (2H, bs), 7,21 (1H, d, J = 8,1 Hz), 6,61 (1H, d, J = 1,9 Hz), 6,55 (1H, dd, J = 8,1, 1,9 Hz), 3,79 (3H, s), 3,76 (3H, s).

FABMS (MH^{+}): 435.

Anal. Calcd. para C_{18}H_{18}N_{4}O_{5}S_{2}: C, 49,76; H, 4,18; N, 12,89; S, 14,76. Encontrado: C, 49,66; H, 4,15; N, 12,77; S, 14,86.

\bullet Ejemplo C(34)

4-[4-Amino-2-(4-sulfamoil-fenilamino)-tiazol-5-carbonil]-benzoato de etilo

11

El compuesto del título se preparó sustancialmente según se describe para el Ejemplo C(1). La 4-Isotiocianato-bencenosulfonamida y el 4-Bromoacetil-benzoato de etilo proporcionaron un 95% de rendimiento de polvo amarillo, con mp de 225-227ºC.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 11,16 (1H, s), 8,32 (2H, bs), 8,04 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,80 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,78 (4H, bs), 7,26 (2H, bs), 4,33 (2H, q, J = 7,2 Hz), 1,33 (3H, t, J = 7,2 Hz).

FABMS (MH^{+}): 447.

Anal. Calcd. para C_{19}H_{18}N_{4}O_{5}S_{2} \cdot 0,4 H_{2}O: C, 50,30; H, 4,18; N, 12,38; S, 14,13. Encontrado: C, 50,11; H, 3,97; N, 12,26; S, 14,14.

\bullet Ejemplo C(35)

4-[4-Amino-5-(2,4-dimetil-benzoil)-tiazol-2-ilamino]-bencenosulfonamida

12

El compuesto del título se preparó principalmente según se describe para el Ejemplo C(1). La 4-Isotiocianato-bencenosulfonamida y 2-bromo-2',4'-dimetilacetofenona suministraron un sólido amarillo con un 75% de rendimiento, con mp de 242-244ºC.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 10,97 (1H, bs), 8,00 (2H, bs), 7,76 (2H, d, J = 9,7 Hz), 7,72 (2H, d, J = 9,7 Hz), 7,24 (2H, bs), 7,22 (1H, d, J = 7,5 Hz), 7,07 (1H, s), 7,03 (1H, d, J = 7,5 Hz), 2,29 (3H, s), 2,23 (3H, s).

FABMS (MH^{+}): 403.

Anal. Calcd. para C_{18}H_{18}N_{4}O_{3}S_{2}: C, 53,71; H, 4,51; N, 13,92; S, 15,93. Encontrado: C, 53,47; H, 4,54; N, 13,69; S, 15,83.

\bullet Ejemplo C(38)

4-[4-Amino-5-(2,6-dicloro-4-trifluorometil-benzoil)-tiazol-2-ilamino]-bencenosulfonamida

13

El compuesto del título se preparó principalmente según se describe para el Ejemplo C(1). La 4-Isotiocianato-bencenosulfonamida y 2-bromo-2',6'-dicloro-4'-(trifluorometil) acetofenona suministraron, después de recristalización a partir de EtOH/H_{2}O y secando vía azeotropa de benceno, un sólido amarillo con un 46% de rendimiento, con mp de 294-296ºC.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 8,10 (1H, s), 8,05 (2H, s), 7,77 (4H, dd, J = 9,0, 14,0 Hz).

HRFABMS: Calcd. para C_{7}H_{12}Cl_{2}F_{3}N_{4}O_{3}S_{2} (MH^{+}): 510,9680. Encontrado: 510,9697.

Anal. Calcd. para C_{17}H_{11}Cl_{2}F_{3}N_{4}O_{3}S_{2} \cdot 0,1 H_{2}O \cdot C6H6: C, 40,28; H, 2,51; N, 10,30; S, 11,97; Cl, 13,51. Encontrado: C, 40,58; H, 2,28; N, 10,75; S, 12,31; Cl, 13,61.

\bullet Ejemplo C(39)

4-[4-Amino-2-(4-sulfamoil-fenilamino)-tiazol-5-carbonil]-benzoato de fenilo

14

El compuesto del título se preparó de una forma análoga a la usada en el Ejemplo C(1). La 4-Isotiocianato-bencenosulfonamida y el 4-(bromoacetil)-fenil benzoato suministraron un sólido amarillo con un 77% de rendimiento, con mp >300ºC.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 11,13 (1H, s), 8,26 (2H, bs), 8,15 (2H, dd, J = 7,2, 1,6 Hz), 7,83-7,73 (7H, m), 7,66-7,59 (2H, m), 7,41 (2H, d, J = 6,9 Hz), 7,27 (2H, s).

HRFABMS (MH^{+}): Calcd.: 495,0797. Encontrado: 495,0812.

Anal. Calcd. para C_{23}H_{18}N_{4}O_{5}S_{2} \cdot 0,2 H_{2}O: C, 55,45; H, 3,72; N, 11,25; S, 12,87. Encontrado: C, 55,34; H, 3,592; N, 11,01; S, 12,88.

\bullet Ejemplo C(47)

4-[4-Amino-5-(4-metil-tiazol-5-carbonil)-tiazol-2-ilamino]-bencenosulfonamida

15

El 5-Bromoacetil-4-metil-tiazol, que tiene la fórmula estructural 100 se preparó según se describe en Sych et al., J. Gen. Chem. USSR, vol. 32 (1962), pp. 970-975. Se añadió bromina (0,75 ml, 7,77 mmol) gota a gota a la solución de 1-(4-metil-tiazol-5-il)-etanona (2,05 mg, 14,5 mmol; Ganapathi et al., Proc.-Indian Acad. Sci. Sect. A, vol. 22 (1945), pp. 362-378) en HOAc (3 ml). Se agitó la mezcla a 85ºC durante 1,5 horas y se volvió una pasta amarilla. Se añadió HOAC (3 ml), y después de 1,5 horas, se le dejó enfriar. Se retiró el HOAc in vacuo y el residuo se dividió entre CH_{2}Cl_{2} y NaHCO_{3} acuoso saturado. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4}, y se evaporó para dar un sólido negro, 1,3 g (41% de rendimiento), que se usó sin purificación adicional.

^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 8,85 (1H, s), 4,28 (2H, s), 2,81 (3H, s).

El compuesto del título se preparó de una forma análoga a la usada en el Ejemplo C(1). La 4-Isotiocianato-bencenosulfonamida y el 5-bromoacetil-4-metil-tiazol proporcionaron un sólido marrón con un 31% de rendimiento, con mp de 265-266ºC.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 11,18 (1H, s), 9,08 (1H, s), 8,30 (2H, bs), 7,78 (4H, bs), 7,72 (2H, bs), 2,55 (3H, s).

Anal. Calcd. para C_{16}H_{13}N_{5}O_{3}S_{3}: C, 42,52; H, 3,31; N, 17,11; S, 24,32. Encontrado: C, 42,28; H, 3,33; N, 17,15; S, 24,52.

\bullet Ejemplo C(48)

4-[4-Amino-5-(3-metiltiofen-2-carbonil)-tiazol-2-ilamino]-bencenosulfonamida

16

El compuesto del título se preparó de una forma análoga a la usada en el Ejemplo C(1). La 4-Isotiocianato-bencenosulfonamida y el 2-bromoacetil-3-metil-tiofeno (del Ejemplo C(19)) proporcionaron un sólido amarillo con un 69% de rendimiento, con mp de 284,5-286,0ºC.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 11,11 (1H, s), 8,20 (2H, bs), 7,80 (2H, d, J = 10,7 Hz), 7,76 (2H, d, J = 10,7 Hz), 7,61 (1H, d, J = 5,0 Hz), 7,26 (2H, s), 6,90 (1H, d, J = 5,0 Hz), 2,38 (3H, s).

Anal. Calcd. para C_{15}H_{14}N_{4}O_{3}S_{3}: C, 45,67; H, 3,58; N, 14,20; S, 24,39. Encontrado: C, 45,52; H, 3,58; N, 14,04; S, 24,36.

\bullet Ejemplo C(49)

4-[4-Amino-5-(3-metil-benzo[b]tiofen-2-carbonil)-tiazol-2-ilamino]-bencenosulfonamida

17

El compuesto del título se preparó de una forma análoga a la usada en el Ejemplo C(1). La 4-Isotiocianato-bencenosulfonamida y el 2-(2-bromoacetil)-3-metil-benzo[b]tiofeno proporcionaron un polvo amarillo con un 73% de rendimiento, con mp de 274,0-275,5ºC.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 11,17 (1H, bs), 8,33 (2H, bs), 8,04-7,97 (1H, m), 7,90-7,84 (1H, m), 7,78 (4H, bs), 7,51-7,44 (2H, m), 7,27 (2H, s), 2,52 (3H, s).

Anal. Calcd. para C_{19}H_{16}N_{4}O_{3}S_{3}: C, 51,33; H, 3,63; N, 12,60; S, 21,64. Encontrado: C, 51,19; H, 3,67; N, 12,31; S, 21,37.

\bullet Ejemplo C(50)

4-[4-Amino-5-(2,5-dimetil-tiofen-3-carbonil)-tiazol-2-ilamino-tiazol-2-ilamino]-bencenosulfonamida

18

El 3-Bromoacetil-2,5-dimetil-tiofeno, que tiene la fórmula estructural 19 se preparó de forma análoga al 2-bromo-2'-yodoacetofenona para el Ejemplo C(12). El 3-Acetil-2,5-dimetiltiofeno (6,83 g, 44,3 mmol) proporcionó 10,1 g (98% de rendimiento) de aceite amarillo, que se usó sin purificación adicional.

^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 11,02 (1H, s), 4,64 (2H, s), 2,58 (3H, s), 2,36 (3H, s).

El compuesto del título se preparó de una forma análoga a la usada en el Ejemplo C(1). La 4-Isotiocianato-bencenosulfonamida y el 3-Bromoacetil-2,5-dimetil-tiofeno proporcionaron un polvo amarillo con un 69% de rendimiento, con mp de 263-5ºC.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 11,02 (1H, s), 8,05 (2H, bs), 7,76 (4H, s), 7,25 (2H, s), 6,87 (1H, s), 2,43 (3H, s), 2,38 (3H, s).

Anal. Calcd. para C_{16}H_{16}N_{4}O_{3}S_{3}: C, 47,04; H, 3,95; N, 13,71; S, 23,55. Encontrado: C, 47,01; H, 3,92; N, 13,62; S, 23,47.

\bullet Ejemplo C(51)

4-[4-Amino-5-(2-oxo-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-carbonil)-tiazol-2-ilamino]-bencenosulfonamida

20

El compuesto del título se preparó principalmente según se describe para el Ejemplo C(1). La 4-Isotiocianato-bencenosulfonamida y la 6-(bromoacetil)-2-oxo-1,2,3,4-tetrahidroquinolina dieron un sólido gris-amarillo con un 48% de rendimiento, con mp de 300-305ºC.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 11,08 (1H, s), 10,32 (1H, s) 8,17 (2H, bs), 7,82-7,70 (4H, m), 7,58-7,45 (3H, m), 7,27 (1H, s), 6,90 (1H, d, J = 8,1 Hz), 2,93 (4H, t, J =7,7 Hz). IR (KBr): 3266, 3193, 3069, 1679, 1597, 1525, 1434, 1365, 1317, 1153 cm^{-1}.

HRFABMS: Calcd. para C_{19}H_{18}N_{5}O_{4}S_{2} (MH^{+}): 444,0800. Encontrado: 444,0816.

Anal. Calcd. para C_{19}H_{17}N_{5}O_{4}S_{2} \cdot 0,6 MeOH: C, 50,88; H, 4,23; N, 15,13; S, 13,86. Encontrado: C, 51,02; H, 4,00; N, 15,00; S, 13,60.

\bullet Ejemplo C(59)

4-[4-Amino-2-(4-sulfamoil-fenilamino)-tiazol-5-il]-(3,5-dimetil-piridin-4-il)-metanona

21

El hidrobromuro de 4-(Bromoacetil)-3,5-dimetilpiridina, que tiene la fórmula estructural 22 se preparó primero como sigue. Se disolvió 4-Acetil-3,5-dimetilpiridina (500 mg, 3,36 mmol; Kutney et al., Can. J. Chem., vol. 41 (1963), pp. 695-702) en HBr al 30% en ácido acético (1 ml), se calentó a 70ºC, y se trató con una mezcla de bromina (0,17 ml, 3,36 mmol) en HBr al 30% en ácido acético (0,5 ml). Después de 2 horas, se dejó enfriar la mezcla a temperatura ambiente y se añadió éter (8 ml). El precipitado resultante se filtró, se aclaró con éter (2x), y se secó para proporcionar 1,03 g (100%) de un sólido púrpura, con mp de 222-225ºC, que se usó sin purificación adicional.

El compuesto del título se preparó principalmente según se describe para el Ejemplo C(1). La 4-Isotiocianato-bencenosulfonamida y el hidrobromuro de 4-(Bromoacetil)-3,5-dimetilpiridina proporcionaron un sólido tostado, que se purificó vía cromatografía en columna con MeOH/CHCl_{3} al 10% y cristalizó a partir de MeOH p ara obtener 35 mg (51%) de sólido amarillo amorfo.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 11,09 (1H, s), 8,32 (2H, s) 8,18 (2H, bs), 7,74 (4H, dd, J = 11,5, 9,3 Hz), 7,27 (2H, s), 2,15 (6H, s).

IR (KBr): 3378, 3342, 3260, 3160, 1625, 1594, 1560, 1518, 1443, 1342, 1160 cm^{-1}.

HRFABMS: Calcd. para C_{17}H_{18}N_{5}O_{3}S_{2} (MH^{+}): 404,0851. Encontrado: 404,0840.

Anal. Calcd. para C_{17}H_{17}N_{5}O_{3}S_{2} \cdot 0,6 H_{2}O: C, 49,44; H, 4,56; N, 16,66; S, 15,26. Encontrado: C, 49,13; H, 4,31; N, 16,61; S, 15,10.

\bullet Ejemplo C(65)

2S-[4-Amino-2-(4-sulfamoil-fenilamino)-tiazol-5-carbonil]-N-carbobenciloxi-pirrolidina

23

El compuesto del título se preparó principalmente según se describe para el Ejemplo C(1). La 4-Isotiocianato-bencenosulfonamida y la 2S-bromoacetil-N-carbobenciloxi-pirrolidina (ver Ejemplo C(64)) proporcionaron un sólido que se purificó vía cromatografía en columna con eluyente MeOH/CHCl_{3} al 5% para dar un sólido amarillo amorfo, 140 mg (46%), con mp de 150-160ºC (d).

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 11,05 (1H, d, J = 10,0 Hz), 1,98 (2H, bd, J = 17,1 Hz), 7,79 (4H, dd, J = 12,1, 9,7 Hz), 7,41-7,11 (5H, m), 5,15-4,89 (2H, m), 4,32-4,21 (1H, bm), 3,51-3,40 (2H, bm), 2,35-2,13 (1H, bm), 1,93-1,75 (3H, bm).

IR (KBr): 3288, 1686, 1598, 1550, 1527, 1420, 1157 cm^{-1}.

HRFABMS: Calcd. para C_{22}H_{23}N_{5}O_{5}S_{2}Cs (M+Cs^{+}): 634,0195. Encontrado: 634,0215.

Anal. Calcd. para C_{22}H_{23}N_{5}O_{5}S_{2} \cdot 0,3 H_{2}O \cdot 0,1 CHCl_{3}: C, 51,15; H, 4,60; N, 13,50; S, 12,36. Encontrado: C, 51,36; H, 4,63; N, 13,31; S, 12,47.

\bullet Ejemplo C(73)

4-[4-Amino-5-(3,5-dibromo-tiofen-2-carbonil)-tiazol-2-ilamino]-bencenosulfonamida

24

El compuesto del título se preparó de una forma análoga a la usada en el Ejemplo C(1). La 4-Isotiocianato-bencenosulfonamida y el 2-bromoacetil-3,5-dibromo-tiofeno (del ejemplo C(72)) proporcionaron un polvo amarillo con un 41% de rendimiento, con mp de 254-255ºC.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 11,24 (1H, s), 8,31 (2H, bs), 7,77 (4H, s), 7,40 (1H, s), 7,28 (2H, s).

FABMS (MH^{+}): 536/538/540.

Anal. Calcd. para C_{14}H_{10}N_{4}O_{3}S_{3}Br_{2}: C, 31,24; H, 1,87; N, 10,41; S, 17,87; Br, 29,69. Encontrado: C, 31,08; H, 1,90; N, 10,16; S, 17,69; Br, 29,96.

\bullet Ejemplo C(76)

4-[4-Amino-5-(1,5-dimetil-1H-imidazol-4-carbonil)-tiazol-2-ilamino]-bencenosulfonamida

25

El compuesto del título se preparó de una forma análoga a la usada en el Ejemplo C(1). La 4-Isotiocianato-bencenosulfonamida y el 5-bromoacetil-1,5-dimetil-1H-imidazol (del ejemplo C(74)) proporcionaron un sólido amarillo con un 8% de rendimiento, con mp de 293-294ºC.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 10,80 (1H, s), 7,81 (2H, d, J = 9,0 Hz), 7,75 (2H, d, J = 9,0 Hz), 7,62 (1H, s), 7,24 (2H, s), 3,56 (3H, s), 2,52 (3H, s).

HRFABMS (M+Na^{+}): Calcd.: 415,0623. Encontrado: 415,0609.

Anal. Calcd. para C_{15}H_{16}N_{6}O_{3}S_{2} \cdot 1,0 CH_{3}OH \cdot 1,0 CHCl_{3}: C, 42,53; H, 4,45; N, 18,26; S, 13,93. Encontrado: C, 42,57; H, 4,41; N, 18,18; S, 14,07.

\bullet Ejemplo C(85)

4-[4-Amino-5-(2,6-difluoro-benzoil)-tiazol-2-ilamino]-bencenosulfonamida

26

El compuesto del título se preparó de una forma análoga a la usada en el Ejemplo C(1). La 4-Isotiocianato-bencenosulfonamida y 2-bromo-2',6'-difluoro-acetofenona (del ejemplo C(79)) proporcionaron cristales amarillo brillante con un 69% de rendimiento, con mp de 258-260ºC.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 11,20 (1H, s), 8,20 (2H, bs), 7,79 (2H, d, J = 9,0 Hz), 7,74 (2H, d, J = 9,0 Hz), 7,61-7,49 (1H, m), 7,26 (2H, s), 7,22 (1H, d, J = 7,9 Hz), 7,19 (1H, d, J = 8,0 Hz).

IR (KBr): 3310, 1622, 1599, 1547, 1467, 1425, 1410, 1318, 1156 cm^{-1}.

HRFABMS (MH^{+}): Calcd.: 411,0397. Encontrado: 411,0410.

Anal. Calcd. para C_{16}H_{12}N_{4}O_{3}S_{2}F_{2} \cdot 0,7 CH_{3}OH: C, 46,34; H, 3,45; N, 12,94; S, 14,82. Encontrado: C, 46,19; H, 3,12; N, 12,83; S, 14,94.

\bullet Ejemplo C(92)

4-[4-Amino-5-(2,5-dicloro-tiofen-3-carbonil)-tiazol-2-ilamino]-bencenosulfonamida

27

El 3-Bromoacetil-2,5-dicloro-tiofeno, que tiene la fórmula estructural 28 se preparó de una forma análoga al 2-Bromo-2'-yodo-acetofenona, ver Ejemplo C(12): el 3-Acetil-2,5-diclorotiofeno (2,0 g, 10,2 mmol) proporcionó 2,9 g (100% de rendimiento) de aceite amarillo, que se usó sin purificación adicional.

^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 7,25 (1H, s), 4,40 (2H, s).

El compuesto del título se preparó de una forma análoga a la usada en el Ejemplo C(1). La 4-Isotiocianato-bencenosulfonamida y el 3-bromoacetil-2,5-dicloro-tiofeno proporcionaron un sólido amarillo con un 65% de rendimiento, con mp de 274-276ºC.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 11,20 (1H, s), 8,24 (2H, bs), 7,80 (4H, s), 7,33 (1H, s), 7,31 (2H, s).

FABMS (MH^{+}): 449/451.

Anal. Calcd. para C_{14}H_{10}N_{4}O_{3}S_{3}Cl_{2}: C, 37,42; H, 2,24; N, 12,47; S, 21,41; Cl, 15,78. Encontrado: C, 37,56; H, 2,19; N, 12,39; S, 21,29; Cl, 15,71.

\newpage

\bullet Ejemplo C(95)

4-[4-Amino-5-(3-metil-5-nitro-tiofen-2-carbonil)-tiazol-2-ilamino]-bencenosulfonamida

29

El compuesto del título se preparó de una forma análoga a la usada en el Ejemplo C(1). La 4-Isotiocianato-bencenosulfonamida y el 2-bromoacetil-3-metil-5-nitro-tiofeno (del ejemplo C(78)) proporcionaron un sólido marrón oscuro con un 38% de rendimiento, con mp de 268-269ºC.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 11,31 (1H, s), 8,46 (2H, bs), 8,08 (1H, s), 7,81 (4H, s), 7,32 (2H, s), 2,38 (3H, s).

Anal. Calcd. para C_{15}H_{13}N_{5}O_{5}S_{3}: C, 40,99; H, 2,98; N, 15,94; S, 21,89. Encontrado: C, 41,11; H, 2,95; N, 15,66; S, 21,70.

\bullet Ejemplo C(99)

4-[4-Amino-5-(2-fluoro-6-trifluorometil-benzoil)-tiazol-2-ilamino]-bencenosulfonamida

30

La 2-Bromo-2'-fluoro-6'-trifluorometil-acetofenona, que tiene la fórmula estructural 31 se preparó de una forma análoga a la 2-bromo-2'-yodo-acetofenona, ver Ejemplo C(12). La 2'-Fluoro-6'-(trifluorometil)-acetofenona (745 mg, 3,61 mmol) proporcionó 1,05 g de aceite amarillo, que se usó sin purificación adicional.

^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 7,69-7,52 (2H, m), 7,44-7,35 (1H, m), 4,42 (3H, s).

El compuesto del título se preparó de una forma análoga a la usada en el Ejemplo C(1). La 4-Isotiocianato-bencenosulfonamida y 2-bromo-2'-fluoro-6'-trifluorometil-acetofenona en bruto proporcionaron un sólido amarillo brillante con un 21% de rendimiento, con mp de 290-292ºC.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 11,15 (1H, s), 8,20 (2H, bs), 7,83-7,68 (7H, m), 7,31 (2H, s).

Anal. Calcd. para C_{17}H_{12}N_{4}O_{3}S_{2}F_{4}: C, 44,35; H, 2,63; N, 12,17; S, 13,93. Encontrado: C, 44,42; H, 2,64; N, 12,13; S, 13,94.

\bullet Ejemplo C(107)

4-[4-Amino-5-(2,4,6-tricloro-benzoil)-tiazol-2-ilamino]-bencenosulfonamida

32

La 2,4,6-Tricloroacetofenona, que tiene la fórmula estructural 33 se preparó primero como sigue. Adaptado a partir de un procedimiento por Reynolds et al., Org. Syn. Coll., vol. IV (1963), pp. 708-710. Se añadió CCl_{4} (11 \mul) a virutas de Mg (283 mg, 11,3 mmol) y a EtOH (0,25 ml). La reacción sobreviviente remitió, antes de que se añadiera una solución de dietil malonato (1,71 ml, 11,33 mmol) en EtOH (0,91 ml) a una tasa para mantener la reacción. Después de 30 min, se refluyó la mezcla para consumir Mg durante una hora, y entonces se dejó enfriar. La masa sólida se suspendió en éter (25 ml) y se añadió cuidadosamente una solución de cloruro de 2,4,6-triclorobenzoilo (2,50 g, 10,3 ml) en éter (5 ml). Después de 3 días, se añadió cuidadosamente una solución de H_{2}SO_{4} (0,6 ml) en agua (10 ml) para disolver cualquier sólido, y se extrajo con éter (2 x 10 ml). Los extractos se secaron sobre MgSO_{4} y se evaporaron hasta un aceite pardo, que se colocó en HOAc (3 ml), H_{2}O (2 ml) y H_{2}SO_{4} (0,33 ml), y se calentó para refluirlo. Después de 7,5 horas, se dejó enfriar la mezcla toda la noche. Se volvió la mezcla alcalina con NaOH 1N (35 ml) y se extrajo con éter (3 x 10 ml). Las capas etéreas combinadas se secaron con MgSO_{4} y se evaporaron para dar 1,80 g (78%) de un sólido blanco que se usó sin purificación adicional (descrito previamente en Baker et al., J. Chem. Soc. (1941), pp. 796-802).

La 2-Bromo-2',4',6'-tricloroacetofenona, que tiene la fórmula estructural 34 se preparó de una forma análoga a la 2-bromo-2'-yodo-acetofenona para el Ejemplo C(12). La 2',4',6'-tricloroacetofenona bruta proporcionó 1,27 g (94%) de cristales dorados que se usaron sin purificación adicional (descrito previamente en Baker et al., J. Chem. Soc. (1941), pp. 796-802).

^{1}H NMR: \delta 7,42 (2H, s), 4,42 (s, 2H).

El compuesto del título se preparó principalmente según se describe para el Ejemplo C(1), excepto por que se empleó exceso de t-butóxido de potasio (2,2 equivalentes). La 4-Isotiocianato-bencenosulfonamida y la 2-bromo-2',4',6'-tricloroacetofenona proporcionaron una goma marrón oscuro, que se purificó vía cromatografía en columna con MeOH/CHCl_{3} al 10% y precipitó a partir del MeOH/CHCl_{3} para obtener 96 mg (21%) de un sólido amarillo pálido amorfo.

^{1}H NMR (CD_{3}OD): \delta 7,87 (4H, dd, J = 14,6, 9,0 Hz), 7,60 (2H, s).

IR (KBr): 3312, 1593, 1545, 1459, 1421, 1161 cm^{-1}.

ESIMS (MH^{+}): 477/479/481. (M^{-}): 475/477/479.

Anal. Calcd. para C_{16}H_{11}Cl_{3}N_{4}O_{3}S_{2}: C, 40,22; H, 2,32; N, 11,73; Cl, 22,26; S, 13,42. Encontrado: C, 40,12; H, 2,34; N, 11,56; Cl, 22,41; S, 13,43.

\bullet Ejemplo C(108)

4-[4-Amino-5-(2,6-difluoro-benzoil)-tiazol-2-ilamino]-N-metil-bencenosulfonamida

35

\vskip1.000000\baselineskip

La 4-Amino-N-metil-bencenosulfonamida, que tiene la fórmula estructural 36 se elaboró primero como sigue. Se agitó N-Metil-4-nitro-bencenosulfonamida (2,58 g, 11,9 mmol; Khanna et al., J. Med. Chem., vol. 40 (1997), pp. 1619-1633) en MeOH (60 ml) bajo atmósfera de nitrógeno durante 2 horas y se filtró. El filtrado se concentró in vacuo para proporcionar 2,17 g (98% de rendimiento) de copos cristalinos incoloros, que mediante ^{1}H NMR encajó con lo narrado en la literatura (Khanna et al., J. Med. Chem., vol. 40 (1997), pp. 1619-1633) y se usó sin purificación adicional.

La 4-Isotiocianato-N-metil-bencenosulfonamida, que tiene la fórmula estructural 37 se preparó de una forma análoga a la 4-Isotiocianato-benzamida del Ejemplo C(102). La 4-Amino-N-metil-bencenosulfonamida (2,17 g, 11,7 mmol) dio 2,10 g (79% de rendimiento) de polvo blanco mullido, que se usó sin purificación adicional.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 7,83 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,65 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,61 (1H, q J = 4,9 Hz), 2,43 (3H, d, J = 4,9 Hz).

El compuesto del título se preparó de una forma análoga a la usada en el Ejemplo C(1). La 4-Isotiocianato-N-metil-bencenosulfonamida y 2-bromo-2',6'-difluoro-acetofenona (del Ejemplo C(79)) proporcionaron un producto bruto, que se extrajo con i-PrOH/CHCl_{3} al 10% y se purificó vía cromatografía en columna con MeOH/CHCl_{3} al 5% para producir un polvo amarillo amorfo con un 41% de rendimiento, que se descompuso sobre 200ºC.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 11,23 (1H, s), 8,33 (2H, bs), 7,81 (2H, d, J = 8,5 Hz), 7,54 (2H, d, J = 8,5 Hz), 7,63-7,41 (1H, m), 7,39 (1H, q, J = 5,0 Hz), 7,23 (2H, t, J = 7,1 Hz), 2,41 (3H, d, J = 5,0 Hz).

HRFABMS (MH^{+}): Calcd.: 425,0554. Encontrado: 425,0566.

Anal. Calcd. para C_{17}H_{14}N_{4}O_{3}S_{2}F_{2} \cdot 0,5 CH_{3}OH: C, 47,72; H, 3,66; N, 12,72; S, 14,56. Encontrado: C, 47,56; H, 3,52; N, 12,72; S, 14,77.

\bullet Ejemplo C(109)

4-[4-Amino-5-(2,6-difluoro-benzoil)-tiazol-2-ilamino]-N-N-dimetil-bencenosulfonamida

38

La 4-Amino-N-N-dimetil-bencenosulfonamida, que tiene la fórmula estructural 39 se elaboró a continuación como sigue. Se agitaron N-N-dimetil-4-nitro-bencenosulfonamida (3,89 g, 16,9 mmol; Khanna et al., J. Med. Chem., vol. 40 (1997), pp. 1619-1633), Pd/C al 10% (800 mg), MeOH (80 ml) y THF (200 ml) en hidrógeno durante 6 horas y se filtraron. El filtrado se concentró in vacuo para proveer 3,68 g de sólido amarillo, que resultó idéntico mediante espectro ^{1}H NMR a la descripción previa por Khanna et al., J. Med. Chem., vol. 40 (1997), pp. 1619-1633 y se usó sin purificación adicional.

La 4-Isotiacianato-N-N-dimetil-bencenosulfonamida, que tiene la fórmula estructural 40 se elaboró después como sigue. A una solución de 4-Amino-N-N-dimetil-bencenosulfonamida (2,0 g, 10 mmol) en acetona (50 ml) a 5-10ºC se añadieron simultáneamente una solución de tiofosgena (0,91 ml, 12 mmol) en acetona (20 ml) y Na_{2}CO_{3} acuoso al 25% (10 ml). Después de 5 min a 5-8ºC, se dejó calentar la mezcla y se agitó a temperatura ambiente durante media hora. El solvente se evaporó y se añadió agua (70 ml). El precipitado amarillo brillante resultante se filtró, se lavó con agua, y se secó al vacío para producir 2,35 g (97% de rendimiento) de polvo blanco, que se usó sin purificación adicional.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 7,82 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,69 (2H, d, J = 8,4 Hz), 2,63 (6H, s).

El compuesto del título se preparó de una forma análoga a la usada en el Ejemplo C(1). La 4-Isotiocianato-N-N-dimetil-bencenosulfonamida y 2-bromo-2',6'-difluoro-acetofenona (del Ejemplo C(79) proporcionaron un sólido marrón bruto que recristalizó a partir de EtOH para dar cristales marrón brillante con un 52% de rendimiento, con mp de 240-242ºC.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 11,24 (1H, s), 8,14 (2H, bs), 7,84 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,72 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,62-7,49 (1H, m), 7,23 (1H, d, J = 7,9 Hz), 7,20 (1H, d, J = 8,0 Hz), 2,59 (6H, s).

Anal. Calcd. para C_{18}H_{16}N_{4}O_{3}S_{2}F_{2}: C, 49,31; H, 3,68; N, 12,78; S, 14,63. Encontrado: C, 49,29; H, 3,71; N, 12,68; S, 14,50.

\newpage

\bullet Ejemplo C(114)

4-[4-Amino-5-(3-metil-tiofen-2-carbonil)-tiazol-2-ilamino]-N-metil-bencenosulfonamida

41

El compuesto del título se preparó de una forma análoga a la usada en el Ejemplo C(1). La 4-Isotiocianato-N-metil-bencenosulfonamida (del Ejemplo C(108)) y 2-bromoacetil-3-metil-tiofeno (del Ejemplo C(19) proporcionaron un sólido amarillo con un 57% de rendimiento, con mp de 197,0-199,5ºC.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 11,19 (1H, s), 8,24 (2H, bs), 7,86 (2H, d, J = 8,7 Hz), 7,75 (2H, d, J = 8,7 Hz), 7,65 (1H, d, J = 5,0 Hz), 7,36 (1H, q, J = 6,1 Hz), 7,03 (1H, d, J = 5,0 Hz), 2,42 (3H, S), 2,41 (3H, d, J = 6,1 Hz).

HRFABMS (MH^{+}): Calcd.:409,0463. Encontrado: 409,0474.

Anal. Calcd. para C_{16}H_{16}N_{4}O_{3}S_{3} \cdot 0,4 H_{2}O: C, 46,23; H, 4,07; N, 13,48; S, 23,14. Encontrado: C, 46,28; H, 3,98; N, 13,38; S, 23,08.

\bullet Ejemplo C(115)

4-[4-Amino-5-(2,4,6-trifluoro-benzoil)-tiazol-2-ilamino]-N-N-dimetil-bencenosulfonamida

42

La 2-Cloro-2',4',6'-trifluoroacetofenona, que tiene la fórmula estructural 43 se preparó primero como sigue. A una solución agitada mecánicamente de 1,3,5-trifluorobenceno (5,17 ml, 50,0 mmol) en dicloroetano (12,5 ml) se añadió gradualmente AlCl_{3} (13,4 g, 115 mmol) durante un periodo de 15 min con cuidado. Se observaron sacudidas violentas y la evolución del gas HCl. La mezcla se calentó cuidadosamente hasta refluir, y se añadió cloruro de cloroacetilo (6,20 g, 4,37 ml, 55,0 mmol) gota a gota durante un periodo de tiempo de 45 min. Después de 6 horas en reflujo, se dejó enfriar la mezcla durante 12 horas, siendo después vertida cuidadosamente en una masa de de hielo/agua (\sim200 ml) y se extrajo con éter (3 x 50 ml). Las capas etéreas combinadas se lavaron con HCl acuoso al 10% (2 x 30 ml), NaOH acuoso 1N (3 x 30 ml), y salmuera (25 ml), se secaron sobre MgSO_{4} y se evaporaron para dar 5,28 g (51%) de un sólido amarillo que se usó sin purificación adicional. (Una muestra analítica cristalizó a partir de éter/hexano para dar microcristales amarillos, con mp de 43-45ºC).

^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 6,81 (2H, t, J = 8,4 Hz), 4,54 (2H, s).

IR (KBr): 1721, 1637, 1616, 1447, 1201, 1128, 1045 cm^{-1}.

Anal. Calcd. para C_{8}H_{4}ClF_{3}O: C, 46,07; H, 1,93; Cl, 17,00. Encontrado: C, 45,92; H, 1,95; Cl, 16,97.

El compuesto del título se preparó principalmente según se describe en el Ejemplo C(1), excepto en que se empleó exceso de t-butóxido de potasio (2,2 equivalentes). La 4-Isotiocianato-bencenosulfonamida y 2-cloro-2',4',6'-trifluoro-acetofenona dieron un sólido marrón-rojo, que se purificó vía cromatografía en columna con MeOH/CH_{2}Cl_{2} al 5% como eluyente. La precipitación con hexano traza en MeOH/CH_{2}Cl_{2} dio 70 mg (33%) de polvo amarillo amorfo que se descompuso sobre 148ºC.

^{1}H NMR (CD_{3}OD): \delta 7,91 (1H, s), 7,86 (4H, dd, J = 14,9, 6,9 Hz), 6,99 (2H, dd, J = 9,0, 7,5 Hz).

IR (KBr): 3278, 1602, 1549, 1425, 1155 cm^{-1}.

HRFABMS. Calcd. para C_{16}H_{12}F_{3}N_{4}O_{3}S_{2} (MH^{+}): 429,0303. Encontrado: 429,0315.

Anal. Calcd. para C_{16}H_{11}F_{3}N_{4}O_{3}S_{2} \cdot 1,1 H_{2}O: C, 42,87; H, 2,97; N, 12,50; S, 14,31. Encontrado: C, 42,98; H, 2,73; N, 12,12; S, 14,48.

\bullet Ejemplo C(116)

{4-Amino-2-[4-(4-metil-piperazin-1-sulfonil)-fenilamino]-tiazol-5-il}-2,6-difluoro-fenil)-metanona

\vskip1.000000\baselineskip

44

\vskip1.000000\baselineskip

La 1-Metil-4-(4-nitro-bencenosulfonil)-piperazina, que tiene la fórmula estructural 45 se preparó de una forma análoga a la usada para la N-metil-4-nitro-bencenosulfonamida para el Ejemplo C(108) (Khanna et al., J. Med. Chem., vol. 40 (1997), pp. 1619-1633). El cloruro de 4-nitrobencenosulfonilo y la 1-metilpiperazina dieron 5,1 g (88% de rendimiento) desólido amarillo, que se usó sin purificación adicional.

La 4-(4-Metil-piperazin-1-sulfonil)-anilina, que tiene la fórmula estructural 46 se preparó de una forma análoga a la usada para la N-metil-4-amino-bencenosulfonamida para el Ejemplo C(108). La 1-Metil-4-(4-nitro-bencenosulfonil)-piperazina proporcionó un sólido plomizo con un 99% de rendimiento, que se usó en el siguiente paso sin purificación adicional.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 7,37 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,67 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,16 (2H, bs), 3,30 (4H, bs), 3,03 (4H, bs), 2,58 (3H, s).

La 1-(4-Isotiocianato-bencenosulfonil)-4-metil-piperazina, que tiene la fórmula estructural
47 se elaboró de una forma análoga a la 4-isotiocianato-benzamida para el Ejemplo C(102).

La 4-(4-Metil-piperazin-1-sulfonil)-anilina proporcionó 1,1 g (94% de rendimiento) de cristales blancos que se usaron sin purificación adicional.

^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 7,74 (2H, d, J = 8,6 Hz), 7,35 (2H, d, J = 8,6 Hz), 3,27 (4H, bs), 2,77 (4H, bs), 2,47 (3H, s).

El compuesto del título se preparó de una forma análoga a la usada en el Ejemplo C(1). La 1-(4-Isotiocianato-bencenosulfonil)-4-metil-piperazina y 2-bromo-2',6'-difluoro-acetofenona (del ejemplo C(79)) proporcionaron un sólido amarillo con un 69% de rendimiento, con mp de 172-174ºC.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 11,23 (1H, bs), 8,21 (2H, bs), 7,84 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,69 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,62-7,49 (1H, m), 7,22 (1H, d, J = 7,8 Hz), 7,19 (1H, d, J = 8,1 Hz), 2,87 (4H, t, J = 4,5 Hz), 2,35 (4H, t, J = 4,5 Hz), 2,13 (3H, s).

HRFABMS (MH^{+}): Calcd. 494,1132. Encontrado: 494,1120.

Anal. Calcd. para C_{21}H_{21}N_{5}O_{3}S_{2}F_{2} \cdot 0,1 H_{2}O \cdot 0,5 CH_{3}OH: C, 50,50; H, 4,57; N, 13,70; S, 12,54. Encontrado: C, 50,34; H, 4,39; N, 13,51; S, 12,63.

\newpage

\bullet Ejemplo D(5)

4-[4-Amino-5-(3-amino-5-amino-tiofen-2-carbonil)-tiazol-2-ilamino]-bencenosulfonamida

48

El compuesto del título se preparó de una forma análoga a la usada en el Ejemplo D(1). El compuesto del título del Ejemplo C(95) se hidrogenó y recristalizó a partir de EtOH para proporcionar un polvo marrón con un 96% de rendimiento, con mp de 268-271ºC.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 10,97 (1H, s), 7,91 (2H, s), 7,82 (2H, d, J = 9,1 Hz), 7,78 (2H, d, J = 9,1 Hz), 7,28 (2H, s), 6,43 (2H, s), 5,81 (1H, s), 2,34 (3H, s).

FABMS (MH^{+}): 410.

Anal. Calcd. para C_{15}H_{15}N_{5}O_{3}S_{3} \cdot 0,1 H_{2}O \cdot 0,3 EtOH: C, 44,07; H, 4,03; N, 16,47; S, 22,63. Encontrado: C, 44,23; H, 3,93; N, 16,07; S, 23,01.

\bullet Ejemplo E(2)

Ácido 4-[4-Amino-2-(4-sulfamoil-fenilamino)-tiazol-5-carbonil]-benzoico

49

A una suspensión de 4-[4-Amino-2-(4-sulfamoil-fenilamino)-tiazol-5-carbonil]-benzoato de etilo (500 mg, 1,12 mmol; Ejemplo C(34)) en MeOH (10 ml) se le añadió NaOH acuoso 1N (3,4 ml, 3,4 mmol). Después de 4 horas, la mezcla resultante se acidificó con HCl acuoso 1N hasta pH 3 y se filtró. El sólido marrón aislado cristalizó en EtOH para proporcionar 330 mg (70% de rendimiento) de cristales marrón brillante, con mp de 298,5-300ºC.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 13,15 (1H, s), 11,14 (1H, s), 8,31 (2H, bs), 8,02 (2H, d, J = 8,1 Hz), 7,78 (4H, s), 7,77 (2H, d, J = 8,1 Hz), 7,26 (2H, s).

HRFABMS (M+Na^{+}): Calcd.: 441,0303. Encontrado: 441,0320.

Anal. Calcd. para C_{17}H_{14}N_{4}O_{5}S_{2} \cdot 0,4 H_{2}O: C, 47,97; H, 3,50; N, 13,16; S, 15,07. Encontrado: C, 48,04; H, 3,48; N, 12,98; S, 15,18.

\bullet Ejemplo J(4)

4-[4-Amino-5-(2,6-difluoro-benzoil)-tiazol-2-ilamino]-N-piperidin-4-ilmetil-bencenosulfonamida

50

La N-ter-Butoxicarbonil-4-carbamoil-piperidina, que tiene la fórmula estructural 51 se elaboró como sigue. A isonipecotamida (5,00 g, 39,0 mmol) en dioxano (100 ml) se añadió di-ter-butil bicarbonato (8,51 g, 39,0 mmol) y N-N-diisopropiletilamina (6,0 ml, 42,9 mmol). Se dejó agitar la mezcla toda la noche, después se evaporó a presión reducida hasta sequedad. El residuo se dividió entre CHCl_{3} y HCl 1N. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4}, y se concentró para dar 8,3 g (93% de rendimiento) de sólido blanco, que se usó sin purificación adicional.

^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 5,53 (2H, bs), 4,03 (2H, d, J = 13,7 Hz), 2,33 (2H, tt, J = 11,8, 3,7 Hz), 2,08 (2H, bs), 1,89 (2H, dd, J = 13,7, 3,7 Hz), 1,69 (1H, dd, J = 11,8, 4,4 Hz), 1,65-1,57 (1H, m), 1,44 (9H, s).

La 4-Aminometil-N-ter-butoxicarbonil-piperidina, que tiene la fórmula estructural 52 se elaboró como sigue. A N-ter-butoxicarbonil-4-carbamoil-piperidina (15,6 mmol) en THF (40 ml) a -78ºC en Ar se le añadió LiAlH_{4} (592 mg, 15,6 mmol). Se dejó calentar la mezcla a temperatura ambiente lentamente y después de media hora, se reenfrió hasta -78ºC, se templó con acetato de etilo, y se dividió entre EtOAc y NaOH 2N. La capa orgánica se separó, se secó sobre K_{2}CO_{3}, y se concentró para dar 1,98 g (59% de rendimiento) de extracto líquido amarillo, que se usó sin purificación adicional.

La N-ter-Butoxicarbonil-4-[(4-nitro-bencenosulfonilamino)-metil]-piperidina, que tiene la fórmula estructural
53 se elaboró como sigue. Se añadió cloruro de 4-nitro-bencenosulfonilo (2,05 g, 9,24 mmol) a una solución de 4-Aminometil-N-ter-butoxicarbonil-piperidina (1,98 g, 9,24 mmol) en THF (20 ml) a temperatura ambiente. La mezcla se refluyó durante 1 hora, se concentró in vacuo, y se dividió entre CH_{2}Cl_{2} y HCl 1N. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se pasó a través de un tampón de gel de sílice, y se concentró para dar 1,71 g (46% de rendimiento) de sólido amarillo, que se usó sin purificación adicional.

La 4-[(4-Amino-bencenosulfonilamino)-metil]-N-ter-Butoxicarbonil-piperidina, que tiene la fórmula estructural 54 se preparó como sigue. Se agitó N-ter-Butoxicarbonil-4-[(4-nitro-bencenosulfonilamino)-metil]-piperidina (1,70 g, 4,26 mmol), Pd/C al 10% (250 mg), MeOH (10 ml), y THF (10 ml) en hidrógeno durante 2 horas y se filtró. El filtrado se concentró en un residuo que se purificó vía cromatografía en columna con MeOH/CHCl_{3} al 5% como eluyente, produciendo 1,39 g (88% de rendimiento) de sólido blanco, que se usó sin purificación adicional.

La N-ter-Butoxicarbonil-4-[(4-isotiocianato-bencenosulfonilamino)-metil]-piperidina, que tiene la fórmula estructural 55, se preparó de una forma análoga a la 1-(4-isotiocianato-fenil)-morfolina para el Ejemplo C(54). La 4-[(4-Amino-bencenosulfonilamino)-metil]-N-ter-Butoxicarbonil-piperidina proporcionó un sólido amarillo con un 39% de rendimiento, que se usó sin purificación adicional.

La 4-{[4-(5-Acetil-4-amino-tiazol-2-ilamino)-bencenosulfonilamino]-metil}-N-ter-butoxicarbonil-piperidina, que tiene la fórmula estructural 56 se preparó de una forma análoga a la usada en el Ejemplo C(1). La N-ter-Butoxicarbonil-4-[(4-isotiocianato-bencenosulfonilamino)-metil]-piperidina y 2-bromo-2',6'-difluoro-acetofenona (del Ejemplo C(79)) proporcionaron un sólido amarillo con un 50% de rendimiento.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 11,22 (1H, s), 8,20 (2H, bs), 7,84-7,73 (3H, m), 7,62-7,54 (2H, m), 7,24 (2H, dd, J = 7,8, 7,7 Hz), 3,89 (2H, d, J = 12,8 Hz), 3,35 (2H, s), 2,52 (2H, d, J = 1,2 Hz), 1,60 (2H, d, J = 10,1 Hz), 1,56-1,42 (1H, m), 1,39 (9H, s), 0,91 (2H, d, J = 12,8 Hz).

El compuesto del título se preparó de una forma análoga a la usada en el Ejemplo J(1). La 4-{[4-(5-Acetil-4-amino-tiazol-2-ilamino)-bencenosulfonilamino]-metil}-N-ter-butoxicarbonil-piperidina proporcionó un sólido marrón con un 28% de rendimiento.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 8,11 (2H, bs), 7,70 (4H, bs), 7,58-7,42 (1H, m), 7,20 (1H, d, J = 7,8 Hz), 7,15 (1H, d, J = 7,8 Hz), 3,80 (2H, bs), 3,05 (2H, d, J = 10,0 Hz), 2,60 (2H, d, J = 6,8 Hz), 1,65 (2H, d, J = 12,2 Hz), 1,52 (1H, bs), 1,07 (2H, d, J = 10,0 Hz).

HRFABMS (MH^{+}): Calcd.: 507,1210. Encontrado: 507,1206.

Anal. Calcd. para C_{22}H_{23}N_{5}O_{3}S_{2}F_{2} \cdot 0,1 CH_{3}OH \cdot 0,2 CF_{3}COOH: C, 50,65; H, 4,73; N, 13,12; S, 12,02. Encontrado: C, 50,92; H, 4,46; N, 12,87; S, 12,18.

Se pueden elaborar otros compuestos de acuerdo con la invención de maneras similares a aquellas descritas anteriormente. Compuestos ejemplares adicionales de la invención se identifican en las Tablas I, II y III en lo que sigue, que proporcionan resultados de ensayos bioquímicos y biológicos.

Evaluación bioquímica y biológica

Se midió la actividad kinasa dependiente de ciclina cuantificando la incorporación dependiente del tiempo catalizada por enzima de fosfato radioactivo a partir de ATP[^{32}P] o ATP[^{33}P] a un sustrato proteico. A menos que se indicara lo contrario, los ensayos se desarrollaron en portaobjetos de 96 pocillos en un volumen total de 50 \mul, en presencia de HEPES 10 mM (N-[2-hidroxietil]piperazina-N'-[ácido 2-etanosulfónico]) (pH 7,4), MgCl_{2} 10 mM, adenosín trifosfato (ATP)25 \muM, 1 mg/ml de ovoalbúmin, 5 \mug/ml de leupeptina, ditiotreitol 1 mM, \beta-glicerosfosfato 10 mM, vanadato sódico 0,1 mM, fluoruro sódico 1 mM, etilenglicol-bis (éter \beta-aminoetilo)-N,N,N',N'-ácido tetraacético 2,5 mM
(EGTA), dimetilsulfóxido al 2% (v/v), y 0,03-0,4 \muCi de ATP[^{32/33}P] por reacción. Las reacciones se iniciaron con enzima, incubada a 30ºC, y terminaron después de 20 minutos por la adición de ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) hasta 250 mM. Después se capturó el sustrato fosforilado sobre una membrana de nitrocelulosa o fosfocelulosa usando un dispositivo de filtración múltiple de 96 pocillos, y se retiró la radioactividad no incorporada mediante lavado repetido con ácido fosfórico al 0,85%. Se cuantificó la radioactividad exponiendo las membranas secas a un fosfovisualizador.

Se midieron los valores de K_{i} aparentes ensayando actividad enzimática en presencia de distintas concentraciones de compuesto inhibidor y restando la radioactividad de fondo medida en ausencia de enzima. Los parámetros cinéticos (kcat, Km por ATP) se midieron para cada enzima bajo las condiciones de ensayo habituales determinando la dependencia de las tasas iniciales de la concentración de ATP. Los datos de inhibición se ajustaron a una ecuación para inhibición competitiva usando Kaleidagraph (Software de Sinergia), o se ajustaron a una ecuación para inhibición de unión forzada competitiva usando el software KineTic (BioKin, Ltd.).

Inhibición de la actividad kinasa del retinoblastoma de CDK4/Ciclina D

Se purificó un complejo de CDK4 humana y ciclina D3, o un complejo de ciclina D1 y una proteína de fusión de CDK4 humana y glutatión-S-transferasa (GST-CDK4), o un complejo de CDK humana y ciclina D3 truncada genéticamente (1-264), usando técnicas cromatográficas bioquímicas tradicionales a partir de células de insecto que se habían coinfectado con los correspondientes vectores de expresión de baculovirus (ver, p.ej., Meijer y Kim, "Chemical Inhibitors of Cyclin-Dependent Kinases", Methods in Enzymol., vol. 283 (1997), pp. 113-128.). El complejo enzimático (5-50 nM) se probó con 0,3-0,5 \mug de fragmento proteico de retinoblastoma recombinante purificado (Rb) como sustrato. El fragmento Rb construido (residuos 386-928 de la proteína de retinoblastoma nativa; 62,3 KDa) contiene la mayoría de los lugares de fosforilación encontrados en la proteína de 106 KDa nativa, así como una marca de seis residuos de histidina para facilitar la purificación. Se capturó el sustrato Rb fosforilado mediante microfiltración sobre una membrana de nitrocelulosa y se cuantificó usando un fosfovisualizador como se describe anteriormente. Para la medida de inhibidores de unión forzada, se redujo la concentración del complejo enzimático hasta 5 nM, y la duración de la prueba se extendió hasta 60 minutos, durante los cuales la dependencia del tiempo de la formación del producto fue lineal.

Inhibición de la actividad kinasa del retinoblastoma de CDK2/Ciclina A

Se purificó CDK2 usando metodología publicada (Rossenblatt et al., "Purification and Crystallization of Human Cyclin-dependent Kinase 2", J. Mol. Biol., vol. 230, 1993, pp. 1317-1319) a partir de células de insecto que se habían infectado con un vector de expresión de baculovirus. Se purificó la ciclina A a partir de células de E. coli que expresaban ciclina A recombinante de longitud completa, y se generó un constructo de ciclina A truncado mediante proteolisis limitada y se purificó como se describe anteriormente (Jeffrey et al., "Mechanism of CDK activation revealed by the structure of a cyclin A_CDK2 complex", Nature, vol. 376 (27 de julio de 1995), pp. 313-320. Se incluyó ciclina A proteolisada purificada en el ensayo con un exceso molar de tres a cinco veces respecto a la CDK2. Alternativamente, se preparó un complejo de CDK2 y ciclina A proteolisada y se purificó mediante filtración en gel. El sustrato para este ensayo fue el mismo fragmento de sustrato Rb usado para los ensayos de CDK4, y la metodología de los ensayos de CDK2/ciclina A y CDK4/ciclina D3 fueron esencialmente los mismos, excepto en que la CDK2 estuvo presente a 150 nM o 5 nM. Los valores de K_{i} se midieron como se describe anteriormente.

Inhibición de la actividad kinasa de la histona H1 de CDK1 (cdc2)/Ciclina B

Se adquirió complejo de CDK1 (cdc2) humana y ciclina B de New England Biolabs (Beverly MA). Alternativamente, se purificó un complejo de CDK1/glutatión-S-transferasa-ciclina B1 usando cromatografía de afinidad del glutatión a partir de células de insecto que se habían coinfectado con los correspondientes vectores de expresión de baculovirus. El ensayo se ejecutó como se describe anteriormente a 30ºC usando 2,5 unidades de cdc2/ciclina B, 10 \mug de proteína histona H1, y 0,1-0,3 \muCi de ATP [^{32/33}P] por ensayo. Se capturó el sustrato de histona fosforilado mediante microfiltración sobre una membrana de fosfocelulosa P81 y se cuantificó usando un fosfovisualizador según se describe anteriormente. Los valores de K_{i} se midieron usando los programas de ajuste de curvas descritos.

Los resultados de los ensayos desarrollados sobre compuestos, que incluyen los ejemplos específicos descritos anteriormente así como ejemplos adicionales designados por el prefijo "I" (p.ej., Ejemplos I(1), I(2), etc), en los que "*" indica un compuesto que tiene una estructura conocida (es decir, que el compuesto per se se conoce), se proporcionan en lo que sigue en las Tablas I, II, y III. A menos que se indique lo contrario en una entrada en particular, las unidades y ensayos usados son como se indican en la columna pertinente de la tabla. La abreviatura "N.I". indica que no se observó inhibición a la concentración indicada.

TABLA I K_{i} con CDKs

57

58

59

a = La ciclina de tipo D es D3; b = la ciclina de tipo D es D1; c = la ciclina de tipo D es D3 truncada

Inhibición del Crecimiento Celular: Evaluación de Citotoxicidad

Se midió la inhibición del crecimiento celular usando la prueba de la sal de tetrazolio, que se basa en la capacidad de células viables para reducir el bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-[2H]-difeniltetrazolio (MTT) a formazán (Mossman, Journal of Immunological Methods, vol. 65, (1983), pp. 55-58). El producto formazán púrpura insoluble en agua se detectó después espectrofotométricamente. Se cultivaron varias líneas celulares (HCT-116, Saos-2, U2-OS, SW480, COLO-205, RXF-393, M14, MDA-MB-468, y MCF7) en portaobjetos. Las células se extendieron en el medio adecuado a un volumen de 135 \mul/pocillo en Medio de McCoy 5A (para células Saos-2, SW480, COLO-205 y HCT-116), RPMI (para COLO-205, RXF-393, y M14), o Medio Eagle Mínimo Esencial (para células MDA-MB-468 y MCF7). Los portaobjetos se incubaron durante cuatro horas antes de la adición de compuestos inhibidores. Se añadieron distintas concentraciones de compuestos inhibidores en dimetilsulfóxido al 0,5% (v/v) (15 \mul/pocillo), y se incubaron las células a 37ºC (5% de CO_{2}) durante cuatro a seis días (dependiendo del tipo de célula). Al final de la incubación, se añadió MTT hasta una concentración final de 0,2 mg/ml, y se incubaron las células durante 4 horas más a 37ºC. Después de la centrifugación de los portaobjetos y la retirada del medio, se midió la absorbancia del formazán (solubilizado en dimetilsulfóxido) a 540 nm. Se determinó la concentración de compuesto inhibidor que causó una inhibición del 50% a partir de la porción lineal de un trazado semi-log de concentración de inhibidor contra porcentaje de inhibición. Todos los resultados se compararon con células control tratadas solamente con dimetilsulfóxido al 0,5% (v/v).

TABLA II IC_{50} con diversas líneas celulares cancerosas en Prueba MTT

\vskip1.000000\baselineskip

60

\vskip1.000000\baselineskip

Inmunomarcaje de pRb

Se evaluó la capacidad de compuestos para inhibir la fosforilación de la proteína del retinoblastoma (pRb) mediante análisis western blot. Se usó un anticuerpo anti-Rb para medir la conversión de pRb hiperfosforilada a pRb hipofosforilada. Se usó un anticuerpo anti-fosfo-Rb (ser780) para medir específicamente la defosforilación en la serina 780, un lugar que previamente había mostrado fosforilarse por CDK4/ciclina D. La inhibición de la fosforilación de la pRb se indica mediante un "+" en la Tabla III a continuación, y el fracaso para inhibir la fosforilación de la pRb se indica mediante un "-" en la tabla.

Se extendieron células de tumor de colon humano (células HCT-116; 5 x 10^{6}) sobre placas y se dejaron crecer toda la noche. Se añadieron cinco micromoles de cada compuesto durante 12 horas. Después se recogieron las células y se centrifugaron. Los sedimentos celulares se lisaron mediante la adición de 100 \mul tampón de lisis (HEPES 50 mM (pH 7,0), NaCl 250 mM, ácido etilendiaminotetraacético 5 mM, Nonidet P-40 al 0,1%, ditiotreitol 1 mM, pirofosfato de sodio 2 mM, ortovanadato de sodio 1 mM, 1 \mug/ml de aprotonina, 1 \mug/ml de leupeptina, 50 \mug/ml de fluoruro de fenilmetilsulfonilo). Se separaron cuarenta microgramos de proteína mediante electroforesis en gel de dodecil-sulfato de poliacrilamida (SDS-PAGE) en un gel al 6%. Las proteínas se transfirieron a nitrocelulosa y se bloquearon con tampón bloqueador al 5% en salino tamponado con Tris toda la noche. Se incubaron anticuerpo anti-Rb (Pharmingen), el anticuerpo (MBL) anti-fosfo-Rb (Ser 780), y anticuerpo secundario durante 1 hora a temperatura ambiente seguido de tres paso de lavado en Tween-20 al 0,01% en salino tamponado con Tris. La proteína de Rb se detectó usando quimioluminiscencia de acuerdo con el fabricante (Amersham).

TABLA III Inhibición de la fosforilación de pRb

Compuesto Ejemplo	Inhibe la fosforilación de pRb	Inhibe la fosforilación
		(ser 780) de pRb
C(85)	+	+
C(48)	+	+
C(50)	+	+
C(73)	+	+
F	-	-

Los ejemplos anteriores ilustran compuestos de acuerdo con la Fórmula I y ensayos que se pueden desarrollar fácilmente para determinar sus niveles de actividad contra los diversos complejos de CDK/ciclina. Será manifiesto que tales ensayos u otros ensayos adecuados conocidos en la técnica se pueden usar para seleccionar un inhibidor que tenga un nivel deseado de actividad contra un objetivo seleccionado.

Mientras se ha ilustrado la invención con referencia a formas de realización específicas y preferidas, aquellos experimentados en la técnica reconocerán que se pueden hacer variaciones y modificaciones a través de la experimentación rutinaria y la práctica de la invención. Por ejemplo, aquellos con habilidad corriente en la técnica reconocerán que se pueden hacer variaciones o sustituciones a los compuestos de la Fórmula I sin afectar adversamente de una manera significativa a su eficacia en las composiciones farmacéuticas. Por tanto, la invención está destinada a no estar limitada por la descripción precedente, sino a ser definida por las reivindicaciones adjuntas y sus equivalentes.

Claims (3)

1. Un compuesto de la Fórmula I:

62

en la que R^{1} se selecciona entre:

63

64

65

y R^{2} es una estructura de anillo sustituido o insustituido, carbocíclico o heterocíclico, monocíclico o policíclico fusionado o no fusionado; en el que cada sustituyente opcional para R^{2} es independientemente un halógeno, oxígeno, haloalquilo, alquilo C_{1-6}-, alquenilo C_{1-6}-, alquinilo C_{1-6}-, hidroxilo, alcoxilo C_{1-6}-, cicloalquilo carbocíclico o heterocíclico, monocíclico o policíclico fusionado o no fusionado; arilo carbocíclico o heterocíclico, monocíclico o policíclico fusionado o no fusionado; amino, nitro, tiol, tioéter, imina, ciano, amido, fosfonato, fosfina, carboxilo, tiocarbonilo, sulfonilo, sulfonamida, cetona, aldehído, o éster

o una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de la Fórmula I.

2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, seleccionado entre el grupo constituido por:

66

67

68

o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto.

3. Una composición farmacéutica que comprende:

(a) una cantidad eficaz de un agente de control del ciclo celular para inhibir una CDK o un complejo CDK/ciclina, seleccionándose dicho agente de control del ciclo celular entre

(i)

el compuesto de la Fórmula I como se define en la reivindicación 1, y

(ii)

una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de la Fórmula I; y

(b) un vehículo farmacéuticamente aceptable.