ES2286008T3 - Tratamiento de la infertilidad. - Google Patents
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Abstract
Método para la maduración de ovocitos humanos in vitro donde el óvulo u óvulos recuperados de una mujer quien, durante un periodo consecutivo de 30 días, ha(n) sido tratado(s) con una hormona hipotalámica y/o una hormona pituitaria o un derivado activo durante un periodo que es inferior a aproximadamente 7 días, preferiblemente inferior a aproximadamente 4 días, ha(n) sido madurado(s) usando un compuesto MAS tal y como se define en la presente durante un periodo temporal de 22-36 horas y en una dosificación en la gama de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 100 µM.
Description
Tratamiento de la infertilidad.
Esta invención se refiere a un método mejorado
de fertilización in vitro (de ahora en adelante designado
IVF).
Puesto que el primer embarazo por IVF fue
obtenido en 1978, este procedimiento ha dado como resultado miles
de embarazos y ha abierto una amplia frontera nueva de
investigación y tratamiento para las parejas infértiles. Además,
actualmente existe una necesidad significante de modalidades
mejoradas para el tratamiento de la infertilidad. Se considera que
aproximadamente una de siete parejas experimenta problemas de
subfertilidad o infertilidad.
La IVF de ovocitos humanos se ha convertido en
un uso común para el tratamiento de la subfertilidad en mujeres y
hombres. El tratamiento de IVF estándar incluye una fase larga de
estimulación hormonal de la paciente, p. ej. 30 días, que se inicia
extrayendo la hormona estimuladora del folículo propia de la
paciente (de ahora en adelante designada FSH) y la hormona
luteinizante (de ahora en adelante designada LH) mediante la
hormona de liberación de gonadotropina (de ahora en adelante
designada GnRH), y esto seguido de inyecciones de gonadotropinas
exógenas, p. ej. FSH y/o LH, para asegurar el desarrollo de
múltiples folículos preovulatorios y la aspiración de múltiples
ovocitos madurados in vivo inmediatamente antes de la
ovulación. El ovocito aspirado es posteriormente fertilizado in
vitro y cultivado, normalmente durante los tres días anteriores
a la transferencia de vuelta al útero en el estadio de
4-8 células. Se han hecho continuos esfuerzos para
optimizar y simplificar este procedimiento. Sin embargo, el índice
de embarazos global no puede ser significativamente superior a
aproximadamente el 20% con las modalidades de tratamiento actuales.
En una gran encuesta europea de pacientes de IVF, se descubrió que
7.2 ovocitos de 11.5 ovocitos aspirados por paciente había sufrido
una reanudación de la meiosis inmediatamente antes de la
fertilización, sólo 4.3 ovocitos fueron fertilizados y sólo 2.2
ovocitos alcanzaron el estadio embrionario de 8 células después de
la fertilización y el cultivo in vitro (ESHRE, Edimburgo;
1997).
Debido a la calidad tan imprevisible de los
embriones del estado de la técnica embrionaria actual, más de un
embrión tiene que ser transferido sólo para tener una posibilidad
razonable de éxito. En consecuencia, es común transferir
2-3 embriones (hasta 5 embriones en algunos países),
lo que conlleva el efecto secundario muy extenso de embarazos
múltiples suponiendo una incomodidad y riesgo muy grandes tanto
para la paciente como para los niños. Además, ha sido estimado que
los gastos aumentados para asistencia sanitaria debido a los
nacimientos múltiples, (mellizos, trillizos etc.) está superando
los gastos de la IVF totales.
Por lo tanto, hay varias desventajas en el
tratamiento actual, las cuatro más notables siendo:
1. El riesgo de hiperestimulación ovárica con la
inyección de gonadotropinas que es una condición potencial fatal
que requiere hospitalización,
2. Embarazos múltiples (50-1.000
veces la frecuencia normal de mellizos y trillizos,
respectivamente),
3. La existencia de segmentos de pacientes
considerables que no toleran el método actual debido, p. ej. al
síndrome del ovario poliquístico y muchas con diabetes, y
4. un riesgo potencial a largo plazo de
cáncer.
Además, el aumento de peso, la hinchazón, las
náuseas, los vómitos, el humor lábil y otras incomodidades de la
paciente junto con la resistencia de las pacientes a inyectarse
ellas mismas están consideradas como desventajas.
Es sabido a partir de WO 96/00235 que ciertos
derivados del esterol pueden ser usados para regular la meiosis. Un
ejemplo de tal esterol es
4,4-dimetil-5\alpha-colesta-8,14,24-trieno-3\beta-ol
(de ahora en adelante designado FF-MAS).
Aquí, el término compuestos MAS designa
compuestos que median la meiosis de los ovocitos. Más
específicamente, los compuestos MAS son compuestos que en la prueba
descrita en el ejemplo 1 más abajo tienen un porcentaje de ruptura
de la vesícula germinal (de ahora en adelante designada GVB) que es
significativamente mayor que el control. Los compuestos MAS
preferidos son aquellos que tienen un porcentaje de GVB de al menos
el 50%, preferiblemente al menos el 80%.
Ejemplos de compuestos MAS están mencionados en
WO 96/00235, 96/27658, 97/00884, 98/28323, 98/54965 y 98/55498; más
específicamente en la reivindicación 1 de los mismos.
En WO 95/000265, algunas sustancias reguladoras
de la meiosis potenciales fueron evaluadas en ratones hembra. 48
horas antes los animales del test fueron matados por dislocación
cervical, se les dio una única inyección de gonadoropina
menopáusica humana conteniendo 20 UI de FSH y 20 UI de LH. Los
ovarios fueron eliminados, colocados en un medio de hipoxantina y
liberados de tejidos extraños. Luego, los ovocitos fueron perforados
y se les quitó los folículos, se liberaron de las células del
cúmulo y se cultivaron en un medio conteniendo un derivado
regulador de la meiosis.
Actualmente, la maduración in vitro en
seres humanos ha demostrado ser poco exitosa a pesar del interés
sustancial y de los esfuerzos clínicos.
Un objeto de la presente invención es el de
tratar la infertilidad humana.
Otro objeto de la presente invención es el de
mejorar la maduración de los ovocitos humanos.
Otro objeto de la presente invención es el de
mejorar la sincronía de la maduración nuclear, citoplásmica y/o
membranosa de sus ovocitos.
Otro objeto de la presente invención es el de
mejorar la fertilidad de los ovocitos.
Otro objeto de la presente invención es el de
mejorar el nivel de implantación de ovocitos por maduración y
fertilización humana in vitro.
Otro objeto de la presente invención es el de
disminuir la incidencia de preembriones humanos con anomalías
cromosómicas (aneuploidía).
Otro objeto de la presente invención es el de
mejorar el indice de seccionamiento de preembriones humanos.
Otro objeto de la presente invención es el de
mejorar la calidad de los preembriones humanos.
Se ha encontrado recientemente, de manera
sorprendente, que el tratamiento de la IVF y el grado de efectos
secundarios pueden ser mejorados sustancialmente si la mujer,
durante un periodo consecutivo de 30 días, evita el tratamiento con
una hormona hipotalámica y/o una hormona pituitaria o un agonista o
antagonista de la misma o un derivado activo de la misma (de ahora
en adelante este tratamiento se designará estimulación exógena) o si
el tratamiento exógeno de la estimulación de la mujer dura sólo un
periodo de tiempo corto, p. ej. menos de 7 días, preferiblemente
menos de 4 días. Usando este método mejorado que implica menos o
ninguna estimulación exógena, un compuesto MAS se utiliza para
madurar y sincronizar activamente los ovocitos humanos in
vitro, conduciendo a la fertilización y al desarrollo del
embrión.
La invención está definida en las
reivindicaciones.
Brevemente, la presente invención se refiere a
un método para la maduración de los ovocitos humanos in
vitro en el que el óvulo o los óvulos inmaduro(s) que
han sido recuperados de una mujer que, durante un periodo
consecutivo de 30 días, ha sido tratada con una hormona hipotalámica
y/o una hormona pituitaria o un derivado activo de la misma durante
un periodo inferior a aproximadamente 7 días, preferiblemente
inferior a aproximadamente 4 días, son madurados in vitro de
una forma sincronizada usando un compuesto MAS tal y como se define
en la presente durante un periodo de tiempo de 22-36
horas y en una dosificación en la gama de aproximadamente 0.1 a
aproximadamente 100 \muM. Las formas de realización preferidas de
esta invención son aquellas establecidas en las subreivindicaciones
más abajo.
En referencia al ciclo femenino, una manera de
realizar el tratamiento de la IVF de esta invención es la
siguiente:
Alrededor de los días 6-9 del
ciclo: Estimulación con FSH, p. ej. 75-600 UI al
día, preferiblemente 150-225 UI al día, p. ej.
durante 3 días.
Alrededor del día 9: los óvulos son recuperados
de la mujer usando la aspiración guiada por ultrasonidos de
folículos de tamaño pequeño a medio con un diámetro de
aproximadamente 6-12 mm, preferiblemente
8-10 mm.
Alrededor del día 9-11: los
óvulos son madurados con un compuesto MAS para estimular la
meiosis. En esta fase de maduración, la concentración de compuesto
MAS puede estar en la gama de aproximadamente
0.1-100 pmol por litro, p. ej.
10-20 \mumol por litro. Este medio puede contener
albúmina de suero humano (de ahora en adelante designada HSA), p.
ej. 0.8%, y puede además contener un poco de etanol, p. ej.; 0.4%,
que ha sido usado para disolver MAS. La duración de esta fase de
maduración está en la gama de alrededor de 22-36
horas.
Alrededor de los días 11-13: los
óvulos son fertilizados in vitro.
Alrededor de los días 12-16: los
óvulos son cultivados in vitro en un medio adecuado.
\newpage
A partir de la aspiración de la víspera
anterior, la mujer recibirá un estrógeno, p. ej. estrógeno valerato
(2 x 10 mg por día). Dos días después, también recibirá un
progestógeno, p. ej., Progestane vagetoria, a diario, que
volverá el revestimiento del útero más propenso a recibir los
futuros embriones. La duración de este tratamiento será diseñada
individualmente para cada paciente. El médico puede elegir entre
una variedad de estrógenos y progestógenos.
Alrededor del día 15-16: uno o
más embriones son transferidos al útero de la mujer.
Por lo tanto, al fin y al cabo, el tratamiento
completo dura aproximadamente 10-15 días.
Con referencia al ciclo femenino, otra forma de
realizar el tratamiento por IVF de esta invención es el
siguiente:
Alrededor de los días 2-8 del
ciclo: Estimulación con FSH, p. ej. 75-600 UI al
día, preferiblemente 150-225 UI al día, p. ej.
durante 3 días, finalmente se extenderá hasta 6 días.
Alrededor del día 7-9: los
óvulos son recuperados de la mujer usando la aspiración guiada por
ultrasonidos de folículos de tamaño pequeño a medio con un diámetro
de aproximadamente 6-15 mm, preferiblemente
8-12 mm.
Alrededor del día 7-11: los
óvulos son madurados con un compuesto MAS para estimular la
meiosis. En esta fase de la maduración, la concentración del
compuesto MAS puede estar en la gama de aproximadamente
0.01-100 \mumol por litro, p. ej.;
5-20 \mumol por litro. Este medio puede contener
albúmina de suero humano (de ahora en adelante designada HSA), p.
ej. 0.8%, y puede además contener un poco de etanol, p. ej.;
0.1-0.4%, que ha sido usado para disolver MAS. La
duración de esta fase de maduración está en la gama de alrededor de
22-36 horas.
Alrededor de los días 9-13: los
óvulos son fertilizados in vitro.
Alrededor de los días 10-16: los
óvulos son cultivados in vitro en un medio adecuado.
A partir de la aspiración de la víspera
anterior, la mujer recibirá un estrógeno, p. ej. estrógeno valerato
(2 x 10 mg por día). Dos días después, también recibirá un
progestógeno, p. ej., Progestane vagetoria, a diario, que
volverá el revestimiento del útero más propenso a recibir los
embriones futuros. La duración de este tratamiento será diseñada
individualmente para cada paciente. El médico puede elegir entre
una variedad de estrógenos y progestógenos.
Alrededor del día 13-16: uno o
más embriones son transferidos al útero de la mujer.
Por lo tanto, al fin y al cabo, el tratamiento
completo dura aproximadamente 10-15 días.
La mayoría de las fases del tratamiento y
procedimiento anteriores se realizan conforme a una manera conocida
y las fases restantes son realizadas en cierto modo conocido per
se. Más detalles sobre la eliminación de los ovocitos de los
folículos en el ovario, el cultivo de los ovocitos aislados, el
medio de cultivo que debe ser usado, la fertilización con esperma, y
la transferencia del embrión a la trompa de Falopio pueden ser
encontrados en la bibliografía, por ejemplo, en la especificación
de la patente estadounidense n°. 5,693,534.
Según esta invención, el compuesto MAS se añade
al medio de cultivo usado. En este medio, la cantidad del compuesto
MAS está en la gama de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 100
\muM.
El riesgo reducido de efectos secundarios hace
que el método según la presente invención sea una alternativa
atractiva a los métodos actuales en los que se usa GnRH durante
aproximadamente 22 días y se usa FSH durante aproximadamente 9 días
antes de que los óvulos sean recuperados y, luego, se usa un
progestógeno durante varias semanas. Por lo tanto, en el método
según la presente invención, el periodo en el que la paciente es
tratada con una hormona hipotalámica y/o una hormona pituitaria se
reduce de aproximadamente el 80-90%. El periodo de
tratamiento total con los métodos actuales es de aproximadamente 4
semanas. Por lo tanto, usando el método conforme a la presente
invención, el periodo total de tratamiento se reduce
aproximadamente un 50-60%.
Las hormonas hipotalámicas son hormonas
presentes en el hipotálamo humano. Las hormonas pituitarias son
hormonas presentes en la glándula pituitaria humana. Las hormonas
gonadotrópicas son hormonas segregadas por el lóbulo anterior del
pituitario en vértebras y por la placenta mamífera, que controlan
la actividad de las gónadas. Químicamente, éstas son glicoproteínas.
Ejemplos de hormonas gonadotrópicas son FSH, LH y gonadotropina
coriónica, p. ej. la gonadotropina coriónica humana (de ahora en
adelante designada hCG). FSH estimula el crecimiento de los
folículos ováricos y sus ovocitos en el ovario y la formación de
espermatozoides en los testículos. FSH puede, p. ej., ser FSH
menopáusica o FSH recombinante. En las mujeres, LH activa el tejido
productor de estrógenos de los ovarios para producir progesterona,
probablemente promueve las fases finales del desarrollo de los
folículos ováricos, inicia la maduración del ovocito final, induce
a la ovulación y en los mamíferos inicia el desarrollo del cuerpo
lúteo. Estas hormonas son conocidas. Es obvio para el trabajador
experto en la técnica que, de forma alternativa, se pueden utilizar
agonistas o antagonistas de estas hormonas. Es también obvio para
el trabajador experto en la técnica que, de forma alternativa, se
pueden usar análogos activos de estas hormonas. Algunos de estos
agonistas, antagonistas y análogos son conocidos y otros pueden ser
preparados por el proceso conocido per se. Ejemplos de
procesos de este tipo conocidos son la síntesis química y la
ingeniería genética.
En una forma de realización preferida, la
presente invención se refiere a un método en el que el periodo en
el que dicha mujer ha sido tratada con una hormona hipotalámica y/o
una hormona pituitaria o un derivado activo es 0 (cero) días.
En una forma de realización adicional preferida,
la presente invención se refiere a un método en el que la mujer ha
sido tratada de infertilidad, y/o para mejorar la maduración de sus
ovocitos, y/o para mejorar la sincronía de la maduración nuclear,
citoplásmica y/o membranosa de sus ovocitos, y/o para mejorar la
fertilidad de sus ovocitos, y/o para mejorar el nivel de
implantación de sus ovocitos por la maduración y fertilización
humana in vitro.
En una forma de realización adicional preferida,
la presente invención se refiere a un método en el que el periodo
consecutivo fue un ciclo menstrual.
En una forma de realización preferida adicional,
la presente invención se refiere a un método donde las hormonas
fueron hormonas de liberación gonadotrópica o un agonista o
antagonista de las mismas o análogos de las mismas u hormonas
gonadotrópicas o un agonista o antagonista de las mismas o análogos
de las mismas.
En una forma de realización adicional preferida,
la presente invención se refiere a un método donde la hormona
gonadotrópica fue FSH o un agonista o antagonista de la misma o
análogos de la misma.
En una forma de realización adicional preferida,
la presente invención se refiere a un método donde el periodo en el
que la paciente ha sido tratada con FSH o un agonista o antagonista
de la misma o análogos de la misma, antes de la recuperación del
óvulo, fue inferior a 7 días, preferiblemente inferior a 4 días, y
es al menos 1 día.
En una forma de realización adicional preferida,
la presente invención se refiere a un método en el que el periodo
en el que la paciente ha sido tratada con FSH o un agonista o
antagonista de la misma o análogos de la misma fue 2, 3 o 4
días.
En una forma de realización preferida adicional,
la presente invención se refiere a un método en el que no se
utiliza gonadotropina coriónica, p. ej. gonadotropina coriónica
humana o un agonista o antagonista de la misma o análogos de la
misma.
En una forma de realización preferida adicional,
la presente invención se refiere a un método en el que no se
utiliza la hormona de liberación gonadotrópica, p. ej. GnRH, o un
agonista o antagonista de la misma o análogos de la misma.
En una forma de realización preferida adicional,
la presente invención se refiere a un método en el que la
dosificación del compuesto MAS está en la gama de aproximadamente
0.01 \muM por litro hasta aproximadamente 100 \muM por litro,
preferiblemente en la gama de aproximadamente 0.1 \muM por litro
hasta aproximadamente 100 \muM por litro.
En una forma de realización preferida adicional,
la presente invención se refiere a un método en el que el compuesto
MAS es uno de los compuestos mencionados en WO 96/00235, 96/27658,
97/00884, 98/28323, 98/54965 y 98/55498; más específicamente los
compuestos mencionados en la reivindicación 1 de estos
documentos.
En una forma de realización preferida adicional,
la presente invención se refiere a un método en el que el compuesto
MAS es FF-MAS.
Adicionalmente, la presente invención se refiere
a un kit farmacéutico en forma de dosificación unitaria para el uso
por la fertilización in vitro comprendiendo
1-8 dosificaciones unitarias separadas, dicho kit
comprendiendo menos de 7, preferiblemente menos de 4, y al menos 1
unidad de dosificación separada para la administración secuencial
diaria de una hormona hipotalámica y/o una hormona pituitaria o un
derivado activo para la administración secuencial diaria y 1 unidad
de dosificación de un compuesto MAS. Este kit puede tener las
características preferidas anteriormente descritas.
La presente invención está ilustrada con mayor
detalle por los ejemplos siguientes, que, no obstante, no deben ser
interpretados como limitadores. Las características descritas en la
descripción precedente, en los siguientes ejemplos y en las
reivindicaciones pueden, tanto por separado como en cualquier
combinación de la mismas, ser sustanciales para realizar la
invención en diversas formas de la misma.
Los ovocitos fueron obtenidos de ratones hembra
inmaduros (C57BL/6J X DBA/2J F1, Bomholtgaard, Dinamarca) que
pesaban 13-16 gramos, que fueron mantenidos bajo
temperatura controlada (20-22ºC), luz (luces en
06.00-18.00) y humedad relativa
(50-70%). Los ratones recibieron una inyección
intraperitoneal de 0.2 ml de gonadotropinas
(Gonal-F, Serono) conteniendo 20 UI de FSH y 48
horas más tarde los animales fueron matados por dislocación
cervical. Los óvulos fueron seccionados y los ovocitos fueron
aislados en un medio Hx (ver más abajo) bajo un estereomicroscopio
por rotura manual de los folículos usando un par de agujas de
calibre 27. Los ovocitos esféricos que presentaban una vesícula
germinal intacta (de ahora en adelante designada GV) fueron
divididos en ovocitos incluidos en el cúmulo (de ahora en adelante
designados CEO) y en ovocitos desnudos (de ahora en adelante
designados NO) y colocados en un medio esencial
\alpha-mínimo (\alpha-MEM sin
ribonucleósidos, Gibco BRL, Cat. N°. 22561) suplementados con 3
mg/ml de albúmina de suero bovino (BSA, Sigma Cat. No.
A-7030); 5 mg/ml de albúmina de suero humano (HSA,
Statens Seruminstitut, Dinamarca ); 0.23 mM de piruvato (Sigma, Cat.
No S-8636); 2 mM de glutamina (Flow Cat. N°.
16-801); 100 IU/ml de penicilina y 100 \mug/ml de
estreptomicina (Flow, Cat n°. 16-700). Este medio
fue suplementado con 3 mM de hipoxantina (Sigma Cat. No.
H-9377) y se denominó medio Hx. Los ovocitos fueron
enjuagados tres veces en el medio Hx y los ovocitos de tamaño
uniforme fueron divididos en grupos de CEO y NO. CEO y NO fueron
cultivados en multiplacas de 4 pocillos (Nunclon, Dinamarca) en las
que cada pocillo contenía 0.4 ml de medio Hx y el compuesto para ser
testado en una concentración de 10 \muM. Un pocillo de control
(es decir; 35-45 ovocitos cultivados en un medio
idéntico sin adición del compuesto de prueba) fue siempre cultivado
simultáneamente con 3 pocillos de la prueba (35-45
ovocitos por pocillo suplementados con el compuesto de prueba). Los
ovocitos fueron cultivados en una atmósfera humedecida con el 5% de
CO_{2} en aire durante 24 horas a 37°C. Hacia el final del
periodo de cultivo, el número de ovocitos con GV, GVB y cuerpos
polares (de ahora en adelante designados PB), respectivamente,
fueron contados usando un estéreomicroscopio (Wildt, Leica MZ 12).
El porcentaje de GVB, definido como porcentaje de ovocitos
sometidos a GVB por número total de ovocitos en ese pocillo, fue
calculado como:
% GVB =
((Número de GVB + número de PB)/número total de ovocitos) x
100
Las pacientes para la fertilización in
vitro (IVF) normalmente son sometidas a un largo protocolo de
gonadotropina (4 semanas) el cual conduce a la aspiración de los
ovocitos madurados in vivo. Estos ovocitos son
posteriormente fertilizados in vitro y reemplazados como
4-8 embriones celulares en el útero de la paciente
por un catéter cervical.
Todas las pacientes de IVF pueden de forma
potencial recibir este tratamiento, en la gama de edad de 20 a 45
años que presenten o no el síndrome poliquístico ovárico (PCO) y
con o sin un ciclo regular. En el caso de un ciclo irregular o
amenorrea (sin actividad cíclica) este procedimiento podría ser
precedido de un anticonceptivo oral durante varios períodos
(1-10 meses) y retirado tras la iniciación del
siguiente procedimiento. Al principio (día 1-6,
preferiblemente día 3-6) del ciclo (día 1 = primer
día de menstruación), la paciente será clínicamente examinada y
recibirá o no un pequeño estímulo de FSH individual diseñado para
cada paciente (duración: 1-7 días, dosis: 75 UI a
750 UI, preferentemente 3-4 días con dosis de 150 a
300 UI de FSH de base recombinante o urinaria) usando o no un
antagonista de GNRH y con o sin hCG. Los folículos de tamaño
pequeño a medio (tamaño: folículos de 4 a 16 mm, preferiblemente de
8 a 12 mm) serán aspirados guiados por ultrasonidos usando una
presión de succión baja/reducida y unas agujas especialmente
diseñadas (más rígidas). Se examinará el fluido aspirado para
encontrar los complejos de ovocitos del cúmulo (COC) y una vez
identificados bajo el estereomicroscopio (usando o no filtros del
embrión), el COC será puesto en cultivo. Se puede utilizar una
amplia variedad de medios de cultivo de ovocitos o componentes de
los medios conocidos por el trabajador experto, no obstante los
ovocitos serán inducidos a reanudar la maduración meiótica por
exposición a FF-MAS. La albúmina de suero humano
(HSA) puede ser añadida o no al medio. En el caso de ser añadida,
puede estar en una concentración de 0.1 a 100 mg/ml,
preferentemente de 5 a 15 mg/ml o de 0.5 a 1.5% (volumen/volumen).
La formulación de FF-MAS puede estar en forma de una
solución madre de etanol, DMSO u otra solución de solvente orgánico
o puede estar en forma de pocillos secos revestidos de
FF-MAS/HSA preparados para el uso añadiéndose al
medio de cultivo apropiado. La duración de la maduración in
vitro puede variar entre 4 y 60 horas, preferentemente entre 30
y 40 horas. La concentración de FF-MAS puede variar
entre 0.01 \muM y 100 \muM, preferiblemente entre 0.1 \muM y
100 \muM, más preferiblemente entre 5 \muM y 30 \muM, incluso
más preferiblemente entre 10 \muM y 30 \muM. Después de la
maduración in vitro, los ovocitos pueden ser fertilizados por
IVF convencional o por inyección del esperma intracitoplasmático
(de ahora en adelante designado ICSI) o mediante los métodos de
fertilización apropiados futuros conduciendo a zigotos fertilizados
y el embrión en desarrollo puede ser transferido en el día 1 al día
6 después de la fertilización, preferentemente en el día 2 a 3, bien
como una transferencia de un único óvulo o como una transferencia
de varios óvulos. La paciente puede recibir progesterona y/o
terapia estrogénica antes y después de la transferencia en
protocolos individuales diseñados para cebar y mantener el linaje
endométrico receptivo apropiado.
En comparación con los procedimientos conocidos,
se obtuvieron mejores resultados usando el procedimiento
anterior.
Se comenzó una estimulación ovárica breve en la
paciente con FSH recombinante con una dosis diaria de promedio de
225 en el día 2 del ciclo y se continuó hasta un total de tres
veces en días alternos, es decir; 2°; 4°, y 6° día del ciclo. Al
menos 3 folículos de 10 mm o más en el día 7 conducen a la
aspiración de folículos inmaduros de un tamaño entre
8-12 mm. Los folículos fueron aspirados y los
ovocitos inmaduros incluidos en el cúmulo (estadio GV) fueron
cultivados en un sistema de cultivo de ovocitos conteniendo un medio
de cultivo in vitro (IVC) conteniendo un medio de cultivo
in vitro estándar (IVC) (IVF 20 (que está disponible por
Scandinavian IVF Science AB, Gothenburg, Suecia)) conteniendo
además albúmina de suero humano (0.8%) y FF-MAS (5
\muM). Todos los ovocitos fueron cultivados en condiciones
normales a 37°C en la incubadora. Cada ovocito fue cultivado en un
pocillo en un plato de cultivo de cuatro cámaras como sistema del
medio de cultivo. La duración de la exposición al medio de cultivo
con el tratamiento fue de 30 horas antes de que se realizara ICSI o
fertilización in vitro. Los preembriones fueron evaluados
para el estadio de seccionamiento y la fragmentación / morfología en
los días 1, 2 y 3 post ICSI/IVF. Después de 3 días de cultivo, una
selección de los mejores preembriones, normalmente dos
preembriones, fueron sustituidos en la paciente.
En comparación con los procedimientos conocidos,
se obtuvo un resultado clínico similar. No obstante, en este
ejemplo, en comparación con los procedimientos conocidos, se
utilizó una exposición hormonal reducida y, en consecuencia, se
obtuvo un perfil de efectos secundarios reducido.
Usando el procedimiento descrito en el ejemplo 3
con condición de que en vez de que se usara FF-MAS
en una concentración de 5 \muM, se usara FF-MAS en
una concentración de 20 \muM, se obtuvo un resultado clínico
similar en este procedimiento que el que se obtuvo con los
procedimientos conocidos. No obstante, en este ejemplo, comparado
con los procedimientos conocidos, se usó una exposición hormonal
reducida y, consecuentemente, se obtuvo aquí un perfil de efectos
secundarios reducido.
Claims (12)
1. Método para la maduración de ovocitos
humanos in vitro donde el óvulo u óvulos recuperados de una
mujer quien, durante un periodo consecutivo de 30 días,
ha(n) sido tratado(s) con una hormona hipotalámica
y/o una hormona pituitaria o un derivado activo durante un periodo
que es inferior a aproximadamente 7 días, preferiblemente inferior
a aproximadamente 4 días, ha(n) sido madurado(s)
usando un compuesto MAS tal y como se define en la presente durante
un periodo temporal de 22-36 horas y en una
dosificación en la gama de aproximadamente 0.1 a aproximadamente
100 \muM.
2. Método según la reivindicación 1 donde dicha
mujer ha sido tratada de infertilidad, y/o para mejorar la
maduración de sus ovocitos, y/o para mejorar la sincronía de
maduración nuclear, citoplásmica y/o membranosa de sus ovocitos,
y/o para mejorar la fertilidad de sus ovocitos, y/o para mejorar el
nivel de implantación de sus ovocitos por maduración y
fertilización humana in vitro.
3. Método según cualquiera de las
reivindicaciones precedentes donde el periodo en el que dicha mujer
ha sido tratada con una hormona hipotalámica y/o una hormona
pituitaria o un agonista o antagonista de la misma o un derivado
activo es 0 (cero) días.
4. Método según la reivindicación precedente
donde el periodo consecutivo fue un ciclo menstrual.
5. Método según cualquiera de las
reivindicaciones precedentes donde las hormonas son hormonas de
liberación gonadotrópica o un agonista o antagonista de las mismas
o análogos de las mismas u hormonas gonadotrópicas o un agonista o
antagonista de las mismas o análogos de las mismas.
6. Método según la reivindicación precedente
donde la hormona gonadotrópica fue FSH o un agonista o antagonista
de la misma o análogos de la misma.
7. Método según la reivindicación precedente
donde el periodo en el que la paciente ha sido tratada con FSH o un
agonista o antagonista de la misma o análogos de la misma, antes de
la recuperación del óvulo, fue inferior a 7 días, preferiblemente
inferior a 4 días, y es al menos de 1 día.
8. Método según la reivindicación precedente
donde el periodo en el que la paciente ha sido tratada con FSH o un
agonista o antagonista de la misma o análogos de la misma es de 2,
3 o 4 días.
9. Método según cualquiera de las
reivindicaciones precedentes en el que no se utilizó gonadotropina
coriónica, p. ej. gonadotropina coriónica humana o un agonista o
antagonista de la misma o análogos de la misma.
10. Método según la reivindicación precedente
en el que no se utilizó la hormona de liberación de gonadotropina,
p. ej. GnRH, o un agonista o antagonista de la misma o análogos de
la misma.
11. Método según la reivindicación precedente
donde el compuesto MAS es FF-MAS.
12. Kit farmacéutico en forma de dosificación
unitaria para el uso para la fertilización in vitro
comprendiendo 1-8 dosificaciones unitarias
separadas, dicho kit comprendiendo menos de 7, preferiblemente menos
de 4, y al menos 1 unidad de dosificación separada para la
administración secuencial diaria de una hormona hipotalámica y/o una
hormona pituitaria o un derivado activo de la misma para la
administración diaria secuencial y 1 unidad de dosificación de un
compuesto MAS.
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