ES2284076T3 - Derivados triciclicos de 1-(indol-3-il)carbonil)piperazina como agonistas del receptor de cannabinoides cb1. - Google Patents

Abstract

Un derivado tricíclico de 1-[(indol-3-il)carbonil]piperazina que tiene la Fórmula general I Fórmula I en la que X es CH2, O o S; R representa 1-3 sustituyentes seleccionados independientemente entre H, alquilo (C1-4), alquiloxi (C1-4) y halógeno; R1 es un cicloalquilo (C5-8); R2 es H o alquilo (C1-4); R3, R3'', R4, R4'', R5, R5'' y R6'' son independientemente hidrógeno o alquilo (C1-4), sustituidos opcionalmente con alquiloxi (C1-4), OH o halógeno; R6 es hidrógeno o alquilo (C1-4), opcionalmente sustituido con alquiloxi (C1-4), OH o halógeno; o R6 forma junto con R7 un anillo heterocíclico saturado de 4-7 miembros, que contiene opcionalmente otro heteroátomo seleccionado entre O y S; R7 forma junto con R6 un anillo heterocíclico saturado de 4-7 miembros, que contiene opcionalmente otro heteroátomo seleccionado entre O y S; o R7 es H, alquilo (C1-4) o cicloalquilo (C3-5), estando los grupos alquilo opcionalmente sustituidos con OH, halógeno o alquiloxi (C1-4); o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Description

Derivados tricíclicos de 1-[(indol-3-il)carbonil]piperazina como agonistas del receptor de cannabinoides CB1.

La presente invención se refiere a derivados tricíclicos de 1-[(indol-3-il)carbonil]piperazina, a composiciones farmacéuticas que comprenden los mismos y al uso de estos derivados tricíclicos de 1-[(indol-3-il)carbonil]piperazina en terapia, especialmente en el tratamiento del dolor.

El tratamiento del dolor está limitado a menudo por los efectos secundarios de la medicación disponible actualmente. Los opioides se usan extensivamente para un dolor de moderado a grave. Estos agentes son baratos y eficaces pero experimentan efectos secundarios graves y potencialmente mortales, más particularmente dificultad respiratoria y rigidez muscular. Además, las dosis de opioides que pueden administrarse están limitadas por náuseas, emesis, estreñimiento, pruritis y retención urinaria, dando como resultado a menudo que los pacientes elijan recibir un control de dolor sub-óptimo en lugar de sufrir estos efectos secundarios dolorosos. Además, estos efectos secundarios a menudo dan como resultado que los pacientes necesiten hospitalización prolongada. Los opioides son altamente adictivos y son fármacos prescritos en muchos territorios. Por tanto existe una demanda para nuevos analgésicos que tengan un perfil mejorado de efectos secundarios comparado con los productos usados actualmente, en dosis equi-
analgésicas.

Se está acumulando la evidencia de que los agonistas de cannabinoides tienen un potencial como analgésicos y agentes anti-inflamatorios. Están implicados dos tipos de receptores de cannabinoides, el receptor de cannabinoides CB1, que se localiza principalmente en el sistema nervioso central pero que se expresa también en neuronas periféricas y en menor grado en otros tejidos periféricos, y el receptor de cannabinoides CB2 que se localiza en su mayor parte en células inmunes. (Howlett, A. C. et al.: Internacional Union of Pharmacology. XXVII. Classification of Cannabinoid Receptors, Pharmacol. Rev. 54, 161-202, 2002). Aunque el receptor CB2 se ha visto implicado en la modulación de la respuesta inmune y anti-inflamatoria de los cannabinoides, los agonistas del receptor de cannabinoides CB1, especialmente aquellos que actúan sobre el receptor CB1 se han sugerido recientemente como útiles en el tratamiento del dolor (véase Iversen, L. y Chapman, V. Current Opinion in Pharmacology, 2, 50-55, 2002 y las referencias en el mismo) WIN 55,212-2, la sal mesilato de (R)-() [2,3-dihidro-5-metil-[(morfolinil)metil]pirrolo[1,2,3-de]-1,4-benzoxazinil]-(1-naftalenil) metanona se describió en la Patente de Estados Unidos 4.939.138 (Sterling Drug Inc.) como un agente analgésico. El compuesto es el prototipo de los aminoalquilindoles (Eissenstat et al., J. Med. Chem., 38, 3094-3105, 1995) que son potentes agonistas del receptor de cannabionoides CB1 que pueden producir antinocicepción con eficacia equivalente a la de morfina en modelos animales de dolor agudo, dolor inflamatorio persistente, y dolor neuropático.

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Los derivados de pirrolo[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina carboxamida estructuralmente parecidos se han descrito en el documento WO 2001/58869 (Bristol-Myers Squibb Comp.) como moduladores del receptor de cannabinoides útiles para el tratamiento de enfermedades respiratorias. Derivados tricíclicos de 3-carboxamido-indol parecidos
se han descrito como antagonistas del receptor 5-HT en el documento EP 0 393 766 (Duphar Intern. Res.
B.V.).

Los agonistas de cannabinoides conocidos son en general altamente lipófilos e insolubles en agua. Existe por tanto una necesidad de agonistas de cannabinoides con propiedades mejoradas para usar como agentes terapéu-
ticos.

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Para este fin la presente invención proporciona derivados tricíclicos de 1-[indol-3-il)carbonil]piperazina que tienen la Fórmula general I

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en la que

X es CH_{2}, O o S;

R representa 1-3 sustituyentes seleccionados independientemente entre H, alquilo (C_{1-4}), alquiloxi (C_{1-4}) y halógeno;

R_{1} es un cicloalquilo (C_{5-8});

R_{2} es H o alquilo (C_{1-4});

R_{3}, R_{3}', R_{4}, R_{4}', R_{5}, R_{5}' y R_{6}' son independientemente hidrógeno o alquilo (C_{1-4}), sustituidos opcionalmente con alquiloxi (C_{1-4}), OH o halógeno;

R_{6} es hidrógeno o alquilo (C_{1-4}), opcionalmente sustituido con alquiloxi (C_{1-4}), OH o halógeno; o R_{6} forma junto con R_{7} un anillo heterocíclico saturado de 4-7 miembros, que contiene opcionalmente otro heteroátomo seleccionado entre O y S;

R_{7} forma junto con R_{6} un anillo heterocíclico saturado de 4-7 miembros, que contiene opcionalmente otro heteroátomo seleccionado entre O y S; o

R_{7} es H, alquilo (C_{1-4}) o cicloalquilo (C_{3-5}), los grupos alquilo opcionalmente sustituidos con alquiloxi (C_{1-4}), OH o halógeno; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, como agonistas del receptor de cannabinoides CB1, que pueden usarse en el tratamiento del dolor tal como por ejemplo dolor peri-operativo, dolor crónico, dolor neuropático, dolor por cáncer y el dolor y la espasticidad asociados con esclerosis múltiple.

Las estructuras tricíclicas básicas de los derivados de 1-[(indol-3-il)carbonil]piperazina de la invención son 2,3-dihidro-pirrolo[3,2,1-ij]quinolina cuando X es CH_{2}, 2,3-dihidropirrolo-[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina, cuando X es oxígeno y 2,3-dihidro-pirrolo[1,2,3,-de]-1,4-benzotiazina, cuando X es azufre.

Los compuestos de la invención cuando X es oxígeno se describen genéricamente en el documento WO 2001/58869 (supra) como moduladores del receptor de cannabinoides para tratar enfermedades respiratorias. Estos moduladores se identifican preferentemente en este documento como moduladores del receptor CB2. Los derivados de 2,3-dihidro-pirrolo[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina descritos en el documento WO 2001/58869 se caracterizan por la presencia de una cadena lateral de (4-morfolinil)metilo unida a la posición 3 del anillo de benzoxazina. Los derivados tricíclicos de 1-[(indol-3-il)carbonil]piperazina de la invención se distinguen de los del documento WO 2001/58869 por tener una cadena lateral de cicloalquilo (C_{5-8}) en la posición correspondiente, una característica que proporciona compuestos que tienen actividad agonista de CB1.

El término alquilo (C_{1-4}) como se usa en la definición de la Fórmula 1 significa un grupo alquilo ramificado o no ramificado que contiene 1-4 átomos de carbono, tales como butilo, isobutilo, terc-butilo, propilo, isopropilo, etilo y metilo.

En el término alquiloxi (C_{1-4}), alquilo (C_{1-4}) tiene el significado como se ha definido anteriormente.

El término cicloalquilo (C_{5-8}) significa un grupo alquilo cíclico saturado que tiene 5-8 átomos de carbono, y que puede representar así ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, o ciclooctilo.

El término halógeno significa F, Cl, Br o I.

En la definición de Fórmula I, R_{6} puede formar junto con R_{7} un anillo heterocíclico saturado de 4-7 miembros, que significa que R_{6} junto con el átomo de carbono al que está unido y R_{7} junto con el átomo de nitrógeno al que está unido completan un anillo saturado de 4-7 miembros, tal como un anillo de azetidina, pirrolidina, piperidina o azepina. Dichos anillos pueden contener un heteroátomo O o S adicional para formar anillos tales como un anillo de morfolina, tiomorfolina, tetrahidrotiazol o isotiazol.

Existe una preferencia para derivados tricíclicos de 1-[(indol-3-il)carbonil]piperazina de Fórmula I en los que R es H y R_{1} es ciclopentilo o ciclohexilo.

Son especialmente preferidos los derivados tricíclicos de 1-[(indol-3-il)carbonil]piperazina de Fórmula I en los que R, R_{2}, R_{3}, R_{3}', R_{4}', R_{5}, R_{5}' y R_{6}' son H; R_{4}, R_{6} y R_{7} son independientemente H o alquilo (C_{1-4}); o R_{6} forma junto con R_{7} un anillo heterocíclico saturado de 5 ó 6 miembros y R_{4} es H o alquilo (C_{1-4}).

En el caso en el que X sea O, se prefieren adicionalmente aquellos isómeros en los que la estereoquímica en la posición 3 del anillo de benzoxazina es (R).

Los derivados tricíclicos de 1-[(indol-3-il)carbonil]piperazina de la invención pueden prepararse mediante métodos conocidos en la técnica de química orgánica en general.

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Las 1-[(indol-3-il)carbonil]piperazinas tricíclicas de Fórmula I pueden prepararse por ejemplo a partir de la condensación de un compuesto de Fórmula II, en la que R, R_{1}, R_{2}, y X tienen el significado como se ha descrito anteriormente y C(O)Y representa un ácido carboxílico o un derivado activado del mismo, tal como un éster de ácido carboxílico o un haluro de ácido carboxílico, preferiblemente un cloruro o un bromuro, con un compuesto de Fórmula III en el que R_{3} - R_{7} tienen el significado como se ha definido anteriormente. Cuando R_{7} en compuestos de Fórmula III representa hidrógeno, el átomo de nitrógeno al que está unido puede tener que protegerse temporalmente durante la reacción de condensación. Los grupos protectores adecuados para grupos funcionales que tienen que protegerse temporalmente durante las síntesis se conocen en la técnica, por ejemplo de Wuts, P.G.M y Greene, T.W.: Protective Groups in Organic Synthesis, Tercera Edición, Wiley, Nueva York, 1999. Cuando C(O)Y representa un ácido carboxílico (es decir, Y es hidroxi) la reacción de condensación puede realizarse con la ayuda de un reactivo de acoplamiento, tal como por ejemplo carbonil diimidazol, diciclohexilcarbodiimida y similares, en un disolvente tal como dimetilformamida o diclorometano. Cuando C(O)Y representa un haluro de ácido carboxílico (es decir, Y es haluro) la condensación con el derivado de amina de Fórmula III puede realizarse en presencia de una base, por ejemplo trietilamina, en un disolvente tal como diclorometano. Cuando C(O)Y representa un éster de ácido carboxílico, una condensación directa con el derivado de amina de Fórmula III puede realizarse a una temperatura elevada.

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Los compuestos de Fórmula III pueden obtenerse de fuentes comerciales, prepararse mediante procedimientos de la bibliografía o modificaciones de procedimientos de la bibliografía conocidos por aquellas personas especialistas en la técnica. Por ejemplo, los compuestos de Fórmula III pueden prepararse por reducción de una dicetopiperazina, usando un agente reductor tal como hidruro de litio y aluminio o un complejo borano-tetrahidrofurano como se describe en M. E. Jung y J. C. Rohloff (J. Org. Chem. 50, 4909-4913, 1985) Las dicetopiperazinas se pueden preparar mediante diversas rutas, como se describe en C. J. Dinsmore y D. C. Bershore. (Tetrahedron 58, 3297-3312, 2002).

Los compuestos de Fórmula II pueden prepararse mediante procedimientos de la bibliografía o modificaciones de los procedimientos de la bibliografía conocidos por aquellas personas especialistas en la técnica. Por ejemplo, los compuestos de Fórmula II en los que C(O)Y representa un ácido carboxílico y R_{2} es alquilo (C_{1-4}) pueden prepararse mediante alquilación de compuestos de Fórmula II en los que C(O)Y representa un ácido carboxílico y R_{2} es hidrógeno, mediante tratamiento con al menos dos equivalentes de una base fuerte, tal como n-butillitio, seguido de tratamiento con un agente alquilante, tal como un haluro de alquilo (C_{1-4}).

Los compuestos de Fórmula II pueden prepararse por acilación de un compuesto de Fórmula IV, usando un reactivo acilante. Por ejemplo, los compuestos de Fórmula II en los que Y es hidroxi pueden obtenerse a partir de compuestos de Fórmula IV mediante tratamiento con anhídrido trifluoroacético en un disolvente tal como dimetilformamida, seguido de hidrólisis usando hidróxido sódico acuoso a una temperatura elevada. Los compuestos de Fórmula II en los que Y es cloruro pueden prepararse mediante reacción de un compuesto de Fórmula IV con cloruro de oxalilo en un disolvente tal como 1,1,2,2-tetracloroetano seguido de reagrupamiento a una temperatura elevada. Los compuestos de Fórmula IV pueden prepararse a partir de compuestos de Fórmula IV usando la síntesis de indol de Fischer (Chem. Rev. 69, 227-250, 1969).

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Como alternativa, los compuestos de Fórmula II pueden prepararse a partir de compuestos de Fórmula V usando los procedimientos descritos por Wijngaarden et al. (J. Med. Chem. 36, 3693-3699, 1993) o Hwu et al. (J. Org. Chem. 59, 1577-1582, 1994) o modificaciones de estos procedimientos.

Los compuestos de Fórmula V pueden prepararse por procedimientos de la bibliografía o modificaciones de procedimientos de la bibliografía conocidos por aquellas personas especialistas en la técnica. Por ejemplo los compuestos de Fórmula V en los que X es CH_{2} pueden prepararse a partir de compuestos de Fórmula VI mediante reducción, usando un agente reductor tal como borohidruro sódico en presencia de un catalizador tal como cloruro de níquel (II). Los compuestos de Fórmula VI pueden por ejemplo prepararse mediante una reacción de acoplamiento, tal como reacción de una 2-cloroquinolina con un reactivo Grignard cicloalquilo (C_{5-8}), en presencia de un catalizador tal como cloruro de níquel (II).

Los compuestos de Fórmula V en la que X es O o S pueden prepararse por reacción de un compuesto de Fórmula VII en la que X es OH o SH con un compuesto de Fórmula VIII para formar un éter o un tioéter, seguido de reducción del grupo nitro a una amina y ciclación reductora. La reacción de eterificación puede realizarse por ejemplo en presencia de una base, tal como carbonato potásico, con un catalizador tal como yoduro potásico. La reducción y la ciclación pueden realizarse por ejemplo usando hidrógeno gaseoso en presencia de un catalizador tal como paladio sobre carbón vegetal.

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Los bompuestos de Fórmula VII y los compuestos de Fórmula VIII pueden obtenerse de fuentes comerciales, prepararse por procedimientos de la bibliografía o modificaciones de procedimientos de la bibliografía conocidos por aquellas personas especialistas en la técnica. Por ejemplo, los compuestos de Fórmula VIII pueden prepararse a partir de compuestos de Fórmula IX usando un agente de bromación tal como bromo en un disolvente tal como metanol.

La persona especialista entenderá igualmente que pueden obtenerse diversos derivados tricíclicos de 1-[(indol-3-il)carbonil]piperazina de Fórmula I mediante las reacciones de conversión apropiadas de los grupos funcionales correspondientes a algunos de los sustituyentes R y R_{3}-R_{7}. Por ejemplo, los compuestos de Fórmula I en la que R_{7} es alquilo (C_{1-4}) o cicloalquilo (C_{3-5}), cuyos grupos alquilo pueden sustituirse con OH, halógeno o alquiloxi (C_{1-4}), pueden prepararse mediante la reacción de un compuesto de Fórmula I en la que R_{7} es hidrógeno con un haluro de alquilo (C_{1-4}) o un haluro de alquilo (C_{1-4}) funcionalizado, en presencia de una base tal como carbonato potásico.

Los derivados tricíclicos de 1-[(indol-3-il)carbonil]piperazina de Fórmula I y sus sales contienen al menos un centro quiral, y por tanto existen como estereoisómeros, incluyendo enantiómeros y diastereómeros. La presente invención incluye los estereoisómeros mencionados anteriormente dentro de su ámbito y cada uno de los enantiómeros individuales R y S de los compuestos de Fórmula I y sus sales, sustancialmente libres, es decir asociados con menos del 5%, y preferiblemente menos del 2%, en particular menos del 1% del otro enantiómero, y mezclas de dichos enantiómeros en cualquier proporción incluyendo las mezclas racémicas que contienen cantidades sustancialmente iguales de los dos enantiómeros.

Los métodos de síntesis asimétrica o separación quiral en los que se obtienen los estereoisómeros puros se conocen bien en la técnica, por ejemplo síntesis mediante inducción quiral o partiendo de sustratos quirales disponibles en el mercado, o separación de estereoisómeros, por ejemplo usando cromatografía sobre medios quirales o mediante cristalización con un contra-ión quiral.

Se pueden obtener sales farmacéuticamente aceptables tratando una base libre de un compuesto de Fórmula I con un ácido mineral tal como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico y ácido sulfúrico, o un ácido orgánico tal como por ejemplo ácido ascórbico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido láctico, ácido maleico, ácido malónico, ácido fumárico, ácido glicólico, ácido succínico, ácido propiónico, ácido acético, ácido metano sulfónico y similares.

Los compuestos de la invención pueden existir en formas no solvatadas así como formas solvatadas con disolventes farmacéuticamente aceptables tales como agua, etanol y similares. En general, las formas solvatadas se consideran equivalentes a las formas no solvatadas para el propósito de la invención.

La presente invención proporciona adicionalmente composiciones farmacéuticas que comprenden un derivado tricíclico de 1-[(indol-3-il)carbonil]piperazina que tiene la Fórmula general I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, mezclado con adyuvantes farmacéuticamente aceptables, y opcionalmente otros agentes terapéuticos. El término "aceptable" significa ser compatible con los otros ingredientes de la composición de la invención y no perjudicial para los destinatarios de la misma. Las composiciones incluyen, por ejemplo, aquellas adecuadas para administración oral, sublingual, subcutánea, intravenosa, epidural, intratecal, intramuscular, transdérmica, pulmonar, local, o rectal, y similares, todas en formas de dosificación unitaria para administración.

Para administración oral, el ingrediente activo puede presentarse en forma de unidades discretas, tales como comprimidos, cápsulas, polvos, granulados, soluciones, suspensiones y similares. Para administración parenteral, la composición farmacéutica de la invención puede presentarse en recipientes de dosis unitaria o multi-dosis, por ejemplo líquidos para inyección en cantidades predeterminadas, por ejemplo en viales y ampollas sellados, y pueden almacenarse también en un estado secado por congelación (liofilizado) que requiere solo la adición de un vehículo líquido estéril, por ejemplo agua, antes de su uso.

Mezclado con dichos adyuvantes farmacéuticamente aceptables, por ejemplo como se describe en la referencia estándar, Gennaro, A.R. et al., Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20ª Edición, Lippincott Williams & Wilkins, 2000, véase especialmente Parte 5: Pharmaceutical Manufacturing), el agente activo puede comprimirse en unidades de dosificación sólidas, tales como píldoras, comprimidos, o procesarse en cápsulas, supositorios o parches. Mediante líquidos farmacéuticamente aceptables el agente activo puede aplicarse como una composición fluida, por ejemplo en una preparación de inyección, en forma de una solución, una suspensión, una emulsión, o como un pulverizador, por ejemplo un pulverizador nasal.

Para producir unidades de dosificación sólidas, se contempla el uso de aditivos convencionales tales como cargas, colorantes, aglutinantes poliméricos y similares. En general, puede usarse cualquier aditivo farmacéuticamente aceptable que no interfiera con la función de los compuestos activos. Los vehículos adecuados con los que puede administrarse el agente activo de la invención en forma de composiciones sólidas incluyen lactosa, almidón, derivados de celulosa y similares, o mezclas de las mismas, usados en cantidades adecuadas. Para administración parenteral pueden usarse suspensiones acuosas, soluciones salinas isotónicas y soluciones estériles inyectables, que contienen agentes dispersantes y/o agentes humectantes farmacéuticamente aceptables, tales como propilenglicol o butilenglicol.

La invención incluye además una composición farmacéutica, como se ha descrito anteriormente en este documento, en combinación con material de envasado adecuado para dicha composición, incluyendo dicho material de envasado instrucciones para el uso de la composición para el uso como se ha descrito anteriormente en este documento.

Se ha descubierto que los derivados tricíclicos de 1-[(indol-3-il)carbonil]piperazina de la invención son agonistas del receptor CB1, como se ha determinado en un ensayo informador del CB1 humano usando células CHO. Los métodos para determinar la unión al receptor así como la actividad biológica in vitro de los moduladores del receptor de cannabinoides se conocen bien en la técnica. En general, el receptor expresado se pone en contacto con el compuesto a ensayar y se mide la unión o la estimulación o la inhibición de una respuesta funcional.

Para medir una respuesta funcional el ADN aislado que codifica el gen de receptor CB1, preferiblemente el receptor humano, se expresa en células hospedadoras adecuadas. Dicha célula puede ser la célula de Ovario del Hámster Chino, aunque otras células son adecuadas también. Preferiblemente, las células son de origen mamífero.

Los métodos para construir líneas celulares que expresan CB1 recombinante se conocen bien en la técnica. (Sambrook et al., Molecular Cloning: a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, Laboratory Pres, Cold Spring Harbor, última edición) La expresión del receptor se obtiene mediante la expresión del ADN que codifica la proteína deseada. Todas las técnicas de ligamiento de secuencias adicionales y construcción de sistemas de expresión adecuados son, actualmente, bien conocidas en la técnica. Fragmentos o todo el ADN que codifica la proteína deseada pueden construirse sintéticamente usando técnicas convencionales en fase sólida, preferiblemente para incluir sitios de restricción para facilitar el ligamiento. Los elementos de control adecuados para transcripción y traducción de la secuencia codificante incluidas pueden proporcionarse a las secuencias que codifican el ADN. Como se sabe bien, los sistemas de expresión están disponibles y son compatibles con un amplio intervalo de hospedadores, que incluyen hospedadores procariotas tales como bacterias y hospedadores eucariotas tales como levadura, células vegetales, células de insectos, células de mamíferos, células de aves y similares.

Las células que expresan el receptor se ponen en contacto después con el compuesto de ensayo para observar la unión, o la estimulación o la inhibición de una respuesta funcional.

Como alternativa, las membranas celulares aisladas que contienen el receptor expresado CB1 (o CB2) pueden usarse para medir la unión de compuesto.

Para medir la unión se pueden usar compuestos marcados radiactivamente o fluorescentemente. La sonda cannabinoide radio-marcada más ampliamente usada es [^{3}H]CP55940, que tiene aproximadamente una afinidad igual para sitios de unión CB1 y CB2.

Otro ensayo implica evaluación de los compuestos agonistas del cannabinoide CB1 mediante determinación de la respuesta de mensajero secundario, tal como por ejemplo la medición de los cambios mediados por receptor en las rutas de AMPc y MAPquinasa. De este modo, dicho método implica la expresión del receptor CB1 en la superficie celular de una célula hospedadora y la exposición de la célula al compuesto de ensayo. La respuesta de mensajero secundario se mide después. El nivel de mensajero secundario se reduce o se aumenta, dependiendo del efecto del compuesto de ensayo sobre la unión al receptor.

Además de la medición directa por ejemplo de niveles de AMPc en la célula expuesta, pueden usarse células que además de transfección con el ADN que codifica el receptor están transfectadas también con un segundo ADN que codifica un gen informador, cuya expresión está correlacionada con la activación del receptor. En general, la expresión del gen informador puede controlarse mediante cualquier elemento respuesta que reaccione a cambios de nivel del mensajero secundario. Son genes informadores adecuados, por ejemplo, LacZ, fosfatasa alcalina, luciferasa de luciérnaga y proteína fluorescente verde. Los principios de dichos ensayos de transactivación se conocen bien en la técnica, y se describen en Stratowa, Ch, Himler, A. y Czernilofsky, A. P., Curr. Opin. Biotechnol. 6, 574 (1995). Para seleccionar compuestos agonistas activos sobre el receptor CB1, el valor de EC_{50} tiene que ser de < 10^{-5} M, preferiblemente de < 10^{-7} M.

Los compuestos pueden usarse en el tratamiento del dolor tal como por ejemplo dolor peri-operativo, dolor crónico, dolor neuropático, dolor por cáncer y dolor y espasticidad asociados con esclerosis múltiple.

Los agonistas de cannabinoide de la invención serían también potencialmente útiles en el tratamiento de otros desordenes tales como esclerosis múltiple, espasticidad, inflamación, glaucoma, náuseas y emesis, pérdida de apetito, trastornos del sueño, dificultades respiratorias, alergias, epilepsias, migraña, trastornos cardiovasculares, trastornos neurodegenerativos, ansiedad, lesiones cerebrales traumáticas y apoplejía.

Los compuestos pueden usarse también junto con otros fármacos, por ejemplo fármacos analgésicos tales como opioides y fármacos anti-inflamatorios no esteroideos (NSAID), que incluyen inhibidores selectivos de COX-2.

Los compuestos de la invención pueden administrarse a seres humanos en una cantidad suficiente y durante un tiempo suficiente para aliviar los síntomas. Ilustrativamente, los niveles de dosificación para seres humanos pueden estar en el intervalo de 0,001 a 50 mg por kg de peso corporal, preferiblemente en una dosificación de 0,01-20 mg por kg de peso corporal.

La invención se ilustra mediante los siguientes Ejemplos.

Ejemplo 1

Sal clorhidrato de (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidro-6-(4-etilpiperazin-1-ilcarbonil)pirrolo[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina

A una solución de D-N-Boc-ciclohexilglicina (25,0 g, 97,2 mmol) en dimetilformamida (200 ml), se le añadieron hidrogenocarbonato sódico (24,5 g, 291,6 mmol) y yoduro de metilo (6,96 ml, 106,9 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 64 h en nitrógeno. La mezcla resultante se repartió entre diclorometano y agua. La fase acuosa se extrajo con diclorometano y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. Los cristales obtenidos se lavaron con n-heptano para dar éster metílico de D-N-Boc-ciclohexilglicina (25,65 g, 94,5 mmol).

A una solución de éster metílico de D-N-Boc-ciclohexilglicina (25,65 g, 94,5 mmol) en metanol (200 ml) y tetrahidrofurano (100 ml), se le añadieron cloruro de calcio (21,0 g, 198 mmol) y borohidruro sódico (14,3 g, 378 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min en nitrógeno. La mezcla resultante se vertió en agua enfriada con hielo, se neutralizó con ácido clorhídrico 5 N, y se repartió entre diclorometano y agua. La fase acuosa se extrajo con diclorometano y las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución saturada de carbonato sódico y salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El residuo se cristalizó en heptano para obtener (R)-N-Boc-2-ciclohexiletanolamina bruta (29,38 g, 94,5 mmol).

A una mezcla de (R)-N-Boc-2-ciclohexiletanolamina bruta (29,38 g, 94,5 mmol) y trifenilfosfina (37,2 g, 141,8 mmol) en tolueno (150 ml) a 0ºC se le añadió azodicarboxilato de diisopropilo (19,5 ml, 99,2 mmol). Después de agitar durante 1 h, se añadió 2-bromofenol (12,1 ml, 104,0 mmol) a la mezcla a 0ºC. La mezcla de reacción se agitó durante 2 h a 0ºC y durante 20 h a temperatura ambiente. La mezcla resultante se repartió entre diclorometano y agua. La fase acuosa se extrajo con diclorometano y las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución de hidróxido sódico 2 N y salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida eluyendo con acetato de etilo al 0-10% (v/v) en heptano para dar (R)-2-(2-terc-butoxicarbonilamino-2-ciclohexiletoxi)-bromobenceno (12,80 g, 32,1 mmol).

Una mezcla de (R)-2-(2-terc-butoxicarbonilamino-2-ciclohexiletoxi)-bromobenceno (500 mg, 1,26 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) (146 mg, 0,126 mmol) y terc-butóxido sódico (181 mg, 1,88 mmol) en tolueno (4,0 ml) se expuso a irradiación con microondas durante 10 min a 120ºC. La mezcla resultante se repartió entre diclorometano y agua. La fase acuosa se extrajo con diclorometano y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida eluyendo con acetato de etilo al 0-17% (v/v) en heptano para dar (R)-4-terc-butoxicarbonil-3-ciclohexil-3,4-dihidro-2H-1,4-benzoxazina (270 mg, 0,85 mmol). Esta reacción se repitió 13 veces a la misma escala para dar el mismo intermediario (un total de 3,98 g, 12,5 mmol).

Una mezcla de (R)-4-terc-butoxicarbonil-3-ciclohexil-3,4-dihidro-2H-1,4-benzoxazina (3,98 g, 12,5 mmol), ácido clorhídrico 5 N (10 ml) y etanol (10 ml) se agitó a 70ºC durante 50 min. El etanol se retiró al vacío y el residuo se repartió entre diclorometano y una solución de hidróxido sódico 2 N. La fase acuosa se extrajo con diclorometano y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron para dar (R)-3-ciclohexil-3,4-dihidro-2H-1,4-benzoxazina (2,72 g, 12,5 mmol).

(R)-3-ciclohexil-3,4-dihidro-2-1,4-benzoxazina (2,72 g, 12,5 mmol) se disolvió en N,N-dimetilformamida (20 ml) y se le añadió una solución de nitrito sódico (949 mg, 13,8 mmol) en agua (3,0 ml) a 0ºC. Después, se añadió ácido clorhídrico 5 N (6,0 ml) a 0ºC. La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 1 h, después se repartió entre acetato de etilo y agua. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El residuo obtenido se disolvió en éter dietílico (50 ml), y se le añadió hidruro de litio y aluminio en tetrahidrofurano (1,0 M; 9,51 ml, 9,51 mmol) a 0ºC. La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 1 h, después se inactivó con agua enfriada con hielo. Se añadió acetato de etilo a la mezcla y la mezcla se filtró a través de un lecho corto de Celite, y la torta de filtrado se lavó con acetato de etilo. El filtrado se repartió y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida eluyendo con acetato de etilo al 0-17% (v/v) en heptano para dar (R)-4-amino-3-ciclohexil-3,4-dihidro-2H-1,4-benzoxazina (1,47 g, 6,33 mol).

Se añadió piruvato de etilo (882 mg, 7,59 mmol) a una solución de (R)-4-amino-3-ciclohexil-3,4-dihidro-2H-1,4-benzoxazina (1,47 g, 6,33 mmol) en etanol (40 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 min. A la mezcla de reacción, se le añadió ácido sulfúrico (10% v/v en etanol; 8,0 ml). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 2 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se repartió entre acetato de etilo y solución de carbonato sódico. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida eluyendo con acetato de etilo al 0-10% (v/v) en heptano para dar (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidropirrolo[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina-5-carboxilato de etilo (1,49 g, 4,76 mmol).

A una solución de (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidropirrolo[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina-5-carboxilato de etilo (1,49 g, 4,76 mmol) en etanol (50 ml), se le añadió hidróxido sódico 4 N (5,94 ml, 23,8 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 70ºC durante 40 min. El etanol se retiró al vacío, y el residuo se neutralizó con ácido clorhídrico 2 N, y se repartió entre diclorometano y agua. La fase acuosa se extrajo con diclorometano y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El residuo se disolvió en quinolina (20 ml), después se añadió polvo de cobre (453 mg, 7,13 mmol). La mezcla se agitó a 210ºC durante 1 h. Se añadieron acetato de etilo y agua a la mezcla a temperatura ambiente, y la mezcla se filtró a través de un lecho corto de Celite, y la torta de filtrado se lavó con acetato de etilo. El filtrado se acidificó con ácido clorhídrico 5 N y se repartió. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo y las fases orgánicas combinadas se lavaron con ácido clorhídrico 1 N y salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida eluyendo con acetato de etilo al 0-10% (v/v) en heptano para dar (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidropirrolo[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina (984 mg, 4,08 mmol).

A una solución de (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidropirrolo[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina (80 mg, 1,33 mmol) en 1,1,2,2-tetracloroetano (2,0 ml), se le añadió cloruro de oxalilo (46 mg, 0,36 mmol) con agitación en una corriente de nitrógeno. La mezcla se calentó a 120ºC durante 1 hora. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se añadieron trietilamina (36 mg, 0,36 mmol) y N-etilpiperazina (45 mg, 0,40 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 h y después se repartió entre diclorometano y agua. La fase acuosa se extrajo con diclorometano, y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron. El aceite pardo resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida usando metanol al 5% (v/v) en diclorometano como eluyente para dar el compuesto del título en forma de la base libre. La formación de la sal clorhidrato se consiguió mediante la adición de cloruro de hidrógeno (solución 2 M en éter dietílico, 0,5 ml) a una solución de la base libre en éter dietílico (2 ml) y etanol (1 ml). El disolvente se retiró al vacío y el precipitado se secó para dar el compuesto del titulo (sal clorhidrato 1:1) en forma de un sólido (70 mg, 0,17 mmol).

^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,00-1,40 (6H, m), 1,38 (3H, t, J 7,3), 1,58 (1H, d, J 12,4), 1,62-1,70 (1H, m), 1,70-1,80 (2H, m), 1,80-1,90 (1H, m), 3,10-3,70 (6H, m), 3,25 (2H, c, J 7,3), 4,20-4,60 (4H, m), 4,71 (1H, dd, J 3,0, 12,6), 6,66 (1H, d, J 7,8), 7,08 (1H, t, J 7,8), 7,22 (1H, d, J 7,8), 7,74 (1H, s): EsIMS: m/z = 382,2 [M + H]^{+}, 268,2;
[\alpha]_{D}^{22} -18,5º (c = 1,4 mg/ml en metanol).

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Ejemplo 2

Sal clorhidrato de (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidro-6-[(S)-octahidro-2H-pirido[1,2-a]pirazin-2-ilcarbonil]pirrolo[1,2,3,-de]-1,4-benzoxazina

A una solución de ácido (S)-(+)-1-(terc-butoxicarbonil)-2-piperidina carboxílico (2,00 g, 8,72 mmol) en diclorometano (30 ml), se le añadió clorhidrato de éster de metil glicina (1,09 g, 8,72 mmol), clorhidrato de 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etil carbodiimida (2,01 g, 10,46 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (1,22 g, 9,04 mmol) y trietilamina (2,43 ml, 17,4 mmol), La mezcla resultante se agitó en una corriente de nitrógeno durante 18 h. La mezcla se lavó con ácido clorhídrico 0,5 M (20 ml), agua (2 x 20 ml) y salmuera (20 ml), se secó sobre sulfato sódico y se concentró para dar éster metílico de (S)-1-(terc-butoxicarbonil)piperidina-2-carboxilglicina en forma de un aceite incoloro (2,47 g, 8,23 mmol).

El éster metílico de (S)-1-(terc-butoxicarbonil)piperidina-2-carboxilglicina (2,46 g, 8,20 mmol) se disolvió en ácido trifluoroacético (10 ml) y la solución resultante se agitó durante 1 hora. El ácido trifluoroacético se retiró después para proporcionar un aceite incoloro, que se disolvió en metanol (85 ml) y se le añadió trietilamina (9,0 ml, 64,6 mmol). La mezcla resultante se calentó a reflujo durante 4 h. La solución se concentró después para dar un aceite naranja pálido que se recristalizó de heptano al 48%, éter al 48%, 2-propanol al 4% para proporcionar (S)-octahidro-1,4-dioxo-2H-pirido[1,2-a]pirazina en forma de cristales blancos (0,66 g, 3,90 mmol).

Se añadió (S)-octahidro-1,4-dioxo-2H-pirido[1,2-a]pirazina (0,5 g, 2,98 mmol) en porciones a una solución agitada de hidruro de litio y aluminio (1 M en tetrahidrofurano; 11,9 ml, 11,9 mmol). La mezcla resultante se calentó a reflujo durante 0,5 h. La solución se enfrió a 0ºC y se trató gota a gota con agua (1,35 ml), una solución de hidróxido sódico 1 M (0,45 ml), y después agua (1,35 ml). Se añadió tetrahidrofurano (10 ml) y la solución se agitó durante 0,5 h, antes de la filtración. La torta de filtrado se lavó con tetrahidrofurano (2 x 5 ml) y el filtrado y los lavados se concentraron para dar (S)-octahidro-2H-pirido[1,2-a]pirazina en forma de un aceite amarillo (0,29 g, 2,07 mmol).

A una solución de (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidropirrolo[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina (100 mg, 0,41 mmol) en 1,1,2,2-tetracloroetano (2,0 ml), se le añadió cloruro de oxalilo (58 mg, 0,46 mmol) con agitación en una corriente de nitrógeno. La mezcla se calentó a 120ºC durante 1,5 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se añadieron trietilamina (46 mg, 0,46 mmol) y (S)-octahidro-2H-pirido-[1,2-a]pirazina (70 mg, 0,50 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 19 horas y después se repartió entre diclorometano y agua. La fase acuosa se extrajo con diclorometano, y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron. El aceite pardo resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida eluyendo con acetato de etilo al 50% (v/v) en n-heptano, después metanol en acetato de etilo al 0-17% (v/v) para dar el compuesto del título en forma de la base libre. La formación de sal clorhidrato se consiguió mediante adición de cloruro de hidrógeno (solución 2 M en éter dietílico, 1 ml) a una solución de la base libre en éter dietílico (2 ml) y etanol (2 ml). El disolvente se retiró al vacío y el precipitado se secó para dar el compuesto del título (sal clorhidrato 1:1) en forma de un sólido (78 mg, 0,18 mmol).

^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,00-1,35 (6H, m), 1,50-2,05 (11H, m), 3,00-3,10 (1H, m), 3,10-3,30 (3H, m), 3,40-3,55 (3H, m), 4,20-4,30 (2H, m), 4,50-4,70 (2H, m), 4,71 (1H, dd, J 3,0, 12,6), 6,67 (1H, d, J 7,2), 7,08 (1H, t, J 7,8), 7,21 (1H, d, J 7,2), 7,74 (1H, s): EsIMS: m/z = 408,2 [M + H]^{+}, 268,2; [\alpha]_{D}^{22} -27,5º (c = 5,8 mg/ml en metanol).

Ejemplo 3

Sal clorhidrato de (S)-3-ciclohexil-2,3-dihidro-6-[(S)-octahidro-2H-pirido[1,2-a]pirazin-2-ilcarbonil]pirrolo[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina

El compuesto del título se preparó usando el procedimiento descrito en el Ejemplo 2 usando (S)-3-ciclohexil-2,3-dihidropirrolo[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina, que se preparó a partir de L-N-Boc-ciclohexilglicina de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1.

^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,00-1,35 (6H, m), 1,50-2,05 (11H, m), 3,05 (1H, t, J 10,4), 3,10-3,30 (3H, m), 3,40-3,55 (3H, m), 4,20-4,30 (2H, m), 4,30-4,60 (2H, m), 4,71 (1H, dd, J 3,0, 12,6), 6,66 (1H, d, J 8,0), 7,08 (1H, t, J 8,0), 7,22 (1H, d, J 8,0), 7,73 (1H, s): EsIMS: m/z = 408,2 [M + H]^{+}, 268,2; [\alpha]_{D}^{22} +14,4º (c = 1,3 mg/ml en metanol).

Ejemplo 4

Sal clorhidrato de (R)-3-Ciclohexil-2,3-dihidro-6-[(S)-3,4-dimetilpiperazin-1-ilcarbonil]pirrolo[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina

A una solución de (R)-(3-ciclohexil-2,3-dihidropirrolo[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina (600 mg, 2,49 mmol) en N,N-dimetilformamida (5,0 ml) a 0ºC se le añadió anhídrido trifluroacético (0,311 ml, 2,73 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 h, después se repartió entre diclorometano y agua. La fase acuosa se extrajo con diclorometano, y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida eluyendo con acetato de etilo al 0-25% (v/v) en heptano para dar (R)-3-ciclohexil-6-trifluorometilcarbonil-2,3-dihidropirrolo[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina (628 mg, 1,86 mmol).

A una solución de (R)-3-ciclohexil-6-trifluorometilcarbonil-2,3-dihidropirrolo[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina (628 mg, 1,86 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml) se le añadió NaOH 4 N (5,0 ml). La mezcla se calentó a reflujo durante 42 h, después se acidificó a pH 1 usando ácido clorhídrico 5 N y se repartió entre diclorometano y agua. La fase acuosa se extrajo con diclorometano, y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, y se con-
centraron para dar ácido (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidropirrolo[1,2,3-de]1,4-benzoxazina-6-carboxílico bruto (572 mg).

A una solución de ácido (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidropirrolo[1,2,3-de]1,4-benzoxazina-6-carboxílico (120 mg,
0,421 mmol) y (S)-1,2-dimetilpiperazina (62 mg, 0,547 mmol) en N,N-dimetilformamida (3,0 ml) se le añadieron 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (97 mg, 0,505 mmol) y 1-hidroxi benzotriazol (68 mg, 0,505 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 h, después se repartió entre diclorometano y agua. La fase acuosa se extrajo con diclorometano, y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida eluyendo con acetato de etilo al 0-20% (v/v) para dar el compuesto del título en forma de una base libre. La formación de sal clorhidrato se consiguió mediante adición de cloruro de hidrógeno (solución 2 M en éter dietílico, 0,5 ml) a una solución de la base libre en éter dietílico (2 ml) y etanol (1 ml). El disolvente se retiró al vacío y el precipitado se secó para dar el compuesto del título (sal clorhidrato 1:1) en forma de un sólido (84 mg, 0,20 mmol).

^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,00-1,35 (5H, m), 1,39 (3H, d, J 4,8), 1,58 (1H, d, J 12,0), 1,60-1,70 (1H, m), 1,70-1,82 (3H, m), 1,82-1,90 (1H, m), 2,96 (3H, s), 3,20-3,70 (5H, m), 4,20-4,30 (2H, m), 4,40-4,70 (2H, m); 4,71 (1H, d, J 10,0), 6,67 (1H, d, J 8,2), 7,08 (1H, t, J 8,2), 7,21 (1H, d, J 8,2), 7,74 (1H, s): EsIMS: m/z = 382,1
[M + H]^{+}, 268,1.

Ejemplo 5

El método del Ejemplo 4 se usó adicionalmente para preparar los siguientes compuestos:

5A: Sal clorhidrato de (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidro-6-[(S)-3-metilpiperazin-1-ilcarbonil]pirrolo-[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina se preparó usando (S)-2-metilpiperazina en lugar de (S)-1,2-dimetilpiperazina.

EsIMS: m/z = 368 [M + H]^{+}, 267,8; [\alpha]_{D}^{22} - 44,4º (c = 2,3 mg/ml en metanol).

5B: Sal clorhidrato de (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidro-6-[(cis)-3,5-dimetilpiperazin-1-ilcarbonil]pirrolo-[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina se preparó usando cis-2,6-dimetilpiperazina en lugar de (S)-1,2-dimetilpiperazina.

EsIMS: m/z = 382,1 [M + H]^{+}, 267,6; [\alpha]_{D}^{22} -19,6º (c = 2,8 mg/ml en metanol).

5C: Sal clorhidrato de (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidro-6-[4-metilpiperazin-1-ilcarbonil]pirrolo-[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina se preparó usando N-metilpiperazina en lugar de (S)-1,2-dimetilpiperazina.

EsIMS: m/z = 368 [M + H]^{+}, 268; [\alpha]_{D}^{22} -20,3º (c = 3,0 mg/ml en metanol).

Ejemplo 6

Sal clorhidrato de (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidro-6-[(cis)-2,6-dimetilpiperazin-1-ilcarbonil]pirrolo-[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina

A una solución de (cis)-2,6-dimetilpiperazina (900 mg, 8,49 mmol) y bicarbonato sódico (0,2 ml de solución saturada) en THF (5 ml) se le añadió bromuro de bencilo (1,02 ml, 8,49 mmol). La mezcla se expuso a irradiación con microondas a 80ºC durante 15 minutos. El disolvente se retiró al vacío y el residuo se lavó con solución de bicarbonato sódico y se extrajo con diclorometano. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida eluyendo con metanol al 5-10% (v/v) en diclorometano para dar 1-N-bencil-(cis)-3,5-dimetilpiperazina en forma de un aceite transparente (900 mg, 4,40 mmol).

A una solución de ácido (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidropirrolo[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina-6-carboxílico (362 mg, 1,23 mmol) en diclorometano (20 ml) se le añadió cloruro de oxalilo (0,215 ml, 2,46 mmol). La mezcla de color azul intenso se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y después el disolvente se retiró al vacío para dar cloruro de ácido (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidropirrolo[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina-6-carboxílico (380 mg, 1,23 mmol) en forma de un sólido azul.

A una solución de cloruro de ácido (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidropirrolo[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina-6-carboxílico (380 mg, 1,23 mmol) y N,N-diisopropil etilamina (0,2 ml, 1,3 mmol) en diclorometano (20 ml) se le añadió 1-N-bencil-(cis)-3,5-dimetilpiperazina (250 mg, 1,2 mmol) en diclorometano (5 ml) y la mezcla se agitó durante 16 h a temperatura ambiente. La mezcla se repartió entre una solución de bicarbonato sódico y diclorometano. La fase orgánica se separó y el disolvente se retiró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida eluyendo con metanol al 0-5% (v/v) en diclorometano. La formación de la sal clorhidrato se consiguió mediante la adición de cloruro de hidrógeno (solución 2 M en éter dietílico; 2 ml) a la base libre en diclorometano (1 ml). El precipitado se filtró y se secó para dar una sal clorhidrato de (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidro-6-[(cis)-4-bencil-2,6-dimetilpiperazin-1-ilcarbonil]pirrolo[1,2,3-de]-1,4,benzoxazina en forma de un polvo azul claro (240 mg, 0,51 mmol).

A una solución de sal clorhidrato de (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidro-6-[(cis)-4-bencil-2,6-dimetilpiperazin-1-ilcarbonil]pirrolo[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina (200 mg, 0,42 mmol) en etanol (5 ml) se le añadió paladio al 10% sobre carbón vegetal (10 mg). La mezcla se agitó en una atmósfera de hidrógeno durante 16 h a temperatura ambiente. La mezcla se filtró y el disolvente se retiró al vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (100 mg, 0,26 mmol).

^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,03-1,39 (5H, m), 1,49 (6H, d, J 7,2), 1,55-1,87 (6H, m), 3,47 (4H, m), 4,29 (2H, m), 4,72 (1H, d, J 9,8), 4,80 (2H, m), 6,66 (1H, d, J 7,5), 7,09 (1H, m, J 7,7), 7,19 (1H, d, J 8,9), 7,66 (1H, s): EsIMS: m/z = 382,3 [M + H]^{+}, 268; [\alpha]_{D}^{22} - 17,0º (c = 2,4 mg/ml en metanol).

Ejemplo 7

Sal clorhidrato de (R)-3-ciclohexil-2,3,-dihidro-6-[(cis)-3,4,5,-trimetilpiperazin-1-ilcarbonil]pirrolo[1,2,3-de]-1,4- benzoxazina

A una solución de sal clorhidrato de (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidro-6-[(cis)-3,5-dimetilpiperazin-1-ilcarbonil]pirrolo[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina (100 mg, 0,26 mmol) en etanol (10 ml) se le añadió formaldehído (37% en agua; 1 ml, 12,5 mmol) y triacetoxiborohidruro sódico (200 mg, 0,93 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. El disolvente se retiró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida eluyendo con metanol al 0-10% (v/v) en diclorometano para dar el compuesto del título en forma de la base libre. La formación de sal clorhidrato se consiguió mediante la adición de cloruro de hidrógeno (solución 2 M en éter dietílico, 2 ml) a una base libre en diclorometano (1 ml). El precipitado se filtró y se secó para dar el compuesto del título (sal clorhidrato 1:1). EsIMS: m/z = 396,1 [M + H]^{+}, 268; [\alpha]_{D}^{22} - 19,6º (c = 2,1 mg/ml en metanol).

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Ejemplo 8

Sal clorhidrato de (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidro-6-[(cis)-3,5-dimetil-4-etilpiperazin-1-ilcarbonil]-pirrolo[1,2,3-de]- 1,4-benzoxazina

El compuesto del título se preparó siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo 7 usando acetaldehído en lugar de formaldehído. EsIMS: m/z = 410,3 [M + H]^{+}, 268; [\alpha]_{D}^{22} -17,8º (c = 2,0 mg/ml en metanol).

Ejemplo 9

Sal clorhidrato de (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidro-6-[(cis)-3,5-dimetil-4-(2-hidroxietil)piperazin-1-ilcarbonil]-pirrolo [1,2,3-de]-1,4-benzoxazina

A una solución de la sal clorhidrato de (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidro-6-[(cis)-3,5-dimetilpiperazin-1-ilcarbonil]pirrolo[1,2,3-de]-1,4-benzoxazina (120 mg, 0,31 mmol) en acetonitrilo (3 ml) se le añadió 2-bromoetanol (0,024 ml, 0,34 mmol). La mezcla se expuso a irradiación con microondas durante 30 minutos a 150ºC. La mezcla se filtró y el disolvente se retiró al vacío. El residuo se purificó usando HPLC (columna Waters Xterra [RP18, 5 \mum] de 30 mm x 10 mm, acetonitrilo al 10-100% [v/v] en agua durante un gradiente de 25 minutos, tampón de ácido trifluoroácetico al 0,1%, detectado por UV a 254 nm) para dar el compuesto del titulo en forma de una sal de ácido trifluoroácetico (TFA). La formación de la sal clorhidrato se consiguió mediante la adición de cloruro de hidrógeno (solución 2 M en éter dietílico, 2 ml) a la sal TFA en diclorometano (1 ml). El precipitado se filtró y se secó para dar el compuesto del título (20 mg, 0,04 mmol).

^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,01-1,39 (5H, m), 1,44 (6H, d, J 5,3), 1,56-1,85 (6H, m), 3,32 (2H, d, J 14,2), 3,54 (2H, s), 3,72 (2H, m), 3,82 (0,5H, m), 3,93 (1,5H, d, J 4,5), 4,24-4,28 (3H, m), 4,36-4,40 (0,5H, d, J 11,6), 4,52 (1,5H, d, J 13,1), 4,69 (1H, d, J 10,1), 6,66 (1H, d, J 7,5), 7,06-7,10 (1H, m), 7,20 (1H, d, J 8,0), 7,75 (1H, s): EsIMS: m/z = 426,1 [M + H]^{+}, 268; [\alpha]_{D}^{22} -18,3º (c = 2,2 mg/ml en metanol).

Ejemplo 10

Sal clorhidrato de (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidro-6-[(cis)-3,5-dimetil-4-(2-metoxietil)piperazin-1-ilcarbonil]-pirrolo [1,2,3-de]-1,4-benzoxazina

El compuesto del título se preparó siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo 9 usando 2-bromoetil metil éster en lugar de 2-bromoetanol.

EsIMS: m/z = 440 [M + H]^{+}, 268; [\alpha]_{D}^{22} - 20,8º (c = 2,5 mg/ml en metanol).

Ejemplo 11

Sal clorhidrato de (rac)-4-ciclopentil-5,6-dihidro-1-(4-etilpiperazin-1-ilcarbonil)-4H-pirrolo[3,2,1-ij]-quinolina

A una solución de 2-cloroquinolina (8,2 g, 50 mmol) y [1,2-bis(difenilfosfino)etano]dicloroníquel(II) (200 mg, 0,38 mmol) en éter dietílico (20 ml) enfriada en un baño de hielo/metanol se le añadió bromuro de ciclopentilmagnesio (solución 2 M en éter dietílico; 25,5 ml, 51 mmol) durante un periodo de 15 minutos. La solución parda resultante se agitó después durante 30 minutos, el baño de hielo se retiró y la mezcla se agitó durante 10 minutos más. La solución parda resultante se enfrió de nuevo a 0ºC y se le añadió lentamente una solución saturada de cloruro amónico (40 ml). La mezcla de reacción resultante se vertió en un embudo de decantación y se diluyó adicionalmente con éter dietílico (60 ml) y una solución saturada de cloruro amónico (60 ml). Los compuestos orgánicos se separaron y la fase acuosa se lavó con éter dietílico (2 x 100 ml). Los compuestos orgánicos combinados se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y el disolvente se retiró al vacío para dejar 2-ciclopentilquinolina (9,98 g, 50,4 mmol) en forma de un aceite.

A una solución de 2-ciclopentilquinolina (7,95 g, 40,3 mmol) y cloruro de níquel (II) (1,63 g, 6,85 mmol) en metanol (120 ml) enfriada en un baño de hielo/metanol se le añadió borohidruro sódico (6,1 g, 161,2 mmol) en porciones durante 1,5 h. El baño de refrigeración se retiró y la reacción se agitó durante 30 minutos más. El metanol se retiró después al vacío. Al precipitado negro resultante se le añadió ácido clorhídrico 2 M (100 ml) y después se basificó con hidróxido potásico 10 M. La mezcla se vertió en un embudo de decantación y se extrajo con éter (4 x 200 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y el disolvente se retiró al vacío para dar 2-ciclopentil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina (7,45 g, 37,1 mmol) en forma de un aceite pardo claro.

A una solución de 2-ciclopentil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina (4,0 g, 20 mmol) en tetrahidrofurano (15 ml) se le añadió bromopiruvato de etilo (pureza \sim90%; 1,38 ml, 9,9 mmol) y la reacción se agitó durante 15 h. El precipitado resultante se filtró y se lavó con tetrahidrofurano (20 ml). El filtrado se evaporó al vacío. El residuo resultante se disolvió en tetrahidrofurano (10 ml) y 2-metoxietanol (10 ml) y la solución se añadió gota a gota a una solución a reflujo de cloruro de magnesio (II) (1,05 g, 11 mmol) en 2-metoximetanol (10 ml). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 2 h y después se le añadió una porción adicional de cloruro de magnesio (II) (1,05 g, 11 mmol) y se continuó calentando a reflujo durante una noche. La reacción se enfrió y el disolvente se retiró al vacío. El aceite pardo resultante se disolvió en diclorometano (150 ml) y se lavó con HCl 2 M (50 ml), carbonato potásico saturado (50 ml) y salmuera (50 ml). Los compuestos orgánicos se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y el disolvente se retiró al vacío. El aceite resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida usando diclorometano al 33-67% (v/v) en heptano para dar éster etílico del ácido 4-ciclopentil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolina-1-carboxílico (1,45 g, 4,9 mmol).

A una solución de etil éster del ácido 4-ciclopentil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolina-1-carboxílico (1,45 g, 4,9 mmol) en agua (10 ml) y etanol (15 ml) se le añadió hidróxido sódico (1,96 g, 49 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante una noche (\sim 14 h). La reacción se enfrió y se acidificó con HCl 5 M. El precipitado blanco resultante se filtró y se secó al vacío para dar ácido 4-ciclopentil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolina-1-carboxílico (1,13 g, 4,2 mmol) en forma de un sólido blanco.

A una solución de ácido 4-ciclopentil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolina-1-carboxílico (342 mg, 1,27 mmol) en diclorometano (20 ml) se le añadió cloruro de oxalilo (218 \mum, 3,18 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 1 h. Después se añadió una porción adicional de cloruro de oxalilo (436 \mul, 6,36 mmol) y la reacción se agitó durante una noche. El disolvente y los reactivos en exceso se retiraron al vacío para dejar un sólido verde. El sólido verde se disolvió en diclorometano (20 ml) y se añadió N-etilpiperazina (323 \mul, 2,54 mmol) gota a gota. La mezcla de reacción resultante se agitó durante 1 hora y se vertió después en un embudo de decantación. La fase orgánica se lavó con una solución saturada de bicarbonato potásico (20 ml) y salmuera (20 ml), se secó (MgSO_{4}) y el disolvente se retiró al vacío para dejar un aceite pardo. El aceite se purificó por cromatografía ultrarrápida eluyendo con metanol al 0-5% (v/v) en diclorometano para dar el compuesto del título (400 mg, 1,09 mmol). ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta_{H} 1,31-1,43 (4H, m), 1,45-1,79 (6H, m), 1,87-1,96 (1H, m), 2,05-2,24 (2H, m), 2,30-2,37 (1H, m), 2,90 (1H, dt J 16,6, 3,9), 3,03-3.20 (3H, m), 3,26 (2H, q, J 7,5), 3,45-3,65 (4H, m), 4,16-4,23 (1H, m), 4,57 (2H, d, J 14,7), 6,99 (1H, d, J 7,1), 7,12 (1H, t, J 8,0), 7,48 (1H, d, J 8,0), 7,76 (1H, s): EsIMS: m/z = 366,3 [M + H]^{+}, 252,1.

Ejemplo 12

El producto obtenido en el Ejemplo 11 se sometió a separación HPLC quiral en una columna Chiracel® OD (2 cm x 25 cm), eluyendo con isohexano/isopropanol 92/8 (v/v) a un caudal de 15 ml/min. Los productos se detectaron usando un detector UV a una longitud de onda de 240 nm para dar el Enantiómero 1; tiempo de retención 24,18 minutos; exceso enantiomérico >89%, y el Enantiómero 2; tiempo de retención 33,6 minutos, exceso enantiomérico > 92%.

12A: Sal clorhidrato de (+)-4-ciclopentil-5,6-dihidro-1-(4-etilpiperazin-1-ilcarbonil)-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quino- lina

A una solución del Enantiómero 1 (147 mg, 0,38 mmol) en diclorometano (5 ml) se le añadió ácido clorhídrico (solución 2 M en éter dietílico; 0,5 ml). El reactivo en exceso y el disolvente se retiraron al vacío para dejar el compuesto del título en forma de un sólido blanco.

EsIMS: m/z = 366,1 [M + H]^{+}, 252,1; [\alpha]_{D}^{22} +25,8º (c = 2,6 mg/ml en metanol).

12B: Sal clorhidrato de (-)-4-ciclopentil-5,6-dihidro-1-(4-etilpiperazin-1-ilcarbonil)-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolina

A una solución del Enantiómero 2 (143 mg, 0,38 mmol) en diclorometano (5 ml) se le añadió ácido clorhídrico (solución 2 M en éter dietílico, 0,5 ml). El reactivo en exceso y el disolvente se retiraron al vacío para dejar el compuesto del título en forma de un sólido blanco.

EsIMS: m/z = 366,0 [M + H]^{+}, 252,1; [\alpha]_{D}^{22} -21,3º (c = 2,4 mg/ml en metanol).

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Ejemplo 13

Sal clorhidrato de (+)-4-ciclohexil-5,6-dihidro-1-(4-etilpiperazin-1-ilcarbonil)-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolina

A una solución de quinolina (11,84 ml, 100 mmol) en clorobenceno (300 ml) se le añadieron secuencialmente agua (300 ml), ácido ciclohexanocarboxílico (35,88 g, 280 mmol), nitrato de plata (1,36 g, 8,0 mmol), persulfato amónico (22,82 g, 100 mmol) y ácido trifluoroacético (7,67 g, 100 mmol). La mezcla se calentó a 140ºC con agitación durante 3 h. La mezcla se enfrió después a temperatura ambiente, se basificó con hidróxido sódico sólido y el disolvente se retiró al vacío. El residuo se sometió después a una extracción continua con isohexano durante 18 horas, el disolvente se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida eluyendo con acetato de etilo al 20% (v/v) en isohexano para dar 2-ciclohexilquinolina en forma de un aceite amarillo (2,66 g, 12,61 mmol).

Una solución de 2-ciclohexilquinolina (2,66 g, 12,61 mmol) en ácido acético glacial (25 ml) se trató con cianoborohidruro sódico (2,38 g, 37,82 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 4 h y después a 40ºC durante 18 h. La mezcla se trató después con hidróxido sódico 2 M (200 ml), se agitó durante 30 minutos y se extrajo en acetato de etilo (3 x 100 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron después con agua (3 x 100 ml), se secaron con sulfato sódico, se evaporaron a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida eluyendo con acetato de etilo al 0-3% (v/v) en isohexano para dar 2-ciclohexil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina en forma de un aceite amarillo (1,61 g, 7,49 mmol).

Se trató 2-ciclohexil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina (2,61 g, 12,14 mmol) en etanol (75 ml) con (R)-(-)-2-hidroxi-5,5-dimetil-4-fenil-1,3,2-dioxofosforinan-2-óxido (2,94 g, 12,14 mmol) y la mezcla se agitó a 50ºC hasta que se completó la disolución. La mezcla se evaporó después a presión reducida hasta que el volumen total fue de 30 ml y se dejó cristalizar durante 3 horas. La suspensión se filtró y el precipitado incoloro se re-cristalizó en etanol para dar un sólido incoloro y cristalino (2,1 g). Este se trató con una solución saturada de carbonato sódico (50 ml) y se extrajo en diclorometano (2 x 50 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron después con sulfato sódico y se evaporaron a presión reducida para dar 2-ciclohexil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina no racémica en forma de un aceite transparente (0,98 g, 4,56 mmol). El exceso enantiomérico se determinó como el 94% mediante HPLC quiral en una columna Chiracel® OJ, eluyendo con isohexano/etanol 97:3 (v/v) a un caudal de 1 ml/min. Los enantiómeros se detectaron usando un detector UV a una longitud de onda de 230 nm. Los enantiómeros se eluyeron con unos tiempos de retención de 8,4 min (97 %) y 9,4 min (3%).

Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 1, usando la 2-ciclohexil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina no racémica anterior en lugar de (R)-3-ciclohexil-3,4-dihidro-2H-1,4-benzoxazina, se produjo el compuesto del título en forma de un sólido incoloro (0,05 g, 0,12 mmol). ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta_{H} 1,05-1,26 (5H, m), 1,48-1,87 (9H, m), 2,01-2,11 (1H, m), 2,30-2,39 (1H, m), 2,70-3,12 (6H, m), 3,44-3,52 (2H, m), 3,96-4,13 (3H, m), 4,53 (2H, d, a, J 14,1), 7,00 (1H, d, J 7,5), 7,16 (1H, t, J 7,4), 7,44 (1H, d, J 8,1), 7,59 (1H, s), EsIMS: m/z = 380 [M + H]^{+}, 266: [\alpha]_{D}^{22} +42,6º (c = 2,7 mg/ml en metanol).

Ejemplo 14

Sal clorhidrato de (+)-4-ciclohexil-5,6-dihidro-1-(4-metilpiperazin-1-ilcarbonil)-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolina

El compuesto del título se preparó siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo 13 usando N-metilpiperazina en lugar de N-etilpiperazina. ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta_{H} 1,05-1,28 (6H, m), 1,51-1,87 (5H, m), 2,02-2,11 (1H, m), 2,31-2,39 (1H, m), 2,76-3,10 (7H, m), 3,41-3,50 (2H, m), 3,92-4,10 (3H, m), 4,55 (2H, d, a, J 13,8), 7,00 (1H, d, J 7,1), 7,16 (1H, t, J 7,0), 7,44 (1H, d, J 8,1), 7,59 (1H, s), EsIMS: m/z = 366 [M + H]^{+}, 266: [\alpha]_{D}^{22} +19,3º (c = 1,5 mg/ml en metanol).

Ejemplo 15

Sal clorhidrato de (-)-4-ciclohexil-5,6-dihidro-1-(4-etilpiperazin-1-ilcarbonil)-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolina

Se preparó 2-ciclohexil-1,2,3,4-terahidroquinolina no racémica siguiendo el procedimiento descrito en el ejemplo 13 usando (S)-(+)-2-hidroxi-5-5-dimetil-4-fenil-1,3,2-dioxafosforinan-2-óxido en lugar de (R)-(-)-2-hidroxi-5,5-dimetil-4-fenil-1,3,2-dioxafosforinan-2-óxido.

El exceso enantiomérico del intermediario 2-ciclohexil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina se determinó al 86% mediante HPLC quiral en una columna Chiralcel® OJ, eluyendo con isohexano/etanol 97:3 (v/v) a un caudal de 1 ml/min. Los enantiómeros se detectaron usando un detector UV a una longitud de onda de 230 nm, y tiempos de retención de 8,4 min (7%), y 9,4 min (93%). El compuesto del título se preparó siguiendo el procedimiento del Ejemplo 1 usando la 2-ciclohexil-1,2,3,4-tetrahidroquinona no racémica en lugar de (R)-3-ciclohexil-3,4-dihidro-2H-1,4-benzoxazina. ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta_{H} 1,05-1,26 (5H, m), 1,48-1,87 (9H, m), 2,01-2,11 (1H, m), 2,30-2,39 (1H, m), 2,70-3,12 (6H, m), 3,44-3,52 (2H, m), 3,96-4,13 (3H, m), 4,53 (2H, d, a, J 14,1), 7,00 (1H, d, J 7,5), 7,16 (1H, t, J 7,4), 7,44 (1H, d, J 8,1), 7,59 (1H, s), EsIMS: m/z = 380 [M + H]^{+}, 266: [\alpha]_{D}^{22} -28,4º (c = 1,6 mg/ml en metanol).

Ejemplo 16

Sal clorhidrato de (-)-4-ciclohexil-5,6-dihidro-1-(4-metilpiperazin-1-ilcarbonil)-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolina

El compuesto del título se preparó siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo 15 usando N-metilpiperazina en lugar de N-etilpiperazina.

^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta_{H} 1,05-1,28 (6H, m), 1,51-1,87 (5H, m), 2,02-2,11 (1H, m), 2,31-2,39 (1H, m), 2,76-3,10 (7H, m), 3,41-3,50 (2H, m), 3,92-4,10 (3H, m), 4,55 (2H, d, a, J 13,8), 7,00 (1H, d, J 7,1), 7,16 (1H, t, J 7,0), 7,44 (1H, d, J 8,1), 7,59 (1H, s), EsIMS: m/z 366 [M + H]^{+}, 266; [\alpha]_{D}^{22} -46.2º (c = 2,1 mg/ml en metanol).

Ejemplo 17

Determinación in-vitro de eficacia y potencia en el receptor de CB1 humano expresado en células CHO

Se suspendieron células de ovario de hámster chino (CHO) que expresan el receptor de CB1 humano y un gen informador de luciferasa en rojo fenol/DMEM libre de suero/mezcla F-12 nutriente que contiene penicilina/estreptomicina (50U/50 \mug/ml) y fungizona (1 \mug/ml) y se sembraron en placas de 96 pocillos a una densidad de 3 x 10^{4} células por pocillo (100 \mul de volumen final). Las células se incubaron durante una noche (aprox. durante 18 h a 37ºC, CO_{2} al 5%/aire al 95%) antes del ensayo.

El compuesto de ensayo (solución 10 mM en dimetilsulfóxido) se diluyó en Mezcla F12 Nutriente para dar un intervalo de soluciones madre de 0,11 mM a 0,11 nM. Las soluciones madre (10 \mul) se añadieron directamente a los pocillos pertinentes. Las placas se incubaron a 37ºC durante 5 h para permitir la expresión inducida por el agonista de la enzima luciferasa. Bajo una luz tenue, se añadió el sustrato LucLite (Packard; reconstituido de acuerdo con las instrucciones del fabricante; 100 \mul) a cada pocillo. Las placas se cubrieron con Top Seal y después se incubaron a temperatura ambiente durante 5 minutos antes de contarlas en el Packard TopCount (recuento de fotón único, tiempo de recuento 0,01 minutos, retraso de recuento 5 minutos).

Se ajustó una curva de "mejor ajuste" mediante un método de suma mínima de cuadrados a la representación de recuentos por segundo (CPS) frente a la concentración del compuesto (M) para obtener una cantidad EC_{50}. La Figura 1 muestra los valores pEC_{50} obtenidos para algunos compuestos representativos de la invención.

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TABLA 1

6

7

8

Ejemplo 18

Latencia del Coletazo de la Cola en Ratones

Se enseñó a los ratones a quedarse quietos en un aparato de coletazo de la cola (Ugo Basile, Italia) mientras se medía la latencia del coletazo de la cola. La cola se expuso a un haz concentrado de calor radiante en un punto aproximadamente 2,5 cm de la punta. La latencia del coletazo de la cola se definió como el intervalo entre la aplicación del estímulo térmico y la retirada de la cola. Se empleó un límite de 12 segundos para evitar el daño tisular. Se trataron cuatro grupos de ocho ratones con vehículo o una de las tres dosis del compuesto de ensayo, administrada por vía intravenosa (vehículo: solución salina 9 g/l, volumen de inyección 10 ml/kg). La latencia del coletazo de la cola se midió antes de la administración del compuesto de ensayo y a intervalos regulares (típicamente 20, 40 y 60 minutos) después de la administración del compuesto. La ED_{50} se calculó a T_{max}.

Los compuestos de los ejemplos 2, 4, 14, 15 y 16 aumentaron significativamente la latencia del coletazo de la cola con una ED_{50} < 5 \mumol/kg.

Claims (7)

1. Un derivado tricíclico de 1-[(indol-3-il)carbonil]piperazina que tiene la Fórmula general I

9

en la que

X es CH_{2}, O o S;

R representa 1-3 sustituyentes seleccionados independientemente entre H, alquilo (C_{1-4}), alquiloxi (C_{1-4}) y halógeno;

R_{1} es un cicloalquilo (C_{5-8});

R_{2} es H o alquilo (C_{1-4});

R_{3}, R_{3}', R_{4}, R_{4}', R_{5}, R_{5}' y R_{6}' son independientemente hidrógeno o alquilo (C_{1-4}), sustituidos opcionalmente con alquiloxi (C_{1-4}), OH o halógeno;

R_{6} es hidrógeno o alquilo (C_{1-4}), opcionalmente sustituido con alquiloxi (C_{1-4}), OH o halógeno; o

R_{6} forma junto con R_{7} un anillo heterocíclico saturado de 4-7 miembros, que contiene opcionalmente otro heteroátomo seleccionado entre O y S;

R_{7} forma junto con R_{6} un anillo heterocíclico saturado de 4-7 miembros, que contiene opcionalmente otro heteroátomo seleccionado entre O y S; o

R_{7} es H, alquilo (C_{1-4}) o cicloalquilo (C_{3-5}), estando los grupos alquilo opcionalmente sustituidos con OH, halógeno o alquiloxi (C_{1-4}); o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

2. El derivado tricíclico de 1-[(indol-3-il)carbonil]piperazina de la reivindicación 1, en el que R es H, y R_{1} es ciclopentilo o ciclohexilo.

3. El derivado tricíclico de 1-[(indol-3-il)carbonil]piperazina de la reivindicación 1 ó 2, en el que X es CH_{2} u O.

4. El derivado tricíclico de 1-[(indol-3-il)carbonil]piperazina de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que R, R_{2}, R_{3}, R_{3}', R_{4}', R_{5}, R_{5}' y R_{6}' son H; R_{4}, R_{6} y R_{7} son independientemente H o alquilo (C_{1-4}); o R_{6} forma junto con R_{7} un anillo heterocíclico saturado de 5 ó 6 miembros y R_{4} es H o alquilo (C_{1-4}).

5. El derivado tricíclico de 1-[(indol-3-il)carbonil]piperazina de cualquiera de las reivindicaciones 1-4 para uso en terapia.

6. Una composición farmacéutica que comprende un derivado tricíclico de 1-[(indol-3-il)carbonil]piperazina de cualquiera de las reivindicaciones 1-4 junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable del mismo.

7. Uso de un derivado tricíclico de 1-[(indol-3-il)carbonil]piperazina de Fórmula 1 como se ha definido en la reivindicación 1, en la preparación de un medicamento para el tratamiento del dolor.