ES2279546T3 - Vacunas contra la micosis. - Google Patents

Abstract

LA INVENCION SE REFIERE A VACUNAS QUE COMPRENDEN BLASTOESPORAS DE LEVADURA HOMOGENEIZADAS E INACTIVADAS ASI COMO MICROCONITIOS DE DERMATOFITOS HOMOGENEIZADOS E INACTIVADOS O MATERIAL ANTIGENICO DE LAS ESPORAS, LA INVENCION TAMBIEN SE REFIERE A PROCEDIMIENTOS PARA SU PRODUCCION Y SU USO PARA LA PROFILAXIS Y/O EL TRATAMIENTO DE MICOSIS EN MAMIFEROS, PREFERIBLEMENTE EN HUMANOS. LAS VACUNAS DE ACUERDO CON LA INVENCION SON ESPECIALMENTE UTILES PARA LA PROFILAXIS Y/O EL TRATAMIENTO DE MICOSIS DERMICAS, PREFERIBLEMENTE DERMATOMICOSIS Y/O CANDIDIOSIS Y/O ONICOMICOSIS.

Description

Vacunas contra la micosis.

El presente invento corresponde al campo de la dermatología micológica y tiene que ver con las vacunas, compuestas de dermatófitos de microconidias inactivadas y homogeneizadas y de blastosporas de levaduras homogeneizadas inactivadas o del material antigéno de las esporas mencionadas, a los métodos de obtención de las vacunas y a sus aplicaciones para realizar la profiláctica y/o la curación de las micósis cutáneas, de preferencia de la dermatomicósis y/o de la candidiásis y/o del onicomicósis.

Últimamente se la incrementado considerablemente el porcentaje de las enfermedades fúngicas (micosis). De todas las enfermedades cutáneas del ser humano, especialmente se incrementó fuertemente (hasta en el 4-8%) la cantidad de enfermedades causadas por las infecciones fúngicas (micosis cutáneas). En los trópicos, la cantidad de estas enfermedades aumentó hasta alcanzar valores del 15-20%. Los patógenos más propagados, asociados a las micosis cutáneas, son los dermatófitos del género Trichophyton, tales como el Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes y/o el Trichophyton verrucosum. Otro grupo de patógenos fúngicos, asociados a las micosis cutáneas, los conforman las levaduras(o levaduras fúngicas), por ejemplo, del género Candida, y específicamente de la especie Candida albicans.

El ejemplo típico de las micosis superficial es la onicomicosis (Tinea unguium). De onicomicosis padecen aproximadamente del 2-8% de la población humana. En los países europeos, los patógenos principales, asociados a la onicomicosis, son los dermatófitos de las especies Trichophyton rubrum y Trichophyton mentagrophytes, y así mismo las levaduras de la especie Candida albicans. Los microorganismos de la especie Candida albicans frecuentemente se encuentran en las uñas afectadas de los dedos de las manos, y no de los pies. A diferencia de otras micosis superficiales, la onicomicosis nunca se cura espontáneamente, y si no es curada conlleva a la onicodistrofía.

En la terapia de las micosis superficiales generalmente se utilizan las sustancias químicas de acciones antifúngicas. No obstante, las insuficiencias de estas sustancias químicas son sus efectos secundarios significativos (por ejemplo, la hepatoxicocidad, la teratogénesis potencial, la destrucción del tracto intestinal (digestivo) y del sistema nerviosos central, y así mismo todo tipo de reacciones alérgicas posibles) y/o la ineficacia insuficiente de causar el efecto en el lugar específico deseado, como es en el caso de la onicomicosis, donde la parte afectada se encuentra por debajo de la uña. Y en especial en las enfermedades crónicas, cuando las raíces infectadas de los cabellos o de las uñas, cuando la quimioterapia es de larga duración y causa la decepción, tanto en el médico y en el mismo paciente. Además, porque es extremadamente elevada la velocidad de la reincidencia (recidiva).

En los pacientes de inmunología deficiente, las micosis superficiales pueden pasar a ser afecciones fúngicas sistémicas (micosis sistémicas). Para la curación de las afecciones sistémicas mediante los agentes químicos, generalmente se necesitan semanas o meses. En algunos casos, la curación puede durar hasta un año. Al surgir los efectos secundarios, el consentimiento del paciente para su curación se somete a pruebas, y aquí lo principal reside en el problema de la relación riesgo/beneficio de la curación a realizarse.

De acuerdo con las ideas contemporáneas, las infecciones fúngicas crónicas afectan a personas sanas, pero, de acuerdo a otra relación, a personas sin déficit de inmunidad, debido a que de las mismas se inicia solamente la generación de los anticuerpos contra los hongos, es decir la reacción mediata inmunológica IgE (la inmunoglobulina E), y no la inmediata respuesta inmunológica de la célula. No obstante, la respuesta inmediata inmunológica del anticuerpo, por sí misma es insuficiente para vencer la infección fúngica. Como resultado se da la micosis crónica (Sorensen, G.W., Arch. Dermatol. 112, 1976. 40-42; Hay, R.J., Shennan, G., Br. J. Dermatol. 106, 1982, 191-198; Dahl, M.V., Adv. Dermatol. 2, 1987, 305-320).

Es muy conocida la capacidad de las vacunas, compuestas de dermatófitos vivos, de provocar ambas respuestas, no obstante, lo mismo que para todos los preparados de las vacunas, en estos casos existe el peligro constante de infección por parte de las personas sanas recientemente vacunadas. Las vacunas inactivadas, muy frecuentemente no provocan la suficiente respuesta inmediata eficaz de la célula y por consiguiente no son eficaces como las vacunas vivas.

Los especialistas conocen los enfoques del uso de los dermatófitos inactivados en calidad de vacunas contra la dermatomicosis. Por ejemplo, Wharton M. y otros. (J. Invest. Derm. 14, 291-303, 1950) anuncian sobre la activa inmunización contra la infección, causada por el Trichophyton purpureum de los conejos, mediante la ayuda de la suspensión inactivada de la hifa Trichophyton rubrum. En la patente europea 393371 y en la solicitud internacional 9307894, se afirma acerca del uso de las vacunas inactivadas contra la dermatomicosis, que contiene dermatófitos del género Trichophyton y/o Microsporum. Hasta donde se sabe, no se afirma nada acerca de las vacunas contra la micosis, que deberían de contener dermatófitos de microconidias inactivadas homogeneizadas y de blastoesporas de levaduras homogeneizadas inactivadas.

Inesperadamente se descubrió de que las vacunas, compuestas de dermatófitos de microconidias inactivadas y homogeneizadas y de blastosporas de levaduras homogeneizadas inactivadas, causan la estabilidad confiable contra las infecciones fúngicas.

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El presente invento abre campo a las vacunas compuestas de dermatófitos de microconidias inactivas y homogeneizadas y de blastosporas de levaduras homogeneizadas inactivadas o del material antígeno de dichas esporas, los métodos de sus obtenciones y aplicaciones con fines profilácticos y/o de curación de la micosis de los mamíferos, y de preferencia del ser humano. Las vacunas, según esta invención, son de especial utilidad para la profiláctica y/o la curación de las micosis superficiales, de preferencia de la dermatomicosis y/o de la candidiásis y/o de la onicomicosis.

Las vacunas, según este invento, poseen magníficas propiedades inmunológicas al no existir efectos secundarios desfavorables. En particular, estas vacunas, no provocan reacciones alérgicas.

En una de las variantes de la realización del presente invento, las vacunas de esta invención se componen de blastosporas de levaduras inactivadas y/o de blastoesporas de levaduras, que se encuentran en estado de crecimiento(hinchados) y/o que contienen tubos germinales(o en germinación), y/o microconidias de dermatófitos y/o microconidias de dermatófitos, que se encuentran en estado de crecimiento (hinchados) y/o que contienen tubos germinales, y/o que está compuesto del material antígeno de dichas esporas. Preponderantemente las blastoesporas de las levaduras pertenecen al género de la Candida, de mayor prevalencia a la especie de la Candida albicans y/o las microconidias de los dermatófitos pertenecen al género de los Trichophyton y/o de los Microsporum, es decir a las especies de los Trichophyton rubrum y/o Trichophyton mentagrophytes y/o Microsporum canis. De especial prevalencia son las cepas de la Candida albicans BNA-9456 y/o de la Candida albicans BNA-9457 y/o de la Candida albicans BNA-9458 y/o de la Candida albicans BNA-9459 y/o del Trichophyton rubrum BNA-9469 y/o Trichophyton rubrum BNA-9470 y/o Trichophyton rubrum BNA-9471 y/o Trichophyton rubrum BNA-9472 y/o Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 y/o Microsporum canis BNA-7281. Según los ejemplos que se dan, son especialmente predominantes las combinaciones de las cepas. Predominantemente, el 50% de las blastosporas de las levaduras y/o las microconidias de los dermatófitos se encuentran en estado de crecimiento(hinchados) y/o contienen tubos germinales. Preponderantemente la concentración de las esporas es de 40 hasta 90 millones por ml., de especial preferencia es la concentración de aproximadamente de 60 millones de esporas por ml. Para la inactivación de las esporas se utilizan de preferencia el compuesto mercurial tiomersal, formaldehido o propiolactona-2.

En otra variante de la realización de esta invención, las blastoesporas de las levaduras y/o las microconidias de los dermatófitos se modifican mediante el tratamiento químico, de preferencia tratandoseles con el H_{2}O_{2} y/o con el permanganato de sodio y/o con el permanganato de potasio.

Las vacunas, según esta invención, pueden modular el sistema inmune, es decir que éstas poseen propiedades estimulantes inmunológicas y que pueden ser introducidas sin la agregación de los estimuladores inmunológicos. Por esta razón una de las variantes de la realización del invento de esta vacuna, según este propio invento, no contiene adyuvantes en su composición ni otras sustancias modulantes inmunológicas o estimuladores inmunológicos.

En otra de las variantes de la realización de este invento, para la intensificación posterior de sus propiedades inmunológicas, adicionalmente contienen, por lo menos, de una sustancia con la actividad modulante inmunológica, de preferencia de un adyuvante y que sea elegido del grupo compuesto del acetato de la vitamina E, de la emulsión de aceite y del agua, del fosfato de aluminio, del oxido de aluminio, de gel sobre la base del hidróxido de aluminio y de la metilcelulosa, de la emulsión de aceite, de muramildipeptidos, del adyuvante de Freund y las saponinas, y/o, de por lo menos, de la Citokine, de preferencia elegido del grupo, compuesto de interleukine-2 (IL-2), interleukine-12 (IL-12) y del interferon-\gamma (INF-\gamma).

Según esta invención, en una de las variantes de la realización del propio invento, se aplican para la curación y/o profiláctica de las micosis, de preponderancia de las micosis superficiales, de preferencia la dermatomicosis y/o de la candidiásis y/o de la onicomicosis de los mamíferos, y mayormente del ser humano.

En otra de las variantes de la realización de esta invención, se les utilizan en calidad de moduladores inmunológicos, y de preponderancia a los estimuladores inmunológivos.

En otra de las variantes de la realización de esta invención, se les utiliza también para la estimulación de la respuesta inmune de los animales con deficiencias inmunológicas.

Las vacunas, según este invento, pueden ser administradas por la vía parenteral, de preferencia mediante la inyección intramuscular y/o mediante la inyección intraperitoneal y/o mediante la inyección intracutánea y/o mediante la inyección subcutánea y/o local, de preferencia cutánea.

En otra variante de su realización, este invento muestra los métodos de preparación de estas vacunas. Estas vacunas se preparan a partir de los dermatófitos y de las levaduras, predominantemente elegidos de los géneros y/o de las especies y/o de las cepas, arriba expuestas, de acuerdo a los siguientes métodos.

La primera etapa de cultivación, para todos los métodos que se exponen en adelante, se realiza de la siguiente manera.

Los cultivos de los dermatófitos, de preponderancia de los géneros Trichophyton y/o Microsporum, de mayor preferencia de las especies Trichophyton mentagrophytes y/o Trichophyton rubrum o de las cepas del Trichophyton rubrum BNA-9469 y/o del Trichophyton rubrum BNA-9470 y/o Trichophyton rubrum BNA-9471 y/o del Trichophyton rubrum BNA-9472 y/o del Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 y/o del Microsporum canis BNA-7281, fueron cultivados por separado en una mezcla del agar-mosto, por ejemplo, en 3-10 matraces de Roux. Cada cultivo se mantuvo por el transcurso de 15-30 días y a la temperatura de los 26-28Cº.

Los cultivos de las levaduras, de prepoderancia de los géneros Candida, de mayor preferencia de las especies Candida albicans BNA-9456 y/o Candida albicans BNA-9457 y/o Candida albicans BNA-9458 y/o Candida albicans BNA-9459, se realizaron por separado, por ejemplo, en 2-8 matraces de Roux en agar glucosado de Sabuoraud o en el agar del extracto de malta, o bien en cualquier otro medio favorable por el transcurso de 1-7 días y a la temperatura de 26-37ºC.

Luego el material fungíco obtenido, según esta metódica, preferencialmente se sometió al siguiente tratamiento.

Método 1

(Descrito en los ejemplos 1-7)

Las masas fungibles de los dermatófitos se recolectaron y homogeneizaron por separado en solución acuosa (por ejemplo, de 100-500 ml.) compuesta de: el 0.1-0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada o con 0.1-1% de la peptona de soya o de la carne de cerdo en combinación con el 5-6% de la glucosa y con el 0.1-1% de extracto de la levadura. A la concentración de las microconidias se ajustó hasta que sea del valor de hasta de 30-90 millones por ml. en cada homogenate. Después, cada suspensión de las macroconidias fueron fermentadas por el transcurso de 1-2 días a la temperatura de 28ºC, obteniéndose así el 50-100% de los s germinativos. Después de la fermentación, las suspensiones celulares pueden ser lavadas con el a gua destilada, o con la solución salina fisiológica, o por ejemplo, con la solución del cloruro de sodio o con otra solución que sea conveniente.

Las blastosporas de la Candida albicans fueron lavadas con la solución fisiológica del cloruro de sodio o con otra solución conveniente. La concentración de las blastosporas en suspensión se ajustó para que sea del valor de hasta de 10-90 millones por ml.

Los diferentes volúmenes de cada cultivo, en forma de suspensión, fueron mezclados en un solo contenedor. El homogenate fue inactivado agregándosele el compuesto mercurial de tiomersal directamente en la suspensión celular, en la proporción de 1:11000 hasta 1:25000 (peso/volumen). La mezcla fue incubada por el transcurso de 1-3 días a la temperatura ambiente.

La vacuna así obtenida se vertió en un frasco, se comprobó su esterilidad, seguridad y propiedades inmunológicas en correspondencia con las metódicas adoptadas y fueron conservadas al frío de hasta 4-10ºC. Las vacunas, preparadas de esta manera, pueden utilizarse para la profiláctica y curación de la micosis de los mamíferos, y de preferencia del ser humano.

Método 2

(Descrito en los ejemplos 8-11)

Las masas fungibles de los dermatófitos se recolectaron y homogeneizaron por separado en solución acuosa (por ejemplo, de 100-500 ml.) compuesta de: el 0.1-0.3% de de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, con el 0.1-1% de la peptona de soya o de la carne de cerdo en combinación con el 5-6% de glucosa y con el 0.1-1% de extracto de la levadura. A la concentración se le ajustó hasta que sea del valor de hasta de 30-90 millones por ml. en cada homogenate. Después, cada suspensión de microconidias fueron fermentadas por el transcurso de 1-2 días a la temperatura de 28ºC, obteniéndose así el 50-100% de tubos germinativos. Volúmenes iguales de cada cultivo de dermatófitos en forma de suspensión se mezclaron en un solo contenedor. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal directamente en la suspensión celular, en la proporción de 1:11000 hasta de 1:25000 (peso/volumen). La mezcla fue incubada por el transcurso de 1-2 días a la temperatura ambiente.

Cada uno de los cultivos de la levadura se cultivaron y homogeneizaron en 5000 ml del medio RPMI-1640, con contenido de glutamine-L (de la firma Serva), o en otro medio de cultivo conveniente. A la concentración de las blastosporas se ajustó hasta que sea del valor de hasta de 10-30 millones por ml. La suspensión celular fúngica fue incubada en depósitos de cultivo, con el contenido de uno de los medios arriba mencionados a la atmósfera de 5-6% de anhidrído(ácido) carbónico, a la temperatura de 36-38ºC. Generalmente dentro de las 2-4 horas de la incubación, el 50-100% de las blastosporas se encontraban ya en estado de crecimiento y contenían tubos germinativos. Las blastosporas se reunían y lavaban de 3-5 veces, por ejemplo, mediante el proceso de la centrifugadora (de 4000-6000 rev/min) por el lapso de 25-45 minutos para cada centrifugación, a la temperatura de 4-10ºC. Luego, la concentración de las células se ajustó hasta que su valor sea de hasta de 10-90 millones por ml. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal directamente en la suspensión celular, en la proporción de 1:11000 hasta de 1:25000 (peso/volumen). La mezcla se incubó por el lapso de 2 días a la temperatura ambiente. Volúmenes Iguales de cada cultivo de la Candida albicans, se mezclaron en un solo contenedor en forma de suspensión.

Luego se mezclaron las suspensiones celulares de los dermatófitos y de las levaduras. La vacuna así obtenida se vertió en un frasco, se comprobaron su esterilidad, seguridad y propiedades inmunológicas de acuerdo con las metódicas adoptadas y se conservaron al frío a la temperatura de hasta de 4-10ºC. Las vacunas, preparadas según este método, pueden ser utilizadas para la profiláctica y curación de la micosis de los mamíferos, y de preferencia del ser humano.

Método 3

(Descrito en los ejemplos 12-15)

Las masas fúngicas de los dermatófitos fueron recolectados y homogeneizadas por separado en la solución acuosa (por ejemplo, de 100-500 ml.) compuesta de: el 0.1-0.3% de proteína muscular hidrolizada y fermentada o con el 0.1-1% de la peptona de soya o de la carne de cerdo en combinación con el 5-6% de glucosa y con el 0.1-1% de extracto de la levadura. A la concentración de las microconidias se ajustó hasta que sea del valor de 30-90 millones por ml. en cada homogenate. Después, cada suspensión de las microconidias fueron fermentadas por el transcurso de 1-2 días a la temperatura de 28ºC.

Las blastosporas de las levaduras se recolectaron mediante el lavado con el cloruro de sodio fisiológico o otra solución conveniente. A la concentración de las blastosporas en suspensión se ajustó hasta que sea del valor de hasta de 10-90 millones por ml. Iguales volúmenes de cada cultivo en forma de suspensión, fueron mezclados en un solo contenedor. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal directamente en la suspensión celular, en la proporción de 1:11000 hasta de 1:25000 (peso/volumen). La mezcla se incubó por el transcurso de 1-3 días a la temperatura ambiente.

Después de la inactivación, la suspensión celular fue tratada con el agua oxigenada. Con estos fines se le añadieron sustancias con contenidos de agua oxigenada, hasta que su concentración alcance los valores comprendidos del 1-3%. La suspensión celular se removió por el lapso de 14-48 horas. Las células así tratadas fueron lavadas de 3-5 veces, mediante el proceso del centrifugado (de 4000-6000 rev./min.), por el lapso de 20-50 minutos con el agua destilada o con la solución fisiológica del cloruro de sodio. A la concentración final de las esporas se ajustó hasta que sea del valor de hasta de 30-90 millones por ml.

En calidad de tratamiento alternativo con el agua oxigenada, la suspensión de las células puede ser tratada con el permanganato de sodio o de calcio. Con este fin se le agregó el permanganato de sodio o de calcio hasta que alcanzase los valores comprendidos de 1:10000 hasta 1:30000 (peso/volumen), y la suspensión se removió por el lapso de de 10-48 horas. Las células así tratadas fueron lavadas de 3-5 veces, por ejemplo, con el agua destilada, mediante el proceso de la centrifugadora por el lapso comprendido de 25-45 minutos para cada etapa de la centrifugación (de 4000-6000 rev./min.). A la concentración final de las esporas se ajustó hasta que sea del valor de hasta de 30-90 millones
por ml.

Después se mezclaron las suspensiones celulares de los dermatófitos y de las levaduras. La vacuna así obtenida se vertió en un frasco, se comprobó su esterilidad, seguridad y propiedades inmunológicas de acuerdo con las metódicas adoptadas y se conservaron al frío de 4-10ºC. Las vacunas, preparadas mediante este método, pueden ser utilizados para realizar la profiláctica y la curación de las micosis de los mamíferos, y de preferencia del ser humano.

Método 4

(Descrito en los ejemplos 16-19)

Las masas fungibles de los dermatófitos fueron recolectadas y homogeneizadas por separado en la solución acuosa (por ejemplo, de 100-500 ml.) compuesta de: el 0.1-0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 0.1-1% de la peptona de soya o de la carne de cerdo en combinación con el 5-6% de la glucosa y con el 0.1-1% de extracto de la levadura. A la concentración de las microconidias se ajustó hasta que sea del valor de hasta de 30-90 millones por ml en cada homogenate. Después, cada suspensión de microconidias fueron fermentadas por el transcurso de 1-2 días a la temperatura de 28ºC. Los volúmenes iguales de cada cultivo en forma de suspensión fueron mezclados en un solo contenedor. El homogenate fue inactivado agregándosele el compuesto mercurial de tiomersal directamente en la suspensión celular, en la proporción de 1:10000 hasta 1:25000 (peso/volumen). La mezcla fue incubada por el transcurso de 1-2 días a la temperatura ambiente.

Después de la inactivación, la suspensión celular fue tratada con el agua oxigenada. Con estos fines se le añadieron sustancias con contenidos de agua oxigenada, hasta que su concentración alcance los valores comprendidos del 1-3%. La suspensión de las células fue removida por el lapso de 14-48 horas. Las células así tratadas fueron lavadas de 3-5 veces mediante el proceso de la centrifugación (de 4000-6000 rev./min.) por el lapso de 20-50 minutos con el agua destilada o con la solución fisiológica del cloruro de sodio. A la concentración final de las esporas se ajustó hasta que sea del valor de de hasta de 30-90 millones por ml.

En calidad de tratamiento alternativo con el agua oxigenada, la suspensión de las células puede ser tratada con el permanganato de sodio o de calcio. Con este fin se le añadieron permanganato de sodio o de calcio hasta que alcance los valores comprendidos de 1:10000 hasta 1:30000 (peso/volumen), y la suspensión se removió por el lapso de de 10-48 horas. Las células así tratadas fueron lavadas de 3-5 veces, por ejemplo, con el agua destilada, mediante la centrifugadora por el lapso comprendido de 25-45 minutos para cada etapa de la centrifugación (de 4000-6000 rev./min.). A la concentración final de las esporas se le ajustó hasta que sea del valor de hasta de 30-90 millones
por ml.

Cada uno de los cultivos de la levadura se cultivaron y homogeneizaron en 500 ml. del RPMI-1640, con contenido de glutamine-L (de la firma Serva), o en otro medio de cultivo conveniente. A la concentración de las blastosporas se ajustó hasta que sea del valor de hasta de 10-30 millones por ml. La suspensión celular fúngica fue incubada en depósitos de cultivo, con el contenido de uno de los medios arriba mencionados a la atmósfera de 5-6% de anhidrído(ácido) carbónico, a la temperatura de 36-38ºC. Generalmente dentro de las 2-4 horas de la incubación, el 50-100% de las blastosporas se encontraban ya en estado de crecimiento y contenían tubos germinativos. Las blastosporas se recolectaron y lavaron de 3-5 veces, por ejemplo, con ayuda de del proceso de la centrifugación (de 4000-6000 rev/min) por el lapso de 25-45 minutos para cada centrifugación, a la temperatura de 4-10ºC. Luego, a la concentración de las células se ajustó hasta que igual al valor de hasta de 10-90 millones por ml. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal directamente en la suspensión celular, en la proporción de 1:11000 hasta del 1:25000 (peso/volumen). La mezcla se incubó por el lapso de 2 días a la temperatura ambiente.

Después de la inactivación, la suspensión celular fue tratada con el agua oxigenada. Con estos fines se le añadieron sustancias con contenido de agua oxigenada, hasta que su concentración alcance los valores comprendidos del 1-3%. La suspensión de las células fue removida por el lapso de 14-48 horas. Las células así tratadas fueron lavadas de 3-5 veces mediante el proceso de la centrifugación (de 4000-6000 rev./min.) por el lapso de 20-50 minutos con el agua destilada o con la solución fisiológica del cloruro de sodio. A la concentración final de las esporas se ajustó hasta que sea del valor, de hasta de 30-90 millones por ml.

En calidad de tratamiento alternativo con el agua oxigenada, la suspensión de las células puede ser tratada con el permanganato de sodio o de calcio. Con este fin se le añadieron permanganato de sodio o de calcio hasta que alcance los valores comprendidos de 1:10000 hasta 1:30000 (peso/volumen), y la suspensión se removió por el lapso de de 10-48 horas. Las células así tratadas fueron lavadas de 3-5 veces, por ejemplo, con el agua destilada, mediante la centrifugadora por el lapso comprendido de 25-45 minutos para cada etapa de la centrifugación (de 4000-6000 rev./min.). A la concentración final de las esporas se ajustó hasta que sea del valor de hasta de 30-90 millones por ml. Luego, volúmenes iguales de cada cultivo de levadura en forma de suspensión se mezclaron en un solo contenedor. Después se mezclaron las suspensiones celulares de los dermatófitos y las levaduras. Las vacunas, preparadas mediante este método, pueden ser utilizados para realizar la profiláctica y la curación de las micosis de los mamíferos, y de preferencia del ser humano.

Método 5

(Descrito en los ejemplos 20-23)

Las masas fungibles de los dermatófitos fueron recolectadas y homogeneizadas por separado en solución acuosa (por ejemplo, de 100-500 ml.) compuesta de: del 0.1-0.3% de proteína muscular hidrolizada fermentada o con el 0.1-1% de la peptona de soya o de la carne de cerdo en combinación con el 5-6% de glucosa y con el 0.1-1% de extracto de la levadura. A la concentración de las microconidias se ajustó hasta que sea del valor de hasta de 30-90 millones por ml. en cada homogenate.

Las blastosporas de las levaduras se recolectaron mediante el lavado con el cloruro de sodio fisiológico o con otra solución conveniente. A la concentración de las blastosporas en suspensión se ajustó hasta que sea del valor de hasta de 10-90 millones por ml.

Iguales volúmenes de cada cultivo en forma de suspensión se recolectaron y mezclaron en un solo contenedor. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal directamente en la suspensión celular, en la proporción de 1:11000 hasta de 1:25000 (peso/volumen). La mezcla se incubó por el transcurso de 1-3 días a la temperatura ambiente.

La vacuna así obtenida se vertió en un frasco, se comprobó su esterilidad, seguridad y sus propiedades inmunológicas de acuerdo con las metódicas adoptadas y se conservaron al frío de 4-10ºC. Las vacunas, preparadas mediante este método, pueden ser utilizados para realizar la profiláctica y la curación de las micosis de los mamíferos, y de preferencia del ser humano.

Método 6

(Descrito en los ejemplos 24-27)

Las masas fúngicas de los dermatófitos fueron recolectadas y homogeneizadas por separado en la solución acuosa (por ejemplo, de 100-500 ml.) compuesta de: del 0.1-0.3% de proteína muscular hidrolizada y fermentada, con el 5-6% de glucosa y con el 0.1-1% de extracto de la levadura. A la concentración de las microconidias se ajustó hasta que sea del valor de hasta de 30-90 millones por ml. en cada homogenate.

Las blastosporas de las levaduras se recogieron mediante el lavado con el cloruro de sodio fisiológico o con otra solución conveniente. A la concentración de las blastoesporas en suspensión se ajustó hasta que sea del valor de hasta de 10-90 millones por ml.

Iguales volúmenes de cada cultivo en forma de suspensión se combinaron y mezclaron en un solo contenedor. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal directamente en la suspensión celular, en la proporción de 1:11000 hasta de 1:25000 (peso/volumen). La mezcla se incubó por el lapso de 1-3 días a la temperatura interior.

Después de la inactivación la suspensión celular fue tratada con el agua oxigenada. Con estos fines se le añadieron sustancias con contenidos de agua oxigenada, hasta que su concentración alcance los valores comprendidos del 1-3%. La suspensión de las células fue removida por el lapso de 14-48 horas. Las células así tratadas fueron lavadas de 3-5 veces mediante el centrifugado (de 4000-6000 rev./min.) por el transcurso de las 20-50 minutos con agua destilada o la solución fisiológica del cloruro de sodio. A la concentración final de las esporas se ajustó hasta que sea del valor de hasta de de 30-90 millones por ml.

En calidad de tratamiento alternativo con el agua oxigenada, la suspensión de las células puede ser tratada con el permanganato de sodio o de calcio. Con este fin se le añadieron permanganato de sodio o de calcio hasta que alcance los valores comprendidos de 1:10000 hasta 1:30000 (peso/volumen), y la suspensión se removió por el lapso de de 10-48 horas. Las células así tratadas fueron lavadas de 3-5 veces, por ejemplo, con el agua destilada, mediante el proceso de la centrifugación por el lapso comprendido de 25-45 minutos para cada etapa de la centrifugación (de 4000-6000 rev./min.). A la concentración final de las esporas se ajustó hasta que sea del valor de hasta de 30-90 millones por ml.

Después se mezclaron las suspensiones celulares de los dermatófitos y de las levaduras. La vacuna así obtenida se vertió en un frasco, se comprobó sus esterilidad, seguridad y sus propiedades inmunológicas de acuerdo con las metódicas adoptadas y se conservaron al frío de 4-10ºC. Las vacunas, preparadas mediante este método, pueden ser utilizadas para realizar la profiláctica y la curación de las micosis de los mamíferos, y de preferencia del ser humano.

Las vacunas, obtenidas, según los métodos 1-6, pueden unirse con el portador, que contenga la sustancia como actividad inmunomodulante, de preferencia un adyuvante, y que sea elegida del grupo compuesto del acetato de la vitamina E, de la emulsión de aceite y de agua, del fosfato de aluminio, del oxido de aluminio, de gel sobre la base del hidróxido de aluminio y de la metilcelulosa, de la emulsión de aceite, de muramildipeptidos, del adyuvante de Freund y las saponinas, y/o, de por lo menos, de un Citokine, de preferencia elegido del grupo, compuesto de interleukine-2 (IL-2), interleukine-12 (IL-12) y del interferon-\gamma (INF-\gamma), para intensificar posteriormente la actividad inmunológica de las vacunas obtenidas según esta invención.

1. Método de obtención de la cantidad aumentada de microconidias en crecimiento y de las microconidias con tubos germinales de dermatófitos

Los cultivos de los dermatófitos se cultivaron por el transcurso de 15-20 días en 2-8 matraces de Roux en agar sólido (agar de extracto de malta, agar de Sabuoraud). Los cultivos se recolectaron y homogeneizaron en un medio líquido estéril, por ejemplo, con el 0.3-1.0% de extracto impuro o con la peptona de la carne o de la soya, con el contenido del 5-6% de glucosa y el 0.1-1.0% del extracto de la levadura, o bien con el caldo del extracto de malta, con el caldo de la carne con glucosa o con otros medios. Se mantuvo el valor del pH del medio entre los valores de 6.2-7.2. A la concentración de las macroconidias en suspensión fúngica se hizo que ajustó hasta que alcance los valores comprendidos de hasta de 3-90 millones por ml. Para la segunda etapa del cultivo (cultivo profundo), a la suspensión de las esporas se le colocó en una recipiente aparte, con el contenido del medio anteriormente mencionado. El cultivo profundo se realizó por el transcurso de 10-48 horas. Después de las 10-15 horas después del inicio del cultivo, se realizó el análisis microscópico de las suspensiones celulares con el objeto de calcular la cifra de las células en crecimiento y en germinación. Estos análisis se repitieron cada 5-6 horas. El cultivo llegó a suspenderse cuando no menos del 50% de las microconidias se encontraban ya en estado de crecimiento o en germinación y cuando, en no más del 7-10% de las células, se podían apreciar la segunda ramificación del micelio. El diámetro de las microconidias en crecimiento y en estado de germinación aumentaba en 1.2 veces en comparación con las microconidias comunes.

2. Método de obtención de la cantidad aumentada de blastosporas en crecimiento y de blastosporas en levaduras con tubos germinales

Los cultivos de levaduras, de preferencia de las especies de la Candida, se cultivaron en el transcurso de 2-3 días en el agar sólido (agar de extracto de malta, agar de Sabuoraud). Los cultivos se recolectaron y homogeneizaron en un medio líquido estéril, de preferencia con el medio RPMI-1640 (de la firma Serva) o con el medio 199 (de la firma Serva), o con el 0.3-1.0% del extracto de la carne, con contenido de 5-6% de glucosa y el 0.1-1.0% de extracto de levadura, hasta obtener el valor del pe de 6.8-7.0. A la concentración de las blastosporas de la suspensión fúngica se ajustó hasta que sea del valor de hasta de 1-20 millones por ml. Después, la suspensión de las esporas así obtenida se colocó sobre el matraz de cultivos celulares o en una taza de Petra (con la capa de la altura del líquido de 2-5 mm) y fue incubada a la atmósfera de 5-6% de anhídrido carbónico y a la temperatura de 36-38ºC por el lapso de 2-4 horas. El proceso de la incubación se suspendió cuando, del 50% o de más células, se podían apreciar los tubos germinativos en estado de crecimiento.

Las blastosporas en crecimiento y las blastosporas en germinación, obtenidas según este método, tenían sus diámetros aumentados en 1.2 veces o más, en comparación con las blastosporas comunes.

Esta invención, en otra variante de su realización, muestra las cepas fúngicas altamente inmunológicas, que se describen en adelante. Estas cepas son útiles, básicamente, para la obtención de vacunas altamente inmunológicas, tal como lo demuestra esta invención. Todas las cepas fueron depositadas por el solicitante, de acuerdo con las estipulaciones del Convenio de Apestada, en la "Biblioteca Alemana de Microorganismos y de cultivos celulares" (BAM), Esclerodermias Weg 1 B, W-38124, Brunswick, Alemannia.

Trichophyton rubrum, Nº BNA-9469

Esta cepa fue depositada en la BNA, el 26 de octubre del año 1994, con el número de registro BNA-9469.

Esta cepa se obtuvo mediante la selección directa, basada en la producción de las esporas y la atenuación de la cepa epizoótica Nº 533, que fue identificada en la piel humana en el año 1985. La cepa se identificó utilizándose el código de Rebell-Taplin (Rebell G., Taplin D., "Reconocimiento e Identificación de los Dermatófitos", edición tercera, editorial de la Universidad de Miami, Coral Gables, Estado de Florida, EE. UU., 1978).

Las propiedades biológicas de esta cepa se describen en el cuadro A.

La cepa Nº BNA-9469 se diferencia, de la cepa epidémica (epidemial), por crecer más rápidamente en el medio o caldo de cultivo, por producir en un grado elevadamente extraordinario las microconidias y por presentar la virulencia más reducida.

Trichophyton rubrum, Nº BNA-9470

Esta cepa fue depositada en la BNA, el 26 de octubre del año 1994 con el número de registro BNA-9470.

Esta cepa se obtuvo mediante la selección directa, basada en la producción de las esporas y la atenuación de la cepa epizoótica Nº 533, que fue identificada en la piel humana en el año de 1990. La cepa se identificó utilizandose el código de Rebell-Taplin (Rebell G., Taplin D., "Reconocimiento e Identificación de los Dermatófitos", edición tercera, editorial de la Universidad de Miami, Coral Gables, Estado de Florida, EE. UU., 1978).

Las propiedades biológicas de esta cepa se describen en el cuadro B.

La cepa Nº BNA-9470 se diferencia, de la cepa epidémica (epidemial), por crecer más rápidamente en el medio o caldo de cultivo, por producir en un grado elevadamente extraordinario las microconidias y por presentar la virulencia más reducida.

Trichophyton rubrum, Nº BNA-9471

Esta cepa fue depositada en la BNA, el 26 de octubre del año 1994 con el número de registro BNA-9471.

Esta cepa se obtuvo mediante la selección directa, basada en la producción de las esporas y la atenuación de la cepa epizoótica Nº 620, que fue identificada en la piel humana en el año 1989. La cepa se identificó utilizándose el código de Rebell-Taplin (Rebell G., Taplin D., "Reconocimiento e Identificación de los Dermatófitos", edición tercera, editorial de la Universidad de Miami, Coral Gables, Estado de Florida, EE. UU., 1978).

Las propiedades biológicas de esta cepa se describen en el cuadro C.

La cepa Nº BNA-9471 se diferencia, de la cepa epidémica (epidemial), por crecer más rápidamente en el medio o caldo de cultivo, por producir en un grado elevadamente extraordinario las microconidias y por presentar la virulencia más reducida.

Trichophyton rubrum, Nº BNA-9472

Esta cepa fue depositada en la BNA, el 26 de octubre del año 1994 con el número de registro BNA-9472.

Esta cepa se obtuvo mediante la selección directa, basada en la producción de las esporas y la atenuación de la cepa epizoótica Nº 754, que fue identificada en la piel humana en el año 1990. La cepa se identificó utilizandose el código de Rebell-Taplin (Rebell G., Taplin D., "Reconocimiento e Identificación de los Dermatófitos", edición tercera, editorial de la Universidad de Miami, Coral Gables, Estado de Florida, EE. UU., 1978).

Las propiedades biológicas de esta cepa se describen en el cuadro D.

La cepa Nº BNA-9472 se diferencia, de la cepa epidémica (epidemial), por crecer más rápidamente en el medio o caldo de cultivo, por producir en un grado elevadamente extraordinario las microconidias y por presentar la virulencia más reducida.

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Candida albicans, Nº BNA-9456

Esta cepa fue depositada en la BNA, el 26 de octubre del año 1994 con el número de registro BNA-9456.

Esta cepa se obtuvo mediante la selección directa, basada en la estabilización de las características de cultivo-morfológicas y la atenuación de la cepa Nº 008-L, que fue identificada en el ser humano en el año 1990. La cepa se identificó utilizándose el código de Lodder (Lodder G., "Las levaduras: investigación taxonómica", Compañía Editora Nor-Holandesa, Amsterdam-Londres, 1970).

Las propiedades biológicas de esta cepa se describen en el cuadro E.

La cepa Nº BNA-9456 se diferencia, de la cepa epidémica (epidemial), por crecer más rápidamente en el medio o caldo de cultivo, por sus propiedades biológicas estables, y por producir, en un grado elevadamente extraordinario, la biomasa y por presentar la virulencia más reducida.

Candida albicans, Nº BNA-9457

Esta cepa fue depositada en la BNA, el 26 de octubre del año 1994 con el número de registro BNA-9457.

Esta cepa se obtuvo mediante la selección directa, basada en la estabilización de las características culturales-morfológicas y la atenuación de la cepa epidémica; Nº 012, que fue identificada en el ser humano en el año 1992. La cepa se identificó utilizándose el código de Lodder (Lodder G., "Las levaduras: investigación taxonómica", Compañía Editora Nor-Holandesa, Amsterdam-Londres, 1970).

Las propiedades biológicas de esta cepa se describen en el cuadro F.

La cepa Nº BNA-9457 se diferencia, de la cepa epidémica (epidemial), por crecer más rápidamente en el medio o caldo de cultivo, por sus propiedades biológicas estables, y por producir, en un grado elevadamente extraordinario, la biomasa y por presentar la virulencia más reducida.

Candida albicans, Nº BNA-9458

Esta cepa fue depositada en la BNA, el 26 de octubre del año 1994 con el número de registro BNA-9458.

Esta cepa se obtuvo mediante la selección directa, basada en la estabilización de las características culturales-morfológicas y la atenuación de la cepa epidémica Nº 047,

que fue identificada en el ser humano en el año 1989. La cepa se identificó utilizándose el código de Lodder (Lodder G., "Las levaduras: investigación taxonómica", Compañía Editora Nor-Holandesa, Amsterdam-Londres, 1970).

Las propiedades biológicas de esta cepa se describen en el cuadro G.

La cepa Nº BNA-9458 se diferencia, de la cepa epidémica (epidemial), por crecer más rápidamente en el medio o caldo de cultivo, por sus propiedades biológicas estables, y por producir, en un grado elevadamente extraordinario, la biomasa y por presentar la virulencia más reducida.

Candida albicans, Nº BNA-9459

Esta cepa fue depositada en la BNA, el 26 de octubre del año 1994 con el número de registro BNA-9459.

Esta cepa se obtuvo mediante la selección directa, basada en la estabilización de las características culturales-morfológicas y la atenuación de la cepa epidémica Nº 158, que fue identificada en el ser humano en el año 1990. La cepa se identificó utilizándose el código de Lodder (Lodder G., "Las levaduras: investigación taxonómica", Compañía Editora Nor-Holandesa, Amsterdam-Londres, 1970).

Las propiedades biológicas de esta cepa se describen en el cuadro H.

La cepa Nº BNA-9459 se diferencia, de la cepa epidémica (epidemial), por crecer más rápidamente en el medio o caldo de cultivo, por sus propiedades biológicas estables, y por producir, en un grado elevadamente extraordinario, la biomasa y por presentar la virulencia más reducida.

Las cepas Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 y Microsporum canis BNA-7281 fueron depositadas por el solicitante en la BNA, el 1 de octubre del año de 1992, de acuerdo con las estipulaciones del Convenio de Budapest y descritas por el solicitante, por ejemplo, en la solicitud para la patente PCT/EP92/02391, que fue publicada como la solicitud internacional 93/07894, del 29 de abril del año 1993.

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Cepas, depositadas por la firma Basotherm GmbH, 88396 Biberach an der Riss, Alemania

Por la firma Basotherm GmbH, Alemania, fueron depositadas las siguientes cepas:

Trichophyton rubrum, cepa Nº 533 (BNA-9469),

Trichophyton rubrum, cepa Nº 535 (BNA-9470),

Trichophyton rubrum, cepa Nº 620 (BNA-9471),

Trichophyton rubrum, cepa Nº 754 (BNA-9472),

Candida albicans, cepa Nº 008-L (BNA-9456),

Candida albicans, cepa Nº 012 (BNA-9457),

Candida albicans, cepa Nº 047 (BNA-9458),

Candida albicans, cepa Nº 158 (BNA-9459).

El depositario autorizó al solicitante referirse en la solicitud, sobre el material biológico depositado y le dio la autorización ilimitada e irrevocable para que el material depositado fuese accesible a la opinión pública, en correspondencia con la Regla 28 del AEP (Acuerdo Europeo de Patentes).

CUADRO A

1

CUADRO B

2

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CUADRO C

3

CUADRO D

5

6

CUADRO E

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7

CUADRO F

9

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CUADRO G

10

CUADRO H

12

13

Breve descripción de las figuras

Figura 1. Dinámica de los síntomas clínicos de las infecciones, provocadas por la especie Trichophyton rubrum, en los conejillos de indias (primer experimento, con el complejo I-I y I-II). Al equipararse la gravedad de la afección en grados en el grupo de control, la eficacia del complejo I-I, fue de los valores del 100%, 36.0%, 40.0% \hache 100%, y del complejo I-II, de los valores del 40.0%, 44.0%, 30.0% y 55.6%, en el transcurso de los 7, 13, 21 y 28 días, correspondientemente.

Figura 2. Dinámica de los síntomas clínicos de las infecciones, provocadas por la especie Trichophyton rubrum, en los conejillos de indias (segundo experimento, con el complejo II-I y II-II). Al equipararse la gravedad de la afección en grados en el grupo de control, la eficacia del complejo II-I, fue de los valores del 100%, 32.4%, 79.4% \hache 76.4%, y del complejo II-II, de los valores del 84.4%, 33.8%, 53.1% y 42.3%, en el transcurso de los 7, 15, 21 y 28 días, correspondientemente.

Figura 3. Dinámica de los síntomas clínicos de las infecciones, provocadas por la especie Trichophyton rubrum, en los conejillos de indias (tercer experimento, con el complejo III-I, III-II, III-III, y III-IV). Al equipararse la gravedad de la afección en grados en el grupo de control, la eficacia del complejo III-I, fue de los valores del 78.2%, 48.0%, 100.0% y 100%, del complejo III-II, de los valores de - 72.7%, 50.0%, 100.0% y 100%, del complejo III-III - 36.4%, 20.0%, 50.0% y 0%, del complejo III-IV - 9.1%, 20.0%, 43.8% y 37.5%, del complejo III-V - 34.5%, 36.0%, 35.0% y 20.0%, en el transcurso de los 7, 16, 21 y 28 días, correspondientemente. Se notó la disminución de la gravedad de la afección en puntos y la rápida recuperación de los animales vacunados con los complejos III-I y III-II.

Figura 4. Dinámica de los síntomas clínicos de las infecciones, provocadas por la especie Trichophyton mentagrophytes, en los conejillos de indias (tercer experimento, con el complejo III-I, III-II, III-III, III-IV y III-V). Al equipararse la gravedad de la afección en grados en el grupo de control, la eficacia del complejo III-I fue de los valores de 50.0%, 9.1%, 37.5% y 71.5%, del complejo III-II - de los valores de 55%, 13.6%, 33.3% y 69.2%, del complejo III-III - de los valores de 0%, 0%, 65.6% y 63.9%, del complejo III-IV - de los valores de 10.0%, 2.3%, 44.4% y 76.9%, y del complejo III-V - de los valores de 10.0%, 0%, 33.3% y 46.2%, en el transcurso de los 7, 16, 21 y 28 días, correspondientemente. En los conejillos de indias, vacunadas con el complejo III-I y III-II, los indicadores de la gravedad de los síntomas clínicos en puntos, al compararse con los valores obtenidos en el grupo de animales de control, fueron inferiores durante todo el período de la observación. En los conejillos de indias, vacunados con el complejo III-III, III-IV o III-V, los síntomas notables de la infección, provocadas por la especie Trichophyton mentagrophytes, se observaron por el transcurso de los 7 y 16 días, no obstante, en los siguientes plazos de observación, estas síntomas fueron significativamente reducidos, al compararse con los animales del grupo de control.

Figura 5. Dinámica de los síntomas clínicos de las infecciones, provocadas por la especie Trichophyton rubrum, en los conejos (primer experimento, con el complejo II-I). Al equipararse la gravedad de la afección en grados en el grupo de control, la eficacia del complejo II-I fue de los valores de 53.3%, 36.0%, 47.4% y 84.6% y 100%, días, dentro de los 7, 15, 21 y 28 días, correspondientemente.

Figura 6. Dinámica de los síntomas clínicos de las infecciones, provocadas por la especie Trichophyton rubrum, en los conejillos de indias (con el complejo IV-I, IV-II y IV-III). Al equipararse la gravedad de la afección en grados en el grupo de control, la eficacia del complejo IV-I fue de los valores de 28.6%, 19.1%, 91.3% y 100%, del complejo IV-II - 28.6%, 23,8%, 91.3% y 100%, y del complejo IV-III - 50%, 21.4%, 87.0% y 100%, dentro de los 7, 14, 23 y 28 días, correspondientemente. Los síntomas clínicos de la tricofitosis a los 7 días, fueron más notables en los animales vacunados con los complejos IV-II y IV-III, en comparación con los animales no vacunados en control, sin embargo, los indicadores promedios, de la gravedad de la afección, en los conejillos de indias vacunados (con los complejos IV-I, IV-II y IV-III), fueron significativamente más inferiores en el grupo en control dentro de los 14, 23 y 28 días, correspondientemente.

Figura 7. Dinámica de los síntomas clínicos de las infecciones, provocados por la especie Trichophyton rubrum, en los conejillos de indias (complejo IV-II). Al equipararse la gravedad de la afección en grados en el grupo de control, la eficacia del complejo IV-II, fue de los valores de 33.3%, 37.1%, 73.1% y 94.1%, dentro de los 10, 16, 22 y 29 días, correspondientemente.

Figura 8. Dinámica de la cantidad de conejillos de indias con síntomas clínicos de las infecciones, provocados por la especie Trichophyton rubrum (complejo IV-II). La cantidad de conejillos de indias, vacunados con el complejo IV-II, con síntomas clínicos de las infecciones provocadas por la especie Trichophyton rubrum, en comparación con la cantidad de animales en control no vacunados, en los diferentes plazos de observación.

Figura 9. Dinámica de los síntomas clínicos de las infecciones, provocados por la especie Trichophyton rubrum, en los conejos (complejo IV-II). Al compararse la gravedad de la afección en grados en el grupo de control, la eficacia del complejo IV-II fueron los valores de 30.8%, 65.6%, 79.2% y 88.9%, dentro de los 10, 16, 22 \hache 29 días, correspondientemente.

Figura 10. Dinámica de la cantidad de conejos con síntomas clínicos de las infecciones, provocadas por la especie Trichophyton rubrum. Cantidad de conejos, vacunados con el complejo IV-II, con síntomas clínicos de las infecciones, provocadas por la especie Trichophyton rubrum, en comparación con la cantidad de animales no vacunados del grupo de control, en los diferentes plazos de observaciones.

Figura 11. Dinámica de los síntomas clínicos de las infecciones, provocadas por la especie Trichophyton rubrum, en los conejillos de indias (complejos VI-I, VI-II, VI-III, VI-IV, VI-V, VI-VI). Al compararse la gravedad de la afección en grados, en el grupo de control, la eficacia del complejo VI-I, fueron del 100%, 45.8%, 76.5%, 85.7 y 50.0%, del complejo VI-II - 70.0%, 25.0%, 47.1%, 100% y 100%, del complejo VI-III - 80.0%, 29.2%, 52.9%, 100% y 100%, del complejo VI-IV - 60.0%, 29.2%, 48.5%, 100% y 100%, del complejo VI-V - 60.0%, 16.7%, 29.4%, 100% y -25%, y del complejo VI-VI - 60.0%, 12.5%, 100% y 75.0%, dentro de los 7, 13, 21, 28 días, correspondientemente.

Figura 12. Dinámica de los síntomas clínicos de las infecciones, provocadas por la especie Trichophyton mentagrophytes, en los conejillos de indias (complejos VI-I, VI-II, VI-III, VI-IV, VI-V, VI-VI). Al compararse la gravedad de la afección en grados, en el grupo de control, la eficacia del complejo VI-I, fueron de 20.0%, 20.0%, 44.4%, 84.6% y 84.6%, del complejo VI-II - de 13.3%, 16.0%, 27.8%, 46.2% y 76.9%, del complejo VI-III - de 33.3%, 20.0%, 38.9%, 30.8% y 92.3%, del complejo VI-IV - 20.0%, 20.0%, 33.3%, 46.2% y 61.5%, del complejo VI-V - 13.3%, 20.0%, 27.8%, 53.8% y 80.8%, y del complejo VI-VI - 26.7%, 20.0%, 38.9%, 76.9% y 92.3%, dentro de los 7, 13, 21, 28 y 33 días, correspondientemente.

Figura 13. Dinámica de los síntomas clínicos de las infecciones, provocadas por la especie Trichophyton rubrum, en los conejillos de indias (complejos VII-I, VII-II, VII-III, VII-IV, VII-V, VII-VI, VII-VII). Al compararse la gravedad de la afección, en grados, en el grupo de control, la eficacia del complejo VII-I, fue de 16.7%, 22.2%, 30.0% y 40.0%, del complejo VII-II - de 33.3%, 27.8%, 30.0% y 0%, del complejo VII-III - de 0.0%, 33.3%, 80.0% y 60.0%, del complejo VII-IV - de 100%, 11.1%, 60.0%, y 60.0%, del complejo VII-V - 33.3%, 33.3%, 50.0% y 60.0%, del complejo VII-VI - 33.3%, 16.7%, 60.0% y 60.0%, y del complejo VII-VII - de 75.0%, 36.1%, 85.0% y 70.0%, dentro de los 7, 14, 23 y 28 días, correspondientemente.

Figura 14. Dinámica de los síntomas clínicos de las infecciones, provocadas por la especie Trichophyton mentagrophytes, en los conejillos de indias (complejos VII-I, VII-II, VII-III, VII-IV, VII-V, VII-VI, VII-VII). Al compararse la gravedad de la afección, en grados, en el grupo de control, la eficacia del complejo VII-I, fue de -12.5%, 22.7%, 27.3% y 70.0%, del complejo VII-II - de -25%, 9.1%, 18.2% y 37.5%, del complejo VII-III - de -25%, 4.5%, 9.1% y 60.0%, del complejo VII-IV - -6.3%, 4.5%, 54.5% y 90.0%, del complejo VII-V - de -6.3%, 0%, 0%, y 40.0%, del complejo VII-VI - 6.3%, 13.6%, 9.1% y 50.0%, y del complejo VII-VII - 6.3%, 18.2%, 36.4% y 100%, dentro de los 7, 14, 23 y 28 días, correspondientemente.

Figura 15. Dinámica de los síntomas clínicos de las infecciones, provocadas por la especie Trichophyton rubrum, en los conejillos de indias [complejos VIII-I, VIII-I+H, control+H; donde H significa, que los animales fueron tratados con Hostacortin H (acetato-prednisolon)]. Al compararse la gravedad de la afección, en grados, en el grupo de control sin este tratamiento, la eficacia del complejo VIII-I, fue del 100%, 27.8%, 33.3% y 100%, del complejo VIII-I+H - del 40.0%, 27.8%, 0% y 100%, dentro de los 7, 14, 20 y 29 días, correspondientemente. Y al compararse la gravedad de la afección, en grados, en el grupo de control tratado con el Hostacortin H (acetato-prednisolon), la eficacia del complejo VIII-I, fue del 100%, 38.1%, 57.1% y 100%, y del complejo VIII-I+H - del -50%, 38.1%, 35.7% y 100%, dentro de los 7, 14, 20 y 29 días, correspondientemente.

Figura 16. Dinámica de los síntomas clínicos de las infecciones, provocadas por la especie Trichophyton mentagrophytes, en los conejillos de indias [complejos VIII-I, VIII-I+H, con el control+H; H significa, que los animales fueron tratados con el Hostacortin H (acetato-Prednisolon)]. Al compararse la gravedad de la afección, en grados, en el grupo de control sin este tratamiento, la eficacia del complejo VIII-I, fue del 20.0%, 25.0%, 44.4% y 100%, del complejo VIII-I+H - del 25.0%, 25.0%, 33.3% y 100%, dentro de los 7, 14, 20 y 29 días, correspondientemente. Y al compararse la gravedad de la afección, en grados, en el grupo de control tratado con el Hostacortin H (acetato-Prednisolon), la eficacia del complejo VIII-I, fue del 20.0%, 25.0%, 41.2% y 100%, y del complejo VIII-I+H - del 25.0%, 25.0%, 29.4% y 100%, dentro de los 7, 14, 20 y 29 días, correspondientemente.

Figura 17. Dinámica de lo síntomas clínicos de las infecciones, provocadas por las especie Candida albicans, en los conejillos de indias (complejo VIII-I). Al compararse la gravedad de la afección, en grados, en el grupo de animales de control sin el tratamiento, la eficacia del complejo VIII-I, fue del 6.3%, 11.1%, 100% y 100%, dentro de los 7, 14, 20 y 29 días, correspondientemente.

Figura.18. Dinámica de lo síntomas clínicos de las infecciones, provocadas por las especie Microsporum canis, en los conejillos de indias (complejo VIII-II). Al compararse la gravedad de la afección, en grados, en el grupo de animales de control sin el tratamiento, la eficacia del complejo VIII-II, fue del 6.3%, 9.5%, -9.1% y 90.0%, dentro de los 7, 14, 20 y 29 días, correspondientemente.

Figura.19. Dinámica de lo síntomas clínicos de las infecciones, provocadas por las especie Trichophyton rubrum, en los conejillos de indias (complejo VIII-II). Al compararse la gravedad de la afección, en grados, en el grupo de animales de control sin el tratamiento, la eficacia del complejo VIII-II, fue del 40.0%, 33.3%, 55.6% y 100%, dentro de los 7, 14, 20 y 29 días, correspondientemente.

Figura.19. Dinámica de lo síntomas clínicos de las infecciones, provocadas por las especie Trichophyton mentagrophytes, en los conejillos de indias (complejo VIII-II). Al compararse la gravedad de la afección, en grados, en el grupo de animales de control sin el tratamiento, la eficacia del complejo VIII-II, fue del 25.0%, 25.0%, 50.0% y 100%, dentro de los 7, 14, 20 y 29 días, correspondientemente.

Ejemplos Ejemplo 1

Los cultivos de las cepas de la especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9472 y de la Candida albicans BNA-9456, se utilizaron para obtener 1.5 l. de la vacuna. Cada una de las cepas, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 y Trichophyton rubrum BNA-9472, se cultivaron por separado en el agar del extracto de malta, en 3 matraces o frascos de Roux para cada cultivo, por el transcurso de 20 días a la temperatura de 28ºC. Mientras que la cepa de la especie Candida albicans BNA-9456 se cultivó en 2 frascos de Roux en el agar de Sabouraud, a la temperatura de los 28ºC por el transcurso de 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas BNA-7279 y BNA-9472 fueron recolectadas y homogeneizadas por separado en 500 ml. de solución acuosa compuesta de: el 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura. La concentración de las microconidias de cada homogenate se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. Para la obtención del 50% hasta el 100% de tubos germinales, cada suspensión de microconidias se fermentó por el transcurso de 1-2 días a la temperatura de 28ºC.

Las blastosporas de la cepa BNA-9456, fueron recolectadas mediante el lavado con 500 ml. de la solución fisiológica del cloruro de sodio. La concentración de blastosporas en suspensión se ajustó hasta que su valor sea de 60 millones por ml.

Se combinaron y mezclaron 500 ml. de cada cultivo en un solo contenedor. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1.5 l. del homogenate se le agregó 75 mg. de tiomersal. La mezcla fue incubada a la temperatura ambiente por el transcurso de 2 días.

La vacuna así obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas, en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardó a la temperatura de enfriamiento de 4ºC. La vacuna así obtenida, se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular. La eficacia de la vacuna, después de la infección de los conejillos de indias y los conejos con la cepa Trichophyton, puede apreciarse en los cuadros 9,10,11, 12,13,14,15,16,17,18 y en las figuras 2,3,4,5 (complejos II-I, III-I, VI-I).

Ejemplo 2

Los cultivos de las cepas de la especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9472 y de la Candida albicans BNA-9456, se utilizaron para obtener 1.5 l. de la vacuna. Las cepas Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 y Trichophyton rubrum BNA-9472 se cultivaron por separado en el agar del extracto de malta en 3 frascos de Roux para cada cultivo por el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Mientras que la cepa de la especie Candida albicans BNA-9456 se cultivó en 2 frascos de Roux en el agar de Sabouraud, a la temperatura de los 28ºC por el transcurso de 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas BNA-7279 y BNA-9472 fueron recolectadas y homogeneizadas por separado en 500 ml. de solución acuosa del 0.3% de proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y del 0.1% del extracto de la levadura. La concentración de las microconidias de cada homogenate se ajustó hasta que su valor sea de 60 millones por ml. Para la obtención del 50% hasta el 100% de tubos germinales, cada suspensión de microconidias se fermentó por el transcurso de 1-2 días a la temperatura de 28ºC. Después, las suspensiones celulares fueron lavadas 5 veces con la solución fisiológica de cloruro de sodio, mediante el proceso de la centrifugación (4000 rev/min), a la temperatura de 10ºC, por el lapso de 25 minutos para cada etapa de la centrifugación.

Las blastosporas de la cepa BNA-9456, fueron recolectadas mediante el lavado con 500 ml. de la solución fisiológica del cloruro de sodio. La concentración de blastosporas en suspensión se ajustó hasta que su valor sea del valor de 60 millones por ml.

Luego se combinaron 500 ml de cada cultivo y se mezclaron en un solo contenedor. El homogenate fue inactivado mediante el añadido de tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1.5 l. del homogenate se le agregó 75 mg. de tiomersal. La mezcla fue incubada a la temperatura ambiente por el transcurso de 2 días.

La vacuna así obtenida se vertió en un frasco, comprobándose la esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas, en conformidad con las metódicas adoptadas y se guardó a la temperatura de enfriamiento de 4ºC. La vacuna así obtenida, se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular. La eficacia de la vacuna, después de la infección de los conejillos de indias y los conejos con la cepa Trichophyton, puede apreciarse en los cuadros 11, 12,13,14, y en las figuras 3,4, (complejo III-II).

Ejemplo 3

Los cultivos de las cepas de la especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9472 y de la especie de la Candida albicans BNA-9456, se utilizaron para obtener 1.5 l. de la vacuna. Las cepas Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 y Trichophyton rubrum BNA-9472 se cultivaron por separado en el agar del extracto de malta, en 3 frascos de Roux para cada cultivo, por el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Mientras que la cepa de la especie Candida albicans BNA-9456 se cultivó en 2 frascos de Roux en el agar de Sabouraud, a la temperatura de 28ºC y por el transcurso de 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas BNA-7279 y BNA-9472 fueron recogidas y homogeneizadas por separado en 500 ml. de solución acuosa compuesta de: el 0.5% de la peptona de soya, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura. La concentración de microconidias de cada homogenate se ajustó hasta que sea del valor de 65 millones por ml. Para la obtención del 50% hasta el 100% de tubos germinales, cada suspensión de las microconidias fue fermentada por el transcurso de 1-2 días a la temperatura de los 28ºC. Las blastosporas de la cepa BNA-9456 se recolectaron mediante el lavado con 500 ml. de la solución fisiológica del cloruro de sodio. La concentración de blastosporas en suspensión se ajustó hasta que su valor sea de 60 millones por ml. Se combinaron 500 ml. de cada cultivo y se les mezclaron en un solo contenedor. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1.5 l. del homogenate se le agregó 75 mg. de tiomersal. La mezcla se incubó a al temperatura ambiente por el transcurso de 2 días.

La vacuna así obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas, en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardó a la temperatura de enfriamiento de 4ºC. La vacuna así obtenida, se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular. La eficacia de la vacuna, después de la infección de los conejillos de indias con la cepa Trichophyton, puede apreciarse en los cuadros 11, 12,13,14, y en las figuras 3,4, (complejo III-III).

Ejemplo 4

Los cultivos de las cepas de la especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9472 y de la especie de la Candida albicans BNA-9456, se utilizaron para obtener 1.5 l. de la vacuna. Las cepas Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 y Trichophyton rubrum BNA-9472 se cultivaron por separado en el agar del extracto de malta, en 3 frascos de Roux para cada cultivo, por el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Mientras que la cepa de la especie Candida albicans BNA-9456 se cultivó en 2 frascos de Roux en el agar de Sabouraud, a la temperatura de los 28ºC y por el transcurso de 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas BNA-7279 y BNA-9472 fueron recolectadas y homogeneizadas por separado en 500 ml de solución acuosa compuesta de: el 0.5% de la peptona de soya, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura. La concentración de las microconidias de cada homogenate se ajustó hasta que sea del valor de 55 millones por ml. Para la obtención del 50% hasta el 100% de tubos germinales, cada suspensión de las microconidias se fermentó por el transcurso de 1-2 días a la temperatura de los 28ºC. Las suspensiones celulares se lavaron 5 veces con la solución fisiológica del cloruro de sodio, mediante el proceso de la centrifugación (4000 rev/min), a la temperatura de 10ºC por el lapso de 25 minutos para cada etapa de la centrifugación.

Las blastosporas de la cepa BNA-9456 se recolectó mediante el lavado con 500 ml. de la solución fisiológica del cloruro de sodio. La concentración de las blastosporas en suspensión se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml.

Se combinaron 500 ml. de cada cultivo y se les mezclaron en un solo contenedor. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1.5 l. del homogenate se le agregó 75 mg. de tiomersal. La mezcla se incubó a al temperatura ambiente por el transcurso de 2 días.

La vacuna así obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas, en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardó a la temperatura de enfriamiento de 4ºC. La vacuna así obtenida, se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular. La eficacia de la vacuna, después de la infección de los conejillos de indias con la cepa Trichophyton, puede apreciarse en los cuadros 11, 12,13,14, y en las figuras 3,4, (complejo III-IV).

Ejemplo 5

Los cultivos de las cepas de la especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9469, Trichophyton rubrum BNA-9470, Trichophyton rubrum BNA-9471, Trichophyton rubrum BNA-9472 y de las especies Candida albicans BNA-9456, Candida albicans BNA-9457, Candida albicans BNA-9458, Candida albicans BNA-9459, se utilizaron para la obtención de 1.5 l. de la vacuna. Las cepas Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 y Trichophyton rubrum BNA-9472 se cultivaron por separado en el agar del extracto de malta, en 3 frascos de Roux para cada cultivo, por el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Mientras que la cepa de la especie Candida albicans BNA-9456 se cultivó en 2 frascos de Roux en el agar de Sabouraud, a la temperatura de los 28ºC por el transcurso de 3 días. Las cepas BNA-7279, BNA-9469, BNA-9470, BNA-9471 y BNA-9472 fueron cultivadas por separado en agar de extracto de malta, en 3 frascos de Roux para cada cultivo, por el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Mientras que cada una de las cepas de las especies, Candida albicans BNA-9456, BNA-9457, BNA-9458 y BNA-9459, fueron cultivadas en el agar de Sabouraud en 1 frasco de Roux, a la temperatura de 28ºC y por el transcurso de 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas, BNA-7279, BNA-9470, BNA-9471 y BNA-9472, fueron recolectadas y homogeneizadas por separado en 100 ml. de solución acuosa, compuesta de: el 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura. Luego, la masa fúngica de la cepa BNA-7279 fue homogeneizada en 500 ml. de solución del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y del 0.1% del extracto de la levadura. La concentración de micronidias de cada homogenate se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. Para la obtención del 50% hasta el 100% de tubos germinales, cada suspensión de las microconidias se fermentó por el transcurso de 1-2 días a la temperatura de los 28ºC. Al término del cultivo, 150 ml. de la suspensión de las cepas Trichophyton rubrum BNA-9469, BNA-9470, BNA-9471 y BNA-9472 se mezclaron en un solo contenedor.

Las blastosporas de las cepas, BNA-9456, BNA-9457, BNA-9458 y BNA-9459, se recolectaron mediante el lavado con 200 ml. de la solución fisiológica del cloruro de sodio. La concentración de blastosporas de cada suspensión se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. Luego, 150 ml. de suspensión de cada una de las cepas se mezclaron en un solo contenedor.

Se mezclaron en un solo contenedor 500 ml. de suspensión de células Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, 500 ml. de suspensión mezclada de las células Trichophyton rubrum BNA-9469, BNA-9470, BNA-9471 y BNA-9472 y 500 ml. de suspensión mezclada de las células Candida albicans BNA-9456, BNA-9457, BNA-9458 y BNA-9459. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:12500 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, al volumen de 1 l. del homogenate se le agregó 80 mg. de tiomersal. Finalmente, la mezcla se incubó a la temperatura ambiente durante un día.

La vacuna así obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas, en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardó a la temperatura de enfriamiento de 4ºC. La vacuna así obtenida, se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular.

Ejemplo 6

Los cultivos de las cepas de la especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9469, Trichophyton rubrum BNA-9471, Trichophyton rubrum BNA-9472, y de la especie Candida albicans BNA-9457, se utilizaron para la obtención de 1.5 l. de la vacuna. Mientras que las cepas de las especies, BNA-7279, BNA-9469, BNA-9471, y BNA-9472, se cultivaron por separado en el agar del extracto de malta, en 4 frascos de Roux para cada cultivo, por el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Cada una de las cepas de la especie, Candida albicans BNA-9456 y BNA-9457, se cultivaron en 1 frasco de Roux en el agar de Sabouraud, a la temperatura de 28ºC por el transcurso de 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas, BNA-9469, BNA-9471, y BNA-9472, fueron recolectadas y homogeneizadas por separado en 200 ml. de solución acuosa, compuesta de: el 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura. Luego, la masa fúngica de la cepa BNA-7279 fue homogeneizada en 500 ml. de la solución del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y del 0.1% del extracto de la levadura. La concentración de las microconidias de cada homogenate se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. Para la obtención del 50% hasta el 100% de tubos germinales, cada suspensión de las microconidias se fermentó por el transcurso de 1-2 días a la temperatura de los 28ºC. Al término del cultivo, 200 ml. de suspensión de las cepas Trichophyton rubrum BNA-9469, BNA-9470, BNA-9471 y BNA-9472 fueron mezcladas en un solo contenedor.

Las blastosporas de las cepas BNA-9456 y BNA-9457, se recolectaron mediante el lavado con 250 ml. de la solución fisiológica del cloruro de sodio. La concentración de las blastosporas de cada suspensión se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. Luego, 150 ml. de suspensión de cada una de las cepas se mezclaron en un solo contenedor.

Se mezclaron en un solo contenedor 500 ml. de suspensión de las células Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, 500 ml. de suspensión mezclada de células Trichophyton rubrum BNA-9469, BNA-9471 y BNA-9472, y 500 ml. de suspensión mezclada de las células Candida albicans BNA-9456 y BNA-9457. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:12500 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, al volumen de 1.5 l. del homogenate se le agregó 60 mg. de tiomersal. Finalmente, la mezcla se incubó a la temperatura ambiente durante 2 días.

La vacuna así obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas, en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardó a la temperatura de enfriamiento de 4ºC. La vacuna así obtenida, se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular.

La eficacia de la vacuna, después de la infección con la cepa Trichophyton, puede apreciarse en los cuadros 24-27 y en las figures 11 y12, después de la infección con las cepas Candida albicans - en el cuadro 44.

Ejemplo 7

Los cultivos de las cepas de la especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9472, y de las especies Candida albicans BNA-9456, Candida albicans BNA-9457, se utilizaron para la obtención de 1.5 l. de la vacuna. Mientras que las cepas de las especies, BNA-7279 y BNA-9472, se cultivaron por separado en el agar del extracto de malta, en 8 frascos de Roux para cada cultivo, por el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Cada una de las cepas de la especie, Candida albicans BNA-9456 y BNA-9457, se cultivaron en 1 frasco de Roux en el agar de Sabouraud, a la temperatura de los 28ºC por el transcurso de 3 días.

Las masas fúngicas de la cepa BNA-9472, fueron recolectadas y homogeneizadas por separado en 500 ml de solución acuosa, compuesta de: el 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura. Luego, la masa fúngica de la cepa BNA-7279 fue homogeneizada en 500 ml. de solución del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura. La concentración de las microconidias de cada homogenate se ajustó hasta que su valor sea de 50 millones por ml. Para la obtención del 50% hasta el 100% de tubos germinales, cada suspensión de las microconidias se fermentó por el transcurso de 1-2 días y a la temperatura de 28ºC.

Las blastosporas de las cepas BNA-9456 y BNA-9457, se recolectaron mediante el lavado con 250 ml. de solución fisiológica del cloruro de sodio. La concentración de las blastosporas de cada suspensión se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. Luego, 250 ml. de suspensión de cada una de las cepas se mezclaron en un solo contenedor.

Se mezclaron en un solo contenedor 500 ml. de suspensión de las células Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, 500 ml. de la suspensión mezclada de las células Trichophyton rubrum BNA-9472, y 500 ml. de suspensión mezclada de las células Candida albicans BNA-9456 y BNA-9457. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:12500 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, al volumen de 1.5 l. del homogenate se le agregó 60 mg. de tiomersal. Finalmente, la mezcla se incubó a la temperatura ambiente durante 2 días.

La vacuna así obtenida se vertió en un frasco, comprobándose la esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas, en conformidad con las metódicas adoptadas y se guardó a la temperatura de enfriamiento de 4ºC. La vacuna así obtenida, se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular.

Ejemplo 8

Los cultivos de las cepas de la especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9472, y de la especie Candida albicans BNA-9456, se utilizaron para la obtención de 1.5 l. de la vacuna. Mientras que las cepas de las especies, BNA-7279 y BNA-9472, se cultivaron por separado en el agar del extracto de malta, en 6 frascos de Roux para cada cultivo, por el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Las cepas de la especie, Candida albicans BNA-9456, se cultivaron en 2 frascos de Roux en el agar de Sabouraud, a la temperatura de 28ºC por el transcurso de 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas, BNA-7279 y BNA-9472, fueron recolectadas y homogeneizadas por separado en 500 ml de solución acuosa compuesta de: el 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura. La concentración de las microconidias de cada homogenate se ajustó hasta que sea del valor de 56 millones por ml. Para la obtención del 50% hasta el 100% de tubos germinales, cada suspensión de las microconidias se fermentó por el transcurso de 1-2 días a la temperatura de los 28ºC.

Las células de la cepa BNA-9456 fueron recolectadas y homogeneizadas en 5000 ml. del medio RPMI-1640 con glutamine-L (de la firma Serva). La concentración de las blastosporas en suspensión se ajustó hasta que sea del valor de 20 millones por ml. Se incubaron los 5000 ml. de esta suspensión celular de frascos de cultivo, que contenían el medio RPMI-1640, a la atmósfera del 5% de anhídrido carbónico a la temperatura de 36-38ºC. Pasadas las 4 horas de la incubación, del 50 al 100% de las blastosporas se encontraban en estado de crecimiento y contenían tubos germinales. Las blastosporas fueron recolectadas y lavadas tres veces mediante el proceso de la centrifugación (4000 rev/min), a la temperatura de 4-10ºC, por el lapso de 25 minutos, en cada etapa de la centrifugación. La concentración de las células se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:12500 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, al volumen de 1 l. del homogenate se le agregó 80 mg. de tiomersal. Finalmente, la mezcla se incubó a la temperatura ambiente durante 2 días.

Se combinaron y mezclaron 750 ml. de suspensión de células BNA-9456 y se mezclaron con 750 ml. de la mezcla, compuesta por la suspensión de las células BNA-7279 y BNA-9472. La vacuna así obtenida se vertió en un frasco, comprobándose la esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas, en conformidad con las metódicas adoptadas y se guardó a la temperatura de enfriamiento de 4ºC. La vacuna así obtenida, se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular. La eficacia de la vacuna, después de la infección de los conejillos de indias con la cepa Trichophyton, puede apreciarse en los cuadros 1, 2 y 5 (complejos I-I, III-I), y después de la infección con la cepa Trichophyton rubrum - en los cuadros 7, 8 y en la figura 1 (complejo I-I).

Ejemplo 9

Los cultivos de las cepas de la especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9469, Trichophyton rubrum BNA-9470, Trichophyton rubrum BNA-9471, Trichophyton rubrum BNA-9472 y de las especies Candida albicans BNA-9456, Candida albicans BNA-9457, Candida albicans BNA-9458, Candida albicans BNA-9459, se utilizaron para la obtención de 1.5 l. de la vacuna. Mientras que las cepas de las especies, BNA-7279, BNA-9469, BNA-9470, BNA-9471 y BNA-9472, se cultivaron por separado en el agar del extracto de malta, en 3 frascos de Roux para cada cultivo, por el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Cada una de las cepas de la especie, Candida albicans BNA-9456, BNA-9457, BNA-9458 y BNA-9459, se cultivaron por separado en 1 frasco de Roux en el agar de Sabouraud, a la temperatura de 28ºC, por el transcurso de 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas, BNA-9469, BNA-9470, BNA-9471 y BNA-9472, fueron recogidas y homogeneizadas por separado en 100 ml. de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura. La concentración de las microconidias de cada homogenate se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. Para la obtención del 50% hasta el 100% de tubos germinales, cada suspensión de las microconidias se fermentó por el transcurso de 2 días a la temperatura de los 28ºC. Al término de la cultivación, se mezclaron en un solo contenedor 150 ml. de cada suspensión de las células de las especies Trichophyton rubrum BNA-9469, BNA-9470, BNA-9471 \hache BNA-9472. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal en la proporción de 1:16000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1 l. del homogenate se le agregó 62.5 mg. de tiomersal. Luego la mezcla fue incubada a la temperatura ambiente por el transcurso de 2 días.

Las células de las cepas, BNA-9456, BNA-9457, BNA-9458 y de la BNA-9459, fueron recolectadas y homogeneizadas en el medio RPMI-1640 (de la firma Serva). La concentración de las blastosporas en suspensión, se ajustó hasta que sea del valor de 20 millones por ml. Se incubaron 1500 ml de cada suspensión celular de los frascos de cultivos, con el contenido del medio RPMI-1640, a la atmósfera del 6% de anhídrido carbónico a la temperatura de 36-38ºC. Dentro de 3 horas de la incubación, del 50 hasta el 100% de las blastosporas, se encontraban en estado de crecimiento y contenían tubos germinales. Las blastosporas fueron recolectadas y lavadas tres veces mediante el proceso de la centrifugación (4000 rev/min), a la temperatura de 4-10ºC por el lapso de 25 minutos, en cada etapa de la centrifugación. La concentración de las células se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:25000 (piso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1 l. del homogenate se le añadió 40 mg. de tiomersal. La mezcla fue incubada a la temperatura ambiente, por el transcurso de un día. Se combinaron 150 ml. de las suspensiones de las células BNA-9456, BNA-9457, BNA-9458 y BNA-9459 y se mezclaron en un solo contenedor. Se combinaron 500 ml. de la mezcla, compuesta por las suspensiones de las células BNA-9469, BNA-9470, BNA-9471 y BNA-9472, con 500 ml. de la suspensión de las células BNA-7279 y 500 ml. de la mezcla compuesta de las suspensiones de las células BNA-9456, BNA-9457, BNA-9458 y BNA-9459.

La vacuna así obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas, en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardó a la temperatura de enfriamiento de 4ºC. La vacuna así obtenida, se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular.

Ejemplo 10

Los cultivos de las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9469, Trichophyton rubrum BNA-9471, Trichophyton rubrum BNA-9472 y de las especies Candida albicans BNA-9456, Candida albicans BNA-9457, se utilizaron para obtener 1.5 l. de la vacuna. Las cepas, BNA-7279, BNA-9469, BNA-9471 y BNA-9472, fueron cultivadas por separado en el agar del extracto de malta, en 4 frascos de Roux, por el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Cada una de las cepas de la especie Candida albicans BNA-9456 y BNA-9457 se cultivaron por separado en 1 frasco de Roux en el agar de Sabouraud, a la temperatura de 28ºC por el transcurso de 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas, BNA-9469, BNA-9471 y BNA-9472, se recolectaron y homogeneizaron por separado en 100 ml. de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de levadura. La masa fúngica de la cepa BNA-7279 y la mezcla de las cepas BNA-9469, BNA-9471 y BNA-9472 fueron combinadas y homogeneizadas por separado en 500 ml. de solución acuosa del 0.3% de proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de levadura. La concentración de las macroconidias se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. del homogenate. Para la obtención del 50% hasta el 100% de tubos germinales, ambas suspensiones de microconidias fueron fermentadas por el transcurso de 1-2 días a la temperatura de 28ºC. Se combinaron, en un solo contenedor, 500 ml. de suspensión de las células de la especie Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 y 500 ml. de la suspensión mezclada de las células de las especies Trichophyton rubrum BNA-9469, BNA-9471 y BNA-9472. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal, en acuerdo con la proporción 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1 l. del homogenate se le agregó 50 mg. de tiomersal. Esta mezcla se incubó a la temperatura ambiente por el transcurso de 2 días.

Las células de las cepas BNA-9456 y BNA-9457 se recolectaron y homogeneizaron en el medio de cultivo RPMI-1640 (de la firma Serva). La concentración de las blastosporas en suspensión se ajustó hasta que sea del valor de 20 millones por ml. Se incubaron 1500 ml. de cada suspensión celular en los frascos de cultivo, con el medio de cultivo RPMI-1640, a la atmósfera del 5% del anhídrido carbónico, a la temperatura de 36-38ºC. Pasadas las 4 horas de la incubación, del 50 hasta el 100% de las blastosporas, generalmente se encontraban en el estado de crecimiento y contenían tubos germinales. Las blastosporas se recolectaron y lavaron, mediante el proceso de la centrifugación (a 5000 rev/min), a la temperatura de 4-10ºC, por el lapso de 20 minutos, en cada etapa de la centrifugación. La concentración de las células se ajustó hasta que sea del valor de 50 millones por ml. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1 l. del homogenate se le agregó 50 mg. de tiomersal. La mezcla se incubó a la temperatura ambiente por el transcurso de un día. Se combinaron 150 ml. de las suspensiones de las células BNA-9456 y BNA-9457 y se mezclaron en un solo contenedor. Se combinaron 500 ml. de la mezcla, compuesta por las suspensiones de las células BNA-9469, BNA-9471 y BNA-9472, con 500 ml. de la suspensión de células BNA-7279 y con 500 ml. de la mezcla de las suspensiones de las células BNA-9456 y BNA-9457.

La vacuna así obtenida se vertió en un frasco, comprobándosela esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas, en conformidad con las metódicas adoptadas y se guardó a la temperatura de enfriamiento de 4ºC. La vacuna así obtenida, se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular.

Ejemplo 11

Los cultivos de las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9472 y de las especies Candida albicans BNA-9456, Candida albicans BNA-9457 y Candida albicans BNA-9459, se utilizaron para la obtención de 1.5 l. de la vacuna. Cada una de las cepas, BNA-7279, BNA-9469 y BNA-9472, se cultivaron por separado en el agar del extracto de malta, en 6 frascos de Roux, por el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Y cada una de las cepas, Candida albicans BNA-9456, BNA-9457 y BNA-9459, fueron cultivadas en 1 frasco de Roux en el agar de Sabouraud, a la temperatura de 28C y por el transcurso de 3 días.

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Las masas fúngicas de las cepas BNA-7279 y BNA-9472 se recolectaron y homogeneizaron por separado en 500 ml. de solución acuosa del 0.3% de proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura. La concentración de las macroconidias se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. del homogenate. Para la obtención del 50% hasta el 100% de tubos germinales, ambas suspensiones de microconidias se fermentaron a la temperatura de 28ºC por el transcurso de 2 días. Se combinaron en un contenedor 500 ml. de suspensión de las células Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 con 500 ml. de suspensión de las células Trichophyton rubrum BNA-9472. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1l. del homogenate se le agregó 50 mg. de tiomersal. La mezcla se incubó a la temperatura ambiente por el transcurso de 2 días.

Las células de las cepas, BNA-9456, BNA-9457 y BNA-9459, se recolectaron y homogeneizaron por separado en el medio RPMI-1640 (de la firma Serva). La concentración de las blastosporas se ajustó hasta que sea del valor de 10 millones por ml. Se incubaron 2000 ml. de cada suspensión celular por separado, en tubos de cultivo de Petri con el medio RPMI-1640, a la atmósfera del 6% del anhídrido carbónico y a la temperatura de 38ºC. Pasadas las 3 horas de la incubación, del 50 hasta el 100% de las blastosporas generalmente se encontraban en el estado de crecimiento y contenían tubos germinales. Las blastosporas se reunieron y se lavaron tres veces, mediante el proceso de la centrifugación (de 5000 rev/min), a la temperatura de 4-10ºC, por el lapso de 25 minutos en cada etapa de la centrifugación. La concentración de las células se ajustó hasta que sea del valor de 20 millones por ml. Se mezclaron iguales volúmenes de las suspensiones celulares de cada cepa. La suspensión mezclada fue inactivada agregándosele tiomersal de acuerdo a la proporción de 1:20000 (peso/volumen).

Se mezclaron 500 ml. de esta suspensión con 1000 ml. de suspensión de las microconidias. La vacuna así obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas, en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardó a la temperatura de enfriamiento de 4ºC. La vacuna así obtenida, se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular.

Ejemplo 12

Los cultivos de las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9472 y de la especie Candida albicans BNA-9456, se utilizaron para la obtención de 1.5 l. de la vacuna. Las cepas BNA-7279 y BNA-9472, se cultivaron por separado en el agar de extracto de malta, en 6 frascos de Roux, para cada cultivo, por el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. La cepa Candida albicans BNA-9456, se cultivó en 2 frascos de Roux en el agar de Sabouraud, por el transcurso de 3 días y a la temperatura de 28ºC.

Las masas fúngicas de las cepas BNA-7279 y BNA-9472, se recolectaron y homogeneizaron por separado en 500 ml. de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura. La concentración de las macroconidias se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. del homogenate. Para la obtención del 50% hasta el 100% de tubos germinales, ambas suspensiones de microconidias fueron fermentadas por el transcurso de 2 días y a la temperatura de los 28ºC. En un contenedor se mezclaron 500 ml. de suspensión de células Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 con 500 MJI de suspensión de las células Trichophyton rubrum BNA-9472. Las blastosporas de la cepa BNA-9456, fueron recolectadas y lavadas con 500 ml. de agua destilada. La concentración de las blastosporas en suspensión se ajustó hasta que sea del valor de 56 millones por ml.

Se mezclaron 500 ml. de esta suspensión con la suspensión de las microconidias. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1 l. del homogenate se le agregó 50 mg. de tiomersal. La mezcla se incubó a la temperatura ambiente por el transcurso de 2 días.

Al término del proceso de la inactivación, la suspensión celular fue tratada con el agua oxigenada. La sustancia, con agua oxigenada, por ejemplo, la adición compuesta de la urea con el agua oxigenada, se le agregó a la suspensión celular, obteniéndose así la concentración final del agua oxigenada del 3%. La suspensión celular obtenida se mezcló durante las 24 horas. Las células así tratadas se lavaron cinco veces durante 30 minutos, con el agua destilada mediante el proceso de la centrifugación (4000 rev/min). La concentración final de las células, se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml.

La vacuna obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas, en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardó a la temperatura de enfriamiento de 4ºC. La vacuna así obtenida, se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular. La eficacia de la vacuna, después de la infección de los ratones con la cepa Candida albicans, puede apreciarse en el cuadro 6 (complejo 4-I), y después de la infección de los conejillos de indias con la cepa Trichophyton - en los cuadros 11, 12, 13, 14, y en las figuras 3,4 (complejo III-V).

Ejemplo 13

Los cultivos de las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9469, Trichophyton rubrum BNA-9470, Trichophyton rubrum BNA-9471, Trichophyton rubrum BNA-9472 y de las especies Candida albicans BNA-9456, Candida albicans BNA-9457, Candida albicans BNA-9458, Candida albicans BNA-9459, se utilizaron para la obtención de 1.5 l de la vacuna. Cada una de las cepas, BNA-7279, BNA-9469, BNA-9470, BNA-9471 y BNA-9472, se cultivaron por separado en el agar del extracto de malta, en 3 frascos de Roux para cada cultivo, en el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Mientras que cada una de las cepas de la Candida albicans, BNA-9456, BNA-9457, BNA-9458 y BNA-9459, se cultivaron en 1 frasco de Roux en el agar de Sabouraud, a la temperatura de 28ºC y en el transcurso de 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas, BNA-9469, BNA-9470, BNA-9471 y BNA-9472, se recolectaron, combinaron y homogeneizaron en 100 ml de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura.

Las masas fúngicas de la cepa BNA-7279 y de la mezcla de las cepas, BNA-9469, BNA-9470, BNA-9471 y BNA-9472, se recolectaron y homogeneizaron por separado en 500 ml de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de levadura. La concentración de las microconidias se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. del homogenate. Para la obtención del 50% hasta el 100% de tubos germinales, ambas suspensiones de las microconidias se fermentaron en el transcurso de 1-2 días y a la temperatura de 28ºC. En un solo contenedor se mezclaron 500 ml. de la suspensión de las células Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 con 500 ml de la suspensión mixta de las células Trichophyton rubrum BNA-9469, BNA-9470, BNA-9471 y BNA-9472.

Las blastosporas de las cepas, BNA-9456, BNA-9457, BNA-9458 y BNA-9459, se recolectaron lavándolas con 200 ml de agua destilada. La concentración de las blastosporas se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. Luego se mezclaron 150 ml. de cada suspensión.

Se combinaron 500 ml. de la suspensión obtenida con la suspensión de las microconidias. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1 l. del homogenate se le agregó 50 mg. de tiomersal. La mezcla se incubó a la temperatura ambiente en el transcurso de 2 días. Después de la inactivación, la suspensión celular fue tratada con el permanganato de sodio, en la concentración de 1:10000 (peso/volumen), por el transcurso de 16 horas durante el mezclado. Las células así tratadas se lavaron cinco veces con el agua destilada, mediante el proceso de la centrifugación (4000 rev/min), por el lapso de 25 minutos, en cada etapa de la centrifugación. La concentración final se ajustó hasta que sea del valor de 40 millones por ml.

La vacuna obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas, en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardó a la temperatura de enfriamiento de 4ºC. La vacuna así obtenida, se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular.

Ejemplo 14

Los cultivos de las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9469, Trichophyton rubrum BNA-9471 y Trichophyton rubrum BNA-9472 y de las especies, Candida albicans BNA-9456, Candida albicans BNA-9457, se utilizaron para la obtención de 1.5 l. de la vacuna. Cada una de las cepas, BNA-7279, BNA-9469, BNA-9471 y BNA-9472, se cultivaron por separado en el agar del extracto de malta en 4 frascos de Roux, para cada cultivo, en el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Mientras que cada una de las cepas de la Candida albicans BNA-9456 y BNA-9457, se cultivaron en 1 frasco de Roux en el agar de Sabouraud a la temperatura de 28ºC y por el transcurso de 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas, BNA-9469, BNA-9471 y BNA-9472, se recolectaron, combinaron y homogeneizaron en 100 ml. de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura. Las masas fúngicas de la cepa BNA-7279 y de la mezcla de las cepas, BNA-9469, BNA-9471 y BNA-9472, se recolectaron y homogeneizaron por separado en 500 ml. de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura.

La concentración de las microconidias se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml del homogenate. Para la obtención del 50% hasta el 100% de tubos germinales, ambas suspensiones de las microconidias se fermentaron en el transcurso de 1-2 días y a la temperatura de 28ºC. En un solo contenedor se mezclaron 500 ml. de la suspensión de las células Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 con 500 ml de la suspensión mixta de las células Trichophyton rubrum BNA-9469, BNA-9471 y BNA-9472.

Las blastosporas de las cepas, BNA-9456 y BNA-9457, se recolectaron lavándolas con 200 ml. de solución fisiológica del cloruro de sodio. La concentración de las blastosporas en suspensión se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. Luego se mezclaron 250 ml. de cada suspensión.

Se combinaron 500 ml. de la suspensión obtenida con la suspensión de las microconidias. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1 l. del homogenate se le agregó 50 mg. de tiomersal. La mezcla se incubó a la temperatura ambiente en el transcurso de 2 días.

Después de la inactivación, la suspensión celular fue tratada con el agua oxigenada. A la suspensión celular se le agregó agua oxigenada, en forma de tabletas, hasta que la concentración final del agua oxigenada sea del valor del 1%. La suspensión de las células se mezclaron durante las 24 horas. Las células así tratadas se lavaron cinco veces con el agua destilada, mediante el proceso de la centrifugación (4000 rev/min), por el lapso de 30 minutos, en cada etapa de la centrifugación. La concentración final se ajustó hasta que sea del valor de 50 millones por ml.

La vacuna obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas, en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardó a la temperatura de enfriamiento de 4ºC. La vacuna así obtenida, se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular.

Ejemplo 15

Los cultivos de las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9472 y de las especies Candida albicans BNA-9456, Candida albicans BNA-9457 y Candida albicans BNA-9459, se utilizaron para la obtención de 1.5 l de la vacuna. Cada una de las cepas, BNA-7279 y BNA-9472, se cultivaron por separado en el agar del extracto de malta en 6 frascos de Roux para cada cultivo, en el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Mientras que cada una de las cepas de la Candida albicans BNA-9456, BNA-9457 y BNA-9459, se cultivaron en 1 frasco de Roux para cada cultivo en el agar de Sabouraud a la temperatura de 28ºC y por el transcurso de 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas, BNA-7279 y BNA-9472, se recolectaron y homogeneizaron por separado en 500 ml de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura. La concentración de las microconidias se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml del homogenate. Para la obtención del 50% hasta el 100% de tubos germinales, ambas suspensiones de las microconidias se fermentaron en el transcurso de 1-2 días y a la temperatura de 28ºC. En un solo contenedor se mezclaron 500 ml. de la suspensión de las células Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 con 500 ml. de la suspensión mixta de las células Trichophyton rubrum BNA-9472.

Las blastosporas de las cepas, BNA-9456, BNA-9457 y BNA-9459, se recolectaron lavándolas con 200 ml. de solución fisiológica del cloruro de sodio. La concentración de las blastosporas en suspensión se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. Luego se mezclaron 250 ml. de cada suspensión.

Se combinaron 500 ml. de la suspensión obtenida con la suspensión de las microconidias. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1 l. del homogenate se le agregó 50 mg. de tiomersal. La mezcla se incubó a la temperatura ambiente en el transcurso de 2 días.

Después de la inactivación, la suspensión celular fue tratada con el permanganato de sodio, en la concentración de 1:20000 (peso/volumen), en el transcurso de 36 horas durante el mezclado. Las células así tratadas se lavaron cinco veces con el agua destilada, mediante el proceso de la centrifugación (4000 rev/min), por el lapso de 25 minutos, en cada etapa de la centrifugación.

La concentración final se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. La vacuna obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas, en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardó a la temperatura de enfriamiento de 4ºC. La vacuna así obtenida, se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular.

Ejemplo 16

Los cultivos de las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9472 y de la especie Candida albicans BNA-9456, se utilizaron para la obtención de 1.5 l de la vacuna. Cada una de las cepas BNA-7279 y BNA-9472, se cultivaron por separado en el agar del extracto de malta en el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Mientras que la cepas de la Candida albicans BNA-9456, se cultivaron en 2 frascos de Roux en el agar de Sabouraud a la temperatura de 28ºC y en el transcurso de 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas, BNA-7279 y BNA-9472, se recolectaron y homogeneizaron por separado en 200 ml de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura. La concentración de las micronidias se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml del homogenate. Para la obtención del 50% hasta el 100% de tubos germinales, ambas suspensiones de microconidias se fermentaron durante 1-2 días a la temperatura de 28ºC. En un solo contenedor se mezclaron 500 ml de suspensión de células de la especie Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 con 500 ml de la suspensión de células de la especie Trichophyton rubrum BNA-9472. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1 l. del homogenate se le agregó 50 mg. de tiomersal. Luego, la mezcla se incubó a la temperatura ambiente durante 2 días.

Al término de la inactivación, la suspensión de las células fue tratada con el agua oxigenada. La sustancia, con el contenido del agua oxigenada, por ejemplo, la adición compuesta del agua oxigenada con la urea (H_{2}NCONH_{2}-H_{2}O_{2}), se le agregó a la suspensión celular, hasta que la concentración final del agua oxigenada sea del valor del 3%. La suspensión celular se mezcló durante las 24 horas. Las células así tratadas se lavaron cinco veces con el agua destilada, mediante el proceso de la centrifugación (4000 rev/min), por el lapso de 30 minutos en cada etapa de la centrifugación. La concentración final de las células se ajustó hasta que sea del valor de 40 millones por ml.

Las células de la cepa BNA-9456, se recolectaron y homogeneizaron en el medio RPMI-1640 (de la firma Serva). La concentración de las blastosporas se ajustó hasta que sea del valor de 20 millones por ml. Se incubaron 2000 ml. de esta suspensión celular en los frascos de cultivo con el medio RPMI-1640, a la atmósfera del 5% del anhídrido carbónico, a la temperatura de 36-38ºC. Pasadas las 4 horas de la incubación, del 50 hasta el 100% de las blastosporas contenían generalmente los tubos germinales o se encontraban en estado de crecimiento. Las blastosporas se recogieron y lavaron tres veces, mediante el proceso de la centrifugación (4000 rev/min), a la temperatura de 4-10ºC y por el lapso de 25 minutos, en cada etapa de la centrifugación. La concentración de las células se ajustó hasta que sea del valor de 40 millones por ml. La suspensión se inactivo agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:25000 (peso/volumen).

Al término de la inactivación, la suspensión de las células fue tratada con el agua oxigenada. La sustancia, con el contenido de agua oxigenada, por ejemplo la adición compuesta del agua oxigenada con la urea (H_{2}NCONH_{2}-H_{2}O_{2}), se agregó a la suspensión celular hasta que la concentración del agua oxigenada adquiera el valor del 3%. Luego, la suspensión celular se mezcló durante las 24 horas. Las células así tratadas, se lavaron cinco veces por el lapso 30 minutos con el agua destilada, mediante la centrifugación (4000 rev/min). La concentración final de las células se ajustó hasta que sea del valor de 120 millones por ml. Luego se mezclaron 500 ml de esta suspensión con 1000 ml de la suspensión de las microconidias.

La vacuna obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas, en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardó a la temperatura de enfriamiento de 4ºC. La vacuna así obtenida, se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular. La eficacia de la vacuna, después de la infección de los ratones con la cepa Candida albicans, puede apreciarse en los cuadros 1, 2, 3, 4, 5 (complejo I-II, 2-I, 3-II), y después de la infección de los conejillos de indias con la cepa Trichophyton rubrum - en los cuadros 7 y 8, y en la figura 1 (complejo I-II).

La eficacia de la vacuna, después de la infección de los ratones con la cepa de la especie Candida albicans, se muestran en los cuadros 1, 2, 3, 4, 5 (complejos I-II, 2-I, 3-II), y después de la infección de los conejillos de indias con la cepa de la especie Trichophyton rubrum - en los cuadros 7, 8 y en la figura1 (complejo I-II).

Ejemplo 17

Los cultivos de las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9469, Trichophyton rubrum BNA-9470, Trichophyton rubrum BNA-9471, Trichophyton rubrum BNA-9472 y de las especies Candida albicans BNA-9456, Candida albicans BNA-9457, Candida albicans BNA-9458, Candida albicans BNA-9459, se utilizaron para la obtención de 1.5 l. de la vacuna. Cada una de las cepas, BNA-7279, BNA-9469, BNA-9470, BNA-9471 y BNA-9472, se cultivaron por separado en el agar del extracto de malta, en 3 frascos de Roux para cada cultivo, en el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Mientras que cada una de las cepas de la Candida albicans BNA-9456, BNA-9457, BNA-9458 y BNA-9459, se cultivaron en 1 frasco de Roux en el agar de Sabouraud a la temperatura de 28ºC y en el transcurso de 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas, BNA-9469, BNA-9470, BNA-9471 y BNA-9472, se recolectaron, combinaron y homogeneizaron en 100 ml. de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura. Las masas fúngicas de la cepa BNA-7279 y de la mezcla de las cepas, BNA-9469, BNA-9470, BNA-9471 y BNA-9472, se recolectaron y homogeneizaron por separado en 500 ml. de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura. La concentración de las microconidias se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. del homogenate.

Para la obtención del 50% hasta el 100% de tubos germinales, ambas suspensiones de microconidias se fermentaron durante 1-2 días a la temperatura de 28ºC. En un solo contenedor se mezclaron 500 ml. de suspensión de células de la especie Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 con 500 ml de la suspensión mixta de células de la especie Trichophyton rubrum BNA-9469, BNA-9470, BNA-9471 y BNA-9472. El homogenate se inactivo agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1 l. del homogenate se le agregó 50 mg. de tiomersal. Luego, la mezcla se incubó a la temperatura ambiente durante 2 días.

Al término de la inactivación, la suspensión de las células fue tratada con el permanganato de sodio, con la concentración de 1:30000 (peso/volumen), durante las 24 horas al realizarse el mezclado. Las células así tratadas se lavaron cinco veces con el agua destilada, mediante el proceso de la centrifugación (4000 rev/min), por el lapso de 25 minutos en cada etapa de la centrifugación. La concentración final de las células se ajustó hasta que alcance el valor de 60 millones por ml.

Al término de la inactivación, la suspensión de células fue tratada con el agua oxigenada. La sustancia, con el contenido de agua oxigenada, por ejemplo la adición compuesta del agua oxigenada con la urea, se agregó a la suspensión celular hasta que la concentración del agua oxigenada adquiera el valor del 3%. Luego, la suspensión celular se mezcló durante las 24 horas. Las células así tratadas, se lavaron cinco veces en el lapso 30 minutos con el agua destilada, mediante la centrifugación (4000 rev/min). La concentración final de las células se ajustó hasta que alcance el valor de 40 millones por ml.

Las células de las cepas, BNA-9456, BNA-9457, BNA-9458 y BNA-9459, se recolectaron y homogeneizaron por separado en el medio RPMI-1640. La concentración de las blastosporas se ajustó hasta que alcance el valor de 20 millones por ml. 130 ml. de las suspensiones celulares fueron incubadas en los frascos de cultivo,que contenían el medio RPMI-1640, a la atmósfera del 5%, de anhídrido carbónico y a la temperatura de 38ºC. Pasadas las 3 horas de la incubación, del 50 hasta el 100% de las blastisporas, generalmente contenían tubos germinales o se encontraban en el estado de crecimiento. Las blastosporas fueron recolectadas y lavadas 2-3 veces mediante el proceso de la centrifugación (4000 rev/min), a la temperatura de 4-10ºC por el lapso de 25 minutos en cada etapa de la centrifugación. La concentración de las células se ajustó hasta que alcance el valor de 40 millones por ml. La suspensión fue inactivada agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:25000 (peso/volumen).

Al término de la inactivación, las suspensión de las células fue tratada con el agua oxigenada. A la suspensión celular se le agregó agua oxigenada en la forma de tabletas, hasta que la concentración final del agua oxigenada adquiera el valor de 3%. La suspensión celular se mezcló durante las 24 horas. Las células tratadas se lavaron cinco veces con el agua destilada, en el lapso de 30 minutos, mediante el proceso de centrifugación (4000 rev/min). La concentración final se ajustó hasta que alcance el valor de 60 millones por ml.

Luego se mezclaron 500 ml. de esta suspensión con 1000 ml. de la suspensión de las microconidias. La vacuna obtenida se vertió en un frasco, se comprobó su esterilidad, su con fiabilidad y propiedades inmunológicas en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardó a la temperatura de enfriamiento de 4ºC. La vacuna así obtenida, se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular.

Ejemplo 18

Los cultivos de las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9469, Trichophyton rubrum BNA-9471, Trichophyton rubrum BNA-9472 y de la especies Candida albicans BNA-9456, Candida albicans BNA-9457, se utilizaron para la obtención de 1.5 l. de la vacuna. Cada una de las cepas, BNA-7279, BNA-9469, BNA-9471 y BNA-9472, se cultivaron por separado en el agar del extracto de malta en 4 frascos de Roux, por el transcurso de los 20 días y a la temperatura de 28ºC. Mientras que cada una de las cepas de la Candida albicans BNA-9456 y BNA-9457, se cultivaron en 1 frasco de Roux en el agar de Sabouraud a la temperatura de 28ºC y en el transcurso de los 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas, BNA-9469, BNA-9471 y BNA-9472, se recolectaron, combinaron y homogeneizaron en 100 ml. de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de levadura.

Las masas fúngicas de la cepa BNA-7279 y de la mezcla de las cepas, BNA-9469, BNA-9471 y BNA-9472, se recolectaron y homogeneizaron por separado en 500 ml. de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de levadura. La concentración de las micronidias se ajustó hasta que alcance el valor de 60 millones por ml. del homogenate. Para la obtención del 50% hasta el 100% de tubos germinales, ambas suspensiones de microconidias se fermentaron durante 1-2 días a la temperatura de 28ºC. En un solo contenedor se mezclaron 500 ml. de suspensión de células de la especie Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 con 500 ml. de la suspensión mixta de células de la especie Trichophyton rubrum BNA-9469, BNA-9471 y BNA-9472. El homogenate se inactivo agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1 l. del homogenate se le agregó 50 mg. de tiomersal. Luego, la mezcla se incubó a la temperatura ambiente durante 2 días.

Al término de la inactivación, las suspensión de las células fue tratada con el agua oxigenada. A la suspensión celular se le agregó agua oxigenada en la forma de tabletas, hasta que la concentración final del agua oxigenada adquiera el valor de 2%. La suspensión celular se mezcló durante las 36 horas. Las células tratadas se lavaron cinco veces con agua destilada, por el lapso de 25 minutos, mediante el proceso de centrifugación (4000 rev/min). La concentración final se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml.

Los cultivos de las células de las cepas, BNA-9456 y BNA-9457, se recolectaron y homogeneizaron por separado, en el medio RPMI-1640 (de la firma Serva). La concentración de las blastosporas se ajustó hasta que sea del valor de 10-20 millones por ml. 130 ml. de las suspensiones celulares se incubaron en frascos de cultivo, que contenían el medio RPMI-1640, a la atmósfera del 6% del anhídrido carbónico y a la temperatura de 36-38ºC. Pasadas las 3 horas de la incubación, del 50 hasta el 100% de las blastosporas generalmente contenían tubos germinales o se encontraban en el estado de crecimiento. Las blastosporas se recolectaron y se lavaron tres veces, mediante el proceso de la centrifugación (4000 rev/min), a la temperatura de 4-10ºC y por el lapso de 25 minutos en cada etapa de la centrifugación. La concentración de las células se ajustó hasta sea del valor de 40 millones por ml. La suspensión fue inactivada agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:25000 (peso/volumen).

Al término de la inactivación, las suspensión de las células fue tratada con el agua oxigenada. A la suspensión celular se le agregó agua oxigenada en la forma de tabletas, hasta que la concentración final del agua oxigenada adquiera el valor del 3%. La suspensión celular se mezcló durante las 24 horas. Las células tratadas se lavaron cinco veces con agua destilada, en el lapso de 30 minutos, mediante el proceso de centrifugación (4000 rev/min). La concentración final se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml.

\newpage

Luego se mezclaron 500 ml. de esta suspensión con 1000 ml. de la suspensión de las microconidias. La vacuna obtenida se vertió en un frasco, se comprobó su esterilidad, su con fiabilidad y propiedades inmunológicas en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardó a la temperatura de enfriamiento de 4ºC. La vacuna así obtenida, se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular.

Ejemplo 19

Los cultivos de las cepas de la especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9472 \hache de la especie Candida albicans BNA-9456, Candida albicans BNA-9457 y BNA-9459, se utilizaron para la obtención de 1.5 l de la vacuna. Las cepas, BNA-7279 y BNA-9472, se cultivaron por separado en el agar de extracto de malta en 6 frascos de Roux, para cada cultivo, por el transcurso de 28ºC. Mientras que cada una las cepas de la Candida albicans, BNA-9456, BNA-9457 y BNA-9459, se cultivaron por separado en 1 frasco de Roux, en el agar de Sabouraud, a la temperatura de 28ºC y en el transcurso de los 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas, BNA-7279 y BNA-9472, se recolectaron y homogeneizaron en 100 ml. de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de levadura. Las masas fúngicas de la cepa BNA-7279 y de la mezcla de las cepas, BNA-9469, BNA-9471 y BNA-9472, se recolectaron y homogeneizaron por separado en 500 ml de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura. Y las masas fúngicas de las cepas, BNA-7279 y BNA-9472, se recolectaron y homogeneizaron por separado en 500 ml de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura. La concentración de las microconidias se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. del homogenate. Para la obtención del 50% hasta el 100% de tubos germinales, ambas suspensiones de las microconidias se fermentaron durante 1-2 días a la temperatura de 28ºC. En un solo contenedor se mezclaron 500 ml. de suspensión de células de la especie Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 con 500 ml de la suspensión mixta de células de la especie Trichophyton rubrum BNA-9472. El homogenate se inactivo agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1l. del homogenate se le agregó 50 mg. de tiomersal. Luego, la mezcla se incubó a la temperatura ambiente durante 2 días.

Al término de la inactivación, la suspensión de las células fue tratada con el permanganato de sodio, en la concentración de 1:30000 (peso/volumen), por el transcurso de 24 horas durante el mezclado. Las células así tratadas se lavaron cinco veces con el agua destilada, mediante el proceso de la centrifugación (4000 rev/min), en el lapso de 25 minutos en cada etapa de centrifugación. La concentración final de las células se ajustó hasta que sea del valor de 40 millones por ml.

Las células de las cepas, Candida albicans BNA-9456, BNA-9457 y BNA-9459, se recolectaron y homogeneizaron por separado en el medio RPMI-1640 (de la firma Serva).

La concentración de las blastosporas se ajustó hasta que sea del valor de 20 millones por ml. 130 ml de las suspensiones celulares se incubaron en frascos de cultivo, que contenían el medio RPMI-1640, a la atmósfera del 6% del anhídrido carbónico y a la temperatura de 36-38ºC. Pasadas las 4 horas de la incubación, del 50 hasta el 100% de las blastosporas generalmente contenían tubos germinales o se encontraban en el estado de crecimiento. Las blastosporas se recolectaron y se lavaron tres veces, mediante el proceso de la centrifugación (4000 rev/min), a la temperatura de 4-10ºC y por el lapso de 30 minutos en cada etapa de la centrifugación. La concentración de las células se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. Se mezclaron iguales volúmenes de suspensiones celulares de cada cepa. La suspensión mixta fue inactivada agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:11000 (peso/volumen).

Al término de la inactivación, la suspensión de las células fue tratada con el permanganato de sodio, de la concentración de 1:20000 (peso/volumen), por el transcurso de las 24 horas durante el mezclado. Las células así tratadas se lavaron cinco veces con el agua destilada, mediante el proceso de la centrifugación (4000 rev/min), en el lapso de 25 minutos en cada etapa de la centrifugación. La concentración final de las células se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml.

Finalmente se mezclaron 500 ml de esta suspensión con 1000 ml de la suspensión de las microconidias. La vacuna obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas, en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardó a la temperatura de enfriamiento de 4ºC. La vacuna así obtenida, se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular. La eficacia de la vacuna, después de la infección con la cepa Trichophyton, puede apreciarse en los cuadros 24-27 y en las figures 11 y 12, después de la infección con la cepa Candida albicans - en el cuadro 44 (complejo VI-VI).

Ejemplo 20

Los cultivos de las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9472 \hache Candida albicans BNA-9456, se utilizaron para la obtención de 1.5 l de la vacuna. Las cepas BNA-7279 y BNA-9472, se cultivaron por separado en el agar del extracto de malta, en 6 frascos Roux, para cada cultivo, por el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Y cada una de las cepas de la Candida albicans BNA-9456, se cultivaron por separado en 2 frascos de Roux en el agar de Sabouraud, a la temperatura de 28ºC y por el transcurso de 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas, BNA-7279 y BNA-9472, se recolectaron y homogeneizaron por separado en 500 ml. de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de levadura. La concentración de las microconidias se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml del homogenate. En un solo contenedor se mezclaron 500 ml. de cada suspensión.

Las blastosporas de la cepa BNA-9456 se recolectaron y lavaron en 500 ml. de agua destilada. La concentración de las blastosporas en suspensión se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml.

Se mezclaron 400 ml. de esta suspensión con la suspensión de las microconidias. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1l. del homogenate se le agregó 50 mg. de tiomersal. Luego, la mezcla fue incubada a la temperatura ambiente y por el transcurso de 2 días.

La vacuna obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas, en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardó a la temperatura de enfriamiento de 4ºC.

La vacuna así obtenida, se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular. La eficacia de la vacuna en los conejillos de indias, después de la infección con la cepa Trichophyton rubrum, puede apreciarse en los cuadros 9, 10 y en la figura 2 (complejo II-II).

Ejemplo 21

Los cultivos de las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9469, Trichophyton rubrum BNA-9470, Trichophyton rubrum BNA-9471, y Trichophyton rubrum BNA-9472 y de de las especies Candida albicans BNA-9456, Candida albicans BNA-9457, Candida albicans BNA-9458 y Candida albicans BNA-9459, se utilizaron para la obtención de 1.5 l. de la vacuna. Las cepas, BNA-7279, BNA-9469, BNA-9470, BNA-9471 y BNA-9472, se cultivaron por separado, en el agar del extracto de malta, en 3 frascos de Roux para cada cultivo, en el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Mientras que cada una de las cepas de la Candida albicans BNA-9456, BNA-9457, BNA-9458 y BNA-9459, se cultivaron en un frasco de Roux en el agar de Sabouraud a la temperatura de 28ºC y por el transcurso de 3 días. Las masas fúngicas de las cepas, BNA-9469, BNA-9470, BNA-9471 y BNA-9472, se recolectaron, combinaron y homogeneizaron en 100 ml. de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de levadura. Las masas fúngicas de la cepa BNA-7279 y de la mezcla de las cepas, BNA-9469, BNA-9470, BNA-9471 y BNA-9472, se recolectaron y homogeneizaron por separado en 500 ml. de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de levadura. La concentración de las microconidias se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. del homogenate. En un solo contenedor se mezclaron 500 ml. de la suspensión de células de la especie Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 con 500 ml. de la suspensión mixta de células de la especie Trichophyton rubrum BNA-9469, BNA-9479, BNA-9471 yBNA-9472.

Las blastosporas de las cepas, BNA-9456, BNA-9457, BNA-9458 y BNA-9459, se recolectaron lavándose con 200 ml. de agua destilada. La concentración de las blastosporas en suspensión se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. Luego se mezclaron 150 ml. de cada suspensión.

Se mezclaron 500 ml. de la suspensión obtenida con la suspensión de las microconidias. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1l. del homogenate se le agregó 50 mg. de tiomersal. Luego, la mezcla fue incubada a la temperatura ambiente y por el transcurso de 2 días.

La vacuna obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas, en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardó a la temperatura de enfriamiento de 4ºC. La vacuna así obtenida, se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular.

Ejemplo 22

Los cultivos de las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9469, Trichophyton rubrum BNA-9471, Trichophyton rubrum BNA-9472 y de las especies Candida albicans BNA-9456 y Candida albicans BNA-9457, se utilizaron para la obtención de 1.5 l. de la vacuna. Cada una de las cepas, BNA-7279, BNA-9469, BNA-9471 y BNA-9472, se cultivaron por separado en el agar del extracto de malta, en 4 frascos de Roux, para cada cultivo, por el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC.

Mientras que cada una de las cepas del Candida albicans BNA-9456 y BNA-9457, se cultivaron en 1 frasco de Roux, para cada cultivo, en el agar de Sabouraud a la temperatura de 28ºC y por el transcurso de 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas, BNA-9469, BNA-9471 y BNA-9472, se recolectaron, combinaron y homogeneizaron en 100 ml de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura. Las masas fúngicas de la cepa BNA-7279 y de la mezcla de las cepas, BNA-9469, BNA-9471 y BNA-9472, se recolectaron y homogeneizaron por separado en 500 ml. de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura. La concentración de las microconidias se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. del homogenate. En un solo contenedor se mezclaron 500 ml. de la suspensión de células de la especie Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 con 500 ml. de la suspensión mixta de células de la especie Trichophyton rubrum BNA-9469, BNA-9471 y BNA-9472.

Las blastosporas de la cepa, BNA-9456 y BNA-9457, se recolectaron lavándolas con 200 ml. de agua destilada. La concentración de las blastosporas en suspensión se ajustó hasta que alcance el valor de 60 millones por ml. Luego se mezclaron 250 ml. de cada suspensión.

Se mezclaron 500 ml. de la suspensión obtenida con la suspensión de las microconidias. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1l. del homogenate se le agregó 50 mg. de tiomersal. Luego, la mezcla fue incubada a la temperatura ambiente por el transcurso de 2 días.

La vacuna obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas, en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardó a la temperatura de enfriamiento de 4ºC. La vacuna así obtenida, se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular. La eficacia de la vacuna en los conejillos de indias, después de la infección con la cepa Trichophyton, puede apreciarse en los cuadros 24-27 y en las figuras 11 y 12, después de la infección de los ratones con la cepa Candida albicans - en el cuadro 44 (complejo VI-I).

Ejemplo 23

Los cultivos de las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9472 y de las especies, Candida albicans BNA-9456, Candida albicans BNA-9457 y Candida albicans BNA-9459, se utilizaron para la obtención de 1.5 l. de la vacuna. Cada una de las cepas BNA-7279 y BNA-9472, se cultivaron por separado, en el agar del extracto de malta en 6 frascos de Roux, para cada cultivo, en el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Mientras que cada una de las cepas de la Candida albicans BNA-9456, BNA-9457 y BNA-9459, se cultivaron, en 1 frasco de Roux para cada cultivo, en el agar de Sabouraud, a la temperatura de 28ºC y por el transcurso de 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas, BNA-9469 y BNA-9472, se recolectaron, y homogeneizaron por separado en 500 ml. de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de levadura. La concentración de las microconidias se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. del homogenate. En un solo contenedor se mezclaron 500 ml. de la suspensión de células de la especie Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 con 500 ml. de la suspensión Trichophyton rubrum BNA-9472.

Las blastosporas de las cepas, BNA-9456, BNA-9457 y BNA-9459, se recolectaron, lavandoseles con 200 ml. de agua destilada. La concentración de las blastosporas en suspensión se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. Luego se mezclaron 250 ml. de cada suspensión.

Se mezclaron 500 ml. de la suspensión obtenida con la suspensión de las microconidias. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1l. del homogenate se le agregó 50 mg. de tiomersal. Luego, la mezcla fue incubada a la temperatura ambiente y por el transcurso de 2 días.

La vacuna obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas, en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardó a la temperatura de enfriamiento de 4ºC. La vacuna así obtenida, se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular. La eficacia de la vacuna, después de la infección con la cepa Trichophyton, puede apreciarse en los cuadros 24-27 y en las figuras 11 y 12, después de la infección de los ratones con la cepa Candida albicans - en el cuadro 44 (complejo VI-II).

Ejemplo 24

Los cultivos de las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9472 y de la especie de la Candida albicans BNA-9456, se utilizaron para la obtención de 1.5 l de la vacuna. Cada una de las cepas, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 y Trichophyton rubrum BNA-9472, se cultivaron por separado, en el agar del extracto de malta en 6 frascos de Roux, para cada cultivo, en el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Mientras que cada una de las cepas de la Candida albicans BNA-9456, BNA-9457 y BNA-9459, se cultivaron, en 2 frascos de Roux para cada cultivo, en el agar de Sabouraud, a la temperatura de 28ºC y por el transcurso de los 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas, BNA-9469 y BNA-9472, se recolectaron, y homogeneizaron por separado en 500 ml. de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de levadura. La concentración de las microconidias se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. del homogenate. En un solo contenedor se mezclaron 500 ml. de la suspensión de células de la especie Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 con 500 ml. de la suspensión Trichophyton rubrum BNA-9472.

Las blastosporas de las cepas, BNA-9456, BNA-9457 y BNA-9459, se recolectaron, lavándose con 200 ml. de agua destilada. La concentración de las blastosporas en suspensión se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. Luego se mezclaron 500 ml. de cada suspensión.

Las blastosporas de la cepa BNA-9456, se recolectaron, lavándose con 500 ml. de agua destilada. La concentración de las blastosporas en suspensión se ajustó hasta que sea del valor de 10 millones por ml.

Se mezclaron 500 ml. de la suspensión obtenida con la suspensión de las microconidias. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1l. del homogenate se le agregó 50 mg de tiomersal. Luego, la mezcla fue incubada a la temperatura ambiente por el transcurso de 2 días.

Al término de la inactivación, la suspensión de las células fue tratada con el permanganato de sodio, en la concentración de 1:20000 (peso/volumen), por el transcurso de las 36 horas durante el mezclado. Las células así tratadas se lavaron cinco veces con el agua destilada, mediante el proceso de la centrifugación (4000 rev/min), en el lapso de 25 minutos en cada etapa de la centrifugación. La concentración final de las células se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml.

La vacuna obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas, en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardó a la temperatura de enfriamiento de 4ºC. La vacuna así obtenida, se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular.

Ejemplo 25

Los cultivos de las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA69, Trichophyton rubrum BNA-9470, Trichophyton rubrum BNA-9471, y Trichophyton rubrum BNA-9472 y de las especies, Candida albicans BNA-9456, Candida albicans BNA-9457, Candida albicans BNA-9458, Candida albicans BNA-9459, se utilizaron para la obtención de 1.5 l de la vacuna. Cada una de las cepas, BNA-7279, BNA-9469, BNA-9470, BNA-9471 y BNA-9472, se cultivaron por separado, en el agar del extracto de malta, en 3 frascos de Roux para cada cultivo, en el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Mientras que cada una de las cepas de la Candida albicans, BNA-9456, BNA-9457, BNA-9458 y BNA-9459, se cultivaron en 1 frasco de Roux para cada cultivo, en el agar de Sabouraud, a la temperatura de 28ºC y por el transcurso de 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas, BNA-9469, BNA-9470, BNA-9471 y BNA-9472, se recolectaron, combinaron y homogeneizaron en 100 ml de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de levadura. Las masas fúngicas de la cepa BNA-7279 y de la mezcla de las cepas, BNA-9469, BNA-9470, BNA-9471 y BNA-9472, se recolectaron y homogeneizaron por separado en 500 ml. de solución acuosa de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la lavadura. La concentración de las micronidias se ajustó hasta que alcance el valor de 60 millones por ml del homogenate. En un solo contenedor se mezclaron 500 ml. de la suspensión de células de la especie Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 con 500 ml de la suspensión mezclada de células Trichophyton rubrum BNA-9469, BNA-9470, BNA-9471 y BNA-9472.

Las blastosporas de las cepas BNA-9456, BNA-9457, BNA-9458 y BNA-9459, se recolectaron, lavandoseles con 200 ml de agua destilada. La concentración de las blastosporas en suspensión se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. Luego se mezclaron 150 ml. de cada suspensión.

Se mezclaron 500 ml. de la suspensión obtenida con la suspensión de las microconidias. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1 l. del homogenate se le agregó 50 mg de tiomersal. Luego, la mezcla fue incubada a la temperatura ambiente por el transcurso de 2 días.

Al término de la inactivación, la suspensión de las células fue tratada con el agua oxigenada. A la suspensión de las células se le agregó agua oxigenada en forma de tabletas, hasta que la concentración final del agua oxigenada sea del valor del 3%. Luego la suspensión de las células se mezclaron durante las 24 horas. Las células así tratadas, se lavaron cinco veces por el lapso de 25 minutos, con agua destilada, mediante el proceso de la centrifugación (4000 rev/min). La concentración final de las células se ajustó hasta que sea del valor de 80 millones por ml.

La vacuna obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardo a la temperatura de enfriamiento de hasta los 4ºC. La vacuna así obtenida se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular. La eficacia de la vacuna, después de la infección con la cepa Trichophyton, puede apreciarse en los cuadros 24-27 y en las figuras 11 y 12, y después de la infección con la cepa Candida albicans - en el cuadro 44 (complejo VI-V).

Ejemplo 26

Los cultivos de las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9469, Trichophyton rubrum BNA-9471, Trichophyton rubrum BNA-9472 y de las especies Candida albicans BNA-9456, Candida albicans BNA-9457, se utilizaron para la obtención de 1.5 l de la vacuna. Las cepas BNA-7279, BNA-9469, BNA-9471 y BNA-9472, se cultivaron por separado en el agar del extracto de malta, en 4 frascos de Roux para cada cultivo, en el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Mientras que cada una de las cepas, de la Candida albicans BNA-9456 y BNA-9457, se cultivaron en 1 frasco de Roux con el agar de Sabouraud, a la temperatura de 28ºC por el transcurso de 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas, BNA-9469, BNA-9471 y BNA-9472, se recolectaron, combinaron y homogeneizaron en 100 ml de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura. Las masas fúngicas, de la cepa BNA-7279 y de la mezcla de las cepas BNA-9469, BNA-9471 y BNA-9472, se recolectaron y homogeneizaron por separado en 500 ml. de solución acuosa del 0.3% de la proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura. La concentración de las microconidias se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. del homogenate. Y en un solo contenedor se mezclaron 500 ml. de suspensión de células Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 con 500 ml. de la suspensión mixta de células Trichophyton rubrum BNA-9469, BNA-9471 y BNA-9472.

Las blastosporas de las cepas BNA-9456 y BNA-9457 se recolectaron y lavaron con 200 ml. de agua destilada. La concentración, de las blastosporas en suspensión, se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. Luego se mezclaron 250 ml. de cada suspensión.

Se mezclaron y combinaron 500 ml. de la suspensión obtenida con la suspensión de las microconidias. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1 l. del homogenate se le agregó 50 mg. de tiomersal. Luego, la mezcla fue incubada a la temperatura ambiente en el transcurso de 2 días.

Al término de la inactivación, la suspensión de células fue tratada con el permanganato de sodio, de la concentración de 1:10000 (peso/volumen), por el transcurso de 36 horas durante el mezclado. Las células así tratadas se lavaron cinco veces con el agua destilada, mediante el proceso de la centrifugación (4000 rev/minuto), por el lapso de 25 minutos en cada etapa de la centrifugación. La concentración final de las células se ajustó hasta que alcance el valor de 60 millones por ml.

La vacuna obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardo a la temperatura de enfriamiento de hasta los 4ºC. La vacuna así obtenida se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular. La eficacia de la vacuna, después de la infección con la cepa Trichophyton, puede apreciarse en los cuadros 24-27 y en las figuras 11 y 12, y después de la infección con la cepa Candida albicans - en el cuadro 44 (complejo VI-IV).

Ejemplo 27

Los cultivos de las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9472 y de las especies, Candida albicans BNA-9456, Candida albicans BNA-9457 y Candida albicans BNA-9459, se utilizaron para la obtención de 1.5 l. de la vacuna.

Las cepas BNA-7279 y BNA-9472 fueron cultivadas por separado en el agar del extracto de malta en 6 frascos de Roux para cada cultivo, por el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Y cada una de las cepas de la especie, Candida albicans BNA-9456, BNA-9457 y BNA-9459, se cultivaron, en 1 frasco de Roux, en el agar de Sabouraud, por el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC.

Las masas fúngicas de las cepas BNA-7279 y BNA-9472 se recolectaron y homogeneizaron por separado en 500 ml de la solución acuosa del 0.3% de proteína muscular hidrolizada y fermentada, el 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de levadura. La concentración de las microconidias se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. del homogenate. En un solo contenedor se mezclaron 500 ml. de suspensión de la especie Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 con 500 ml. de suspensión de la especie Trichophyton rubrum BNA-9472.

Las blastosporas de las cepas BNA-9456, BNA-9457 y BNA-9459 se recolectaron lavándolas con 200 ml. de agua destilada. A la concentración de las blastosporas en suspensión se ajustó hasta que alcance el valor de 60 millones por ml. Se mezclaron 250 ml. de cada suspensión.

Luego se mezclaron 500 ml. de la suspensión obtenida con la suspensión de las microconidias. El homogenate fue inactivado agregándosele tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), en cada suspensión celular. Con este objeto, a 1 l. del homogenate se le agregó 50 mg. de tiomersal. Luego la mezcla se incubó a la temperatura ambiente por el transcurso de 2 días.

Al término de la inactivación, la suspensión de células fue tratada con el agua oxigenada. La sustancia, con el contenido del agua oxigenada, por ejemplo la adición compuesta del agua oxigenada con la urea, se le agregó a la suspensión celular hasta que la concentración final del agua oxigenada adquiera el valor del 3%. Luego, la suspensión celular se mezcló durante las 36 horas. Las células así tratadas se lavaron cinco veces, en el lapso de 25 minutos, con el agua destilada mediante el proceso de la centrifugación\rinversa (4000 rev/min). La concentración final de las células se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml.

La vacuna obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardo a la temperatura de enfriamiento de hasta los 4ºC. La vacuna así obtenida se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular.

Ejemplo 28 Eficacia de la vacuna en los ratones, después de ser infectados con la cepa de la especie Candida albicans DL_{50} (50% de Dosis Letal)

La infección se efectuó mediante la inyección intraperitoneal en el ratón de 45 millones de blastosporas Candida albicans. En el mismo día de la infección se le inyectó una sola vez la dosis de 0.3 ml. de la vacuna, y la segunda dosis - dentro de los 7 día después de la infección. La observación se llevó a cabo por el transcurso de 4 semanas, después de la inyección inicial de la vacuna. Según este método, se investigaron los complejos I-I, I-II, 2-I (ver los cuadros 1, 2, 3, 4).

Ejemplo 29 Eficacia de la vacuna en los ratones, después de ser infectados con la cepa de la especie Candida albicans DI_{10}_{0} (100% de Dosis Infecciosa)

La infección se efectuó mediante la inyección intraperitoneal en el ratón de 10 millones de blastosporas Candida albicans. En el mismo día de la infección se le inyectó una sola vez la dosis de 0.3 ml. de la vacuna, y la segunda dosis - dentro de los 7 día después de la infección. La observación se llevó a cabo por el transcurso de 4 semanas, después de la inyección inicial de la vacuna. Según este método, se investigaron los complejos 3-I, 3-II, 4-I (ver los cuadros 5, 6, 23, 44, 45).

Ejemplo 30 Eficacia de la vacuna en los conejos, después de ser infectados con la cepa de la especie Trichophyton

La infección con microconidias de la cepa de la especie Trichophyton rubrum, con el contenido de 500 mil microconidias por cm^{2} (1.5 millones de microconidias), se realizó localmente a cada uno de los animales.

La infección con microconidias de la cepa de la especie Trichophyton mentagrophytes, con el contenido de 100-200 mil microconidias por cm^{2} (300-600 mil microconidias), se realizó localmente a cada uno de los animales.

Una sola dosis de 1.0 ml. de la vacuna se inoculó mediante la inyección intraperitoneal en el mismo día de la infección y la segunda dosis - dentro de los 7 días después de la infección. La observación se llevó a cabo por el transcurso de 4 semanas, después de la inyección inicial de la vacuna. Se investigaron los complejos: I-I, I-II, II-I, II-II, II-I, III-I, III-II, III-III, III-IV, III-V (ver cuadros 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 y las figuras 1, 2, 3, 4).

Los síntomas clínicos de la infección en los conejillos de indias, provocados por la cepa de la especie Trichophyton, se evaluaron utilizándose los siguientes indicadores de gravedad de la infección en puntos:

0

- ausencia de síntomas,

1

- hiperemía de la piel en el lugar de la aplicación fúngica,

2

- zonas unitarias de descamación de la piel,

3

- descamación de la piel en el lugar de la aplicación fúngica,

4

- pequeñas cascarillas delgadas de piel en el lugar de la aplicación fúngica,

5

- cascarillas de piel en forma de costras en el lugar de la aplicación fúngica.

Ejemplo 31 Eficacia de la vacuna en los conejillos de indias, después de ser infectados con la cepa de la especie Trichophyton

La infección con microconidias de la cepa de la especie Trichophyton rubrum, con el contenido de 500 mil microconidias por cm^{2} (1.5 millones de microconidias), se realizó localmente a cada uno de los animales.

Una sola dosis de 2.0 ml de la vacuna se inoculó mediante la inyección intramuscular en el mismo día de la infección y la segunda dosis - dentro de los 7 días después de la infección. La observación se llevó a cabo por el transcurso de 4 semanas, después de la inyección inicial de la vacuna. Se investigaron los complejos: I-II (ver cuadros 15, 16 y la figura 5).

Los síntomas clínicos de la infección en los conejos, provocados por la cepa de la especie Trichophyton, se evaluaron utilizándose los siguientes indicadores de gravedad de la infección en puntos, tal como se muestran en el ejemplo 30.

Ejemplo 32

Los cultivos de las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9472 y de la especie Candida albicans BNA-9456, se utilizaron para la obtención de 1.5 l. de la vacuna. Cada una de las cepas, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 y Trichophyton rubrum BNA-9472, se cultivaron por separado en la mezcla del gar-mosto, en 3 matraces o frascos de Roux para cada cultivo, en el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Mientras que las cepas de la Candida albicans BNA-9456, se cultivaron en 2 matraces de Roux en el agar de Sabouraud a la temperatura de 28ºC durante 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas, BNA-7279 y BNA-9472, se recolectaron y homogeneizaron por separado en 500 ml. de solución acuosa, compuesta de: 0.3% de peptona de la carne de cerdo (Oxoide), 5% de glucosa y 0.1% de extracto de la levadura. La concentración de las microconidias se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. de homogenate.

Para la obtención del 50% hasta el 100% de los tubos germinativos, ambas suspensiones de las microconidias se fermentaron durante 1-2 días a la temperatura de 28ºC. Luego, las suspensiones celulares se lavaron cinco veces con la solución del cloruro de sodio, mediante el proceso de la centrifugación (4000 rev/min), a la temperatura de 10ºC y por el lapso de 25 minutos, en cada etapa de la centrifugación. La concentración final de las células se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml.

Las blastosporas de las cepas BNA-9456, se recolectaron lavándolas con 500 ml. de solución fisiológica del cloruro de sodio. La concentración de las blastosporas en suspensión se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. Finalmente, en un solo contenedor se combinaron 500 ml. de suspensión de cada uno de los cultivos.

Para la inactivación de la mezcla homogeneizada, se agregó tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1.5 l. del homogenate se le agregó 75 mg. de tiomersal. La mezcla se dejó añejar durante 2 días a la temperatura ambiente.

La vacuna obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardo a la temperatura de enfriamiento de hasta los 4ºC.

La vacuna así obtenida se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular. La suspensión obtenida fue empacada y en ese aspecto esta disponible para aplicarla en los animales. La eficacia de la vacuna, después de la infección, de los conejillos de indias y de los conejos, con las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes \hache Trichophyton rubrum, se puede apreciar en los cuadros 17, 18, 19, 20, 21, 22 y en las figuras 6, 7, 8, 9, 10 (complejo IV-II), después de la infección con la cepa de la especie de la Candida albicans - en el cuadro 23.

Ejemplo 33

Para la obtención de 1.5 l de la vacuna, se utilizaron los cultivos de las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9472 y de la especie de la Candida albicans BNA-9456. Cada una de las cepas, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 y Trichophyton rubrum BNA-9472, se cultivaron por separado en la mezcla del agar-mosto, en 3 matraces o frascos de Roux para cada cultivo, en el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Mientras que las cepas de la Candida albicans BNA-9456, se cultivaron en 2 matraces o frascos de Roux en el agar de Sabouraud a la temperatura de 28ºC durante 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas, BNA-7279 y BNA-9472, se recolectaron y homogeneizaron por separado en 500 ml de solución acuosa, compuesta de: 0.3% de peptona de la carne de cerdo (Biteck, Difco), 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de levadura. La concentración de las microconidias se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml de homogenate.

Para la obtención del 50% hasta el 100% de los tubos germinativos, cada una de las suspensiones de las microconidias se fermentaron durante 1-2 días a la temperatura de 28ºC. Luego, las suspensiones celulares se lavaron cinco veces con la solución fisiológica del cloruro de sodio, mediante el proceso de la centrifugación (4000 rev/min), a la temperatura de 10ºC y por el lapso de 25 minutos, en cada etapa de la centrifugación.

Las blastosporas de las cepas BNA-9456, se recolectaron lavándolas con 500 ml. de solución fisiológica del cloruro de sodio. La concentración de las blastosporas en suspensión se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. Finalmente, en un solo contenedor se combinaron y mezclaron 500 ml. de suspensión de cada uno de los cultivos.

Para la inactivación de la mezcla homogeneizada, se le agregó tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volu-
men), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 1.5 l. del homogenate se le agregó 75 mg. de tiomersal. La mezcla se dejó añejar durante 2 días a la temperatura ambiente.

La vacuna obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardo a la temperatura de enfriamiento de hasta los 4ºC. La vacuna así obtenida se utilizó para la inmunización de los animales mediante la inyección intramuscular. La suspensión obtenida fue empacada y en ese aspecto se puso en disponibilidad para ser aplicada a los animales. La eficacia de la vacuna, después de la infección de los conejillos de indias, con las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes \hache Trichophyton rubrum, se puede apreciar en los cuadros 17, 18 y en la figura 6 (complejo IV-III).

Ejemplo 34 Eficacia de la vacuna en los conejillos de indias, después de ser infectados con las cepas de las especies Trichophyton Microsporum y Candida

La infección con microconidias de la cepa de la especie Trichophyton rubrum, con el contenido de 500 mil microconidias por cm^{2} (1.5 millones de microconidias), se realizó en cada uno de los animales.

La infección con microconidias de la cepa de la especie Trichophyton mentagrophytes, con el contenido de 100-200 mil microconidias por cm^{2} (de 300-600 mil microconidias), se realizó localmente a cada uno de los animales.

La infección mediante la suspensión, en forma de pasta, de blastosporas de la especie de la Candida albicans, que se obtuvieron desde la superficie del cultivo de dos días, se realizó localmente a cada uno de los animales.

Una sola dosis de 1.0 ml. de la vacuna se inoculó mediante la inyección intramuscular en el mismo día de la infección y la segunda dosis - dentro de los 7 días después de la infección. La observación se llevó a cabo por el transcurso de 4 semanas, después de la inyección inicial de la vacuna. Se investigaron los complejos: IV-I, IV-II, IV-III (ver los cuadros 17, 18, 19, 20 y las figuras 6, 7, 8).

Una sola dosis de 0.75 ml. de la vacuna se inoculó mediante la inyección intramuscular en el mismo día de la infección y la segunda dosis - dentro de los 7 días después de la infección. La observación se llevó a cabo por el transcurso de 4 semanas, después de la inyección inicial de la vacuna. Se investigaron los complejos: VIII-II (ver los cuadros 38, 39, 40, 41, 42, 43 y las figuras 18, 19, 20).

Una sola dosis de 0.5 ml. de la vacuna se inoculó mediante la inyección intramuscular en el mismo día de la infección y la segunda dosis - dentro de los 7 días después de la infección. La observación se llevó a cabo por el transcurso de 4 semanas, después de la inyección inicial de la vacuna. Se investigaron los complejos: VI-I, VI-II, VI-III, VI-IV, VI-V, VI-VI, VII-I, VII-II, VII-III, VII-IV, VII-V, VII-VI, VII-VII, VII-VIII, VIII-I (ver los cuadros 24-27 y las figuras 11- 17).

Los síntomas clínicos de la infección en los conejillos de indias, provocados por la cepa de la especie Trichophyton Microsporum y Candida, se evaluaron utilizándose los siguientes indicadores de gravedad de la infección por puntos:

0

- ausencia de síntomas,

1

- hiperemía de la piel en el lugar de la aplicación fúngica,

2

- zonas unitarias de descamación de la piel,

3

- descamación de la piel en el lugar de la aplicación fúngica,

4

- pequeñas cascarillas delgadas de piel en el lugar de la aplicación fúngica,

5

- cascarillas de piel en forma de costras en el lugar de la aplicación fúngica.

Ejemplo 35 Investigación de la eficacia y con fiabilidad de la vacuna en los ratones

Una sola dosis de 0.2 ml. de la vacuna se introdujo mediante la inyección subcutánea o hipodérmicamente y la segunda dosis - dentro de los 7 días, justo en el mismo día de la infección. La observación se llevó a cabo por el transcurso de 4 semanas, después de la inyección inicial de la vacuna.

Mediante este método se investigaron los complejos: IV-II, VI-I, VI-II, VI-III, VI-IV, VI-V, VI-VI (ver cuadros 23, 24).

Se investigaron la con fiabilidad y la acción profiláctica de la vacuna para las diferentes dosis de aplicación. Una sola dosis de la vacuna (de 0.1, 0.2, 0.5, 1.0 o 2) ml. se inoculó mediante la inyección subcutánea y la segunda dosis, dentro de los 7 días. La dosis de 0.5 ml. de la vacuna se inoculó en el animal mediante la inyección en dos sectores, y las dosis de 1.0 ml. y 2.0 ml., se inocularon en tres sectores. Dentro de las 4 semanas los ratones se infectaban. La observación se llevó a cabo por el transcurso de 4 semanas, después de la inyección inicial de la vacuna y por el transcurso de 4 semanas después de la infección. De esta manera se investigó el complejo VIII-I (ver los cuadros 45 y 46).

Ejemplo 36 Eficacia de la vacuna en los conejos, después de ser infectados con la cepa de la especie Trichophyton

La infección con microconidias de la cepa de la especie Trichophyton rubrum, con el contenido de 500 mil microconidias por cm^{2} (1.5 millones de microconidias), se realizó localmente a cada uno de los animales.

Una sola dosis de 2.0 ml. de la vacuna se inoculó mediante la inyección intramuscular en el mismo día de la infección, y la segunda dosis - dentro de los 7 días después de la infección. La observación se llevó a cabo por el transcurso de 4 semanas, después de la inyección inicial de la vacuna. Mediante este método se investigaron los complejos: IV-II (ver los cuadros 21, 22 y las figuras 9, 10). Los síntomas clínicos de la infección en los conejos, provocados por la cepa de la especie Trichophyton, se evaluaron utilizándose los siguientes indicadores de gravedad de la infección por puntos, tal como se muestran en el ejemplo 34.

Ejemplo 37 Eficacia de la vacuna después de ser infectados los conejillos de indias, con la cepa de la especie Trichophyton y ser sometidos a la terapia inmunodepresiva

La infección con microconidias de la cepa de la especie Trichophyton rubrum, con el contenido de 500 mil microconidias por cm^{2} (1.5 millones de microconidias), se realizó localmente en cada uno de los animales.

La infección con microconidias de la cepa de la especie Trichophyton mentagrophytes, con el contenido de 100-200 mil microconidias por cm^{2} (300-600 mil microconidias), se realizó localmente en cada uno de los animales.

En calidad de inmunodepresante se utilizó el hostacortin H, 1 ml. de la suspensión sólida contenía 10 mg. de prednisolon-21-acetato y 9.45 mg. de alcohol bencílico. Una sola dosis de 0.1 ml. de la suspensión de hostacortin se inoculó mediante la inyección intramuscular, en el mismo día de la infección y la segunda dosis - dentro de los 3 días, y la tercera dosis - dentro de los 7 días.

Una sola dosis de 1.0 ml. de la vacuna se inoculó mediante la inyección intramuscular en el mismo día de la infección, y la segunda dosis - dentro de los 7 días después de la infección. La observación se llevó a cabo por el transcurso de 4 semanas, después de la inyección inicial de la vacuna. Mediante este método se investigaron los complejos: IV-I, IV-II, IV-III (ver los cuadros 17, 18, 19, 20 y los dibujos 6, 7, 8).

Una sola dosis de 0.75 ml. de la vacuna se inoculó mediante la inyección intramuscular en el mismo día de la infección, y la segunda dosis - dentro de los 7 días después de la infección. La observación se llevó a cabo por el transcurso de 4 semanas, después de la inyección inicial de la vacuna. Mediante este método se investigaron los complejos: VIII-II (ver los cuadros 38, 39, 40, 41, 42, 43 y los dibujos 18, 19, 20).

Una sola dosis de 0.5 ml. de la vacuna se inoculó mediante la inyección intramuscular en el mismo día de la infección, y la segunda dosis - dentro de los 7 días después de la infección. La observación se llevó a cabo por el transcurso de 4 semanas, después de la inyección inicial de la vacuna. Mediante este método se investigaron los complejos: VIII-I+H y el control +H (los animales que no fueron vacunados, que recibieron hostacortin H) (ver los cuadros 32-35 y las figuras 15-16).

Los síntomas clínicos de la infección en los conejillos de indias, provocados por la cepa de la especie Trichophyton, se evaluaron utilizándose los siguientes indicadores de gravedad de la infección por puntos:

0

- ausencia de síntomas,

1

- hiperemía de la piel en el lugar de la aplicación fúngica,

2

- zonas unitarias con descamación de la piel,

3

- descamación de la piel en el lugar de la aplicación fúngica,

4

- pequeñas cascarillas delgadas de piel en el lugar de la aplicación fúngica,

5

- cascarillas de piel en forma de costras en el lugar de la aplicación fúngica.

Ejemplo 38

La vacuna de la serie Nº 851, se obtuvo en condiciones industriales. Para la obtención de 15 l. de la vacuna, se utilizaron los cultivos de las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9472 y de la especie Candida albicans BNA-9456. Cada una de las cepas, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 y Trichophyton rubrum BNA-9472, se cultivaron por separado en el agar-mosto, en 10 matraces de Roux para cada cultivo, en el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Mientras que las cepas de la especie de la Candida albicans BNA-9456, se cultivaron en 4 matraces de Roux en el agar de Sabouraud, a la temperatura de 28ºC y durante 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas, BNA-7279 y BNA-9472, se recolectaron y homogeneizaron por separado en 500 ml. de solución acuosa, compuesta de: el 0.3% de peptona de carne de cerdo (Oxoide), 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de la levadura. La concentración de las microconidias se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. del homogenate.

Para la obtención del 50% hasta el 100% de los tubos germinativos, cada suspensión de las microconidias se fermentaron durante 1-2 días a la temperatura de 28ºC.

Luego las suspensiones celulares, mediante el sistema del flujo transversal, fueron lavadas con la solución fisiológica del cloruro de sodio.

Las blastosporas de las cepas BNA-9456, se recolectaron y lavaron con la solución fisiológica del cloruro de sodio. La concentración de las blastosporas en suspensión se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml.

Para la inactivación de los homogenates, se le agregó tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 5 l. del homogenate se le agregó 250 mg. de tiomersal, luego la mezcla se dejó añejar durante 2 días a la temperatura ambiente.

Al término de la inactivación, se comprobaron la esterilidad y la inactivación de 5000 ml. de cada suspensión. Luego se combinaron y mezclaron las suspensiones estériles e inactivas. La vacuna obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardo a la temperatura de enfriamiento de 4ºC.

La vacuna así obtenida se utilizó para la inmunización de los animales. La suspensión obtenida fue empaquetada en frascos grandes y en ese aspecto se puso en disponibilidad para ser aplicada en los animales. La eficacia de la vacuna, después de la infección de los conejillos de indias, con las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes \hache Trichophyton rubrum, puede apreciarse en los cuadros 28-31 y en los dibujos 13, 14 (complejo VII-VII), y con las cepas de la Candida albicans - en los cuadros 45 y 46.

Ejemplo 39

La vacuna de la serie Nº 851/NF7522LO01 (28 de mayo de 1997), se obtuvo en condiciones industriales. Para la obtención de 15 l. de la vacuna, se utilizaron los cultivos de las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279, Trichophyton rubrum BNA-9472 y de la especie Candida albicans BNA-9456. Cada una de las cepas, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 y Trichophyton rubrum BNA-9472, se cultivaron por separado en el agar-mosto, en 10 matraces de Roux para cada cultivo, por el transcurso de 20 días y a la temperatura de 28ºC. Mientras que las cepas de la especie de la Candida albicans BNA-9456, se cultivaron en 4 matraces de Roux en el agar de Sabouraud, a la temperatura de 28ºC durante 3 días.

Las masas fúngicas de las cepas, BNA-7279 y BNA-9472, se recolectaron y homogeneizaron por separado en 500 ml. de solución acuosa, compuesta de: el 0.3% de peptona de la carne de cerdo (Oxoide), 5% de glucosa y el 0.1% del extracto de levadura. La concentración de las microconidias se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. del homogenate. Para la obtención del 50% hasta el 100% de los tubos germinativos, cada suspensión de las microconidias se fermentaron durante 1-2 días a la temperatura de 28ºC.

Luego las suspensiones celulares, mediante el sistema del flujo transversal, fueron lavadas con la solución fisiológica del cloruro de sodio.

Las blastosporas de las cepas BNA-9456, se recolectaron lavándoseles con la solución fisiológica del cloruro de sodio, mediante el sistema del flujo transversal. La concentración de las blastosporas en suspensión se ajustó hasta que sea del valor de 60 millones por ml. Para la inactivación de los homogenates, se le agregó tiomersal, en la proporción de 1:20000 (peso/volumen), directamente en la suspensión celular. Con este objeto, a 5 l. del homogenate se le agregó 250 mg. de tiomersal, luego la mezcla se dejó añejar durante 2 días a la temperatura ambiente.

Al término de la inactivación, se comprobaron la esterilidad y la inactivación de 5000 ml. de cada suspensión. Luego se combinaron y mezclaron las suspensiones estériles e inactivas.

La vacuna obtenida se vertió en un frasco, comprobándose su esterilidad, con fiabilidad y sus propiedades inmunológicas en conformidad con las metódicas adoptadas y se le guardo a la temperatura de enfriamiento de los 4ºC.

La vacuna así obtenida se utilizó para la inmunización de los animales. La vacuna obtenida de 600 ml., de la serie Nº 851, fue empaquetada en 1080 frascos de 0.6 ml. de vacuna en cada uno de ellos y en ese aspecto se puso en disponibilidad para ser aplicada en los animales.

La eficacia de la vacuna, después de la infección de los conejillos de indias, con las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes \hache Trichophyton rubrum, puede apreciarse en los cuadros 32-37 y en las figuras 15, 16, 17 (complejo VIII-I)

Ejemplo 40

Se combinaron y mezclaron 5.5 ml. de la vacuna de la serie Nº 851 (ver el ejemplo 38) con 0.7 ml. de Immukin® (interferon \gamma-1b) de la serie Nº 612608, producido por la firma del Dr. Karl Thomae GmbH, el 12 de diciembre de 1996, con la concentración de 0.1 mg. en 0.5 ml. de solución acuosa. Los complejos se obtuvieron directamente antes de ser aplicados en los animales. La suspensión obtenida y empaquetada en frascos, estuvo en disponibilidad para ser aplicada en los animales. La eficacia de la vacuna, después de la infección de los conejillos de indias, con las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes \hache Trichophyton rubrum, puede apreciarse en los cuadros 28-31 y en los dibujos 13, 14 (complejo VII-I).

Ejemplo 41

Se combinaron y mezclaron 5.5 ml. de la vacuna de la serie Nº 851 (ver el ejemplo 38) con 10 \mugr del recombinante del factor a de necrósis tumoral (FNO-\alpha) de la serie Nº 612608, producido por la firma Promega (EE. UU.). Los complejos se obtuvieron directamente antes de ser inyectados en los animales.

La suspensión obtenida y empaquetada en frascos, estuvo en disponibilidad para ser aplicada en los animales. La eficacia de la vacuna, después de la infección de los conejillos de indias, con las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes \hache Trichophyton rubrum, puede apreciarse en los cuadros 28-31 y en los dibujos 13, 14 (complejo
VII-II).

Ejemplo 42

Se combinaron y mezclaron 5.5 ml de la vacuna de la serie Nº 851 (ver el ejemplo 38) con 5 \mugr de recombinante humano interleikina-2 (IL-2) de la serie Nº 5970601, producido por la firma Promega (EE. UU.). Los complejos se obtuvieron directamente antes de ser aplicados en los animales.

La suspensión obtenida y empaquetada en frascos, estuvo en disponibilidad para ser aplicada en los animales. La eficacia de la vacuna, después de la infección de los conejillos de indias, con las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes \hache Trichophyton rubrum, puede apreciarse en los cuadros 28-31 y en los dibujos 13, 14 (complejo
VII-III).

Ejemplo 43

Se combinaron y mezclaron 5.5 ml. de la vacuna de la serie Nº 851 (ver el ejemplo 38) con 5 \mugr de la recombinante humana interleukina-12 (IL-12) de la serie Nº 86H6661, producido por la firma Sigma. Los complejos se obtuvieron directamente antes de ser aplicados en los animales.

La suspensión obtenida y empaquetada en frascos, estuvo en disponibilidad para ser aplicada en los animales. La eficacia de la vacuna, después de la infección de los conejillos de indias, con las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes \hache Trichophyton rubrum, puede apreciarse en los cuadros 28-31 y en los dibujos 13, 14 (complejo
VII-IV).

Ejemplo 44

Se combinaron y mezclaron 5.5 ml. de la vacuna de la serie Nº 851 (ver el ejemplo 38) con 5 \mugr de recombinante humana-8 (IL-8) de la serie Nº 14788621, producido por la firma Boehringer Manheim. Los complejos se obtuvieron directamente antes de ser aplicados en los animales.

La suspensión obtenida y empaquetada en frascos, estuvo en disponibilidad para ser aplicada en los animales. La eficacia de la vacuna, después de la infección de los conejillos de indias, con las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes \hache Trichophyton rubrum, puede apreciarse en los cuadros 28-31 y en los dibujos 13, 14 (complejo
VII-V).

La eficacia de la vacuna en los conejillos de indias, después de ser infectados con las especies Trichophyton mentagrophytes \hache Trichophyton rubrum, se puede apreciar en los cuadros 28-31 y en los dibujos 13, 14 (complejo VII-V).

Ejemplo 45

Se combinaron y mezclaron 5.5 ml. de la vacuna de la serie Nº 851 (ver el ejemplo 38) con 2.5 \mugr de la recombinante humana interleukina-4 (IL-4), de la serie Nº 7099101, producido por la firma Promega. Los complejos se obtuvieron directamente antes de ser aplicados en los animales.

La suspensión obtenida y empaquetada en frascos, estuvo en disponibilidad para ser aplicada en los animales. La eficacia de la vacuna, después de la infección de los conejillos de indias, con las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes \hache Trichophyton rubrum, puede apreciarse en los cuadros 28-31 y en los dibujos 13, 14 (complejo
VII-VI).

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Ejemplo 46

Se combinaron y mezclaron 50 ml. de la vacuna de la serie Nº 851 (ver el ejemplo 38) con 25 ml. de la cepa inactivada de la especie Microsporum canis BNA-7281, con la suspensión de las microconidias, con el contenido del 60% de tubos germinativos y con la concentración de 50 millones de células por 1 ml. de la solución fisiológica del cloruro de sodio.

La suspensión obtenida y empaquetada en frascos, estuvo en disponibilidad para ser aplicada en los animales. La eficacia de la vacuna, después de la infección de los conejillos de indias, con las cepas de las especies, Trichophyton mentagrophytes \hache Trichophyton rubrum, puede apreciarse en los cuadros 38-43 y en los dibujos 18-20 (complejo
VII-II).

Ejemplo 47

Se combinaron y mezclaron 10 ml. de la vacuna de la serie Nº 851 (ver el ejemplo 38) con 25 ml. de la vacuna inactivada "Rotlauf", contra la inflamación eritematosa (standard RF-2 del Instituto Paul-Ehrflich, Alemania) con la actividad 0.2 de la unidad internacional por dosis.

Otros 10 ml. de la vacuna de la serie Nº 851 (ver el ejemplo 38) se mezclaron con 25 ml. de de la vacuna inactivada "Rotlauf", contra la inflamación eritematosa (standard RF-2 del Instituto Paul-Ehrlich, Alemania), con la actividad 1.0 de la unidad internacional por dosis.

Otros 10 ml. de la vacuna de la serie Nº 851 (ver el dibujo 38) con 25 ml. de la vacuna inactivada "Rotlauf", contra la inflamación eritematosa (standard RF-2 del Instituto Paul Ehrlflich, Alemania), con la actividad de 5.0 unidades internacionales por dosis.

La suspensión obtenida y empaquetada en frascos, estuvo disponible para ser aplicada en los animales. La eficacia de la vacuna en los ratones, después de ser infectados de erisipela, puede apreciarse en el cuadro 47 (RF-2+complejo VIII-I).

De controles positivos sirvieron las vacunas contra la inflamación eritematosa(erisipelatora) (standar RF-2 del Instituto Paul Ehrflich, Alemania) con la actividad de 5.0 unidades internacionales por dosis.

Dentro de los 21 días, todos los animales vacunados y en control, fueron infectados con los cultivos virulentos de la erisipela. La eficacia se evaluó de acuerdo con el método standard, propuesto por el instituto Paul Ehrflich, Alemania.

Ejemplo 48

La eficacia de la vacuna obtenida, tal como se describe en el ejemplo 1, sobre la base de las cepas de las especies, Candida albicans BNA-9456, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 y Trichophyton rubrum BNA-9472, se demostraron mediante la vacunación de los seres humanos varones de 41 años de edad, infectados con el virus Herpes simplex labialis.

La vacunación intramuscular de 10 ml. de la vacuna, en el intervalo de 14 días entre cada inoculación, condujo a la curación del paciente vacunado dentro de los 4-5 días, después de efectuarse la primera inyección. Todos los síntomas clínicos, incluidos los comezones, desaparecieron. No se manifestaron ningún tipo de efectos secundarios.

Ejemplo 49

La eficacia de la vacuna obtenida, tal como se describe en el ejemplo 2, sobre la base de las cepas de las especies, Candida albicans BNA-9456, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 y Trichophyton rubrum BNA-9472, se demostraron mediante la vacunación de los seres humanos varones de 42 años de edad, que padecen de pioderma folicular crónica.

La vacunación intramuscular con 1,0 ml. de la vacuna, con el intervalo de 14 días entre cada inoculación, condujo a la curación del paciente vacunado dentro de los 4-6 días, después de efectuarse la última inyección, que se manifestó con la reducción significativa de la cantidad de las pústulas subcorneales y de la intensidad de los síntomas clínicos. No se manifestaron ningún tipo de efectos secundarios.

Ejemplo 50

La eficacia de la vacuna obtenida, tal como se describe en el ejemplo 2, sobre la base de las cepas de las especies, Candida albicans BNA-9456, Trichophyton mentagrophytes BNA-7279 y Trichophyton rubrum BNA-9472, se demostraron mediante la vacunación de un muchacho de 12 años de edad con verrugas comunes (Verucae vulgares y verrugas paroniquial).

La vacuna se inoculó 2 veces, mediante la inyección intramuscular, en el intervalo de dos meses, lo que condujo a la disminución significativa de la cantidad de las verrugas, después de realizarse la primera inyección, y a la desaparición total de las verrugas, dentro de los 30 días, después de realizarse la segunda inyección. No se llegaron a manifestar ningún tipo de efectos secundarios.

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Resultados obtenidos, al infectarse los ratones vacunados con la cepa de la especie Candida albicans DL_{50} (primer experimento)

CUADRO 1

14

Al utilizarse la dosis DL_{50,} se notaron indicadores iguales de muerte en los ratones (40-50%), en grupos experimentales y de pruebas, durante el período de aguda patogenicidad (3 días después de la inyección).

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CUADRO 2

15

Durante el período de las observaciones de los animales del grupo de control (de 4 días hasta 28 días), en el 100% de los animales sobrevivientes sin vacunar, se desarrollaron síntomas clínicos de candidiásis, mientras que en los animales vacunados, el indicador de eficacia fue del 60% (complejo I-I), correspondientemente.

\newpage

Resultados obtenidos, al ser infectados los ratones vacunados con la cepa DL_{50} de la especie Candida albicans (segundo experimento)

CUADRO 3

16

Al ser infectados con las dosis DL_{50}, el 40% y el 36%, murieron correspondientemente, en los grupos experimentales y de control, durante el período de aguda patogenicidad (a los 3 días después de realizarse la inyección).

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CUADRO 4

17

Durante el período de las observaciones de los animales del grupo de control (de 4 días hasta 28 días), en el 100% de los animales sobrevivientes sin vacunar, se desarrollaron síntomas clínicos de candidiásis, mientras que en los animales vacunados, el indicador de eficacia fue del 50% (complejo 2-I), correspondientemente.

\newpage

Resultados obtenidos, al ser infectados los ratones vacunados con la cepa DI_{50} de la especie Candida albicans (tercer experimento)

CUADRO 5

18

Al utilizarse la DI_{100,} el 70% de los animales vacunados con el complejo 3-I y el 30% de los animales vacunados con el complejo 3-II, estuvieron sanos, mientras que el 82% de los animales del grupo de control, experimentaron síntomas clínicos de la candidiásis.

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Resultados obtenidos, al ser infectados los ratones vacunados con la cepa ID_{100} de la especie Candida albicans (tercer experimento)

CUADRO 6

19

Al utilizarse la DI_{100,} el 90% de los animales vacunados con el complejo 4-I estuvieron sanos, mientras que el 82% de los animales del grupo de control, experimentaron síntomas clínicos de la candidiásis.

\newpage

Síntomas clínicos de la infección en los conejillos de indias, provocados por la cepa de la especie Trichophyton rubrum (primer experimento)

CUADRO 7

20

Aquí se puede apreciar la gravedad de los síntomas clínicos de la rubrofitósis en los conejillos de indias infectados, en los diferentes plazos de las observaciones. En los animales del grupo de control sin vacunar, en comparación con los animales vacunados (con los complejos I-I y I-II), se manifestaron síntomas clínicos más graves (ver la figura 1).

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Cantidad de conejillos de indias con los síntomas de la infección, provocados por la especie Trichophyton rubrum (primer experimento)

CUADRO 8

21

En comparación con los animales del grupo en control, en los días 7 y 28, se notaron menores cantidades de animales con síntomas clínicos después de la vacunación.

\newpage

Síntomas clínicos de la infección en los conejillos de indias, provocados por la cepa de la especie Trichophyton rubrum (segundo experimento)

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CUADRO 9

22

Aquí se puede apreciar la gravedad de los síntomas clínicos de la rubrofitósis en los conejillos de indias infectados, en los diferentes plazos de las observaciones. En los animales del grupo de control sin vacunar, en comparación con los animales vacunados (con los complejos II-I y II-II), se manifestaron síntomas clínicos más graves (ver dibu-
jo 2).

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Cantidad de conejillos de indias con los síntomas de la infección, provocados por la especie Trichophyton rubrum (primer experimento)

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CUADRO 10

23

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En comparación con los animales del grupo de control, se observaron menores cantidades de animales con síntomas clínicos, en ambos grupos vacunados, durante todos los plazos de las observaciones.

\newpage

Síntomas clínicos de la infección en los conejillos de indias, provocados por la cepa de la especie Trichophyton rubrum (tercer experimento)

CUADRO 11

24

Aquí se puede apreciar la gravedad de los síntomas clínicos de la rubrofitósis en los conejillos de indias infectados, en los diferentes plazos de las observaciones. En los animales del grupo de control sin vacunar, en comparación con los animales vacunados (con los complejos III-I, III-II, III-III, III-IV y III-V), se notaron síntomas clínicos más graves (ver el dibujo 3).

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Cantidad de conejillos de indias con los síntomas de la infección, provocados por la especie Trichophyton rubrum (tercer experimento)

CUADRO 12

25

Síntomas clínicos de la infección en los conejillos de indias, provocados por la cepa de la especie Trichophyton mentagrophytes (tercer experimento)

CUADRO 13

26

Aquí se puede apreciar la gravedad de los síntomas clínicos de la infección de la rubrofitósis, provocados por la especie de la trichophyton mentagrophytes en los conejillos de indias infectados, en los diferentes plazos de las observaciones. En los animales del grupo de control sin vacunar, en comparación con los animales vacunados (complejos III-I, III-II, III-III, III-IV y III-V), se manifestaron los síntomas clínicos más graves (ver el dibujo 4).

Cantidad de conejillos de indias con los síntomas de la infección, provocados por la especie Trichophyton rubrum (tercer experimento)

CUADRO 14

27

En el transcurso del período de las observaciones, casi en todos los animales vacunados se manifestaron los síntomas clínicos.

Síntomas clínicos de la infección en los conejos, provocados por la cepa de la especie Trichophyton rubrum (primer experimento)

CUADRO 15

28

Aquí se puede apreciar la gravedad de los síntomas clínicos de la infección en los conejos, provocados por la especie Trichophyton rubrum, en los diferentes plazos de las observaciones. En los animales del grupo de control sin vacunar, en comparación con los animales vacunados (con el complejo II-I), se notaron los síntomas clínicos más graves (ver el dibujo 5).

Cantidad de conejos con los síntomas de la infección, provocados por la especie Trichophyton rubrum (primer experimento)

CUADRO 16

29

Casi en todos los animales vacunados, en comparación con los animales del grupo de control, no se manifestaron los síntomas clínicos en los días 21 y 28.

Síntomas clínicos de la infección en los conejillos de indias, provocados por la cepa de la especie Trichophyton rubrum (cuarto experimento)

CUADRO 17

30

Aquí se puede apreciar la gravedad de los síntomas clínicos de la infección en los conejillos de indias, provocados por la especie Trichophyton rubrum, en los diferentes plazos de las observaciones. En los animales del grupo de control sin vacunar, en comparación con los animales vacunados (complejo IV-I, complejo IV-II, complejo IV-III), se notaron los síntomas clínicos más graves (ver el dibujo 6).

Cantidad de conejillos de indias con los síntomas de la infección, provocados por la especie Trichophyton rubrum

CUADRO 18

31

Casi en todos los animales vacunados, en comparación con los animales del grupo de control, no se manifestaron los síntomas clínicos en el día 28.

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Síntomas clínicos de la infección en los conejillos de indias, provocados por la cepa de la especie Trichophyton rubrum

CUADRO 19

32

Aquí se muestra la gravedad de los síntomas clínicos de la infección en los conejillos de indias, provocados por la especie Trichophyton rubrum, en los diferentes plazos de las observaciones. En los animales del grupo de control sin vacunar, en comparación con los animales vacunados (con el complejo IV-II), se notaron los síntomas clínicos más graves (ver dibujo 7).

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Cantidad de conejillos de indias con los síntomas clínicos de la infección, provocados por la especie Trichophyton rubrum

CUADRO 20

33

Casi en todos los animales vacunados, en comparación con los animales del grupo de control, no se llegaron a manifestar los síntomas clínicos en el día 29 (ver dibujo 8).

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Síntomas clínicos de la infección en los conejos, provocados por la especie Trichophyton rubrum

CUADRO 21

34

Aquí se muestra la gravedad de los síntomas clínicos de la infección en los conejos, provocados por la especie Trichophyton rubrum, en los diferentes plazos de observaciones.

En los animales de control sin vacunar, en comparación con los animales vacunados (con los complejos IV-II), se notaron los síntomas clínicos más graves (ver el dibujo 9).

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Cantidad de conejos con síntomas clínicos de la infección, provocados por la especie Trichophyton rubrum

CUADRO 22

35

Casi en todos los animales, en comparación con los animales del grupo de control, no se notaron los síntomas clínicos de la infección en el día 29 (ver el dibujo 10).

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Resultados obtenidos al infectarse los ratones vacunados mediante la cepa DI_{100} de la especie Candida albicans (sexto experimento)

CUADRO 23

Desarrollo de la infección

36

Al aplicarse la DI_{100,} el 45% de los animales, vacunados con el complejo IV-I, y el 30% estuvieron sanos, mientras que el 80% de los animales del grupo de control, experimentaron los síntomas clínicos de la candidiásis.

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Síntomas clínicos de la infección en los conejillos de indias, provocados por la especie Trichophyton rubrum

CUADRO 24

37

Aquí se muestra la gravedad de los síntomas clínicos de la infección, en los conejillos de indias infectados, provocada por la especie Trichophyton rubrum, en los diferentes plazos de las observaciones. En los animales de control sin vacunar, en comparación con los animales vacunados, se notaron los síntomas clínicos más graves en los días 28 y 33. Los síntomas clínicos eran de mayor intensidad en el día 33, solo en los animales vacunados con el complejo VI-V (ver el dibujo 11).

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(Tabla pasa a página siguiente)

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Cantidad de conejos con síntomas clínicos de la infección, provocados por la especie Trichophyton rubrum

CUADRO 25

38

Los síntomas clínicos se notaron, en comparación con los animales del grupo de control, en el menor número de animales vacunados o bien no se notaron por completo en los días 28 y 33 correspondientemente.

En la mayor cantidad de los animales vacunados con el complejo VI-V, en comparación con los demás animales del grupo de control, se notaron los síntomas clínicos en el día 33.

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(Tabla pasa a página siguiente)

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Síntomas clínicos de la infección en los conejillos de indias, provocados por la especie Trichophyton mentagrophytes

CUADRO 26

39

Aquí se muestra la gravedad de los síntomas clínicos en los conejillos de indias, provocados por la especie Trichophyton mentagrophytes, en los diferentes plazos de las observaciones. En los animales del grupo de control sin vacunar, en comparación con los animales vacunados, se notaron los síntomas clínicos de mayor gravedad durante todos los plazos de las observaciones (ver el dibujo 12).

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(Tabla pasa a página siguiente)

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Cantidad de conejillos de indias con síntomas clínicos de la infección, provocados por la especie Trichophyton mentagrophytes

CUADRO 27

40

Los síntomas clínicos se notaron, en comparación con los animales del grupo de control, en el menor número de animales vacunados o bien no se notaron por completo en los días 28 y 33 correspondientemente.

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(Tabla pasa a página siguiente)

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Síntomas clínicos de la infección en los conejillos de indias, provocados por la especie Trichophyton rubrum

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CUADRO 28

41

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Aquí se muestra la gravedad de los síntomas clínicos de la infección, en los conejillos de indias infectados, provocada por la especie Trichophyton rubrum, en los diferentes plazos de las observaciones. En los animales de control sin vacunar, en comparación con los animales vacunados, se notaron los síntomas clínicos más graves en todos los plazos de las observaciones, en los días 23 y 28. (tal como se puede apreciar en el dibujo 13).

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Cantidad de conejillos de indias con síntomas clínicos de la infección, provocados por la especie Trichophyton rubrum

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CUADRO 29

42

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Los síntomas clínicos se notaron, en comparación con los animales del grupo de control, en el menor número de animales vacunados o bien no se notaron por completo en el día 28.

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Síntomas clínicos de la infección en los conejillos de indias, provocados por la especie Trichophyton mentagrophytes

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CUADRO 30

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43

Aquí se muestra la gravedad de los síntomas clínicos de la infección, en los conejillos de indias infectados, provocada por la especie Trichophyton mentagrophytes, en los diferentes plazos de las observaciones. En los animales de control sin vacunar, en comparación con los animales vacunados, se notaron los síntomas clínicos más graves en todos los plazos de las observaciones, en los días 28. (ver el dibujo 14).

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Cantidad de conejillos de indias con síntomas clínicos de la infección, provocados por la especie Trichophyton mentagrophytes

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CUADRO 31

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44

Los síntomas clínicos se notaron, en comparación con los animales del grupo de control, en la menor cantidad de los animales vacunados o bien no se notaron por completo en los días 28.

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Síntomas clínicos de la infección en los conejillos de indias, provocados por la especie Trichophyton rubrum

CUADRO 32

45

Aquí se muestra la gravedad de los síntomas clínicos de la infección, en los conejillos de indias infectados, provocada por la especie Trichophyton rubrum, en los diferentes plazos de las observaciones. En los animales vacunados, tratados y sin tratar con prenisolon-21-acetato, en comparación con los animales de control sin vacunar, no se notaron los síntomas clínicos en el día 28 (ver dibujo 15).

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(Tabla pasa a página siguiente)

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Cantidad de conejillos de indias con síntomas clínicos de la infección, provocados por la especie Trichophyton rubrum

CUADRO 33

46

En los animales sin vacunar, en comparación con los animales del grupo de control, no se notaron los síntomas clínicos el día 28.

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(Tabla pasa a página siguiente)

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Síntomas clínicos de la infección en los conejillos de indias, provocados por la especie Trichophyton mentagrophytes

CUADRO 34

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47

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Aquí se muestra la gravedad de los síntomas clínicos de la infección, en los conejillos de indias infectados, provocados por la especie Trichophyton mentagrophytes, en los diferentes plazos de las observaciones. En los animales vacunados, tratados y sin tratar con prenisolon-21-acetato, en comparación con los animales de control sin vacunar, no se notaron los síntomas clínicos en el día 28 (ver dibujo 16).

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(Tabla pasa a página siguiente)

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Cantidad de conejillos de indias con síntomas clínicos de la infección, provocados por la especie Trichophyton mentagrophytes

CUADRO 35

48

En los animales sin vacunar, en comparación con los animales del grupo de control, los síntomas clínicos se notaron el día 29.

Síntomas clínicos de la infección en los conejillos de indias, provocados por la especie Candida albicans

CUADRO 36

49

Aquí se muestra la gravedad de los síntomas clínicos de la infección en los conejillos de indias, provocados por la especie Candida albicans, en los diferentes plazos de las observaciones.

En los animales en control sin vacunar, en comparación con los animales vacunados (con el complejo VIII-I), se notaron síntomas clínicos más graves (ver dibujo 17).

Cantidad de conejillos de indias con síntomas clínicos de la infección, provocados por la especie Candida albicans

CUADRO 37

50

En los animales vacunados, en comparación con los animales del grupo de control, no se notaron síntomas clínicos en los días 20 y 29.

Síntomas clínicos de la infección en los conejillos de indias, provocados por la especie Microsporum canis

CUADRO 38

51

Aquí se muestra la gravedad de los síntomas clínicos de la infección, en los conejillos de indias infectados, provocados por la especie Microsporum canis, en los diferentes plazos de las observaciones. En los animales de control sin vacunar, en comparación con los animales vacunados (con el complejo VIII-II), se notaron síntomas clínicos más graves en el día 29 (ver dibujo 18).

Cantidad de conejillos de indias con síntomas clínicos de la infección, provocados por la especie Microsporum canis

CUADRO 39

52

En la menor cantidad de animales vacunados, en comparación con los animales del grupo de control, se notaron los síntomas clínicos en los días 20 y 29.

Síntomas clínicos de la infección en los conejillos de indias, provocados por la especie Tricophyton rubrum

CUADRO 40

53

Aquí se muestra la gravedad de los síntomas clínicos de la infección, en los conejillos de indias infectados, provocados por la especie Trichophyton rubrum, en los diferentes plazos de las observaciones. En los animales en control sin vacunar, en comparación con los animales vacunados (con el complejo VIII-II), se notaron síntomas clínicos más graves en los días 20 y 29 (ver dibujo 19).

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Cantidad de conejillos de indias con síntomas clínicos de la infección, provocados por la especie Trichophyton rubrum

CUADRO 41

54

En la menor cantidad de animales vacunados, en comparación con los animales del grupo de control, se notaron los síntomas clínicos en los días 20 y 29.

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Síntomas clínicos de la infección en los conejillos de indias, provocados por la especie Trichophyton mentagrophytes

CUADRO 42

55

Aquí se muestra la gravedad de los síntomas clínicos de la infección, en los conejillos de indias infectados, provocados por la especie Trichophyton mentagrophytes, en los diferentes plazos de las observaciones. En los animales en control sin vacunar, en comparación con los animales vacunados (con el complejo VIII-II), se notaron síntomas clínicos más graves en los días 20 y 29 (ver dibujo 20).

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Cantidad de conejillos de indias con síntomas clínicos de la infección, provocados por la especie Trichophyton mentagrophytes

CUADRO 43

56

En la menor cantidad de animales vacunados, en comparación con los animales del grupo de control, se notaron los síntomas clínicos en los días 20 y 29.

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Resultados obtenidos al ser infectados los ratones vacunados mediante la cepa DI_{100} de la especie Candida albicans

CUADRO 44

Desarrollo de la infección

57

Al aplicarse la cepa DI_{100} de la especie Candida albicans, el 70% de los animales vacunados con el complejo VI-I y el 50% de los animales vacunados con los complejos VI-III y VI-VI, estuvieron sanos, mientras que el 90% de los animales del grupo de control, experimentaban los síntomas clínicos de la candidiásis. Los animales vacunados con el complejo VI-I, se mantuvieron vivos por el transcurso de 4 semanas, después de la infección (duración del experimento). Análogamente, el 80% de los animales, vacunados con los complejos VI-III y VI-VI, se mantuvieron vivos en el transcurso de toda la duración del experimento. La eficacia profiláctica de la dosis de esta vacuna, fue mayor en comparación con las demás dosis.

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(Tabla pasa a página siguiente)

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Resultados obtenidos al ser infectados los ratones vacunados mediante la cepa DI_{100} de la especie Candida albicans

CUADRO 45

Desarrollo de la infección

58

Al aplicarse la cepa DI_{100} de la especie Candida albicans, el 40% de los animales vacunados con la dosis de 0.2 ml, estuvieron sanos, mientras que en el 90% de los animales del grupo de control se notaron los síntomas clínicos de la candidiásis. En el transcurso de las 4 semanas, después de ser infectados (duración del experimento), se mantuvieron vivos el 50% de los animales, vacunados con la dosis de 0.2 ml. Durante el experimento, de los animales no vacunados, murieron el 80%. La dosis de 0.2 ml de la vacuna poseía mayor eficacia profiláctica en comparación con las demás dosis analizadas.

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Pruebas de seguridad de la Vacuna de la serie Nº 851

CUADRO 46

59

La doble inyección de diferentes dosis de la vacuna, demuestra la seguridad de la serie investigada Nº 851, que se obtuvo industrialmente.

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CUADRO 47

60

61

En este tiempo la actividad de la vacuna RF-2 fue de 50,0 UI/ml y los complejos de vacuna de la partida nº 851 tuvieron 74,0 IU/ml. El tiempo de vida de los ratones vacunados con RF-2 con una dosis de 0,2 ml y Complejo VII-VII comparado con RF-2 sólo fue mas prolongado. El número de animales que murieron después de la infección fue menor en el grupo vacunado mediante RF-2 con el complejo VII-VII que en los animales vacunados con RF-2.

Claims (30)

1. Vacuna compuesta de micronidias inactivadas homogeneizadas de dermatófitos y de blastoesporas en levaduras inactivadas o de material antígeno de estas esporas.

2. La vacuna, de conformidad con la reivindicación 1, se diferencia en que las blastoesporas se encuentran en estado hinchado y/o por que poseen tubos germinales y/o porque las micronidias se encuentran en estado hinchado y/o por el hecho de disponer tubos germinales.

3. La vacuna, de conformidad con la reivindicación 1 o 2, se diferencia en que, por lo menos el 50% de las blastoesporas se encuentran en estado hinchado y/o porque disponen de tubos germinales y/o por el hecho de que por lo menos el 50% de las micronidias se encuentran en estado hinchado y/o por el hecho de tener tubos germinales.

4. La Vacuna, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, se diferencia en que las blastoesporas en levadura pertenecen a la especie de la Cándida y las microconidias de los dermatófitos corresponden a las especies de los Trichophyton y/o Microsporum.

5. La Vacuna, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, se diferencia en que las blastoesporas en levadura corresponden a la especie Cándida albicans y las microconidias de los dermatófitos corresponden a las especies Trichophyton rubrum y/o Trichophyton mentagrophytes y/o Microsporum canis.

6. Vacuna que, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, se diferencia en que las blastoesporas en levadura pertenecen a la stockvacuna de la Cándida albicans DSM - 9456, y/o a la Cándida albicans DSM - 9457, y/o a la Cándida albicans DSM - 9458, y/o a la Cándida albicans DSM - 9459 y porque las microconidias de los dermatófitos pertenecen a la stockvacuna Trichophyton rubrum DSM - 9469, y/o Trichophyton rubrum DSM - 9470, y/o Trichophyton rubrum DSM - 9471, y/o Trichophyton rubrum DSM - 9472, y/o Trichophyton mentagrophytes DSM - 7279, y/o Microsporum canis DSM - 7281.

7. Vacuna que, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, se diferencia en que las esporas de los hongos fueron inactivadas mediante el compuesto mercurial de Tiomersal, con formaldehido o con 2-propiolactones.

8. Vacuna que, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7,se diferencia en que las esporas de hongos fueran modificadas después de la inactivación.

9. Vacuna que, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, se diferencia en que las esporas de hongos citadas anteriormente, fueran modificadas mediante el tratamiento con el H_{2}O_{2} o con las sales de permanganato.

10. Vacuna que, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, se diferencia en que esta vacuna contra los hongos no contiene ninguna cantidad adicional de sustancia inmunomodulante.

11. Vacuna que, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, se diferencia en que esta vacuna contra los hongos no contiene nada de adyuvante.

12. Vacuna, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, se diferencia en que esta vacuna contra los hongos, no contiene sustancia adicional con actividad inmunomodulante.

13. Vacuna,de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, se diferencia en que la vacuna contra los hongos, contiene adyuvante y/o, por lo menos, un cytokine.

14. Vacuna, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, se diferencia por contener de 10 - 90 millones de esporas en un mililitro(ml).

15. Vacuna, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, se diferencia por contener 60 millones de esporas en 1 mililitro(ml).

16. Vacuna, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, para realizar la profiláctica y la curación de la micosis.

17. Vacuna, de conformidad con la reivindicación 16 para realizar la profiláctica y la curación de la micosis de las personas.

18. Vacuna, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 16 a 17 para realizar la profiláctica y la curación de las dermatomicosis y/o de los onicomicosis y/o de las candidiásis.

19. Vacuna de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, para la modulación de la reacción inmune.

20. Vacuna, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, para estimulizar la reacción inmune.

21. Vacuna de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, para la estimulación de la reacción inmune de los animales con inmunidad debilitada.

22. El proceso de elaboración de la vacuna, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, comprende:

A: aumento del dermatófito en un favorable caldo de cultivo denso, la selección y la homogenización del dermatófito,

B: El aumento de las levaduras en el medio favorable, la selección y la homogeneización de las mismas,

C: La combinación y la inactivación de los homogenates A y B.

23. El proceso de la elaboración de la vacuna, en conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque en que el dermatófito es homogeneizado en solución de agua, que debe de contener del 0.1-0.3% de hidrolizata fermentada de proteína muscular o del 0.1-1.0% de peptona de soya o de carne de cerdo en combinación con el 5-6% de glucosa y del 0.1- 1.0% del extracto de levadura, con la incubación posterior por el transcurso de 1-2 días a la temperatura de los 28°C.

24. El proceso de preparación de la vacuna, en conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque las levaduras se incuban después de ser homogeneizadas con la presencia del 5-6% de CO2 por el transcurso de 2 - 4 horas.

25. El proceso de elaboración de la vacuna, en conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 22 a 24, caracterizado porque en que los homogenates de los hongos son tratados con el H_{2}O_{2}, o con la sal de permanganato.

26. El proceso de elaboración de la vacuna, en conformidad con la reivindicación 22, que incluye la preparación de una cantidad adicional de microconidias hinchadas y de microconidias con tubos germinales de dermatófitos, que comprende:

El cultivo de los dermatófitos en un líquido de cultivo denso,

la selección y la homogeneización del cultivo en un líquido de cultivo liquido,

el mantenimiento del valor del pH en el medio liquido entre los valores 6.2 - 7.2,

el traslado de la suspensión a una recipiente aparte que contenga un medio liquido fresco,

el control del aumento y los indicios morfológicos de las células de los dermatófitos,

la selección de las células, si la cantidad no menor al 50% de microconidias muestra el estado hinchado o en crecimiento, y si la cantidad no menor al 7 - 10% de las células muestra la segunda ramificación micelial.

27. El proceso, en conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque los líquidos de cultivo son el agar con el extracto de malta o con el agar del acíbar, y el medio liquido consistente del 0.3-1.0% del extracto común o la peptona de la carne o de la soya, con el contenido del 5-6% de glucosa y del 0.1-1.0% del extracto de levadura o el caldo con el extracto de malta o el caldo de carne con glucosa.

28. El proceso, en conformidad con la reivindicación 26 que incluye la preparación de una cantidad adicional de blastoesporas hinchadas y de blastoesporas con tubos germinales de levaduras, comprende:

El cultivo de las levaduras en un líquido de cultivo denso,

La selección y la homogeneización de las levaduras en un medio líquido,

La incubación del homogenate en una atmósfera del 5-6% de CO2, a la temperatura de 36-38°C por el lapso de 2 - 4 horas,

El control del crecimiento y los indicios morfológicos de las células de las levaduras,

La selección de las células, si no menos del 50% de blastoesporas muestran los tubos germinales o en el estado hinchado.

29. El proceso, en conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque el medio líquido de cultivo posee pH del valor de 6.8-7.0.

30. El proceso, en conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 22 a 29, caracterizado porque los dermatófitos pertenecen a la especie del Trichophyton y/o Microsporum, y/o a las especies Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes y/o en que el stockvacuna es el Trichophyton rubrum DSM - 9469 y/o DSM - 9470 y/o DSM - 9471 y/o DSM - 9472 y/o Trichophyton mentagrophytes DSM - 7279 y/o Microsporum canis DSM - 7281 y las levaduras son tomadas de las especies de la Cándida o de la Cándida albicans y/o de los stockvacunas de la Cándida albicans DSM - 9456 y/o DSM - 9457 y/o DSM - 9458 y/o DSM - 9459.