ES2284670T3 - Procedimiento para fabricacion de vehiculos de oxigeno sinteticos a partir de hemoglobinas reticuladas covalentemente con propiedades funcionales mejoradas mediante reticulacion en presencia de efectores que no reaccionan quimicamente de la afinidad por oxigeno de la hemoglobina. - Google Patents
Procedimiento para fabricacion de vehiculos de oxigeno sinteticos a partir de hemoglobinas reticuladas covalentemente con propiedades funcionales mejoradas mediante reticulacion en presencia de efectores que no reaccionan quimicamente de la afinidad por oxigeno de la hemoglobina. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2284670T3 ES2284670T3 ES01957822T ES01957822T ES2284670T3 ES 2284670 T3 ES2284670 T3 ES 2284670T3 ES 01957822 T ES01957822 T ES 01957822T ES 01957822 T ES01957822 T ES 01957822T ES 2284670 T3 ES2284670 T3 ES 2284670T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- hemoglobin
- oxygen
- cross
- hemoglobins
- poly
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 title claims abstract description 185
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 title claims abstract description 185
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 66
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 title claims abstract description 66
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 66
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 39
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 27
- 230000000694 effects Effects 0.000 title abstract description 4
- INGWEZCOABYORO-UHFFFAOYSA-N 2-(furan-2-yl)-7-methyl-1h-1,8-naphthyridin-4-one Chemical compound N=1C2=NC(C)=CC=C2C(O)=CC=1C1=CC=CO1 INGWEZCOABYORO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 41
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims abstract description 43
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 24
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims description 35
- 229920000233 poly(alkylene oxides) Polymers 0.000 claims description 31
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 claims description 22
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 15
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 15
- LEQAOMBKQFMDFZ-UHFFFAOYSA-N glyoxal Chemical compound O=CC=O LEQAOMBKQFMDFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 11
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 claims description 10
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 9
- 239000003633 blood substitute Substances 0.000 claims description 9
- XOHUEYCVLUUEJJ-UHFFFAOYSA-I 2,3-Diphosphoglycerate Chemical compound [O-]P(=O)([O-])OC(C(=O)[O-])COP([O-])([O-])=O XOHUEYCVLUUEJJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 7
- AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N divinyl sulfone Chemical compound C=CS(=O)(=O)C=C AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N Inositol-hexakisphosphate Chemical compound OP(O)(=O)O[C@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims description 6
- IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N Phytic acid Natural products OP(O)(=O)OC1C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229940015043 glyoxal Drugs 0.000 claims description 6
- 229940068041 phytic acid Drugs 0.000 claims description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 6
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N Glycolaldehyde Chemical compound OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000005057 Hexamethylene diisocyanate Substances 0.000 claims description 5
- RRAMGCGOFNQTLD-UHFFFAOYSA-N hexamethylene diisocyanate Chemical compound O=C=NCCCCCCN=C=O RRAMGCGOFNQTLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 5
- ZDCDTNQPPGWCGV-UHFFFAOYSA-N 2,5-diisocyanatobenzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC(N=C=O)=CC=C1N=C=O ZDCDTNQPPGWCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- ZNZYKNKBJPZETN-WELNAUFTSA-N Dialdehyde 11678 Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1[C@H](C[C@H](/C(=C/O)C(=O)OC)[C@@H](C=C)C=O)NCC2 ZNZYKNKBJPZETN-WELNAUFTSA-N 0.000 claims description 4
- ZFIVKAOQEXOYFY-UHFFFAOYSA-N Diepoxybutane Chemical compound C1OC1C1OC1 ZFIVKAOQEXOYFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 4
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 claims description 4
- 125000005442 diisocyanate group Chemical group 0.000 claims description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 4
- NBTMNFYXJYCQHQ-UHFFFAOYSA-N (2,3,4,5,6-pentasulfooxycyclohexyl) hydrogen sulfate Chemical compound OS(=O)(=O)OC1C(OS(O)(=O)=O)C(OS(O)(=O)=O)C(OS(O)(=O)=O)C(OS(O)(=O)=O)C1OS(O)(=O)=O NBTMNFYXJYCQHQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 3
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 claims description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 2
- 238000005352 clarification Methods 0.000 claims description 2
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims 1
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 abstract 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 21
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 17
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 14
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 8
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 8
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 8
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 7
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 7
- 239000003518 caustics Substances 0.000 description 6
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 6
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- -1 ester amide Chemical class 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 239000000592 Artificial Cell Substances 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 4
- 239000002262 Schiff base Substances 0.000 description 4
- 150000004753 Schiff bases Chemical class 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 4
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 4
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 4
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 4
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 3
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 239000008151 electrolyte solution Substances 0.000 description 3
- 229940021013 electrolyte solution Drugs 0.000 description 3
- 108010036302 hemoglobin AS Proteins 0.000 description 3
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 3
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- CRZDHHVBLGDCIO-UHFFFAOYSA-N (4,6-diformyl-5-hydroxypyridin-3-yl)methyl dihydrogen phosphate Chemical compound OC1=C(C=O)N=CC(COP(O)(O)=O)=C1C=O CRZDHHVBLGDCIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- KAKZBPTYRLMSJV-UHFFFAOYSA-N Butadiene Chemical compound C=CC=C KAKZBPTYRLMSJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 2
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical class C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000002270 exclusion chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 239000003058 plasma substitute Substances 0.000 description 2
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M sodium ascorbate Substances [Na+].OC[C@@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M 0.000 description 2
- 235000010378 sodium ascorbate Nutrition 0.000 description 2
- 229960005055 sodium ascorbate Drugs 0.000 description 2
- PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M sodium-L-ascorbate Chemical compound [Na+].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- KHAWDEWNXJIVCJ-UHFFFAOYSA-N 1-fluoro-4-(4-fluoro-3-nitrophenyl)sulfonyl-2-nitrobenzene Chemical compound C1=C(F)C([N+](=O)[O-])=CC(S(=O)(=O)C=2C=C(C(F)=CC=2)[N+]([O-])=O)=C1 KHAWDEWNXJIVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBSLIHUMUUEJER-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazol-2-yl formate Chemical compound O=COC1=NC=CN1 NBSLIHUMUUEJER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QUIMTLZDMCNYGY-UHFFFAOYSA-N 2,4-dichloro-1-nitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(Cl)C=C1Cl QUIMTLZDMCNYGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XKXPBJBODVHDAW-UHFFFAOYSA-N 4-(4-amino-2-chlorophenyl)-3-chloroaniline Chemical compound ClC1=CC(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C=C1Cl XKXPBJBODVHDAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 4-(4-fluorophenyl)oxane-4-carboxylic acid Chemical compound C=1C=C(F)C=CC=1C1(C(=O)O)CCOCC1 CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 description 1
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMHJEEQLYBKSAN-UHFFFAOYSA-N Adipaldehyde Chemical compound O=CCCCCC=O UMHJEEQLYBKSAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 200000000007 Arterial disease Diseases 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N Coenzym Q(11) Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(O)=O)C(O)C1O UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N Dimethyl ether Chemical compound COC LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 1
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 1
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 description 1
- WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N Malondialdehyde Chemical compound O=CCC=O WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001164593 Merica Species 0.000 description 1
- 229920001744 Polyaldehyde Polymers 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 206010038470 Renal infarct Diseases 0.000 description 1
- PCSMJKASWLYICJ-UHFFFAOYSA-N Succinic aldehyde Chemical compound O=CCCC=O PCSMJKASWLYICJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 229950006790 adenosine phosphate Drugs 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000006793 arrhythmia Effects 0.000 description 1
- 206010003119 arrhythmia Diseases 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N cyanuric chloride Chemical compound ClC1=NC(Cl)=NC(Cl)=N1 MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006392 deoxygenation reaction Methods 0.000 description 1
- 108010002751 dextran-hemoglobin complex (deoxygenated) Proteins 0.000 description 1
- 108010074807 diaspirin-cross-linked hemoglobin Proteins 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- ZLFRJHOBQVVTOJ-UHFFFAOYSA-N dimethyl hexanediimidate Chemical compound COC(=N)CCCCC(=N)OC ZLFRJHOBQVVTOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AQVMGRVHEOWKRT-UHFFFAOYSA-N dimethyl propanediimidate Chemical compound COC(=N)CC(=N)OC AQVMGRVHEOWKRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- POLCUAVZOMRGSN-UHFFFAOYSA-N dipropyl ether Chemical compound CCCOCCC POLCUAVZOMRGSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 150000002237 fumaric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 150000002373 hemiacetals Chemical class 0.000 description 1
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 1
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 description 1
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 description 1
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 1
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 description 1
- ZFSLODLOARCGLH-UHFFFAOYSA-N isocyanuric acid Chemical compound OC1=NC(O)=NC(O)=N1 ZFSLODLOARCGLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 229940118019 malondialdehyde Drugs 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 150000002924 oxiranes Chemical class 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 238000001470 plasma protein fractionation Methods 0.000 description 1
- 229920001281 polyalkylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000867 polyelectrolyte Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N propylamine Chemical compound CCCN WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N pyridoxal 5'-phosphate Chemical compound CC1=NC=C(COP(O)(O)=O)C(C=O)=C1O NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000007682 pyridoxal 5'-phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011589 pyridoxal 5'-phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001540 sodium lactate Substances 0.000 description 1
- 235000011088 sodium lactate Nutrition 0.000 description 1
- 229940005581 sodium lactate Drugs 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/41—Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
- A61K38/42—Haemoglobins; Myoglobins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
Abstract
Un procedimiento para la producción de vehículos de oxígeno sintéticos por medio de un agente reticulante bifuncional de proteínas, seleccionado de diepóxido de butadieno, divinilsulfona, un diisocianato, especialmente diisocianato de hexametileno, diisocianato de ciclohexilo y ácido 2, 5-bisisocianatobencenosulfónico, un di-N-hidroxisuccinimidil éster, un diimidoéster, o un dialdehído, especialmente glioxal, el glicoaldehído que reacciona de manera análoga; o hemoglobina reticulada químicamente con glutardialdehído con propiedades funcionales mejoradas, caracterizado porque antes de la reticulación covalente de la hemoglobina, se añaden efectores que no reaccionan químicamente de la afinidad por el oxígeno de la hemoglobina seleccionados de 2, 3-bisfosfoglicerato, hexafosfato de inositol, hexasulfato de inositol o ácido melítico a su disolución de reacción.
Description
Procedimiento para la fabricación de vehículos
de oxígeno sintéticos a partir de hemoglobinas reticuladas
covalentemente con propiedades funcionales mejoradas mediante la
reticulación en presencia de efectores que no reaccionan
químicamente de la afinidad por el oxígeno de la hemoglobina.
La invención se refiere a un procedimiento para
la producción de vehículos de oxígeno sintéticos a partir de
hemoglobinas reticuladas químicamente con propiedades funcionales
mejoradas, añadiéndose antes de la reticulación de la hemoglobina,
efectores que no reaccionan químicamente de la afinidad por el
oxígeno de la hemoglobina y que están presentes durante la
reticulación. Esto conduce según la invención a la protección
reversible de la zona de conformación de la molécula de
hemoglobina, que regula la interacción de la hemoglobina con el
oxígeno. Esta protección no química hace que se modifiquen las
propiedades de fijación del oxígeno (especialmente la afinidad y la
cooperatividad) durante una reticulación de la hemoglobina
modificada.
Un motivo, por el que se modifican y se cambian
químicamente hemoglobinas nativas, es el desarrollo y producción de
vehículos de oxígeno sintéticos a partir de tales hemoglobinas. Las
hemoglobinas nativas no cambiadas (especialmente como forma
molecular dispersa de eficacia elevada funcional disuelta en el
plasma sanguíneo) no son apropiadas como vehículos sintéticos,
porque se descomponen en el riñón en subunidades estructurales y
éstas se secretan rápidamente, porque además abandonan también los
capilares y porque producen interacciones no deseadas con proteínas
plasmáticas:
Por esta razón, quieren desarrollarse nuevamente
los vehículos de oxígeno, porque muchos y muy conocidos cambios
patológicos se basan en una carencia de oxígeno en tejidos, en un
caso grave tras una pérdida de sangre fuerte (por ejemplo tras un
accidente o durante una intervención quirúrgica grande) y en casos
crónicos en trastornos circulatorios, de los últimos por ejemplo en
caso de la denominada arteriopatía obliterante, además en infarto
de miocardio, en arritmias, en apoplejía, en infarto renal y otros
más. Dado que los vehículos de oxígeno sintéticos son
transportadores de oxígeno muy eficaces, pueden combatirse con ellos
las enfermedades mencionadas de manera muy eficaz.
Para desarrollar vehículos de oxígeno
sintéticos, que no tengan los inconvenientes mencionados, se ha
estudiado llevar a cabo diferentes planteamientos teóricos. Los más
importantes son
- \bullet
- la microencapsulación de disoluciones de hemoglobina en liposomas, denominados hemosomas (Ogata Y. (1994): "Characteristics of Neo Red Cells, Their Function and Safety: In Vivo Studies", Artificial Cells, Blood Substitutes, and Immobilization Biotechnologies 22: 875 - 881);
- \bullet
- enlaces intramoleculares covalentes, es decir, una estabilización de la estructura cuaternaria de la hemoglobina, bien mediante un agente reticulante bifuncional (Farmer M.C., et al. (1995): "Preclinical Data and Clinical Trials with Diaspirin Cross-linked Hemoglobin", - Tsuchida E. (Ed.): Artificial Red Cells, John Wiley 1995:177 - 185; Bakker J.C., et al. (1988): "Properties of Hemoglobin Interdimerically Cross-linked with NFPLP", Biomaterials, Artificial Cells, and Immobilization Biotechnologies 16: 635-636), o bien mediante obtención por ingeniería genética de hemoglobinas modificadas correspondientes (Looker D. et al. (1992): "A Human Recombinant Haemoglobin Designed for Use as a Blood Substitute", Nature 356: 258 - 260); véase también el documento US-A 4.600.531, relativo a la producción de hemoglobinas enlazadas intramolecularmente con ayuda de derivados de ácido fumárico en presencia de polianiones que no reaccionan tales como por ejemplo hexasulfato de inositol.
- \bullet
- enlaces covalentes de macromoléculas en la hemoglobina, por ejemplo polisacáridos, dextranos, hidroxietil almidón, inulina o macromoléculas solubles en agua sintéticas como polietilenglicoles (Xue H., Wong J. T.-F. (1994): "Preparation of Conjugated Hemoglobins", - Abelson J.N., Simon M.I. (Ed.): Methods of Enzymology, volumen 231 B, Academic Press 1994: 308 - 322; Tam S.C., et al.(1978): "Blood Replacement in Dogs by Dextran-Hemoglobin", Canadian Journal of Biochemistry 56:981 - 984; memoria de la patente DE-A 30 26 398 (1981): "Modifiziertes Hämoglobin enthaltender Blutersatz"; memoria de la patente EP-A 0 206 448 (1986): "Hemoglobin Combined with a Poly(Alkylene Oxide)"; memoria de la patente US 5.234.903 (1993): "Chemically Modified Hemoglobin as an Effective, Stable, Non-immunogenic Red Blood Cell Substitute"; memoria de la patente US 5.312.808 (1994): "Fractionation of Polyalkylene Oxide-Conjugated Hemoglobin Solutions");
- \bullet
- reticulaciones intermoleculares (Gould S.A., et al. (1998): "The Clinical Development of Human Polymerized Hemoglobin", - Chang T.M.S. (Ed.): Blood Substitutes: Principles, Methods, Products and ClinicalTrials, Volume 2, Karger Landes Systems 1998: 12 - 28; Pearce L.B., Gawryl M.S. (1998):"Overview of Preclinical and Clinical Efficacy of Biopure's HBOCs", - Chang T.M.S. (Ed.): Blood Substitutes: Principles, Methods, Products and Clinical Trials, volumen 2, Karger Landes Systems 1998: 82- 98; Bakker J.C., et al. (1992): "Preparation and Characterization of Crosslinked and Polymerized Hemoglobin Solutions", Biomaterials, Artificial Cells, and Immobilization Biotechnologies 20: 233- 241).
Los vehículos de oxígeno sintéticos mencionados
en último lugar basados en hemoglobinas reticuladas tienen
comparados con los otros una serie de ventajas: las hemoglobinas
reticuladas suficientemente grandes (polímeros de hemoglobina)
disponen de una presión coloidal-osmótica tan
escasa, que (debido a sus propias presiones
coloidales-osmóticas tan escasas combinadas después
con un expansor de plasma) no sólo pueden utilizarse como sustituto
del volumen sanguíneo que transporta oxígeno para reemplazar la
sangre que falta, sino que especialmente pueden añadirse también a
la sangre (como aditivo de la sangre que transporta oxígeno)
(Barnikol W.K.R., et al. (1996): "Hyperpolymere Hämoglobine
als künstliche Sauerstoffträger. Ein innovativer Ansatz der
medizinischen Entwicklung", Therapiewoche 46: 811 - 815). Las
áreas de indicaciones para tal aditivo-transportador
de oxígeno son el tratamiento de muchos estados de carencia de
oxígeno crónicos, como se mencionaron anteriormente. El tratamiento
con un aditivo es siempre posible también sin una pérdida de sangre
anterior; por el contrario los sustitutos del volumen (de sangre)
que transportan oxígeno mencionados en conjunto son apropiados
exclusivamente para el tratamiento de estados de carencia de
oxígeno agudos tras pérdidas de sangre. Las hemoglobinas con alto
grado de reticulación tienen además la ventaja de una permanencia
intravasal especialmente más larga. Además, tras su administración
no debe contarse con aumentos de la presión arterial, dado que
debido a su tamaño no abandonan los vasos sanguíneos y por
consiguiente no pueden actuar como constrictores de la musculatura
vascular.
El abastecimiento normal de los tejidos con
oxígeno mediante la hemoglobina natural, que se encuentra en los
glóbulos rojos, se basa esencialmente en las características de la
fijación del oxígeno especiales de la hemoglobina, como curva de
unión en forma de S. Esta característica de fijación puede
caracterizarse con dos magnitudes, concretamente con la denominada
presión de saturación media del oxígeno (P50) como medida de la
afinidad por el oxígeno media de la hemoglobina y el índice de HILL
(n50) como medida de las interacciones homotrópicas, de la
denominada cooperatividad de los sitios de fijación del oxígeno.
Ambas magnitudes determinan de manera decisiva,
como de eficaz se absorbe en el pulmón el oxígeno del aire dentro
de la sangre y como de bien se cede de nuevo el oxígeno en los
capilares de la sangre a los tejidos. Normalmente, la hemoglobina
empaquetada en los glóbulos rojos sanguíneos de la sangre humana
tiene un valor de P50 de aproximadamente 3332,5 Pa y el valor de
n50 alto de 2,6; los valores correspondientes de la hemoglobina
disuelta libre del ser humano y del cerdo ascienden en condiciones
fisiológicas a aproximadamente 2132,8 Pa e igualmente 2,6. Se
conoce desde hace mucho tiempo, que de manera natural se produce en
mamíferos la característica de fijación del oxígeno normal en sus
glóbulos rojos mediante moléculas efectoras pequeñas, que pueden
unirse de manera asociativa (o sea no covalente) a la hemoglobina.
A este respecto, en el caso de ser humano o cerdo se trata de
2,3-bisfosfoglicerato (DPG). Este efector se une de
manera no covalente en la denominada cavidad central de la molécula
de hemoglobina, que se forma mediante las cuatro subunidades
globulares agrupadas de manera pseudotetraédrica de esta molécula;
él hace esto de manera especialmente fija en el estado desoxigenado
de la hemoglobina. Además de los naturales, se conocen también
efectores sintéticos y extraños a la especie, que igualmente
influyen fuertemente a las propiedades de unión de la hemoglobina
humana, por ejemplo hexafosfato de inositol, hexasulfato de
inositol y ácido melítico (W.K.R. Barnikol, O. Burkhard (1983):
"Die Feinstruktur als Hilfsmittel zum Studium pharmakologischer
Wirkungen auf die
Sauerstoff-Hämoglobin-Bindung.
Hämoglobin als Puffer des Sauerstoffpartialdruckes",
Funktionelle Biologie und Medizin 2: 245 - 249). Evidentemente y
lógicamente tales efectores se unen específicamente a la zona que
capta oxígeno de la molécula de hemoglobina.
Para vehículos de oxígeno sintéticos de
dispersión molecular, independientemente de la estrategia de
desarrollo elegida, depende de poder ajustar la afinidad media
mediante las modificaciones químicas necesarias hasta un
determinado valor deseado y de mantener lo más posible la
cooperatividad natural a su valor elevado.
La producción de vehículos de oxígeno sintéticos
basándos en hemoglobinas reticuladas requiere en primer lugar la
reticulación covalente de la hemoglobina para dar moléculas grandes.
Además, entonces pueden enlazarse covalentemente éstas con
moléculas inertes y biocompatibles, para impedir interacciones no
deseadas con proteínas plasmáticas. Tanto la reticulación como los
enlaces químicos covalentes se realizan preferiblemente en grupos
amino de las moléculas de hemoglobina. Las reacciones químicas
mencionadas con la hemoglobina se realizan de tal modo que se
encuentran en todas las pautas cambios no deseados de la afinidad
por el oxígeno, pero sobre todo una pérdida de la cooperatividad
(una reducción del valor de n50), por ejemplo en la reticulación de
la hemoglobina humana con divinilsulfona (H. Pötzschke, St. Guth,
W.K.R. Barnikol: "Divinylsulfone-Crosslinked
Hyperpolymeric Human Haemoglobin as an Artificial Oxygen Carrier in
Anaesthetized Spontaneously Breathing Rats", Advances in
Experimental Biology and Medicine volumen 345, Plenum Press, New
York 1994: 205 -214), especialmente entonces, cuando se quiere
conseguir un alto grado de reticulación dentro de lo posible sin
hemoglobina mono-
mérica.
mérica.
El objetivo de la presente invención es
desarrollar un procedimiento mediante el cual se impiden o se
modifican de manera deseada las modificaciones producidas en una
reticulación de moléculas de hemoglobina de las propiedades de
fijación del oxígeno relativas a la afinidad por el oxígeno así como
la extensión de la cooperatividad homotrópica de los sitios de
fijación del oxígeno de las hemoglobinas reticuladas.
Según la invención, el objetivo se soluciona,
añadiendo antes de la reticulación de las hemoglobinas un efector
que no reacciona químicamente de la afinidad por el oxígeno de las
hemoglobinas y éste permanece allí durante la reacción de
reticulación.
Sorprendentemente se demuestra que los efectores
conocidos de la fijación del oxígeno de las hemoglobinas también
pueden usarse además, para proteger estas hemoglobinas durante las
reticulaciones, por ejemplo con glutardialdehído, de manera
reversible y eficaz frente a un cambio en la afinidad por el oxígeno
mediante el agente reticulante, sobre todo, para disminuir la
reducción de la cooperatividad decisiva. Esto es especialmente
importante para agentes reticulantes tan reactivos y eficaces, como
el denominado glutardialdehído.
Como efectores de protección se añaden según la
invención hexafosfato de inositol, hexasulfato de inositol, ácido
melítico y especialmente 2,3-bisfosfoglicerato,
preferiblemente en cantidades desde 1 hasta 20, especialmente de 1
a 10 mol y muy especialmente de 1 a 3, especialmente 2 mol por mol
de hemoglobina no reticulada.
Los agentes reticulantes se seleccionan de
diepóxido de butadieno, divinilsulfona, un diisocianato,
especialmente diisocianato de hexametileno, diisocianato de
ciclohexilo y ácido
2,5-bisisocianatobencenosulfónico, un
di-N-hidroxisuccinimidil éster, un
diimidoéster, o un dialdehído, especialmente glioxal, el
glicoaldehído que reacciona de manera análoga, o
glutardialdehído
Como material de partida de hemoglobina para la
enseñanza según la invención, es adecuada la hemoglobina monomérica,
nativa o modificada químicamente del ser humano o del cerdo, o de
ganado bovino, se prefiere hemoglobina humana y especialmente de
cerdo. La modificación química de la hemoglobina puede consistir por
ejemplo en un enlace covalente de determinadas sustancias de bajo
peso molecular, tales como los efectores de la afinidad por el
oxígeno, por ejemplo
piridoxal-5'-fosfato o
2-nor-2-formil-piridoxal-5'-fosfato
(tal como se describe en Kothe et al. (1985), Surgery,
Gynecology & Obstetrics 161: 563-569 o Van der
Plas et al. (1987), Transfusion 27: 425-430
y (1988), Transfusion 28: 525-530, además citado en:
Rudolph A. S. et al. (Ed.): Red Blood Cell Substitutes:
Basic Principles and Clinical Applications, Marcel Dekker, New York
entre otros 1998; Tsuchida E. (Ed.): Blood Substitutes: Present and
Future Perspectives, Elsevier Science, Amsterdam 1998; Chang T. M.
S. (autor o ed.): Blood Substitutes: Principles, Methods, Products
and Clinical Trials, volumen 1 y ~ volumen 2, Karger Landes, Basel
entre otros 1997 y 1998, véase también el documento EP 0 528 841,
allí se describe la piridoxilación de la hemoglobina).
Preferiblemente se enlazan estas moléculas antes de la reticulación
según la invención.
De manera alternativa o complementaria, puede
realizarse una modificación con moléculas que mejoran la tolerancia
de los vehículos de oxígeno sintéticos producidos con el plasma. A
esto pertenecen por ejemplo polietilenglicoles (resumido en: Harris
J. M. (Ed.): Poly (Ethylene Glycol) Chemistry: Biotechnical and
Biomedical Applications, Plenum, New York entre otros 1992). La
reacción se describe a continuación.
La hemoglobina puede desoxigenarse o
carbonizarse preferiblemente de manera conocida. Se prefiere
hemoglobina nativa, especialmente monomérica de seres humanos y
especialmente de cerdo.
Se conocen las reticulaciones de hemoglobinas
monoméricas con algunos agentes reticulantes y se describen de
manera múltiple en la bibliografía, se enumeran a modo de
ejemplo:
Las memorias de las patentes US 4.001.200 y US
4.001.401 se refieren a hemoglobinas reticuladas así como a su
utilización como sustituto de la sangre y expansor del plasma. Los
pesos moleculares (masas molares) de estas hemoglobinas reticuladas
ascienden a desde 65000 hasta 1000000 g/mol. Pueden producirse por
medio de un gran número de agentes enlazantes mencionados, tales
como por ejemplo divinilsulfona, epiclorhidrina, diepóxido de
butadieno, diisocianato de hexametileno, los dialdehídos glioxal y
glutardialdehído así como los diimidoesteres suberimidato de
dimetilo, malonimidato de dimetilo y adipimidato de dimetilo.
La memoria de la patente DE 24 49 885 se refiere
(entre otros) también a hemoglobinas reticuladas, que pueden
producirse mediante la reacción de hemoglobinas no reticuladas con
algunos dialdehídos, por ejemplo malondialdehído, succindialdehído,
glutardialdehído, adipindialdehído y suberdialdehído.
La memoria de la patente US 4.357.636 describe
la producción de distintas hemoglobinas reticuladas mediante la
reacción de hemoglobina con algunos dialdehídos y polialdehídos, por
ejemplo sencillos como glutardialdehído y glioxal, pero también con
estructuras más complejas, que se producen mediante la apertura de
anillo oxidativa de las estructuras hemiacetales y hemicetales
cíclicas de las moléculas de azúcar en monosacáridos y
oligosacáridos así como derivados de estos.
La memoria de la patente US 5.439.882 trata de
hemoglobinas reticuladas, que se producen mediante la reacción con
los dialdehídos o-adenosina y o-ATP,
producidos mediante la oxidación que abre el anillo de la ribosa en
la adenosina y en el adenosintrifosfato. Estas hemoglobinas
reticuladas tienen pesos moleculares desde 65000 hasta 390000
g/mol.
La memoria de la patente EP 0 201 618 se refiere
a un procedimiento, para producir, a partir de disoluciones
altamente concentradas de hemoglobinas monoméricas, polímeros de
hemoglobina solubles de extremadamente alto peso molecular, los
denominados hiperpolímeros (peso molecular de 65000 a 15000000).
Los procedimientos descritos pueden utilizarse
según el presente procedimiento, añadiéndose el agente reticulante
no reactivo según la invención inmediatamente antes de la reacción
de la reticulación en la cantidad indicada.
En principio se realiza la reticulación de la
hemoglobina con el uso de un agente reticulante poli o bifuncional
adecuado para proteínas, se prefieren agentes reticulantes
bifuncionales tales como diepóxido de butano, divinilsulfona, un
diisocianato, especialmente diisocianato de hexametileno,
diisocianato de ciclohexilo o ácido
2,5-bisisocianatobencenosulfónico, un
di-N-hidroxisuccinimidil éster, un
diimidoéster, o un dialdehído, especialmente glioxal, el
glicoaldehído que reacciona de manera análoga, o
glutardialdehído.
De manera muy especialmente preferible se
realiza la reticulación con glutardialdehído, tal como se describe
por ejemplo en Pötzschke H. y Barnikol W. (1992), Biomaterials,
Artificial Cells, and Immobilization Biotechnology 20: 287 - 291, o
como en los ejemplos de a continuación.
Según el agente reticulante usado, se utilizan
razones molares del agente reticulante (con respecto a la
hemoglobina monomérica) desde 3 hasta 60 veces, preferiblemente de
6 a 35 veces, por ejemplo preferiblemente un exceso molar de entre
7 y 10 veces de glutardialdehído. Los enlaces químicamente no
estables, especialmente las bases de Schiff, que se producen en el
caso de la reacción de grupos aldehído funcionales con grupos amino
de las hemoglobinas, se estabilizan de manera reductora de modo
conocido, mediante la reacción de agentes de reducción adecuados,
tales como por ejemplo borohidruro de sodio, en un exceso molar
suficiente con respecto a la hemoglobina monomérica,
preferiblemente de 2 a 100 veces, especialmente preferible de 5 a 20
veces, en condiciones conocidas
adecuadas.
adecuadas.
La realización de las reticulaciones (como
también de las reacciones de derivatización) depende según los
requisitos de las reacciones químicas elegidas: las hemoglobinas
nativas y modificadas son polielectrolitos y se encuentran por esta
razón para dar la reacción con el agente de reticulación en
disoluciones de electrolitos acuosas, que contienen por ejemplo
cloruro sódico o/y hidrogenocarbonato de sodio, con concentraciones
de iones de hasta 300 mmol/l, preferiblemente entre 50 y 200
mmol/l. La temperatura de reacción para la reticulación de las
hemoglobinas asciende a de 4 a 65, preferiblemente de 3 a 30 y
especialmente de 4 a 10ºC, las actividades de los protones en las
disoluciones, expresadas como valores de pH, ascienden a entre 5 y
11, preferiblemente entre 6 y 9 y especialmente entre 6,5 y 8,
pueden ajustarse de manera conocida, por ejemplo con ácido láctico
o hidróxido de sodio, hasta el valor deseado. El efector se añade a
la disolución de reacción, que contiene todavía hemoglobina no
reticulada en una concentración desde 10 hasta 420, especialmente
desde 150 hasta 400 g/l.
La hemoglobina puede desoxigenarse, por ejemplo
mediante excesos de corriente de disolución con nitrógeno u otros
gases inertes libres de oxígeno. A continuación, se añade el
reactivo de reticulación de manera conocida en una razón molar
adecuada con respecto a la hemoglobina monomérica. Los tiempos de
reacción ascienden, según la reacción especial seleccionada,
también dependiendo de la temperatura, el valor de pH, la
concentración de iones, etc., entre unos pocos minutos y hasta 3
días, preferiblemente menos de 5 horas y muy preferiblemente menos
de 2 horas.
Entonces, el exceso de agente de reticulación
puede eliminarse por ejemplo químicamente mediante la reacción con
medios de reducción adecuados, o mediante procedimientos
físicos.
Las hemoglobinas así producidas pueden
modificarse dado el caso químicamente de manera adicional, tal como
se menciona a continuación, por ejemplo pueden enlazarse con
poli(óxidos de alquileno).
Se conocen algunos enlaces covalentes de
poli(óxidos de alquileno) en proteínas, especialmente también en
hemoglobinas no reticuladas, y se describen en la bibliografía (el
estado de la técnica descrito comprende: Harris J. M.(Ed.): Poly
(Ethylene Glycol) Chemistry: Biotechnical and Biomedical
Applications, Plenum, New York entre otros 1992). En el caso de
muchos de estos procedimientos se realiza el enlace del poli(óxido
de alquileno) sobre un puente molecular ("spacer",
espaciador), que por ejemplo crea un agente de enlace bifuncional.
O sea, se enlaza de manera considerada estricta en estos casos un
producto de enlace de un poli(óxido de alquileno) con un reactivo
de enlace a la proteína.
Se conoce la unión de poli(óxidos de alquileno)
a proteínas (por ejemplo, la patente estadounidense 4.179.337
(1979): "Non-immunogenic Polypeptides"),
especialmente también a hemoglobinas, concretamente también a
vehículos de oxígeno sintéticos basados en hemoglobinas
modificadas, (memoria de la patente US 5.478.805 (1995):
"Fractionation of Polyalkylene Oxide-Conjugated
Hemoglobin Solution", el documento US 5.386.014 (1995):
"Chemically Modified Hemoglobin as an Effective, Stable,
Non-immunogenic Red Blood Cell Substitute", el
documento EP-A 0206 448 (1986): "Hemoglobin
Combined with a Poly (Alkylene Oxide)", el documento
EP-A 0 067 029 (1982): "Oxygen Carrier"). El
enlace de poli(óxidos de alquileno) a vehículos de oxígeno
sintéticos basados en hemoglobinas modificadas evidentemente nunca
se efectuó según la bibliografía conocida, a una hemoglobina
reticulada, y sirvió siempre para la obtención de objetivos de
tipos completamente distintos, por ejemplo de una prolongación de la
permanencia intravasal, o también para una reducción de la potencia
inmunogénica de los vehículos de oxígeno sintéticos.
Para el enlace covalente de los poli(óxidos de
alquileno) se usan preferiblemente aquellos derivados de los
poli(óxidos de alquileno), que contienen unido ya de manera
covalente un agente enlazante con un grupo funcional, que producen
una reacción química directa con grupos amino, alcohol o sulfhidrilo
de las hemoglobinas con la formación de los enlaces covalentes de
los poli(óxido de alquileno) (por ejemplo poli(óxidos de alquileno)
con grupos reactivos de N-hidroxisuccinimidil éster,
epóxido (glucidiléter), aldehído, isocianato, vinilsulfona,
yodoacetamida, formiato de imidazolilo, tresilato, entre otros).
Muchos de tales polietilenglicoles activados monofuncionales están
disponibles comercialmente, por ejemplo los mencionados, y
concretamente con pesos moleculares entre aproximadamente 500 y
5000 g/mol.
Preferiblemente se utilizan derivados de un
poli(óxido de alquileno), especialmente seleccionados de poli(óxido
de etileno), poli(óxido de propileno) o copolímeros de los mismos.
Con especial preferencia se utilizan productos de enlace de
poli(óxido de alquileno), especialmente los mencionados, con una
molécula que enmascara un grupo hidroxilo terminal, especialmente
como éter, éster, amida de éster con resto orgánico alifático de
cadena corta (C_{1} - C_{5}).
Alternativamente, en primer lugar pueden
activarse químicamente los poli(óxidos de alquileno) no activos de
cada manera adecuada adicional o, eventualmente tras una
derivatización necesaria adicional, se enlazan mediante agentes de
enlace químicos con la hemoglobina, por ejemplo por medio de la
reacción química con bromuro de cianógeno, una carbodiimida tal
como por ejemplo
1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida
o N,N'-diciclohexilcarbodiimida, cloruro de
cianurilo (con estos polietilenglicoles activados,
4,6-dicloro-s-triazin-polietilenglicoles,
igualmente están disponibles comercialmente), u otros agentes de
enlace conocidos tales como por ejemplo
2,2'-diclorobencidina,
p,p'-difluoro-m,m'-dinitrodifenilsulfona,
2,4-dicloronitrobenceno y más (resumen en Harris J.
M. (Ed.): Poly (Ethylene Glycol) Chemistry: Biotechnical and
Biomedical Applications, Plenum, New York entre otros 1992).
Como poli(óxidos de alquileno) son adecuados
especialmente poli(óxidos de etileno) (polietilenglicoles),
poli(óxido de propileno) (polipropilenglicoles), así como
copolímeros (polímeros mixtos) de óxido de etileno y óxido de
propileno, especialmente, tal como se mencionó, ciertos derivados de
estos, tales como compuestos que enmascaran a un grupo OH, por
ejemplo (mono)éteres con un alcohol de cadena corta, preferentemente
con de 1 a 5 átomos de carbono, tal como monometiléter,
monoetiléter, monopropiléter, etc., (mono)ésteres con ácidos
carboxílicos de cadena corta, preferentemente con de 1 a 5 átomos
de carbono, tales como éster monometílico, éster monometílico,
éster monopropílico, etc., y productos de deshidratación con una
amina alifática con de 1 a 5 átomos de carbono, tal como
monometilamina, monoetilamina, monopropilamina, etc. con los
indicados anteriormente. Se prefieren especialmente
polietilenglicoles y sus derivados mencionados.
El peso molecular de los poli(óxidos de
alquileno) usados asciende a entre 200 y 5000 g/mol, especialmente
entre 500 y 2000 g/mol.
Estos se utilizan preferentemente en una
cantidad de 1-40, especialmente 4-15
mol/mol de hemoglobina.
La realización de los enlaces en el caso del
modo de proceder según la invención es análoga tal como se describen
anteriormente.
Por consiguiente, la hemoglobina puede enlazarse
con poli(óxido de alquileno) con ayuda de procedimientos conocidos,
tal como se describieron anteriormente, por ejemplo mediante
combinación directa con ayuda de un agente de condensación, tal
como bromuro de cianógeno, o con ayuda de un reactivo de
reticulación, tal como por ejemplo cloruro de cianurilo (véase el
documento DE-OS 30 26 398), o mediante la reacción
con un poli(óxido de alquileno) activado, por ejemplo un
N-hidroxisuccinimidil éster de un derivado de
poli(óxido de alquileno). De esta manera, se enlazan al menos 1,
especialmente de 1 a 40 y preferiblemente de 4 a 15 moléculas del
poli(óxido de alquileno) usado según la invención por cada molécula
de hemoglobina monomérica.
A modo de ejemplo pueden aplicarse los
siguientes procedimientos para el enlace de los poli(óxidos de
alquileno), conservando su integridad estructural:
(1) se hace reaccionar polietilenglicol (no
activado) con de 2 a 5 veces la cantidad molar, preferiblemente de
3 veces la cantidad molar de bromuro de cianógeno a un valor de pH
desde 9 hasta 10. El bromuro de cianógeno restante se elimina de la
mezcla de reacción mediante filtración en gel, diálisis, etc., y el
producto se hace reaccionar después con por ejemplo de 0,1 a 0,002
veces, preferiblemente de 0,02 a 0,01 veces una cantidad molar
necesaria de hemoglobina a pH de 7 a 9, preferiblemente de 7,5 a 8,
en disolución acuosa (véase el documento DE-OS 3
026 398);
(2) se añade polietilenglicol en benceno, que
contiene una cantidad en exceso de carbonato de sodio, y después se
hace reaccionar con de 2 a 5 veces la cantidad molar,
preferiblemente de 3 a 4 veces la cantidad molar de cloruro del
ácido cianúrico. Se separa el producto de reacción,
polietilglicol-4,6-dicloro-s-triazina,
y se hace reaccionar con la cantidad deseada, por ejemplo de 1 a
0,002 mol, preferiblemente de 0,1 a 0,01 mol, con respecto a un mol
del producto reacción mencionado anteriormente, de hemoglobina en
una disolución tampón con un valor de pH desde 8 hasta 9,5 (véase
el documento DE-OS 30 26 398);
(3) se añade poli(óxido de alquileno) activado,
por ejemplo un N-hidroxisuccinimidil éster de un
poli(óxido de alquileno), en de 1 a 40 veces un exceso molar con
respecto a la hemoglobina monomérica, a una disolución acuosa con
un pH de entre 7 y 10 de una hemoglobina que ha de enlazarse con el
poli(óxido de alquileno) y se deja reaccionar.
Los procedimientos explicados anteriormente
pueden aplicarse también en el caso de los polímeros usados según
la invención.
La unión química de los poli(óxidos de
alquileno) en los vehículos de oxígeno sintéticos a partir de las
hemoglobinas reticuladas, puede realizarse en el transcurso de la
producción de los derivados de hemoglobina según la invención en
tres momentos:
i) En el primer caso se une el derivado de
poli(óxido de alquileno) a la hemoglobina altamente pura, nativa o
modificada (monómeros de hemoglobina), a continuación de esto se
realiza después la reticulación de las hemoglobinas con un agente
reticulante especialmente bifuncional.
ii) En el segundo caso se acoplan los derivados
de poli(óxido de alquileno) a la hemoglobina reticulada ya
sintetizada, es decir, a continuación de la reacción de los
monómeros de hemoglobina altamente pura, nativa o modificada con
efectores, con un agente reticulante bifuncional.
iii) En el tercer caso finalmente puede
realizarse una unión covalente de derivados de poli(óxido de
alquileno) tanto a los monómeros de hemoglobina antes de su
reticulación, como además después, en el transcurso adicional de la
producción, a la hemoglobina reticulada.
Tal como se mencionó, se realiza en cada caso
antes de la reticulación la adición según la invención de un
efector. Preferiblemente se realiza la modificación con un
poli(óxido de alquileno), especialmente poli(óxido de etileno) o
derivados de los mismos tales como se mencionaron anteriormente,
tras la reticulación según la invención.
Las hemoglobinas reticuladas obtenidas pueden
purificarse después de manera conocida adecuada, por ejemplo
mediante centrifugación, filtración o ultrafiltración, o
cromatográficamente (por ejemplo mediante cromatografía de
exclusión por volumen preparativa, tal como por ejemplo de gel de
Sephadex G-25) o tal como se describen en los
documentos mencionados anteriormente o en Curling J.M.: Methods of
Plasma Protein Fractionation, Academic Press, London, 1980, o en
los documentos EP-A 0 854151, EP-A
95 107 280 y posteriormente se somete a tratamiento subsiguiente
para dar una preparación farmacéutica.
Preferiblemente se mezcla hemoglobina
monomérica, preferiblemente en estado desoxigenado, en una
disolución de electrolitos acuosa (que contiene por ejemplo
hidrogenocarbonato de sodio o cloruro de sodio o lactato de sodio o
más de éstos), en primer lugar con uno de los efectores mencionados
en las cantidades indicadas y posteriormente se reticula, por
ejemplo con los agentes reticulantes bifuncionales mencionados,
especialmente con de 7 a 10 veces un exceso molar de
glutardialdehído. Se elimina el glutardialdehído excedente de manera
conocida con borohidruro de sodio, por ejemplo mediante la adición
de de 2 a 100 veces, especialmente de 5 a 20 veces un exceso molar,
con respecto de nuevo a la hemoglobina monomérica. Después, las
hemoglobinas reticuladas así obtenidas pueden tratarse
posteriormente por ejemplo mediante diálisis, centrifugación,
filtración de clarificación y ultrafiltración, precipitación, por
ejemplo con poli(óxido de etileno), procedimientos de cromatografía
preparativa, tales como por ejemplo mediante cromatografía de
permeación en gel, y también pueden someterse a tratamiento
subsiguiente para dar una preparación farmacéutica como vehículos de
oxígeno sintéticos o también aún pueden hacerse reaccionar y
tratarse con poli(óxido de alquileno) y después pueden tratarse
para dar una preparación farmacéutica.
De esta manera se obtiene como producto una
hemoglobina reticulada, que presenta mediante la presencia del
efector no reactivo durante la reticulación, propiedades de afinidad
por el oxígeno especialmente favorables evitando o reduciendo una
pérdida de la cooperatividad. Esta ventaja que puede conseguirse de
la enseñanza según la invención fue sorprendente en vista del
estado de la técnica, dado que en ésta no se conoce un tratamiento
con efectores no reactivos y no podía esperarse una influencia de
tales moléculas no reactivas en las reacciones químicas,
especialmente con reactivos de reticulación altamente reactivos. Las
hemoglobinas reticuladas según la invención presentan una ventaja
inesperada excepcionalmente favorable, concretamente una reducción
de la pérdida de la cooperatividad de la fijación del oxígeno,
comparadas con hemoglobinas reticuladas completamente análogas pero
producidas sin el modo de procedimiento según la invención.
Además, si se enlazan de manera covalente los
poli(óxidos de alquileno) a las hemoglobinas reticuladas, entonces
puede obtenerse adicionalmente (también en condiciones fisiológicas
extremas, especialmente del valor de pH) una tolerancia con el
plasma claramente mejorada. La tolerancia es a este respecto
independiente del tipo y del peso molecular de la hemoglobina, del
agente reticulante usado, de los efectores o del poli(óxido de
alquileno) utilizado.
Los derivados de hemoglobina producidos según la
invención pueden usarse como tales o en forma adecuada, por ejemplo
preparaciones farmacéuticas como vehículos de oxígeno sintéticos de
manera intravasal como productos farmacéuticos o para fines
biomédicos, como sustitutos de la sangre para el tratamiento de una
carencia del volumen sanguíneo, como aditivo para la sangre para el
tratamiento de condiciones de carencia de oxígeno patogénicas, o
como una disolución nutritiva, en organismos humanos o animales, en
órganos o en aplicaciones biotecnológicas. Para la producción de
los productos que han de administrarse, se disuelven los productos
de hemoglobina según la invención en medios adecuados, tales como
disoluciones de infusión, por ejemplo en disolución acuosa de
cloruro sódico o glucosa, ambas preferiblemente en concentraciones
isotónicas al plasma sanguíneo.
Con especial preferencia se explican
detalladamente las configuraciones de la invención a continuación en
primer lugar mediante un procedimiento de producción general y los
ejemplos de a continuación:
Se disuelve hemoglobina de cerdo, humana o de
ganado bovino, nativa o tras una modificación química previa por
ejemplo con un efector que se une covalentemente de la afinidad por
el oxígeno y/o un poli(óxido de alquileno) que se une
covalentemente para mejorar la tolerancia con proteínas plasmáticas,
con una concentración de entre 10 y 420 g/l, preferiblemente entre
150 y 400 g/l, en una disolución acuosa de hidrogenocarbonato de
sodio, teniendo ésta una concentración entre 40 y 100 mmol/l y una
temperatura del intervalo entre 3 y 30ºC. Mediante un exceso de
corriente con nitrógeno puro y agitación de esta disolución de
hemoglobina, se realiza una desoxigenación de la hemoglobina. El pH
de la disolución se titula con ácido láctico o solución cáustica (de
una concentración entre 0,1 y 1 mol/l) hasta un valor entre 6 y 9,
preferiblemente entre 6,5 y 8. Ahora se realiza la adición desde 1
hasta 10, preferiblemente de 1 a 3 mol del efector por mol, a la
hemoglobina monomérica, reticulada, especialmente se prefiere como
efector 2,3-bisfosfoglicerato. A continuación se
efectúa la reacción de la hemoglobina con un agente reticulante
bifuncional, elegido de diepóxido de butadieno, divinilsulfona, un
diisocianato, especialmente diisocianato de hexametileno,
diisocianato de ciclohexilo y ácido
2,5-bisisocianatobencenosulfónico, un
di-N-hidroxisuccinimidil éster, un
diimidoéster, o un dialdehído, especialmente glioxal, el
glicoaldehído que reacciona de manera análoga, y muy especialmente
preferible glutardialdehído. La razón molar del agente reticulante
con respecto a la hemoglobina monomérica asciende a entre 3 y 60,
especialmente entre 6 y 35 mol por mol de hemoglobina monomérica.
Tras la reticulación con uno de los dialdehídos mencionados, se
reducen las bases de Schiff producidas con borohidruro de sodio, en
una razón molar con respecto a la hemoglobina monomérica de entre 2
y 100, preferiblemente entre 5 y 20. Esta reducción se realiza a un
pH de entre 7,5 y 10, preferiblemente entre 8 y 9; este valor de pH
se ajusta, tal como se describió anteriormente, con solución
cáustica o ácido láctico.
Ahora, las hemoglobinas reticuladas pueden
enlazarse covalentemente, tras el ajuste de nuevo del valor de pH
entre 7,5 y 10 (con solución cáustica o ácido láctico), con un
derivado de poli(óxido de alquileno), añadiéndose éste en una razón
molar desde 1 hasta 40, preferiblemente entre 4 y 15 con respecto a
la hemoglobina monomérica a la mezcla de reacción. Los poli(óxidos
de alquileno) pueden estar ya monofuncionalmente activados para la
reacción especialmente con grupos amino de la hemoglobina, o pueden
activarse o enlazarse de manera pasiva. Sin el enlace del
poli(óxido de alquileno) preferido se realiza de manera directa el
tratamiento adicional.
A continuación se aclara el modo de
procedimiento especial preferido, que también se basa en los
ejemplos de realización posteriores de 1 a 3:
En primer lugar se desoxigena mediante agitación
y exceso de corriente de nitrógeno la hemoglobina porcina o
hemoglobina humana, que está disuelta con una concentración
preferiblemente entre 150 y 400 g/l en una disolución de
electrolitos-(NaHCO_{3}) hidrogenocarbonato acuosa de una
concentración preferiblemente entre 40 y 100 mmol/l y a una
temperatura de 3 a 30ºC, entonces se añaden preferiblemente entre 2
y 6 mol de ascorbato de sodio por mol de hemoglobina y se titula la
disolución con ácido láctico hasta un valor de pH preferiblemente
entre 6,5 y 8. En el valor de pH así ajustado se realiza ahora
(véase los ejemplos 2 y 3) la adición de uno de los efectores de la
afinidad por el oxígeno mencionados anteriormente en la cantidad
indicada, preferiblemente 1, 2 ó 3 mol por mol de hemoglobina
monomérica. A continuación se realiza la reticulación mediante la
adición especialmente de glutardialdehído en la razón molar
preferiblemente entre 7 y 10 mol por mol de hemoglobina monomérica.
Tras la titulación repetida de la disolución con solución cáustica
(NaOH) hasta un valor de pH preferiblemente entre 8 y 9, se realiza
una reducción de las bases de Schiff formadas con borohidruro de
sodio, que se añade en una razón molar preferiblemente entre 5 y 20
mol por mol de hemoglobina monomérica. Con una titulación adicional
con solución cáustica o ácido láctico se lleva el valor de pH en el
intervalo preferiblemente entre 8 y 9 y se realiza una adición de
polietilenglicol activado, por ejemplo a un derivado de
N-hidroxisuccinimidilo, con un peso molecular desde
300 hasta 5000, preferiblemente entre 500 y 2000 g/mol, en una razón
molar entre 1 y 15 mol por mol de hemoglobina monomérica. A
continuación mediante exceso de corriente de oxígeno puro y
agitación se liga simultáneamente con éste la hemoglobina reticulada
producida. Para la caracterización de las propiedades de la
fijación del oxígeno en condiciones fisiológicas se cambia ahora el
disolvente junto con todos los productos de reacción y reactivos no
consumidos que están allí contenidos, por ejemplo con ayuda de una
cromatografía de exclusión por volumen o de una ultrafiltración, por
una disolución de electrolitos acuosa correspondiente al fluido
plasmático, conteniendo ésta cloruro de sodio 125 mM; cloruro de
potasio 4,5 mM y hidrogenocarbonato de sodio 20 mM.
La invención se aclara con más detalle mediante
los siguientes ejemplos. A este respecto sirve el ejemplo 1
(ninguna adición de los efectores no reactivos de la afinidad por el
oxígeno para la reticulación de la hemoglobina) como comparación,
los ejemplos 2 y 3 representan la invención y demuestran las mejoras
que pueden obtenerse.
Ejemplo 1 de aplicación
1
(Comparación para
22ºC)
Se desoxigenó a 22ºC mediante agitación y exceso
de corriente de nitrógeno, una disolución al 35% de hemoglobina
porcina (Hb) en NaHCO_{3} 50 mM. A continuación se realizó una
adición de ascorbato de sodio (4 mol/mol de Hb). Entonces se tituló
la disolución con ácido láctico hasta un valor de pH de 7,2 y se
mezcló con glutardialdehído (9 mol/mol de Hb), tiempo de reacción
posterior de aproximadamente 1,5 h. Tras la titulación con solución
cáustica (NaOH) hasta un valor de pH de 7,8, siguió una reducción de
las bases de Schiff formadas con borohidruro de sodio (10 mol de
NaBH_{4}/mol de Hb), tiempo de reacción posterior de
aproximadamente 0,75 h. Tras una titulación adicional de la
disolución con NaOH hasta un valor de pH de 8,5 se hizo reaccionar
la hemoglobina disuelta con un exceso molar de 8 veces de
polietilenglicol del propionato de
metoxi-succinimidilo de peso molecular de 2000
g/mol, tiempo de reacción posterior de aproximadamente 1 h. Entonces
se realizó una ligación de la hemoglobina reticulada con oxígeno
puro. A continuación se cambio el medio del producto disuelto con
ayuda de una cromatografía de exclusión por volumen (Sephadex
G-25 -Gel, Pharmacia. D) por una disolución de
electrolitos de composición de NaCl 125 mM, KCl 4,5 mM y NaHCO_{3}
20 mM.
Las mediciones en condiciones fisiológicas
(temperatura de 37ºC, presión parcial de dióxido de carbono de 5332
Pa y un valor de pH de 7,4) dieron para el producto un valor de n50
(cooperatividad) de 1,35 en una valor de p50 (afinidad media) de
3559,1 Pa.
Ejemplo 2 de
aplicación
Se produjo el producto de la misma manera que en
el ejemplo 1 de aplicación, con la excepción particular de que
antes de la reticulación con glutardialdehído se realiza una adición
de 3 moles de 2,3-bisfosfoglicerato por mol de la
hemoglobina monomérica que ha de reticularse. A este respecto se
obtuvo en las condiciones fisiológicas mencionadas de la
caracterización, una clara reducción de la pérdida de la
cooperatividad de los sitios de fijación del oxígeno de la
hemoglobina, con un valor de n50 (como magnitud para la
cooperatividad) de 1,7, en una afinidad por el oxígeno media
elevada, expresada como un p50 de 2399,4 Pa.
Ejemplo 3 de
aplicación
(Comparación para
4ºC)
Se produjo el producto de la misma manera que en
el ejemplo 1 de aplicación con la diferencia de que la producción
se realizó a 4ºC y se prolongó 10 x el tiempo de reacción.
Se obtuvo en las condiciones mencionadas
anteriormente un valor de p50 de 5065,4 Pa y un valor de n50 de
1,1.
Ejemplo 4 de
aplicación
Se produjo un polímero de manera muy análoga tal
como se describe en el ejemplo 3 de aplicación, con la modificación
de que se añadieron 2 moles de 2,3-bisfosfoglicerato
por cada mol de hemoglobina antes de la reticulación de la
hemoglobina.
El valor de n50 ascendió a 1,7, en un valor de
p50 de 2532,7 Pa.
Ejemplo 5 de
aplicación
Se produjo el producto de igual manera que en el
ejemplo 3 de aplicación, excepto que se habían añadido 2 moles de
hexafosfato de inositol por cada mol de hemoglobina antes de la
reticulación.
En las condiciones mencionadas anteriormente,
dio el análisis un valor de p50 de 2332,75 Pa y un valor de n50 de
1,2.
Ejemplo 6 de
aplicación
Se produjo el producto de igual manera que en el
ejemplo 3 de aplicación con la modificación de que se añadieron 2
moles de ácido melítico por cada mol de hemoglobina antes de la
reticulación.
El análisis en las condiciones mencionadas
anteriormente dio un valor de p50 de 1946,18 y de n50 de 1,5.
\newpage
\global\parskip0.950000\baselineskip
Ejemplo 7 de
aplicación
(Comparación)
Se produjo el producto de igual manera que en el
ejemplo 1 de aplicación con la diferencia de que se usó el agente
reticulante glicolaldehído con un exceso de 20 veces, de que
ascendió el tiempo de reacción de la reticulación a 4 h y el valor
de pH a 9,1.
En las condiciones mencionadas dio el análisis
un valor de p50 de 2399,4 Pa y un valor de n50 de 1,2.
Ejemplo 8 de
aplicación
Se obtuvo el producto de igual manera que en el
ejemplo 7 de aplicación, excepto que se añadieron 2 moles de
2,3-bisfosfoglicerato por cada mol de hemoglobina a
la mezcla de reacción antes de la reticulación.
El análisis en las condiciones mencionadas dio
un valor de p50 de 1732,9 Pa y un valor de n50 de 1,55.
Ejemplo 9 de
aplicación
Se obtuvo el producto de igual manera que en el
ejemplo 7 de aplicación, con la modificación de que se añadieron a
la mezcla de reacción 2 moles de hexafosfato de inositol por cada
mol de hemoglobina.
El análisis en las condiciones mencionadas dio
un valor de p50 de 2879,28 Pa y un valor de n50 de 1,6.
Ejemplo 10 de
aplicación
Se obtuvo el producto de igual manera que en el
ejemplo 7 de aplicación, con la modificación de que se añadieron a
la mezcla de reacción 2 moles de ácido melítico por cada mol de
hemoglobina.
El análisis en las condiciones mencionadas dio
un valor de p50 de 2199,45 Pa y un valor de n50 de 1,5.
Ejemplo 11 de
aplicación
(Comparación)
Se produjo el producto de igual manera que en el
ejemplo 3 con la diferencia de un uso de hemoglobina humana.
En las condiciones mencionadas dio el análisis
un valor de p50 de 2666 Pa y un valor de n50 de 1,2.
Ejemplo 12 de
aplicación
Se produjo el producto de igual manera que en el
ejemplo 11, excepto que se añadieron 2 moles de bisfosfoglicerato
por cada mol de hemoglobina antes de la reticulación.
En las condiciones mencionadas anteriormente dio
el análisis un valor de p50 de 1732,9 Pa y un valor de n50 de
1,4.
Ejemplo 13 de
aplicación
Se produjo el producto de igual manera que en el
ejemplo 11, con la modificación de que se añadieron 2 moles de
hexafosfato de inositol por cada mol de hemoglobina antes de la
reticulación.
En las condiciones mencionadas anteriormente dio
el análisis un valor de p50 de 1599,6 Pa y un valor de n50 de
1,8.
Claims (17)
1. Un procedimiento para la producción de
vehículos de oxígeno sintéticos por medio de un agente reticulante
bifuncional de proteínas, seleccionado de diepóxido de butadieno,
divinilsulfona, un diisocianato, especialmente diisocianato de
hexametileno, diisocianato de ciclohexilo y ácido
2,5-bisisocianatobencenosulfónico, un
di-N-hidroxisuccinimidil éster, un
diimidoéster, o un dialdehído, especialmente glioxal, el
glicoaldehído que reacciona de manera análoga; o hemoglobina
reticulada químicamente con glutardialdehído con propiedades
funcionales mejoradas, caracterizado porque antes de la
reticulación covalente de la hemoglobina, se añaden efectores que no
reaccionan químicamente de la afinidad por el oxígeno de la
hemoglobina seleccionados de 2,3-bisfosfoglicerato,
hexafosfato de inositol, hexasulfato de inositol o ácido melítico a
su disolución de reacción.
2. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque la hemoglobina procede del cerdo.
3. Procedimiento según la reivindicación 2,
caracterizado porque se utiliza como efector no reactivo
2,3-bisfosfoglicerato.
4. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque el efector no
reactivo de la afinidad por el oxígeno de la hemoglobina se añade
antes de su reticulación en una cantidad desde 1 hasta 20 moles por
mol de hemoglobina.
5. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la hemoglobina
procede del ser humano, del cerdo o de ganado bovino.
6. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque se utiliza la
hemoglobina en una concentración desde 10 hasta 420 g/l.
7. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque para la
reticulación en presencia del efector que no reacciona químicamente
de la afinidad por el oxígeno se utiliza hemoglobina nativa o
hemoglobina derivatizada mediante una modificación química
previa.
8. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque la hemoglobina
se utiliza en estado desoxigenado.
9. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque el reactivo de
reticulación se utiliza en una cantidad desde 3 hasta 60 moles por
mol de hemoglobina monomérica.
10. Procedimiento según la reivindicación 9,
caracterizado porque el agente reticulante bifuncional es
glutardialdehído.
11. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque durante la
reticulación con un efector no reactivo químicamente, la
hemoglobina reticulada tratada dado el caso se derivatiza y se
modifica químicamente de manera adicional.
12. Procedimiento según la reivindicación 11,
caracterizado porque la hemoglobina reticulada se enlaza
covalentemente con un poli(óxido de alquileno).
13. Procedimiento según la reivindicación 12,
caracterizado porque la hemoglobina reticulada se enlaza
covalentemente con un poli(óxido de etileno).
14. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 13, caracterizado porque la hemoglobina
reticulada y dado el caso modificada químicamente de manera
adicional, tratada con un efector no reactivo, se purifica de manera
preparativa mediante diálisis, centrifugación, filtración de
clarificación y ultrafiltración y/o procedimientos cromatográficos
preparativos.
15. Un uso de una hemoglobina reticulada
producida según el procedimiento según una de las reivindicaciones
1 a 14 para la producción de un agente para su aplicación intravasal
o biomédica como vehículo de oxígeno sintético.
16. Uso según la reivindicación 15,
caracterizado porque el agente se usa en forma de una
preparación farmacéutica como un sustituto de la sangre, o como un
aditivo para la sangre o para una solución nutritiva, en organismos
humanos y animales, en órganos individuales, o en aplicaciones
biotecnológicas.
17. Un producto de hemoglobina, producido según
una de las reivindicaciones 1 a 14.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE10031742A DE10031742A1 (de) | 2000-06-29 | 2000-06-29 | Verfahren zur Herstellung künstlicher Sauerstoffträger aus kovalent vernetzten Hämoglobinen mit verbesserten funktionellen Eigenschaften durch Vernetzung in Anwesenheit chemisch nicht reagierender Effektoren der Sauerstoffaffinität der Hämoglobine |
| DE10031742 | 2000-06-29 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2284670T3 true ES2284670T3 (es) | 2007-11-16 |
Family
ID=7647246
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES01957822T Expired - Lifetime ES2284670T3 (es) | 2000-06-29 | 2001-06-02 | Procedimiento para fabricacion de vehiculos de oxigeno sinteticos a partir de hemoglobinas reticuladas covalentemente con propiedades funcionales mejoradas mediante reticulacion en presencia de efectores que no reaccionan quimicamente de la afinidad por oxigeno de la hemoglobina. |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20040023851A1 (es) |
| EP (1) | EP1294385B1 (es) |
| AT (1) | ATE358494T1 (es) |
| AU (1) | AU2001279641A1 (es) |
| DE (2) | DE10031742A1 (es) |
| ES (1) | ES2284670T3 (es) |
| WO (1) | WO2002000229A1 (es) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6306166B1 (en) * | 1997-08-13 | 2001-10-23 | Scimed Life Systems, Inc. | Loading and release of water-insoluble drugs |
| DE10031744A1 (de) * | 2000-06-29 | 2002-01-17 | Sanguibio Tech Ag | Mit Blutplasma verträgliche, vernetzte und mit Polyalkylenoxiden konjugierte Säugetierhämoglobine als künstliche medizinische Sauerstoffträger, ihre Herstellung und ihre Verwendung |
| DE10220992A1 (de) * | 2002-05-11 | 2003-12-04 | Sanguibiotech Ag | Verwendung eines oder mehrerer Sauerstoffträger, ausgewählt aus Hämoglobin, Myoglobin und Derivaten hiervon zur Behandlung einer Organfunktionsstörung infolge eines akuten Versorgungsmangels und zur Behandlung/Vermeidung einer Gewebeschädigung infolge einer solchen Störung |
| EP1469011B1 (en) * | 2003-04-17 | 2007-11-07 | Ezio Panzeri | Hemoglobin conjugates |
| US7235639B2 (en) * | 2003-04-23 | 2007-06-26 | Ezio Panzeri | Hemoglobin conjugates |
| DE10352692A1 (de) | 2003-11-12 | 2005-06-23 | Sanguibiotech Gmbh | Verwendung hypo-onkotischer Lösungen in das Blut addierbarer, hyperpolymerer Hämoglobine zur Behandlung eines Lungenödems |
| ES2393639T3 (es) | 2007-01-21 | 2012-12-26 | Hemoteq Ag | Producto médico para tratar cierres de conductos corporales y prevención de nuevos cierres |
| US9192697B2 (en) * | 2007-07-03 | 2015-11-24 | Hemoteq Ag | Balloon catheter for treating stenosis of body passages and for preventing threatening restenosis |
| EP2944332B1 (en) | 2009-07-10 | 2016-08-17 | Boston Scientific Scimed, Inc. | Use of nanocrystals for a drug delivery balloon |
| EP2453938B1 (en) * | 2009-07-17 | 2015-08-19 | Boston Scientific Scimed, Inc. | Nucleation of drug delivery balloons to provide improved crystal size and density |
| US20110160645A1 (en) * | 2009-12-31 | 2011-06-30 | Boston Scientific Scimed, Inc. | Cryo Activated Drug Delivery and Cutting Balloons |
| EP2611476B1 (en) | 2010-09-02 | 2016-08-10 | Boston Scientific Scimed, Inc. | Coating process for drug delivery balloons using heat-induced rewrap memory |
| EP2550973B1 (en) | 2011-07-23 | 2013-08-28 | SastoMed GmbH | Wound spray |
| US8669360B2 (en) | 2011-08-05 | 2014-03-11 | Boston Scientific Scimed, Inc. | Methods of converting amorphous drug substance into crystalline form |
| WO2013028208A1 (en) | 2011-08-25 | 2013-02-28 | Boston Scientific Scimed, Inc. | Medical device with crystalline drug coating |
| EP2614833A1 (en) | 2012-01-13 | 2013-07-17 | SastoMed GmbH | Scarring reducing wound treatment |
| RU2504387C2 (ru) * | 2012-04-12 | 2014-01-20 | Учреждение Российской академии наук Институт высокомолекулярных соединений РАН | Способ получения полимерного модифицированного гемоглобина |
| DE102013014651A1 (de) | 2013-09-03 | 2015-03-05 | Sanguibiotech Gmbh | Zubereitungen zur verbesserten Gewebe-Oxygenierung durch peritoneale Beatmung |
| EP3421044A1 (en) | 2017-06-26 | 2019-01-02 | SastoMed GmbH | Oxygen carriers for the treatment of skin indispositions |
| CA3070172A1 (en) | 2017-07-18 | 2019-01-24 | VirTech Bio, Inc. | Blood substitutes comprising hemoglobin and methods of making |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4001200A (en) * | 1975-02-27 | 1977-01-04 | Alza Corporation | Novel polymerized, cross-linked, stromal-free hemoglobin |
| US4001401A (en) * | 1975-02-02 | 1977-01-04 | Alza Corporation | Blood substitute and blood plasma expander comprising polyhemoglobin |
| US4179637A (en) * | 1978-04-14 | 1979-12-18 | Santora James V | Incandescent light bulb with multiple filaments providing multiple lives |
| US4600531A (en) * | 1984-06-27 | 1986-07-15 | University Of Iowa Research Foundation | Production of alpha-alpha cross-linked hemoglobins in high yield |
| GB8710598D0 (en) * | 1987-05-05 | 1987-06-10 | Star Medical Diagnostics Ltd | Hemoglobin based blood substitute |
| US5234903A (en) * | 1989-11-22 | 1993-08-10 | Enzon, Inc. | Chemically modified hemoglobin as an effective, stable non-immunogenic red blood cell substitute |
| US5312808A (en) * | 1989-11-22 | 1994-05-17 | Enzon, Inc. | Fractionation of polyalkylene oxide-conjugated hemoglobin solutions |
| US5386014A (en) * | 1989-11-22 | 1995-01-31 | Enzon, Inc. | Chemically modified hemoglobin as an effective, stable, non-immunogenic red blood cell substitute |
| US5439882A (en) * | 1989-12-29 | 1995-08-08 | Texas Tech University Health Sciences Center | Blood substitute |
| US5250665A (en) * | 1991-05-31 | 1993-10-05 | The University Of Toronto Innovations Foundation | Specifically β-β cross-linked hemoglobins and method of preparation |
| US5387672A (en) * | 1993-03-02 | 1995-02-07 | The University Of Maryland At Baltimore | Hemoglobin intramolecularly cross-linked withlong chain divalent reagents |
| DK0646130T3 (da) * | 1993-03-16 | 1997-06-02 | Hemosol Inc | Selektiv tværbinding af hæmoglobiner ved hjælp af oxiderede, ringåbnede saccharider |
-
2000
- 2000-06-29 DE DE10031742A patent/DE10031742A1/de not_active Withdrawn
-
2001
- 2001-06-02 US US10/312,427 patent/US20040023851A1/en not_active Abandoned
- 2001-06-02 AT AT01957822T patent/ATE358494T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-06-02 EP EP01957822A patent/EP1294385B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-02 DE DE50112296T patent/DE50112296D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-02 ES ES01957822T patent/ES2284670T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-02 WO PCT/EP2001/006329 patent/WO2002000229A1/de not_active Ceased
- 2001-06-02 AU AU2001279641A patent/AU2001279641A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE358494T1 (de) | 2007-04-15 |
| AU2001279641A1 (en) | 2002-01-08 |
| EP1294385B1 (de) | 2007-04-04 |
| WO2002000229A1 (de) | 2002-01-03 |
| US20040023851A1 (en) | 2004-02-05 |
| DE50112296D1 (de) | 2007-05-16 |
| DE10031742A1 (de) | 2002-01-17 |
| EP1294385A1 (de) | 2003-03-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2284670T3 (es) | Procedimiento para fabricacion de vehiculos de oxigeno sinteticos a partir de hemoglobinas reticuladas covalentemente con propiedades funcionales mejoradas mediante reticulacion en presencia de efectores que no reaccionan quimicamente de la afinidad por oxigeno de la hemoglobina. | |
| US4377512A (en) | Oxygen carrier for blood substitute | |
| US4301144A (en) | Blood substitute containing modified hemoglobin | |
| JPS6289630A (ja) | ヘモグロビン―ポリオキシアルキレン結合体 | |
| US5110909A (en) | Macromolecular conjugates of hemoglobin, a procedure for their preparation and their uses | |
| EP3081233B1 (en) | Glycopolysialylation of proteins other than blood coagulation proteins | |
| JPH0365326B2 (es) | ||
| US4698387A (en) | Allosteric conjugates of hemoglobin and use as blood substitutes | |
| ES2432075T3 (es) | Espray para heridas | |
| ES2856055T3 (es) | Glicopolisialilación de proteínas diferentes de las proteínas de coagulación de la sangre | |
| JP2000514434A (ja) | ヘモグロビン―ヒドロキシエチルスターチ結合体含有酸素運搬剤、その製造方法及びその血液代用剤等としての使用 | |
| JPS61249388A (ja) | 安定化ス−パ−オキサイドジスムタ−ゼ | |
| JPH07506123A (ja) | 酸化開環サッカライドによるヘモグロビンの選択的架橋 | |
| ES2395894T3 (es) | Hemoglobinas de mamífero compatibles con plasma sanguíneo, reticuladas y conjugadas con poli(óxidos de alquileno) como portadores de oxígeno médicos artificiales, su preparación y su uso | |
| ES2255669T3 (es) | Uso de uno o varios secuestrantes de oxigeno liberados de plasma y componentes de pared celular naturales o modificados para el tratamiento externo de heridas abiertas, especialmente cronicas. | |
| KR102144139B1 (ko) | 다이아스피린 가교결합된 페길화 헤모글로빈 | |
| CN113599504A (zh) | 一种无载体蛋白质胞内递送前药及其制备方法与应用 | |
| US5998361A (en) | Polymerized hemoglobin | |
| US5981710A (en) | Therapeutic hemoglobin composition having isotropically increased size | |
| JPH02231078A (ja) | ヒアルロン酸修飾スーパーオキシドジスムターゼ | |
| JP2531661B2 (ja) | 酸素運搬剤 | |
| WO2022272124A1 (en) | Hemoglobin-based oxygen carriers and methods of making and using thereof | |
| JPH0195774A (ja) | 修飾スーパーオキサイド・ジスムターゼ | |
| JPH02231076A (ja) | デキストラン修飾スーパーオキシドジスムターゼ | |
| Savla | Scalable Purification of Ultra-Pure Lumbricus terrestris Mega-Hemoglobin and Surface Modification using Bio-compatible Polymers for use as an Oxygen Therapeutic |