ES2377858T3 - Conjugados con biomoléculas de los (4S, 8S)- y (4R,8R)- ácidos 4-p-bencil-8-metil-3,6,9-triaza-3N,6N,9N-tricarboximetil-1, 11-undecanodioicos, puros en cuanto a enantiómeros, procedimientos para su preparación y su utilización para la preparación de agentes farmacéuticos - Google Patents

Abstract

Conjugados de las formulas generales VIIa y VIIb en las que Z representa un atomo de hidrogeno o un equivalente de un ion metalico de un elemento con los numeros atomico.21-29, 31, 32, 37-39, 42-44, 46, 47, 49, 58-71, 75, 77, 82 u 83, A representa un grupo -COO, R representa una biomolécula unida a través de un grupo funcional, o un radical alquilo de C1-C25 lineal o ramificado, saturado o insaturado y eventualmente interrumpido por uno hasta seis átomos de O, o respectivamente por grupos fenileno, -NHCO, -CONH-, y/o -NH-(C=S)-NH, que eventualmente está sustituido en un sitio arbitrario con uno hasta seis grupos carboxilo, grupos hidroxilo, grupos amino u otros grupos funcionales, a través de los cuales pueden estar unidas las biomoléculas, así como sus sales con bases orgánicas o inorgánicas, con las condiciones de que el radical alquilo ha de contener por lo menos una biomolécula unida a través de una grupo funcional y de que por lo menos dos Z han de representar un equivalente de un ion metálico.

Description

Conjugados con bi omoleculas de los (4S,8S)- y (4R,8R)-acidos 4-p-bencil-8-metil-3,6,9-triaza-3N,6N,9Ntricarboximetil-1,11-undecanodioicos, puros en cuanto a enantiomeros, procedimientos para su preparacion y su utilizacion para la preparacion de agentes farmaceuticos El invento se refiere a los objetos caracterizados en las reivindicaciones: a conjugados con biomoleculas de los (4S,8S)- y (4R,8R)-acidos 4-p-bencil-8-metil-3,6,9-triaza-3N,6N,9N-tricarboximetil-1,11-undecanodioicos, puros en cuanto a enantiomeros, a procedimientos para su preparacion y a su utilizacion para la preparacion de agentes farmaceuticos destinados al radiodiagnostico, a la radioterapia o al diagnostico por RMN. El uso de radiofarmacos para finalidades diagnosticas y terapeuticas se conoce desde hace mucho tiempo en el sector de la investigacion biologica y medica. En particular, los radiofarmacos se utilizan para representar determinadas estructuras tales como, por ejemplo, el esqueleto, los organos o los tejidos. El uso diagnostico tiene como premisa el uso de tales agentes radiactivos que, despues de su aplicacion, se enriquecen especificamente en las estructuras existentes en un paciente, que deben de ser investigadas. Estos agentes radiactivos, que se enriquecen l ocalmente, pueden ser rastreados, registrados o escintigrafiados por medio de unos detectores adecuados, tales como por ejemplo camaras de escintilacion u otros procedimientos adecuados de registro. La distribucion y la intensidad relativa del agente radiactivo detectado caracterizan al sitio de una estructura, en la que se encuentra el agente radiactivo, y puede representar la presencia de anomalias en estructuras y en funciones, modificaciones patologicas, etc. De un modo similar, se pueden administrar unos radiofarmacos como agentes terapeuticos, para irradiar determinados tejidos o zonas enfermos/as. Tal tratamiento requiere la preparacion de agentes terapeuticos radiactivos, que se enriquecen en determinadas estructuras, organos o tejidos. Un radiofarmaco desarrollado por la entidad IDEC Pharmaceuticals Corp. para la terapia del "linfoma no de Hodgkin" es Zevalin® (vease p.ej. Cancer (2002) febrero 15: 94, (supl. 4):1.349-57). El ion radiante es en este caso el 90Y que emite rayos �, que esta unido a un a nticuerpo especifico para un tumor a traves de un compuesto quelante (un derivado sustituido con metilo de acido dietilen-triamina-pentaacetico (MX-DTPA)). La resonancia magnetica nuclear (RMN) es hoy en dia un metodo, que se usa ampliamente y que se aprovecha para la generacion de imagenes in vivo, con el que se pueden representar vasos corporales y tejidos corporales (inclusive tumores) a traves de la medicion de las propiedades magneticas de los protones en el agua del cuerpo. Para esto se emplean p.ej. unos agentes de contraste, que dan lugar a un refuerzo del contraste en las imagenes resultantes o respectivamente que h ace legibles a estas imagenes tan solo a traves de la influencia sobre determinados parametros de RMN de los protones del cuerpo (p.ej. los periodos de tiempo de relajacion T1 y T2). Sobre todo pasan a usarse unos compuestos complejos de iones paramagneticos, tales como p.ej. unos compuestos complejos que contienen gadolinio (p.ej. Magnevist®), debido al efecto de los iones paramagneticos sobre el acortamiento de los periodos de tiempo de relajacion. Tanto los iones paramagneticos, tales como p.ej.: Gd3+, Mn 2+, Cr3+, Fe3+ y Cu2+ asi como tambien muchos radionuclidos metalicos, se pueden administrar en una forma libre como soluciones, ya que son altamente toxicos. Con el fin de hacer adecuados a estos iones para un uso in vivo, por regla general ellos se convierten en compuestos complejos. Por ejemplo, en el documento de solicitud de patente europea EP-A-0 071 564 se describe, entre otras cosas, la sal de meglumina del compuesto complejo con gadolinio(III) del acido dietilen-triaminapentaacetico (DTPA) como agente de contraste para la tomografia por RMN. Un preparado, que contiene este compuesto complejo, fue autorizado internacionalmente bajo el nombre de Magnevist® como primer agente de contraste de RMN. Este agente de contraste se distribuye extracelularmente despues de una aplicacion por via intravenosa y es segregado por via renal mediante secrecion glomerular. Practicamente no se observa ningun paso del mismo a traves de membranas celulares intactas. El Magnevist® es especialmente bueno para la representacion de zonas patologicas (p.ej. inflamaciones y tumores). No obstante, los agentes radioterapeuticos y agentes de contraste conocidos no se pueden emplear satisfactoriamente para todos los casos de uso. Asi, muchos de estos agentes se distribuyen por todo el espacio extracelular del cuerpo. Con el fin de aumentar la eficiencia de estos agentes en el diagnostico in vivo y en la terapia, se intenta aumentar su especificidad y su selectividad, por ejemplo, para celulas dianas o para deseadas zonas y estructuras del cuerpo. Un mejoramiento de estas propiedades se puede conseguir, por ejemplo, mediante acoplamiento de los compuestos complejos con metales a biomoleculas segun el principio de direccion de farmacos hacia dianas (en ingles "drug-targeting"). Como biomoleculas se ofrecen proteinas plasmaticas, anticuerpos, sus fragmentos, hormonas, factores de crecimiento y substratos de receptores y enzimas (p.ej. vease el documento de solicitud de patente internacional W0 97/12850, Institut fur Diagnostikforschung an der FU Berlin (Instituto para la investigacion del diagnostico en la Universidad Libre de Berlin). Sin embargo, hasta ahora, p.ej. la especificidad para un tumor (el enriquecimiento en tumores) en muchos casos todavia no es lo suficientemente alta, lo que constituye un objetivo importante especialmente en el caso de la radioinmunoterapia.

Ademas, es deseable poner a disposicion agentes para el diagnostico y la terapia, que junto a una especificidad lo mas alta que sea posible para una diana, posean una gran estabilidad in vivo para los iones metalicos convertidos en complejos, que en la mayoria de los casos son toxicos.

5 Una mision del invento consistio, por consiguiente, en poner a disposicion nuevos agentes para el radiodiagnostico y el diagnostico por RMN, asi como para la radioterapia, que no tengan lasmencionadas desventajas y en particular que tengan una alta estabilidad in vivo, una buena compatibilidad y sobre todo unas propiedades especificas para ciertos organos. Por una parte, la retencion en los tejidos tumorales o en los organos que se han de investigar, debe de ser suficiente para poder conseguir con una pequefa dosificacion la calidad de las imagenes o respectivamente

10 una su ficiente i rradiacion, que se nec esitan para un d iagnostico y u na t erapia ef icientes. P or o tra par te, a continuacion se debe de garantizar una segregacion de los metales, lo mas rapida y ampliamente completa que sea posible,desde el cuerpo. Ademas, los agentes de contraste de RMN deben de mostrar una alta relaxividad para protones y, por consiguiente, en el caso de un aumento de la intensidad de las sefales, deben de permitir una reduccion de las dosis.

15 Se emprendieron diferentes ensayos para m ejorar las propiedades de unos derivados de DTPA bioacoplables mediante la introduccion de ciertos sustituyentes.

Cummins y colaboradores describen p.ej. una sintesis detallada de derivados de DTPA sustituidos con metilo, que se pueden acoplar, por ejemplo, con anticuerpos ("A Convenient Synthesis of Bifunctional Chelating Agents Based 20 on Dietilenetriaminepentaacetic Acid and Their Coordination Chemistrywith Yttrium" (Una sintesis conveniente de agentes quelantes bifuncionales, que se basan en el acido dietilen-triamina-pentaacetico, y su quimica de coordinacion con itrio", Bioconjugate Chemistry, (1991), 180-186. Brechbiel y colaboradores, "Synthesis of (1-(pisothiocyanatobenzyl) derivatives of DTPA and EDTA. Antibody Labeling and Tumor-Imaging Studies" (Derivados de 1-(p-isotiocianatobencilo) de DTPA y EDTA. Marcacion con anticuerpos y estudios de representacion en imagenes

25 de t umores), I norg. C hem. ( 1986), 25, 2. 772-2.781). E n l a so licitud de pat ente i nternacional W 0 88/ 01618 de Gansow y colaboradores se divulga un DTPA, que esta provisto de un sustituyente metilo en la posicion 8 y de un sustituyente bencilo funcionalizado en para en la posicion 4.

30 El compuesto I fue designado MX-DTPA, mx-DTPA o tambien 1B4M-H5DTPA. La solicitud de patenteinternacional W0 01/41743 de la entidad IDEC PharmaceuticalsCorporation describe una sintesis regioselectiva del compuesto I, que parte de una (S)-p-nitrofenil-alanina protegida con Boc y de una diamina monoprotegida. El centro estereogenico en la posicion 4 de este compuesto se describe como de configuracion S; el centro estereogenico en la posicion 8 no es definido.

35 Tal co mo y a se ha m encionado m as arriba, M X-DTPA es un co mponente del pr eparado Z EVALIN® para el tratamiento dellinfoma no de Hodgkin. Tambien aqui, se emplea como ligando quelante la mezcla de (4S,8R)-y (4S,8S)-MX-DTPA. McMurry y colaboradores (J. Med. Chem., (1998), 41, 3.546-3.549) pudieron mostrar que unos DTPA sustituidos con

40 ciclohexilo, que han sido sustituidos con nitrobencilo, a causa de la estructura rigida y voluminosa del anillo de ciclohexano, poseen una co nfiguracion preferida. A si, el c ompuesto I I ( y est o t ambien se ria v alido para e l enantiomero) tiene una estabilidad in vitro e in vivo mas alta que el compuesto III.

A pesa r de q ue M X-DTPA (I) m ostro unas propiedades bi en i nvestigadas y aceptables - p.ej. un a est abilidad aumentada de los compuestos complejos, comparada con la del DTPA sin sustituir -, sigue siendo deseable aumentar aunmas la estabilidad de los compuestos complejos con metales in vivo y poner a disposicion unos

5 agentes para el diagnostico y la terapia, que presentan una seguridad lo mas alta que sea posible.

Por fin, se encontro que unos derivados de MX-DTPA, en los que el sustituyente metilo (en la posicion 8), que es relativamente pequefo, ha sido introducido de un modo enantioselectivo, en el caso de una adecuada configuracion presenta in vitro sorprendentemente una estabilidad termodinamica manifiestamente mas alta que la de la mezcla de

10 diastereoisomeros (IV) (vease mas abajo).

En este caso, tal como se encontro, tiene que presentarse la configuracion de los sustituyentes metilo y bencilo como (4S,8S) (vease el compuesto Va) o (4R,8R) (vease el compuesto Vb), con el fin de conseguir el efecto descrito. Las configuraciones (4S,8R) o (4R,8S) (vease el compuesto VI a o respectivamente b) dan lugar, por el 5 contrario, a una estabilidad disminuida del compuesto complejo. Un experimento impresionantemente ejemplificativo pudo mostrar, que en una mezcla de en cada caso un equivalente de Va (R = -N02), VIa (R = -N02) y de la sal de Gd(III), se f orma ca si exclusivamente e l compuesto complejo co n G d de l co mpuesto V a. A demas, se pu do determinar la constante de estabilidad termodinamica para el compuesto Va con un valor logKy = 24,7 ± 0,7, que, por consiguiente, esta m anifiestamente aum entada f rente a l a co nstante de estabilidad d e l a m ezcla d e

10 diastereoisomeros IV (logKy = 22,5 (J. Med. Chem. (1998), 41, 3546-3549). Ademas, se encontro que la radiotoxicidad del co mpuesto co mplejo co n un m etal del co mpuesto V a in vivo ha disminuido f rente a l a del compuesto VIa.

Este resultado es inesperado y sorprendente, puesto que en el caso de los sustituyentes metilo en la posicion 8 no se trata de ninguna estructura rigida, "que organiza el espacio" o que es exigente desde el punto de vista esterico,

15 tal como ocurre en el caso del sustituyente ciclohexilo de los compuestos II y III. Asi, era de esperar que todos los cuatro estereoisomeros tuviesen casi las mismas propiedades de formacion de compuestos complejos. Tal como ya se ha descrito, se puso de manifiesto que, al compararlos, los compuestos Va y Vb conformes al invento poseen unas propiedades de formacion de compuestos complejos manifiestamente mejores que los compuestos VIa y VIb.

Ademas de esto, los compuestos conformes al invento muestran una buena relaxividad y una buena solubilidad en

20 agua, de tal manera que ellos se adecuan como agentes farmaceuticos para el radiodiagnostico y el diagnostico por RMN asi como para la radioterapia.

El invento se refiere por consiguiente a unos conjugados de las formulas generales VIIa y VIIb

en las que 25 Z representa un atomo de hidrogeno o un equivalente de un ion metalico de un e lemento con el numero

atomico 21-29, 31, 32, 37-39, 42-44, 46, 47, 49, 58-71, 75, 77, 82 u 83, A representa un grupo -C00, R representa una biomolecula unida a traves de un grupo funcional, o un radical alquilo de C1 -C25 lineal o

ramificado, saturado o insaturado y eventualmente interrumpido por uno hasta seis atomos de 0, o

respectivamente por grupos fenileno, -NHC0-, -C0NH-,

y/o -NH-(C=S)-NH, que eventualmente esta sustituido en un sitio arbitrario con uno hasta seis grupos carboxilo,

5 grupos hidroxilo, grupos amino u otros grupos funcionales, a t raves de l os cuales pue den est ar uni das las biomoleculas, asi como sus sales con bases organicas o inorganicas, con las condiciones de que el radical alquilo ha de contener por lo menos una biomolecula unida a traves de un grupo funcional y de que por lo menos dos Z han de representar un equivalente de un ion metalico.

10 El radical R puede representar un radical alquilo con 1 -25 atomos de carbono (conteniendo el por lo menos un grupo funcional a traves del cual esta unida una biomolecula). Este radical alquilo puede ser lineal o ramificado,

y esta provisto en un sitio arbitrario de uno hasta seis grupos carboxilo, hidroxilo, y/o amino (p.ej.:

o por lo menos de otro grupo fijador funcional, que puede estar unido con una biomolecula -tal como p.ej. carboxilo, carboxilo activado, am ino, ni tro, i socianato, i sotiocianato, hi drazino, se micarbazido, t iosemicarbazido, cloroacetamido, bromoacetamido, yodoacetamido, acrilo, acilamino, de anhidridos mixtos, azido, de cloruro de acido,

20 hidroxido, de cloruro de sulfonilo, vinilsulfono, carbodiimido, maleimido, dioxo u otro grupo fijador funcional (p.ej.

El radical alquilo de C1 -C25 puede estar interrumpido eventualmente por uno hasta seis atomos de 0, o por grupos fenileno,

-

NHC0, -C0NH, -0-(C0)-NH, y/o -NH-(C=S)-NH (p.ej.

R puede representar por si mismo tambien un grupo funcional, tal como p.ej. carboxilo, carboxilo activado, amino, nitro, i socianato, i sotiocianato, hi drazino, se micarbazido, t iosemicarbazido, cl oroacetamido, br omoacetamido, yodoacetamido, acr ilo, aci lamino, de anhidridos mixtos, azi do, de cloruro de aci do, de bromuro de aci do, de

Un gran numero de los posibles grupos fijadores antes mencionados permiten una reaccion selectiva con grupos funcionales de las biomoleculas enel valor optimo de pH, por ejemplola reaccion por adicioncongrupos -SH

10 (cisteina en la biomolecula), y ciertamente de manera exclusiva de grupos -SH, p.ej. con maleimidas (compuestos con (2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-ilo) vease mas arriba) o bromoacetamidas, cuando tenga lugar el acoplamiento en la region debilmente acida de valores del pH.

Por un grupo carboxilo activado se entienden precedentemente los grupos carboxilo, que estan derivatizados de tal

15 manera que ellos facilitan la reaccion con una biomolecula. Son conocidos los grupos que pueden ser utilizados para la activacion, y se puede remitir por ejemplo a la obra de M. y A. Bodanszky, "The Practice of Peptide Synthesis" (La practica de la sintesis de peptidos), editorial Springer 1984. Unos ejemplos de ellos son aductos del acido carboxilico con carbodiimidas o esteres activados tales como p.ej. esteres de hidroxibenzotriazol. Se prefiere especialmente el

Los esteres activados de los compuestos precedentemente descritos se preparan tal como es conocidopara un experto en la especialidad. Para el caso de los isocianatos o de los a-halogeno-acetatos, los correspondientes 25 compuestos precursores con amino terminal se hacen reaccionar segun metodos conocidos a partir de la bibliografia con t iofosgeno o ha logenuros de ac ido 2 -halo-acetico. T ambien es posible la reaccion co n unos esteres

(Hal = halogeno).

Por lo general, para est a f inalidad se pu eden ut ilizar t odos los metodos usuales de act ivacion para ac idos carboxilicos,que son conocidos a partir del estado de la tecnica. Si el sustituyente R contiene un grupo amido, entonces este se pr epara, por ej emplo, haci endo r eaccionar un ac ido ca rboxilico activado co n una am ina. L a activacion del aci do ca rboxilico se efectua se gun l os metodos us uales. E jemplos de adecuados r eactivos de

activacion son diciclohexil-carbodiimida (DCC), hidrocloruro de 1-etil-3-(3-dimetilamino-propil)-carbodiimida (EDC), hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi-tris(dimetilamino)-fosfonio (B0P) y hexafluorofosfato de 0-(benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametil-uronio(HBTU), de manera preferida DCC. Tambien es posible la adicion de catalizadores con nucleofilos para 0, tales como p.ej. N-hidroxi-succinimida (NHS) o N-hidroxi-benzotriazol.

Si en el caso del sustituyente se trata de una funcion de acido carboxilico, entonces esta se puede emplear en una forma protegida (p.ej. en forma del ester bencilico),yla separaciondel grupoprotector se puede efectuar por hidrogenolisis.

Con el fin de unir esta funcion de acido carboxilico a un apropiado grupo funcional de una biomolecula apropiada (acerca de la descr ipcion de biomoleculas: ve ase m as abajo), por r egla general, est e debera se r activado primeramente. De manera preferida, para esto se producen de manera intermedia unos esteres activados, que son atacados luego por un grupo nucleofilo de la biomolecula. De este modo resulta un enlace covalente entre la biomolecula y el compuesto de la formula I. Unos esteres activados preferidos son los esteres de la N-hidroxisuccinimida, los esteres del para-nitrofenol o los esteres del pentafluorofenol. Si el grupo funcional debe de ser unido a la biomolecula en forma de un isotiocianato, entonces de manera preferida se utiliza primeramente una amina terminal, la cual, si es necesario, puede ser provista de un grupo protector adecuado. Los gruposprotectores adecuados son conocidos a partir de la quimica de los peptidos. Despues de haber separado el grupo protector, mediante reaccion de la amina primaria terminal con tiofosgeno se puede producir el isotiocianato. Con este pueden reaccionar por adicion los grupos nucleofilos de la biomolecula.

La sintesis de los conjugados se efectua por regla general de tal manera que primeramente se produce un ligando o compuesto complejo quelato derivatizado y funcionalizado, que luego es unido con la biomolecula. Sin embargo, tambien es posible que, en el caso de la utilizacion de biomoleculas preparadas sinteticamente, durante la sintesis de la biomolecula el ligando o compuesto complejo quelato conforme al invento sea incorporado en esta. Esto se puede efectuar, por ejemplo, durante la sintesis secuencial de oligopeptidos en unaparato automata (robot) de sintesis. En caso de que sea necesario, para ello los grupos protectores usuales en la sintesis de la correspondiente biomolecula se pueden introducir en el compuesto conforme al invento. Estos se desdoblan luego en el aparato sintetizador con arreglo a los usuales algoritmos de sintesis.

Los compuestos conformes al invento contienen por lo menos dos centros de quiralidad (las posiciones 4 y 8). Tambien, R puede contener uno o varios centros adicionales dequiralidad, no estableciendose diferencia en las descripciones y e n l as reivindicaciones entre l os diferentes enantiomeros, per o los m encionados co mpuestos abarcan siempre los dos enantiomeros y, en el caso de presentarse varios centros estereos, ellos comprenden tambien todos los posibles diastereoisomeros asi como sus mezclas.

Por el concepto de "biomolecula" se entiende predominantemente cualquier molecula que, o bien se presenta en la naturaleza, por ejemplo en el cuerpo, o que se habia preparado por sintesis con una estructura analoga. Ademas de esto, por este concepto se entienden las moleculas, que pueden entrar en interaccion con una molecula que aparece biologicamente, por ejemplo en el cuerpo, o en una estructura que alli aparece, de tal manera que, por ejemplo, los conjugados se pueden enriqueceren determinados sitios deseados del cuerpo. Por el concepto de "cuerpo" se entiende predominantemente cualquier cuerpo vegetal o animal, prefiriendose los cuerpos animales y en particular los humanos.

Son biomoleculas, en particular, las moleculas que aparecen en seres vivos, que, como productos de la seleccion evolutiva, por m edio de u na cooperacion ordenada y compleja, cu mplen un as misiones especificas para e l organismo, y constituyen e l f undamento de su s funciones vitales (el metabolismo y el ca mbio de f orma, la procreacion y propagacion, el balance energetico). En las biomoleculas, las moleculasmas grandes (proteinas, acidos nucleicos, polisacaridos, lipidos, etc.) estan constituidas en la mayoria de los casos por eslabones sencillos (aminoacidos, nucleobases, monosacaridos, acidos grasos, etc.). Las correspondientes macromoleculas son designadas tambien como biopolimeros.

Ventajosamente, la biomolecula puede tener, por ejemplo, un entramado polipeptidico a base de aminoacidos con cadenas laterales, que pueden reaccionar con el grupo reactivo de los compuestos VIIa' y VIIb' (vease mas abajo). Tales cadenas laterales incluyen, por ejemplo, los grupos carboxilo de restos de acido aspartico y acido glutamico, los grupos amino de restos de lisina, los grupos aromaticos de restos de tirosina y histidina y los grupos sulfhidrilo de restos de cisteina.

Una r ecopilacion acerca de biomoleculas co n numerosos ejemplos se e ncuentra e n la o bra "Chemie d er Biomolekule" ( Quimica de l as biomoleculas) de l a T U-Graz (Universidad T ecnica de G raz) ( H. B erthold y colaboradores, Institut fur 0rganische Chemie, TU-Graz, 2001), a la que tambien se puede acceder a traves del internet dentro de la direccion www.orgc.tu-graz.ac.at.

Para la formacion de los conjugados conformes al invento se adecuan especialmente las siguientes biomoleculas: biopolimeros, pr oteinas, t ales como l as proteinas, q ue t ienen u na f uncion biologica, H SA (albumina d e su ero humano), BSA (albumina de suero bovino), etc., proteinas y peptidos, que se enriquecen en determinados sitios en

el organismo (p.ej. en receptores, membranas celulares, canales etc.), peptidos disociables por proteasas, peptidos con sitios sinteticos de rotura preestablecida (p.ej. esteres y amidas labiles, etc.), peptidos, que son disociados por metaloproteasas, peptidos con engarzadores fotodisociables, peptidos con grupos disociables por agentes oxidantes (oxidasas), peptidos con aminoacidos naturales y no naturales, glicoproteinas (glicopeptidos), proteinas de sefal, proteinas antiviricas y apoctosis (de muerte celular programada), biopolimeros modificados sinteticamente, tales como biopolimeros derivatizados con engarzadores, metaloproteasas modificadas y oxidasas derivatizadas, hidratos de carbono (desde mono- hasta polisacaridos), tales como azucares derivatizados, azucares disociables en el organismo, c iclodextrinas y sus derivados, am inoazucares, q uitosano, p olisulfatos y d erivados de ac ido acetilneuraminico, anticuerpos, tales como anticuerpos monoclonales, fragmentos de anticuerpos, anticuerpos policlonales, minicuerpos, cadenas unicas (del ingles "single chains") (tambien las que estan unidas con engarzadores para formar fragmentos multiples), globulos sanguineos rojos yotros componentes de la sangre, marcadores del cancer (p.ej. CAA) y sustancias que median por la adhesion entre celulas (p.ej. Lewis X y derivados anti-Lewis X), fragmentos de ADN y ARN, tales como ADN's y ARN's derivatizados (p.ej. los que fueron encontrados por el procedimiento SELEX), ARN y ADN sinteticos (tambien con bases no naturales), PNAs (acronimo de acidos nucleicos peptidicos) (de Hoechst) y antisentido, �-aminoacidos (de Seebach), aminas vectoras para la infiltracion en la celula, aminas biogenicas, compuestos farmaceuticos, preparados oncologicos, polimeros sinteticos, que estan dirigidos hacia una diana biologica (p.ej. un receptor), esteroides (naturales y modificados), prostaglandinas, taxol y sus derivados, endotelinas, alcaloides, acido folico y sus derivados, lipidos bioactivos, grasas, esteres de acidos grasos, mono-, di- y trigliceridos modificados sinteticamente, liposomas, que estan derivatizados junto a la superficie, micelas procedentes de acidos grasos naturales o compuestos de perfluoroalquilo, porfirinas, texafrinas, porfirinas ampliadas, citocromos, inhibidores, neuramidasas, neuropeptidos, inmunomoduladores, tales como FK 506, CAPE y gliotoxina, e ndoglicosidasas, su bstratos, que s on activados por enzimas, t ales co mo l a ca lmodulina c inasa, l a caseina cinasa II, la glutation-S-transferasa, la heparinasa, metaloproteasas de matriz, la cinasa del receptor de insulina, UDP-galactosa 4-epimerasa, fucosidasas, proteinas G, galactosidasas, glicosidasas, glicosil transferasas y la xi losidasa, antibioticos, vi taminas y co mpuestos analogos a vi taminas, hor monas, i ntercaladores de A DN, nucleosidos, nucleotidos, lectinas, vitamina B12, Lewis X y compuestos afines, psoralenos, antibioticos del tipo de dieno-trienos, carbaciclinas, VEGF (acronimo del ingles "vascular endothelial growth factor" (factor de crecimiento endotelial vascular)), somatostatina ysus derivados, derivados de biotina, antihormonas, proteinas y compuestos sinteticos especificas/os para tumores, polimeros, que se enriquecen en zonas de caracter acido o basico del cuerpo (distribucion controlada por el valor del pH), mioglobinas, apomioglobinas, etc., peptidos de neurotransmisores, factores de necrosis tumoral, peptidos, que se enriquecen en un tejido inflamado, reactivos para agrupaciones de sangre (en ingles "bloodpool), proteinas transportadoras de aniones y cationes, poliesteres (p.ej. del acido lactico), poliamidas y polifosfatos.

La mayoria de las biomoleculas antes citadas son obtenibles comercialmente de Merck, Aldrich, Sigma, Calbiochem

o Bachem.

Ademas, co mo bi omoleculas se pue den em plear t odos los "grupos fijadores de pr oteinas plasmaticas" o respectivamente todos los "grupos de fijacion a dianas", que se divulgan en los documentos W0 96/23526 y W0 01/08712.

Ademas, los compuestos de las formulas VII a y b pueden constituir conjugados con todas aquellas moleculas, que se hacen reaccionar dentro del estado de la tecnica con colorantes fluorescentes, con el fin de, por ej emplo, determinar su localizacion dentro de la celula mediante microscopia de epifluorescencia. Los compuestos pueden estar conjugados tambien con unos medicamentos que son en principio arbitrarios, con el fin de vigilar entonces, despues de la administracion del medicamento, el transporte de este dentro del organismo mediante la tecnica de RMN o de escintigrafia. Ademas, es posible que los conjugados conformes al invento a base de los compuestos de las formulas VII a y b y de las biomoleculas contengan otras moleculas adicionales, que han sido conjugadas con las biomoleculas. Por lo tanto, por el concepto de "biomolecula" se abarcan dentro del sentido del invento todas las moleculas, que se presentan en sistemasbiologicos, ytodas las moleculas, que son biocompatibles (en lo que respecta a la definicion de biomoleculas, vease mas arriba).

La relaxividad de los compuestos complejos paramagneticos conformes al invento es tan alta, que ellos se adecuan especialmente bien para el diagnostico por RMN. Los compuestos conformes al invento se fijan a proteinas. Esta propiedad les hace posible permanecer, unidos a proteinas del plasma, durante mas tiempo en la corriente sanguinea y hacer posible asi una representacion del espacio vascular. Ademas de esto, se hace posible tambien la representacion de unos sitios con una permeabilidad aumentada, t al co mo se pueden enc ontrar por ej emplo en t umores. Esta per meabilidad va scular aum entada constituye, ad emas, una base para la terapia tumoral con compuestos complejos con metales radiactivos. E l farmaco abandona el vaso dentro del tumor, permanece en el tejido y somete a este a su radiacion terapeuticamente eficaz. La fijacion de proteinas plasmaticas hace posibletambien un diagnostico con generacion de imagenes para la localizacion de infartos o necrosis como consecuencia del enriquecimiento de las sustancias conformes al invento en el infarto o en la necrosis. La deteccion, la localizacion y la vigilancia de necrosis oinfartos es un sector importante en la medicina. Asi, el infarto de miocardio no da l ugar inmediatamente a un t ejido irreversiblemente incapaz de funcionar, sino que inicia

un proceso dinamico, que se extiende a lo largo de un prolongado periodo de tiempo (de algunas semanas a varios meses). La enfermedad transcurre aproximadamente en tres fases, que no estan separadas nitidamente entre si,, sino que se solapan. La primera fase, el desarrollo del infarto de miocardio, abarca las 24 horas despues del infarto, en las que la destruccion avanza como una onda de choque (fenomeno de frente de onda) desde el subendocardio

5 hacia el miocardio. La segunda fase, el infarto ya existente, comprende la estabilizacion de la zona en la que tiene lugar una formacion de fibras (fibrosis) como proceso de curacion. La tercera fase, el infarto curado, comienza despues de que todo el tejido destruido haya sido reemplazado por un tejido cicatricial fibroso. Durante este periodo de tiempo tiene lugar una extensa reestructuracion.

10 Para realizar la evaluacion de un infarto de miocardio, tiene una importancia decisiva el hecho de saber que tamafo tiene la porcion del tejido que se ha perdido definitivamente durante el infarto y en que lugar se efectuo la perdida, puesto que de este conocimiento depende el tipo de la terapia. Los infartos se efectuan no solo en el miocardio sino tambien en otros tejidos tales como los existentes en el cerebro

o en los rifones.

15 Mientras que el i nfarto es curable hasta cierto p unto, en el ca so de un a n ecrosis, l a m uerte t isular limitada localmente, solo se pueden impedir o por lo menos aliviar las secuelas dafinas para el resto del organismo. Las necrosis pueden resultar de diferentes modos: por lesiones, agentes quimicos, deficit de oxigeno o por irradiacion. Como en el caso del infarto, el conocimiento de la extension y del tipo de una necrosis es importante para el ulterior modo de proceder por el medico.

20 La preparacion de los conjugados conformes al invento de las formulas VII a y b se efectua mediante el recurso de

en las que Z' tiene el significado de Z o de un grupo protector de carboxilo, R' representa un grupo funcional y A

25 representa un grupo -C00, eventualmente despues de la separacion de los grupos protectores de carboxilo, se hacen reaccionar de un modo en si conocido con una biomolecula, y a continuacion (eventualmente despues de la separacion de los grupos protectores de carboxilo), los acidos asi obtenidos se hacen reaccionar de un modo en si conocido con por lo menos un oxido metalico o con una sal metalica de un elemento con los numeros atomicos 2129, 31, 32, 37-39, 42-44, 46, 47, 49, 58-71, 75, 77, 82 u 83, y a continuacion, en el caso de que se desee, los

30 atomos de hidrogeno acidos pr esentes se t ransforman en sa les fisiologicamente co mpatibles con co mpuestos inorganicos y/u organicos o con aminoacidos.

La reaccion con la biomolecula se puede efectuar con quelatos de metales (Z' representa equivalentes de iones metalicos), co n co mpuestos quelantes (Z' representa hi drogeno) o c on co mpuestos quelantes protegidos (Z'

35 representa unos grupos protectores de carboxilo) de las formulas VII'a y VII'b, de tal manera que la separacion de los grupos protectores o respectivamente la introduccion de los iones metalicos deseados se efectue segun sea la via de reaccion escogida.

Como grupos protectores de carboxilo Z' entran en cuestion grupos alquilo, arilo y aralquilo inferiores, por ejemplo

40 los grupos metilo, etilo, propilo, butilo, fenilo, bencilo, difenilmetilo, trifenilmetilo, bis(4-nitro-fenil)-metilo, asi como trialquil-sililo.

La separacion de los grupos protectores Z' se efectua de un modo en si conocido, por ejemplo mediante hidrolisis, saponificacion alcalina de los esteres, de manera preferida con un alcali en una solucion acuosa-alcoholica, a unas

45 temperaturas de 0 °C a 50 °C, o en el caso de los esteres bencilicos mediante hidrogenacion catalitica y en el caso de l os esteres t-butilicos mediante hi drolisis en co ndiciones acidas, por ej emplo con aci do clorhidrico o trifluoroacetico (Protective Groups in 0rganic Synthesis (Grupos protectores en la sintesis organica), 2a edicion, T.W. Greene y P.G.M. Wutz, John Wiley & Sons, Inc., Nueva York, 1991).

50 La preparacion de los conjugados de las formulas VIIa y VIIbconformes al invento se ilustra en lo sucesivo con el Ejemplo del compuesto 1 escogido,

en el que Z' es t-butilo.

Mediante una saponificacion alcalina y un subsiguiente tratamiento con un intercambiador de iones, el compuesto 1 se puede transformar en el compuesto VII' a con grupos carboxilo libres. El compuesto 1 resulta a partir de la triamina 2 mediante una reaccion de alquilacion con el ester terc.-butilico de

El compuesto 2 es accesible mediante reduccion de la amida 3 con un compuesto complejo de borano y tetrahidrofurano. En este caso se siguen las condiciones, como se han descrito por ejemplo en J. Amer. Chem. Soc., (1990), 9608.

15 La amida 3 s e pr epara a p artir de l a d iamina 4 pr otegida dos veces co n B oc, m ediante r eaccion co n acido trifluoroacetico y diclorometano.

La formacion de l a amida 4 se efectua en est e caso segun los metodos bien conocidos para un experto en l a 20 especialidad, por ejemplo, la activacion de un acido por

-

cloruro de oxalilo: J. 0rg. Chem., 29: 843 (1964)

-

cloruro de tionilo: Helv., 42: 1653 (1959)

-

carbodiimidas. Helv. 46: 1550 (1963)

-

carbodiimidas/hidroxisuccinimida: J. A m C hem. 86: 1839 ( 1964) asi co mo J. 0rg. C hem. 53: 3 583 ( 1988); 25 Synthesis 453 (1972)

-

el metodo del anhidrido: 2-etoxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina: J. Am. Chem. Soc. 90:1651 (1986); Int. J. Pept. Prot. Res., 26:493 (1985); Am. Soc. 73: 3547 (1951)

-

el metodo de la imidazolida: Am. Soc. 91:2691 (1969)

J.

Med. Chem. 1996, 392596; Tetrahedron Letters 1994, 35, 5.981; Bioorg. Med. Letters 1996, 6, 55; J. Chem. Soc. Commun. 1994, 201,

El alcohol 9 es el producto de una reaccion entre el (S)-2-amino-1-propanol (10) obtenible comercialmente y el dicarbonato de di-terc.-butilo �(Boc)20� en tetrahidrofurano.

15 El gruponitrocontenidoen elcompuesto1sirve,despues de sutransformacion en el grupo amino, directamente como sitio de fijacion para biomoleculas, por ejemplo a traves de una formacion de una amida con ayuda de esteres activados o a traves de una aminacion reductora con grupos carbonilo o despues de una transformacion en grupos que reaccionan selectivamente. Estas reacciones de transformacion son bien conocidas para un experto en la especialidad.

20 Asi, Gansow(documento de patente europea EP 484984) y Meares (documento de patente de losEE.UU. US 4622420) d escriben la preparacion de halogeno-acetamidas de compuestos formadores de complejos, q ue encuentran utilizacion para el acoplamiento con grupos -SH o -NH2.

El grupo isotiocianato hace posible un acoplamiento selectivo con grupos amino. Su preparacion y la reaccion con

25 aminas para dar l as correspondientes tioureas se h an descrito, por ejemplo, en e l docu mento d e pat ente U S 4680338 de Immunomedics. La reaccion con hidrazidas para dar las correspondientes tio-semicarbazidas se expone en el documento de solicitud de patente internacional W0 95/15335 de Neorx Corp. Las maleimidas hacen posible una reaccion selectiva con grupos -SH. Su preparacion y su reaccion se describen,

por ejemplo, en los documentos de patentes US 5273743 y EP 446071 de Hybritech o EP 345723 de Nihon Medi Physics.

La introduccion de los deseados iones metalicos de compuestos complejos para la preparacion de agentes de diagnostico por RMN (resonancia magnetica nuclear) se puede efectuar del modo que se ha divulgado en los documentos de patentes EP 71564, EP 130934 y en el documento de publicacion para informacion de solicitud de patente alemana DE-0S 34 01 052. Para ello, el oxido metalico o una sal metalica (por ejemplo, un cloruro, nitrato, acetato, carbonato o sulfato) del elemento deseado se disuelve o suspende en agua y/o en un alcohol inferior (tal como metanol, etanol o isopropanol), y se hace reaccionar con lasolucion o suspension de la cantidad equivalente del compuesto formador de complejos conforme al invento. La neutralizacion de grupos carboxi libres que estan eventualmente todavia presentes, se efectua con ayuda de bases inorganicas (p.ej. hidroxidos, carbonatos o bicarbonatos) de p.ej. sodio, potasio, litio, magnesio o calcio y/o de bases organicas, tales como, entre otras, aminas primarias, secundarias y terciarias, tales como p.ej. etanolamina, morfolina, glucamina, N-metil-y N,N-dimetil-glucamina, asi comode aminoacidos de caracter basico, tales como p.ej. lisina, arginina y ornitina o de amidas de aminoacidos originalmente neutros o de caracter acido.

Para la preparacion d e los compuestos complejos n eutros, por ej emplo a sales de compuestos complejos d e caracter acido en una solucion o suspension acuosa, se les puede afadir tanta cantidad de la base deseada, que se alcance el punto neutro. La solucion obtenida se puede concentrar seguidamente por evaporacion en vacio hasta sequedad. Frecuentemente, es ventajoso precipitar las sales neutras formadas mediante adicion de disolventes miscibles con agua, tales como p.ej. alcoholes inferiores (metanol, etanol, isopropanol y otros), cetonas inferiores (acetona y otras), eteres polares (tetrahidrofurano, dioxano, 1,2-dimetoxietano y otros), y obtener de esta manera unos materiales cristalizados que son faciles de aislar y bien purificables. Se ha acreditado como especialmente ventajoso afadir la base deseada, ya durante la formacion del compuesto complejo, a la mezcla de reaccion, y ahorrarse de esta manera una etapa del procedimiento. Si los compuestos formadores de complejos deben de e ncontrar utilizacion para la preparacion de agentes de radiodiagnostico o r adioterapeuticos, ent onces la pr eparacion de l os compuestos complejos a partir de l os compuestos formadores de complejos se puede efectuar segun los metodos descritos en "Radiotracers for Medical Applications" (Radiotrazadores para aplicaciones medicas), tomo I, CRC Press, Boca Raton, Florida (1983).

Puede ser deseable preparar el compuesto complejo tansolo poco antes de su utilizacion, en particular cuando el deba de ser empleado como un radiofarmaco. Por lo tanto, el invento abarca tambien un estuche para la produccion de radiofarmacos, que comprenden un compuesto de la formula VIIa o VIIb, en la que Z representa un radioisotropo. Son o bjeto del i nvento, ademas, unos agentes farmaceuticos, q ue contienen por l o m enos un co mpuesto fisiologicamente compatible de la formula general VIIa o VIIb, eventualmente con los aditivos usuales en la galenica.

La preparacion de los agentes farmaceuticos conformes al invento se efectua de un modo en si conocido, suspendiendo o disolviendo los compuestos complejos conformes al invento -eventualmente mediando adicion de los aditivos usuales en la galenica -en un medio acuoso, y a continuacion esterilizando eventualmente la suspension

o solucion. Unos aditivos adecuados son, por ejemplo, tampones fisiologicamente inocuos (tales como p.ej. trometamina), adiciones de compuestos formadores de complejos o compuestos complejos debiles (tales como p.ej. acido di etilentriaminapentaacetico o l os compuestos complejos con Ca correspondientes a los compuestos complejos con metales conformes al invento) o -en caso necesario � unos electrolitos tales como p.ej. cloruro de sodio o -en caso necesario -agentes antioxidantes tales como p.ej. acido ascorbico.

Si para la administracion por via enteral o para otras finalidades se desean unas suspensiones o soluciones de los agentes conformes al invento en agua o en una solucion salina fisiologica, ellas se mezclan con una o varias sustancia(s) coadyuvante(s) usuales en la galenica �p.ej. metil-celulosa, lactosa, manitol� y/o con uno o va rios agente(s) tensioactivo(s) �p.ej. lecitinas, Tween®, Myrj®� y/o con una(s) sustancia(s) armatizante(s) para la correccion del sabor �p.ej. aceites esenciales�.

En pr incipio, t ambien es posible pr eparar l os agentes farmaceuticos conformes al i nvento tambien sin ni ngun aislamiento de las sales de compuestos complejos. En cualquier caso se tiene que prestar un cuidado especial en llevar a cabo la formacion del quelato de tal manera que las sales y las soluciones de sales conformes al invento esten practicamente exentas de iones metalicos no convertidos en compuestos complejos, que tienen un efecto toxico.

Esto se puede garantizar, por ejemplo, con ayuda de indicadores colorimetricos tales como naranja de xilenol mediante valoraciones de control durante el proceso de preparacion.

El invento se refiere, por consiguiente, tambien a procedimientos para la preparacion de los compuestos complejos y de sus sales. Como ultima medida de seguridad queda una purificacion de la sal de compuesto complejo, que se ha aislado.

Los agentes farmaceuticos conformes al invento contienen de manera preferida desde 1 fmol hasta 1,3 mol/l de la sal del compuesto complejoy se afaden dosificadamente por regla general en unas cantidades de 0,5 pmol/kg

5 mmol/kg. Ellos estan destinados a la aplicacion por via enteral y parenteral. Los compuestos complejos conformes al invento pasan a usarse

1.

para el diagnostico por RMN en forma de sus compuestos complejos conlos iones paramagneticos delos elementos con los numeros atomicos 21-29, 42, 44 y 58-70. Unos iones adecuados son, por ejemplo, los iones de cromo(III), hierro(II), cobalto(II), niquel(II), cobre(II), praseodimio(III), neodimio(III), samario(III) e iterbio(III). A causa de sus fuertes momentos magneticos, son especialmente preferidos para el diagnostico por RMN los iones de gadolinio(III), terbio(III), disprosio(III), holmio(III), erbio(III), manganeso(II) y hierro(III).

2.

para el radiodiagnostico yla radioterapia enforma de sus compuestos complejos con radioisotopos de los elementos con los numeros atomicos 26, 27, 29, 31, 32, 37-39, 43, 46, 47, 49, 61, 62, 64, 67, 70, 71, 75, 77, 82 y 83.

Los agentes conformes al invento cumplen las multiples y variadas condiciones previas para la idoneidad como agentes de contraste para la tomografia de espin nuclear. Asi, ellos son sobresalientemente adecuados, despues de una aplicacion por via oral o parenteral, mediante aumento de la intensidad de la sefal, para mejorar en su poder expresivo a la imagen obtenida con ayuda del tomografo de espin nuclear. Ademas, ellos muestran la alta actividad, que es necesaria para cargar al cuerpo con unas cantidades lo mas pequefas que sean posibles de sustancias ajenas, y la buena compatibilidad, que es necesaria para mantener el caracter no invasivo de las investigaciones.

La buena solubilidad en agua y la pequefa osmolalidad de los agentes conformes al invento permite preparar unas soluciones altamente concentradas, para mantener la carga volumetrica de la circulacion dentro de unos limites soportables y para compensar la dilucion mediante el liquido corporal, es decir que los agentes de diagnostico por RMN tienen que ser de 100 a 1.000 veces mejor solubles en agua que para la espectroscopia por RMN. Ademas, los agentes conformes al invento no solo tienen una alta estabilidad in vitro, sino tambien una estabilidad in vivo sobresalientemente alta, de tal manera que una liberacion o un intercambio de los iones, que no estan unidos por enlaces covalentes en los complejos -que son en si toxicos -, dentro del periodo de tiempo en el que se segregan completamente otra vez los nuevos agentes de contraste, solo se efectua de un modo extremadamente lento.

Por lo general, los agentes conformes al invento son afadidos dosificadamente para el uso como agentes de diagnostico por RMN en unas cantidades de 0,0001-5 mmol/kg, de manera preferida de 0,005-0,5 mmol/kg. Los detalles del uso se discuten p.ej. en la cita de H.-J.- Weinmann y colaboradores, Am. J. of Roentgenology 142, 619 (1984).

Unas bajas dosificaciones (por debajo de 1 mg/kg de peso corporal) de los agentes de diagnostico por RMN especificos para ciertos organos, son empleables, por ejemplo, para la deteccion de tumores y de un infarto c ardiaco. U nas dosificaciones especialmente bajas de los compuestos co mplejos conformes al invento son adecuadas para el uso en la radioterapia y el radiodiagnostico. Asi, pasan a emplearse tanto para finalidades terapeuticas como tambien para finalidades de diagnostico unas dosificaciones de 0,5 pM/kg -5 �M/kg, de manera preferida de 50 pM/kg -500 nM/kg. Usualmente, en lo que respecta al ion de metal radiactivo se utilizan unas concentraciones molares aproximadamente 100 -100.000 veces mas pequefas que lo que se da el caso de los compuestos formadores de quelatos o respectivamente de los bioconjugados con compuestos formadores de quelatos, de tal manera que, por lo tanto, los compuestos formadores de quelatos o respectivamente los bioconjugados con compuestos formadores de quelatos se presentan en un exceso.

Ademas, los compuestos complejos conformes al invento se puedenutilizar ventajosamente como reactivos de susceptibilidad y como reactivos de desplazamiento (en ingles "shift" para la espectroscopia por RMN in vivo.

Los agentes conformes al invento son adecuados tambien como agentes de radiodiagnostico y radioterapeuticos a causa de sus ventajosas propiedades radiactivas y de la buena estabilidad de los compuestos complejos que estan contenidos en el los. D etalles acerca de s u uso y dosificacion se d escriben p. ej. e n " Radiotracers f or M edical Applications", CRC-Press, Boca Raton, Florida, 1983, asi como en las citas de Eur. J. Nucl. Med. 17 (1990) 346-364 y Chem. Rev. 93 (1993) 1137-1156.

Para la SPECT (acronimo de Single Photon Emission Computed Tomography = tomografia computarizada por emision de fotones individuales) se adecuan los compuestos complejos con los isotopos 111In y 99mTc.

0tro metodo de generacion de imagenes con radioisotopos es la tomografia por emision de positrones, que utiliza unos isotopos que emiten positrones, tales como p.ej. 43Sc, 44Sc, 52Fe, 55Co, 68Ga, 64Cu, 86Y y 94mTc (Heiss, W.D.; Phelps, M.E.; Positron Emission Tomography of Brain (Tomografia por emision de positrones del cerebro), editorial Springer Verlag Berlin, Heidelberg, Nueva York 1983).

Los compuestos conformes al i nvento so n adec uados sorprendentemente t ambien para l a di ferenciacion e ntre tumores malignos y benignos en zonas sin una barrera hematoencefalica.

Ellos se distinguen tambien por el hecho de que son eliminados completamente desde el cuerpo y, por consiguiente, son bien compatibles.

Puesto que las sustancias conformes al invento se enriquecen en tumores malignos (no hay ninguna difusion en tejidos sanos, pero una alta permeabilidad de los vasos tumorales), ellas pueden apoyar tambien a la radioterapia de tumores malignos. Esta se diferencia del correspondiente diagnostico solo por la cantidad yel tipo del isotopo utilizado. El objetivo es en este caso la destruccion de celulas tumorales por medio de una radiacionde onda corta rica en energia con un radio de alcance lo mas pequefo que sea posible. Para esto, se aprovechan unas interacciones de l os metales, que est an contenidos en l os compuestos complejos (tales como p .ej. hi erro o gadolinio) con radiaciones ionizantes (p.ej. rayos X) o con rayos de neutrones. Por medio de este efecto se aumenta significativamente la dosis local de radiacion en el lugar, en donde se encuentra el compuesto complejo metalico (p.ej. en tumores). Con el fin de producir la misma dosis de radiacion en el tejido maligno, en el caso del uso de tales compuestos complejos con metales se puede reducir considerablemente la carga por radiaciones para un tejido sano y, por consiguiente, se pueden reducir los efectos secundarios gravosos para los pacientes. Los conjugados de compuestos complejos con metales conformes al invento se adecuan por lo tanto tambien como una sustancia radiosensibilizante en el caso de la radioterapia de tumores malignos (p.ej. el aprovechamiento de efectos de M�ssbauer o en el caso de la terapia por captura de neutrones). Unos adecuados iones que emiten rayos son p.ej. 46Sc, 47Sc, 48Sc, 72Ga, 73Ga, 90Y, 67Cu, 109Pd, 111Ag,149Pm, 153Sm, 166Ho, 177Lu, 186Re y 188Re, prefiriendose 90Y,177Lu, 72Ga, 153Sm y 67Cu. Unos adecuados iones que emiten rayos a, que tienen pequefos periodos de tiempo de semidesintegracion son p.ej. 211At, 211Bi, 213Bi y 214Bi, prefiriendose el 212Bi. Un adecuado ion que emite fotones y electrones es el 158Gd, que se puede obtener a partir del 157Gd mediante captura de neutrones.

Si el agente conforme al invento esta destinado al uso en la variante de la radioterapia que ha sido propuesta por R.

L. Mills y colaboradores �Nature, tomo 336, (1988), pagina 787�, entonces el ion central tiene que derivarse de un isotopo de M��bauer tal como por ejemplo 57Fe o 151Eu.

En el caso de la aplicacion in vivo de los agentes terapeuticos conformes al invento, estos se pueden administrar en comun con un vehiculo adecuado, tal como p.ej. un suero o una solucion fisiologica de cloruro de sodio, y se pueden administrar en comun con otra proteina distinta tal como p.ej. la albumina de suero humano. La dosificacion depende en este caso del tipo de la perturbacion celular, del ion metalico usado y del tipo del metodo de generacion de imagenes.

Los agentes terapeuticos conformes al invento se aplican de manera preferida por via parenteral, de manera mas preferida por via intravenosa.

Detalles de los usos de agentes radioterapeuticos se discuten p.ej. en la cita de R. W. Kozak y colaboradores, TIBTEC, octubre de 1986, 262 (vease tambien Bioconjugate Chem. 12 (2001) 7-34).

En conjunto, se ha conseguido sintetizar nuevos/as compuestos formadores de complejos, compuestos complejos con m etales y sales de c ompuestos complejos con m etales, qu e of recen unas posibilidades mejoradas en l a medicina de diagnostico y terapeutica.

Los siguientes Ejemplos sirven para ilustrar mas detalladamente el objeto del invento:

Los Ejemplos 10, 12 - 15, 18, 19, 20, 21, 28 - 31 describen unos conjugados con anticuerpos. Los conjugados con otras biomoleculas se pueden preparar segun las siguientes prescripciones generales de trabajo:

En este caso "AAV" �acronimo de Allgemeine ArbeitsVorschrift) representa una prescripcion general de trabajo, "RP18" designa una fase estacionaria de cromatografia en fase inversa. El numero de los complejos por cada biomolecula se determino mediante escintigrafia o I CP (acronimo del ingles "inductively coupled plasma atomic emission spectroscopy" = espectroscopia de emision atomica por plasma acoplado inductivamente).

Prescripción general de trabajo (AAV) I: Conjugados de albúminas y amidas

3 mmol del acido se disuelven en 15 ml de DMF (dimetilformamida), mediando enfriamiento con hielo se mezclan con 380 mg (3,3 mmol) de N-hidroxi-succinimiday681mg de diciclohexilcarbodiimida y se activanpreviamente durante 1 hora en el hielo. La mezcla del ester activado se afade gota a gota en el transcurso de 30 minutos a una solucion de 16,75 g (0,25 mmol) de albumina de suero bovino (BSA) en 150 ml de un tampon de fosfato (de pH 7,4), y se agita durante 2 horas a la temperatura ambiente. La solucion de la tanda se filtra, el material filtrado se ultrafiltra a traves de un AMIC0N®YM30 (limite de exclusion 30.000 Da), el material retenido se cromatografia a traves de una columna con Sephadex® G50 y las fracciones de productos se liofilizan.

Prescripción general de trabajo (AAV) II: Conjugados de albúminas y maleimida

0,0438 mmol de la maleimida en 1 ml de DMF se afaden a 0,84 g (0,0125 mmol) de albumina de suero bovino (BSA), disueltos en 15 ml de un tampon de fosfato (de pH 7,4), y se agita durante una hora a la temperatura

ambiente. La solucion de la tanda se filtra, el material filtrado se ultrafiltra a traves de un AMIC0N® YM30 (limite de exclusion 30.000 Da), el material retenido se cromatografia a traves de una columna con Sephadex® G50 y las fracciones de productos se liofilizan.

Prescripción general de trabajo (AAV) III: Preparación de conjugados de amidas

3 mmol del acido se disuelven en 15 ml de DMF, mediando enfriamiento con hielo se mezclan con 380 mg (3,3 mmol) de N-hidroxi-succinimida y 681 mg de diciclohexilcarbodiimida y se activan previamente durante 1 hora en el hielo. La mezcla del ester activado se introduce gota a gota en una solucion de 2,5 mmol del componente aminico en 15-150 ml de DMF y se agita durante una noche a la temperatura ambiente. La solucion de la tanda se filtra y se cromatografia en presencia de gel de silice.

Prescripción general de trabajo (AAV) IV: Preparación de conjugados de maleimida y SH

3 mmol de la maleimida en 15 ml de DMF se afaden gota a gota a 2,5 mmol del componente de SH en 15-150 ml de DMF y se agita durante una hora a la temperatura ambiente. La solucion de la tanda se filtra, el material filtrado se ultrafiltra a traves de un AMIC0N® YM30(limite de exclusion 30.000Da), el material retenido se cromatografia a traves de una columna con Sephadex® G50 y las fracciones de productos se liofilizan.

Prescripción general de trabajo (AAV) V: Preparación de conjugados de una halógeno-acetamida y SH

3 mmol de la halogeno-acetamida en 15 ml de DMF se afaden gota a gota a 2,5 mmol del componente de SH en 15-150 ml de DMF y se agitan durante ocho horas a la temperatura ambiente. La solucion de la tanda se filtra, el material filtrado se ultrafiltra a traves de un AMIC0N® YM30 (limite de exclusion 30.000 Da), el material retenido se cromatografia a traves de una columna con Sephadex® G50 y las fracciones de productos se liofilizan.

Ejemplo 1

a) (S)-Éster terc.-butílico de ácido (2-hidroxi-1-metil-etil)-carbámico

10,50 g (140 mmol) de (S)-(+)-2-amino-1-propanol se disolvieron en 110 ml de THF y se enfriaron a 0°C. A esta solucion agitada se le afadio gota a gota una solucion de 30,2 g (139 mmol) de dicarbonato de di-terc.-butilo en 45 ml de THF. La mezcla de reaccion se agito durante 90 minutos a 25°Cy se concentro por evaporacion en un evaporador rotatorio. El residuo se recogio en 300 ml de dietil-eter ya continuacion se lavo con 90 ml de una solucion 0,01 M de HCl. La fase organica se seco mediante sulfato de sodio y se concentro por evaporacion en un evaporador rotatorio y en una bomba de aceite. El producto en bruto (20,4 g) se empleo sin mas purificacion para la siguiente reaccion.

b) (S)-Éster 2-terc.-butoxicarbonilamino-propílico de ácido metanosulfónico

20,3 g (116 mmol) del compuesto 1a se disolvieron en 125 ml de diclorometanoy se mezclaron con 17,7 g (175 mmol) de trietilamina. A 0°C se afadio gotaa gota a esto una solucion de 14,7 g (128 mmol) de cloruro de acido metanosulfonico en 30 ml de diclorometano. La solucion de reaccion se agito a 0°C durante 2 h y a continuacion se mezclo con 300 ml de agua. La fase organica se separo. La fase acuosa se extrajo dos veces con 150 ml de diclorometano. Las fases organicas reunidasse lavaron una vez con 150 ml de una solucion 0,1 M de HCl, dos veces en cada caso con 150 ml de una solucion al 5 � de hidrogenocarbonato de sodioyfinalmente con 50 ml de una solucion acuosa saturada de clorurode sodio. La fase organica se seco con sulfato de sodio. La solucion se concentro por evaporacion y se separo por cristalizacionen un armario frigorifico. Los cristales selavaron con hexano frio. Resultaron 25,4 g (100 mmol) del producto deseado. EM-FAB: 254 (M+ +1,13)

c) (S)-Éster terc.-butílico de ácido (2-azido-1-metil-etil)-carbámico

Una solucion de 20,3 g (100 mmol) del compuesto 1b en 155 ml de DMS0 se mezclaron con 7,8 g (120 mmol) de aziduro de sodio y se agitaron durante 24 h a 45°C. Se afadieron a esto 250 ml de una mezcla de agua y hielo. La mezcla se extrajo multiples veces con 200 ml de diclorometano. Las fases organicas reunidas se lavaron dos veces con 50 ml de una solucion acuosa saturada de cloruro de sodio. La fase organica se concentro por evaporacion. Se obtuvieron 11,4 g del producto en bruto. El producto en bruto se empleo sin mas purificacion para la siguiente reaccion. EM-FAB: 201 (M+ +1,23)

d) (S)-Éster terc.-butílico de ácido (2-amino-1-metil-etil)-carbámico

Una solucion agitada de 11,4 g (57 mmol) del compuesto 1c en 165 ml del ester etilico de acido acetico se mezclaron con 1,8 g de Pd/C (al 10 �) y se sometieron durante 15 h a una atmosfera de hidrogeno de 4 bares. El catalizador se separo por filtracion (a traves de una denominada frita G4). El material filtrado se concentro por

evaporacion en un evaporador rotatorio y se purifico mediante cromatografia en columna (en presencia de Si02 � con diclorometano • diclorometano : metanol 1:1). Se obtuvo el producto deseado con un rendimiento de 73 � (7,25 g; 42 mmol). EM-FAB: 175 (M+ +1,29)

e) (S,S)-{Éster terc.-butílico de ácido 2-[2-terc.-butoxicarbonilamino-3-(4-nitro-fenil)-propionilamino]1-metil-etil}-carbámico

Una solucion agitada de 7,2 g (41 mmol) del compuesto 1d, 245 ml de agua y 245 ml de diclorometano se mezclaron con 12,9 g (42 mmol) de(S)-acido2-terc.-butoxicarbonilamino-3-(4-nitro-fenil)-propionico obtenible comercialmente (de Bachem) y 6,4 g (42 mmol) de 1-hidroxibenzotriazol -H20 (H0BT). La solucion se enfrio a 0°C y se mezclo con 8,8 g (46 mmol) de 1-(dimetil-aminopropil)-3-etil-carbodiimida (EDCI). La solucion de reaccion se agito durante siete horas a 0°C, durante 12 horas a la temperatura ambientey durante24 horas a 60°C. La solucion se enfrio a la temperatura ambiente. La fase acuosa se separo y se extrajo multiples veces con diclorometano. Las fases organicas reunidas se lavaron con una solucion al 5 � de hidrogenocarbonato de sodio y con una solucion acuosa saturada de cloruro de sodio. Se seco mediante sulfato de sodio y se concentro por evaporacion en un evaporador rotatorio. El residuo se mezclo con hexano, se trituro, se filtro con succion y se lavo posteriormente con hexano frio. El material solido se seco en vacio a 30°C. Se obtuvo el producto 1e deseado con un rendimiento de 77 � (14,9 g; 32 mmol). EM-FAB: 467 (M+ +1,38)

f) (S,S)-N-(2-amino-propil)-3-(4-nitro-fenil)-propano-1,2-diamina

14,9 g (32 mmol) del compuesto 1e se suspendieron en 180 ml de diclorometano. A continuacion, se afadieron gota a gota a esto 54,2 g (475 mmol) de acido trifluoroacetico. La solucion se agito durante una hora y se concentro por evaporacion en un evaporador rotatorio. Se afadio a esto diclorometano y se concentro otra vez por evaporacion. Se afadio a esto dietil-eter. El material solido que habia precipitado, se separo y se lavo con dietil-eter frio. El material solido se seco en vacio a 35°C.A una solucion agitada de este material solido (17,7 g) en 225 ml de THF absoluto se leafadieron gota a gota 225 ml (1 M) de un compuesto complejo de boranoy tetrahidrofurano. La solucion de reaccion se calento durante 6 h bajo reflujo y a continuacion se agito durante una noche a la temperatura ambiente. Se afadieron con precaucion 60 ml de metanol y se agito durante otras 2 h. La solucion se concentro por evaporacion en un evaporador rotatorio y se mezclo con 150 ml de etanol. Se introdujo HCl gaseoso, de tal manera que precipito un material solido. Se concentro por evaporacion y se mezclo con dietil-eter seco. El material solido se separo, se lavo con dietil-eter y se seco en vacio a 40°C. Se obtuvieron 9,61 g (�26,6 mmol) del producto 1f deseado en forma del trihidrocloruro. EM-FAB: 253 (M+ +1,28)

g) (S,S)-Éster terc.-butílico de ácido {[2{[2-(bis-terc.-butoxicarbonilmetil-amino)-propil]terc.-butoxicarbonilmetil-amino}-1-(4-nitro-bencil)-etil]-terc.-butoxicarbonilmetil-amino-acético

A una solucion agitada de 9,6 g (27 mmol) del compuesto 1f en 290 ml de acetonitrilo y60 ml de agua se le afadieron gota a gota 43,8 g (317 mmol) de carbonato de potasio y 39 g (200 mmol) del ester terc.-butilico de acido bromoacetico. La solucion se calento durante � 7 h a 70 °C. Se afadieron otros 13,1 g (94 mmol) de carbonato de potasio y 8,8 ml (60 mmol) del ester terc.-butilico de acido bromoacetico. La solucion se agito durante � 7 h a 70°C. La solucion de reaccion se concentro por evaporacion en un evaporador rotatorio, se lavo con agua y se extrajo tres veces con acetato de etilo. Las fases organicas reunidas se lavaron con una solucion acuosa saturada de cloruro de sodio, se secaron mediante su lfato de s odio y se co ncentraron por eva poracion. E l r esiduo s e pur ifico por cromatografia en columna (en presencia de Si02 -diclorometano • diclorometano : metanol 98:2).Se obtuvo el producto 1g deseado con un rendimiento de 54 � (23,2 g; 42 mmol). EM-FAB: 824 (M+ +1,58)

h) (S,S)-�?cido {[2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-1-(4-nitro-bencil)-etil]carboximetil-amino}-acético

A una solucion agitada de 14,8 g (130 mmol) de acido trifluoroacetico, 25,5 g (300 mmol) de diclorometano y 2,9 g (25 mmol) de trietilsilano se le afadieron 1,65 g (2 mmol) del compuesto 1g. La mezcla de reaccion se agito durante 1 h y se concentro por evaporacion en un evaporador rotatorio y en una bomba de aceite. El residuo se mezclo con dietil-eter. El material solido se separo por filtracion y se lavo con dietil-eter. Se obtuvo el producto 1h deseado con un rendimiento de 99 � (1,0 g; 1,99 mmol). EM-FAB: 543 (M+ +1,59)

Ejemplo 2

(S,S)-Éster terc.-butílico de ácido {[2-(4-amino-fenil)-1-({[2-(bis-terc.-butoxicarbonilmetil-amino)-propil]terc.-butoxicarbonilmetil-amino}-metil)-etil]-terc.-butoxicarbonilmetil-amino}-acético

A una solucion de 0,5 g (0,6 mmol) del compuesto 1g en 10 ml de isopropanol sele afadieron 0,2 g de Pd/C (al 10 �). La atmosfera sobre la solucion de reaccion fue provista de hidrogeno. La solucion se agito durante 5 h, se filtro y se concentro por evaporacion. Se obtuvo el producto 2 deseado con un rendimiento de 81 � (397 mg; 0,5 mmol). EM-FAB: 795 (M+ +1,63)

Ejemplo 3

(S,S)-�?cido [(1-(4-amino-bencil)-2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-etil)-carboximetilamino]-acético

Metodo A: A una solucion de 0,5 g (0,9 mmol) del compuesto 1h en 10 ml de isopropanol se le afadieron 0,2 g de Pd/C (al 10 �). La atmosfera sobre la solucion de reaccion fue provista de hidrogeno. La solucion se agito durante 5 h, se filtro y se concentro por evaporacion. Se obtuvo el producto 3 deseado con un rendimiento de 87 � (410 mg; 0,78 mmol). EM-FAB: 513 (M+ +1,43)

Metodo B: A una solucion agitada de 3,64 g (32 mmol) de acido trifluoroacetico, 6,38 g (75 mmol) de diclorometano y 0,7 g (6 mmol) de trietilsilano se le afadieron 397 mg (0,5 mmol) del compuesto 2. La solucion de reaccion se agito durante 1 h yse concentro por evaporacionen un evaporadorrotatorio y enuna bomba de aceite. El residuo se mezclo con dietil-eter. El material solido se separo por filtracion y se lavo con dietil-eter. Se obtuvo el producto 3 deseado con un rendimiento de 99 � (253 mg; 0,5 mmol). EM-FAB: 513 (M+ +1,48)

Ejemplo 4

(S,S)-�?cido [(2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-1-{4-[3-(2,5-dioxo2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-bencil}-etil)-carboximetil-amino]-acético

A una solucion agitada de 1,02 g (2 mmol) del compuesto 3 y 774 mg (6 mmol) de diisopropiletilamina en 20 ml de DMF se le afadieron a 0°C 800 mg (3 mmol) del ester 2,5-dioxo-pirrolidin-1-ilico de acido 3-(2,5-dioxo-2,5-dihidropirrol-1-il)-propionico (de Aldrich). La solucion de reaccion se agito durante 4 horas a la temperatura ambiente. La solucion se afadio gota a gota a 120 ml de dietil-eteragitado energicamente. La suspension se agito durante 30 minutos y se filtro. El residuo se seco en una bomba de aceite. Una parte del residuo se purifico mediante una RP-HPLC (cromatografia de fase liquida de alto rendimiento en fase inversa) semipreparativa. EM-FAB: 664 (M+ +1,24)

Ejemplo 5(S,S)-�?cido [(1-(4-isotiocianato-bencil)-2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-etil)carboximetil-amino]-acético

A un sistema de dos fases agitado energicamente a base de 0,51 g (1 mmol) del compuesto 3, 3 ml de agua, 605 mg (6 mmol) de trietilamina y 3 ml de cloroformo se le afadieron gota a gota a 0°C 114 mg (1 mmol) de tiofosgeno en un poco de cloroformo. La solucion se agito durante 3 horas. La fase organica se separo. La fase organica se extrajo dos veces con agua. Las fases acuosas reunidas se lavaron con diclorometano, se diluyeron con agua y se liofilizaron. La sustancia se ensayo en cuanto a la pureza mediante una HPLC: HyPurity C18 (5 �m, 150 x 3,0 mm) con un gradiente de acetonitrilo : agua : acido trifluoroacetico (3 : 96,9 : 0,1 • 99,9 : 0 : 0,1). Se obtuvo el producto 5 deseado con un rendimiento de 91 � (505 mg, 910 mmol). EM-FAB: 555 (M+ +1,39)

Ejemplo 6

(S,S)-�?cido ({2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-1-[4-(2-bromo-acetilamino)-bencil]etil}-carboximetil-amino]-acético

A una solucion de 0,51 g (1 mmol) del compuesto 3 y 606 mg (6 mmol) de trietilamina en 10 ml de DMF se le afadieron a -20°C 202 mg (1,1 mmol) de bromuro de acido bromoacetico. La solucion de reaccion se agito durante una h ora a l a t emperatura ambiente. La solucion se v ertio en di etil-eter agi tado e nergicamente. E l m aterial precipitado se separo por filtracion, se recogio en agua y se liofilizo inmediatamente. La sustancia se ensayo en cuanto a la pureza mediante una HPLC: HyPurity C18 (5 �m, 150 x 3,0 mm) con un gradiente de acetonitrilo : agua : acido trifluoroacetico (3 : 96,9 : 0,1 • 99,9 : 0 : 0,1). Se obtuvo el producto 6 deseado con un rendimiento de 82 � (520 mg, 820 �mol). EM-FAB: 634 (M+ +1,46)

Ejemplo 7

(S,S)-�?cido ({2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-1-[4-(2-yodo-acetilamino)-bencil]-etil} carboximetil-amino)-acético

A una solucion de 0,51 g (1 mmol) del compuesto 3 y 606 mg (6 mmol) de trietilamina en 10 ml de DMF se le afadieron a -20°C 274 mg (1,1 mmol) de bromuro de acido yodoacetico. La solucion de reaccion se agito durante una hora a la temperatura ambiente. La solucion se vertio en un dietil-eter agitado energicamente. El material precipitado se separo por filtracion, se recogio en agua y se liofilizo inmediatamente. La sustancia se ensayo en cuanto a la pureza mediante una HPLC: HyPurity C18 (5 �m, 150 x 3,0 mm) con un gradiente de acetonitrilo : agua : acido trifluoroacetico (3 : 96,9 : 0,1 • 99,9 : 0 : 0,1). Se obtuvo el producto 7 deseado con un rendimiento de 88 � (600 mg, 880 �mol). EM-FAB: 681 (M+ +1,32)

Ejemplo 8

(S,S)-�?cido ({2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-1-[4-(2-yodo-acetilamino)-bencil]etil}-carboximetil-amino)-acético

A una solucion de 0,51 g (1 mmol) del compuesto 3 y 606 mg (6 mmol) de trietilamina en 10 ml de DMF se le afadieron a -20°C 125 mg (1,1 mmol) de cloruro de acido cloroacetico. La solucion de reaccion se agito durante una hora a la temperatura ambiente. La solucion se vertio en dietil-eter agitado energicamente. El material precipitado se separo por filtracion, se recogio en agua y se liofilizo inmediatamente. La sustancia se ensayo en cuanto a la pureza mediante una HPLC: H yPurity C 18 ( 5 � m, 150 x 3, 0 m m) co n un gr adiente d e ace tonitrilo : agua : aci do trifluoroacetico (3 : 96,9 : 0,1 • 99,9 : 0 : 0,1). Se obtuvo el producto 8 deseado con un rendimiento de 82 � (520 mg, 820 �mol). EM-FAB: 590 (M+ +1,31)

Ejemplo 9

(S,S)-�?cido ({2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-1-[4-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)- bencil]-etil}-carboximetil-amino)-acético

Apoyandose en la cita de Tetrahedron Lett.; 38; 46; 1997; 8089-8092: Una mezcla de aproximadamente 1 g de gel de silice secado, 100 mg (1,0 mmol) de anhidrido de acido maleico, 512 mg (1,0 mmol) del compuesto 3 y35,6 mg(0,1 mmol) de cloruro de tantalo(V) secalentaron en un horno de microondas (300 W) durante 5 min. El residuo se eluyo a traves de una frita con metanol. El material filtrado se concentro por evaporacion. El residuo se recogio en agua. La solucion se liofilizo. Una parte del residuo se purifico mediante una RP-HPLC semipreparativa con una mezcla de acetonitrilo y agua (20:80). La sustancia se ensayo en cuanto a la pureza mediante una HPLC: HyPurity C18 (5 �m, 150 x 3,0 mm) con un gradiente de acetonitrilo : agua : acido trifluoroacetico (3 : 96,9 : 0,1 • 99,9 : 0 : 0,1). Se obtuvo el producto 9 deseado con 94 mg (0,16 mmol) en una pureza de 96 � EM-FAB: 593 (M+ +1,42)

Ejemplo 10

Conjugado con un anticuerpo del producto del Ejemplo 4, a saber el (S,S)-ácido [(2-{[2-(bis-carboximetilamino)-propil]-carboximetil-amino}-1-{4-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-bencil}-etil)carboximetil-amino]-acético

200 �g de un anticuerpo con grupos tiol libremente accesibles (p.ej. HuM195 (comparese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview CA, EE.UU.) - si el anticuerpo no posee grupos tiol libremente accesibles, estos pueden ser producidosmediante la utilizacion de 2-iminotiolano HCl (vease p.ej. el documento EP 0 607 222 B1)) se diluyeron en 1,2 ml de un tampon de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 159 �g (240 nmol) del producto del Ejemplo 4, disueltos en 50 �l de un tampon de borato (vease mas arriba), y se agitaron durante 3 horas a 37°C. Se purifico a traves de una columna NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase movil: PBS).

Ejemplo 11

(S,S)-�?cido {[(2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-1-(4-{3-[2-(2,5-dioxo-2,5-dihidropirrol-1-il)-etil]-tioureido}-bencil)-etil]-carboximetil-amino}-acético

A una solucion agitada de 555 mg (1 mmol) del compuesto 5 en 5 ml de DMF se le afadio gota a gota una solucion de 154 mg (1,1 mmol) de 1-(2-amino-etil)-pirrol-2,5-diona en 2 ml de dioxano. La solucion de reaccion se agito durante una noche y se afadio gota a gota a 80 ml de dietil-eter agitado energicamente. El material precipitado se

separo por filtracion y se recogio en agua. La solucion se liofilizo. Una parte del residuo se purifico mediante una RP-HPLC semipreparativa con una mezcla de acetonitrilo y agua (20:80). La sustancia se ensayo en cuanto a la pureza mediante una HPLC: HyPurity C 18 ( 5 � m, 150 x 3, 0 m m) co n un gr adiente d e ace tonitrilo : agua : aci do trifluoroacetico (3 : 96,9 : 0,1 • 99,9 : 0 : 0,1). Se obtuvo el producto 11 deseado con 0,104 g (0,15 mmol) en una alta pureza. EM-FAB: 696 (M+ +1,33)

Ejemplo 12

Compuesto complejo con indio del conjugado con un anticuerpo del producto del Ejemplo 4, a saber el (S,S)-ácido [(2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-1-{4-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1- il)-propionilamino]-bencil}-etil)-carboximetil-amino]-acético

200 �g de un anticuerpo con grupos tiol libremente accesibles (p.ej. HuM195 (comparese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview CA, EE.UU.) - si el anticuerpo no posee grupos tiol libremente accesibles, estos pueden ser producidosmediante la utilizacion de 2-iminotiolano HCl (vease p.ej. el documento EP 0 607 222 B1)) se diluyeron en 1,2 ml de un tampon de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 159 �g (240 nmol) del producto del Ejemplo 11, disueltos en 50 �l de un tampon de borato (vease mas arriba), y se agitaron durante 3 horas a 37°C. La solucion tamponadora de borato se intercambiopor un tampon de acetato,dializando la solucion de muestra tres veces durante 1 h en el Slide-A-Lyzer 10000, Pierce,MWC0 (procedimiento de dialisis) en cada caso frente a 200 ml de un tampon de Na0Ac 0,1 M (de pH 6,0). Finalmente se dializo durante una noche frente a 400 ml de un tampon de Na0Ac 0,1 M (de pH 6,0). La solucion se mezclo con 80 �l (0,05 M en HCl) de �111In�InCl3 (27,88 MBq) y se agito durante 30 min a la temperatura ambiente. Se purifico sobre una columna NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G25, fase movil: PBS).

Ejemplo 13

Compuesto complejo con itrio del conjugado con un anticuerpo del (1'R,2R,5S)-ácido 5-({[2-({1-carboxi5-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentil}-carboximetil-amino]-etil]-carboximetil-amino}metil)-1-carboximetil-pirrolidina-2-carboxílico

200 �g de un anticuerpo con grupos tiol libremente accesibles (p.ej. HuM195 (comparese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview CA, EE.UU.) - si el anticuerpo no posee grupos tiol libremente accesibles, estos pueden ser producidosmediante la utilizacion de 2-iminotiolano HCl (vease p.ej. el documento EP 0 607 222 B1)) se diluyeron en 1,2 ml de un tampon de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 159 �g (240 nmol) del producto del Ejemplo 11, disueltos en 50 �l de un tampon de borato (vease mas arriba), y se agitaron durante 3 horas a 37°C. La solucion tamponadora de borato se intercambio por un tampon de acetato dializando la solucion de muestra tres veces durante 1 h en el SlideA-Lyzer 10000, Pierce, MWC0 (procedimiento de dialisis) en cada caso frente a 200 ml de un tampon de Na0Ac 0,1 M (de pH 6,0). Finalmente, se dializo durante una noche frente a 400 ml de un tampon de Na0Ac 0,1 M (de pH 6). La solucion se mezclo con 50 MBq de � 90Y�YCl3 y se agito durante 30 min a la temperatura ambiente. Se purifico sobre una columna NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase movil: PBS).

Ejemplo 14

Compuesto complejo con escandio del conjugado con un anticuerpo del (1'R,2R,5S)-ácido 5-({[2-({1-carboxi5-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentil}-carboximetil-amino]-etil]-carboximetil-amino}metil)-1-carboximetil-pirrolidina-2-carboxílico

200 �g de un anticuerpo con grupos tiol libremente accesibles (p.ej. HuM195 (comparese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview CA, EE.UU.) - si el anticuerpo no posee grupos tiol libremente accesibles, estos pueden ser producidosmediante la utilizacion de 2-iminotiolano HCl (vease p.ej. el documento EP 0 607 222 B1)) se diluyeron en 1,2 ml de un tampon de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 159 �g (240 nmol) del producto del Ejemplo 11, disueltos en 50 �l de un tampon de borato (vease mas arriba), y se agitaron durante 3 horas a 37°C. La solucion tamponadora de borato se intercambio por un tampon de acetato dializando la solucion de muestra tres veces durante 1 h en el SlideA-Lyzer 10000, Pierce, MWC0 (procedimiento de dialisis) en cada caso frente a 200 ml de un tampon de Na0Ac 0,1 M (de pH 6,0). Finalmente se dializo durante una noche frente a 400 ml de un tampon de Na0Ac 0,1 M (de pH 6). La solucion se mezclo con 50 MBq de �47Sc�ScCl3 y se agito durante 30 min a la temperatura ambiente. Se purifico sobre una columna NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase movil: PBS).

Ejemplo 15

Compuesto complejo con lutecio del conjugado con un anticuerpo del (1'R,2R,5S)-ácido 5-({[2-({1-carboxi5-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentil}-carboximetil-amino)-etil]-carboximetil-amino}metil)-1-carboximetil-pirrolidina-2-carboxílico

200 �g de un anticuerpo con grupos tiol libremente accesibles (p.ej. HuM195 (comparese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview CA, EE.UU.) - si el anticuerpo no posee grupos tiol libremente accesibles, estos pueden ser producidosmediante la utilizacion de 2-iminotiolano HCl (vease p.ej. el documento EP 0 607 222 B1)) se diluyeron en 1,2 ml de un tampon de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 159 �g (240 nmol) del producto del Ejemplo 11, disueltos en 50 �l de un tampon de borato (vease mas arriba), y se agitaron durante 3 horas a 37°C. La solucion tamponadora de borato se intercambio por un tampon de acetato dializando la solucion de muestra tres veces durante 1 h en el SlideA-Lyzer 10000, Pierce, MWC0 (procedimiento de dialisis) en cada caso frente a 200 ml de un tampon de Na0Ac 0,1 M (de pH 6,0). Finalmente se dializo durante una noche frente a 400 ml de un tampon de Na0Ac 0,1 M (de pH 6). La solucion se mezclo con 50 MBq de � 177Lu�LuCl3y se agito durante 30 min a la temperatura ambiente. Se purifico sobre una columna NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase movil: PBS).

Ejemplo 16

a) (S)-Éster bencílico de ácido 6-benciloxicarbonilamino-2-(2-terc.-butoxicarbonilamino-acetilamino)hexanoico

A una solucion agitada de 2,15 g (12,28 mmol) de Boc-Gly-0H y 4,08 ml (29,5 mmol) de trietilamina en 50 ml de diclorometano se le afadieron 1,55 g (13,5 mmol) de N-hidroxi-succinimida. Despues de 20 min se afadieron 5 g (12,3 mmol) del hidrocloruro de H-Lys-(Z)-0Bzl, que se disolvio en un poco de diclorometano, y 2,78 g (13,5 mmol) de diciclohexilcarbodiimida en un poco de diclorometano. La solucion se agito durante tres dias y se vertio en 250 ml de un a m ezcla de a gua y hielo. La f ase or ganica se separo. La f ase acu osa se ex trajo m ultiples veces con diclorometano. Las fases organicas reunidasse lavaron con una solucion acuosa saturada de cloruro de sodio, se secaron mediante sulfato de sodio y se concentraron por evaporacion. El residuo se purifico por cromatografia en columna (en presencia de Si02 hexano: acetato de etilo 4:1 • hexano: acetato de etilo 1:1). Se obtuvo el producto 16a deseado con un rendimiento de 96 � (6,2 g; 11,7 mmol). EM-FAB: 528 (M+ +1,75)

b) (S)-Éster bencílico de ácido 6-benciloxicarbonilamino-2-(2-{2-[2-(2-terc.-butoxicarbonilamino-acetilamino)acetilamino]-acetilamino}-acetilamino)-hexanoico

A una solucion de 6,2 g (11,7 mmol) del compuesto 16a en 30 ml de diclorometano se le afadieron gota a gota a 0°C 30 ml de acido trifluoroacetico. La solucion se agito durante 2 horas a la temperatura ambiente y se concentro por evaporacion en un evaporador rotatorio. Se afadieron 50 ml de agua y 50 ml de tolueno y se concentro otra vez por eva poracion en un ev aporador rotatorio. La u ltima et apa d e t rabajo se r epitio t res veces. F inalmente se concentro por evaporacion en una bomba de aceite. Una s olucion agitada del r esiduo en 90 ml de diclorometano s e m ezclo a 0 °C con 2, 37 g ( 18,3 m mol) de diisopropiletildiamina, 3,02 g (14,7 mmol) de diciclohexilcarbodiimida, disueltos en un poco de diclorometano, 1,69 g (14,7 mmol) de N-hidroxi-succinimida y 3,4 g (14,7 mmol) de Boc-Gly-Gly-0H. La suspension se agito durante tres dias a la temperatura ambiente y se mezclo con 150 ml de una mezcla de agua y hielo. La fase organica se separo. La fase acuosa se extrajo multiples veces con acetato de etilo. Las fases organicasreunidas se lavaron con una solucion acuosa saturada de cloruro de sodio, se seco sobre sulfato de sodio y se concentro por evaporacion. El residuo se purifico por cromatografia en columna (en presencia de Si02 acetato de etilo • metanol : acetato de etilo 15:85). Se obtuvo el producto 16b deseado con un rendimiento de 53 � (4,18 g; 6,5 mmol). EM-FAB: 643 (M+ +1,56)

c) (S)-�?cido 2-{2-[2-(2-terc.-butoxicarbonilamino-acetilamino)-acetilamino]-acetilamino}-6-[3-(2,5-dioxo2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-hexanoico

A una solucion de 4,18 g (6,5 mmol) del compuesto 16b en 40 ml de isopropanol se le afadio 1 g de Pd/C (al 10 �). La atmosfera sobre la solucion agitada se saturo con hidrogeno. La solucion de reaccion se agito durante 90 min, se filtro y se concentro por evaporacion. El residuo se mezclo a 0°C con 20 ml de DMF, 1,5 g (12 mmol) de diisopropiletilamina y 2,4 mg (9 mmol) del ester 2,5-dioxo-pirrolidin-1-ilico de acido 3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionico (de Aldrich). La solucion de reaccion se agito durante 4 horas a latemperatura ambiente. La solucion se afadio a una solucion de HCl (de pH 4) y se extrajo multiples veces con acetato de etilo. Las fases organicas reunidas se lavaron con una solucion acuosa saturada de cloruro de sodio, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron por evaporacion. El residuo se purifico por cromatografia en columna (en presencia de Si02 acetato de etilo • metanol : acetato de etilo 20:80). Se obtuvo el producto 16c deseado con un rendimiento de 67 � (2,5 g; 4,4 mmol). EM-FAB: 570 (M+ +1,31)

d) (1S,1'S,4S)-1-[4-{3-[({[({1-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentilcarbamoíl}metil)-carbamoíl]-metil}carbamoíl)-metil]-tioureido}]-bencil-4-metil-DTPA

A una solucion agitada de 570 mg (1 mmol) del compuesto 16c en 5 ml de diclorometano se le afadieron gota a gota a 0°C 5 ml de acido trifluoroacetico. La solucion se agito durante 2 h a latemperatura ambiente y se concentro por evaporacion en un ev aporador rotatorio. E l r esiduo se ex trajo co n di etil-eter. F inalmente se c oncentro po r evaporacion en una bomba de aceite. El residuo se recogio en DMF y se mezclo con � 200 mg (� 2 mmol) de trietilaminay 505 mg (0,9 mmol) del compuesto 5. La solucion se agito durante 3 horas a 40°C y se afadio gota a gota a dietil-eter agi tado energicamente. El material precipitado se separo por filtracion y se purifico por cromatografia en columna en RP (fase inversa). EM-FAB: 1016 (M+ +1,31)

Ejemplo 17

Compuesto complejo con gadolinio del (S,S)-ácido [(1-(4-amino-bencil)-2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]carboximetil-amino}-etil)-carboximetil-amino]-acético

128,1 mg (0,25 mmol) del compuesto 3 se suspendieron en 4 m l de agua destilada, se calentarona 80°Cy se disolvieron. Se mezclo en porciones con 45,3 mg (0,125 mmol) de Gd203. La suspension se calento a 80°C y se agito durante una hora. La solucion se enfrio a la temperatura ambiente y se ajusto con una lejia de sosa (1M) a un pH = 7. Se elimino el agua mediante liofilizacion. Se obtuvo el producto deseado con 166,6 mg (0,25 mmol, 99,8 �). EM-FAB: (M+ +1,21): 668

Ejemplo 18

Conjugado con un anticuerpo de (1S,1'S,4S)-1-[4-{3-[({[({1-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)propionilamino]-pentilcarbamoíl}-metil)carbamoíl]-metil}-carbamoíl)-metil]-tioureido}]-bencil-4-metil-DTPA

200 �g de un anticuerpo con grupos tiol libremente accesibles (p.ej. HuM195 (comparese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview CA, EE.UU.) - si el ant icuerpo no posee gr upos tiol l ibremente acce sibles, ent onces estos pueden s er pr oducidos mediante la utilizacion de 2-iminotiolano HCl (vease p.ej. el documento EP 0 607 222 B1)) se diluyeron en 1,2 ml de un tampon de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 243 �g (240 nmol) del producto del Ejemplo 16d, disueltos en 50 �l de un tampon de borato (vease mas arriba), y se agitaron durante 3 horas a 37°C. Se purifico a traves de una columna NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase movil: PBS).

Ejemplo 19

Compuesto complejo con itrio del conjugado con un anticuerpo de (1S,1'S,4S)-1-[4-{3-[({[({1-carboxi5-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentilcarbamoíl}-metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoíl)metil]-tioureido}]-bencil-4-metil-DTPA

200 �g de un anticuerpo con grupos tiol libremente accesibles (p.ej. HuM195 (comparese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview CA, EE.UU.) - si el ant icuerpo no posee gr upos tiol l ibremente acce sibles, ent onces estos pueden s er pr oducidos mediante la utilizacion de 2-iminotiolano HCl (vease p.ej. el documento EP 0 607 222 B1)) se diluyeron en 1,2 ml de un tampon de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 243 �g (240 nmol) del producto del Ejemplo 16d, disueltos en 50 �l de un tampon de borato (vease mas arriba), yse agitaron durante 3 horas a 37°C. La solucion tamponadora de borato se intercambio por un tampon de acetato dializando la solucion de muestra tres veces durante 1 h en el Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWC0 (procedimiento de dialisis) en cada caso frente a 200 ml de un tampon de Na0Ac 0,1 M (de pH 6,0). Finalmente se dializo durante una noche frente a 400 ml de un tampon de Na0Ac 0,1 M (de pH 6). La solucion se mezclo con 50 MBq de �90Y�YCl3 y se agito durante 30 min a la temperatura ambiente. Se purifico sobre una columna NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase movil: PBS).

Ejemplo 20

Compuesto complejo con escandio del conjugado con un anticuerpo de (1S,1'S,4S)-1-[4-{3-[({[({1-carboxi5-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentilcarbamoíl}-metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoíl)metil]-tioureido}]-bencil-4-metil-DTPA

200 �g de un anticuerpo con grupos tiol libremente accesibles (p.ej. HuM195 (comparese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview CA, EE.UU.) - si el ant icuerpo no posee gr upos tiol l ibremente acce sibles, ent onces estos pueden s er pr oducidos

mediante la utilizacion de 2-iminotiolano HCl (vease p.ej. el documento EP 0 607 222 B1)) se diluyeron en 1,2 ml de un tampon de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 243 �g (240 nmol) del producto del Ejemplo 16d, disueltos en 50 �l de un tampon de borato (vease mas arriba), yse agitaron durante 3 horas a 37°C. La solucion tamponadora de borato se intercambio por un tampon de acetato dializando la solucion de muestra tres veces durante 1 h en el Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWC0 (procedimiento de dialisis) en cada caso frente a 200 ml de un tampon de Na0Ac 0,1 M (de pH 6,0). Finalmente se dializo durante una noche frente a 400 ml de un tampon de Na0Ac 0,1M (de pH 6,0).La solucion semezclo con 50 MBq de �47Sc�ScCl3y se agito durante 30minala temperatura ambiente. Se purifico sobre una columna NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G25, fase movil: PBS).

Ejemplo 21

Complejo con lutecio del conjugado con un anticuerpo de (1S,1'S,4S)-1-[4-{3-[{{[({1-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentilcarbamoíl}-metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoíl)-metil]-tioureido}]bencil-4-metil-DTPA

200 �g de un anticuerpo con grupos tiol libremente accesibles (p.ej. HuM195 (comparese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview CA, EE.UU.) - si el ant icuerpo no posee gr upos tiol l ibremente acc esibles, ent onces estos pueden s er pr oducidos mediante la utilizacion de 2-iminotiolano HCl (vease p.ej. el documento EP 0 607 222 B1)) se diluyeron en 1,2 ml de un tampon de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 243 �g (240 nmol) del producto del Ejemplo 16d, disueltos en 50 �l de un tampon de borato (vease mas arriba), yse agitaron durante 3 horas a 37°C. La solucion tamponadora de borato se intercambio por un tampon de acetato dializando tres veces la solucion de m uestra durante 1 h en el Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWC0 (procedimiento de dialisis) en cada caso frente a 200 ml de un tampon de Na0Ac 0,1 M (de pH 6,0). Finalmente se dializo durante una noche frente a 400 ml de un tampon de Na0Ac 0,1 M (de pH 6). La solucion se mezclo con 50 MBq de �177Lu�LuCl3 y se agito durante 30 min a la temperatura ambiente. Se purifico sobre una columna NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G25, fase movil: PBS).

Ejemplo 22

(R,R)-�?cido {[2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-1-(4-nitro-bencil)-etil]-carboximetilamino}-acético

La sintesis del Ejemplo 22 se llevo a cabo de una manera analoga a la del Ejemplo 1, con la diferencia de que no se empleo el (S)- sino el (R)-2-amino-1-propanol, y tampoco se em pleo el (S)-acido sino el (R)-acido 2 -terc.butoxicarbonilamino-3-(4-nitro-fenil)-propionico como eslabon. Se obtuvo el producto 22 deseado en una alta pureza (� 96 �, RP-HPLC). EM-FAB: 513 (M+ +1,42)

Ejemplo 23

(R,R))-�?cido [(1-(4-amino-bencil)-2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-etil)-carboximetilamino]-acético

La sintesis del Ejemplo 23 se llevo a cabo de una manera analoga a la del Ejemplo 3 metodo A, con la diferencia de que como educto (producto de partida) no se empleo el compuesto 1h, sino el 22. Se obtuvo el producto 23 deseado con un rendimiento de 96 �. EM-FAB: 513 (M+ +1,42)

Ejemplo 24

(R,R))-Éster terc.-butílico de ácido {[2-(4-amino-fenil)-1-({[2-(bis-terc.-butoxicarbonilmetil-amino)-propil]terc.-butoxicarbonilmetil-amino}-metil)-etil]-terc.-butoxicarbonilmetil-amino}-acético

La sintesis del Ejemplo 24 se llevo a cabo de una manera analoga a la del Ejemplo 2, con la diferencia de que como educto no se empleo el compuesto 1g, sino el correspondiente compuesto precursor procedente de la sintesis del compuesto 22. Se obtuvo el producto 24 deseado con un rendimiento de 86 �. EM-FAB: 794 (M+ +1,53)

Ejemplo 25

(R,R)-�?cido [(1-(4-isotiocianato-bencil)-2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-etil)carboximetil-amino]-acético

La sintesis del Ejemplo 25 se llevo a cabo de una manera analoga a la del Ejemplo 5, con la diferencia de que como educto no se empleo el compuesto 3 sino el compuesto 23. Se obtuvo el producto 25 deseado con un rendimiento de 74 �. EM-FAB: 555 (M+ +1,33)

Ejemplo 26

(R,R)-�?cido ({2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-1[4-(2-bromo-acetilamino)-bencil]etil}-carboximetil-amino)-acético

La sintesis del Ejemplo 26 se llevo a cabo de una manera analoga a la del Ejemplo 6, con la diferencia de que como educto no se empleo el compuesto 3 sino el compuesto 23. Se obtuvo el producto 23 deseado con un rendimiento de 71 �. EM-FAB: 590 (M+ +1,48)

Ejemplo 27

a) �?cido N-[4-(2-(bis-carboximetil-amino)-3-{[2-(bis-carboximetil-amino)propil]-carboximetil-amino}-propil)fenil]-succinámico

A una solucion de 793 mg (1 mmol) del compuesto 24 y 0,28 ml (� 2 mmol) de diisopropiletilamina en 20 ml de THF se le afadieron 200 mg (2 mmol) de anhidrido de acido succinico. La solucion se agito durante 2 h a la temperatura ambiente. La solucion se concentro por evaporacion hasta un tercio del volumen, se diluyo con diclorometano, y se afadio a u na so lucion acu osa (de pH = 4,5). La f ase acu osa se s eparo y se e xtrajo m ultiples veces con diclorometano. Las fasesorganicas reunidasse lavaron con una solucion de cloruro de sodio. Se seco con sulfato de sodio yseconcentro por evaporacion en un evaporadorrotatorio. El residuo se purifico por cromatografia en columna (en presencia de una mezcla de CH2Cl2 y Me0H). El producto 27a deseado se obtuvo con un rendimiento de 85 � (0,85 mmol). EM-FAB: 613 (M+ +1,58)

b) (1R,1'S,4R)-1-[4-(3-{[({[({1-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentilcarbamoíl}metil)-carbamoíl]-metil}carbamoíl)-metil]-carbamoíl}-propionil)]-bencil-4-metil-DTPA

A una solucion agitada de 570 mg (1 mmol) del compuesto 16c en 5 ml de diclorometano se le afadieron gota a gota a 0°C 5 ml de acido trifluoroacetico. La solucion se agito durante 2 h a latemperatura ambiente yse concentro por evaporacion en un evaporador rotatorio. El residuo se extrajo por agitacion con dietil-eter. Finalmente, se concentro en una bomba de aceite. El residuo se suspendio en diclorometano, se mezclo con 0,25 g (� 2 mmol) de la base de Hunig, 304 mg (2 mmol) de 1-hidroxibenzotriazol -H20 (H0BT) y 122 mg (2 mmol) del compuesto 27a. La solucion se enfrio a 0°C y se mezclo con 419 mg (21 mmol) de 1-(dimetilaminopropil)-3-etil-carbodiimida (EDCI). La solucion se agito durante 12 horas y se vertio en una mezcla de agua y hielo. La fase acuosa se separo y se extrajo multiples veces con diclorometano. Las fases organicas reunidas se lavaron con una solucion de cloruro de sodio. Se seco con sulfato de so dio y s e co ncentro por eva poracion en un ev aporador rotatorio. E l r esiduo s e pur ifico por cromatografia en columna (en presencia de una mezcla de CH2Cl2 y acetonitrilo). Se obtuvo con un rendimiento de 85 � (0,85 mmol) el producto deseado, que se recogio luego en 5 ml de diclorometano y 3 ml de anisol, y se mezclo con 5 ml de acido trifluoroacetico a 0°C. La solucion se agito durante 8 horas, se concentro por evaporaciony se extrajo por agitacion con dietil-eter. El producto 27b deseado se obtuvo con un rendimiento de 90 � (813,9 mg). EM-FAB: 1064 (M+ +1,38)

Ejemplo 28 Conjugado con un anticuerpo de (1R,1'S,4R)-1-[4-(3-{[({[({1-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)propionilamino]-pentilcarbamoíl]-metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoíl]-propionil)]-bencil-4-metil-DTPA

200 �g de un anticuerpo con grupos tiol libremente accesibles (p.ej. HuM195 (comparese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview CA, EE.UU.) - si el ant icuerpo no posee gr upos tiol l ibremente acce sibles, ent onces estos pueden s er pr oducidos mediante la utilizacion de 2-iminotiolano HCl (vease p.ej. el documento EP 0 607 222 B1)) se diluyeron en 1,2 ml de un tampon de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 255 �g (240 nmol) del producto del Ejemplo 27b, disueltos en 50 �l de un tampon de borato (vease mas arriba), y se agitaron durante 3 horas a 37°C. Se purifico sobre una columna NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase movil: PBS).

Ejemplo 29

Complejo con itrio del conjugado con un anticuerpo de (1R,1'S,4R)-1-[4-(3-{[({[({1-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentilcarbamoíl}-metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoíl)-metil]carbamoíl}propionil)]-bencil-4-metil-DTPA

200 �g de un anticuerpo con grupos tiol libremente accesibles (p.ej. HuM195 (comparese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview CA, EE.UU.) - si el ant icuerpo no posee gr upos tiol l ibremente acce sibles, ent onces estos pueden s er pr oducidos mediante la utilizacion de 2-iminotiolano HCl (vease p.ej. el documento EP 0 607 222 B1)) se diluyeron en 1,2 ml de un tampon de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 255 �g (240 nmol) del producto del Ejemplo 27b, disueltos en 50 �l de un tampon de borato (vease mas arriba), yse agitaron durante 3 horas a 37°C. La solucion tamponadora de borato se intercambio por un tampon de acetato dializando la solucion de muestra tres veces durante 1 h en el Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWC0 (procedimiento de dialisis) en cada caso frente a 200 ml de un tampon de Na0Ac 0,1 M (de pH 6,0). Finalmente, se dializo durante una noche frente a 400 ml de un tampon de Na0Ac 0,1 M (de pH 6). La solucion se mezclo con 50 MBq de �90Y�YCl3 y se agito durante 30 min a la temperatura ambiente. Se purifico sobre una columna NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase movil: PBS).

Ejemplo 30

Complejo con lutecio del conjugado con un anticuerpo de (1R,1'S,4R)-1-[4-(3-{[({[({1-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentilcarbamoíl}-metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoíl)-metil]carbamoíl}propionil)]-bencil-4-metil-DTPA

200 �g de un anticuerpo con grupos tiol libremente accesibles (p.ej. HuM195 (comparese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview CA, EE.UU.) - si el ant icuerpo no posee gr upos tiol l ibremente acce sibles, ent onces estos pueden s er pr oducidos mediante la utilizacion de 2-iminotiolano HCl (vease p.ej. el documento EP 0 607 222 B1)) se diluyeron en 1,2 ml de un tampon de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 255 �g (240 nmol) del producto del Ejemplo 27b, disueltos en 50 �l de un tampon de borato (vease mas arriba), yse agitaron durante 3 horas a 37°C. La solucion tamponadora de borato se intercambio por un tampon de acetato dializando la solucion de muestra tres veces durante 1 h en el Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWC0 (procedimiento de dialisis) en cada caso frente a 200 ml de un tampon de Na0Ac 0,1 M (de pH 6,0). Finalmente, se dializo durante una noche frente a 400 ml de un tampon de Na0Ac 0,1 M (de pH 6). La solucion se mezclo con 50 MBq de �177Lu�LuCl3 y se agito durante 30 min a la temperatura ambiente. Se purifico sobre una columna NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G25, fase movil: PBS).

Ejemplo 31

Complejo con escandio del conjugado con un anticuerpo de (1R,1'S,4R)-1-[4-(3-{[({[({1-carboxi5-[3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentilcarbamoíl}-metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoíl)metil]-carbamoíl}-propionil)]-bencil-4-metil-DTPA

200 �g de un anticuerpo con grupos tiol libremente accesibles (p.ej. HuM195 (comparese la cita de Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1722; obtenible comercialmente de Protein Design Labs Inc., Mountainview CA, EE.UU.) - si el ant icuerpo no posee gr upos tiol l ibremente acce sibles, ent onces estos pueden s er pr oducidos mediante la utilizacion de 2-iminotiolano HCl (vease p.ej. el documento EP 0 607 222 B1)) se diluyeron en 1,2 ml de un tampon de borato (50 mM, de pH 8,5), se mezclaron con 255 �g (240 nmol) del producto del Ejemplo 27b, disueltos en 50 �l de un tampon de borato (vease mas arriba), yse agitaron durante 3 horas a 37°C. La solucion tamponadora de borato se intercambio por un tampon de acetato dializando la solucion de muestra tres veces durante 1 h en el Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWC0 (procedimiento de dialisis) en cada caso frente a 200 ml de un tampon de Na0Ac 0,1 M (de pH 6,0). Finalmente, se dializo durante una noche frente a 400 ml de un tampon de Na0Ac 0,1 M (de pH 6). La solucion se mezclo con 50 MBq de � 47Sc�ScCl3y se agito durante 30min a la temperatura ambiente. Se purifico sobre una columna NAP-5 (de Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G25, fase movil: PBS).

Claims (10)

1. REIVINDICACIONES

   1. Conjugados de las formulas generales VIIa y VIIb

   5 en las que Z representa un atomo de hidrogeno o un equivalente de un ion metalico de un elemento con los numeros

   atomicos 21-29, 31, 32, 37-39, 42-44, 46, 47, 49, 58-71, 75, 77, 82 u 83, A representa un grupo -C00, R representa una biomolecula unida a traves de un grupo funcional, o un radical alquilo de C1-C25 lineal o

   10 ramificado, saturado o insaturado y eventualmente interrumpido por uno hasta seis atomos de 0, o respectivamente por grupos fenileno, -NHC0, -C0NH-,

   y/o -NH-(C=S)-NH, que eventualmente esta sustituido en un sitio arbitrario con uno hasta seis grupos carboxilo,

   15 grupos hidroxilo, grupos amino u ot ros grupos funcionales, a t raves de l os cuales pue den est ar uni das las biomoleculas, asi como sus sales con bases organicas o inorganicas, con las condiciones de que el radical alquilo ha de contener por lo menos una biomolecula unida a traves de una grupo funcional y de que por lo menos dos Z han de representar un equivalente de un ion metalico.

   20 2. Conjugados de acuerdo con la reivindicacion 1, en los que por lo menos dos de los radicales Z representan un equivalente de un ion metalico de un elemento paramagnetico con los numeros atomicos 21-29, 42, 44 y 58-70.
2. 3. Conjugados de acuerdo con la reivindicacion 1, en los que por lo menos dos de los radicales Z representan un

   equivalente de un ion metalico de un elemento radiactivo con los numeros atomicos 26, 27, 29, 31, 32, 37-39, 43, 46, 25 47, 49, 61, 62, 64, 70, 71, 75, 77, 82 y 83.

   a traves del cual esta unida una biomolecula.

   a traves del cual esta unida una biomolecula.

3. 6.

   Conjugados de acuerdo con la reivindicacion 1, en los que R representa un grupo carboxilo, carboxilo activado, amino, nitro, isocianato, isotiocianato, hidrazino, semicarbazido, tiosemicarbazido, cloroacetamido, bromoacetamido, yodoacetamido, acrilo, acilamino, de anhidridos mixtos, azido, de cloruro de aci do, de hidroxido, de cloruro de sulfonilo, vinilsulfono, carbodiimido, maleimido o diazo, a traves del cual esta unida una biomolecula.

4. 7.

   Compuestos de acuerdo con la reivindicacion 6, enlos que el grupo carboxilo activado se escoge entre el conjunto que se compone de

5. 8.

   Conjugados de acuerdo con la reivindicacion 1, en los que la biomolecula se escoge entre el conjunto que se compone de:

   10 biopolimeros, proteinas, tales como las proteinas que tienen una funcion biologica, HSA, BSA, etc., proteinas y peptidos, que se enriquecen en determinados sitios en el organismo (p.ej. junto a receptores, membranas celulares, canales etc.), peptidos disociables por proteasas, peptidos con sitios sinteticos de rotura preestablecida (p.ej. esteres y am idas labiles, et c.), pept idos, que s on disociados por m etaloproteasas, peptidos con engarzadores fotodisociables, peptidos con grupos disociables con agentes oxidantes (oxidasas), peptidos con aminoacidos

   15 naturales y no naturales, glicoproteinas (glicopeptidos), proteinas de sefal, proteinas antiviricas yapoctosis (de muerte celular programada), biopolimeros modificados sinteticamente, tales como unos biopolimeros derivatizados con engarzadores, metaloproteasasmodificadas y oxidasas derivatizadas, etc., hidratos de carbono (mono-hasta polisacaridos), t ales como a zucares derivatizados, azu cares disociables en el or ganismo, ci clodextrinas y s us derivados, aminoazucares, quitosano, polisulfatos y derivados de acido acetilneuraminico, anticuerpos, tales como

   20 anticuerpos m onoclonales, f ragmentos de ant icuerpos, anticuerpos p oliclonales, m inicuerpos, c adenas unicas (tambien aquellas que estan unidades con engarzadores para formar fragmentos multiples), globulos rojos y otros componentes de la sangre, marcadores del cancer (p.ej. CAA) y otras sustancias que median en la adhesion entre celulas (p.ej. Lewis X y derivados anti-Lewis X), fragmentos de ADN y ARN, tales como ADN's y ARN's derivatizados (p.ej. aquellos que fueron encontrados por el procedimiento SELEX), ARN y ADN sinteticos (tambien con bases no

   25 naturales), PNAs (de Hoechst) y antisentido, -aminoacidos (de Seebach), aminas vectoras para la infiltracion en la celula, am inas bi ogenicas, c ompuestos farmaceuticos, pr eparados oncologicos, p olimeros sinteticos, que estan dirigidos hacia una diana biologica (p.ej. un receptor), esteroides (naturales y modificados), prostaglandinas, taxol y sus derivados, endotelinas, alcaloides, acido folico y sus derivados, lipidos bioactivos, grasas, esteres de acidos grasos, mono-, di- y trigliceridos modificados sinteticamente, liposomas, que estan derivatizados en la superficie,

   30 micelas a base de acidos grasos naturales o de compuestos de perfluoroalquilo, porfirinas, texafrinas, porfirinas ampliadas, citocromos, inhibidores, neuraminidasas, neuropeptidos, inmunomoduladores, tales como FK 506, CAPE y gliotoxina, endoglicosidasas, substratos que son activados por enzimas, tales como la calmodulina cinasa, la caseina cinasa II, la glutation-S-transferasa, la heparinasa, metaloproteasas de la matriz, la cinasa del receptor de insulina, la UDP-galactosa 4-epimerasa, fucosidasas, proteinas G, galactosidasas, glicosidasas, glicosil transferasas

   35 y l a xi losidasa, ant ibioticos, vi taminas y c ompuestos analogos a vi taminas, hor monas, i ntercaladores de A DN, nucleosidos, nucleotidos, lectinas, vitamina B12, Lewis X y compuestos afines, psoralenos, antibioticos del tipo de dieno-trienos, carbaciclinas, VEGF (acronimo del ingles "vascular endothelial growth factor" (factor de crecimiento endotelial vascular)), somatostatina y sus derivados, derivados de biotina, antihormonas, proteinas especificas para tumores y compuestos sinteticos especificos para tumores, polimeros, que se enriquecen en zonas de caracter

   40 acido o basico del cuerpo (distribucion controlada por el valor del pH), mioglobinas,apomioglobinas, etc., peptidos de neurotransmisores, factores de necrosistumoral, peptidos, que se enriquecen en tejidos inflamados, reactivos para agrupaciones de sangre, proteinas transportadoras de aniones y cationes, poliesteres (p.ej. del acido lactico), poliamidas y polifosfatos.
6. 9. Procedimiento par a l a p reparacion d e unos conjugados de l as formulas V IIa y V IIb d e ac uerdo co n l a

   en las que Z' tiene el significado de Z o de un grupo protector de carboxilo, R' representa un grupo funcional y A

   5 representa un grupo -C00, eventualmente despues de la separacion de los gruposprotectores de carboxilo, se hacen reaccionar de un modo en si conocido con una biomolecula, y a continuacion (eventualmente despues de la separacion de los grupos protectores de carboxilo), los acidos obtenidos de esta manera se hacen reaccionar de uno modo en si conocido con por lo menos un oxido metalico o una sal metalica de un elemento que tiene los numeros atomicos 21-29, 31, 32, 37-39, 42-44, 46, 47, 49, 58-71, 75, 77, 82 u 83, y a continuacion, en caso deseado, los

   10 atomos de hidrogeno acidos presentes, se transforman con compuestos organicos y/u organicos o con aminoacidos en sales fisiologicamente compatibles.
7. 10. Estuche para la produccion de radiofarmacos, que comprende un conjugado de acuerdo con la reivindicacion 1,

   en el que Z es un atomo de hidrogeno, y representa un compuesto de un elemento radiactivo con los numeros 15 atomicos 26, 27, 29, 31, 32, 37-39, 43, 46, 61, 62, 64, 67, 70, 71, 75, 77, 82 y 83.
8. 11. Agentes farmaceuticos, que contienen por lo menos un compuesto fisiologicamente compatible de acuerdo con la reivindicacion 2.

   20 12. Agentes farmaceuticos, que contienen por lo menos un compuesto fisiologicamente compatible de acuerdo con la reivindicacion 3.
9. 13. U tilizacion de un c ompuesto de acuerdo c on l a r eivindicacion 2 par a l a pr eparacion de a gentes par a e l

   diagnostico por RMN. 25
10. 14. U tilizacion de un c ompuesto de acuerdo c on l a r eivindicacion 3 par a l a pr eparacion de a gentes par a e l radiodiagnostico o la radioterapia.