ES2287029T3 - Composicion y procedimiento para modular la apoptosis en celulas que sobreexpresan proteinas miembro de la familia bcl-2. - Google Patents
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Abstract
El uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de un derivado de antimicina para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad asociada con la apoptosis seleccionada del grupo constituido por neoplasias, afecciones linfoproliferativas, cáncer y cáncer resistente a fármacos, en el que dicho derivado de antimicina se selecciona del grupo constituido por antimicina A0(a), antimicina A0(b), antimicina A0(c), antimicina A0(d), antimicina A1, antimicina A2, antimicina A3, antimicina A4, antimicina A5, antimicina A6, kitamicina A, kitamicina B, urauquimicina B, deisovalerilblastomicina, y dehexil-deisovalerilblastomicina; con la condición de que el grupo hidroxilo en el anillo benceno esté reemplazado con un grupo metoxi.
Description
Composición y procedimientos para modular la
apoptosis en células que sobreexpresan proteínas miembro de la
familia Bcl-2.
Las mitocondrias juegan un papel central
mediando la apoptosis en una cantidad de modelos de apoptosis
(Kroemer y col., Immunol. Today 18:44-51 (1997);
Zamzami y col., J. Exp. Med. 183:1533-44 (1996);
Zamzami y col., J. Exp. Med. 182:367-77 (1995)). Las
células inducidas para sufrir apoptosis muestran una interrupción
temprana del potencial transmembrana mitocondrial
(\Delta\Psi_{m}) que precede otros cambios de apoptosis, tales
como la fragmentación nuclear y exposición de fosfatidilserina en la
parte externa de la membrana plasmática. Las mitocondrias aisladas o
los productos liberados por las mitocondrias inducen la apoptosis
nuclear en un sistema reconstituido libre de células (Liu y col.,
Cell 86:147-157 (1996); Newmeyer y col., Cell
79:353-364 (1994)).
Los experimentos previos indicaron que la
pérdida de \Delta\Psi_{m} previa a la apoptosis incluye la
apertura de poros mitocondriales de permeabilización mitocondrial
(PT), que son canales de alta conductividad en la parte interna de
la membrana mitocondrial que corresponden a megacanales
mitocondriales identificados por medio de estudios
electrofisiológicos (Kroemer y col., supra; Zamzami y col.
(1996), supra; Bernardi y col., Biochim. et Biophys. Acta
1275:5-9 (1996); Zoratti y col., Biochim. et
Biophys. Acta 1241:139-176 (1995); Petit y col.,
FEBS Letters 396:7-13 (1996)). De hecho, la
inducción de PT es suficiente para provocar todo el espectro de
cambios asociados con la apoptosis. Por el contrario, los agentes
que previenen la apertura de poros PT, tales como el ácido
bongkrékico, atenúan la apoptosis (Kroemer y col., lmrnunol. Today
18:44-51 (1997); Zamzami y col., J. Exp. Med.
183:1533-1544 (1996); Zamzami y col., FEBS Letters
384:53-57 (1996)).
Miembros de la familia de Bcl-2
conservada con la evolución son reguladores importantes de la
supervivencia y de la muerte celular por apoptosis. Las proteínas
Bcl-2, Bcl-X_{L},
Bcl-w, A1 y Mcl-1 son antagonistas
de muerte mientras que Bax, Bak, Bad, Bcl-xs, Bid, y
son agonistas de muerte (Kroemer y col., Nature Med.
6:614-620 (1997)). Las proteínas miembros de la
familia de Bcl-2 están localizadas predominantemente
en la membrana mitocondrial externa, pero también se encuentran en
la membrana nuclear y en el retículo endoplásmico (Kroemer y
col.,
supra).
supra).
Entre las proteínas miembros de la familia de
Bcl-2, hay varios motivos de aminoácidos
conservados, BH1-BH4. Los miembros proapoptóticos
de la familia, Bax y Bad, contienen un dominio de BH3 que es
suficiente para inducir la muerte celular (Chittenden y col., EMBO
J. 14:5589-5596 (1995); Hunter y col,. J. Biol.
Chem. 271:8521-8524 (1996)). Resulta interesante
destacar que el dominio de BH3 está conservado en las proteínas
antiapoptóticas Bcl-2 y
Bcl-X_{L}. Recientemente, se ha informado que la
escisión de Bcl-x_{L} y Bcl-2 en
el dominio del bucle elimina el dominio N-terminal
de BH4 y convierte Bcl-x_{L} y
Bcl-2 en una potente molécula promuerte (Cheng y
col., Science 278:1966-1968 (1997); Clem y col.,
Proc. Nat. Acad. Sci. USA 95:554-559 (1998)).
El análisis de estructura por RMN de un complejo
entre Bcl-xL y un péptido de 16 residuos que abarca
el dominio Bak de BH3 demostró que el péptido BH3, en una
configuración anfipática alfa helicoidal, se une con elevada
afinidad al bolsillo hidrófobo creado por los dominios BH1, BH2 y
BH3 de Bcl-x_{L} (Sattler y col., Science
275:983-986 (1997)). Se cree que la leucina en
posición 1 del núcleo del dominio BH3 y el ácido aspártico en
posición 6 son residuos críticos para la inducción de
heterodimerización y apoptosis. Otro hecho en favor de esta
conclusión es que se han identificado un número de promotores de
muerte "sólo de BH3" que no tienen similitud con
Bcl-2 más allá de su homología de dominio BH3
(Kelekar y col., Trends Cell Biol. 8:324-330
(1998)). Éstos incluyen Bik, Bim, Hrk, Bad, Blk, y Bid, que no
pueden homodimerizar, pero dependen de la unión a proteínas
antiapoptóticas tales como Bcl-2 para inducir la
muerte celular.
Los mecanismos exactos por los que
Bcl-2 previene la apoptosis siguen resultando
difíciles de entender. En vista de la importancia de las
mitocondrias en la apoptosis y la localización mitocondrial de
Bcl-2, parece que un sitio importante donde
Bcl-2 interrumpe las señales apoptóticas es a nivel
de las mitocondrias. Se ha demostrado que Bcl-2
inhibe la apoptosis previniendo la transición de permeabilidad
mitocondrial y estabilizando el \Delta\Psi_{m} (Zamzami y
col., J. Exp. Med. 183:1533-1544 (1996)). En
ausencia de Bcl-2, se liberan desde las
mitocondrias factores apoptogénicos, tales como citocromo c y factor
inductor de apoptosis (FIA) en respuesta a disparadores de
apoptosis (Susin y col., J. Exp. Med. 184:1331-1841
(1996); Kluck y col., Science 275:1132-1136
(1997)). Esta liberación a su vez lleva a la activación posterior de
caspasa y da como resultado cambios nucleares y de membrana
asociados con la apoptosis.
Los miembros de la familia de
Bcl-2 muestran una expresión específica de tejidos
diferente. En el hígado del ser humano adulto, la expresión de
Bcl-2 está confinada a las células de los conductos
biliares (Charlotte y col., Am. J. Pathol.
144:460-465 (1994)) y está ausente en hepatocitos
normales y malignos. En contraste, puede detectarse expresión de
ARN de Bcl-x_{L} y proteína en hepatocitos
quiescentes en humanos adultos y aumentan 4 a 5 veces durante la
fase G1 de hepatocitos en regeneración (Tzung y col., Am. J. Pathol.
150:1985-1995 (1997)). También se observa expresión
aumentada de Bcl-x_{L} en líneas celulares de
hepatoma, tales como HepG2.
Se cree que algunas enfermedades están
relacionadas con la regulación negativa de la apoptosis en las
células afectadas. Por ejemplo, las neoplasias pueden resultar, al
menos en parte, de un estado de resistencia a la apoptosis en el
que las señales de proliferación celular exceden de manera
inadecuada las señales de muerte celular. Además, algunos virus de
ADN, tales como el virus de Epstein-Barr, el virus
de la peste porcina Africana y adenovirus, parasitan la maquinaria
celular del huésped para dirigir su propia replicación y al mismo
tiempo modulan la apoptosis para reprimir la muerte celular y
permitir que la célula diana reproduzca el virus. Más aún, ciertas
enfermedades, tales como afecciones linfoproliferativas, cáncer
(incluyendo cáncer resistente a fármacos), artritis, inflamación
enfermedades autoinmunes, y similares, pueden resultar de una
regulación negativa de señales de muerte celular. En tales
enfermedades, sería deseable promover mecanismos apoptóticos.
La mayoría de los agentes quimioterápicos
disponibles en la actualidad apuntan al ADN celular e inducen la
apoptosis en células tumorales (Fisher y col., Cell
78:539-542 (1994)). Una sensibilidad disminuida a la
inducción de la apoptosis ha surgido como un modo importante de
resistencia a fármacos. En particular, la sobre expresión de
Bcl-2 y Bcl-x_{L} confieren
resistencia a múltiples agentes quimioterápicos, que incluyen
agentes alquilantes, antimetabolitos, inhibidores de
topoisomerasas, inhibidores de microtúbulos y antibióticos
antitumorales, y pueden constituir un mecanismo de
quimiorresistencia clínica en ciertos tumores (Minn y col., Blood
86:1903-1910 (1995); Decaudin y col., Cancer Res.
57:62-67 (1997)).
Sin embargo, ni Bcl-2 ni
Bd-x_{L}, protegen a las células de cualquier
inductor de apoptosis. Por ejemplo, la sobreexpresión de
Bcl-2 brinda poca protección frente a la muerte de
timocitos inducida por Thy-1 y a la muerte inducida
por Fas (Hueber y col., J. Exp. Med. 179:785-796
(1994); Memon y col., J. Immunol. 15:4644-4652
(1995)). A nivel mitocondrial, la sobreexpresión de
Bcl-2 en la membrana mitocondrial externa inhibe la
inducción de poros PT por hidroperóxido de
t-butilo, protonóforo y atractilósido, pero no por
iones calcio, diamida o caspasa 1 (Zamzami y col., J. Exp. Med.
183:1533-1544 (1996); Susin y col., J. Exp. Med.
186:25-37 (1997)). Por consiguiente, una clase de
agentes mitocondrialmente activos puede afectar directamente la
maquinaria de apoptosis mitocondrial evitando el sitio de función
de Bcl-2 y la protección brindada por los miembros
de la familia de Bcl-2. Un agente de este tipo puede
ser potencialmente útil para solucionar la resistencia a múltiples
fármacos conferida por Bcl-2 o
Bcl-x_{L} y son muy necesarios en la técnica.
Las antimicinas constituyen otra clase de
agentes mitocondrialmente activos. Las antimicinas comprenden
generalmente un resto salicilato de N-formilamino
unido a un anillo dilactona a través de un enlace amida. Las
antimicinas difieren en los grupos R unidos al anillo dilactona
opuestos al enlace amida. (Véase, G, Rieske, Pharm. Ther.
11:415-420 (1980)). Por ejemplo, antimicina A_{1},
tiene un grupo hexilo en la posición 2 del anillo dilactona
mientras que antimicina A_{3} tiene un grupo butilo en esa
posición. Se ha publicado mucha bibliografía sobre la relación
entre estructura y actividad de las antimicinas y su inhibición de
citocromo bc_{1} (Miyoshi y col., Biochim. Biophys. Acta
1229:149-154 (1995); Tokutake y col., Biochim.
Biophys. Acta 1142:262-268 (1993); Tokutake y col.,
Biochim. Biophys. Acta 1185:271-278 (1994)). La
estructura publicada del complejo de citocromo bc1 con antimicina
A_{1} revela que la antimicina A_{1} ocupa una posición en el
sitio de unión de Qi ubiquinona en el citocromo b (Xia y col.,
Proc. Nat Acad. Sci. USA 94:11399-11404 (1997)). Las
antimicinas generalmente inhiben la respiración mitocondrial, lo
que sugiere que las diferencias en los grupos R hidrófobos en el
anillo dilactona no son críticas para la unión de citocromo b. Los
estudios de mutagénesis y de actividad-estructura
de antimicina demostraron que la actividad inhibidora de citocromo
bc_{1} es altamente dependiente del resto de ácido salicílico de
N-formilamino (Tokutake y col., (1994),
supra). La metilación del hidroxilo fenólico o la
modificación del grupo N-formilamino reducen
significativamente la capacidad de antimicina A de unirse al
citocromo bc_{1} e inhibirlo. La metilación del hidroxilo fenólico
disminuye la actividad inhibidora en 2,5 logs. La sustitución del
grupo formilamino con grupos acetilamino y propilamino en la
posición 3 reduce la actividad de citocromo bc1 en 1,2 y 2,4 logs,
respectivamente. Por consiguiente, se entiende que el resto
salicilato de N-formilamino es importante para la
unión de las antimicinas al citocromo b.
Se ha descubierto recientemente que dos
antimicinas, antimicina A_{1} y A_{3}, inhiben la actividad de
las proteínas antiapoptóticas miembros de la familia de
Bcl-2, Bcl-2 o
Bcl-x_{L}. Por consiguiente, estas moléculas son
compuestos potencialmente útiles para la profesión médica y para
pacientes que sufren alguna enfermedad proliferativa y otras
enfermedades en las que la apoptosis está regulada inadecuadamente.
Sin embargo, las antimicinas son tóxicas porque inhiben también la
respiración mitocondrial. Por consiguiente, existe una necesidad
crítica de derivados de las antimicinas que sean eficaces induciendo
la apoptosis en células en las que la apoptosis está
inadecuadamente regulada y que a la vez exhiban una inhibición
disminuida de la respiración mitocondrial.
La presente invención está definida en las
reivindicaciones y está basada en el sorprendente descubrimiento de
que las antimicinas pueden inhibir la actividad de las proteínas
antiapoptóticas miembros de la familia de Bcl-2,
tales como Bcl-2 o Bcl-c_{L}. La
invención también está basada en el descubrimiento de que la
actividad inhibidora de la respiración mitocondrial de las
antimicinas es separable de la inhibición de las proteínas miembros
de la familia de Bcl-2.
La presente invención proporciona el uso de
agentes que comprenden derivados de antimicinas que modulan la
apoptosis por medio de la unión a una proteína miembro de la familia
de Bcl-2 para fabricar un médicamente como se
define en la reivindicación 1. Estos agentes exhiben una unión
disminuida a citocromo B (o al complejo de citocromo bc_{1},
denominado de aquí en adelante como "citocromo B") comparada
con las antimicinas no derivatizadas. En una forma de realización,
el agente induce de preferencia la apoptosis en células que
sobreexpresan una proteína antiapoptótica miembro de la familia de
Bcl-2. En otra forma de realización, el agente es
sustancialmente no tóxico para las células que no sobreexpresan la
proteína antiapoptótica miembro de la familia de
Bcl-2. El agente típicamente inhibe la actividad de
una proteína antiapoptótica miembro de la familia de
Bcl-2 por medio de la unión al bolsillo hidrófobo
formado por los dominios BH1, BH2 y BH3 de la proteína.
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Los agentes comprenden derivados de una
antimicina, o una porción de los mismos, tales como la modificación
química del resto dilactona (por ejemplo, el resto
4,9-dioxo-1,5-dioxanan-7-il
éster). En una forma de realización de preferencia, el derivado de
antimicina comprende al menos dos modificaciones químicas. La
modificación disminuye la afinidad del derivado de antimicina por
el citocromo B y aumenta la afinidad del derivado de antimicina por
una proteína miembro de la familia de Bcl-2.
En otro aspecto, la invención proporciona el uso
de composiciones farmacéuticas que comprenden el agente para tratar
a un sujeto en el que una célula sobreexpresa una proteína
antiapoptótica miembro de la familia de Bcl-2.
Tales composiciones son útiles para tratar enfermedades o afecciones
asociadas con la apoptosis como se definen en la reivindicación
1.
La Figura 1 representa un esquema general para
la síntesis química de antimicina A_{3}, y para la síntesis de
derivados de antimicinas.
Previo a describir la invención con más detalle,
resultará útil para su mayor comprensión, definir ciertos términos
como se usan de aquí en adelante.
El término "apoptosis" se refiere a una red
regulada de acontecimientos bioquímicos que llevan a una forma
selectiva de suicidio celular, y se caracteriza por fenómenos
bioquímicos y morfológicos fácilmente observables, tales como la
fragmentación del ácido desoxirribonucleico (ADN), condensación de
la cromatina, que puede o no estar asociada con actividad de
endonucleasas, migración de cromosomas, marginación en el núcleo
celular, formación de cuerpos apoptóticos, hinchazón de
mitocondrias, ensanchamiento de las crestas mitocondriales,
apertura de poros de transición de permeabilidad mitocondrial y/o
disipación del gradiente de protones mitocondrial.
El término "antimicinas" se refiere a las
antimicinas A_{0} (a-d), A_{1}, A_{2},
A_{3}, A_{4}, A_{5}, A6, kitamicina A y B, urauquimicina B,
deisovalerilblastomicina, y dehexil-deisovaleriloxi
antimicina A. Las antimicinas se representan generalmente por la
siguiente fórmula I, y tienen la configuración absoluta [2R, 3R, 4S,
7S, 8R]:
Los grupos en las posiciones R_{1} y R_{2}
varían de la siguiente manera:
El término "derivado de antimicina" se
refiere a una modificación química de una antimicina, por la que se
elimi-
na(n) o sustituye(n) uno o más átomos de una antimicina, o se añaden átomos nuevos. Un "derivado de antimicina" además incluye porciones de una antimicina así como también modificaciones químicas de la misma, y variantes quirales de una antimicina.
na(n) o sustituye(n) uno o más átomos de una antimicina, o se añaden átomos nuevos. Un "derivado de antimicina" además incluye porciones de una antimicina así como también modificaciones químicas de la misma, y variantes quirales de una antimicina.
\global\parskip1.000000\baselineskip
El término "agente" se usa en este
documento para indicar un compuesto químico, o una mezcla de
compuestos químicos, sales y solvatos de los mismos, y similares,
que son capaces de modular la actividad biológica de una proteína
miembro de la familia de Bcl-2. Un agente comprende
típicamente un derivado de antimicina.
El término "induce de preferencia"
apoptosis se refiere a una estimulación de apoptosis al menos 5
veces mayor, a una concentración dada de un agente, en células que
sobreexpresan una proteína miembro de la familia de
Bcl-2 en comparación con células que no
sobreexpresan la proteína miembro de la familia de
Bcl-2 (por ejemplo, una DL_{50} o CI_{50} 5
veces mayor).
El término "sustancialmente no tóxico" se
refiere a un agente que induce apoptosis en al menos aproximadamente
50 por ciento de las células que sobreexpresan una proteína miembro
de la familia de Bcl-2, pero no induce apoptosis en
más de aproximadamente 5%, de más preferencia menos que 1%, de las
células que no sobreexpresan la proteína miembro de la familia de
Bcl-2.
El término "proteína(s) miembro de la
familia de Bcl-2" se refiere a una familia de
proteínas conservada con la evolución caracterizada por tener uno o
más dominios de homología de aminoácidos, BH1, BH2, BH3, y/o BH4.
Las proteínas miembros de la familia de Bcl-2
incluyen, Bcl-2, Bcl-x_{L},
Bcl-w, A1, Mcl-1, Bax, Bak, Bad,
Bcl-xs y Bid. Las "proteínas miembros de la
familia de Bcl-2" además incluyen esas proteínas,
o sus fragmentos biológicamente activos, que tienen una similitud de
menos 70% en la secuencia de aminoácidos a una proteína miembro de
la familia de Bcl-2.
El término "proteína antiapoptótica miembro de
la familia de Bcl-2" se refiere a
Bcl-2, Bcl-x_{L},
Bcl-w, A1,
Mcl-1, y otras proteínas caracterizadas por tener uno o más dominios de homología de aminoácidos, BH1, BH2, BH3, y/o BH4, y porque promueven la supervivencia celular atenuando o inhibiendo la apoptosis. Las "proteínas antiapoptóticas miembros de la familia de Bcl-2" además incluyen esas proteínas, o sus fragmentos biológicamente activos, que tienen una similitud de al menos 70% en la secuencia de aminoácidos a una proteína miembro de la familia de Bcl-2.
Mcl-1, y otras proteínas caracterizadas por tener uno o más dominios de homología de aminoácidos, BH1, BH2, BH3, y/o BH4, y porque promueven la supervivencia celular atenuando o inhibiendo la apoptosis. Las "proteínas antiapoptóticas miembros de la familia de Bcl-2" además incluyen esas proteínas, o sus fragmentos biológicamente activos, que tienen una similitud de al menos 70% en la secuencia de aminoácidos a una proteína miembro de la familia de Bcl-2.
El término "biológicamente activa" o
"actividad biológica" se refiere a la capacidad de una molécula
para modular la apoptosis, tal como por medio de la unión a una
proteína miembro de la familia de Bcl-2. Una
molécula biológicamente activa puede modular la apoptosis causando
un cambio en el gradiente mitocondrial de protones, causando un
cambio en el hinchamiento mitocondrial o en las características
morfológicas de las mitocondrias, afectando la liberación de una
molécula indicadora, tal como, por ejemplo, rodamina 123 o calceína,
desde mitocondrias o vesículas que comprenden una proteína
antiapoptótica miembro de la familia de Bcl-2
formadora de poros o causando cualquier otro cambio morfológico
asociado con la apoptosis.
Los derivados de antimicina pueden prepararse
modificando químicamente una antimicina según procedimientos
químicos convencionales. Por ejemplo, puede modificarse el grupo
hidroxilo en el resto salicilato de antimicina A_{3} usando un
haluro de alquilo primario o diazometano para formar un derivado de
antimicina 2-alcoxiéter (por ejemplo,
2-metoxiéter antimicina A_{3}). Una antimicina
puede también modificarse por acetilación.
Como alternativa, pueden prepararse derivados de
antimicina por medio de síntesis química ("total") de
novo. Por ejemplo, Shimano y col., (Tetrahedron
54:12745-12774 (1998), idearon un procedimiento
sintético total para las dilactonas antifúngicas relacionadas
UK-2A y UK-3A. Esta síntesis total
puede usarse para preparar derivados de antimicina. Según este
procedimiento, puede modelarse antimicina A_{3} comprendiendo tres
unidades estructurales: ácido
N-formil-3-aminosalicílico,
L-treonina, y el resto dilactona. (Véase las
fórmulas III-V, respectivamente).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La antimicina A3 puede sintetizarse uniendo
estas unidades estructurales. Los derivados de una o más de estas
unidades estructurales pueden unirse químicamente para formar
derivados de antimicina.
Pueden prepararse también bibliotecas de
derivados de antimicina mediante diseño racional. (Véase
generalmente, Cho y col., Pac. Symp. Biocompat.
305-316 (1998); Sun y col., J. Comput. Aided Mol.
Des. 12:597-604 (1998)). Por ejemplo, pueden
prepararse bibliotecas de derivados de antimicina mediante síntesis
de bibliotecas combinatorias químicas (véase generalmente DeWitt y
col., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 90:6909-6913 (1993);
Publicación de Patente Internacional WO 94/08051; Baum, Chem. &
Eng. News, 72:20-25 (1994); Burbaum y col., Proc.
Nat. Acad. Sci. USA 92:6027-6031 (1995); Baidwin y
col., J. Am. Chem. Soc. 117:5588-5589 (1995);
Nestler y col., J. Org. Chem. 59:4723-4724 (1994);
Borehardt y col., J. Am. Chem. Soc. 116:373-374
(1994); Ohlmeyer y col., Proc. Nat. Acad. Sci. USA
90:10922-10926 (1993); y Longman, Windhover's In
Vivo The Business & Medicine Report 12:23-31
(1994)).
Los siguientes artículos describen
procedimientos para seleccionar moléculas de partida y/o criterios
usados en su selección: Martin y col., J. Med. Chem.
38:1431-1436 (1995); Domine y col., J. Med. Chem.,
37:973-980 (1994); Abraham y col., J. Pharm. Sci.
83:1085-1100 (1994).
Una "biblioteca combinatoria" es una
colección de compuestos en la que los compuestos que comprenden la
colección están compuestos de uno más tipos de subunidades. Las
subunidades pueden seleccionarse de restos naturales o no
naturales, que incluyen dienos, compuestos de benceno, cicloalcanos,
lactonas, dilactonas, aminoácidos, alcanos, y similares. Los
compuestos de la biblioteca combinatoria difieren en una o más
formas con respecto al número, orden, tipo o tipos de
modificaciones hechas a una o más de las subunidades que comprenden
los compuestos. Como alternativa, una biblioteca combinatoria puede
referirse a una colección de "moléculas centrales" que varían
en el número, tipo o posición de los grupos R que contienen y/o la
identidad de moléculas que componen la molécula central. La
colección de compuestos se genera de una manera sistemática.
Cualquier procedimiento para generar sistemáticamente una colección
de compuestos que difieren uno del otro en una o más de las formas
descritas anteriormente es una biblioteca combinatoria.
Puede sintetizarse una biblioteca combinatoria
en un soporte sólido a partir de uno o más materiales de partida de
resinas unidas a fase sólida. La biblioteca puede contener cinco (5)
o más, de preferencia diez (10) o más, moléculas orgánicas
diferentes una de otra (es decir, cinco (5) moléculas diferentes y
no (5) copias de la misma molécula). Cada una de las diferentes
moléculas (diferente estructura básica y/o diferentes sustituyentes)
estarán presentes en una cantidad tal que su presencia pueda
determinarse mediante algún medio (por ejemplo, pueda aislarse,
analizarse, detectarse con una pareja de unión o sonda adecuada).
Las cantidades reales necesarias de cada molécula diferente para
que su presencia pueda determinarse pueden variar debido a los
procedimientos reales usados y pueden cambiar según avanzan las
tecnologías de aislamiento, detección y análisis. Cuando las
moléculas están presentes en cantidades sustancialmente equimolares,
puede detectarse una cantidad de 100 picomoles o más. Las
bibliotecas de preferencia comprenden cantidades sustancialmente
equimolares de cada producto de reacción deseado y no incluyen
cantidades relativamente grandes o pequeñas de cualquier molécula
dada de manera que la presencia de tales moléculas dominen o estén
completamente suprimidas en cualquier ensayo.
Las bibliotecas combinatorias se preparan
generalmente derivatizando un compuesto de partida sobre un soporte
de fase sólida (tal como una perla). En general, el soporte sólido
tiene una resina unida comercialmente disponible, tal como una
Resina de Rink o de Merrifield. Tras unir el compuesto de partida,
se unen los sustituyentes al compuesto de partida. Por ejemplo,
puede unirse un compuesto de benceno a un soporte a través de una
resina de Rink. Se hace reaccionar el anillo benceno
simultáneamente con una amida, tal como un
N-formilamino, N-acetilamino,
N-propionilamino, y similar. Como alternativa, el
compuesto de partida puede comprender el resto dilactona, o un
precursor del mismo. Los sustituyentes se añaden al compuesto de
partida, y pueden variarse proporcionando una mezcla de reactivos
que comprenden los sustituyentes. Los ejemplos de sustituyentes
adecuados incluyen, pero no se limitan a, los siguientes:
(1) sustituyentes hidrocarburo, esto es,
sustituyentes alifáticos (por ejemplo, alquilo o alquenilo),
alicíclicos (por ejemplo, cicloalquilo, cicloalquenilo), núcleos
aromáticos sustituidos con aromáticos, alifáticos y alicíclicos, y
similares, así como también sustituyentes cíclicos;
(2) sustituyentes hidrocarburo sustituido, esto
es, aquellos sustituyentes que contienen radicales no hidrocarburo
que no alteran el sustituyente hidrocarburo predominante; aquellos
expertos en la técnica conocerán tales radicales (por ejemplo, halo
(especialmente cloro y fluoro), alcoxi, mercapto, alquilmercapto,
nitro, nitroso, sulfoxi, y similares);
(3) heterosustituyentes, esto es, sustituyentes
que, teniendo carácter predominantemente hidrocarbilo, contendrán
otros átomos diferentes de carbono. Los heteroátomos adecuados serán
evidentes para los expertos en la técnica e incluyen, por ejemplo,
azufre, oxígeno, nitrógeno, y tales sustituyentes como piridilo,
furanilo, tiofenilo, imidazolilo, y similares. Los heteroátomos, y
típicamente no más de uno, estarán presentes para cada átomo de
carbono en los sustituyentes basados en hidrocarburo. Como
alternativa, puede no haber tales radicales o heteroátomos en el
sustituyente basado en hidrocarburo y será, por consiguiente,
puramente hidrocarburo.
En una forma de realización, se prepara una
biblioteca combinatoria de derivados de antimicina. Por ejemplo, el
compuesto de partida puede ser un precursor del resto dilactona. Se
sintetiza una biblioteca combinatoria de la dilactona usando le
síntesis de Shimano (infra) variando los sustituyentes añadidos en
cada etapa de la síntesis. Opcionalmente, tras la lactonización, se
añaden a la biblioteca los restos treonina y ácido salicílico, o
derivados de los mismos.
Los procedimientos para generar bibliotecas
combinatorias son conocidos en la técnica, e incluyen los
siguientes: Patentes de EEUU Nº 5.958.792; 5.807.683; 6.004.617;
6.077.954.
Los agentes de la presente invención son útiles
para tratar células en las que la señal de muerte celular está
regulada negativamente y la célula afectada tiene una propensión
inadecuadamente disminuida para la muerte celular, a las que se
denomina de aquí en adelante como estando en un "estado apoptótico
disminuido". La invención además proporciona medicamentos para
administrar a un sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un
agente para tratar una enfermedad asociada con la apoptosis en la
que resulta deseable inducir la apoptosis en ciertos tipos de
células, tales como células infectadas con virus o que expresan
autoanticuerpos. Típicamente, el agente se purifica sustancialmente
previamente a la administración. El sujeto puede ser un animal, que
incluye pero no se limita a, vacas, cerdos, caballos, pollos,
gatos, perros, y similares, y es típicamente un mamífero, y en una
forma de realización particular, un ser humano. En otra forma de
realización específica, el sujeto es un mamífero diferente de un
ser humano.
Se conocen diversos sistemas de administración y
pueden usarse para administrar un agente, tales como, por ejemplo,
encapsulamiento en liposomas, micropartículas, microcápsulas,
células recombinantes capaces de expresar el agente, endocitosis
mediada por receptor (véase, por ejemplo, Wu y Wu, J. Biol. Chem.
262:4429-4432 (1987)), y similares. Los agentes se
administran como composiciones terapéuticas o farmacéuticas mediante
cualquier vía adecuada conocida por los expertos en la técnica que
incluyen, por ejemplo, vía intravenosa, subcutánea, intramuscular,
intradérmica, transdérmica, intratecal, intracerebral,
intraperitoneal, epidural y otras. La administración puede ser
rápida como por inyección o durante un período de tiempo como por
medio de infusión lenta o inyección o infusión en el líquido
cefalorraquídeo (LCR). Cuando la intención es administrar un agente
a células en el sistema nervioso central, la administración puede
ser con uno o más componentes capaces de promover la penetración
del agente a través de la barrera hematoencefálica. Además, puede
resultar deseable introducir un agente en el tejido blanco por
cualquier vía adecuada, que incluye inyección intravenosa e
intratecal. Puede usarse también administración intrapulmonar, tal
como, por ejemplo, mediante el uso de un inhalador o nebulizador, y
la formulación del agente con un agente generador de aerosol.
Las composiciones farmacéuticas pueden
administrarse también por vía oral en cualquier forma de
dosificación oral aceptable incluyendo, pero no limitado a,
cápsulas, comprimidos, píldoras, suspensiones o soluciones acuosas.
En el caso de comprimidos para uso oral, los vehículos comúnmente
usados incluyen lactosa y almidón de maíz. Las ayudas de
lubricación, tales como estearato de magnesio, también se añaden
típicamente. Para la administración oral en forma de cápsula, los
diluyentes útiles incluyen lactosa y almidón de maíz seco. Cuando
se necesitan suspensiones acuosas, el agente puede combinarse con
ayudantes emulsivos y de suspensión. Si se desea, pueden usarse
también algunos edulcorantes, aromatizantes y colorantes.
En una forma de realización específica, puede
resultar deseable administrar el agente localmente al área que
necesita tratamiento; esta administración puede lograrse, por
ejemplo, pero no limitado a, infusión local durante una cirugía,
aplicación tópica (por ejemplo, en combinación con un apósito para
heridas tras la cirugía), por inyección, por medio de un catéter,
por medio de un supositorio, o por medio de un implante, siendo el
implante un material poroso, no poroso, o gelatinoso, que incluye
membranas tales como membranas o fibras de silástic. En una forma
de realización, la administración puede ser por inyección directa en
el sitio (o antiguo sitio) de un tumor maligno o tejido neoplásico
o preneoplásico.
En otra forma de realización, el agente puede
administrarse en una vesícula, en particular un liposoma (véase,
por ejemplo, Langer, Science 249:1527-1533 (1990);
Treat y col., en Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and
Cancer, Lopez-Berestein y Fidler (eds.), Liss, Nueva
York, pág. 353-365 (1989);
Lopez-Berestein, supra, pág.
317-327).
317-327).
En otra forma de realización más, el agente
puede administrarse en un sistema de liberación controlada. En una
forma de realización, puede usarse una bomba (véase, por ejemplo,
Langer, supra; Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201
(1987); Buchwald y col., Surgery 88:507 (1980); Saudek y col., N.
Engl. J. Med. 321:574 (1989)). En otra forma de realización, pueden
usarse materiales poliméricos (véase, por ejemplo, Medical
Applications of Controlled Release, Langer y Wise (eds.), CRC Pres.,
Boca Raton, Florida (1974); Controlled Drug Bioavailability. Drug
Product Design and Performance, Smolen y Ball (eds.), Wiley, Nueva
York (1984); Ranger y Peppas, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem.
23:61 (1983); véase también Levy y col., Science 228:190 (1985);
During y col., Ann. Neurol. 25:351 (1989); Howard., J. Neurosurg,
71:105 (1989)). En otra forma de realización más, puede colocarse un
sistema de liberación controlada en proximidad de la diana
terapéutica, lo que requiere sólo una fracción de la dosis sistémica
(véase, por ejemplo, Goodson, Medical Applications of Controlled
Release, supra, Vol. 2, pág. 115-138 (1984)).
Otros sistemas de liberación controlada se discuten en, por ejemplo,
la revisión de Langer (Science 249:1527-1533
(1990)).
(1990)).
La presente invención también proporciona el uso
de composiciones farmacéuticas. Tales composiciones comprenden una
cantidad terapéuticamente eficaz de un agente, y un vehículo
farmacéuticamente aceptable. El término "farmacéuticamente
aceptable" significa aprobado por una agencia reguladora del
gobierno Federal o de un estado o que figura en la Farmacopea de
EEUU y otra farmacopea generalmente reconocida para uso en animales,
y más típicamente en seres humanos. El término "vehículo" se
refiere a un diluyente, adyuvante, excipiente, estabilizante, o
transportador con el que se formula el agente para su
administración. Los vehículos farmacéuticos pueden ser líquidos
estériles, tales como agua y aceites, que incluyen aquellos de
origen animal, vegetal o de petróleo o sintéticos, tales como
aceite de cacahuete, aceite de soya, aceite mineral, aceite de
sésamo, y similares. El agua es un vehículo típico cuando la
composición farmacéutica se administra por vía intravenosa. Pueden
usarse también como vehículos líquidos soluciones salinas y
soluciones acuosas de dextrosa y de glicerol, particularmente para
soluciones inyectables. Los excipientes farmacéuticos adecuados
incluyen almidón, glucosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta,
arroz, harina, tiza, gel de sílice, estearato de sodio,
monoestearato de glicerol, talco, cloruro de sodio, leche desnatada
deshidratada, glicerol, propilenglicol, agua, etanol, y similares.
La composición puede, si se desea, contener también cantidades
menores de agentes humectantes o emulsivos, o agentes tamponadores
de pH. Las composiciones farmacéuticas pueden tomar la forma de
soluciones, suspensiones, emulsiones, comprimidos, píldoras,
cápsulas, polvos, formulaciones de liberación sostenida, y
similares. La composición puede formularse como un supositorio, con
ligantes y vehículos convencionales tales como triglicéridos.
Las formulaciones orales pueden incluir
vehículos convencionales tales como grados farmacéuticos de manitol,
lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina de sodio,
celulosa, carbonato de magnesio, y similares. Los ejemplos de
vehículos farmacéuticamente aceptables están descritos en, por
ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, de E.W. Martin. Tales
composiciones contendrán una cantidad terapéuticamente eficaz del
agente, típicamente en forma purificada, junto con una cantidad
adecuada de vehículo para proporcionar una formulación apropiada
para administrar al sujeto. La formulación deberá adaptarse al modo
de administración.
En una forma de realización, el agente se
formula de acuerdo con los procedimientos de rutina como una
composición farmacéutica adaptada para la administración
intravenosa a seres humanos. Típicamente, las composiciones para
administración intravenosa son soluciones en tampón acuoso estéril.
Cuando es necesario, la composición puede incluir un agente
solubilizante y un anestésico local para aliviar el dolor en el
sitio de la inyección. Generalmente, los ingredientes se proveen
por separado o mezclados juntos en formas de dosificación de
monodosis. Por ejemplo, como un polvo seco liofilizado o un
concentrado libre de agua en un recipiente herméticamente sellado
tal como una ampolla o bolsa que indica la cantidad de agente
activo. Cuando la composición debe administrarse por infusión,
puede administrarse con una botella de infusión que contiene agua o
solución salina estéril de grado farmacéutico. Cuando la
composición se administra por inyección, puede proporcionarse
también una ampolla de agua estéril para inyección o solución
salina, para poder mezclar los ingredientes previo a la
administración.
Los agentes pueden formularse como formas
neutras o como sales. Las sales farmacéuticamente aceptables
incluyen aquellas formadas con los grupos amino libres tales como
aquellas que derivan de ácidos clorhídrico, fosfórico, acético,
oxálico, tartárico, y similares, y aquellas formadas con grupos
carboxilo libres tales como aquellas que derivan de hidróxido de
sodio, potasio, amonio, calcio, y férrico, isopropilamina,
trietilamina, 2-etilaminoetanol, histidina,
procaína, y similares.
La cantidad del agente que se combina con el
vehículo para producir una forma de monodosis variará, dependiendo
de la naturaleza del agente y la composición de la forma de
dosificación. Deberá entenderse, sin embargo, que una dosis
específica y un régimen de tratamiento para cualquier paciente
particular, o estado de enfermedad dependerá de una diversidad de
factores, que incluyen la edad, peso corporal, salud general, sexo,
dieta, tiempo de administración, tasa de excreción, combinación de
fármacos, el juicio del médico tratante, y la gravedad de la
enfermedad particular que se trata. La cantidad de agente activo
dependerá también de la actividad específica del agente y de si el
agente se administra conjuntamente con algún otro ingrediente
terapéutico o profiláctico. Son útiles los niveles de dosificación
de entre aproximadamente 0,001 y aproximadamente 100 mg/kg de peso
corporal por día, típicamente entre aproximadamente 0,1 y
aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal por día del agente
activo.
El medicamento puede estar en la forma de un
paquete o kit farmacéutico que comprende uno o más recipientes
llenos con uno o más ingredientes de las composiciones farmacéuticas
de la invención. Opcionalmente puede haber junto con tal(es)
recipiente(s) una nota en la forma prescrita por una agencia
gubernamental que regula la fabricación, uso o venta de productos
farmacéuticos o biológicos, reflejando dicha nota la aprobación por
parte de la agencia de la fabricación, uso o venta para
administración a seres humanos.
Los siguientes ejemplos se proporcionan sólo
como ilustrativos de diversos aspectos de la invención y no deben
interpretarse como limitantes de la invención.
Ejemplo
1
Los estudios de respiración celular, niveles de
ATP y especies reactivas de oxígeno en líneas celulares tratadas
con antimicina A sugieren fuertemente que las diferencias observadas
en la viabilidad celular no pueden explicarse por los efectos
conocidos de antimicina A en la transferencia de electrones en
mitocondrias o la fosforilación oxidativa. Para abordar
definitivamente qué actividades de antimicina A están involucradas
en la muerte celular selectiva de células que sobreexpresan
Bcl-x_{L}, se determinó la relación entre
estructura y actividad para antimicina A_{3} como un inhibidor de
la actividad de poro de Bcl-x_{L}.
En este ejemplo, se prepararon dos derivados de
antimicina A_{3}, metiléter de antimicina A_{3}
(2-metoxiéter antimicina A_{3}) y fenaciléter de
antimicina A_{3} (ejemplo comparativo). La estructura de
antimicina A_{3} se mostró anteriormente (fórmula (I), donde
R_{1} es un grupo butilo). (Véase también van Tamelen y col., J.
Am. Chem. Soc. 83:1639 (1961)). El metiléter de antimicina A tiene
la siguiente fórmula (VI) y una configuración absoluta de [2R, 3R,
4S, 7S, 8R]:
El metiléter de antimicina A_{3} se prepara
directamente a partir de antimicina A_{3} de la siguiente manera:
Brevemente, se disolvió antimicina A_{3} en éter dietílico y se
hizo pasar una corriente de diazometano a través de la mezcla de
reacción hasta persistencia del color amarillo. Se trató la mezcla
de reacción con ácido acético hasta que se tornó incolora. Se
redujo la mezcla hasta sequedad bajo presión reducida y se sometió
a cromatografía en gel de sílice dando 14,3 mg de metiléter de
antimicina A_{3}. El producto resultante se caracterizó por RMN,
espectroscopía infrarroja y espectroscopía de masas.
El derivado fenaciléter de antimicina A_{3} se
preparó de la siguiente manera: Se trató una solución de antimicina
A_{3} (5,7 mg, 10,95 mmol) en acetonitrilo seco con bromuro de
fenacilo (4,4 mg, 21,9 mmol) y carbonato de potasio pulverizado
(6,0 mg, 43,8 mmol). Se dejó la mezcla en agitación a temperatura
ambiente durante 18 horas. Se aplicó la mezcla de reacción
directamente a una columna de cromatografía en gel. Se eluyó el
producto con acetato de etilo al 20%/hexano dando 5,4 mg (78%) del
producto como un aceite incoloro. El producto resultante se
caracterizó por RMN, espectroscopía infrarroja y espectroscopía de
masas.
Ejemplo
2
Se estudió el derivado metiléter de antimicina
A_{3} preparado en el Ejemplo 1 para determinar su efecto en la
vía apoptótica en células que sobreexpresan
Bcl-x_{L}. El derivado metiléter mostró
previamente ser inactivo como inhibidor de citocromo bc_{1}.
(Véase, por ejemplo, Miyoshi y col., Biochim Biophys Acta
1229:149-154 (1995); Takotake y col., Biochim
Biophys Acta 1185:271-278 (1994)). El metiléter
tiene también un efecto insignificante en el consumo celular de
O_{2} comparado con el compuesto original antimicina A_{3}. Se
trataron líneas celulares TABX2S (que sobreexpresan
Bcl-x_{L}), TAMH.neo (control) y TABX1A
(antisentido) con 2-metoxi antimicina A_{3}.
Estas líneas celulares exhibieron un patrón de citotoxicidad
preferencial para células que sobreexpresan
Bcl-x_{L}, pero no para las células de control.
Este patrón fue similar al del tratamiento de estas líneas
celulares con antimicina A_{3}, lo que indica que el efecto de
este derivado de antimicina sobre la respiración celular fue
separable del efecto sobre la apoptosis.
Para confirmar estos datos, se llevaron a cabo
también ensayos con fracciones mitocondriales de cada línea celular
usando la sonda mitocondrial JC-1. Las mitocondrias
de células que sobreexpresan Bcl-x_{L} (células
TABX2S) se despolarizaron fuertemente tras añadir el derivado
2-metoxi a una concentración de 2 \mug/ml. Como
se observa para el compuesto relacionado, antimicina A_{3}, las
mitocondrias con niveles normales de expresión de
Bcl-x_{L} no fueron afectadas por el análogo
2-metoxi.
Finalmente, el derivado 2-metoxi
antimicina A_{3} demostró que se une a Bcl-2
recombinante. El derivado 2-metoxi antimicina
A_{3} no es fluorescente debido al sustituyente electrófilo
adicional en el anillo benceno. Por consiguiente, la unión de
2-metoxi antimicina A_{3} a la proteína
Bcl-2 puede medirse en un ensayo de unión
competitiva controlando la fluorescencia de antimicina A_{3}. Para
estos experimentos, se añadieron antimicina A_{3} (2 \muM) y ya
sea 2-metoxiéter antimicina A_{3} o fenaciléter
antimicina A_{3} (2 \muM) simultáneamente al polipéptido de
Bcl-2 (3 \muM) y se dejó equilibrar durante 7,5
minutos a 22,5ºC previo a medir la intensidad de fluorescencia de
antimicina A_{3}. La fluorescencia de un complejo antimicina
A_{3}-Bcl-2 recombinante unido
previamente disminuyó exponencialmente con el añadido de
2-metoxi antimicina A_{3}, lo que indica
competición por el sitio de unión de antimicina A_{3} en
Bcl-2. Como otro control para especificidad de
unión, se probó también el efecto del derivado fenaciléter de
antimicina A_{3}. Estos resultados sugieren firmemente que la
sensibilidad celular y mitocondrial a la antimicina A_{3} en
líneas celulares que expresan Bcl-x_{L} son el
resultado de la unión directa de antimicina A_{3} con la proteína
Bcl-x_{L}. Además, el derivado
2-metoxiéter de antimicina A_{3} inhibió la
formación de poros de Bcl-x_{L} en un ensayo de
permeabilidad de liposomas tan bien como la antimicina A_{3}.
Los resultados demuestran que las antimicinas
tienen dos actividades de unión a proteínas estructuralmente
distinguibles, una para unión a citocromo bc_{1}, y la otra para
unión a proteínas miembros de la familia de Bcl-2,
y que estas actividades son separables.
Ejemplo
3
La síntesis total de antimicina A_{3} se lleva
a cabo esencialmente como describe Shimano para las dilactonas
relacionadas UK-2A y UK-3A (Shimano,
Tetrahedron 5412745-12774 1998). Brevemente, la
antimicina A_{3} está compuesta por tres unidades estructurales:
un ácido
N-formil-3-aminosalicílico,
L-treonina y ácido
2-butil-3,4-dihidroxipentanoico.
De los tres componentes estructurales, el ácido
N-formil-3-aminosalicílico
y la L-treonina están disponibles comercialmente.
El ácido dihidroxipentanoico se prepara en una secuencia de
reacciones de cuatro etapas comenzando con cloruro de caproílo. En
referencia a la Figura 1, se hace reaccionar cloruro de caproílo con
la oxazolidinona derivada de valina de Evans,
(R)-4-isopropiloxazolidin-2-ona,
y n-butil-Li (Etapa a). El aducto
resultante (2) se hace reaccionar por condensación de aldol con un
aldehído quiral derivado de ácido (S)-(-)-láctico
(3) en presencia de dibutil-BOTf y trietilamina
(Etapa b). Se protege el grupo 4-hidroxilo del
aducto resultante (4) como un éter de
t-butildimetilsililo (usando cloruro de TBS y DIEA),
seguido por la hidrólisis mediada por peróxido (usando peróxido de
hidrógeno e hidróxido de litio) del auxiliar quiral dando el ácido
dihidroxipentanoico protegido de manera diferencial (5) (Etapas c y
d). La protección diferencial de los dos alcoholes secundarios
permite la incorporación de diversos ácidos carboxílicos en la
posición 3 de la lactona. El ácido carboxílico se acopla al
benciléster de
N-FMOC-L-treonina
con cloruro de BOP y DMAP (Etapa e). La eliminación de dos grupos
protectores bencilo con H_{2} y Pd/O dará el seco-ácido de
dilactona (6) (Etapa f). La lactonización se produce usando una
reacción formadora de éster mediada por BOP-Cl con
DMAP (Etapa g). Se usa dietilamina para eliminar el grupo protector
de FMOC dando la dilactona (7) (Etapa h). Se acopla el ácido
N-formil-3-aminosalicílico
a la dilactona usando química convencional de carbodiimida (Etapa
i). En particular, se combina la dilactona con ácido
N-formil-3-aminosalicílico
usando EDCl y HOBT, seguido por el tratamiento con TBAF. La
elaboración final de la estructura de antimicina A_{3}
derivatizada se realiza por eliminación mediada por fluoruro del
grupo protector de sililo y acoplamiento cloruro ácido deseado (por
ejemplo cloruro de isovalerilo y DIEA) (Etapas j y k).
Ejemplo
4
Para preparar derivados de antimicina A_{3}
modificados en el resto isovalerato (es decir, R_{2}) de la
dilactona, la síntesis total de antimicina A_{3} (como se
describió en el Ejemplo 3) se lleva a cabo con las siguientes
modificaciones: Tras la dilactonización, se sustituye el cloruro de
isovalerilo por otro cloruro de acilo, tal como cloruro de acetilo,
cloruro de butirilo, y similar.
Ejemplo
5
Para preparar derivados de antimicina A_{3} en
los que el grupo butilo (es decir, R_{1}) en la dilactona está
sustituido con otro grupo R, la síntesis total de antimicina A_{3}
(como se describió en el Ejemplo 3) se lleva a cabo con las
siguientes modificaciones: Se sustituye el cloruro de caproílo de la
etapa 1 con otro cloruro de acilo, tal como cloruro de propionilo y
otro cloruro de acilo lineal o ramificado.
\global\parskip0.000000\baselineskip
<110> Fred Hutchinson Cancer Research
Center
\hskip1cmHockenbery, David M.
\hskip1cmSimon, Julian A.
\hskip1cmTzung, Shie-Pon
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> COMPOSICIONES Y PROCEDIMIENTOS PARA
MODULAR LA APOPTOSIS EN CÉLULAS QUE SOBREEXPRESAN PROTEÍNAS
MIEMBROS DE LA FAMILIA DE Bcl-2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> 14538A-004610PC
\vskip0.400000\baselineskip
<140>
\vskip0.400000\baselineskip
<141>
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<150> 60/149.968
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
20-08-1999
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn Ver. 2.1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 16
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de Secuencia Artificial:
Péptido
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gly Gln Val Gly Arg Gln Leu Ala Ile Ile Gly
Asp Asp Ile Asn Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
Claims (4)
1. El uso de una cantidad terapéuticamente
eficaz de un derivado de antimicina para la fabricación de un
medicamento para el tratamiento de una enfermedad asociada con la
apoptosis seleccionada del grupo constituido por neoplasias,
afecciones linfoproliferativas, cáncer y cáncer resistente a
fármacos, en el que dicho derivado de antimicina se selecciona del
grupo constituido por antimicina A_{0(a)}, antimicina
A_{0(b)}, antimicina A_{0(c)}, antimicina
A_{0(d)}, antimicina A_{1}, antimicina A_{2},
antimicina A_{3}, antimicina A_{4}, antimicina A_{5},
antimicina A_{6}, kitamicina A, kitamicina B, urauquimicina B,
deisovalerilblastomicina, y
dehexil-deisovalerilblastomicina; con la condición
de que el grupo hidroxilo en el anillo benceno esté reemplazado con
un grupo metoxi.
2. El uso de la reivindicación 1, en el que el
derivado de antimicina es 2-metoxiéter antimicina A
o A_{3}.
3. El uso de la reivindicación 1 ó 2, en el que
el medicamento además comprende un vehículo farmacéutico.
4. El uso de la reivindicación 1, 2 ó 3, en el
que el medicamento está formulado para administración intravenosa,
subcutánea, intramuscular, intradérmica, transdérmica, intratecal,
intracerebral, intraperitoneal, epidural u oral.
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