ES2284774T3 - Uso de interleucina-18 para el tratamiento de transtornos de la piel asociados con la radiacon uv. - Google Patents

Abstract

Uso de interleucina-18 para la fabricación de un medicamento para la prevención, reducción y tratamiento de trastornos de la piel asociados con lesión inducida por radiación UV, en el que el trastorno se selecciona del grupo que comprende quemaduras solares, inflamación y envejecimiento cutáneo prematuro.

Description

Uso de interleucina-18 para el tratamiento de trastornos de la piel asociados con la radiación UV.

La presente invención se refiere a usos de interleucina-18.

La incidencia de trastornos de la piel debidos a influencias ambientales parece aumentar de forma drástica en los últimos años. Aparte de la exposición a un siempre creciente número y diversidad de agentes químicos procedentes de fuentes diversas, incluyendo las salidas de escape de la combustión de combustibles fósiles o de la fabricación de sustancias plásticas, también la radiación externa juega una parte importante en la génesis de trastornos de la piel. En este contexto, a la radiación UV tanto de origen natural (es decir, radiación solar) como de fuentes artificiales se le atribuye un papel destacado en la etiología de enfermedades y trastornos de la piel. Existe un aumento drástico de la incidencia tanto de cáncer de piel melanoma y no melanoma en Europa, los Estados Unidos y Australia. La entrada creciente de radiación UV debida a la reducción de la capa de ozono puede contribuir a este fenómeno en cierto grado, la razón más importante para el incremento del cáncer de piel inducido por UV es ciertamente el comportamiento de la población. Debido a un cambio constante en la mayoría de las actividades de ocio, la dosis UV acumulativa durante la vida de la población media ha aumentado durante las últimas décadas (Armstrong and Kricker, 2001, J Photochem Photobiol B.;63(1-3):8-18).

De hecho, la radiación ultravioleta es una de las influencias ambientales más importantes con respecto a la piel de las formas de vida terrestres. Esto es particularmente cierto para el intervalo medio de la radiación UV (290-320 nm), debido a que es este intervalo al que se le atribuye una función causante, no solo por las quemaduras solares, sino también por el aumento masivo en la incidencia de cáncer de piel descrita antes. Desde un punto de vista mecanístico, el efecto perjudicial de la radiación UV sobre las células cutáneas se cree que está causado por el daño masivo que ésta induce en el ADN de las células de la piel que han sido expuestas a dicha radiación. El ADN absorbe luz UV en la región UVB (290-320 nm) y en la región UVC (200-290 nm). La absorción de radiación UV va acompañada con frecuencia por lesiones en las moléculas de ADN afectadas. La radiación UV en el intervalo de 290-320 nm induce fundamentalmente dos tipos de fotolesiones, a saber, fotoproductos dímeros ciclobutano-pirimidina (CPD) y <6-4>. La inmensa mayoría de estos fotoproductos se eliminan en las células eucarióticas normales por un mecanismo, denominado corrientemente como "reparación por escisión de nucleótidos" (NER) que es de vital importancia debido a que las lesiones en el ADN que permanecen pueden dar lugar a aberraciones malignas de las células afectadas. (de Laat et al., 1999, Genes Dev. 13:768-785). La importancia del mecanismo NER se demuestra extraordinariamente por un trastorno genético caracterizado por la ausencia de un sistema NER funcional, Xeroderma pigmentoso (XP). Por consiguiente, los pacientes que sufren Xeroderma pigmentoso presentan una tasa notablemente incrementada de cáncer de piel (Kraemer et al., 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94:1-14, 1997). El sistema NER eucariótico tiene su homólogo procariótico y viral en enzimas específicas diseñadas para eliminar las lesiones en el ADN inducidas por UV. Por ejemplo, se puede conseguir una aceleración en la reparación del ADN mediante la aplicación de enzimas reparadoras de ADN exógenas que eliminen los mismos efectos UV biológicos. La enzima reparadora de ADN T4N5-endonucleasa ha mostrado invertir con éxito diversos fenómenos mediados por UV, incluyendo la inmunosupresión, liberación de la citocina interleucina-10 inmunosupresora y el mediador inflamatorio factor de necrosis tumoral \alpha (TNF\alpha), cuando se encapsula en liposomas. (Wolf et al, J. Invest. Dermatol., 114:149-156, 2000; Kibitel et al., Photochem. Photobiol. 67:541-546, 1998). Se han hecho observaciones similares con otra enzima reparadora, también de origen bacteriano, fotoliasa, que invierte los dímeros ciclobutano-pirimidina de forma específica tras la iluminación con una luz fotorreactivadora, también denominado "fotorreactivación" (Stege et al., 2000, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97:1790-1795). La introducción de estas enzimas reparadoras en células se lleva a cabo mediante su incorporación en liposomas y la posterior aplicación de estos liposomas sobre células irradiadas con UV en cultivo o sobre la piel irradiada con UV. Se podría demostrar que la aplicación local de estas enzimas reparadoras reduce de forma significativa la incidencia de tumores de piel en ratones irradiados con UV de forma crónica (Yarosh et al., 1992, Cancer Res. 52,4227-4231). Por otro lado, la aplicación tópica de endonucleasa T4N5 reduce de forma significativa el riesgo de que pacientes que tienen xeroderma pigmentoso desarrollen queratosis actínica (Yarosh et al., 2001, Lancet, 357:926-929). No obstante, estos procedimientos no han encontrado su vía en el tratamiento normal de quemaduras solares y lesiones de piel. La protección convencional frente al sol usando filtros UV aplicados tópicamente es todavía de forma indiscutible el modo más eficaz de prevenir las lesiones inducidas por UV en la piel. Los filtros UV convencionales, no obstante, con frecuencia tienen efectos secundarios no deseados, porque éstos pueden causar reacciones alérgicas, si son sistemas de anillo aromático que absorben la radiación UV, o no proporcionan una protección eficaz por el simple bloqueo mecánico de la radiación UV (por ejemplo, pigmentos de óxidos metálicos) y, por otro lado, causan ensuciamiento de las prendas de vestir.

Los dímeros ciclobutano-pirimidina inducidos por UV pueden activar el gen p53 supresor de tumor que desempeña una función crucial en la formación de queratinocitos apoptóticos que aparecen in vivo como células de quemaduras solares en la epidermis (Murphy et al., 2001, Exp. Dermatol., 10:155-160). Ratones con deficiencia en un p53 funcional desarrollaron significativamente menores células de quemaduras solares tras la exposición a irradiación UV que ratones tipo silvestre irradiados con UV (Ziegler et al., 1994, Nature, 372:773-776). La irradiación con UV da lugar a una interrupción del ciclo celular dependiente de p53 durante la fase G1 con el fin de permitir la reparación de ADN antes de la síntesis de ADN. En base a estos hallazgos, se supuso que las células de quemaduras solares eran queratinocitos que no habían podido reparar de forma eficiente el ADN dañado, sufriendo por consiguiente apoptosis y escapando de este modo al riesgo de hacerse malignas. Por consiguiente, la formación de células de quemaduras solares se consideró que era un fenómeno de depuración de control de p53 que protege a los individuos de desarrollar cáncer de piel inducido por UV (Brash et al., 1996, J. Invest. Dermatol. Symposium Proceedings, 1:136-142) con relación a las propiedades supresoras de tumor de p53, los queratinocitos mutados serían susceptibles a los efectos promotores de tumor de UV, mientras que otras células que llevan p53 tipo silvestre serían eliminadas por apoptosis cuando se cargaban con un cierto grado de lesión de ADN (Brash et al., ibid.). Puesto que la radiación UV muta preferiblemente al p53 (Brash et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:10124-10128), éste puede ejercer una presión selectiva para los queratinocitos mutados resistentes a la lesión, permitiendo de este modo que estas células se expandan por clonación y formen queratosis actínicas, la etapa previa del cáncer de piel (Ziegler et al., ibid.). Por tanto, se ha propuesto que la intensidad de la lesión del ADN es un mediador importante de apoptosis y por tanto está relacionado con el número de células de quemaduras solares (Ziegler et al., ibid.). Un aumento en la reparación de ADN también daría como resultado una reducción de la respuesta apoptótica de los queratinocitos a la exposición UV. La evidencia de esta suposición se proporcionó cuando se sometieron células epiteliales (HeLa) a reparación de ADN potenciada después de irradiación con UV. Se consiguió una aceleración de la reparación de ADN por fotorreactivación mediante la adición de la enzima reparadora de ADN fotoliasa encapsulada en liposomas. Una fotorreactivación dio como resultado una tasa de apoptosis reducida de forma significativa, aunque no completa, tras la exposición a UV (Kulms et al., 1999, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96:7974-7979). Se han obtenido resultados similares in vivo demostrando que una aplicación tópica de la enzima reparadora T4N5 mediante liberación en liposomas redujo el número de células de quemaduras solares tanto en ratones como en seres humanos (Wolf et al., 2000, ibid.; Stege et al., 2000, ibid). Considerándolos conjuntamente, estos y los datos citados antes indican claramente que la lesión en el ADN nuclear desempeña una función importante en la mediación de los efectos biológicos de UV.

Un estudio reciente (Schwarz et al., 2002, Nature Cell Biology, 4:26-31) ha demostrado que la interleucina-12 suprime la apoptosis inducida por radiación UV induciendo la reparación de ADN a través del sistema de reparación de las propias células, en particular el sistema de reparación por escisión de nucleótidos (NER). IL-12 es una citocina inmunoestimuladora y tiene una extensa batería de efectos. La interleucina-12 es segregada por linfocitos periféricos después de la inducción. Es producida fundamentalmente por linfocitos B y en menor grado por linfocitos T. En términos de su estructura, la interleucina-12 es una proteína heterodimérica de 70 kDa que tiene una subunidad de 35 kDa y una de 40 kDa (IL-12A = 35 kDa, 197 aminoácidos; IL-12 B = 40 kDa, 306 aminoácidos). El heterodímero se forma por enlaces disulfuro, cuya formación es esencial para la actividad biológica. Ambas subunidades y su interrelación parecen ser esenciales para un correcto funcionamiento de las moléculas, puesto que una subunidad-heterodímero de 40 kDa presenta funciones antagonistas (German et al., 1995, Immunol. Today; 16(10):500-501).

En términos de sus actividades, IL-12 es el tipo clásico de una citocina inmunoestimuladora, como ya se ha citado antes y parece estar involucrada en una amplia gama de reacciones después de una respuesta inmune primaria. IL-12 estimula la proliferación de linfoblastos humanos después de una activación celular por fitohemaglutinina. Activa las células NK que son positivas para CD56 y, además, posee efecto sinérgico con anticuerpos anti-CD-3 con estimulación alogénica en cultivos de linfocitos mixtos en la inducción de proliferación de linfocitos T. Por otro lado, IL-12 ha demostrado inducir la síntesis de IFN-g e interleucina-2 en linfocitos periféricos de tipo 1 de linfocitos T cooperadores (Th1). Los efectos de IL-12 sobre las células citotóxicas son mediados por TNF-\alpha, en base al hallazgo de que un anticuerpo dirigido contra TNF-\alpha puede suprimir los efectos de IL-12 sobre las células citotóxicas. IL-12 y TNF-\alpha son coestimuladores para la producción de IFN-\gamma, maximizando IL-12 la respuesta de IFN-\gamma. Por otro lado, IL-12 funciona junto con IL-1 en la promoción de la proliferación de células mononucleares en sangre periférica y en la promoción de la generación de células citotóxicas activadas por linfocitos (células LAK). Concentraciones picomolares de IL-12 son tan eficaces como concentraciones nanomolares de IL-2 para aumentar la actividad citolítica de las células citotóxicas naturales que se han expandido in vivo por IL-2. Además, IL-12 se ha visto implicada en la patogénesis de enfermedades autoinmunes tales como esclerosis múltiple, sensibilización por contacto y eccema (Riemann et al., J. Immunol. 156(5):1799-1803; Leonard et al., Crit Rev. Immunol. 17(5-6):545-553). Dado que IL-12 permite reducir las dosis de IL-2 que son necesarias para la generación de células LAK se le ha atribuido una posible función para inmunoterapia adoptiva en la que IL-2 se usa normalmente puesto que existen efectos secundarios adversos graves asociados con interleucina-2 y, por tanto, muchas esperanzas residen en la administración conjunta de IL-2 con IL-12. IL-12 también ha demostrado que inhibe el crecimiento de una diversidad de tumores experimentales in vivo y que tiene un efecto antiangiogénico que se cree es mediado por IFN-\gamma.

Como se puede apreciar de lo anteriormente expuesto, la amplia diversidad de funciones de IL-12 puede hacer del uso de IL-12 en aplicaciones médicas una labor formidable, puesto que no se ha predicho de forma inequívoca cual será el resultado de dicha aplicación, dada la naturaleza multifactorial de las interacciones involucradas. Incluso en un menor grado pueden la comprensión y los conocimientos obtenidos a partir de experimentos con IL-12, ser sencillamente transferidos a otras citocinas. Por otro lado, el uso de IL-12 está drásticamente limitado por sus altos costes y además por su tamaño relativamente grande, que, por ejemplo, excluye las aplicaciones tópicas del mismo.

La prevención de un inicio de la lesión inducida por UV de la piel después de exposición a la luz solar y la prevención del envejecimiento prematuro de la piel siguen todavía sin resolver. Medios convencionales, tales como filtros solares aplicados de forma externa previenen la lesión de la piel, pero no son útiles una vez que ya se ha producido la lesión. Igualmente se cumple para los bloqueantes mecánicos, en forma de cremas, pomadas y similares o coberturas textiles, que de nuevo, no tienen uso una vez que se ha producido la lesión. Procedimientos alternativos, tales como la aplicación anteriormente citada de IL-12 que podría demostrar ser un prometedor camino a seguir, pero no parecen ser viables debido a los altos costes de IL-12 y su gran tamaño molecular que evita una captación eficaz en la piel.

Por consiguiente, ha sido un objetivo de la presente invención proporcionar un modo alternativo para prevenir y/o tratar las lesiones en la piel inducidas por UV. Otro objetivo de la presente invención es proporcionar un medicamento para prevenir y/o tratar lesiones en la piel inducidas por UV que sea más asequible y más viable que otros medicamentos conocidos en la técnica.

Estos objetivos se consiguen por el uso de interleucina-18 para la fabricación de un medicamento para la prevención, reducción y tratamiento de trastornos de la piel asociados con lesión inducida por radiación UV, en el que el trastorno se selecciona del grupo que comprende en quemaduras solares, inflamación y envejecimiento cutáneo prematuro.

Con preferencia, el trastorno es un trastorno que se puede aliviar y/o prevenir mediante inducción de la ruta de reparación por escisión de nucleótidos (NER).

Se prefiere que el trastorno esté asociado con apoptosis.

En una realización, la radiación UV cubre al menos un intervalo de longitudes de onda de 220 nm a 350 nm, preferiblemente de 250 nm a 330 nm, más preferiblemente, de 290 nm a 320 nm.

En una realización, la radiación UV se origina de luz solar natural y/o artificial.

Con preferencia, el uso comprende una aplicación de dicho medicamento a un paciente que lo necesite, en el que, con preferencia, la aplicación es sistémica y/o tópica.

En una realización, la aplicación se produce por medio de aplicación de un vehículo farmacéuticamente aceptable y/o por inyección, con preferencia inyección intracutánea de un vehículo farmacéuticamente aceptable, en la que, con preferencia, el vehículo se selecciona del grupo que comprende liposomas, pomadas, aceites, cremas, emulsiones y dispersiones.

En una realización, la aplicación tópica se produce en un intervalo de dosis de 1 ng/ml a 1000 ng/ml.

En una realización, la aplicación sistémica se produce en un intervalo de dosis de 0,1 \mug/kg de peso corporal a 100 \mug/kg de peso corporal, en la que, con preferencia, la aplicación se produce de una a ocho veces al día.

En una realización, la aplicación se produce antes, durante y después de que un paciente se exponga a radiación UV.

Con preferencia, el paciente que lo necesita es un mamífero, preferiblemente un ser humano.

En la preparación de la presente invención, los inventores pudieron demostrar que interleucina-18 puede prevenir y/o tratar lesiones inducidas por UV en la piel que ha sido irradiada con luz UV. Como consecuencia, parece como si interleucina-18 pueda reducir la apoptosis asociada normalmente con radiación UV. Por otro lado, interleucina-18 también puede asegurar una supervivencia a largo plazo de queratinocitos que han sido irradiados con luz UV. Además, la piel de ratones irradiados con UV presentó menos queratinocitos apoptóticos (células de quemaduras solares (SC)) cuando se inyectó IL-18 que los animales sin dicha inyección. Sin pretender seguir teoría alguna, se cree en la actualidad que la reducción de la apoptosis inducida por UV puede ser atribuida a una inducción concomitante del sistema de reparación de células eucarióticas, el sistema NER. La supresión de la apoptosis inducida por UV se atribuye a una reducción pronunciada de la lesión del ADN inducida por UV, que se podía demostrar por transferencias de Southwestern (véase más adelante). Aunque el grado de lesión de ADN inducida por UV en grupos de ratones tratados o no tratados con IL-18, fue la misma inmediatamente después de la irradiación con UV, la lesión del ADN inducida por UV se redujo de forma significativa en el grupo de ratones que se había tratado con interleucina-18. Se pueden encontrar resultados similares también in vivo por medio de experimentos inmunohistoquímicos. La lesión del ADN inducida por UV fue la misma en ratones tratados con IL-18 y no tratados inmediatamente después de la irradiación UV, mientras que la lesión de ADN se redujo de forma significativa 18 horas después de la irradiación. El hecho de que dicho efecto se podía obtener en ratones de tipo silvestre, pero no en ratones que no tenían sistema NER, es decir, ratones con un gen Xpa deficiente, muestra la implicación del sistema de reparación NER. Esto demuestra además que la interleucina-18 puede prevenir la apoptosis inducida por UV induciendo el sistema NER y por tanto reduciendo las lesiones en ADN causadas por la irradiación UV. Debido a dicha reducción de las lesiones en ADN, IL-18 tiene un efecto protector frente al cáncer de piel y el envejecimiento cutáneo prematuro. Esto es lo más sorprendente puesto que dicho efecto solo se ha observado hasta ahora para interleucina-12, que funcionalmente, no se ha asociado con interleucina-18 en absoluto, o solo en campos claramente no relacionados con el sistema
NER.

Tal como se usa en la presente memoria, el término ruta de reparación por escisión de nucleótidos (NER) se usa de forma indistinta con el término "sistema de reparación por escisión de nucleótidos" y "mecanismo de reparación por escisión de nucleótidos", y por lo general se refiere al sistema, como por ejemplo, descrito en de Laat et al., 1999, Genes Develop. 13:768-785.

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Tal como se usa en la presente memoria, el término "trastorno asociado con apoptosis" se utiliza para designar un trastorno que es causado por y/o va acompañado de apoptosis de células y/o que manifiesta el mismo en la apoptosis de células.

Se hace referencia a continuación a las figuras, en las que

la figura 1 muestra la supresión de apoptosis inducida por UV por IL-18,

la figura 2 muestra que interleucina-18 permite la supervivencia de queratinocitos después de irradiación UV,

la figura 3 muestra una reducción de la lesión de ADN inducida por UV por IL-18, in vitro,

la figura 4 muestra una reducción de la lesión de ADN inducida por UV por IL-18, in vivo y

la figura 5 muestra la ausencia de reducción de células de quemaduras solares por IL-18 en ratones con deficiencia en Xpa.

La invención se describe ahora por los siguientes ejemplos específicos, que no pretenden limitar, sino simplemente ilustrar la invención.

Ejemplo 1

Se irradió la línea de células KB (2 x 10^{5}/ml) con 250 J/cm^{2} UVB (290 nm - 320 nm). Cuatro horas antes de la irradiación UV se añadió IL-18 humana recombinante (150 ng/ml) (UV+IL-18). 16 horas después de la irradiación se midió la muerte celular apoptótica por medio de un ELISA para la apoptosis que se basa en el principio de fragmentación de ADN. Para la detección de la fragmentación de ADN, se usó un ELISA de detección de muerte celular (Boehringer Mannheim). El enriquecimiento de mono- y oligonucleosomas liberados en el citoplasma de células se detecta por anticuerpos anti-ADN acoplados a antihistona y peroxidasa biotinilada. La tasa de apoptosis se refleja en el aumento de la extinción representada en el eje Y. La densidad óptica se muestra en el eje Y como media \pm DT de muestras por triplicado. Se usó una prueba de Student para valorar la significación de las diferencias. *p <0,05 (UV+IL-18 frente a UV). En la figura 1 se puede apreciar un resultado de este experimento, que muestra que IL-18 suprime la apoptosis inducida por UV.

Ejemplo 2

Se trataron queratinocitos humanos de tipo silvestre con 150 ng/ml de IL-18 o cantidades equivalentes de diluyente, cuatro horas antes de la radiación UV (250 J/cm^{2}). Después de la irradiación UV, se cultivaron las células en medio con y sin interleucina-18. 24 horas después se reemplazó el medio por medio de crecimiento de queratinocitos sin IL-18 y se cultivaron las células durante 21 días. Después de 21 días se tiñeron las colonias con violeta cristal, resultados que se muestran en la figura 2. De la figura 2 queda claro que interleucina-18 posibilita la supervivencia de queratinocitos después de la irradiación UV.

Ejemplo 3

Se irradiaron células KB con luz UV, 150 J/cm^{2} (290 - 320 nm) en presencia (UV+IL-18) o ausencia (UV) de IL-18 (150 ng/ml). 10 minutos, 3,5 y 6,5 horas, respectivamente, después de la irradiación UV, se extrajo ADN genómico y se llevó a cabo un análisis de transferencia Southwestern usando un anticuerpo dirigido específicamente a lesión de ADN inducida por UV (dímeros de ciblobutano-pirimidina). Se aisló el ADN genómico de 1 x 10^{6} células de acuerdo con el protocolo de extracción de ADN de Biozym Diagnostik (Hessisch Oldendorf, FRG). Se transfirieron 2 \mug de ADN genómico a una membrana de nylon cargada positivamente por transferencia a vacío y se fijó calentando la membrana durante 15 minutos a 80ºC. Para el análisis de transferencia Southwestern se usó un anticuerpo monoclonal dirigido contra dímeros de timina (Kamiya Biomedical Company, Seattle, WA). La detección se llevó a cabo con un anticuerpo anti-ratón conjugado con peroxidasa de rábano picante. Los resultados de este experimento se muestran en la figura 3. La figura 3 muestra que la lesión de ADN inducida por UV se puede reducir por IL-18.

Ejemplo 4

Se rasuraron ratones C57BL/6 en los lomos y se irradiaron dorsalmente con 650 J/cm^{2} de UVB. Tres horas antes de la radiación UV, se inyectaron por vía intracutánea 300 ng de IL-18 (b,d) y cantidades iguales (100 \mul) de solución salina acuosa (a,c). Se tomaron biopsias de piel 10 minutos (a, b) y 16 horas (c,d) después de la irradiación UV y se llevó a cabo un procedimiento de tinción inmunohistoquímica, usando un anticuerpo dirigido específicamente a la lesión de ADN inducida por UV (dímero de ciclobutano-pirimidina). Las biopsias se fijaron en paraformaldehído tamponado al 7%, se deshidrataron y se embebieron en parafina. Después de la desparafinación con xilol y etanol en concentraciones decrecientes, se sumergieron secciones en una solución acuosa que contenía ácido cítrico 0,1 M/citrato sódico 0,1 M y seguidamente se trataron en microondas durante 15 minutos para desenmascarar los epítopes antigénicos. La actividad peroxidasa endógena se bloqueó por incubación con H_{2}O_{2} al 0,1% y sodio ácido al 0,6% en PBS durante 20 minutos. Después de aclarar con PBS, se bloquearon los sitios de unión no específica con BSA al 2% durante 30 minutos a temperatura ambiente seguido por incubación con el anticuerpo primario diluido en BSA al 1% durante la noche. El anticuerpo anti-timidina-dímero se usó en una dilución de 1:2000. La tinción se consiguió por una técnica de inmunoperoxidasa indirecta usando los siguientes reactivos: PBS, anticuerpo anti-ratón conjugado con peroxidasa (sin diluir, Dako envision, Dako, Hamburg, Alemania), H_{2}O_{2} al 0,01%, 3-amino-9-etilcarbazol (Sigma Corp., St. Louis, MO). Los controles negativos comprendían la omisión del primer anticuerpo. Se evaluaron secciones teñidas por microscopía óptica convencional. Los resultados de este experimento se muestran en la figura 4. Como se puede apreciar de la figura 4, la lesión de ADN inducida por UV se puede reducir in vivo por IL-18.

Ejemplo 5

Se rasuraron ratones C57BL/6 (tipo silvestre) y deficientes en Xpa (Xpa KO) en los lomos y se irradiaron dorsalmente mediante 3000 J/cm^{2} de UVB. 3 horas antes de la irradiación UV se inyectó intracutáneamente interleucina-18 (300 ng). 16 horas después de la irradiación UV se tomaron biopsias de piel y se realizó el recuento de queratinocitos apoptóticos (células de quemaduras solares, SC) para 6 mm de piel. Para evaluar la formación de SC, se tomaron biopsias de las áreas expuestas a UV de la piel, se fijaron en formaldehído y se embebieron en parafina. Se tiñeron secciones tisulares (5 \mum) con hematoxilina y eosina y el número de SC (definido como células apoptóticas en la epidermis que presentan un citoplasma eosinofílico contraído y un núcleo condensado) se contó en toda la epidermis de secciones por muestra usando una rejilla de 1 x 1 cm insertada en un microscopio convencional. Se contaron las SC para una longitud de 6 mm de epidermis. Se evaluaron al menos cinco campos de cada muestra y se calculó el número de SC (media \pm DT). Se usó una prueba t de Student para valorar las significaciones de las diferencias. Los resultados de este experimento se muestran en la figura 5. De acuerdo con la figura 5, en ratones deficientes en Xpa, la apoptosis inducida por UV (células de quemaduras solares) no se pudo reducir por IL-18, implicando de este modo una función de IL-18 como inductor directo o indirecto de la ruta NER.

Claims (16)

1. Uso de interleucina-18 para la fabricación de un medicamento para la prevención, reducción y tratamiento de trastornos de la piel asociados con lesión inducida por radiación UV, en el que el trastorno se selecciona del grupo que comprende quemaduras solares, inflamación y envejecimiento cutáneo prematuro.

2. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la radiación UV cubre al menos un intervalo de longitudes de onda de 220 nm a 350 nm.

3. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la radiación UV cubre al menos un intervalo de longitudes de onda de 250 nm a 330 nm.

4. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la radiación UV cubre al menos un intervalo de longitudes de onda de 290 nm a 320 nm.

5. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2-4, en el que la radiación UV se procede de luz solar natural y/o artificial.

6. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores que comprende una aplicación de dicho medicamento a un paciente que lo necesita.

7. Uso de acuerdo con la reivindicación 6, en el que la aplicación es sistémica y/o tópica.

8. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 5-6, en el que la aplicación se produce por medio de aplicación de un vehículo farmacéuticamente aceptable y/o por inyección.

9. Uso de acuerdo con la reivindicación 8, en el que la aplicación se produce por inyección intracutánea de un vehículo farmacéuticamente aceptable.

10. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 8-9, en el que el vehículo se selecciona del grupo que comprende liposomas, pomadas, aceites, cremas, emulsiones y dispersiones.

11. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 7-10, en el que la aplicación tópica se produce en un intervalo de dosis de 1 ng/ml a 1000 ng/ml.

12. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 7-10, en el que la aplicación sistémica se produce en un intervalo de dosis de 0,1 \mug/kg de peso corporal a 100 \mug/kg de peso corporal.

13. Uso de acuerdo con la reivindicación 12, en el que la aplicación se produce de una vez a ocho veces al día.

14. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 6-13, en el que la aplicación se produce antes, durante y después de la exposición del paciente a radiación UV.

15. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 6-14, en el que el paciente que lo necesita es un mamífero.

16. Uso de acuerdo con la reivindicación 15, en el que el paciente que lo necesita es un ser humano.