ES2274888T3 - Nuevos genes de acil alifatico transferasa. - Google Patents
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Abstract
Un gen aislado que codifica una proteína que tiene actividad para transferir un grupo acilo alifático a un grupo glicosilo en la posición 5 de flavonoides, en donde (i) dicha proteína tiene una secuencia de aminoácidos indicada por SEQ ID NO: 2, 4, 6, 23, 25, 27 o 29, o una secuencia de aminoácidos que presenta identidad de 50% o más con una secuencia de aminoácidos indicada por SEQ ID NO: 2, 4, 6, 23, 25, 27 o 29, o (ii) dicho gen se hibrida con una parte o con toda la secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos indicada por SEQ ID NO: 2, 4, 6, 23, 25, 27 o 29, en las condiciones de 5 x SSC y 50°C.
Description
Nuevos genes de acil alifático transferasa.
La presente invención se refiere a un gen que
codifica una proteína que tiene actividad para transferir un grupo
acilo alifático a un grupo glicosilo en la posición 5 de
flavonoides, y a un método que lo utiliza.
En la industria de la floricultura, es
importante desarrollar variedades nuevas y diferentes de plantas de
floración. En particular, el color de las flores es una de las
características más importantes de las plantas de floración, y se
han utilizado extensamente técnicas clásicas de reproducción basadas
en cruce para desarrollar nuevas variedades que presentan diversos
colores. Sin embargo, como los recursos genéticos son muy limitados
para una especie particular de planta en la que se pueden llevar a
cabo cruces, es raro que una sola especie de planta tenga un
espectro completo de variedades de color.
El color de las flores se debe principalmente a
una clase de compuestos, denominados genéricamente antocianinas,
que pertenecen a los flavonoides. Se ha sabido que hay diversas
antocianinas en plantas, y ya se ha determinado la estructura
molecular de muchos de estos compuestos. El color de una
antocianina viene determinado principalmente por su estructura
(Harborne (1986) The Flavonoids, p. 565). Se ha investigado con
enzimas y con genes que codifican estas enzimas, implicadas en la
biosíntesis de antocianinas. Hay casos, por ejemplo, en los que se
aplicaron técnicas de biología molecular y se introdujeron genes en
plantas para alterar el color de las flores (Holton et al.
(1995) Plant Cell, 7, p. 1071; Tanaka et al. (1998) Plant
Cell Physiol. 39. p. 1119). La ruta bioquímica de la biosíntesis de
las antocianinas hasta los antocianidin
3-glucósidos es común en la mayoría de las plantas
de floración (Holton et al. (1995) Plant Cell, 7, p. 1071). A
partir de entonces, los antocianidin 3-glucósidos
presentes en las plantas son sometidos a diversas modificaciones
específicas de cada especie o variedad. La diversidad de esta
modificación es una de las causas de diversidad del color de las
flores.
Aunque las antocianinas son compuestos
inestables en solución neutra, su estabilidad se mejora por
modificación con un grupo glicosilo o un grupo acilo (Forkmann
(1991) Plant Breeding, 106, p.1). El color de las antocianinas se
hace un poco rojizo por glicosilación, y se hace azul cuando se
añade un grupo acilo aromático (Forkmann (1991) Plant Breeding,
106, pl). Los grupos acilo se dividen ampliamente en grupos acilo
aromáticos (por ejemplo, el grupo cafeoílo, el grupo cumaroílo,
etc.) y grupos acilo alifáticos (por ejemplo, el grupo malonilo, el
grupo acetilo, etc.). Se desconoce el papel fisiológico del grupo
acilo alifático en lo que concierne al color de las flores, salvo
que incrementa la solubilidad de las antocianinas.
Se han dado a conocer varios estudios sobre
purificación y propiedades bioquímicas de enzimas con actividad
para transferir un grupo acilo alifático a antocianinas [Archives of
Biochemistry and Biophysics, 1981, 208, 233-241
(Crude purification, molecular weight, and examination of
substrate-specificity of Flavonol 3MaT (una
enzima que cataliza la reacción de transferir un grupo malonilo a un
grupo glicosilo en la posición 3 de un flavonol) and
Flavone/Flavonol 7 MaT (una enzima que cataliza la reacción de
transferir un grupo malonilo a un grupo glicosilo en la posición 7
de flavona y flavonol) of parsley); Archives of Biochemistry
and Biophysics, 1983, 224, 261-271 (Measurement
of activity of flavonol 3MaT and Flavone/Flavonol 7 MaT in various
organs of parsley); Archives of Biochemistry and Biophysics,
1983, 226, 206-217 (Purification into single
sample of Flavonol 3MaT and Flavone/Flavonol 7 MaT of parsley, and
Preparation of 3MaT antibody); Eur. J. Biochem. 1983, 133,
439-448 (Confirmation of existence and structure
of malonylated apigenin
7-0-glucoside in parsley by means
of NMR etc.); Archives of Biochemistry and Biophysics, 1984,
234, 513-521 (Determination of optimum pH,
molecular weight and Km of 7MaT for an isoflavone of a pea);
Phytochemistry, 1993, 32, 1425-1426 (Confirmation
of existence of aliphatic acyl transferase activity to cyanidin
3-glucoside in the crude extract from flower petals
of Dendranthema morifolium, a plant belonging to Asteraceae);
Plant Science, 1996, 118, 109-118 (Confirmation
of malonyl transferase activity in crude extract from cultured cells
of Ajuca reptans); Phytochemistry, 1999, 52,
15-18 (Determination of substrate specificity of
malonyl transferase derived from flower petals of dahlia)]. Sin
embargo, no se han determinado las estructuras primarias de las
proteínas, ni se ha dado a conocer la clonación del gen.
Un objeto de la presente invención es determinar
el efecto de la malonilación como ejemplo de acilación sobre el
color de las flores, por una acil alifático transferasa para
transferir un grupo acilo a antocianinas, y proporcionar un gen que
codifica una proteína que tiene actividad para transferir un grupo
acilo alifático, preferiblemente un gen que codifica una proteína
con actividad para transferir un grupo acilo alifático a las
antocianinas. Es posible alterar el color de las flores
introduciendo un gen que codifica una proteína que tiene actividad
para transferir un grupo acilo alifático de acuerdo con la presente
invención, en una planta y expresándolo.
Como se ha descrito anteriormente, no ha habido
ningún informe sobre el efecto de la malonilación de antocianinas
sobre el color de las flores. Para determinar este efecto, se
comparó el color de tres disoluciones de antocianinas, es decir,
delfinidina-3,5-diglucósido,
awobanina(delfinidina-3-(cumaroil)glucósido-5-glucósido),
malonil-awobanina(delfinidina-3-(cumaroil)glucósido-5-(malonil)glucósido),
y se encontró que el color de malonil-awobanina es
el más azul, lo que indica que la malonilación hace que las
antocianinas sean más azules.
Así, se intentó la purificación de una malonil
transferasa usando flores de salvia como material. Después, se
determinó una secuencia parcial de aminoácidos de la proteína
purificada y, en base a esta información, se amplificó un fragmento
de DNA del gen que codifica la malonil transferasa de salvia
utilizando el método PCR. Usando este fragmento de DNA como sonda,
se escrutó la cDNA-teca de flores de Salvia
guarantica y se obtuvieron dos genes codificantes de malonil
transferasa. Además, usando estos genes como sondas, se obtuvieron
homólogos de Salvia splendens, perilla y lavanda.
Por lo tanto, de acuerdo con la presente
invención, se proporciona un gen que codifica una proteína que tiene
una secuencia de aminoácidos de acuerdo con una cualquiera de SEQ
ID nº: 2, 4, 6, 23, 25, 27 o 29, y tiene actividad para transferir
un grupo acilo alifático a un grupo glicosilo en la posición 5 de
flavonoides, o un gen que codifica una proteína que tiene
cualquiera de estas secuencias modificadas por adición o deleción
de uno o más aminoácidos y/p sustitución por otros aminoácidos, y
tiene actividad para transferir un grupo acilo alifático a un grupo
glicosilo en la posición 5 de flavonoides.
De acuerdo con la presente invención, también se
proporciona un gen que codifica una proteína que tiene una
secuencia de aminoácidos que presenta homología de 50% o más con
cualquiera de las secuencias según la SEQ ID nº: 2, 4, 6-, 23, 25,
27 o 29, y tiene actividad para transferir un grupo acilo alifático
a un grupo glicosilo en la posición 5 de un flavonoide.
Además, de acuerdo con la presente invención, se
proporciona un gen que se hibrida a totalidad de las secuencias de
nucleótidos que codifican cualquier secuencia de aminoácidos según
la SEQ ID nº: 2, 4, 6, 23, 25, 27 o 29 en las condiciones de 5 x
SSC, 50°C, y que codifica una proteína que tiene actividad para
transferir un grupo acilo alifático a un grupo glicosilo en la
posición 5 de flavonoides.
La presente invención proporciona además un
vector que comprende el gen descrito anteriormente.
La presente invención también proporciona un
hospedante transformado por el vector descrito anteriormente.
La presente invención proporciona además una
proteína codificada por cualquiera de los genes descritos
anteriormente.
La presente invención también proporciona un
método de fabricación de la proteína, que comprende las etapas de:
cultivar, o desarrollar, el hospedante descrito anteriormente; y
recoger, del hospedante, la proteína que tiene actividad para
transferir un grupo acilo alifático en un grupo glicosilo en la
posición 5 de flavonoides.
La presente invención proporciona además una
planta transgénica que tiene el gen descrito anteriormente
introducido, o un vástago de la planta o tejido de la misma con la
misma propiedad.
La presente invención proporciona además una
flor cortada de la planta descrita anteriormente o de uno de sus
vástagos con la misma propiedad.
La presente invención proporciona además un
método de alteración del color de las flores utilizando el gen
descrito anteriormente.
La presente invención proporciona además un
método de producción del color azul en una flor utilizando el gen
descrito anteriormente.
Los genes de la presente invención incluyen, por
ejemplo, los que codifican secuencias de aminoácidos de acuerdo con
SEQ ID nº 2, 4, 6, 23, 25, 27 y 29. Sin embargo, se sabe que una
proteína que tiene una secuencia de aminoácidos que se modifica por
adición o deleción de aminoácidos plurales y/o por sustitución de
otros aminoácidos, presenta la misma actividad enzimática que la
proteína original. Por lo tanto, una proteína que tiene una
secuencia de aminoácidos según una cualquiera de SEQ ID nº: 2, 4,
6, 23, 25, 27 o 29 modificada por adición o deleción de uno o más
aminoácidos y/o por sustitución por otros aminoácidos, y un gen que
codifica la proteína, está dentro del alcance de la presente
invención, con tal que la proteína tenga actividad para transferir
un grupo acilo alifático aun grupo glicosilo en la posición 5 de
los flavonoides.
La presente invención también se refiere a un
gen que se hibrida con una secuencia de nucleótidos que codifica
secuencias de aminoácidos de acuerdo con una cualquiera de SEQ ID
nº: 2, 4, 6, 23, 25, 27 o 29, o una parte de las secuencias
nucleotídicas, preferiblemente una secuencia nucleotídica que
codifica 6 o más aminoácidos, por ejemplo, 6 o más aminoácidos en
una región de consenso, en condiciones de, por ejemplo, 5 x SSC, a
50°C, y que codifica una proteína con actividad para transferir un
grupo acilo alifático a un grupo glicosilo en la posición 5 de
flavonoides. Una temperatura de hibridación adecuada varía con la
secuencia nucleotídica o con la longitud de la misma, y se prefiere
una temperatura de 50°C o menos cuando la sonda es un fragmento de
DNA de 18 bases que codifica 6 aminoácidos.
Los genes seleccionados por tal hibridación
incluyen genes de origen natural, incluidos, pero sin limitarse a
ellos, genes derivados de plantas, tales como genes derivados de
petunia, torenia, etc. También, un gen seleccionado por hibridación
puede ser o bien cDNA, o DNA genómico.
Además, la presente invención también se refiere
al uso para alterar el color de las flores, de un gen que codifica
una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos que tiene una
homología de aproximadamente 50% o más, preferiblemente 60% o 70% o
más, aún más, preferiblemente 80% o 90% o más, con la secuencia de
aminoácidos de acuerdo con una cualquiera de SEQ ID nº: 2, 4, 6-,
23, 25, 27 o 29, y que tiene actividad para transferir un grupo
acilo alifático a un grupo glicosilo en la posición 5 de
flavonoides.
Un gen que tiene una secuencia nucleotídica
nativa se puede obtener, por ejemplo, escrutando una
cDNA-teca, como se indica más concretamente en los
ejemplos. Un DNA que codifica una proteína que tiene una secuencia
modificada de aminoácidos se puede sintetizar partiendo de DNA que
tiene una secuencia nucleotídica nativa por medio de métodos
habituales tales como una mutagénesis específica de un sitio o el
método PCR. Por ejemplo, primero, por tratamiento de un cDNA nativo
o DNA genómico con enzimas de restricción, se obtiene un cDNA nativo
o DNA genómico. Después, usando éste como molde, se efectúa una
mutagénesis específica de un sitio o el método PCR con un cebador
que tiene la mutación deseada introducida en él, para obtener un
fragmento de DNA que tiene la modificación deseada introducida en
él. Seguidamente, el fragmento de DNA que tiene la modificación
deseada introducida en él se puede ligar a un fragmento de DNA que
codifica otras porciones de la proteína diana.
Alternativamente, con el fin de obtener DNA que
codifica una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos
acortada, el DNA que codifica una secuencia de aminoácidos más larga
que la secuencia diana de aminoácidos, tal como el DNA que codifica
la secuencia de aminoácidos de longitud completa, se puede cortar
con enzimas de restricción adecuadas. Si el fragmento de DNA
resultante no codifica la secuencia de aminoácidos diana completa,
se puede sintetizar y ligar un fragmento de DNA que consiste en la
secuencia omitida.
Expresando el gen obtenido usando un sistema de
expresión génica en Escherichia coli y levadura, y midiendo
la actividad enzimática, es posible confirmar que un gen obtenido
codifica una proteína que tiene una actividad para transferir un
grupo acilo alifático. También es posible expresar el gen para
obtener, como producto génico, una proteína que tiene actividad
para transferir un grupo acilo alifático. También es posible,
utilizando un anticuerpo frente a una secuencia de aminoácidos de
acuerdo con SEQ ID nº: 2, 4, 6, 23, 25, 27 o 29, obtener una
proteína con actividad para transferir un grupo acilo alifático.
Además, es posible usar un anticuerpo para clonar un gen que
codifica una proteína con actividad para transferir un grupo acilo
alifático derivado de otros organismos vivos.
Por lo tanto, la presente invención se refiere a
un vector de recombinación, especialmente un vector de expresión,
que comprende el gen descrito anteriormente, y a un hospedante
transformado por el vector. Como hospedante, se puede utilizar
tanto un procariota como un eucariota. En procariotas, como
hospedantes habituales se pueden utilizar bacterias tales como
Escherichia coli que pertenece al género Escherichia,
o Bacillus subtilis, que pertenece al género
Bacillus. Como hospedante eucariótico, se puede usar un
eucariota inferior, por ejemplo, un microorganismo eucariótico tal
como levadura y hongos que pertenecen a los hongos.
En levadura, como hospedante se puede utilizar
un microorganismo perteneciente al género Saccharomyces tal
como Saccharomyces cerevisiae o similares. En hongos de tipo
moho, como hospedantes se pueden utilizar microorganismos
pertenecientes al género Aspergillus tales como
Aspergillus orizae, Aspergillus niger, y un
microorganismo perteneciente al género Penicillium. Como
hospedantes, también se pueden utilizar células animales y células
vegetales. En células animales, se pueden utilizar sistemas
celulares procedentes de ratón, hámster, mono, ser humano, etc.
Como hospedante se pueden utilizar células de insecto, tales como
células de gusano de seda, o incluso un gusano de seda en estado
adulto.
El vector de expresión de la presente invención
incluye regiones de control de la expresión, dependiendo de la
clase de hospedante en el que se ha de introducir, tales como un
promotor y un terminador, un origen de replicación, y similares.
Como promotor para un vector de expresión en bacterias, pueden
usarse promotores utilizados corrientemente, tales como un promotor
trc, un promotor tac, un promotor lac o similares. Como promotor
para un vector de expresión en levadura, se puede utilizar un
promotor de gliceraldehído-3-fosfato
deshidrogenasa, un promotor pH05 o similares, y como promotor para
un vector de expresión en hongos, se puede utilizar un promotor de
amilasa, un promotor trpC o similares. Como promotor para un vector
de expresión en hospedantes del tipo de las células animales, puede
usarse un promotor viral tal como un promotor precoz de SV40, un
promotor tardío de SV40, o similares. La construcción del vector de
expresión se puede realizar de acuerdo con cualquiera de los
métodos habituales conocidos por los expertos en la técnica
utilizando enzimas de restricción, ligasas, etc. La transformación
de células hospedantes con el vector de expresión también se puede
realizar de acuerdo con cualquiera de los métodos habituales.
La proteína diana se puede obtener cultivando,
criando o desarrollando el hospedante transformado con el vector de
expresión descrito anteriormente, y recuperando un producto génico
del cultivo o similares, y purificándolo de acuerdo con métodos
habituales, por ejemplo, filtración, centrifugación, lisis de las
células, cromatografía de filtración en gel, cromatografía de
intercambio iónico, y similares.
La presente invención no se limita a un gen
obtenido a partir de salvia y que codifica una proteína que tiene
actividad para transferir un grupo acilo alifático. La presente
invención se refiere al uso de un gen que codifica una proteína que
tiene actividad para transferir un grupo acilo alifático. El origen
de la proteína que tiene actividad para transferir un grupo acilo
alifático puede ser una planta, un animal o un microorganismo.
Independientemente del origen, tal proteína puede aplicarse
igualmente a la alteración del color de las flores, con tal que
tenga actividad para transferir un grupo acilo alifático. Además, la
presente invención se refiere a una planta transgénica o un vástago
o tejido de la misma, incluidas las flores cortadas, que se obtiene
introduciendo un gen que codifica una proteína que tiene actividad
para transferir un grupo acilo alifático, y que tiene por ello su
tono de color modificado.
Usando el gen obtenido de acuerdo con la
presente invención, que codifica una proteína que tiene actividad
para transferir un grupo acilo alifático, las antocianinas
acumuladas en vacuolas pueden acilarse para volverse azules y, como
resultado, puede alterarse el color de las flores para ser azul. En
el presente estado de la técnica, es posible introducir un gen en
una planta y hacer que el gen se exprese de una manera constitutiva
o específica del tejido. También es posible suprimir la expresión de
un gen diana usando, por ejemplo, un método
anti-sentido o un método de
co-supresión.
Ejemplos de plantas que se pueden transformar de
esta manera incluyen, pero sin limitarse a ellas, rosas,
crisantemos, claveles, dragonarias, ciclámenes, orquídeas,
lisianthus, frisias, gerberas, gladiolos, gisófilas, calanchoes,
lirios, pelargonios, geranios, petunias, torenias, tulipanes, arroz,
cebada, trigo, colza, patatas, tomates, chopos, bananas,
eucaliptos, batatas, soja, alfalfa, altramuz y maíz.
La presente invención se describirá más
detalladamente a continuación de acuerdo con los Ejemplos de la
misma. Salvo especificación en contrario, las técnicas de biología
molecular empleadas son las descritas en Molecular Cloning
(Sambrook et al., 1989).
Delfinidina 3,5-diglucosido,
awobanina (delfinidina 3-(cumaroil)
glucosido-5-glucosido),
malonil-awobanina (delfinidina
3-(cumaroil)glucosido-5-(malonil) glucosido)
se disolvieron en tampón de McIlvaine (pH 5,3, pH 5,6, pH 6,0) en
concentraciones de 0,1 mM, 0,3 mM, 0,5 mM, respectivamente, y los
colores de las soluciones fueron evaluados usando cartas de color
(Royal Horticulture Society). Delfinidina
3,5-diglucosido puede obtenerse a partir de su
forma 3,5-diacetilglucosido por separación del resto
acetilo en una reacción de hidrólisis alcalina (Tetrahedron, 48,
4313-4326, 1992).
Awobanina se puede obtener a partir de
malonil-awobanina por separación de su resto
5-malonilo (Tetrahedron Lett. 24,
4863-4866, 1983). La
malonil-awobanina se obtuvo por extracción a partir
de plantas usando el método expuesto en Tetrahedron Lett. 24,
4863-4866, 1983. Cuanto mayor es el número en la
carta de color, más azul es el color. Cuando el número es el mismo,
el símbolo A representa el color más azul. Los resultados del ensayo
se resumen en la Tabla 1. En todas las concentraciones y pH,
malonil-awobanina era la más azul, lo que indica
que el grupo malonilo hacía que las antocianinas llegaran a ser
azules.
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La medición de actividad de maloniltransferasa
se hizo utilizando 100 \mul de solución de reacción (fosfato de
potasio de concentración final 20 mM, pH 7,0, que contenía 10 \mug
de shisonina, 10 \mug de malonil CoA, y una muestra de enzima
para ser medida, disuelta en ácido trifluoroacético al 0,01%).
Después de efectuar la reacción a 30°C durante 20 minutos, la
reacción se terminó por adición de 200 \mul de solución acuosa de
TFA al 0,05% enfriada sobre hielo. La cuantificación de shisonina y
malonil-shisonina se efectuó por cromatografía de
líquidos de alta resolución en fase reversa (DYNAMAX HPLC system)
usando una columna Shodex Asahipak ODP-50 4E, y
usando un gradiente de concentración lineal con solución de TFA al
0,05% como solución y TFA al 0,5%, solución acuosa de acetonitrilo
al 50% como solución, de manera que la concentración de la solución
B era 45%, 45%, 55%, 100%, 100%, 45%, y 45%, a tiempo 0, 3, 17, 18,
23, 24, y 30 minutos, respectivamente, después de empezar la
separación, a un caudal de 0,7 ml/min, usando 50 \mul de solución
de reacción, vigilando la absorción a 520 nm.
La purificación de malonil transferasa se
efectuó usando 2644 g de flores rojas de Salvia splendens
como material de partida. Las flores de salvia se recogieron
enteras incluyendo los cálices inmediatamente antes de abrirse la
flor, y se guardaron a -80ºC hasta su uso en los experimentos.
A 500 g de flores de salvia, se añadieron 100 g
de polivinilpirrolidona (PvPP), 3 L de tampón de extracción
(fosfato de potasio 100 mM (pH 7,0),
2-mercaptoetanol 30 mM, EDTA 5 mM) y fluoruro de
fenilmetilsulfonilo (PMSF) de una concentración final 0,5 mM, y se
redujeron a polvo con una mezcladora modelo HEAVY DUTY BLENDER
(WARING). La solución que contiene material en polvo tt se
centrifugó a 7.500xG durante 20 minutos. El sobrenadante se filtró
a presión reducida (papel de filtro, Whatman 114) para obtener una
solución de enzima bruta. A partir de 2.664 g de flores se obtuvo
un volumen de solución de enzima bruta de 10,4 L.
Seguidamente se efectuó un fraccionamiento con
sulfato de amonio y se recuperó una enzima como precipitante en una
fracción de sulfato de amonio saturado de 20% a 50% y se disolvió en
tampón A (fosfato de potasio 100 mM (pH 7,0),
2-mercaptoetanol 30 mM, EDTA 1 mM, PMSF 0,1 mM)
(2920 ml). A esto se añadieron 280 ml de Octil Sepharose Fast
Flow (Amersham Pharmacia Biotech Co.) y se añadió lentamente
sulfato de amonio a una concentración final de saturación de 30%
mientras que la solución se agitaba lentamente. Después de la
agitación adecuada, la solución se dejó estar aún durante la noche.
Después de confirmar que no quedaba actividad de malonil transferasa
en el líquido sobrenadante, el gel en el sedimento se recuperó por
filtración a presión reducida (papel de filtro, Whatman 114). El
gel se lavó a fondo con tampón B (fosfato de potasio 20 mM, pH 7,0),
2-mercaptoetanol 30 mM, sulfato de amonio saturado
al 20%), mientras se filtraba a presión reducida.
Al gel se añadieron 280 ml de tampón C [fosfato
de potasio 20 mM (pH 7,0), 2-mercaptoetanol 15 mM,
etilenglicol al 50%,
3-[(3-colamidopropil)dimetilamonio)-1-propanosulfonato
(CHAPS) al 0,1%], y después de agitar suavemente durante 30
minutos, se recuperó una maloniltransferasa activa por filtración a
presión reducida. Esta operación de elución con tampón C se repitió
10 veces para recoger una fracción activa. Después de haber
concentrado la fracción activa usando Pellicon (Biomax 8K,
MILLIPORE CORPORATION), y de haber desalado en tampón D (fosfato de
potasio 10 mM (pH 7,0), 2-mercaptoetanol 15 mM,
Triton X-100 al 0,03%), se obtuvieron 155 ml de
solución de enzima 1.
Se cargaron 100 ml de Amarillo MIMETIC 2
(Nacalai Tesque Co.) en una columna Econocolumn (\varphi1,0 cm
\times 120 cm, Japan Bio Rad Laboratories Co.), que se equilibró
con tampón D. Después de aplicar la cantidad total de la solución
de enzima 1 y lavar con tampón D, la proteína unida a la columna se
eluyó usando tampón E (fosfato de potasio 20 mM (pH 7,0),
2-mercaptoetanol 30 mM, 0,05% CHAPS). La fracción
activa se concentró usando Pellicon y ultrafiltración
(YM-10, MILLIPORE CORPORATION), y se obtuvieron 32
ml de solución de enzima 2.
Se cargaron 50 ml de Rojo MIMETIC 3 (Nacalai
Tesque Co.) 50 ml en una columna Econocolumn (\varphi 1,5 cm
\times
30 cm, Japan Bio Rad Laboratories Co.), y se equilibró con tampón F (fosfato de potasio 5 mM (pH 7,0), 2-mercaptoetanol 15 mM, 0,03% de TritonX-100). Después de haber aplicado la cantidad total de solución de enzima 2 y haber lavado con tampón F, las proteínas unidas a la columna se eluyeron utilizando tampón G (fosfato de potasio 5 mM (pH 7,0), 2-mercaptoetanol 30 mM, 0,03% de TritonX-100, acetilCoA 0,1 mM). Después de haber concentrado la fracción activa usando el Pellicon, ultrafiltración y el Centricon, se desaló en tampón H (fosfato de potasio 30 mM (pH 7,0), 2-mercaptoetanol 30 mM, Triton X-100 al 0,03%), y se obtuvieron 3 ml de solución de enzima 3.
30 cm, Japan Bio Rad Laboratories Co.), y se equilibró con tampón F (fosfato de potasio 5 mM (pH 7,0), 2-mercaptoetanol 15 mM, 0,03% de TritonX-100). Después de haber aplicado la cantidad total de solución de enzima 2 y haber lavado con tampón F, las proteínas unidas a la columna se eluyeron utilizando tampón G (fosfato de potasio 5 mM (pH 7,0), 2-mercaptoetanol 30 mM, 0,03% de TritonX-100, acetilCoA 0,1 mM). Después de haber concentrado la fracción activa usando el Pellicon, ultrafiltración y el Centricon, se desaló en tampón H (fosfato de potasio 30 mM (pH 7,0), 2-mercaptoetanol 30 mM, Triton X-100 al 0,03%), y se obtuvieron 3 ml de solución de enzima 3.
Se cargaron 5 ml de Rojo MIMETIC 3 (Nacalai
Tesque Co.) en la columna Econocolumn (\varphi 1,0 cm \times 10
cm, Japan Bio Rad Laboratories Co.), y se equilibró con tampón F.
Después de haber aplicado la cantidad total de la solución de
enzima 3 y haber lavado con tampón F, se eluyeron las proteínas
unidas a la columna utilizando tampón G. Después de haber
concentrado la fracción activa utilizando el Centricon, se
obtuvieron 1,5 ml de solución de enzima 4.
Después de haber equilibrado una columna
MonoQ5/5 (Amersham Pharmacia Biotech Co.) con tampón G, la cantidad
total de la solución de enzima 4 se aplicó a un caudal de 0,05
ml/min y se lavó con tampón F (caudal 0,05 ml/min durante 60
minutos). Las proteínas unidas a la columna se eluyeron usando un
gradiente lineal de 0 a 100% (caudal 0,05 ml/min, durante 400 min)
formado con tampón I (fosfato de potasio 20 mM (pH 7,0),
2-mercaptoetanol 30 mM, 0,03% de
TritonX-100, NaCl 1 mM), y después de concentrar la
fracción activa usando el Centricon, se obtuvieron 0,8 ml de
solución de enzima 5.
Después de haber equilibrado Fenil Superose HR
5/5 (Amersham Pharmacia Biotech Co.) con tampón B, la solución de
enzima 5 con sulfato de amonio añadido a una concentración final de
saturación del 20% se aplicó a un caudal de 0,02 ml/min. Después de
haber lavado la columna con tampón B, las proteínas unidas a la
columna se eluyeron usando un gradiente lineal de 0 a 100% formado
con tampón C (caudal de 0,02 ml/min, durante 500 minutos), y se
obtuvo la fracción activa.
Además, se usó un sistema de electroforesis
preparativa (Bio Phoresis III, Atto Co.) para fraccionar y la
fracción obtenida de 3,2 ml de malonil transferasa se concentró
hasta 40 \mul usando concentración en una membrana de
ultrafiltración, sustituyendo con 0,02% SDS/tampón
Tris-HCl 75 mM (pH 8,8). Después de esto, se realizó
la purificación final usando una columna en fase reversa (PorosR2H,
Japan Perceptive Co.) HPLC. La separación se efectuó bajo la
condición de un gradiente de concentración lineal en 0,1% de TFA
formado por una concentración de acetonitrilo de 8% a 80%, a un
caudal de 0,1 ml/min durante 60 minutos, y vigilando la absorción a
280 nm, sólo se recuperó la fracción pico. Como la proteína
obtenida finalmente resultó ser una sola banda de 47 kDa, se
determinó que el peso molecular de la malonil transferasa era 47
kDa.
Se añadieron 2 pmol de tripsina (Promega Co.) a
la proteína que se recuperó en el Ejemplo 3 como una sola banda. La
proteína se digirió a 37°C durante 30 horas, y se intentó determinar
la estructura de cada fragmento peptídico. La solución digerida con
tripsina se separó usando HPLC en fase reversa (\muRPC C2/C18,
Amersham Pharmacia Biotech Co.) en cada fragmento peptídico. La
separación se efectuó en presencia de ácido trifluoroacético al
0,1%. Usando un gradiente de concentración lineal formado por una
concentración de acetonitrilo de 8% a 80%, a un caudal de 0,1
ml/min durante 60 minutos, y vigilando la absorción a 215 nm, sólo
se recogieron las fracciones pico de absorción.
Cada fracción pico se concentró y secó por
Speed-vac, y se disolvió en 30 \mul de
acetonitrilo al 37% y se sometió a análisis usando un secuenciador
de aminoácidos (PSQ-1, Shimadzu Corporation). Como
resultado, se obtuvieron secuencias de aminoácidos de 12 péptidos.
Las secuencias de aminoácidos se indican a continuación.
MTT20:
Tyr-Ala-Ala-Gly-Asp-Ser-Val-Pro-val-Thr-Ile-Ala-Ala-Ser-Asn
(SEQ ID NO: 7)
MTT21-1:
Leu-Leu-Phe-Tyr-His-His-Pro-Ser-Ser-Lys
(SEQ ID NO: 8)
MTT21-2:
Ser-Gly-Asp-Lys-Ser-Asp-Glu-Asn-Ala-Pro-Glu-Leu-Phe-Ile-Ile-Pro-Ala-Asp-Ala
(SEQ ID NO: 9)
MTT22-1:
Met-Ala-Ala-Phe-Glu-Glu-Val-Phe
(SEQ ID NO: 10)
MTT23:
Trp-Leu-His-Tyr-His-Pro-Val
(SEQ ID NO: 11)
MTT26:
Gly-Ala-Glu-Asn-Trp-Met-Ser-Asp-Ile-Phe-Lys
(SEQ ID NO: 12)
MTT27-2:
Leu-Ala-Ala-Glu-Xaa-Gly-Phe-Ala-Val-Ala-Ala-Ala-Ala-Ile-Gly-Gly-Gly-Ile-Ile-Gly
(SEQ ID NO: 13)
MTT28:
Ser-Phe-Ile-Asn-Asp-Pro-Asn-Lys-Ile-Asp-Ala-Ile-Phe
(SEQ ID NO: 14)
MTT141:
Thr-Ala-Ser-Phe-Pro-Leu-Pro-Thr-Asn-Arg
(SEQ ID NO: 15)
MTT141-2:
Phe-Pro-Gln-Leu-Arg
(SEQ ID NO: 16)
MT142:
Ala-Asp-Phe-Gly-Trp-Gly-Lys
(SEQ ID NO: 17)
MTT291:
Asp-Ala-Asp-Gln-Phe-Tyr-Asp-Leu-Leu-Pro-Pro-Ile-Pro-Pro
(SEQ ID NO: 18)
En base a las secuencias parciales de
aminoácidos MTT20 y MT142 obtenidas en el Ejemplo 4, se construyeron
los siguientes cebadores.
MTT20-1:
5'-TA(T/C) GCI GCI GGI GA(T/C) TCI GTI
CCI GT-3' (I: inosina (SEQ ID NO: 19)
MTT20-3: 5'-GTI
CCI GTI ACI AT(A/T/C) GCI GC-3' (SEQ ID NO:
20)
ATCRr2: 5'-(T/C)TT ICC CCA ICC
(A/G)AA (A/G)TC IGC-3' (SEQ ID NO:
21)
Se llevó a cabo la PCR usando cDNA preparado a
partir de flores de salvia como molde, con una solución reaccionante
que tenía la siguiente composición en una cantidad total de 100
\mul; 1xtampón de PCR TAKARA, concentración 200 mM de dNTPs, 100
ng de cDNA de salvia , 1 pmol/\mul de cebador
MTT20-1, 1 pmol/\mul de cebador ATCRr2, 2,5
unidades de rTaq TAKARA. La reacción se efectuó a 96°C durante 1
minuto, seguida de 30 ciclos cada uno de los cuales consistía en 1
minuto a 96°C, 2 minutos a 42°C y 3 minutos a 72°C, y seguidos
además de 7 minutos a 72°C.
Se llevó a cabo la PCR anidada utilizando este
producto de reacción como molde y utilizando los cebadores
MTT20-3, ATCRr2, con solución reaccionante de la
misma composición que se ha descrito anteriormente. La reacción se
efectuó a 96°C durante 1 minuto, seguida de 30 ciclos cada uno de
los cuales consistía en 1 minuto a 96°C, 2 minutos a 50°C y 3
minutos a 72°C, y seguidos además de 7 minutos a 72°C. El producto
PCR obtenido de esta manera se sometió a subclonación y se
determinó su secuencia. Como resultado, en la secuencia deducida de
aminoácidos del producto de reacción de aproximadamente 900 pb, se
encontraron secuencias de aminoácidos MTT141, MTT26,
MTT27-2 (SEQ ID NO: 15, 12 y 13) además de las
utilizadas para diseñar los cebadores. Así, era evidente que el
producto de reacción era un fragmento génico que codificaba una
proteína purificada.
Se construyó una cDNA-teca
obtenida a partir de flores de Salvia guaranitica usando el
kit de síntesis direccional \lambdaZAP II de cDNA de Stratagene
Co. de acuerdo con el método recomendado por el fabricante del kit.
Aproximadamente 200.000 clones de esta cDNA-teca
fueron escrutados usando la condición de lavado (5 x SSC, 0,1% SDS,
37°C) y con el fragmento de DNA de 889 pb obtenido en el ejemplo 3
como sonda, y finalmente se obtuvieron 10 clones como clones
positivos. Estos clones se clasificaron en tres clases de grupos, y
los clones más largos de estos grupos se llamaron SgMaT1, SgMaT1',
y SgMaT2, respectivamente. El escrutinio de la
cDNA-teca se efectuó de acuerdo con métodos
conocidos (por ejemplo, Fujiwara et al., 1998, Plant J. 16,
421).
SgMaT1 y SgMaT1' son de 1419 pb y 1471 pb,
respectivamente, y ambos carecían de la metionina de iniciación.
Como SgMaT1 y SgMaT1' presentan una identidad de 98% a nivel de
aminoácidos, se consideraron como un gen alélico que codificaba la
misma enzima. En la secuencia deducida de aminoácidos de SgMaT1,
todas las secuencias parciales de aminoácidos de malonil
transferasa purificada determinada en el ejemplo 4 fueron
confirmadas, aunque algunas son parcialmente diferentes. La
diferencia parcial probablemente es debida a la diferencia de
especies de salvia utilizadas.
A partir de estos resultados, se hizo evidente
que los genes SgMaT1 y SgMaT1' codifican una enzima que transfiere
un grupo malonilo a un grupo glicosilo en la posición 5 de
antocianinas. SgMaT2 tiene un cDNA de 1530 pb, que incluye un marco
de lectura abierto de 1260 pb que codifica la proteína de longitud
completa. A nivel de aminoácidos, SgMaT1 presentó una identidad de
52% con SgMaT2. Todos estos genes presentaron una identidad de 37 a
47% con acil transferasas de otras plantas.
En la genciana, las acil transferasas que tienen
diferentes funciones presentan una identidad de sólo 35 a 40%,
incluso en las mismas variedades
(Yonekura-Sakakibara et al., 2000, Plant Cell
Physiol. 41: 495-502). Por lo tanto, la identidad
de 55% entre SgMaT1 y SgMaT2 sugiere, aun contando con el hecho de
que los dos genes se obtienen a partir de la misma variedad, que
SgMaT1 y SgMaT2 son similares en función y que SgMaT2 también
cataliza la reacción de transferir un grupo malonilo a antocianinas.
Las secuencias de nucleótidos de SgMaT1, SgMaT1', y SgMaT2 se
indican en SEQ ID NO: 1, 3, y 5, respectivamente, y las secuencias
de aminoácidos deducidas de estas secuencias de nucleótidos se
indican en SEQ ID NO: 2, 4, y 6, respectivamente.
Una sola colonia de Escherichia coli con
el plásmido pSgMaT1 (que incluía el gen SgMaT1 en EcoRI, sitios XhoI
de pBluescriptSK- (Stratagene), y capaz de expresar un producto
génico SgMaT1 como una proteína de fusión con proteína lac Z por
adición de
isopropil-beta-tiogalactosido
(IPTG)) introducido, se inoculó en medio LB que contenía ampicilina
hasta una concentración final de 50 mg/L, y se precultivó durante
una noche mientras se sacudía a 37ºC. El precultivo (2 ml) se
inoculó en medio LB de 100 ml que contenía ampicilina y se incubó a
30°C hasta que la absorbancia a 600 nm fue de 0,5. Entonces, se
añadió IPTG al medio de cultivo hasta una concentración final de r
mM. El cultivo se mantuvo adicionalmente a 30°C durante 9 horas
después de la adición de IPTG, y luego se recogió. Las células
recogidas se suspendieron en un tampón (KPB 0,1 M, pH 7,0,
2-mercaptoetanol 30 mM, EDTA 1 mM, PMSF 0,1 mM,
0,1% de TritonX-100), y se lisaron por tratamiento
ultrasónico mientras se enfriaba con hielo.
La actividad enzimática se midió usando un
sobrenadante (fracción soluble) obtenida después de centrifugar. La
Escherichia coli que sólo contenía pBluescriptSK^{-} fue
procesada de la misma manera como control. La medición de actividad
se efectuó usando shisonina como sustrato de acuerdo con el ejemplo
2.
En el producto de reacción a partir de la
reacción que usaba el producto de expresión génico pSgMaT1, se
detectó malonil-shisonina (Rt 12,2 minutos) además
de shisonina (Rt 9,7 minutos), mientras que en el control sólo se
detectó shisonina. A partir de esto, se confirmó que el gen SgMaT1
codifica una enzima con actividad para transferir el grupo
malonilo.
Se construyó una cDNA-teca de
pétalos de flores de salvia (Salvia splendens) usando un kit
de síntesis ZAP-cDNA (Strategene Co.) with XZAP II
(Strategene Co.) as a vector, de acuerdo con el método recomendado
por el fabricante. Usando el SgMaT1 obtenido en el ejemplo 6 como
sonda, se llevó a cabo el escrutinio por el método descrito en el
ejemplo 6. El clon con el cDNA más largo se designó SsMaT1. Esta
secuencia de nucleótidos se muestra en SEQ ID NO: 22, y la
secuencia de aminoácidos deducida de esta secuencia de nucleótidos
se indica en SEQ ID NO: 23. Considerando la secuencia, este cDNA no
se considera que es un cDNA de longitud completa.
SsMaT1 presentó 92% de identidad con SgMat1, y
52% de identidad con SgMaT2 a nivel de los aminoácidos.
De manera similar, se escrutó la misma
cDNA-teca usando SgMaT2 como sonda, y se obtuvo
SsMaT2. Esta secuencia de nucleótidos se muestra en SEQ ID NO: 24,
y la secuencia de aminoácidos deducida de esta secuencia de
nucleótidos se indica en SEQ ID NO: 25.
SsMaT2 presentó 53% de identidad con SgMat1, 96%
de identidad con SgMaT2, y 52% de identidad con SsMaT1 a nivel de
los aminoácidos.
Se recogieron hojas rojas jóvenes de perilla
(Perilla frutescens), y partiendo de este material, se
construyó una cDNA-teca usando un kit de síntesis
de cDNA ZAP (Strategene Co.) con \lambdaZAP II (Strategene Co.)
como vector, de acuerdo con el método recomendado por el fabricante.
Como en el ejemplo 8, este banco se escrutó usando SgMaT1 como
sonda, y el clon que tenía el cDNA más largo entre los clones
obtenidos se designó PfMaT1. La secuencia de nucleótidos de PfMaT1
se indica en SEQ ID NO: 26, y la secuencia de aminoácidos deducida
de esta secuencia de nucleótidos se indica en SEQ ID NO: 27.
PfMaT1 presentó 67% de identidad con SgMat1, 57%
de identidad con SgMaT2, y 65% de identidad con SsMat1, y 57% de
identidad con SsMaT2 a nivel de los aminoácidos.
Se construyó una cDNA-teca de
lavanda (Lavendula angustifolia) usando un kit de síntesis
ZAP-cDNA (Strategene Co.) with \lambdaZAP II
(Strategene Co.) as a vector, de acuerdo con el método recomendado
por el fabricante. Usando SgMaT2 obtenido en el ejemplo 6 como
sonda, se llevó a cabo el escrutinio por el método descrito en el
ejemplo 6, y se obtuvo LnMaT2. Esta secuencia de nucleótidos se
muestra en SEQ ID NO: 28, y la secuencia de aminoácidos deducida de
esta secuencia de nucleótidos se indica en SEQ ID NO: 29.
LnMaT2 presentó 53% de identidad con SgMat1, 65%
de identidad con SgMaT2, y 51% de identidad con SsMat1, 64% de
identidad con SsMaT2, y 56% de identidad con PfMaT1 a nivel de los
aminoácidos.
Se sintetizaron un cebador para introducir un
sitio BamHI en el extremo 5'- del gen SsMaT1 obtenido en el ejemplo
8 (Cebador nº 1: 5'-GGA TCC ATC GAG GGA CGC ATG ACA ACA ACA
ACA AC- 3' (SEQ ID NO: 30)), un cebador para introducir un sitio
BamHI en el extremo 3'- del gen SsMaT1 (Cebador nº 2: 5'- GGA
TCC TTA CAA TGG TTC GAC GAG CGC CGG AGA - 3' (SEQ ID NO: 31)),
y un cebador para suprimir el sitio BamHI en el gen SsMaT1 (Cebador
nº 3: 5'- G GAC CCG CCG ATA CCG GAA AAT TAC TTC- 3' (SEQ ID
NO: 32)).El cebador nº1 se diseñó de manera que se codifica un
sitio de escisión en el Factor Xa
(Ile-Glu-Gly-Arg)
justo antes del codon de iniciación de SsMaT1, metionina.
Se llevó a cabo una primera reacción PCR usando
el cebador nº 2 y el cebador nº 3 con el plásmido
(pBK-CMV-SsMaT1) que tiene cDNA de
SsMaT1 introducido en sitios de clonación múltiple (EcoRI, XhoI) del
vector de fagomido pBK-CMV (Toyobo Co.) como molde
(composición de reaccionante: 100 ng de
pBK-CMV-SsMaT1, 1xtampón pfu
(Stratagene Co.), concentración 200 \muM de los dNTPs,
concentración 1 \muM de cebador nº 2, concentración 1 \muM de
cebador nº 3, 2,5 U de polimerasa pfu (Stratagene Co.); condiciones
de reacción: 96°C 2 minutos, (96°C 1 minuto, 70°C
1 minuto, 72°C 3 minutos) \times30 ciclos, 72°C 7 minutos), y se obtuvo un producto PCR (aproximadamente 500 pb).
1 minuto, 72°C 3 minutos) \times30 ciclos, 72°C 7 minutos), y se obtuvo un producto PCR (aproximadamente 500 pb).
Usando el fragmento de DNA bicatenario de SsMaT1
obtenido como primer producto de la PCR y cebador nº 1, se llevó a
cabo una segunda reacción PCR (composición de reaccionante: 100 ng
de pBK-CMV-SsMaT1, 1xtampón pfu,
concentración 200 \muM de los dNTPs, concentración 1 \muM de
cebador nº 1, 100 ng del primer producto de PCR, 2,5 U de DNA
polimerasa de pfu (Stratagene Co.); condiciones de reacción: 96°C 7
minutos, (96°C durante 2 minutos, 70°C durante 1 minuto, 72°C
durante 7 minutos) x30 ciclos, 72°C durante 10 minutos).
El segundo producto de PCR se sometió a adición
de una cola A (100 ng del segundo producto de la PCR, 1xtampónExTaq,
concentración 2 mM de dATP, ExTaq TAKARA; 70°C, 30 minutos), y se
clonó en el vector pCR2,1-TOPO (Clonetech Co.).
Como resultado, se obtuvo un plásmido para insertar un SsMaT1 de
longitud completa (pCR2.1-SsMatl). Usando un
secuenciador de DNA, se confirmó que se introdujo un nucleótido
incorrecto en la secuencia de DNA del gen SsMaT1 debido a la
operación de PCR.
El pCR2,1-SsMaT1 se digirió
completamente con BamHI, y se recuperó un fragmento de DNA de
aproximadamente 1400 pb. Este fragmento de DNA se subclonó en el
sitio BamHI del vector de expresión pQE-30 en
Escherichia coli (QIAGEN Co.), y se designó
pQE-30Xa-SsMaT1.
La expresión de SsMaT1 en Escherichia
coli que contenía
pQE-30Xa-SsMaT1 se efectuó de
acuerdo con el método descrito en el ejemplo 7. La medición de la
actividad enzimática se efectuó de acuerdo con el método descrito
en el ejemplo 2.
El extracto obtenido a partir de Escherichia
coli que expresa el gen SsMaT1 se usó para medir la actividad
enzimática y se confirmó que se producía
malonil-shisonina además de shisonina. Así, se
confirmó que el gen SsMaT1 gene codifica una proteína que tiene
actividad para transferir un grupo malonilo a un grupo glicosilo en
la posición 5 de flavonoides.
Cuando se utilizó acetil CoA, metilmalonil CoA,
o succinil CoA en lugar de malonil CoA como sustrato, se observó un
nuevo pico además de shisonina en la cromatografía en columna usando
HPLC, lo que indica que SsMaT1 tiene actividad para transferir
estos sustratos a shisonina.
Como en el ejemplo 7, usando un plásmido
construido de manera que el gen PfMaT1 obtenido en el ejemplo 9 se
puede expresar como una proteína de fusión fusionada con la proteína
LacZ, se expresó el gen PfMaT1 en Escherichia coli como en
el ejemplo 7, y se midió la actividad enzimática. La medición de la
actividad enzimática se efectuó de acuerdo con el método descrito
en el ejemplo 2.
Un extracto obtenido a partir de Escherichia
coli que expresa el gen PfMaT1 se usó para medir la actividad
enzimática y se confirmó que se producía
malonil-shisonina además de shisonina Así, se
confirmó que el gen PfMaT1 codifica una proteína que tiene
actividad para transferir un grupo malonilo a un grupo glicosilo en
la posición 5 de flavonoides.
Se ha hecho evidente por primera vez mediante la
presente invención que una acil alifático transferasa está
implicada en el control del color de las flores. El color de las
flores se puede alterar expresando esta proteína en los pétalos de
las flores para modificar las antocianinas. Como acil alifático
transferasa, se puede usar cualquier gen que codifica una proteína
que tiene la misma actividad enzimática en otros organismos además
de los genes descritos anteriormente obtenidos a partir de salvia,
perilla y lavanda.
<110> SUNTORY LIMITED
\vskip0.400000\baselineskip
<120> Nuevo gen de acil alifático
transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<130> 1003551
\vskip0.400000\baselineskip
<160>
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1419
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<230> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SgMaT1 de Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 445
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<230> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SgMaT1 de Salvia guaranitica
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1471
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SgMaT1' de Salvia
guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 444
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<230> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SgMaT1' de Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1530
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<230> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SgMaT2 de Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 459
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SgMaT2 de Salvia guaranitica
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
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<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Tyr Ala Ala Gly Asp Ser Val Pro Val Thr Ile
Ala Ala Ser Asn}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 10
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<212> PRT
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<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Leu Leu Phe Tyr His His Pro Ser Ser
Lys}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 9
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Gly Asp Lys Ser Asp Glu Asn Ala Pro Glu
Leu Phe Ile Ile Pro}
\sac{Ala Asp Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 10
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Met Ala Ala Phe Glu Glu Val Phe}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
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<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 11
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Trp Leu His Tyr His Pro Val}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
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<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 12
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gly Ala Glu Asn Trp Met Ser Asp Ile Phe
Lys}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
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<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 13
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Leu Ala Ala Glu Xaa Gly Phe Ala Val Ala Ala
Ala Ala Ile Gly Gly}
\sac{Gly Ile Ile Gly}
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\vskip0.400000\baselineskip
<210> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 14
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Phe Ile Asn Asp Pro Asn Lys Ile Asp Ala
Ile Phe}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 10
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<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 15
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Thr Ala Ser Phe Pro Leu Pro Thr Asn
Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 16
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 5
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<212> PRT
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<213> Secuencia artificial
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<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 16
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Phe Pro Gln Leu Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 17
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
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<212> PRT
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<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 17
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Asp Phe Gly Trp Gly Lys}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
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<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 18
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Asp Ala Asp Gln Phe Tyr Asp Leu Leu Pro Pro
Ile Pro Pro}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 19
\vskip1.000000\baselineskip
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\hskip-.1em\dddseqskiptaygcigcig gigaytcigt iccigt
\hfill26
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\vskip0.400000\baselineskip
<210> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 20
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipgticcigtia ciathgcigc
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 21
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipytticcccai ccraartcig c
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1636
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<230> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SsMaT1 de Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 22
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 460
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<230> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SsMaT1 de Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 23
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1498
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<230> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SsMaT2 de Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 24
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 459
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<230> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SsMaT2 de Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 25
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1502
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Perilla frutescens
\vskip0.400000\baselineskip
<230> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SfMaT1 de Perilla frutescens
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 26
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 447
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Perilla frutescens
\vskip0.400000\baselineskip
<230> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SfMaT1 de Perilla frutescens
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 27
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1502
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Lavendula angustifolia
\vskip0.400000\baselineskip
<230> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa LnMaT2 de Lavendula
angustifolia
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 28
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 29
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 469
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Lavendula angustifolia
\vskip0.400000\baselineskip
<230> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa LnMaT2 de Lavendula angustifolia
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 29
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 30
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 35
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador No. 1
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 30
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipggatccatcg agggacgcat gacaacaaca acaac
\hfill35
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 31
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 33
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador No.2
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 31
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipggatccttac aatggttcga cgagcgccgg aga
\hfill33
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 32
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador No.3
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 32
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipggacccgccg ataccggaaa attacttc
\hfill28
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<110> SUNTORY LIMITED
\vskip0.400000\baselineskip
<120> Nuevo gen que codifica acil
alifático transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<130> 1003551
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 32
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1419
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SgMaT1 de Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 445
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SgMaT1 de Salvia guaranitica
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1471
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SgMaT1' de Salvia
guaranitica
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 444
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SgMaT1' de Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1530
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SgMaT2 de Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 459
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SgMaT2 de Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Tyr Ala Ala Gly Asp Ser Val Pro Val Thr Ile
Ala Ala Ser Asn}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Leu Leu Phe Tyr His His Pro Ser Ser
Lys}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 9
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Gly Asp Lys Ser Asp Glu Asn Ala Pro Glu
Leu Phe Ile Ile Pro}
\sac{Ala Asp Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 10
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Met Ala Ala Phe Glu Glu Val Phe}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 11
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Trp Leu His Tyr His Pro Val}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 12
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gly Ala Glu Asn Trp Met Ser Asp Ile Phe
Lys}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 13
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Leu Ala Ala Glu Xaa Gly Phe Ala Val Ala Ala
Ala Ala Ile Gly Gly}
\sac{Gly Ile Ile Gly}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 14
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Phe Ile Asn Asp Pro Asn Lys Ile Asp Ala
Ile Phe}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 15
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Thr Ala Ser Phe Pro Leu Pro Thr Asn
Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 16
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 16
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Phe Pro Gln Leu Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 17
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 17
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Asp Phe Gly Trp Gly Lys}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 18
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Asp Ala Asp Gln Phe Tyr Asp Leu Leu Pro Pro
Ile Pro Pro}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador, n es inosina
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 19
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskiptaygcngcng gngaytcngt nccngt
\hfill26
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador, n es inosina
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 20
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipgtnccngtna cnathgcngc
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador, n es inosina
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 21
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipyttnccccan ccraartcng c
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1636
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SsMaT1 de Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 22
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 460
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SsMaT1 de Salvia splendens
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 23
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1498
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SsMaT2 de Salvia splendens
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 24
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 459
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SsMaT2 de Salvia splendens
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 25
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1502
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Perilla frutescens
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SfMaT1 de Perilla frutescens
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 26
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 447
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Perilla frutescens
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SEMaT1 de Perilla frutescens
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 27
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1502
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Lavendula angustifolia
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa LnMaT2 de Lavendula
angustifolia
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 28
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 29
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 469
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Lavendula angustifolia
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa LnMaT2 de Lavendula angustifolia
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 29
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 30
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 35
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador No.1
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 30
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipggatccatcg agggacgcat gacaacaaca acaac
\hfill35
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 31
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 33
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador No.2
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 31
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipggatccttac aatggttcga cgagcgccgg aga
\hfill33
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 32
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador No.3
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 32
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipggacccgccg ataccggaaa attacttc
\hfill28
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<110> SUNTORY LIMITED
\vskip0.400000\baselineskip
<120> Nuevo gen que codifica acil
alifático transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<130> 1003551
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 32
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1419
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SgMaT1 de Salvia guaranitica
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 445
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SgMaT1 de Salvia guaranitica
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1471
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SgMaT1' de Salvia
guaranitica
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 444
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SgMaT1' de Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1530
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SgMaT2 de Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 459
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SgMaT2 de Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Tyr Ala Ala Gly Asp Ser Val Pro Val Thr Ile
Ala Ala Ser Asn}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Leu Leu Phe Tyr His His Pro Ser Ser
Lys}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 9
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Gly Asp Lys Ser Asp Glu Asn Ala Pro Glu
Leu Phe Ile Ile Pro}
\sac{Ala Asp Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 10
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Met Ala Ala Phe Glu Glu Val Phe}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
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<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 11
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Trp Leu His Tyr His Pro Val}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 12
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gly Ala Glu Asn Trp Met Ser Asp Ile Phe
Lys}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 13
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Leu Ala Ala Glu Xaa Gly Phe Ala Val Ala Ala
Ala Ala Ile Gly Gly}
\sac{Gly Ile Ile Gly}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 14
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Phe Ile Asn Asp Pro Asn Lys Ile Asp Ala
Ile Phe}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 15
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Thr Ala Ser Phe Pro Leu Pro Thr Asn
Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 16
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 16
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Phe Pro Gln Leu Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 17
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 17
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Asp Phe Gly Trp Gly Lys}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 18
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Asp Ala Asp Gln Phe Tyr Asp Leu Leu Pro Pro
Ile Pro Pro}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador, n es inosina
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 19
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskiptaygcngcng gngaytcngt nccngt
\hfill26
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador, n es inosina
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 20
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipgtnccngtna cnathgcngc
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador, n es inosina
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 21
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipyttnccccan ccraartcng c
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1636
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SsMaT1 de Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 22
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 460
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SsMaT1 de Salvia splendens
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 23
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1498
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SsMaT2 de Salvia splendens
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 24
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 459
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SsMaT2 de Salvia splendens
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 25
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1502
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Perilla frutescens
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SfMaT1 de Perilla frutescens
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 26
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 447
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Perilla frutescens
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SfMaT1 de Perilla frutescens
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 27
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1502
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Lavendula angustifolia
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa LnMaT2 de Lavendula
angustifolia
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 28
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 29
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 469
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Lavendula angustifolia
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa LnMaT2 de Lavendula angustifolia
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 29
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 30
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 35
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador No.1
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 30
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipggatccatcg agggacgcat gacaacaaca acaac
\hfill35
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 31
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 33
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador No.2
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 31
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipggatccttac aatggttcga cgagcgccgg aga
\hfill33
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 32
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador No.3
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 32
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipggacccgccg ataccggaaa attacttc
\hfill28
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<110> SUNTORY LIMITED
\vskip0.400000\baselineskip
<120> Nuevo gen que codifica acil
alifático transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<130> 1003551
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 32
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1419
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SgMaT1 de Salvia guaranitica
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 445
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SgMaT1 de Salvia guaranitica
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1471
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SgMaT1' de Salvia
guaranitica
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 444
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SgMaT1' de Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1530
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SgMaT2 de Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 459
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SgMaT2 de Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Tyr Ala Ala Gly Asp Ser Val Pro Val Thr Ile
Ala Ala Ser Asn}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Leu Leu Phe Tyr His His Pro Ser Ser
Lys}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 9
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Gly Asp Lys Ser Asp Glu Asn Ala Pro Glu
Leu Phe Ile Ile Pro}
\sac{Ala Asp Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 10
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Met Ala Ala Phe Glu Glu Val Phe}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 11
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Trp Leu His Tyr His Pro Val}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 12
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gly Ala Glu Asn Trp Met Ser Asp Ile Phe
Lys}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 13
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Leu Ala Ala Glu Xaa Gly Phe Ala Val Ala Ala
Ala Ala Ile Gly Gly}
\sac{Gly Ile Ile Gly}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 14
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Phe Ile Asn Asp Pro Asn Lys Ile Asp Ala
Ile Phe}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
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\vskip0.400000\baselineskip
<211> 10
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<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 15
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Thr Ala Ser Phe Pro Leu Pro Thr Asn
Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
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\vskip0.400000\baselineskip
<211> 5
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<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 16
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Phe Pro Gln Leu Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
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<211> 7
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<212> PRT
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<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 17
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\sa{Ala Asp Phe Gly Trp Gly Lys}
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<210> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 14
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<212> PRT
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<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 18
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Asp Ala Asp Gln Phe Tyr Asp Leu Leu Pro Pro
Ile Pro Pro}
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\vskip0.400000\baselineskip
<210> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 26
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<212> DNA
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<213> Secuencia artificial
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<220>
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<223> Cebador
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\hskip-.1em\dddseqskiptaygcigcig gigaytcigt iccigt
\hfill26
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<210> 20
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<211> 20
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<212> DNA
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<213> Secuencia artificial
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<220>
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<223> Cebador
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<400> 20
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\vskip0.400000\baselineskip
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<210> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
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<212> DNA
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<213> Secuencia artificial
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<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador
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\hskip-.1em\dddseqskipytticcccai ccraartcig c
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<210> 22
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<211> 1636
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<212> DNA
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<213> Salvia splendens
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<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SsMaT1 de Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 22
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<211> 460
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<212> PRT
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<213> Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SsMaT1 de Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 23
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1498
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SsMaT2 de Salvia splendens
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 24
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
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<210> 25
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<211> 459
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SsMaT2 de Salvia splendens
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 25
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1502
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Perilla frutescens
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SfMaT1 de Perilla frutescens
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 26
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
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\vskip0.400000\baselineskip
<211> 447
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Perilla frutescens
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SfMaT1 de Perilla frutescens
\vskip0.400000\baselineskip
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\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
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<210> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1502
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Lavendula angustifolia
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa LnMaT2 de Lavendula
angustifolia
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 28
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 29
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 469
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<212> PRT
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<213> Lavendula angustifolia
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa LnMaT2 de Lavendula angustifolia
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 29
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<210> 30
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 35
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
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<223> Cebador NO.1
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<400> 30
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\hfill35
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<210> 31
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 33
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador NO.2
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<400> 31
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\hskip-.1em\dddseqskipggatccttac aatggttcga cgagcgccgg aga
\hfill33
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\vskip0.400000\baselineskip
<210> 32
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador NO.3
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<400> 32
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipggacccgccg ataccggaaa attacttc
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<110> SUNTORY LIMITED
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<120> Novel Aliphatic acyltransferase
gene
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<130> 1003551
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<160>
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<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1419
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<212> DNA
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<213> Salvia guaranitica
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<230> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SgMaT1 de Salvia guaranitica
\newpage
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\vskip1.000000\baselineskip
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<211> 445
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<212> PRT
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<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<230> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SgMaT1 de Salvia guaranitica
\newpage
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<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1471
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SgMaT1' de Salvia
guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
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\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 444
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<230> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SgMaT1' de Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
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<211> 1530
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
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<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<230> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SgMaT2 de Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
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\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 459
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia guaranitica
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SgMaT2 de Salvia guaranitica
\newpage
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<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 15
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<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
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\sa{Tyr Ala Ala Gly Asp Ser Val Pro Val Thr Ile
Ala Ala Ser Asn}
\vskip1.000000\baselineskip
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<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Leu Leu Phe Tyr His His Pro Ser Ser
Lys}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 9
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Gly Asp Lys Ser Asp Glu Asn Ala Pro Glu
Leu Phe Ile Ile Pro}
\sac{Ala Asp Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 10
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Met Ala Ala Phe Glu Glu Val Phe}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 11
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Trp Leu His Tyr His Pro Val}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 12
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gly Ala Glu Asn Trp Met Ser Asp Ile Phe
Lys}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 13
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Leu Ala Ala Glu Xaa Gly Phe Ala Val Ala Ala
Ala Ala Ile Gly Gly}
\sac{Gly Ile Ile Gly}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 14
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Phe Ile Asn Asp Pro Asn Lys Ile Asp Ala
Ile Phe}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 15
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Thr Ala Ser Phe Pro Leu Pro Thr Asn
Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 16
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 16
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Phe Pro Gln Leu Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 17
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 17
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Asp Phe Gly Trp Gly Lys}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia parcial de aminoácidos de
malonil transferasa
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 18
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Asp Ala Asp Gln Phe Tyr Asp Leu Leu Pro Pro
Ile Pro Pro}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 19
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskiptaygcigcig gigaytcigt iccigt
\hfill26
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 20
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipgticcigtia ciathgcigc
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 21
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipytticcccai ccraartcig c
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1636
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<230> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SsMaT1 de Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 22
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 460
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<230> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SsMaT1 de Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 23
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1498
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<230> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SsMaT2 de Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 24
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 459
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<230> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SsMaT2 de Salvia splendens
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 25
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1502
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Perilla frutescens
\vskip0.400000\baselineskip
<230> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa SfMaT1 de Perilla frutescens
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 26
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 447
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Perilla frutescens
\vskip0.400000\baselineskip
<230> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa SfMaT1 de Perilla frutescens
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 27
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1502
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Lavendula angustifolia
\vskip0.400000\baselineskip
<230> Secuencia de nucleótidos que
codifica malonil transferasa LnMaT2 de Lavendula
angustifolia
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 28
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 29
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 469
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Lavendula angustifolia
\vskip0.400000\baselineskip
<230> Secuencia de aminoácidos de malonil
transferasa LnMaT2 de Lavendula angustifolia
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 29
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 30
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 35
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador No.1
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 30
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipggatccatcg agggacgcat gacaacaaca acaac
\hfill35
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 31
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 33
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador No.2
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 31
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipggatccttac aatggttcga cgagcgccgg aga
\hfill33
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 32
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cebador No. 3
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 32
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipggacccgccg ataccggaaa attacttc
\hfill28
Claims (11)
1. Un gen aislado que codifica una proteína que
tiene actividad para transferir un grupo acilo alifático a un grupo
glicosilo en la posición 5 de flavonoides, en donde (i) dicha
proteína tiene una secuencia de aminoácidos indicada por SEQ ID NO:
2, 4, 6, 23, 25, 27 o 29, o una secuencia de aminoácidos que
presenta identidad de 50% o más con una secuencia de aminoácidos
indicada por SEQ ID NO: 2, 4, 6, 23, 25, 27 o 29, o (ii) dicho gen
se hibrida con una parte o con toda la secuencia de nucleótidos que
codifica una secuencia de aminoácidos indicada por SEQ ID NO: 2, 4,
6, 23, 25, 27 o 29, en las condiciones de 5 x SSC y 50°C.
2. Un vector que comprende un gen según la
reivindicación 1.
3. Un hospedante transformado por un vector
según la reivindicación 2, donde dicho hospedante no es un ser
humano ni una célula de una linea germinal humana.
4. Un hospedante según la reivindicación 3,
donde dicho hospedante es una célula bacteriana o vegetal.
5. Una proteína codificada por un gen según la
reivindicación 1.
6. Un procedimiento para producir una proteína,
que comprende las etapas de:
cultivar o desarrollar un hospedante según la
reivindicación 3 o 4; y
recoger, del hospedante, dicha proteína que
tiene actividad para transferir un grupo acilo alifático en un
grupo glicosilo en la posición 5 de flavonoides.
7. Una planta transgénica que tiene un gen según
la reivindicación 1 introducido en ella, o un vástago o tejido de
la misma que tiene las mismas propiedades.
8. La planta transgénica, el vástago o tejido de
la misma según la reivindicación 7, donde dicha planta en la que se
introduce dicho gen es una rosa, crisantemo, clavel, dragonaria,
ciclamen, orquídea, lisianthus, frisia, gerbera, gladiolo,
gisófila, calanchoe, lirio, pelargonio, geranio, petunia, torenia,
tulipán, arroz, cebada, trigo, colza, patata, tomate, chopo,
banana, eucalipto, batata, soja, alfalfa, altramuz o maíz.
9. Una flor cortada de la planta transgénica
según la reivindicación 7 u 8, en donde dicha flor tiene el gen
aislado de la reivindicación 1.
10. Un método para alterar el color de las
flores usando un gen según la reivindicación 1.
11. Un método según la reivindicación 10, donde
la alteración del color da como resultado que las flores obtienen
un matiz más azul.
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| AU6070001A (en) | 2001-12-11 |
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