ES2283811T3 - Derivados de 1,2-dihidro-pirazol-3-ona y 3-alcoxi-1h-pirazol sustituidos 1,4,5- para la utilizacion como agentes reductores de tnf-alfa e interleukina en el tratamiento de inflamaciones. - Google Patents

Abstract

Un compuesto de fórmula (Ver fórmula) o una sal faUn compuesto de fórmula (Ver fórmula) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde R 2 es rmacéuticamente aceptable del mismo, donde R 2 es alquilo C1-C8, fenilo, bencilo, R c , R f , alquilalquilo C1-C8, fenilo, bencilo, R c , R f , alquil(C1-C4)R c , alquil(C1-C4)R f o R g ; R 3 es fenil(C1-C4)R c , alquil(C1-C4)R f o R g ; R 3 es fenilo, naftilo, o un heterociclo anular de 5 o 6 miembo, naftilo, o un heterociclo anular de 5 o 6 miembros saturado o insaturado que contiene 1-4 heteroáros saturado o insaturado que contiene 1-4 heteroátomos seleccionados entre N, O y S, donde no más dtomos seleccionados entre N, O y S, donde no más de 2 de los heteroátomos son O o S, y el heterocicle 2 de los heteroátomos son O o S, y el heterociclo está sustituido con 0, 1 o 2 grupos oxo y está oo está sustituido con 0, 1 o 2 grupos oxo y está opcionalmente fusionado con un grupo benzo, cualquipcionalmente fusionado con un grupo benzo, cualquiera de los cuales está sustituido con 0, 1, 2 o 3 era de los cuales está sustituido con 0, 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados entre alquilo C1-C8, hsustituyentes seleccionados entre alquilo C1-C8, haloalquilo C1-C4, halo, ciano, nitro, -C(=O)R b , aloalquilo C1-C4, halo, ciano, nitro, -C(=O)R b , -C(=O)OR b , -C(=O)NR a R a , -C(=NR a )NR a R a ,-C(=O)OR b , -C(=O)NR a R a , -C(=NR a )NR a R a , -OR a , -OC(=O)R b , -OC(=O)NR a R a , -OC(=O)N(R -OR a , -OC(=O)R b , -OC(=O)NR a R a , -OC(=O)N(R a )S(=O)2 R b , -O-alquil(C2-C6)NR a R a , -O-alq a )S(=O)2 R b , -O-alquil(C2-C6)NR a R a , -O-alquil(C2-C6)OR a , -SR a , -S(=O)R b , -S(=O)2R b , uil(C2-C6)OR a , -SR a , -S(=O)R b , -S(=O)2R b , -S(=O)2NR a R a , -S(=O)2N(R a )C(=O) R b , -S(=O)-S(=O)2NR a R a , -S(=O)2N(R a )C(=O) R b , -S(=O)2N(R a )C(=O)OR b , -S(=O)2N(R a )C(=O)NR a R a , 2N(R a )C(=O)OR b , -S(=O)2N(R a )C(=O)NR a R a , -NR a R a , -N(R a )C(=O)R b , -N(R a )C(=O)OR b ,-NR a R a , -N(R a )C(=O)R b , -N(R a )C(=O)OR b , -N(Ra )C(=O) NR a R a , -N(R a )C(=NR a )NR a R a -N(R a )C(=O) NR a R a , -N(R a )C(=NR a )NR a R , -N(R a )S(=O)2R b , -N(R a )S(=O)2NR a R a , -Na , -N(R a )S(=O)2R b , -N(R a )S(=O)2NR a R a , -R a alquil(C2-C6)NR a R a y -NR a alquil(C2-C6) ORNR a alquil(C2-C6)NR a R a y -NR a alquil(C2-C6) O a ; R 4 es 4-piridinilo sustituido con 0, 1, 2 o R a ; R 4 es 4-piridinilo sustituido con 0, 1, 2 o3 sustituyentes seleccionados entre alquilo C1-C8, 3 sustituyentes seleccionados entre alquilo C1-C8 haloalquilo C1-C4, halo, ciano, nitro, -C(=O)R b , haloalquilo C1-C4, halo, ciano, nitro, -C(=O)R b, -C(=O)OR b , -C(=O)NR a R a , -C(=NR a )NR a R a , -C(=O)OR b , -C(=O)NR a R a , -C(=NR a )NR a R , -OR a , -OC(=O)R b , -OC(=O)NR a R a , -OC(=O)Na , -OR a , -OC(=O)R b , -OC(=O)NR a R a , -OC(=O)(R a )S(=O)2R b , -O-alquil(C2-C6)NR a R a , -O-alN(R a )S(=O)2R b , -O-alquil(C2-C6)NR a R a , -O-aquil(C2-C6)OR a , -SR a , -S(=O)R b , -S(=O)2R b ,lquil(C2-C6)OR a , -SR a , -S(=O)R b , -S(=O)2R b -S(=O)2NR a R a , -S(=O)2N(R a )C(=O)R b , -S(=O), -S(=O)2NR a R a , -S(=O)2N(R a )C(=O)R b , -S(=O2N(R a )C(=O)OR b , -S(=O)2N(R a )C(=O)NR a R a , )2N(R a )C(=O)OR b , -S(=O)2N(R a )C(=O)NR a R a ,-NR a R a , -N(R a )C(=O)R b , -N(R a )C(=O) OR b -NR a R a , -N(R a )C(=O)R b , -N(R a )C(=O) OR b, -N(R a )C(=O)NR a R a , -N(R a )C(=NR a )NR a R , -N(R a )C(=O)NR a R a , -N(R a )C(=NR a )NR a Ra , -N(R a )S(=O)2R b , -N(R a )S(=O)2NR a R a , - a , -N(R a )S(=O)2R b , -N(R a )S(=O)2NR a R a , NR a alquil(C2-C6)NR a R a y -NR a alquil(C2-C6)OR-NR a alquil(C2-C6)NR a R a y -NR a alquil(C2-C6)O a ; R a es independientemente en cada caso H o R R a ; R a es independientemente en cada caso H o Rb ; R b es independientemente en cada caso alquilo b ; R b es independientemente en cada caso alquil C1-C8, fenilo o bencilo; R c es independientemento C1-C8, fenilo o bencilo; R c es independientemene en cada caso un anillo monocíclico de 5, 6 o 7 mte en cada caso un anillo monocíclico de 5, 6 o 7 iembros obicíclico de 6, 7, 8, 9, 10 u 11 miembrosmiembros o bicíclico de 6, 7, 8, 9, 10 u 11 miembr saturado o insaturado que contiene 1, 2 o 3 átomoos saturado o insaturado que contiene 1, 2 o 3 átos seleccionados entre N, O y S, donde el anillo esmos seleccionados entre N, O y S, donde el anillo tá fusionado con 0 o 1 grupos benzo y 0 o 1 anilloestá fusionado con 0 o 1 grupos benzo y 0 o 1 anils heterocíclicos de 5, 6 o 7 miembros saturados o los heterocíclicos de 5, 6 o 7 miembros saturados insaturados que contienen 1, 2 o 3 átomos seleccioo insaturados que contienen 1, 2 o 3 átomos seleccnados entre N, O y S; donde los átomos de carbono ionados entre N, O y S; donde los átomos de carbondel anillo están sustituidos con 0, 1 o 2 grupos oo del anillo están sustituidos con 0, 1 o 2 gruposxo; R d es independientemente en cada caso alquilo oxo; R d es independientemente en cada caso alqui C1-C8, haloalquilo C1-C4, halo, ciano, nitro, -C(lo C1-C8, haloalquilo C1-C4, halo, ciano, nitro, -=O)R b , -C(=O) OR b , -C(=O)NR a R a , -C(=NR a )C(=O)R b , -C(=O) OR b , -C(=O)NR a R a , -C(=NR aNR a R a , -OR a , -OC(=O)R b , -OC(=O)NR a R a , )NR a R a , -OR a , -OC(=O)R b , -OC(=O)NR a R a -OC(=O)N(R a )S(=O)2R b , -O-alquil(C2-C6) NR a R , -OC(=O)N(R a )S(=O)2R b , -O-alquil(C2-C6) NR a a , -O-alquil(C2-C6)OR a , -SR a , -S(=O)R b , -S(R a , -O-alquil(C2-C6)OR a , -SR a , -S(=O)R b , -=O)2R b , -S(=O)2NR a R a , -S(=O)2N(R a )C(=O)R bS(=O)2R b , -S(=O)2NR a R a , -S(=O)2N(R a )C(=O)R , -S(=O)2N(R a ) C(=O)OR b , -S(=O)2N(R a )C(=O)N b , -S(=O)2N(R a ) C(=O)OR b , -S(=O)2N(R a )C(=OR a R a , -NR a R a , -N(R a )C(=O)R b , -N(R 2 )C)NR a R a , -NR a R a , -N(R a )C(=O)R b , -N(R 2 (=O)OR b , -N(R a )C(=O)NR a R a , -N(R a ) C(=NR )C(=O)OR b , -N(R a )C(=O)NR a R a , -N(R a ) C(=Na )NR a R a , -N(R a )S(=O)2R b , -N(R a )S(=O)2NRR a )NR a R a , -N(R a )S(=O)2R b , -N(R a )S(=O)2 a R a , -NR a alquil(C2-C6)NR a R a o -NR a alquiNR a R a , -NR a alquil(C2-C6)NR a R a o -NR a alql(C2-C6)OR a; R e es independientemente en cada cauil(C2-C6)OR a ; R e es independientemente en cadaso alquilo C1-C6 sustituido con 1, 2 o 3 sustituye caso alquilo C1-C6 sustituido con 1, 2 o 3 sustitntes seleccionados independientemente entre R d ; uyentes seleccionados independientemente entre R dR f es independientemente en cada caso R c sustitu ; R f es independientemente en cada caso R c sustido con 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados indepituido con 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados inendientemente entre R d ; y R g es independientemedependientemente entre R d ; y R g es independientnte en cada caso R b sustituido con 1, 2 o 3 sustiemente en cada caso R b sustituido con 1, 2 o 3 sutuyentes seleccionados independientemente entre R stituyentes seleccionados independientemente entrec , R f y R d . R c , R f y R d .

Description

Derivados de 1,2-dihidro-pirazol-3-ona y 3-alcoxi-1H-pirazol sustituidos 1,4,5- para la utilización como agentes reductores de TNF-\alpha e interleucina en el tratamiento de inflamaciones.

La presente invención comprende una nueva clase de compuestos útiles en el tratamiento de enfermedades, tales como las enfermedades mediadas por TNF-\alpha, IL-1\beta, IL-6 y/o IL-8 y otras malignidades, tales como el dolor y la diabetes. En particular, los compuestos de la invención son útiles para la profilaxis y el tratamiento de enfermedades o condiciones que implican inflamación. Esta invención también hace referencia a intermedios y procedimientos útiles en la preparación de tales compuestos.

La interleucina-1 (IL-1) y el Factor de Necrosis Tumoral \alpha (TNF-\alpha) son citocinas pro-inflamatorias secretadas por una variedad de células, incluyendo monocitos y macrófagos, en respuesta a muchos estímulos inflamatorios (p. ej., lipopolisacáridos - LPS) o estrés celular externo (p. ej., choque osmótico y peróxidos).

Los niveles elevados de TNF-\alpha y/o IL-1 sobre los niveles basales han sido implicados en la mediación o exacerbación de numerosos estados de enfermedad incluyendo la artritis reumatoide; la enfermedad de Pagets; la osteoporosis; el mieloma múltiple; la uveitis; la leucemia mielógena aguda y crónica; la destrucción de las células \beta pancreáticas; la osteoartritis; la espondilitis reumatoide; la artritis gotosa; la enfermedad inflamatoria del intestino; el síndrome de la fatiga respiratoria en adultos (ARDS); la psoriasis; la enfermedad de Crohn; la rinitis alérgica; la colitis ulcerativa; la anafilaxis; la dermatitis de contacto; el asma; la degeneración muscular; la caquexia; el síndrome de Reiter; la diabetes de tipo I y II; las enfermedades de resorción ósea; la reacción injerto vs. anfitrión; la lesión de isquemia-reperfusión; aterosclerosis; el trauma cerebral; la esclerosis múltiple; la malaria cerebral; la sepsis; el choque séptico; el síndrome del choque tóxico; la fiebre, y las mialgias debidas a infección. El HIV-1, el HIV-2, el HIV-3, el citomegalovirus (CMV), la influenza, el adenovirus, los herpes virus (incluyendo HSV-1, HSV-2), y el herpes zoster también son exacerbados por el TNF-\alpha.

Se ha informado de que el TNF-\alpha juega un papel en el trauma craneoencefálico, la apoplejía, y la isquemia. Por ejemplo, en modelos animales de traumatismo craneoencefálico (rata), los niveles de TNF-\alpha aumentaban en el hemisferio contusionado (Shohami et al., J. Cereb. Blood Flow Metab. 14, 615 (1994)). En un modelo de isquemia en rata en el que la arteria cerebral media era ocluida, los niveles de ARNm de TNF-\alpha de TNF-\alpha aumentaban (Feurstein et al., Neurosci. Lett. 164, 125 (1993)). Se ha informado de que la administración de TNF-\alpha al córtex de la rata da como resultado una acumulación significativa de neutrófilos en los capilares y una adherencia en los vasos sanguíneos pequeños. El TNF-\alpha promueve la infiltración de otras citocinas (IL-1\beta, IL-6) y también quimiocinas, que promueven la infiltración de neutrófilos en la zona del infarto (Feurstein, Stroke 25, 1481 (1994)). También se ha implicado el TNF-\alpha por jugar un papel en la diabetes de tipo II (Endocrinol. 130, 43-52, 1994; y Endocrinol. 136, 1474-1481, 1995).

El TNF-\alpha parece jugar un papel en la promoción de ciertos ciclos de la vida viral y estados de enfermedad asociados con ellos. Por ejemplo, el TNF-\alpha secretado por los monocitos inducía niveles elevados de expresión de HIV en un clon de células T infectadas crónicamente (Clouse et al., J. Immunol. 142, 431 (1989)). Lahdevirta et al., (Am. J Med. 85, 289 (1988)) estudiaron el papel del TNF-\alpha en los estados de caquexia y degradación muscular asociados con el HIV.

El TNF-\alpha está aguas arriba en la cascada de citocinas de la inflamación. Como resultado, los niveles elevados de TNF-\alpha pueden conducir a niveles elevados de otras citocinas inflamatorias o pro-inflamatorias, tales como IL-1, IL-6, y IL-8.

Los niveles elevados de IL-1 sobre los niveles basales han sido implicados en la mediación o exacerbación de numerosos estados de enfermedad incluyendo; la artritis reumatoide; la osteoartritis; la espondilitis reumatoide; la artritis gotosa; la enfermedad inflamatoria del intestino; el síndrome de la fatiga respiratoria en adultos (ARDS); la psoriasis; la enfermedad de Crohn; la colitis ulcerativa; la anafilaxis; la degeneración muscular; la caquexia; el síndrome de Reiter; la diabetes de tipo I y II; las enfermedades de resorción ósea; la lesión de isquemia- reperfusión; la aterosclerosis; el trauma cerebral; la esclerosis múltiple; la sepsis; el choque séptico; y el síndrome del choque tóxico. Los virus sensibles a la inhibición de TNF-\alpha, HIV-1, HIV-2, HIV-3, también son afectados por la IL-1.

El TNF-\alpha y la IL-1 parecen jugar un papel en la destrucción de las células \beta pancreáticas y en la diabetes. Las células \beta pancreáticas producen insulina que ayuda a mediar la homeostasis de la glucosa en sangre. El deterioro de las células \beta pancreáticas a menudo acompaña a la diabetes de tipo I. Las anomalías funcionales de las células \beta pancreáticas pueden aparecer en pacientes con diabetes de tipo II. La diabetes de tipo II se caracteriza por una resistencia funcional a la insulina. Adicionalmente, la diabetes de tipo II también está acompañada a menudo por niveles elevados de glucagón en plasma y por un incremento de las velocidades de producción de glucosa hepática. El glucagón es una hormona reguladora que atenúa la inhibición de la gluconeogénesis en el hígado por la insulina. Se han encontrado receptores de glucagón en el hígado, el riñón y el tejido adiposo. De este modo los antagonistas de glucagón son útiles para atenuar los niveles de glucosa en plasma (WO 97/16442, incorporada en la presente memoria como referencia en su totalidad). Ejerciendo un efecto antagónico sobre los receptores de glucagón, se piensa que mejorará la sensibilidad a la insulina en el hígado, disminuyendo de ese modo la gluconeogénesis y disminuyendo la velocidad de producción de glucosa hepática.

En modelos de artritis reumatoide en animales, las inyecciones múltiples intraarticulares de IL-1 han conducido a una forma aguda y destructiva de artritis (Chandrasekhar et al., Clinical Immunol Immunopathol. 55, 382 (1990)). En estudios en los que se utilizan células sinoviales reumatoides cultivadas, la IL-1 es un inductor más potente de estromelisina que el TNF-\alpha (Firestein, Am. J. Pathol. 140, 1309 (1992)). En los lugares de la inyección local, se ha observado la migración de neutrófilos, linfocitos, y monocitos. La migración es atribuida a la inducción de quimiocinas (p. ej., IL-8), y a la regulación al alza de las moléculas de adherencia (Dinarello, Eur. Cytokine Netw. 5, 517-531 (1994)).

La Il-1 también parece jugar un papel en la promoción de los ciclos de vida de los virus. Por ejemplo, el incremento inducido por citocinas de la expresión de HIV en una línea de macrófagos infectada crónicamente ha sido asociada con un incremento concomitante y selectivo de la producción de IL-1 (Folks et al., J. Immunol. 136, 40 (1986)). Beutler et al. (J. Immunol. 135, 3969 (1985)) estudiaron el papel de la IL-1 en la caquexia. Baracos et al. (New Eng. J Med. 308, 553 (1983)) estudiaron el papel de la IL-1 en la degeneración muscular.

En la artritis reumatoide, tanto la IL-1 como el TNF-\alpha inducen a los sinoviocitos y condriocitos a producir colagenasa y proteasas neutras, lo que conduce a la destrucción tisular en las articulaciones artríticas. En un modelo de artritis (artritis inducida por colágeno) (CIA) en ratas y ratones), la administración intra-articular de TNF-\alpha antes o después de la inducción de CIA conducía a un comienzo acelerado de la artritis y a un curso más grave de la enfermedad (Brahn et al., Lymphokine Cytokine Res. 11, 253 (1992); y Cooper, Clin. Exp. Immunol. 898, 244 (1992)).

La IL-8 ha sido implicada en la exacerbación y/o producción de muchos estados de enfermedad en los cuales la infiltración masiva de neutrófilos en los lugares de inflamación o lesión (p. ej., isquemia) está mediada por la naturaleza quimiotáctica de IL-8, incluyendo, pero no limitados a, los siguientes: asma, enfermedad inflamatoria del intestino, psoriasis, síndrome de fatiga respiratoria en adultos, lesión por reperfusión cardíaca y renal, trombosis y glomerulonefritis. Además del efecto de quimiotaxis sobre los neutrófilos, la IL-8 también tiene la capacidad de activar los neutrófilos. De este modo, la reducción de los niveles de IL-8 puede conducir a una disminución de la infiltración de neutrófilos.

Se han adoptado numerosos enfoques para bloquear el efecto del TNF-\alpha. Un enfoque implica la utilización de receptores solubles para el TNF-\alpha (p. ej., TNFR-55 o TNFR-75), que han demostrado eficacia en modelos animales de estados de enfermedad mediados por TNF-\alpha. Un segundo enfoque para neutralizar el TNF-\alpha utilizando un anticuerpo monoclonal específico para TNF-\alpha, cA2, ha demostrado una mejoría en el recuento de articulaciones hinchadas en una prueba de artritis reumatoide en humanos en Fase II (Feldmann et al., Immunological Reviews, pp. 195-223 (1995)). Estos enfoques bloquean los efectos del TNF-\alpha y la IL-1 mediante secuestro de proteínas o antagonismo de receptores.

En US 5.100.897, incorporada en la presente memoria como referencia en su totalidad, se describen compuestos de pirimidinona útiles como antagonistas de angiotensina II en los que uno de los átomos de nitrógeno del anillo de pirimidinona está sustituido por un radical fenilmetilo o fenetilo sustituido.

En US 5.162.325, incorporada en la presente memoria como referencia en su totalidad, se describen compuestos de pirimidinona útiles como antagonistas de angiotensina II donde uno de los átomos de nitrógeno del anillo de pirimidinona está sustituido por un radical fenilmetilo sustituido.

En EP 481448, incorporada en la presente memoria como referencia en su totalidad, se describen compuestos de pirimidinona útiles como antagonistas de angiotensina II donde uno de los átomos de nitrógeno del anillo de pirimidinona está sustituido por un radical fenilo, fenilmetilo o fenetilo sustituido.

En CA 2.020.370, incorporada en la presente memoria como referencia en su totalidad, se describen compuestos de pirimidinona útiles como antagonistas de angiotensina II donde uno de los átomos de nitrógeno del anillo de pirimidinona está sustituido por un radical hidrocarbonado bifenilalifático sustituido.

Los siguientes documentos describen compuestos estructuralmente relacionados:

D1:

WO 98/52937 A (SEARLE & CO (US)) 26 Noviembre 1998 (1998-11-26)

D2:

WO 01/16138 A (ABBOTT LAB (US)) 8 Marzo 2001 (2001-03-08)

D3:

WO 00/59506 A (BRISTOL-MYERS SQUIBB CO (US)) 12 Octubre 2000 (2000-10-12)

D4:

EP-A-0 388 690 (STERLING DRUG INC (US)) 26 Septiembre 1990 (1990-09-26)

D5:

EP-A-0 299 407 (STERLING DRUG INC) 18 Enero 1989 (1989-01-18)

D6:

US-A-4 268 626 (ASAHI KASEI KOGYO KABUSHIKI KAISHA (JP)) 19 Mayo 1981 (1981-05-19)

D7:

DATABASE CA [Online] CHEMICAL ABSTRACTS SERVICE, COLUMBUS, OHIO, US; DOWNS, JENNIFER R. ET AL: "Preparation of substituted 1,2-dihidro-3H-pirazol-3-onas from polylithiated 2'-fenilfenilaceto-hydrazides and aromatic esters" XP002262617 recuperado de STN Database núm. acceso 135:226928

D8:

DATABASE CA [Online] CHEMICAL ABSTRACTS SERVICE, COLUMBUS, OHIO, US; TODA, TAKASHI ET AL: "Reactions of difenilciclopropenone with hydrazine derivatives: formation of pyrazolone derivatives via 3-aminocinnamohydrazides" XP002262618 recuperado de STN Database núm. acceso 107:77692

D9:

DATABASE CA [Online] CHEMICAL ABSTRACTS SERVICE, COLUMBUS, OHIO, US; CAPUANO, LILLY ET AL: "Syntheses with 2-diazo-1,3-diketones, III. Cyclocondensations with H-nucleophiles" XP002262619 recuperado de STN Database núm. acceso 89:146867

D10:

DATABASE CA [Online] CHEMICAL ABSTRACTS SERVICE, COLUMBUS, OHIO, US; BOBERG, FRIEDRICH ET AL: "1,2-Dithiaciclopentenes. XVIII. 3-Amino-4-aryl-5-pyrazolinones from 5-amino-4-aryl-1,2-dithiaciclopenten-3-onas" XP002262620 recuperado de STN Database núm. acceso 73:14756

D11:

DATABASE CA [Online] CHEMICAL ABSTRACTS SERVICE, COLUMBUS, OHIO, US; DYMEK, WOJCIECH ET AL: "Reactions of thiosemicarbazones with halo ketones" XP002262621 recuperado de STN Database núm. acceso 68:78208

D12:

DATABASE CA [Online] CHEMICAL ABSTRACTS SERVICE, COLUMBUS, OHIO, US; DYMEK, WOJCIECH ET AL: "Reactions of thiosemicarbazones with halo ketones. IV" XP002262622 recuperado de STN Database núm. acceso 66:37827

D13:

DATABASE CA [Online] CHEMICAL ABSTRACTS SERVICE, COLUMBUS, OHIO, US; AURICH, HANS GUENTER: "Reactions of nitriles with nitroso compounds" XP002262623 recuperado de STN Database núm. acceso 64:27245

D14:

DATABASE CA [Online] CHEMICAL ABSTRACTS SERVICE, COLUMBUS, OHIO, US; SANDSTROM, JAN: "The formation of pyrazoles from thiohydrazides and.alpha.-halo carbonyl compounds. II. 5,6-Difenilthiadiazines y 4,5-difenilpyrazoles" XP002262624 recuperado de STN Database núm. acceso 56:60604

D15:

WO 99/51580 A (ABBOTT LAB (US)) 14 Octubre 1999 (1999-10-14)

D16:

WO 98/52941 A (SEARLE & CO (US)) 26 Noviembre 1998 (1998-11-26)

D17:

WO 98/56377 A (SMITHKLINE BEECHAM (US)) 17 Diciembre 1998 (1998-12-17)

\quad

D1 y D15 a D17 describen compuestos de farmacología relacionada. D2 y D3 describen compuestos para usos médicos relacionados.

Breve descripción de la invención

La presente invención comprende una nueva clase de compuestos útiles en la profilaxis y el tratamiento de enfermedades, tales como las enfermedades mediadas por TNF-\alpha, IL-1\beta, IL-6 y/o IL-8 y otras malignidades, tales como el dolor y la diabetes. En particular, los compuestos de la invención son útiles para la profilaxis y el tratamiento de enfermedades o condiciones que implican inflamación. Por consiguiente, la invención también comprende composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos para la profilaxis y el tratamiento de las enfermedades mediadas por TNF-\alpha, IL-1\beta, IL-6 y/o IL-8, tales como las enfermedades inflamatorias, con dolor y la diabetes y los intermedios y procedimientos útiles para la preparación de los compuestos de la invención.

Los compuestos de la invención están representados por la siguiente estructura general:

1

Lo anterior resume sencillamente ciertos aspectos de la invención, y no se pretende, ni se debe considerar, que sea limitante de la invención en modo alguno. Todas las patentes y otras publicaciones citadas en la presente memoria se incorporan como referencia en su totalidad.

Descripción detallada de la invención

Según la presente invención, se proporcionan compuestos de fórmula:

2

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, donde

R^{2} es alquilo C_{1}-C_{8}, fenilo, bencilo, R^{c}, R^{f}, alquil(C_{1}-C_{4})R^{c}, alquil(C_{1}-C_{4})R^{f} o R^{g};

R^{3} es fenilo, naftilo, o un heterociclo anular de 5 o 6 miembros saturado o insaturado que contiene de 1 a 4 heteroátomos seleccionados entre N, O y S, donde no más de 2 de los heteroátomos son O o S, y el heterociclo está sustituido con 0, 1 o 2 grupos oxo y está opcionalmente fusionado con un grupo benzo, cualquiera de los cuales está sustituido con 0, 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados entre alquilo C_{1}-C_{8}, haloalquilo C_{1}-C_{4}, halo, ciano, nitro, -C(=O)R^{b}, -C(=O)OR^{b}, -C(=O)NR^{a}R^{a}, -C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -OR^{a}, -OC(=O)R^{b}, -OC(=O)NR^{a}R^{a}, -OC(=O)N(R^{a})S(=O)_{2}
R^{b}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})OR^{a}, -SR^{a}, -S(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}R^{b}, -S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C(=O)R^{b}, -N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})S(=O)_{2}R^{b}, -N(R^{a})S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -NR^{a}-alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a} y -NR^{a}-alquil(C_{2}-C_{6})OR^{a};

R^{4} es 4-piridilo sustituido con 0, 1 o 2 grupos oxo y está opcionalmente fusionado con un grupo benzo, cualquiera de los cuales está sustituido con 0, 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados entre alquilo C_{1}-C_{8}, haloalquilo C_{1}-C_{4}, halo, ciano, nitro, -C(=O)R^{b}, -C(=O)OR^{b}, -C(=O)NR^{a}R^{a}, -C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -OR^{a}, -OC(=O)R^{b}, -OC(=O)NR^{a}R^{a}, -OC(=O)N(R^{a})S(=O)_{2}R^{b}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})OR^{a}, -SR^{a}, -S(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}R^{b}, -S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C(=O)R^{b}, -N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})S(=O)_{2}R^{b}, -N(R^{a})S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -NR^{a}-alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a} y -NR^{a}alquil(C_{2}-C_{6})-OR^{a};

R^{a} es independientemente en cada caso H o R^{b};

R^{b} es independientemente en cada caso alquilo C_{1}-C_{8}, fenilo o bencilo;

R^{c} es independientemente en cada caso un anillo monocíclico de 5, 6 o 7 miembros o un anillo bicíclico de 6, 7, 8, 9, 10 u 11 miembros saturado o insaturado que contiene 1, 2 o 3 átomos seleccionados entre N, O y S, donde el anillo está fusionado con 0 o 1 grupos benzo y 0 o 1 anillos heterocíclicos de 5, 6 o 7 miembros saturados o insaturados que contienen 1, 2 o 3 átomos seleccionados entre N, O y S; donde los átomos de carbono del anillo están sustituidos con 0, 1 o 2 grupos oxo;

R^{d} es independientemente en cada caso alquilo C_{1}-C_{8}, haloalquilo C_{1}-C_{4}, halo, ciano, nitro, -C(=O)R^{b}, -C(=O)OR^{b}, -C(=O)NR^{a}R^{a}, -C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -OR^{a}, -OC(=O)R^{b}, -OC(=O)NR^{a}R^{a}, -OC(=O)N(R^{a})S(=O)_{2}R^{b}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})OR^{a}, -SR^{a}, -S(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}R^{b}, -S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C(=O)R^{b}, -N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C
(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})S(=O)_{2}R^{b}, -N(R^{a})S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -NR^{a}alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a} o -NR^{a}alquil(C_{2}-C_{6})OR^{a};

R^{c} es independientemente en cada caso alquilo C_{1}-C_{6} sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre R^{d};

R^{f} es independientemente en cada caso R^{c} sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre R^{d}; y

R^{g} es independientemente en cada caso R^{b} sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre R^{c}, R^{f} y R^{d}.

En otra realización, junto con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, R^{2} es R^{c}, R^{f}, alquil(C_{1}-C_{4})R^{c}, alquil(C_{1}-C_{4})R^{f} o R^{g}.

En otra realización, junto con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, R^{2} es R^{c}.

En otra realización, junto con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, R^{2} es alquil(C_{1}-C_{4})R^{c}.

En otra realización, junto con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, R^{2} es alquil(C_{1}-C_{4})R^{f}.

En otra realización, junto con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, R^{2} es R^{g}.

En otra realización, junto con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, R^{2} es alquilo C_{1}-C_{8}, fenilo o bencilo.

En otra realización, junto con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, R^{2} es alquilo C_{1}-C_{8}.

En otra realización, junto con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, R^{2} es fenilo o bencilo.

En otra realización, junto con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, R^{3} es fenilo o naftilo ambos los cuales están sustituidos con 0, 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados entre alquilo C_{1}-C_{8}, haloalquilo C_{1}-C_{4}, halo, ciano, nitro, -C(=O)R^{b}, -C(=O)OR^{b}, -C(=O)NR^{a}R^{a}, -C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -OR^{a}, -OC(=O)R^{b}, -OC(=O)NR^{a}R^{a}, -OC(=O)N(R^{a})S(=O)_{2}R^{b}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})OR^{a}, -SR^{a}, -S(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}R^{b}, -S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C(=O)R^{b}, -N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})S(=O)_{2}R^{b}, -N(R^{a})S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -NR^{a}alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a} y -NR^{a}-alquil(C_{2}-C_{6})OR^{a}.

En otra realización, junto con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, R^{3} es naftilo no sustituido o fenilo sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados entre alquilo C_{1}-C_{8}, haloalquilo C_{1}-C_{4}, halo, ciano, nitro, -C(=O)R^{b}, -C(=O)OR^{b}, -C(=O)NR^{a}R^{a}, -C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -OR^{a}, -OC(=O)R^{b}, -OC(=O)NR^{a}R^{a}, -OC(=O)N(R^{a})S(=O)_{2}
R^{b}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})OR^{a}, -SR^{a}, -S(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}R^{b}, -S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C(=O)R^{b}, -N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})S(=O)_{2}R^{b}, -N(R^{a})S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -NR^{a}-alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a} y -NR^{a}-alquil(C_{2}-C_{6})OR^{a}.

En otra realización, junto con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, R^{3} es naftilo no sustituido.

En otra realización, junto con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, R^{3} es fenilo sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados entre alquilo C_{1}-C_{8}, haloalquilo C_{1}-C_{4}, halo, ciano, nitro, -C(=O)R^{b}, -C
(=O)OR^{b}, -C(=O)NR^{a}R^{a}, -C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -OR^{a}, -OC(=O)R^{b}, -OC(=O)NR^{a}R^{a}, -OC(=O)N(R^{a})S(=O)_{2}R^{b}, -O-alquil-(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})OR^{a}, -SR^{a}, -S(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}R^{b}, -S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C(=O)R^{b}, -N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})S(=O)_{2}R^{b}, -N(R^{a})S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -NR^{a}-alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a} y -NR^{a}-alquil(C_{2}-C_{6})OR^{a}.

En otra realización, junto con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, R^{3} es fenilo sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados entre alquilo C_{1}-C_{8}, haloalquilo C_{1}-C_{4}, y halo.

En otra realización, junto con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, R^{3} es fenilo sustituido con 1 o 2 átomos de cloro.

En otra realización, junto con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, R^{3} es un heterociclo anular de 5 o 6 miembros saturado o insaturado que contiene 1-4 heteroátomos seleccionados entre N, O y S, donde no más de 2 de los heteroátomos son O o S, y el heterociclo está sustituido con 0, 1 o 2 grupos oxo y está opcionalmente fusionado con un grupo benzo, cualquiera de los cuales está sustituido con 0, 1, 2 o 3 alquilo C_{1}-C_{8}, haloalquilo C_{1}-C_{4}, halo, ciano, nitro, -C(=O)R^{b}, -C(=O)OR^{b}, -C(=O)NR^{a}R^{a}, -C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -OR^{a}, -OC(=O)R^{b}, -OC(=O)NR^{a}R^{a}, -OC(=O)N(R^{a})S(=O)_{2}R^{b}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})OR^{a}, -SR^{a}, -S(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}R^{b}, -S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C(=O)R^{b}, -N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})S(=O)_{2}R^{b}, -N(R^{a})S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -NR^{a}-alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a} o -NR^{a}-alquil(C_{2}-C_{6})OR^{a}.

Otro aspecto de la invención hace referencia a una composición farmacéutica que comprende un compuesto según una cualquiera de las realizaciones anteriores y un portador farmacéuticamente aceptable.

Los compuestos son útiles para la profilaxis o el tratamiento de la inflamación que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto según una cualquiera de las realizaciones anteriores.

Los compuestos son útiles para la profilaxis o el tratamiento de la artritis reumatoide, la enfermedad de Pagets, la osteoporosis, el mieloma múltiple, la uveitis, la leucemia mielógena aguda o crónica, la destrucción de las células \beta pancreáticas, la osteoartritis, la espondilitis reumatoide, la artritis gotosa, la enfermedad inflamatoria del intestino, el síndrome de fatiga respiratoria en adultos (ARDS), la psoriasis, la enfermedad de Crohn, la rinitis alérgica, la colitis ulcerativa, la anafilaxis, la dermatitis de contacto, el asma, la degeneración muscular, la caquexia, el síndrome de Reiter, la diabetes de tipo I, la diabetes de tipo II, las enfermedades de resorción ósea, la reacción injerto vs. anfitrión, la enfermedad de Alzheimer, la apoplejía, el infarto de miocardio, la lesión de isquemia-reperfusión, la aterosclerosis, el trauma cerebral, la esclerosis múltiple, la malaria cerebral, la sepsis, el choque séptico, el choque tóxico, la fiebre, las mialgias debidas a infección por HIV-1, HIV-2, HIV-3, citomegalovirus (CMV), influenza, adenovirus, herpes virus o herpes zoster en un mamífero que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto según una cualquiera de las realizaciones anteriores.

Los compuestos son útiles para disminuir las concentraciones en plasma de cualquiera o de ambos TNF-\alpha e IL-1 que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto según una cualquiera de las realizaciones
anteriores.

Los compuestos son útiles para disminuir las concentraciones en plasma de cualquiera o de ambas IL-6 e IL-8 que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto según una cualquiera de las realizaciones anteriores.

Los compuestos son útiles para la profilaxis o el tratamiento de la enfermedad de la diabetes en un mamífero que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto según una cualquiera de las realizaciones anteriores para producir un efecto antagonista del glucagón.

Los compuestos son útiles para la profilaxis o el tratamiento de un trastorno con dolor en un mamífero que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto según una cualquiera de las realizaciones anteriores.

Los compuestos son útiles para disminuir la producción de prostaglandinas en un mamífero que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto según una cualquiera de las realizaciones anteriores.

Los compuestos son útiles para disminuir la actividad de la enzima ciclooxigenasa en un mamífero que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto según una cualquiera de las realizaciones anteriores. En otra realización, la enzima ciclooxigenasa es COX-2.

Los compuestos son útiles para disminuir la actividad de la enzima ciclooxigenasa en un mamífero que comprende administrar una cantidad eficaz de la composición farmacéutica anterior. En otra realización la enzima ciclooxigenasa es COX-2.

Otro aspecto de la invención hace referencia a la fabricación de un medicamento que comprende un compuesto según una cualquiera de las realizaciones anteriores. Otro aspecto de la invención hace referencia a la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la inflamación que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto según una cualquiera de las realizaciones anteriores.

Otro aspecto de la invención hace referencia a la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la artritis reumatoide, la enfermedad de Pagets, la osteoporosis, el mieloma múltiple, la uveitis, la leucemia mielógena aguda o crónica, la destrucción de las células \beta pancreáticas, la osteoartritis, la espondilitis reumatoide, la artritis gotosa, la enfermedad inflamatoria del intestino, el síndrome de fatiga respiratoria en adultos (ARDS), la psoriasis, la enfermedad de Crohn, la rinitis alérgica, la colitis ulcerativa, la anafilaxis, la dermatitis de contacto, el asma, la degeneración muscular, la caquexia, el síndrome de Reiter, la diabetes de tipo I, la diabetes de tipo II, las enfermedades de resorción ósea, la reacción injerto vs. anfitrión, la enfermedad de Alzheimer, la apoplejía, el infarto de miocardio, la lesión de isquemia-reperfusión, la aterosclerosis, el trauma cerebral, la esclerosis múltiple, la malaria cerebral, la sepsis, el choque séptico, el síndrome de choque tóxico, la fiebre, las mialgias debidas a infección por HIV-1, HIV-2, HIV-3, citomegalovirus (CMV), influenza, adenovirus, herpes virus o herpes zoster en un mamífero que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto según una cualquiera de las realizaciones
anteriores.

Otro aspecto de la invención hace referencia a un método de elaboración de un compuesto como se ha descrito en la presente memoria, que comprende las etapas de:

hacer reaccionar R^{3}-CO_{2}H con R^{4}-C(=O)H en presencia de trialquilamina y anhídrido acético;

proteger el ácido resultante con un grupo protector; y

hacer reaccionar el ácido protegido con hidrazina para formar

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Los compuestos de esta invención pueden tener en general diversos centros asimétricos y son representados típicamente en forma de mezclas racémicas. Se pretende que esta invención abarque las mezclas racémicas, las mezclas parcialmente racémicas y los enantiómeros y diastereoisómeros separados.

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La memoria y las reivindicaciones contienen listas de secuencias en las que se utiliza la expresión "seleccionado entre ...y ..." y "es ... o ..." (a veces referido a grupos de Markush). Cuando se utiliza esta expresión en esta solicitud, a menos que se establezca de otro modo se pretende incluir el grupo en su totalidad, o cualquiera de los miembros individuales del mismo, o cualquiera de los subgrupos del mismo. El uso de esta expresión es meramente con el fin de abreviar y no se pretende en modo alguno limitar la separación de elementos individuales o subgrupos del
género.

A menos que se especifique de otro modo, las siguientes definiciones se aplican a los términos encontrados en la memoria y en las reivindicaciones:

"Arilo" representa un radical fenilo o naftilo, donde el fenilo puede estar fusionado con un puente cicloalquilo
C_{3}-C_{4}.

"Grupo benzo", solo o combinado, representa el radical divalente C_{4}H_{4}=, una representación del cual es -CH=CH-CH=CH-, que cuando está anclado próximo a otro anillo forma un anillo de tipo benceno por ejemplo tetrahidronaftileno, indol y similares.

"Alquilo C_{\alpha}-C_{\beta}" representa un grupo alquilo que comprende de \alpha a \beta átomos de carbono en una relación ramificada, cíclica o lineal o cualquier combinación de las tres. Los grupos alquilo descritos en esta sección también pueden contener enlaces dobles o triples. Los ejemplos de alquilo C_{1}-C_{8} incluyen, pero no están limitados a los
siguientes:

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"Halógeno" y "halo" representan átomos de halógeno seleccionados entre F, Cl, Br y I. "Haloalquilo C_{\alpha}-C_{\beta}" representa un grupo alquilo, como se ha descrito antes, donde cualquier número - al menos uno - de los átomos de hidrógeno anclados a la cadena alquílica están remplazados por F, Cl, Br o I.

"Heterociclo" representa un anillo que comprende al menos un átomo de carbono y al menos otro átomo seleccionado entre N, O y S. Los ejemplos de los heterociclos que se pueden encontrar en las reivindicaciones incluyen, pero no están limitados a, los siguientes:

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60

"Sal farmacéuticamente aceptable" representa una sal preparada mediante métodos convencionales, y son bien conocidas por los expertos en la técnica. Las "sales farmacológicamente aceptables" incluyen sales alcalinas de ácidos inorgánicos y orgánicos, incluyendo pero no limitados a ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido málico, ácido acético, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido láctico, ácido fumárico, ácido succínico, ácido maleico, ácido salicílico, ácido benzoico, ácido fenilacético, ácido mandélico y similares. Cuando los compuestos de la invención incluyen una función ácida tal como un grupo carboxi, los pares catiónicos farmacéuticamente aceptables adecuados para el grupo carboxi son bien conocidos por los expertos en la técnica e incluyen cationes alcalinos, alcalinotérreos, amonio, amonio cuaternario y similares. Para ejemplos adicionales de "sales farmacológicamente aceptables", véase infra y Berge et al., J. Pharm. Sci. 66:1 (1977).

"Grupo eliminable" hace referencia generalmente a grupos fácilmente desplazables por un nucleófilo, tal como una amina, un tiol o un nucleófilo alcohólico. Tales grupos eliminables son bien conocidos en la técnica. Los ejemplos de tales grupos eliminables incluyen, pero no están limitados a, N-hidroxisuccinimida, N-hidroxibenzotriazol, haluros, triflatos, tosilatos y similares. Los grupos eliminables preferidos se indican en la presente memoria cuando es apropiado.

"Grupo protector" hace referencia generalmente a grupos bien conocidos en la técnica que se utilizan para evitar que grupos reactivos seleccionados, tales como carboxi, amino, hidroxi, mercapto y similares, se sometan a reacciones no deseadas, tales como nucleofílicas, electrofílicas, oxidación, reducción y similares. Los grupos protectores preferidos se indican cuando es apropiado. Los ejemplos de los grupos protectores incluyen, pero no están limitados a, aralquilo, aralquilo sustituido, cicloalquenilalquilo y cicloalquenilalquilo sustituido, alilo, alilo sustituido, acilo, alcoxicarbonilo, aralcoxicarbonilo, sililo y similares. Los ejemplos de aralquilo incluyen, pero no están limitados a, bencilo, orto-metilbencilo, tritilo y benzhidrilo, que pueden estar opcionalmente sustituidos con halógeno, alquilo, alcoxi, hidroxi, nitro, acilamino, acilo y similares, y sales, tales como sales de fosfonio y amonio. Los ejemplos de los grupos arilo incluyen fenilo, naftilo, indanilo, antracenilo, 9-(9-fenilfluorenilo), fenantrenilo, durenilo y similares. Los ejemplos de los radicales cicloalquenilalquilo o cicloalquilenilalquilo sustituido, tienen preferiblemente de 6 a 10 átomos de carbono, incluyen, pero no están limitados a, ciclohexenilmetilo y similares. Los grupos acilo, alcoxicarbonilo y aralcoxicarbonilo incluyen benciloxicarbonilo, t-butoxicarbonilo, iso-butoxicarbonilo, benzoilo, benzoilo sustituido, butirilo, acetilo, tri-fluoroacetilo, tri-cloro acetilo, ftaloilo y similares. Se puede usar una mezcla de grupos protectores para proteger el mismo grupo amino, por ejemplo un grupo amino primario puede estar protegido con un grupo aralquilo y un grupo aralcoxicarbonilo. Los grupos protectores de amino también pueden formar un anillo heterocíclico con el nitrógeno al cual están anclados, por ejemplo, 1,2-bis(metilen)benceno, ftalimidilo, succinimidilo, maleimidilo y similares y donde estos grupos heterocíclicos pueden incluir adicionalmente anillos de arilo y cicloalquilo contiguos. Además, los grupos heterocíclicos pueden ser mono-, di- o tri-sustituidos, tales como nitroftalimidilo. Los grupos amino también pueden estar protegidos frente a reacciones no deseadas, tales como oxidación, por medio de la formación de una sal de adición, tal como hidrocloruro, ácido toluenosulfónico, ácido trifluoroacético y similares. Muchos de los grupos protectores de amino también son adecuados para proteger grupos carboxi, hidroxi y mercapto. Por ejemplo, grupos aralquilo. Los grupos alquilo también son adecuados para proteger grupos hidroxi y mercapto, tales como
tert-butilo.

Los grupos protectores de sililo son átomos de silicio opcionalmente sustituidos con uno o más grupos alquilo, arilo y aralquilo. Los grupos protectores de sililo adecuados incluyen, pero no están limitados a, trimetilsililo, trietillsililo, tri-isopropilsililo, tert-butildimetilsililo, dimetilfenilsililo, 1,2-bis(dimetilsilil)benceno, 1,2-bis(dimetilsilil)etano y difenilmetilsililo. La sililación de grupos amino proporciona grupos mono- o di-sililamino. La sililación de compuestos aminoalcohólicos puede conducir a un derivado N,N,O-tri-sililado. La separación de la función sililo de una función éter silílico se logra fácilmente mediante tratamiento, por ejemplo, con un reactivo de hidróxido metálico o de fluoruro de amonio, o bien como una etapa de reacción discreta o bien in situ durante una reacción con el grupo alcohólico. Los agentes sililantes adecuados son, por ejemplo, cloruro de trimetilsililo, cloruro de t-butildimetilsililo, cloruro de fenildimetilsililo, cloruro de difenilmetilsililo o sus productos combinados con imidazol o DMF. Los métodos para la sililación de aminas y la separación de grupos protectores de sililo son bien conocidos por los expertos en la técnica. Los métodos de preparación de estos derivados de amina de los correspondientes aminoácidos, amiduros de aminoácidos o ésteres de aminoácidos también son bien conocidos por los expertos en la técnica de la química orgánica incluyendo la química de aminoácido/éster de aminoácido o aminoalcohol.

Los grupos protectores son separados en condiciones que no afectan a la porción restante de la molécula. Estos métodos son bien conocidos en la técnica e incluyen la hidrólisis ácida, la hidrogenolisis y similares. Un método preferido implica la separación de un grupo protector, tal como la separación de un grupo benciloxicarbonilo mediante hidrogenolisis utilizando paladio sobre carbono en un sistema disolvente adecuado tal como un alcohol, ácido acético, y similares o mezclas de los mismos. Se puede separar un grupo protector t-butoxicarbonilo utilizando un ácido inorgánico u orgánico, tal como HCl o ácido trifluoroacético, en un sistema disolvente adecuado, tal como dioxano o cloruro de metileno. La sal de amina resultante puede ser fácilmente neutralizada para rendir la amina libre. El grupo protector de carboxi, tal como metilo, etilo, bencilo, t-butilo, 4-metoxifenilmetilo y similares, puede ser separado en condiciones de hidrólisis e hidrogenolisis bien conocidas por los expertos en la técnica.

Se debe observar que los compuestos de la invención pueden contener grupos que pueden existir en formas tautoméricas, tales como grupos amidina y guanidina cíclicos y acíclicos, grupos heteroarilo sustituidos con heteroátomos (Y' = O, S, NR), y similares, que se ilustran en los siguientes ejemplos:

7

y aunque se nombre, describa, presente y/o reivindique una forma en la presente memoria, se pretende que todas las formas tautoméricas estén incluidas inherentemente en semejante nombre, descripción, presentación y/o reivindicación.

Los profármacos de los compuestos de esta invención también están contemplados por esta invención. Un profármaco es un compuesto activo o inactivo que es modificado químicamente por medio de la acción fisiológica in vivo, tal como la hidrólisis, el metabolismo y similares, a un compuesto de esta invención después de la administración del profármaco a un paciente. La idoneidad y las técnicas implicadas en la elaboración y el uso de los profármacos son bien conocidos por los expertos en la técnica. Para un estudio general de los profármacos que implican ésteres véanse Svensson y Tunek Drug Metabolism Reviews 165 (1988) y Bundgaard Design of Prodrugs, Elsevier (1985). Los ejemplos de un anión carboxilato enmascarado incluyen una variedad de ésteres, tales como alquílico (por ejemplo, metílico, etílico), cicloalquílico (por ejemplo, ciclohexílico), aralquílico (por ejemplo, bencílico, p-metoxibencílico), y alquilcarboniloxialquílico (por ejemplo, pivaloiloximetílico). Las aminas han sido enmascaradas como derivados sustituidos con arilcarboniloximetilo que son escindidos por esterasas in vivo liberando el fármaco libre y formaldehído (Bundgaard J. Med. Chem. 2503 (1989)). Asimismo, los fármacos que contienen un grupo NH ácido, tales como imidazol, imida, indol y similares, han sido enmascarados con grupos N-aciloximetilo (Bundgaard Design of Prodrugs, Elsevier (1985)). Los grupos hidroxi han sido enmascarados como ésteres y éteres. En EP 039.051 (Sloan y Little, 4/11/81) se describen profármacos de base de Mannich-ácido hidroxámico, su preparación y su uso.

"Citocina" representa una proteína secretada que afecta a las funciones de otras células, concretamente en lo que se refiere a la modulación de las interacciones entre las células del sistema inmunitario o las células implicadas en la respuesta inflamatoria. Los ejemplos de las citocinas incluyen pero no están limitados a la interleucina 1 (IL-1), preferiblemente IL-1\beta, interleucina 6 (IL-6), interleucina 8 (IL-8) y TNF, preferiblemente TNF-\alpha (factor de necrosis tumoral \alpha).

"Enfermedad o estado de enfermedad mediado por TNF, IL-1, IL-6, y/o IL-8" representa todos los estados de enfermedad en los que TNF, IL-1, IL-6, y/o IL-8 juegan un papel, ya sea directamente como el propio TNF, IL-1, IL-6, y/o IL-8, ya sea mediante TNF, IL-1, IL-6, y/o IL-8 que inducen la liberación de otra citocina. Por ejemplo, un estado de enfermedad en el que IL-1 juega un papel principal, pero en el que la producción o la acción de IL-1 es resultado del TNF, se consideraría mediado por TNF.

Los compuestos según la invención pueden ser sintetizados según uno o más de los siguientes métodos. Se debe observar que los procedimientos generales se muestran por lo que se refiere a la preparación de los compuestos que tienen una estereoquímica no especificada. No obstante, tales procedimientos son aplicables generalmente a aquellos compuestos de estereoquímica específica, p. ej., en los que la estereoquímica en torno a un grupo es (S) o (R). Además, los compuestos que tienen una estereoquímica (p. ej., (R)) a menudo pueden ser utilizados para producir aquellos que tienen una estereoquímica opuesta (esto es, (S)) utilizando métodos bien conocidos, por ejemplo, mediante inversión.

Ejemplos Ejemplo 1

8

Ácido 2-(4-cloro-fenil)-3-piridin-4-il-acrílico

A una mezcla de ácido (4-cloro-fenil)acético (9,78 g) y piridina-4-carbaldehído 6,14 g se añadieron anhídrido acético 20 mL y trietilamina 20 mL. La mezcla de reacción se calentó a 120ºC durante 24 horas y se enfrió a la temperatura ambiente. Se añadieron agua y acetato de etilo. Los sólidos formados se filtraron, se lavaron con agua y acetato de etilo y se secaron para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color amarillo claro. MS (ES+): 260 (M+H)^{+}.

Ejemplo 2

9

Éster metílico de ácido 2-(4-cloro-fenil)-3-piridin-4-il-acrílico

La solución de ácido 2-(4-cloro-fenil)-3-piridin-4-il-acrílico 3,5 g en cloruro de tionilo 25 mL se calentó a 70ºC durante cinco horas. La reacción se enfrió a 0ºC, después se añadió metanol 50 mL. Después de templar a la temperatura ambiente a lo largo de una hora, todo el disolvente se separó a presión reducida. La elaboración utilizando acetato de etilo y bicarbonato de sodio produce un sólido de color amarillo claro. MS (ES+): 274 (M+H)^{+}.

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Ejemplo 3

10

4-(4-Cloro-fenil)-5-piridin-4-il-pirazolidin-3-ona

A una solución de éster metílico de ácido 2-(4-cloro-fenil)-3-piridin-4-il-acrílico 2,02 g en alcohol etílico 25 mL se añadió hidrazina 2,37 g. La reacción se calentó a 50ºC durante 135 minutos. Todo el disolvente se separó a presión reducida para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color amarillo claro. MS (ES+): 274 (M+H)^{+}.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 4

11

4-(4-Cloro-fenil)-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona

A una solución de 4-(4-cloro-fenil)-5-piridin-4-il-pirazolidin-3-ona 20 mg en alcohol etílico 5 mL se añadió Pd/C 1 mg. La reacción se calentó a 50ºC durante 48 horas, se enfrió a la temperatura ambiente, se filtró y se concentró hasta un sólido. La purificación mediante placa de TLC seguida de cristalización en cloroformo y metanol produjo el compuesto del título en forma de un sólido blanquecino. MS (ES+): 272 (M+H)^{+}.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 5

12

4-(4-Cloro-fenil)-1-piperidin-4-il-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona

Etapa A

Éster t-butílico de ácido 4-[4-(4-cloro-fenil)-3-oxo-5-piridin-4-il-pirazolidin-1-il]-piperidino-1-carboxílico

A una solución de 4-(4-cloro-fenil)-5-piridin-4-il-pirazolidin-3-ona 0,86 g y éster t-butílico de ácido 4-oxo-piperidino-1-carboxílico 0,75 g en cloroformo 35 mL se añadió triacetoxiborohidruro de sodio 0,75 g a 0ºC, la reacción se templó a la temperatura ambiente a lo largo de dos horas antes de calentar a 50ºC a lo largo de otras dos horas. La reacción se sofocó con agua 25 mL a 0ºC, y la capa orgánica se recogió, se filtró, se secó sobre MgSO_{4}, se concentró hasta un sólido de color amarillo 0,42 g para ser utilizado directamente para la siguiente etapa. MS (ES+): 457
(M+H)^{+}.

Etapa B

Éster t-butílico de ácido 4-[4-(4-cloro-fenil)-3-oxo-5-piridin-4-il-2,3-dihidro-pirazol-1-il]-piperidino-1-carboxílico

A una solución de éster t-butílico de ácido 4-[4-(4-cloro-fenil)-3-oxo-5-piridin-4-il-pirazolidin-1-il]-piperidino-1-carboxílico 0,42 g en etanol 25 mL se añadió paladio sobre carbono 0,02 g. la reacción se calentó a 50ºC durante 48 horas. La reacción se enfrió a la temperatura ambiente, se filtró y se concentró. La purificación mediante cromatografía instantánea produjo el compuesto del título en forma de un aceite incoloro. MS (ES+): 455 (M+H)^{+}; (ES-):
453 (M-H).

tapa C

4-(4-Cloro-fenil)-1-piperidin-4-il-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona

A una solución de éster t-butílico de ácido 4-[4-(4-cloro-fenil)-3-oxo-5-piridin-4-il-2,3-dihidro-pirazol-1-il]-piperidino-1-carboxílico 200 mg en un matraz se añadió HCl en éter y dioxano. Al cabo de 2,25 horas, el disolvente se evaporó a presión reducida para proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite incoloro. MS (ES+): 355 (M+H)^{+}; (ES-): 353 (M-H).

Ejemplo 6

13

4-(4-Cloro-fenil)-1-piperidin-3-il-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona

El compuesto del título se sintetizó análogamente mediante el método descrito en el ejemplo 5 a partir de éster t-butílico de ácido 3-oxo-piperidino-1-carboxílico. Este compuesto se obtuvo en forma de un sólido de color amarillo. MS (ES+): 355 (M+H)^{+}; (ES-): 353 (M-H)^{-}.

Ejemplo 7

14

4-(4-Cloro-fenil)-1-piperidin-4-ilmetil-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona

El compuesto del título fue sintetizado análogamente mediante el método descrito en el ejemplo 5 a partir de éster t-butílico de ácido 4-formil-piperidino-1-carboxílico. Este compuesto se obtuvo en forma de un sólido de color amarillo. MS (ES+): 369 (M+H)^{+}; (ES-): 367 (M-H)^{-}.

Ejemplo 8

15

4-(4-Cloro-fenil)-1-metil-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona

El compuesto del título fue sintetizado análogamente mediante el método descrito en el ejemplo 5 a partir de formaldehído. Este compuesto se obtuvo en forma de un sólido de color amarillo. MS (ES+): 286 (M+H)^{+}; (ES-): 284 (M-H)^{-}.

Ejemplo 9

16

4-(3,4-Diclorofenil)-1-piperidin-4-il-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona

El compuesto del título fue sintetizado análogamente mediante el método descrito en el Ejemplo 5. Se utilizó ácido 3,4-dicloro-fenilacético en lugar de ácido 4-clorofenilacético. MS (ES+): 389,0 (M+H)^{+}; (ES-): 387,4 (M-H)^{-}.

Ejemplo 10

17

4-(4-Clorofenil)-1-(1-metil-piperidin-4-il)-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona

Una solución de 4-(4-clorofenil)-1-piperidin-4-il-5-piridin-4-il-1,2-dihidropirazol-3-ona (0,12 g, 0,34 mmoles) en metanol anhidro (3 mL) se enfrió a 0ºC en un baño de agua con hielo y se añadió formaldehído (3 mL; 37% en peso en agua), seguido de borohidruro de sodio (0,039 g, 1 mmol). Después de agitar durante 1 hora, la mezcla de reacción se sofocó con agua y se diluyó con cloruro de metileno. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó (Na_{2}SO_{4}), y se concentró a vacío. El compuesto del título se aisló en forma de un sólido amorfo de color amarillo mediante HPLC preparativa. MS (ES+): 369,2 (M+H)^{+}; (ES-): 367,1 (M-H)^{-}.

Ejemplo 11

18

4-(4-Clorofenil)-1-(1-metil-piperidin-3-il)-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona

El compuesto del título fue sintetizado análogamente mediante el método descrito en el Ejemplo 10. Se utilizó 4-(4-clorofenil)-1-piperidin-3-il-5-piridin-4-il-1,2-dihidropirazol-3-ona, en lugar de 4-(4-clorofenil)-1-piperidin-4-il-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona. MS (ES+): 369,2 (M+H)^{+}; (ES-): 367,1 (M-H)^{-}.

Ejemplo 12

19

4-(4-Clorofenil)-1-(1-isopropil-piperidin-4-il)-5-piridin-4-il-1,2-dihidropirazol-3-ona

El compuesto del título fue sintetizado análogamente mediante el método descrito en el Ejemplo 10. Se utilizó acetona en lugar de formaldehído. MS (ES+): 397,3 (M+H)^{+}; (ES-): 395,2 (M-H)^{-}.

Ejemplo 13

20

4-[4-(4-Clorofenil)-3-metoxi-5-piridin-4-il-pirazol-1-il]-piperidina

Etapa A

Éster t-butílico de ácido 4-[4-(4-clorofenil)-3-metoxi-5-piridin-4-il-pirazol-1-il]-piperidino-1-carboxílico

Una solución de éster t-butílico de ácido 4-[4-(4-clorofenil)-3-oxo-5-piridin-4-il-2,3-dihidro-pirazol-1-il]-piperidino-1-carboxílico (0,135 g, 0,3 mmoles) en DMF seca (2 mL) se enfrió a 0ºC y se añadió hidruro de litio (0,0035 g, 0,45 mmoles). Después de agitar durante 5 minutos, se añadió yodometano (0,037 mL, 0,6 mmoles) y se dejó que la reacción se templara gradualmente a la temperatura ambiente y se agitó durante 20 horas. La reacción se diluyó con acetato de etilo y se lavó con agua; la capa acuosa se sometió a retrolavado con salmuera, se secó (Na_{2}SO_{4}), y se concentró a vacío. La cromatografía instantánea con 1%, 3%, y 5% de metanol/cloruro de metileno proporcionó 18,8 mg (13%) de un producto monometilado. MS (ES+): 469,2 (M+H)^{+}.

Etapa B

4-[4-(4-Clorofenil)-3-metoxi-5-piridin-4-il-pirazol-1-il]-piperidina

Siguiendo el procedimiento de la Etapa C del Ejemplo 5, se aisló el compuesto del título en forma de un sólido amorfo de color amarillo. MS (ES+): 369,2 (M+H)^{+}.

Ejemplo 14

21

4-(3,4-Dicloro-fenil)-5-piridin-4-il-pirazolidin-3-ona

Etapa A

Ácido 3-(3,4-dicloro-fenil)-2-oxo-4-piridin-4-il-but-3-enoico

A una mezcla de ácido (3,4-dicloro-fenil)-acético 10,3 g y piridin-4-carbaldehído 5,25 mL se añadió anhídrido acético 6 mL y piridina 6 mL. La mezcla de reacción se calentó a 120ºC durante 2 horas y se enfrió a la temperatura ambiente. Se añadieron agua y acetato de etilo. El sólido formado se filtró, se lavó con agua y acetato de etilo y se secó para proporcionar el compuesto del título 10,2 g en forma de un sólido de color amarillo claro. MS (ES+): 292 (M+H)^{+}.

Etapa B

Éster etílico de ácido 3-(3,4-dicloro-fenil)-2-oxo-4-piridin-4-il-but-3-enoico

La solución de ácido 3-(3,4-dicloro-fenil)-2-oxo-4-piridin-4-il-but-3-enoico 9,6 g en cloruro de tionilo 20 mL se calentó a 80ºC durante 1 hora. Se eliminó a vacío el exceso de cloruro de tionilo, se enfrió a 0ºC, después se añadió metanol 50 mL. Después de calentar a la temperatura ambiente a lo largo de una hora y a 60ºC durante 1 hora, todo el disolvente se separó a presión reducida. La elaboración utilizando acetato de etilo y bicarbonato de sodio dio el compuesto del título 11,43 g en forma de un sólido de color blanco. MS (ES+): 322 (M+H)^{+}.

Etapa C

4-(3,4-Dicloro-fenil)-5-piridin-4-il-pirazolidin-3-ona

A una solución de éster etílico de ácido 3-(3,4-dicloro-fenil)-2-oxo-4-piridin-4-il-but-3-enoico 11,4 g en alcohol etílico 50 mL se añadió hidrazina 1,68 mL. La reacción se calentó a 50ºC durante 15 horas. Todo el disolvente se separó a presión reducida para proporcionar el compuesto del título 10,8 g en forma de un sólido de color amarillo claro. MS (ES+): 308 (M+H)^{+}.

Ejemplo 15

22

4-(3,4-Dicloro-fenil)-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona

La solución de 4-(3,4-dicloro-fenil)-5-piridin-4-il-pirazolidin-3-ona 0,30 g, 20 mg de Pd/C y 20 mL de metanol se agitaron a la temperatura ambiente. Se hizo burbujear aire durante 2 horas. La separación por filtración del catalizador Pd/C, se eliminó a vacío todo el disolvente. El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido de color blanco 0,29 g. MS (ES+): 306 (M+H)^{+}.

Ejemplo 16

23

4-(3,4-Dicloro-fenil)-1-isopropil-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona

Etapa A

4-(3,4-Dicloro-fenil)-1-isopropil-5-piridin-4-il-pirazolidin-3-ona

A una solución de 4-(3,4-Dicloro-fenil)-5-piridin-4-il-pirazolidin-3-ona 0,30 g y 0,1 mL de acetona en cloroformo 20 mL se añadió NaBH_{3}(CN) 0,1 g a 0ºC, la reacción se calentó a 50ºC y se agitó durante 1 hora. La reacción se sofocó con NaHCO_{3} sat. 25 mL a 0ºC. La mezcla de reacción se extrajo con diclorometano, 3 x 50 mL. La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro. Después de la purificación mediante cromatografía ins-
tantánea, se obtuvo el compuesto del título en forma de un sólido de color amarillo 0,26 g. MS (ES+): 350 (M+H)^{+}.

Etapa B

4-(3,4-Dicloro-fenil)-1-isopropil-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona

La solución de 4-(3,4-Dicloro-fenil)-1-isopropil-5-piridin-4-il-pirazolidin-3-ona 90 mg en diclorometano 10 mL se trató con tribromuro de feniltrietilamonio 0,1 g a la temperatura ambiente, La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente durante 15 h. La reacción se sofocó con Na_{2}SO_{3} sat. 25 mL a 0ºC. La mezcla de reacción se extrajo con diclorometano, 3 x 50 mL. La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro. Tras la purificación mediante cromatografía instantánea, se obtuvo el compuesto del título en forma de un sólido de color amarillo claro 45 mg. MS (ES+): 348 (M+H)^{+}.

Ejemplo 17

24

1-(4-Aminociclohexil)-4-(4-clorofenil)-5-piridin-4-il-1,2-dihidropirazol-3-ona

Etapa A

Éster t-butílico de ácido {4-[4-(4-clorofenil)-3-oxo-5-piridin-4-il-2,3-dihidropirazol-1-il]ciclohexil}-carbamico

Siguiendo el procedimiento de la Etapa A del Ejemplo 5, excepto que se sustituyó el éster t-butílico de ácido 4-oxo-piperidino-1-carboxílico con éster t-butílico de ácido (4-oxo-ciclohexil)carbamico, se preparó el compuesto del título en forma de un sólido amorfo de color blanquecino. MS (ES+): 469,2 (M+H)^{+}; (ES-): 467,3 (M-H)^{-}.

Etapa B

1-(4-Aminociclohexil)-4-(4-clorofenil)-5-piridin-4-il-1,2-dihidropirazol-3-ona

Siguiendo el procedimiento de la Etapa C del Ejemplo 5, excepto que se sustituyó el éster t-butílico de ácido 4-[4-(4-clorofenil)-3-oxo-5-piridin-4-il-2,3-dihidro-pirazol-1-il]-piperidino-1-carboxílico con éster t-butílico de ácido {4-[4-(4-clorofenil)-3-oxo-5-piridin-4-il-2,3-dihidropirazol-1-il]ciclohexil}carbamico, se preparó el compuesto del título en forma de un sólido amorfo de color amarillo. MS (ES+): 369,3 (M+H)^{+}; (ES-): 367,2 (M-H)^{-}.

Ejemplo 18

25

1-(4-Aminociclohexil)-4-naftalen-2-il-5-piridin-4-il-1,2-dihidropirazol-3-ona

El compuesto del título fue sintetizado análogamente mediante el método descrito en el Ejemplo 20. Se utilizó ácido naftalen-2-il-acético, en lugar de ácido (4-clorofenil)acético. MS (ES+): 385,2 (M+H)^{+}; (ES-): 383,3 (M-H)^{-}.

Ejemplo 19

26

4-Naftalen-2-il-1-(3-fenilpropil)-5-piridin-4-1,2-dihidropirazol-3-ona

El compuesto del título fue sintetizado análogamente mediante el método descrito en la Etapa A, Ejemplo 20. Se utilizó 3-fenilpropionaldehído, en lugar de éster t-butílico de ácido 4-oxo-piperidino-1-carboxílico. MS (ES+): 390,2 (M+H)^{+}; (ES-): 388,2 (M-H)^{-}.

Análisis Biológicos

Se utilizaron los siguientes análisis para caracterizar la capacidad de los compuestos de la invención para inhibir la producción de TNF-\alpha e IL-1-\beta. El segundo análisis puede ser utilizado para medir la inhibición de TNF-\alpha y/o IL-1-\beta en ratones después de la administración oral de los compuestos de ensayo. El tercer análisis, un análisis in vitro de inhibición de la unión de glucagón, puede ser utilizado para caracterizar la capacidad de los compuestos de la invención para inhibir la unión del glucagón. El cuarto análisis, un análisis in vitro de la actividad de inhibición de la enzima ciclooxigenasa (COX-1 y COX-2), puede ser utilizado para caracterizar la capacidad de los compuestos de la invención para inhibir COX-1 y/o COX-2. El quinto análisis, un análisis de inhibición de la quinasa Raf, puede ser utilizado para caracterizar los compuestos de la invención para inhibir la fosforilación de MEK por medio de la quinasa raf.

Análisis de producción de TNF por monocitos activados por lipopolisacáridos Aislamiento de monocitos

Los compuestos de ensayo fueron evaluados in vitro en cuanto a la capacidad para inhibir la producción de TNF por los monocitos activados con lipopolisacáridos bacterianos (LPS). Se obtuvieron leucocitos de una fuente residual reciente (un subproducto de plaquetaféresis) de un banco de sangre local, y se aislaron células mononucleares de sangre periférica (PBMC) mediante centrifugación en gradiente de densidad sobre Ficol-Paque Plus (Pharmacia). Se suspendieron PBMC a 2 x 10^{6}/mL en DMEM con un suplemento de 2% FCS, 10 mM, 0,3 mg/mL de glutamato, 100 U/mL de penicilina G y 100 mg/mL de sulfato de estreptomicina (medio completo). Las células fueron cultivadas en placa en placas de cultivo de 96 pocillos, de fondo redondo Falcon (200 \muL/pocillo) y cultivadas durante la noche a 37ºC y 6% de CO_{2}. Las células no adherentes fueron separadas lavando con 200 \mul/pocillo de medio de nueva aportación. Los pocillos que contenían células adherentes (\sim70% monocitos) fueron rellenados con 100 \muL de medio de nueva aportación.

Preparación de soluciones de partida de compuesto de ensayo

Los compuestos de ensayo fueron disueltos en DMZ. Las soluciones de partida de compuesto fueron preparadas a una concentración inicial de 10 - 50 \muM. Las soluciones de partida fueron diluidas inicialmente a 20 - 200 \muM en medio completo. Después se prepararon nueve diluciones seriadas 2:1 de cada compuesto en medio completo.

Tratamiento de las células con compuestos de ensayo y activación de la producción de TNF con lipopolisacáridos

Se añadieron 100 \muL de cada dilución de compuesto de ensayo a pocillos de microtitulación que contenían monocitos adherentes y 100 \muL de medio completo. Los monocitos fueron cultivados con los compuestos de ensayo durante 60 minutos momento en el cual se añadieron 25 \muL de medio completo que contenía 30 ng/mL de lipopolisacárido de E. coli K532 a cada pocillo. Las células fueron cultivadas 4 horas más. Los sobrenadantes de cultivo fueron separados después y se cuantificó la presencia de TNF en los sobrenadantes utilizando un ELISA.

ELISA para TNF

Se recubrieron placas para ELISA Coming High Binding de 96 pocillos de fondo redondo durante la noche (4ºC) con 150 \muL/pocillo de 3 \mug/mL de MAb anti-TNF-\alpha humano murino (R&D Systems #MAB210). Después los pocillos fueron bloqueados durante 1 h a la temperatura ambiente con 200 \muL/pocillo de tampón para ELISA libre de CaCl_{2} con un suplemento de 20 mg/mL BSA (tampón para ELISA normalizado: 20 mM, 150 mM NaCl, 2 mM CaCl_{2}, timerosal 0,15 mM, pH 7,4). Las placas fueron lavadas y rellenadas con 100 \muL de sobrenadantes de ensayo (diluido 1:3) o patrones. Los patrones constaban de once diluciones seriadas 1,5:1 de una solución de partida de 1 ng/mL de TNF humano recombinante (R&D Systems). Las placas fueron incubadas a la temperatura ambiente durante 1 hora en un sacudidor orbital (300 rpm), lavadas y rellenadas con 100 \muL/pocillo de anti-TNF-\alpha humano de cabra de 0,5 \mug/mL (R&D systems núm. AB-210-NA) biotinilado a una razón 4:1. Las placas fueron incubadas durante 40 min, lavadas y rellenadas con 100 \muL/pocillo de estreptavidina conjugada con fosfatasa alcalina (Jackson ImmunoResearch núm. 016-050-084) a 0,02 \mug/mL. Las placas fueron incubadas 30 min, lavadas y rellenadas con 200 \muL/pocillo de 1 mg/mL
de fosfato de p-nitrofenilo. Después de 30 min, las placas fueron leídas a 405 nm en un lector de placa a la V_{max}.

Análisis de los datos

Los datos de la curva patrón se ajustaron a un polinomio de segundo orden y las concentraciones de TNF-\alpha desconocidas fueron determinadas a partir su DO resolviendo esta ecuación para la concentración. Las concentraciones de TNF se trazaron después vs. La concentración de compuesto utilizando un polinomio de segundo orden. Esta ecuación se utilizó después para calcular la concentración de los compuestos de ensayo causando una reducción del 50% en la producción de TNF.

También se puede demostrar que los compuestos de la invención inhiben la liberación inducida por LPS de IL-1\beta, IL-6 y/o IL-8 a partir de monocitos midiendo las concentraciones de IL-1\beta, IL-6 y/o IL-8 mediante métodos bien conocidos por los expertos en la técnica. De una manera similar al análisis descrito antes que implicaba la liberación de TNF-\alpha inducida por LPS desde los monocitos, también se puede demostrar que los compuestos de esta invención inhiben la liberación inducida por LPS de IL-1\beta, IL-6 y/o IL-8 a partir de los monocitos midiendo las concentraciones de IL-1\beta, IL-6 y/o IL-8 mediante métodos bien conocidos por los expertos en la técnica. De este modo, los compuestos de la invención pueden disminuir los niveles elevados de TNF-\alpha, IL-1, IL-6, y los niveles de IL-8. La reducción de los niveles elevados de estas citocinas inflamatorias a niveles basales o más bajos es favorable en el control, la ralentización del progreso, y el alivio de muchos estados de enfermedad. Todos los compuestos son útiles en los métodos de tratamiento de estados de enfermedad en los que TNF-\alpha, IL-1\beta, IL-6, y IL-8 juegan un papel en toda la extensión de la definición de enfermedades mediadas por TNF-\alpha descritas en la presente memoria.

Análisis de producción de TNF por Células THP1 activadas con lipopolisacáridos

Las células THP1 son resuspendidas en medio para THP1 reciente (RPMI 1640, FBS inactivado con calor al 10%, 1XPGS, 1XNEAA, mas \betaME 30 \muM) a una concentración de 1E6/mL. Se cultivan en placa 100 \muL de células por pocillo en un cultivo de tejidos de 96 pocillos de poliestireno. Se prepara un microgramo por mL de LPS bacteriano en medio THP1 y se transfiere a los pocillos. Los compuestos de ensayo se disuelven en 100% DMSO y se diluyen seriadamente 3:1 en una placa de microtitulación de 96 pocillos de polipropileno (placa con fármaco). Los pocillos de control HI y de control LO contienen solamente DMSO. Un microlitro de compuesto de ensayo de la placa con fármaco seguido de 10 \muL de LPS es transferido a la placa con células. Las células tratadas son inducidas a sintetizar y secretar TNF-\alpha a 37ºC durante 3 h. Cuarenta microlitros de medio acondicionado son transferidos a una placa de polipropileno de 96 pocillos que contiene 110 \muL de tampón ECL (Tris-HCl 50 mM pH 8,0, NaCl 100 mM, 0,05% de Tween 20, 0,05% de NaN_{3} y 1% de FBS) con un suplemento de Ab monoclonal MAB610 0,44 nM (R&D Systems), Ab policlonal rutenilado AF210NA 0,34 nM (R&D Systems) y 44 \mug/mL de Dynabeads M280 anti-ratón de cabra (Dynal). Después de 2 horas de incubación a la temperatura ambiente con sacudimiento, la reacción es leída en el ECL M8 Instrument (IGEN Inc.). Se aplica un bajo voltaje a los complejos inmunitarios de TNF-\alpha rutenilados, que en presencia de TPA (el componente activo de Origlo), da como resultado una reacción redox cíclica que genera luz a 620 nM. La cantidad de TNF-\alpha secretada en presencia de compuesto en comparación con aquella secretada en presencia de vehículo DMSO solo (HI control) es calculada utilizando la fórmula: % control (POC) = (comp - LO media)/(HI media - LO media)* 100. Los datos (que consisten en POC y concentración de inhibitor en \muM) son ajustados a una ecuación de 4 parámetros (y = A + ((B-A)/(1 + ((x/C)^D))), donde A es el valor de y mínimo (POC), B es la y máxima (POC), C es la x (concentración de comp) en el punto de inflexión y D es el factor de la pendiente) utilizando un algoritmo de regresión no lineal de Levenburg-Marquardt.

Los siguientes compuestos muestran actividades en el análisis de las células THP1 (liberación de TNF inducida por LPS) co valores de CI_{50} de 20 \muM o menos:

4-(4-cloro-fenil)-1-piperidin-4-il-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona;

4-(4-cloro-fenil)-1-piperidin-3-il-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona;

4-(4-clorofenil)-1-(1-metil-piperidin-4-il)-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona;

4-(4-clorofenil)-1-(1-metil-piperidin-3-il)-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona;

4-(4-clorofenil)-1-(1-isopropil-piperidin-4-il)-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona;

4-(3,4-dicloro-fenil)-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona;

4-(3,4-dicloro-fenil)-1-isopropil-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona;

1-(4-aminociclohexil)-4-(4-clorofenil)-5-piridin-4-il-1,2-dihidropirazol-3-ona.

Inhibición de la producción de TNF-\alpha Inducida por LPS en ratones

Se administran dosis con vehículo o compuesto de ensayo en vehículo a ratones DBA/1LACJ macho (consistiendo el vehículo en 0,5% de tragacanto en HCl 0,03 N) 30 minutos antes de la inyección de lipopolisacárido (2 mg/Kg, I.V.). Noventa minutos después de la inyección de LPS, la sangre es recogida y el suero es analizado mediante ELISA en cuanto a los niveles de TNF-\alpha.

Se puede demostrar que los compuestos de la invención tienen actividades anti-inflamatorias en modelos animales de inflamación, incluyendo el edema de la pata por carragenano, la artritis inducida por colágeno y la artritis por coadyuvante, tal como el modelo del edema de la pata por carragenano (C. A. Winter et al Proc. Soc. Exp. Biol. Med. (1962) vol 111, p 544; K. F. Swingle, en R. A. Scherrer y M. W. Whitehouse, Eds., Anti-inflammatory Agents, Chemistry y Pharmacology, Vol. 13-II, Academic, New York, 1974, p. 33) y la artritis inducida por colágeno (D. E. Trentham et al J. Exp. Med. (1977) vol. 146, p 857; J. S. Courtenay, Nature (New Biol.) (1980), Vol 283, p 666).

Escrutinio de la Unión de Glucagón-I^{125} con Células CHO/hGLUR

El análisis se describe en WO 97/16442, que se incorpora en la presente memoria como referencia en su totalidad.

Reactivos

Los reactivos pueden ser preparados como sigue: (a) preparar o-Fenantrolina 1M reciente (Aldrich) (198,2 mg/mL etanol); (b) preparar DTT 0,5M reciente (Sigma); (c) Mezcla de Inhibidor de Proteasa (1000X): 5 mg de leupeptina, 10 mg de benzamidina, 40 mg de bacitracina y 5 mg de inhibidor de tripsina de soja por mL de DMSO y almacenar alícuotas a -20ºC; (d) glucagón humano 250 \muM (Peninsula): solubilizar el vial de 0,5 mg en 575 \mul de ácido acético 0,1N (1 \muL rinde una concentración final 1 \muM en el análisis para la unión no específica) y almacenar en alícuotas a -20ºC; (e) Tampón de Análisis: Tris 20 mM (pH 7,8), DTT 1 mM y o-fenantrolina 3 mM; (f) Tampón de Análisis con 0,1% de BSA (para la dilución de la marca solamente; 0,01% final en el análisis): 10 \muL de 10% BSA (inactivado con calor) y 990 \muL de Tampón de Análisis; (g) Glucagón I^{125} (NEN, calidad de receptor, 2200 Ci/mmol): diluir a 50.000 cpm/25 \muL en tampón de análisis con BSA (concentración final aproximadamente 50 pM en el análisis).

Recogida de Células CHO/hGLUR para el Análisis

1. Separar medio del matraz confluente después enjuagar una vez cada uno con PBS (Ca, libre de Mg) y Fluido de Disociación libre de Enzima (Specialty Media, Inc.).

2. Añadir 10 mL de Fluido de Disociación libre de Enzima y mantener durante aproximadamente 4 min a 37ºC.

3. Golpear suavemente las células libres, triturar, tomar alícuotas para el recuento y centrifugar el resto durante 5 min a 1000 rpm.

4. Resuspender el sedimento en Tampón de Análisis a 75.000 células por 100 \muL.

Se pueden utilizar preparaciones de membrana de células CHO/hGLUR en lugar de células completas en el mismo volumen de análisis. La concentración de proteína final de una preparación de membrana es determinada por lotes.

Análisis

La determinación de la inhibición de la unión al glucagón se puede llevar a cabo midiendo la reducción de la unión al glucagón-I^{125} en presencia de los compuestos de Fórmula I. Los reactivos se combinan como sigue:

27

La mezcla se incuba durante 60 minutos a 22ºC en un aparato de sacudimiento a 275 rpm. La mezcla se filtra sobre Filtermat GF/C previamente empapado (0,5% polietilimina (PEI)) utilizando un Innotech Harvester o Tomtec Harvester con cuatro lavados de tampón Tris 20 mM enfriado con hielo (pH 7,8). La radiactividad de los filtros se determina mediante un contador de centelleo gamma.

De este modo, también se puede demostrar que los compuestos de la invención inhiben la unión del glucagón a los receptores de glucagón.

Análisis de la Actividad de la Enzima Ciclooxigenasa

La línea de células de leucemia monocítica humana, THP-1, diferenciada mediante exposición a ésteres de forbol, expresa solamente COX-1; la línea celular de osteosarcoma humano 143B expresa predominantemente COX-2. Las células THP-1 son cultivadas rutinariamente en medio RPMI completo con un suplemento de 10% de FBS y las células de osteosarcoma humano (HOSC) son cultivadas en medio esencial mínimo con un suplemento de 10% de suero bovino fetal (MEM-10%FBS); todas las incubaciones de células son a 37ºC en un entorno humidificado que contiene 5% de CO_{2}.

Análisis de COX-1

En la preparación para el análisis de COX-1, las células THP-1 se hacen crecer hasta la confluencia, es dividen 3:1 en RPMI que contiene 2% de FBS y 12-miristato 13-acetato de forbol 10 mM (TPA), y se incuban durante 48 horas en un aparato de sacudimiento para evitar el anclaje. Las células son sedimentadas y resuspendidas en Solución Salina Tamponada de Hank (HBS) a una concentración e 2,5 \times 10^{6} células/mL y cultivadas en placa en placas de cultivo de 96 pocillos a una densidad de 5 \times 10^{5} células/mL. Los compuestos de ensayo se diluyen en HBS y se añaden a la concentración final deseada y las células se incuban durante 4 horas más. Se añade ácido araquidónico a una concentración final de 30 mM, las células se incuban durante 20 minutos a 37ºC, y la actividad de la enzima se determina como se describe más abajo.

Análisis de COX-2

Para el análisis de COX-2, las HOSC subclonfluentes se tratan con tripsina y se resuspenden a 3 \times 10^{6} células/mL en MEM-FBS que contiene 1 ng de IL-1b humana/mL, se cultivan en placa en placas de cultivo de tejidos de 96 pocillos a una densidad de 3 \times 10^{4} células por pocillo, se incuban en un aparato de sacudimiento durante 1 hora para distribuir uniformemente las células, seguido de una incubación de 2 horas estática para permitir el anclaje. Después el medio es remplazado por MEM que contiene 2% de FBS (MEM-2%FBS) y 1 ng de IL-1b humana/mL, y las células son incubadas durante 18-22 horas. Después de la sustitución del medio por 190 mL de MEM, se añaden 10 mL de compuesto de ensayo diluido en HBS para obtener la concentración deseada y las células se incuban durante 4 horas. Los sobrenadantes se separan y se sustituyen por MEM que contiene ácido araquidónico 30 mM, las células se incuban durante 20 minutes a 37ºC, y se determina la actividad de la enzima como se describe más abajo.

Actividad COX Determinada

Tras la incubación con ácido araquidónico, las reacciones se detienen mediante la adición de HCl 1N, seguido de neutralización con NaOH 1N y centrifugación para sedimentar los desechos celulares. La actividad de la enzima ciclooxigenasa en los sobrenadantes de las células HOSC y THP-1 se determina midiendo la concentración de PGE_{2} utilizando un ELISA asequible comercialmente (Neogen núm. 404110). Se utiliza una curva normalizada de PGE_{2} para la calibración, y se incluyen inhibidores de COX-1 y COX-2 asequibles comercialmente como controles normalizados.

Análisis de la Quinasa Raf

La actividad de la quinasa Raf in vitro se mide por el grado de fosforilación del sustrato MEK (quinasa Map/quinasa ERK) por la quinasa Raf, como se describe en GB 1.238.959 (incorporada en la presente memoria como referencia en su totalidad). La MEK fosforilada es atrapada en el filtro y la incorporación del fosfato radiomarcado es cuantificada mediante recuento por centelleo.

Materiales

Raf Activada es producida mediante transfección triple de células Sf9 con baculovirus que expresan Raf etiquetada con el epítopo "Glu-Glu", val^{12}-H-Ras, y Lck. El epítopo "Glu-Glu", Glu-Try-Met-Pro-Met-Glu, fue fusionado al extremo carboxi de c-Raf completa.

MEK catalíticamente inactiva (mutación K97A) es producida en células Sf9 transfectadas con un baculovirus que expresa K97A MEK1 etiquetada con el epítopo "Glu-Glu" en el extremo C.

Anticuerpo anti-"Glu-Glu" fue purificado de células desarrolladas como se describe en: Grussenmeyer, et al., Proceedings of the National Academy of Science, U.S.A. pág. 7952-7954, 1985.

Tampón de la Columna: Tris 20 mM pH 8, NaCl 100 mM, EDTA 1 mM, EGTA 2,5 mM, MgCl_{2} 10 mM, DTT 2 mM, AEBSF 0,4 mM, 0,1% de n-octilglucopiranosido, ácido okadeico 1 nM, y 10 \mug/mL de cada uno de benzamidina, leupeptina, pepstatina, y aprotinina.

5x Tampón de Reacción: HEPES 125 mM pH=8, MgCl_{2} 25 mM, EDTA 5 mM, Na_{3}VO_{4} 5 mM, 100 \mug/mL de BSA.

Tampón de dilución de la enzima: HEPES 25 mM pH 8, EDTA 1 mM, Na_{3}VO_{4} 1 mM, 400 \mug/mL de BSA.

Solución de Parada: EDTA 100 mM, pirofosfato de sodio 80 mM.

Placas de filtro: Milipore Multiscreen núm. SE3MO78E3, Immobilon-P (PVDF).

Métodos

Purificación de proteína: Las células Sf9 fueron infectadas con baculovirus y desarrolladas como se describen Williams, et al., en Proceedings of the National Academy of Science, U.S.A. págs. 2922-2926, 1992. Todas las etapas posteriores fueron realizadas sobre hielo o a 4ºC. Las células fueron sedimentadas y sometidas a lisis por sonicación en tampón de la columna. Los productos lisados fueron centrifugados a 17.000 x g durante 20 min, seguido de filtración de 0,22 \mum. Las proteínas etiquetadas con el epítopo fueron purificadas mediante cromatografía sobre una columna de afinidad GammaBind Plus a la cual se había acoplad el anticuerpo para "Glu-Glu". Las proteínas fueron cargadas sobre la columna seguido de lavados sucesivos con dos veces el volumen de la columna de tampón de la columna, y eluidas con 50 \mug/mL de Glu-Tyr-Met-Pro-Met-Glu en tampón de la columna.

Análisis de la quinasa Raf: Los compuestos de ensayo fueron evaluados utilizando diez diluciones seriadas 3:1 comenzando en 10 - 100 \muM. Se añadieron 10 \muL del inhibidor de ensayo o el control, disueltos en 10% de DMSO, a la placa de análisis seguido de la adición de 30 \muL de una mezcla que contenía 10 \muL 5x tampón de reacción, \gamma-ATP-P^{33} 1 mM (20 \muCi/mL), 0,5 \muL de MEK (2,5 mg/mL), 1 \muL de \beta-mercaptoetanol 50 mM. La reacción comenzó mediante la adición de 10 \muL de tampón de dilución de enzima que contenía DTT 1 mM y una cantidad de Raf activada que produce una cinética lineal a lo largo del curso del tiempo de reacción. La reacción se mezcló y se incubó a la temperatura ambiente durante 90 minutos y se detuvo mediante la adición de 50 \muL de solución de parada. Se transfirieron alícuotas de 90 \muL de esta solución detenida a placas de filtro de microtitulación de celulosa GFP-30 (Polyfiltronics), las placas de filtro se lavaron en cuatro veces el volumen del pocillo de ácido fosfórico al 5%, se dejaron secar, y después se rellenaron con 25 \muL de cóctel de centelleo. Las placas se sometieron a recuento en cuanto a la emisión gamma P^{33} utilizando un TopCount Scintillation Reader.

Si bien los compuestos de la invención pueden ser administrados en forma de un único agente farmacéutico activo, también pueden ser utilizados combinados con uno o más compuestos de la invención u otros agentes. Cuando se administran en forma de combinación, los agentes terapéuticos pueden ser formulados como composiciones separadas que se administran al mismo tiempo o en momentos diferentes, o los agentes terapéuticos pueden ser administrados en forma de una única composición.

Lo anterior es meramente ilustrativo de la invención y no se pretende que limite la invención a los compuestos descritos. Se pretende que las variaciones y cambios que son obvios para un experto en la técnica están dentro del alcance y la naturaleza de la invención que se definen en las reivindicaciones adjuntas.

A partir de la descripción anterior, un experto en la técnica puede averiguar fácilmente las características esenciales de esta invención, y sin apartarse del espíritu y el alcance de la misma, puede realizar diversos cambios y modificaciones de la invención para adaptarla a diferentes usos y condiciones.

Para el tratamiento de las enfermedades mediadas por TNF-\alpha, IL-1\beta, IL-6, y IL-8, el cáncer, y/o la hiperglicemia, los compuestos de la presente invención pueden ser administrados oralmente, parenteralmente, mediante pulverización por inhalación, rectalmente, o tópicamente en formulaciones unitarias de dosificación que contienen portadores, coadyuvantes, y vehículos farmacéuticamente aceptables convencionales. El término parenteral según se utiliza en la presente memoria incluye, subcutáneo, intravenoso, intramuscular, intraesternal, técnicas de infusión o intraperitonealmente.

Se pretende que el tratamiento de las enfermedades y trastornos en la presente memoria también incluya la administración profiláctica de un compuesto de la invención, una sal farmacéutica del mismo, o una composición farmacéutica de cualquiera a un sujeto (esto es, un animal, preferiblemente un mamífero, muy preferiblemente un ser humano) que se cree que necesita un tratamiento preventivo, tal como, por ejemplo, dolor, inflamación y similares.

El régimen de dosificación para tratar enfermedades mediadas por TNF-\alpha, IL-1, IL-6, y IL-8, cáncer, y/o hiperglicemia con los compuestos de esta invención y o las composiciones de esta invención se basa en una variedad de factores, incluyendo el tipo de enfermedad, la edad, el peso, el sexo, la condición médica del paciente, la gravedad de la condición, la ruta de administración, y el compuesto concreto empleado. De este modo, el régimen de dosificación puede variar ampliamente, pero puede ser determinado rutinariamente utilizando métodos normalizados. Los niveles de dosificación del orden de aproximadamente 0,01 mg a 30 mg por kilogramo de peso corporal por día, preferiblemente de aproximadamente 0,1 mg a 10 mg/kg, más preferiblemente de aproximadamente 0,25 mg a 1 mg/kg son útiles para todos los métodos de uso descritos en la presente memoria.

Los compuestos farmacéuticamente activos de esta invención pueden ser elaborados según los métodos farmacéuticos convencionales para producir agentes medicinales para la administración a pacientes, incluyendo seres humanos y otros mamíferos.

Para la administración oral, la composición farmacéutica puede estar, por ejemplo, en forma de una cápsula, un comprimido, una suspensión, o un líquido. La composición farmacéutica se elabora preferiblemente en forma de una unidad de dosificación que contiene una cantidad dada del ingrediente activo. Por ejemplo, puede contener una cantidad de ingrediente activo de aproximadamente 1 a 2.000 mg, preferiblemente de aproximadamente 1 a 500 mg, más preferiblemente de aproximadamente 5 a 150 mg. Una dosis diaria adecuada para un ser humano u otro mamífero puede variar ampliamente dependiendo del estado del paciente y de otros factores, pero, una vez más, puede ser determinada utilizando métodos rutinarios.

El ingrediente activo también puede ser administrado por medio de una inyección en forma de una composición con portadores adecuados incluyendo solución salina, dextrosa, o agua. El régimen de dosificación parenteral diario será de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 30 mg/kg de peso corporal total, preferiblemente de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 10 mg/kg, y más preferiblemente de aproximadamente 0,25 mg a 1 mg/kg.

Las preparaciones inyectables, tales como las suspensiones acuosas u oleaginosas inyectables estériles, pueden ser formuladas según lo sabido utilizando agentes humectantes y agentes suspensores adecuados. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente parenteralmente aceptable no tóxico, por ejemplo en forma de una solución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que se pueden emplear están agua, solución de Ringer, y solución de cloruro de sodio isotónica. Además, se emplean convencionalmente aceites fijados estériles como disolvente o medio de suspensión. Para este propósito se puede emplear cualquier aceite fijado blando, incluyendo mono- o di-glicéridos sintéticos. Además, los ácidos grasos tales como el ácido oléico encuentran uso en la preparación de inyectables.

Los supositorios para la administración rectal del fármaco pueden ser preparados mezclando el fármaco con un excipiente no irritante adecuado tal como manteca de cacao y polietilenglicoles que son sólidos a la temperatura normal pero líquidos a la temperatura rectal y por lo tanto se fundirán en el recto y liberarán el fármaco.

Una dosis tópica adecuada de ingrediente activo de un compuesto de la invención es de 0,1 mg a 150 mg administrado de una a cuatro, preferiblemente una o dos veces al día. Para la administración tópica, el ingrediente activo puede comprender del 0,001% al 10% p/p, p. ej., del 1% al 2% en peso de la formulación, aunque puede comprender tanto como el 10% p/p, pero preferiblemente no más del 5% p/p, y más preferiblemente del 0,1% al 1% de la formulación.

Las formulaciones adecuadas para la administración tópica incluyen preparaciones líquidas o semi-líquidas adecuadas para la penetración a través de la piel (p. ej., linimentos, lociones, pomadas, cremas, o pastas) y gotas adecuadas para la administración en el ojo, el oído, o la nariz.

Para la administración, los compuestos de esta invención se combinan normalmente con uno o más coadyuvantes apropiados para la ruta de administración indicada. Los compuestos pueden ser mezclados con lactosa, sacarosa, polvo de almidón, ésteres de celulosa de ácidos alcanoicos, ácido esteárico, talco, estearato de magnesio, óxido de magnesio, sales de sodio y calcio de ácidos fosfórico y sulfúrico, acacia, gelatina, alginato de sodio, polivinil-pirrolidina, y/o alcohol polivinílico, y se formulan en comprimidos o cápsulas para la administración convencional. Alternativamente, los compuestos de esta invención se pueden disolver en solución salina, agua, polietilenglicol, propilenglicol, etanol, aceite de maíz, aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de sésamo, goma de tragacanto, y/o diversos tampones. Otros coadyuvantes y modos de administración son bien conocidos en la técnica farmacéutica. El portador o diluyente puede incluir una sustancia de liberación controlada, tales como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo solo o con una cera, u otras sustancias bien conocidas en la técnica.

Las composiciones farmacéuticas pueden ser elaboradas en forma sólida (incluyendo gránulos, polvos o supositorios) o en forma líquida (p. ej., soluciones, suspensiones, o emulsiones). Las composiciones farmacéuticas pueden ser sometidas a operaciones farmacéuticas convencionales tales como esterilización y/o pueden contener coadyuvantes, convencionales, tales como conservantes, estabilizantes, agentes humectantes, emulsionantes, tampones, etc.

Las formas de dosificación sólidas para la administración oral pueden incluir cápsulas, comprimidos, píldoras, polvos, y gránulos. En tales formas de dosificación sólidas, el compuesto activo se puede mezclar con al menos un diluyente inerte tal como sacarosa, lactosa, o almidón. Tales formas de dosificación también pueden comprender, como es normal en la práctica, sustancias adicionales distintas de los diluyentes inertes, p. ej., agentes lubricantes tales como estearato de magnesio. En el caso de las cápsulas, comprimidos, y píldoras, las formas de dosificación también pueden comprender agentes tamponadores. Los comprimidos y las píldoras se pueden preparar adicionalmente con recubrimientos entéricos.

Las formas de dosificación líquidas para la administración oral pueden incluir emulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes, y elixires farmacéuticamente aceptables que contienen diluyentes inertes utilizados comúnmente en la técnica, tales como agua. Tales composiciones también pueden comprender coadyuvantes, tales como agentes humectantes, edulcorantes, aromatizantes, y perfumantes.

Claims (11)

1. Un compuesto de fórmula

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28

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o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde

R^{2} es alquilo C_{1}-C_{8}, fenilo, bencilo, R^{c}, R^{f}, alquil(C_{1}-C_{4})R^{c}, alquil(C_{1}-C_{4})R^{f} o R^{g};

R^{3} es fenilo, naftilo, o un heterociclo anular de 5 o 6 miembros saturado o insaturado que contiene 1-4 heteroátomos seleccionados entre N, O y S, donde no más de 2 de los heteroátomos son O o S, y el heterociclo está sustituido con 0, 1 o 2 grupos oxo y está opcionalmente fusionado con un grupo benzo, cualquiera de los cuales está sustituido con 0, 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados entre alquilo C_{1}-C_{8}, haloalquilo C_{1}-C_{4}, halo, ciano, nitro, -C(=O)R^{b}, -C(=O)OR^{b}, -C(=O)NR^{a}R^{a}, -C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -OR^{a}, -OC(=O)R^{b}, -OC(=O)NR^{a}R^{a}, -OC(=O)N(R^{a})S(=O)_{2}
R^{b}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})OR^{a}, -SR^{a}, -S(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}R^{b}, -S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C(=O)R^{b}, -N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})S(=O)_{2}R^{b}, -N(R^{a})S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -NR^{a}alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a} y -NR^{a}alquil(C_{2}-C_{6})
OR^{a};

R^{4} es 4-piridinilo sustituido con 0, 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados entre alquilo C_{1}-C_{8}, haloalquilo C_{1}-C_{4}, halo, ciano, nitro, -C(=O)R^{b}, -C(=O)OR^{b}, -C(=O)NR^{a}R^{a}, -C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -OR^{a}, -OC(=O)R^{b}, -OC(=O)NR^{a}R^{a}, -OC(=O)N(R^{a})S(=O)_{2}R^{b}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})OR^{a}, -SR^{a}, -S(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}R^{b}, -S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C(=O)R^{b}, -N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})S(=O)_{2}R^{b}, -N(R^{a})S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -NR^{a}alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a} y -NR^{a}alquil(C_{2}-C_{6})OR^{a};

R^{a} es independientemente en cada caso H o R^{b};

R^{b} es independientemente en cada caso alquilo C_{1}-C_{8}, fenilo o bencilo;

R^{c} es independientemente en cada caso un anillo monocíclico de 5, 6 o 7 miembros o bicíclico de 6, 7, 8, 9, 10 u 11 miembros saturado o insaturado que contiene 1, 2 o 3 átomos seleccionados entre N, O y S, donde el anillo está fusionado con 0 o 1 grupos benzo y 0 o 1 anillos heterocíclicos de 5, 6 o 7 miembros saturados o insaturados que contienen 1, 2 o 3 átomos seleccionados entre N, O y S; donde los átomos de carbono del anillo están sustituidos con 0, 1 o 2 grupos oxo;

R^{d} es independientemente en cada caso alquilo C_{1}-C_{8}, haloalquilo C_{1}-C_{4}, halo, ciano, nitro, -C(=O)R^{b}, -C(=O)OR^{b}, -C(=O)NR^{a}R^{a}, -C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -OR^{a}, -OC(=O)R^{b}, -OC(=O)NR^{a}R^{a}, -OC(=O)N(R^{a})S(=O)_{2}R^{b}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})OR^{a}, -SR^{a}, -S(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}R^{b}, -S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C(=O)R^{b}, -N(R^{2})C(=O)OR^{b}, -N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})
C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})S(=O)2R^{b}, -N(R^{a})S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -NR^{a}alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a} o -NR^{a}alquil(C_{2}-C_{6})OR^{a};

R^{e} es independientemente en cada caso alquilo C_{1}-C_{6} sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre R^{d};

R^{f} es independientemente en cada caso R^{c} sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre R^{d}; y

R^{g} es independientemente en cada caso R^{b} sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre R^{c}, R^{f} y R^{d}.

2. El compuesto de la Reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde R^{2} es R^{c}, R^{f}, alquil(C_{1}-C_{4})R^{c}, alquil(C_{1}-C_{4})R^{f} o R^{g}.

3. El compuesto de la Reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde R^{2} es alquilo C_{1}-C_{8}, fenilo o bencilo.

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4. El compuesto de la Reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde R^{3} es fenilo o naftilo ambos los cuales están sustituidos con 0, 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados entre alquilo C_{1}-C_{8}, haloalquilo C_{1}-C_{4}, halo, ciano, nitro, -C(=O)R^{b}, -C(=O)OR^{b},-C(=O)NR^{a}R^{a}, -C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -OR', -OC(=O)R^{b}, -OC(=O)NR^{a}R^{a}, -OC(=O)N(R^{a})S(=O)_{2}R^{b}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})OR^{a}, -SR^{a}, -S(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}R^{b}, -S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C(=O)R^{b}, -N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})S(=O)_{2}R^{b}, -N(R^{a})S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -NR^{a}-alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a} y -NR^{a}-alquil(C_{2}-C_{6})OR^{a}.

5. El compuesto de la Reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde R^{3} es naftilo no sustituido o fenilo sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados entre alquilo C_{1}-C_{8}, haloalquilo C_{1}-C_{4}, halo, ciano, nitro, -C(=O)R^{b}, -C(=O)OR^{b}, -C(=O)NR^{a}R^{a}, -C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -OR^{a}, -OC(=O)R^{b}, -OC(=O)NR^{a}R^{a}, -OC(=O)N(R^{a})S(=O)_{2}R^{b}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})OR^{a}, -SR^{a}, -S(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}R^{b}, -S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C(=O)R^{b}, -N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})S(=O)_{2}R^{b}, -N(R^{a})S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -NR^{a}alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a}, y -NR^{a}alquil(C_{2}-C_{6})OR^{a}.

6. El compuesto de la Reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde R^{3} es un heterociclo anular de 5 o 6 miembros saturado o insaturado que contiene 1-4 heteroátomos seleccionados entre N, O y S, donde no más de 2 de los heteroátomos son O o S, y el heterociclo está sustituido con 0, 1 o 2 grupos oxo y está opcionalmente fusionado con un grupo benzo, cualquiera de los cuales está sustituido con 0, 1, 2 o 3 alquilo C_{1}-C_{8}, haloalquilo C_{1}-C_{4}, halo, ciano, nitro, -C(=O)R^{b}, -C(=O)OR^{b}, -C(=O)NR^{a}R^{a}, -C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -OR^{a}, -OC(=O)R^{b}, -OC
(=O)NR^{a}R^{a}, -OC(=O)N(R^{a})S(=O)2R^{b}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a}, -O-alquil(C_{2}-C_{6})OR^{a}, -SR^{a}, -S(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}R^{b}, -S
(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)R^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -S(=O)_{2}N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C(=O)R^{b}, -N(R^{a})C(=O)OR^{b}, -N(R^{a})C(=O)NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})C(=NR^{a})NR^{a}R^{a}, -N(R^{a})S(=O)_{2}R^{b}, -N(R^{a})S(=O)_{2}NR^{a}R^{a}, -NR^{a}alquil(C_{2}-C_{6})NR^{a}R^{a} o -NR^{a}alquil(C_{2}-C_{6})OR^{a}.

7. El compuesto de la Reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde R^{4} es 4-piridinilo.

8. El compuesto de la Reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde el compuesto
es:

4-(4-cloro-fenil)-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona;

4-(4-cloro-fenil)-1-piperidin-4-il-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona;

4-(4-cloro-fenil)-1-piperidin-3-il-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona;

4-(4-cloro-fenil)-1-piperidin-4-ilmetil-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona;

4-(4-cloro-fenil)-1-metil-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona;

4-(3,4-diclorofenil)-1-piperidin-4-il-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona;

4-(4-clorofenil)-1-(1-metil-piperidin-4-il)-5-piridin-4-il-1-2-dihidro-pirazol-3-ona;

4-(4-clorofenil)-1-(1-metil-piperidin-3-il)-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona;

4-(4-clorofenil)-1-(1-isopropil-piperidin-4-il)-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona;

4-[4-(4-clorofenil)-3-metoxi-5-piridin-4-il-pirazol-1-il]-piperidina;

4-(3,4-dicloro-fenil)-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona;

4-(3,4-dicloro-fenil)-1-isopropil-5-piridin-4-il-1,2-dihidro-pirazol-3-ona;

1-(4-aminociclohexil)-4-(4-clorofenil)-5-piridin-4-il-1,2-dihidropirazol-3-ona;

1-(4-aminociclohexil)-4-naftalen-2-il-3-piridin-4-il-1,2-dihidropirazol-3-ona; o

4-naftalen-2-il-1-(3-fenilpropil)-5-piridin-4-1,2-dihidropirazol-3-ona.

9. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según la Reivindicación 1 y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.

10. El uso de un compuesto según la Reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de la inflamación.

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11. El uso de un compuesto según la Reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de la artritis reumatoide, la enfermedad de Pagets, la osteoporosis, el mieloma múltiple, la uveitis, la leucemia mielógena aguda o crónica, la destrucción de las células \beta pancreáticas, la osteoartritis, la espondilitis reumatoide, la artritis gotosa, la enfermedad inflamatoria del intestino, el síndrome de fatiga respiratoria en adultos (ARDS), la psoriasis, la enfermedad de Crohn, la rinitis alérgica, la colitis ulcerativa, la anafilaxis, las dermatitis de contacto, el asma, la degeneración muscular, la caquexia, el síndrome de Reiter, la diabetes de tipo I, la diabetes de tipo II, las enfermedades de resorción ósea, la reacción injerto vs. anfitrión, la enfermedad de Alzheimer, la apoplejía, el infarto de miocardio, la lesión de isquemia- reperfusión, la aterosclerosis, el trauma cerebral, la esclerosis múltiple, la malaria cerebral, la sepsis, el choque séptico, el síndrome de choque tóxico, la fiebre, las mialgias debidas a infección por HIV-1, HIV-2, HIV-3, citomegalovirus (CMV), influenza, adenovirus, herpes virus o herpes zoster en un mamífero.