ES2290195T3

ES2290195T3 - Uso de hidratos de carbono para eliminar infecciones intestinales en animales.

Info

Publication number: ES2290195T3
Application number: ES01994796T
Authority: ES
Inventors: Michael Klingeberg; Gunhild Kozianowski; Markwart Kunz; Mohammad Munir; Manfred Vogel
Original assignee: Suedzucker AG
Current assignee: Suedzucker AG
Priority date: 2001-01-31
Filing date: 2001-12-17
Publication date: 2008-02-16
Anticipated expiration: 2021-12-17
Also published as: WO2002060452A3; ATE366578T1; EP1357917B9; PT1357917E; EP1357917B1; DK1357917T3; DE10104055A1; EP1698341A3; EP1698342A1; EP1357917A2; AU2002224940A1; EP1698341A2; DE50112727D1; WO2002060452A2

Abstract

Uso de al menos un hidrato de carbono no degradable por los enzimas del tracto digestivo, escogido del grupo formado por 1-O-a-D-glucopiranosil-D-sorbita, 6-O-a-D-glucopiranosil-D-sorbita, ácido lactobiónico y ácido maltobiónico y una mezcla de ellos, como principio activo para preparar un fármaco destinado al tratamiento de las infecciones intestinales causadas por un microorganismo del género Salmonella, E. coli o Shigella en un animal.

Description

Uso de hidratos de carbono para eliminar infecciones intestinales en animales.

La presente invención se refiere al uso de hidratos de carbono, en concreto de 1-O-\alpha-D-glucopiranosil-D-sorbita, 6-O-\alpha-D-glucopiranosil-D-sorbita, ácido lactobiónico, ácido maltobiónico y una mezcla de ellos, para tratar infecciones intestinales bacterianas en animales monogástricos, así como productos para forrajes o piensos dietéticos que llevan uno de estos hidratos de carbono como aditivo.

Las inflamaciones intestinales infecciosas en los animales pueden estar causadas por bacterias, virus, hongos o parásitos. El síntoma principal de estas inflamaciones intestinales es la diarrea. Pueden ir acompañadas de alteraciones de la mucosa, aunque no forzosamente. El cuadro clínico de las inflamaciones intestinales infecciosas es muy variable. Los mismos agentes patógenos causantes de la infección pueden provocar fenómenos severos como diarreas, fiebre y trastornos de nutrición, o también procesos asintomáticos. Asimismo es importante localizar la infección. En caso de afecciones del tracto intestinal superior cabe esperar trastornos nutricionales, meteorismos o evacuaciones masivas de heces sólidas, mientras que la infección del tracto inferior provoca muchas evacuaciones líquidas. Además pueden aparecer signos inespecíficos como dolores viscerales, náuseas, vómitos y fiebre.

Los agentes más comunes de las infecciones intestinales son las bacterias. La condición para su patogenicidad es la capacidad de fijarse a la superficie intestinal. Solo son peligrosas, por ejemplo, las colibacterias capaces de tal adherencia. Algunas bacterias, como los vibriones coléricos, las colibacterias endotóxicas, los estafilicocos, Shigellas y Klebsiellas generan toxinas bacterianas que activan la adenilciclasa intracelular y por lo tanto una mayor secreción de líquido y electrolitos. Las toxinas bacterianas de este tipo también pueden causar una destrucción directa de enterocitos. Algunas bacterias, como las colibacterias, Shigellas, salmonellas, Campylobacter jejuni y Yersinia enterocolitica pueden penetrar a través de la superficie epitelial, destruyendo la mucosa, lo cual se hace evidente por la presencia de sangre y eventualmente de pus en las heces.

Las infecciones intestinales debidas a bacterias son causadas principalmente por Salmonellas. Basándose en propiedades antígenas se han podido distinguir unos 1400 subtipos de Salmonella. Proceden de la orina y heces de animales enfermos o de los llamados portadores crónicos asintomáticos, pues el contagio tiene lugar frecuentemente por ingestión de alimentos contaminados o de agua potable contaminada. En el hombre, por ejemplo, la infección por Salmonellas se desarrolla de cinco formas diferentes, que pueden ser muy variables en cada caso. En el 75% de los casos se trata de gastroenteritis aguda. En el 10% de los casos se trata de bacteremia, acompañada o no de fenómenos intestinales. Aproximadamente un 8% de los infectados por Salmonellas contraen tifus o fiebre tifoidea. Cerca del 5% de las infecciones son de tipo local, por ejemplo de los huesos y articulaciones. Menos del 1% de los casos corresponde a un estado de portador asintomático, en el cual se encuentran los agentes patógenos durante más de un año, mayormente en la vesícula biliar.

Las infecciones intestinales con gérmenes patógenos como las Salmonellas o las Shigellas constituyen un problema grave, sobre todo para el engorde de los cerdos y la avicultura. El peligro para la salud animal y también para la salud humana no proviene en concreto de los animales verdaderamente enfermos, sino de los llamados portadores crónicos de Salmonellas. Cada año hay muchos casos de personas infectadas por Salmonellas, a causa de productos cárnicos, u otros productos de origen animal, infectados.

El tratamiento de las enfermedades intestinales infecciosas puede ir dirigido contra los efectos de la infección - como por ejemplo la deshidratación y el desequilibrio electrolítico - o contra los verdaderos agentes patógenos. Un tratamiento de las infecciones intestinales bacterianas dirigido contra los agentes patógenos puede incluir, por ejemplo, la administración de antibióticos. Para infecciones intestinales bacterianas se recomiendan antibióticos como la ampilicina, el cotrimoxazol y los inhibidores de la girasa, pero solo en casos graves, con fiebre, etc., ya que este tipo de tratamiento con antibióticos puede provocar una resistencia adversa. La excepción la constituyen sobre todo las shigellosis graves, que pueden tratarse con penicilina. Aparte de la problemática de los restos de antibióticos en los productos cárnicos, el tratamiento antibiótico tampoco es deseable para los cerdos, sobre todo porque los gérmenes a combatir desarrollan resistencias a los antibióticos. Se ha reportado el caso de un niño que enfermó por Salmonellas resistentes a los antibióticos, tras el contacto con animales estabulados (Food Chemical News,
(Mayo, 2000), 21-22).

Es sabido que en una fase temprana de la gastroenteritis la microflora comensal normal se reviste de bacterias patógenas productoras de ureasa (Salminen y otros, Chemotherapy, 41 (Suppl.) (1995), 5-15). Por tanto, una estrategia para el tratamiento de las enfermedades intestinales infecciosas tiene por objeto normalizar la microflora gastrointestinal, sobre todo durante la fase de diarrea aguda, administrando preparados bacterianos que lleven gérmenes no patógenos. Por ejemplo, la patente WO 99/26642 describe el empleo de la cepa DSM 6601 de Escherichia coli para tratar diarreas de tipo microbiano en el sector veterinario.

También es conocido el uso de lactulosa para tratar las infecciones intestinales bacterianas del hombre (Ballongue y otros, Scand. J. Gastroenterol. Suppl., 222 (1997), 41-44). La lactulosa no se digiere y produce un medio ácido en el intestino grueso, favoreciendo el crecimiento de especies de Lactobacillus y acelerando así, probablemente, la eliminación de Salmonellas. Por tanto también se ha propuesto el uso de lactulosa para el tratamiento de los cerdos infectados por Salmonellas (Ley y otros, Top Agrar, 10 (1999), 20-21). Sin embargo, en el tratamiento con lactulosa se producen grandes flatulencias y diarrea como efectos secundarios, de modo que los pacientes tienden a rehusar la toma de lactulosa. Además la lactulosa es demasiado cara como ingrediente para piensos.

También es conocido el uso de D-manosa en el agua potable para los pollos (Oyofo y otros, Poultry Science, 68 (1989), 1357-1360). Los pollos así tratados demostraron mucha menor propensión a infectarse con Salmonellas (21-43%), en comparación con los pollos que no habían recibido D-manosa en absoluto, de los cuales entre un 78% y un 93% presentaron una infección por Salmonellas. Como no hay D-manosa disponible para usarla de modo general en piensos y además es muy cara, se propuso el uso de paredes celulares de levaduras lisadas y secadas, que contienen manosa, como aditivo para los piensos de pollos y cerdos (Bae y otros, Han'guk Chuksan Hakhoechi, 41(1) (1999), 23-30). Mediante un tratamiento de 7 días con paredes celulares de levaduras, la densidad de población de Salmonella typhimurium en el ciego de los pollos tan solo se redujo de 10^{5} CFU/ml a 10^{4} CFU/ml. Por tanto este resultado no es satisfactorio. Además, estas sustancias que contienen manosa tienen la desventaja de estar impurificadas con otros componentes de la pared celular.

Las patentes WO 99/55342 y US 6,139,864 describen el uso de 6-O-\alpha-D-glucopiranosil-D-sorbita y 1-O-\alpha-D-gluco-piranosil-D-manita como principios activos antimicrobianos.

Por lo tanto el problema técnico del que parte la presente invención es el de proporcionar unos productos para el tratamiento de los animales con infecciones intestinales causadas por un microorganismo del género Salmonella, E. Coli o Shigella, que permitan la curación de dichas infecciones en mayor medida que los productos empleados hasta la fecha, sin que aparezcan los efectos secundarios descritos en el estado técnico, y que sean mucho más económicos de elaborar que los productos convencionalmente utilizados.

La presente invención resuelve ese problema técnico usando al menos un hidrato de carbono, no degradable por los enzimas del tracto digestivo, escogido del grupo formado por 1-O-\alpha-D-glucopiranosil-D-sorbita, 6-O-\alpha-D-glucopiranosil-D-sorbita, ácido lactobiónico y ácido maltobiónico y una mezcla de ellos, como principio activo para tratar las infecciones intestinales de un animal causadas por un microorganismo del género Salmonella, E. Coli o Shigella. Según la presente invención está previsto que estos hidratos de carbono se usen de manera especial y preferente para el tratamiento de infecciones intestinales causadas por un microorganismo del género Salmonella o Shigella. Los compuestos empleados según la presente invención no son disociados por los enzimas del intestino delgado y por lo tanto llegan inalterados al ciego y al intestino grueso. Por consiguiente pueden desplegar su acción inhibidora o supresora de la infección en el tracto gastrointestinal mediante uno o varios de los siguientes mecanismos. Algunos de los compuestos empleados según la presente invención pueden ser fermentados por bacterias anaeróbicas de la flora intestinal, dando ácidos grasos de cadena corta (SCFA), preferentemente ácido butírico. Otros compuestos utilizados según la presente invención pueden ser fermentados por bacterias de la flora intestinal, pero también hasta ácido láctico y/o ácido acético, rebajando así el valor pH en el intestino grueso. Con la disminución del valor pH se puede favorecer el crecimiento de especies de bacterias no patógenas, mientras que al mismo tiempo se inhibe el de los gérmenes patógenos. Pero algunos de los hidratos de carbono no degradables por los enzimas del tracto digestivo también pueden actuar impidiendo la fijación de gérmenes patógenos a las células del epitelio intestinal o bloqueando las fimbrias de los gérmenes patógenos y por tanto su adhesión a las células epiteliales. Estos mecanismos de actuación permiten una terapia tópica y selectiva de las infecciones intestinales causadas por micro-organismos del género Salmonella, E. coli o Shigella en las personas y en los animales.

Según la presente invención está prevista la posibilidad de usar no solamente un único principio activo, sino una combinación de principios activos, para el tratamiento de las infecciones intestinales provocadas por microorganismos del género Salmonella, E. Coli o Shigella. Es especialmente conveniente que dichos principios activos se puedan administrar a un animal enfermo como preparado farmacéutico o aditivo al pienso o al agua potable, según la forma en que se desarrolle la infección intestinal. En los casos graves de desarrollo agudo de la infección intestinal la presente invención prevé especialmente la administración de los principios activos, solos o en combinación, a concentración relativamente alta y en forma de composición farmacéutica. Para los casos menos graves o para la profilaxis, los principios activos empleados según la presente invención se incluyen como aditivo en el pienso o en el agua potable, de modo que puedan llegar al intestino mediante la alimentación. Otra ventaja concreta es que los principios activos conforme a la presente invención pueden prepararse en grandes cantidades de manera fácil y económica mediante procedimientos conocidos.

Teniendo en cuenta que los principios activos de la presente invención no se degradan en el estómago ni en el intestino delgado, sino solo en el intestino grueso, su biodisponibilidad en el punto de acción farmacológica es extraordinariamente elevada. Contrariamente al caso de los principios activos corrientes - como los antibióticos - los factores de tipo farmacéutico y fisiológico que pueden afectar en gran medida a la biodisponibilidad del principio activo de un fármaco convencional no tienen ninguna influencia. Por tanto la eliminación presistémica (efecto de primer paso), es decir la degradación metabólica de principios activos antes de llegar a su punto de acción, que de otro modo puede limitar considerablemente la biodisponibilidad de los principios activos, no juega aquí ningún papel digno de mención.

El organismo a tratar es preferentemente un animal monogástrico. En el marco de la presente invención el término "animales monogástricos" se refiere a animales vertebrados, sobre todo aves y mamíferos, cuyo estómago consta principalmente de una molleja o estómago muscular. En las aves básicamente monogástricas la molleja puede tener una parte llamada estómago glandular. En los mamíferos monogástricos, concretamente los de tipo carnívoro y omnívoro, el estómago comprende tres partes principales: el cardias cerca de la desembocadura del esófago; el fondo, es decir la parte principal del estómago, con glándulas tubulares, y el píloro cerca de la salida del estómago, con glándulas mucosas ramificadas. El término "animales monogástricos" excluye por ello los rumiantes, cuyo estómago incluye cuatro partes sucesivas anatómicamente diferentes: la panza, donde tiene lugar la disgregación química del alimento - sobre todo la digestión de la celulosa - por medio de microorganismos simbióticos; la redecilla o bonete, el libro y el cuajar. Al contrario que los animales monogástricos, en los rumiantes primero el alimento es regurgitado desde el bonete hacia la cavidad bucal. Una vez remasticado, el alimento pasa a través del canal reticular hacia el libro, desde el cual los líquidos y el quimo espesado son transportados hacia el cuajar.

En caso de los animales monogástricos se trata concretamente de animales útiles, no rumiantes, que son criados por el hombre en establecimientos agropecuarios por motivos de rendimiento laboral, de consumo alimentario o para obtener materias primas. Preferentemente se trata de animales útiles afectados de enfermedades intestinales infecciosas originadas por Salmonellas, E. coli o Shigellas o portadores crónicos de estos gérmenes infecciosos, que luego pueden causar infecciones en otros organismos - por ejemplo en el hombre - a través de la cadena alimenticia. Estos animales útiles son preferentemente cerdos, gansos, pollos, patos y pavos.

En el marco de la presente invención los términos "infecciones intestinales" o "inflamaciones intestinales infecciosas" se refieren a las enfermedades del intestino originadas a consecuencia de una colonización con un microorganismo del género Salmonella, E. coli o Shigella. El término comprende especialmente las infecciones intestinales de tipo bacteriano, como las diversas formas evolutivas de la salmonelosis, sobre todo gastroenteritis, bacteremia, infecciones locales por Salmonellas y/o shigelosis en estado de portador asintomático, colitis hemorrágica causada por E. coli 0157. El término también abarca todas las enfermedades extraintestinales concomitantes con las inflamaciones infecciosas del intestino, por ejemplo las infecciones de órganos que se producen frecuentemente por bacteremia con Samonellas, como la neumonía, la artritis, la colecistitis y similares.

En el marco de la presente invención se entiende como "principio activo" cualquier sustancia, concretamente de naturaleza química, capaz de influenciar o reconocer células biológicas o partes de ellas, sobre todo organelas o componentes celulares. En el marco de la presente invención, el término "principios activos" se refiere especialmente a productos terapéuticos, es decir sustancias que pueden emplearse para la profilaxis o el tratamiento de enfermedades, con el fin de evitar, aliviar y/o eliminar estados patógenos, sobre todo las inflamaciones intestinales infecciosas.

"Hidratos de carbono no degradables por los enzimas del tracto digestivo" se refiere concretamente a polihidroxi-aldehídos y polihidroxicetonas, así como a compuestos macromoleculares hidrolizables a polihidroxialdehídos y polihidro-xicetonas, que durante la digestión, es decir tras la disgregación mecánica de los alimentos, su licuefacción mediante la saliva y su acidificación con el jugo gástrico, no se pueden desdoblar en componentes absorbibles, y por tanto asimilables por la sangre o la linfa, mediante la acción de los enzimas digestivos en la zona del intestino delgado del tracto digestivo. En cualquier caso, los hidratos de carbono no digeridos o indigeribles se pueden degradar a componentes de bajo peso molecular por la flora bacteriana del intestino grueso de un animal monogástrico. Los hidratos de carbono no degradables en el intestino delgado de un animal monogástrico son 1-O-\alpha-D-glucopiranosil-D-sorbita, 6-O-\alpha-D-glucopiranosil-D-sorbita, ácido lactobiónico y ácido maltobiónico.

Como "oligosacárido" se entiende un compuesto formado por la condensación de 2 hasta 10 monosacáridos. Preferentemente se trata de un disacárido, de un trisacárido o de un tetrasacárido, exceptuando la lactulosa. Como "derivados" se entienden equivalentes funcionales o modificaciones de un oligosacárido utilizable, los cuales se obtienen sustituyendo átomos o grupos o restos moleculares en la misma estructura y/o difieren del oligosacárido en, al menos, una posición de su estructura química. Las diferencias entre un derivado y un oligosacárido pueden resultar, por ejemplo, de reacciones de adición, de eliminación o de sustitución. Estos derivados se pueden obtener por separación a partir de productos naturales o bien se pueden preparar por modificación de compuestos ya existentes o, si es preciso, por síntesis total.

Como "hidrolizado de un hidrato de carbono polimérico" se entienden los polisacáridos, poliurónidos, mucopolisacáridos, glicoproteínas, glicolípidos, mureínas, y sustancias capsulares y mucosas de naturaleza polisacárida, que se han disociado por acción del agua. Una hidrólisis de tal tipo puede ocurrir mediante reacciones químicas adecuadas o con el uso de enzimas, por ejemplo hidrolasas como la pectinliasa.

Como alternativa, aparte de la presente invención, se emplea un disacárido, un trisacárido, un tetrasacárido, un producto de oxidación, de reducción o de condensación de los mismos o bien un anhídrido de estos compuestos, en calidad de principio activo para el tratamiento de infecciones intestinales inflamatorias. Como "producto de oxidación" se entiende un producto que se obtiene cuando la sustancia oxidable cede electrones a un oxidante. Los productos de oxidación de los azúcares de tipo oligosacárido son por ejemplo ácidos ónicos, ácidos urónicos y ácidos sacaro-dicarboxílicos. Como "productos de reducción" se entienden aquellos productos resultantes de la separación química de oxígeno en un compuesto, mediante uno o varios agentes desoxidantes. Una de las características del proceso de reducción o hidrogenación es que la sustancia reducible toma electrones del agente reductor. Los productos de reducción de los oligosacáridos son, por ejemplo, azúcar-alcoholes alifáticos y ciclitoles o ciclitos. Como "producto de condensación" se entiende el producto resultante de una reacción química catalizada, por la cual se unen al menos dos moléculas, formando una molécula mayor y desprendiendo simultáneamente una molécula sencilla como agua. Como dianhídridos se entienden los compuestos que se forman por calentamiento, desprendiendo dos moléculas de agua.

En una forma de ejecución especialmente preferida se utiliza 1-O-\alpha-D-glucopiranosil-D-sorbita (en lo sucesivo 1,1-GPS) y/o 6-O-\alpha-D-glucopiranosil-D-sorbita (en lo sucesivo 1,6-GPS) como principio activo para tratar infecciones intestinales de tipo bacteriano.

Los métodos para preparar los azúcar-alcoholes 1,1-GPS y 1,6-GPS o las mezclas que los contienen son conocidos. Por ejemplo en la patente DE 195 23 008 A1 se revela un método para preparar mezclas de 1,6-GPS y 1-O-\alpha-D-glucopiranosil-D-manita (1,1-GPM), que incluye la hidrogenación de isomaltulosa bajo 50 atmósferas de presión, usando un catalizador. En la patente EP 0 625 578 B1 se describen métodos para obtener mezclas de azúcar-alcoholes que contienen 1,1-GPM, 1,1-GPS y 1,6-GPS, por los cuales primero se transforma sacarosa en una mezcla que contiene isomaltulosa y trehalulosa, y el producto así obtenido se hidrogena catalíticamente para dar una mezcla que lleva 1,1-GPM, 1,1-GPS y 1,6-GPS.

En una forma de ejecución especialmente preferida de la presente invención se emplea una mezcla de disacárido-alcoholes que lleva 1-O-\alpha-D-glucopiranosil-D-manita (1,1-GPM) y 6-O-\alpha-D-glucopiranosil-D-sorbita (1,6-GPS), preferentemente en una relación cuantitativa de 1:99 hasta 99:1, sobre todo de aprox. 50:50 (% en peso). La mezcla casi equimolecular de 1,1-GPM y 1,6-GPS puede adquirirse en el comercio y se denomina Palatinit® o Isomalt. Naturalmente también pueden usarse mezclas enriquecidas con 1,1-GPM o 1,6-GPS como las descritas en la patente DE 195 32 396 C2.

En otra forma de ejecución preferida se emplea una mezcla disacárido-alcohólica compuesta por 1,1-GPM, 1,6-GPS y 1,1-GPS, y dado el caso, en combinación con manita, sorbita y oligómeros. En la patente EP 0 625 578 B1 está descrita una mezcla de este tipo. El contenido revelado en esos documentos en cuanto a la preparación y a la composición de las mezclas de azúcar está totalmente incorporado al contenido revelado en la presente exposición y por tanto se solicita su protección en relación con la presente exposición.

En otra forma de ejecución especialmente preferida se usa ácido lactobiónico y/o ácido maltobiónico como principio activo para tratar infecciones intestinales bacterianas. Aparte de la presente invención también se puede usar "palatinosa condensada", es decir el producto formado por la condensación de moléculas de isomaltulosa, y/o un dianhídrido de difructosa.

Los ácidos lactobiónico y maltobiónico pueden prepararse por oxidación de lactosa y maltosa, respectivamente. Los dianhídridos de difructosa pueden prepararse enzimática o químicamente por ejemplo, calentando inulina y/o fructooligosacáridos. Así, por ejemplo, los fructooligosacáridos pueden transformarse en dianhídrido de difructosa III por medio de la inulinfructotransferasa de Arthrobacter ureafaciens.

En otra forma de ejecución, aparte de la presente invención, se usa un fructooligosacárido, un fructooligosacárido hidrogenado, un quitooligosacárido, un quitosanoligosacárido y/o un galactomananoligosacárido como principio activo para tratar infecciones intestinales bacterianas.

Como "fructooligosacáridos" se entienden aquellos sacáridos formados por 2 hasta 10 unidades de fructosa conectadas entre sí mediante enlaces \beta-glicosídicos. Los fructo-oligosacáridos se pueden preparar, por ejemplo, a partir de inulina mediante el uso de endo-inulinasa. Como "fructooligosacáridos hidrogenados" se entienden los fructooligosacáridos que han sido modificados por adición de átomos de hidrógeno, mediante el uso de catalizadores y/o aplicación de presiones elevadas. Como "quitooligosacáridos" se entienden los sacáridos que contienen aminoazúcares y que constan de 2 hasta 10 restos de N-acetil-D-glucosamina unidos entre sí por enlaces \beta-1,4-glicosídicos. Como "quitosanoligosacáridos" se entienden los quitooligosacáridos desacetilados. Como "galactomananoligosacáridos" se entienden aquellos sacáridos cuyas cadenas constan de dos hasta diez unidades de manosa en forma de \beta-piranosa enlazadas 1->4, a las cuales van unidas moléculas de galactosa en forma de ramificaciones cortas 1->6.

En otra forma de ejecución, aparte de la presente invención, como principio activo para tratar infecciones intestinales bacterianas se utiliza un hidrolizado de pectina que contiene oligogalacturónidos.

En un caso de infección intestinal por Salmonellas, E. coli o Shigellas se prevé la administración a un animal monogástrico de una dosis de principio activo suficiente para sanar o prevenir el estado de la infección intestinal, frenar la progresión de la infección intestinal y/o aliviar sus síntomas. Por tanto, la dosificación del principio activo tiene lugar de manera que se logre un resultado médico-terapéutico óptimo sin efectos tóxicos secundarios importantes y el tratamiento tenga un éxito duradero. La cantidad del principio activo administrado a un animal depende entre otras cosas de la forma de administración, de la edad, del sexo y del peso corporal del organismo a tratar y de la gravedad de la enfermedad. Por lo tanto la dosis exacta con que debe tratarse un animal monogástrico debe fijarla el veterinario en cada caso.

Por consiguiente, en una forma de ejecución preferida de la presente invención se prevé el uso de un hidrato de carbono conforme a la presente invención - no degradable por los enzimas del tracto digestivo - como principio activo para tratar infecciones intestinales causadas por microorganismos del género Salmonella, E. coli o Shigella, sobre todo salmonelosis o shigelosis, el cual, una vez aislado y purificado, se administra a un animal monogástrico en forma de preparado farmacéutico. Por tanto la administración de los principios activos según la presente invención en composiciones farmacéuticas está especialmente indicada en los casos graves de infección bacteriana aguda. Como "preparado farmacéutico" en relación con la presente invención se entiende una mezcla que lleva principios activos naturales o sintéticos, empleada con fines diagnósticos, terapéuticos y/o profilácticos, en la cual los principios activos están contenidos en una forma que pueda aplicarse bien a un animal. El preparado farmacéutico puede ser una mezcla sólida o líquida. Por ejemplo, una composición farmacéutica que incluye el principio activo puede llevar uno o más excipientes farmacéuticamente compatibles. Además el preparado farmacéutico puede contener los aditivos habitualmente empleados en el sector, como por ejemplo estabilizantes, espesantes, desmoldantes, disgregantes, lubricantes, colorantes, aromas, saborizantes, emulsionantes u otras sustancias corrientes.

La presente invención contempla preferentemente la administración oral del preparado farmacéutico que contiene el principio activo. Se prefiere especialmente la administración oral del principio activo, porque así se alcanzan las zonas afectadas del tracto digestivo que deben tratarse y por tanto los principios activos se dirigen directamente a los órganos interesados. Según la presente invención se prefiere especialmente que el principio activo se administre en forma de suspensión, tableta, píldora, cápsula, granulado, polvo u otra forma de administración apropiada. Aunque los principios activos utilizados según la presente invención son bastante insensibles al ácido gástrico, se prefieren los medicamentos que presentan un revestimiento resistente al jugo gástrico, a fin de que los principios activos contenidos en el preparado farmacéutico puedan pasar libremente por el estómago y preferiblemente no se disuelvan hasta llegar a las partes superiores del intestino. La composición de los revestimientos resistentes al jugo gástrico y los métodos para su elaboración son conocidos del sector. En una forma de ejecución especialmente preferida de la presente invención se usan medicamentos que poseen un mecanismo de liberación retardada del principio activo, a fin de permitir una terapia tópica a largo plazo de las infecciones intestinales bacterianas. La forma y composición de esta clase de medicamentos con liberación retardada del principio activo también son conocidas del sector.

Una administración de los principios activos de la presente invención en preparados farmacéuticos está especialmente indicada para los casos graves de infección bacteriana aguda. Tal es el caso por ejemplo de las diarreas severas que van acompañadas de una fuerte secreción de líquido y electrolitos, cuyas amenazadoras consecuencias pueden ser deshidratación, shock y acidosis. En concreto para estos casos graves de evolución aguda se puede llevar a cabo una terapia combinada, administrando junto con el/los principio(s) activo(s) empleado(s) según la presente invención al menos otro fármaco para la misma indicación. El/los principio(s) activo(s) de la presente invención y al menos un fármaco adicional se pueden administrar por separado o en forma de combinaciones fijas. El empleo combinado del/de los principio(s) activo (s) según la presente invención y al menos un fármaco adicional puede tener como fin el refuerzo de los efectos terapéuticos, pero también puede actuar sobre diversos sistemas biológicos del organismo, aumentando el efecto global. Por ejemplo, el/los principio(s) activo(s) utilizado(s) en la presente invención se pueden combinar con soluciones de electrolito-azúcar especialmente ajustadas, como por ejemplo Elotrans®, que también pueden administrarse por vía oral. En casos excepcionales, es decir en las formas agudas con peligro vital, los principios activos empleados según la presente invención también pueden combinarse con antibióticos tales como, por ejemplo, ampicilina, cloramfenicol, tetraciclinas y similares.

En otra forma de ejecución preferida de la presente invención está previsto el uso de los hidratos de carbono no degradables por los enzimas del tracto digestivo, para tratar infecciones intestinales, de manera que estén contenidos como aditivo en forrajes, piensos dietéticos o en el agua potable y puedan llegar al tracto digestivo con la alimentación ingerida. Según la presente invención, el aporte de los hidratos de carbono usados conforme a la presente invención a través de la alimentación está previsto, sobre todo, para las formas leves de infección intestinal bacteriana. Además, la alimentación regular con piensos, por ejemplo, que contengan dichos hidratos de carbono permite la realización a largo plazo de una profilaxis de las infecciones intestinales bacterianas.

En relación con la presente invención "forraje" o "pienso" se refiere a cualquier sustancia o mezcla, en estado inalterado, preparado, elaborado o transformado, destinada a la alimentación de los animales. Los piensos pueden estar en forma sólida o líquida. Por lo tanto los términos "forraje" o "pienso" también incluyen el agua potable para animales. Los piensos pueden ser simples o compuestos. Los principios activos de la presente invención se pueden mezclar con el pienso tanto en forma disuelta como en estado sólido. Para su administración a los cerdos los principios activos de la presente invención se pueden agregar en forma de polvo, por ejemplo, a las mezclas de sustancias minerales empleadas en la nutrición animal. Para su administración a los pollos, los principios activos empleados según la presente invención pueden añadirse en forma de polvo, por ejemplo, al pienso de las gallinas ponedoras.

En el marco de la presente invención como "pienso dietético" se entiende un pienso destinado a una determinada finalidad nutricional, que aporta ciertos nutrientes u otras sustancias de efecto dietético-fisiológico según una relación cuantitativa definida o una determinada calidad. Por lo tanto los piensos dietéticos se distinguen normalmente por su composición o sus propiedades de los piensos de tipo comparable. Los piensos dietéticos sirven normalmente para una finalidad alimenticia especial, sobre todo porque contribuyen a satisfacer determinados requisitos nutricionales, como los debidos por ejemplo a enfermedades, anomalías funcionales o reacciones alérgicas contra los piensos simples o sus ingredientes. Los piensos dietéticos también pueden existir en forma sólida o líquida.

Los principios activos utilizados según la presente invención también se pueden agregar al agua potable para los animales. Los principios activos de la presente invención se añaden al agua potable, por ejemplo en forma de polvos o granulados y con preferencia inmediatamente antes del uso, a fin de que se disuelvan con rapidez y sin dejar restos.

La presente invención también se refiere a forrajes y piensos dietéticos que llevan ácido lactobiónico y/o ácido maltobiónico como aditivo. Dichos piensos según la presente invención, suministrados regularmente a los animales monogástricos, proporcionan una protección duradera contra las infecciones intestinales causadas por bacterias de los géneros Salmonella, Shigella o E. coli. No son de la presente invención los forrajes y los piensos dietéticos que llevan 1-O-\alpha-D-glucopiranosil-D-sorbita, 6-O-\alpha-D-glucopiranosil-D-sorbita, "palatinosa condensada", un dianhídrido de difructosa, un fructooligosacárido, fructooligosacárido hidrogenado, quitooligosacárido, quitosanoligosacárido, galactomananoligosacárido y/o un hidrolizado de pectina que contiene oligogalacturónidos, como aditivo.

La presente invención también se refiere a los usos anteriormente mencionados de los citados hidratos de carbono, para elaborar preparados farmacéuticos destinados a la terapia, es decir, a la profilaxis y curación de dichos cuadros patológicos.

Otras formas ventajosas de la presente invención se desprenden de las reivindicaciones secundarias.

La presente invención se ilustra con más detalle mediante los siguientes ejemplos.

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Ejemplo 1 Preparación de compuestos carbohidratos 1,1-GPS

Se disuelve trehalulosa, preparada según la patente DE 32 41 788, en agua desmineralizada de modo que resulte una solución al 40% (peso/peso) y se hidrogena a 120ºC y a 10 Mpa de presión de hidrógeno en presencia de un catalizador níquel Raney. De la mezcla obtenida, formada por 1,1-GPS y 1-O-\alpha-D-glucopiranosil-D-manita (1,1-GPM), se separa una parte de la 1,1-GPM por cristalización. La 1,1-GPM que queda en la mezcla restante no perturba el uso de la 1,1-GPS según la presente invención. Por tanto la mezcla restante de 1,1-GPS y 1,1-GPM se puede emplear en los piensos sin purificarla más.

1,6-GPS

Se disuelve isomaltulosa, preparada según la patente EP 28 900, en agua desmineralizada de modo que resulte una solución al 40% (peso/peso) y se hidrogena a 120ºC y a 10 Mpa de presión de hidrógeno en presencia de un catalizador níquel Raney. De la mezcla obtenida, formada por 1,6-GPS y 1-O-\alpha-D-glucopiranosil-D-manita (1,1-GPM), se separa una parte de la 1,1-GPM por cristalización. La 1,1-GPM que queda en la mezcla restante no perturba el uso de la 1,6-GPS según la presente invención. Por tanto la mezcla restante de 1,6-GPS y 1,1-GPM se puede emplear en los piensos sin purificarla más.

Ácido lactobiónico

En un equipo de oxidación de funcionamiento continuo se disuelven 80 g de lactosa-monohidrato en agua desmineralizada de modo que resulte una solución al 4%. La solución se satura luego con oxígeno. La oxidación tiene lugar sobre un catalizador de lecho sólido de Pt/C a 40ºC. El producto de oxidación resultante se separa continuamente a través de una unidad de electrodiálisis. Tras la liofilización se separa el ácido lactobiónico (sal Na) en forma sólida con una pureza de al menos 86%.

Ácido maltobiónico

En un equipo de oxidación de funcionamiento continuo se disuelven 100 g de maltosa-monohidrato en agua desmineralizada de modo que resulte una solución al 5%. La solución se satura luego con oxígeno. La oxidación tiene lugar sobre un catalizador de lecho sólido de Pt/C a 40ºC. El producto de oxidación resultante se separa continuamente a través de una unidad de electrodiálisis. Tras la liofilización se separa el ácido maltobiónico (sal Na) en forma sólida con una pureza de al menos 85%.

Palatinosa condensada

Se calientan a 160ºC 0,15 kg de isomaltulosa molida tras la adición de ácido cítrico molido (0,15 g) y se dejan a esa temperatura durante 60 minutos. La masa fundida se diluye con agua totalmente desmineralizada hasta 45% de materia seca y se cromatografía a 70ºC en un intercambiador catiónico cargado con Ca^{2+} (IMAC-Ca^{2+} de la firma Rohm & Haas)(lecho de la columna 20 1), utilizando agua como eluyente. Las fracciones de mayor peso molecular (\geq DP 4) se reúnen, se concentran por evaporación y se secan por pulverización. La tabla 1 muestra la composición de la "palatinosa condensada" tras la separación por cromatografía de gel.

TABLA 1 Composición de la "palatinosa condensada"

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Dianhídrido de difructosa I y II (DFA I y DFA II)

En un recipiente cilíndrico de acero colocado en un baño de aceite se calentaron a 200ºC durante 40 minutos 40 g de inulina (Raftiline® HP). Los dianhídridos de fructosa se extrajeron (3 x 200 ml de metanol) de la masa fundida después de enfriar. Los extractos reunidos se concentraron hasta la sequedad en un evaporador rotativo y a continuación se disolvieron de nuevo en agua totalmente desmineralizada. La solución del 10% de materia seca (100 ml) se fraccionó mediante cromatografía de gel (Fractogel HW40S, 3 columnas separadoras de 120 cm de longitud y 10 cm de diámetro cada una) a 55ºC y con un flujo de 600 ml/hora. Las fracciones que contenían los dianhídridos de fructosa se reunieron y se concentraron hasta 15% de materia seca.

Esta solución se cromatografió y fraccionó en una fase reversa (Nucleosil 120-7-C18, 34 cm de longitud, incluyendo precolumna, 2,1 cm de diámetro) a temperatura ambiente, con un flujo de 5 ml/min., empleando agua totalmente desmineralizada y microfiltrada como eluyente. Después de recargar (0,2 ml por separación) se cromatografiaron 5 g de sustancia seca y se fraccionaron apropiadamente, obteniéndose 1,3 g de DFA I con una pureza del 95% y 1,1 g de DFA II con una pureza del 91%.

Dianhídrido de difructosa III (DFA III)

De un cultivo inclinado en agar de la cepa Arthrobacter ureafaciens (ATCC 21 124) se extrajo una cantidad y se transfirió a un matraz agitado (300 ml) que contenía un medio de nutrición (pH 7,0) compuesto por 6 g/l de inulina (Raftiline® St de la firma Orafti), 2 g/l de hidrógenofosfato disódico, 1 g/l de dihidrógenofosfato potásico, 1 g/l de nitrato amónico, 0,5 g/l de sulfato magnésico, 0,01 g/l de sulfato de hierro, 0,03 g/l de sulfato cálcico y 0,5 g/l de extracto de levadura. Luego se realizó una incubación de 24 horas a 27ºC y 120 rpm.

La biomasa (3 g) obtenida mediante centrifugación se completó hasta 300 ml con una solución de inulina al 10% (Raftiline® St) previamente ajustada a un valor pH de 5,5 con tampón de fosfato 0,02 M. Luego se incubó durante 4 horas a 40ºC bajo agitación. Terminada la reacción se separó la biomasa por centrifugación y se microfiltró (0,45 \mum) el sobrenadante obtenido.

Después de concentrarlo hasta 15% de materia seca, el filtrado se fraccionó por cromatografía de gel (Fractogel HW40S, 3 columnas separadoras de 120 cm de longitud y 10 cm de diámetro cada una) a 55ºC y con un flujo de 600 ml/hora.

Así se obtuvieron 15 g de DFA III con una pureza del 95%.

Fructooligosacáridos (FOS)

Mediante un proceso continuo en una máquina homogenizadora Supraton se elaboró una papilla con 60 kg de raíces de achicoria previamente trituradas, después de añadir 120 l de agua. La papilla se calentó a 95ºC y se dejó 30 min. a esa temperatura. Tras enfriar la papilla a 56ºC se ajustó el pH a 5,4 con H_{2}SO_{4} al 33%. Después de agregar 2 unidades de endo-inulinasa (SP 168 de Novo) por gramo de inulina, la mezcla se agitó durante 15 horas a 56ºC. El valor pH se mantuvo constante a 5,4 dosificando lechada de cal.

La reacción enzimática se paró aumentando el valor pH hasta 10,7 mediante la adición de Ca(OH)_{2}. Transcurridos 30 minutos se separó el sólido con un filtro prensa y se lavó repetidamente con 50 l de agua. A continuación los filtrados reunidos se neutralizaron con dióxido de carbono.

El producto se usó directamente después de concentrarlo y secarlo o bien se sometió primero a una operación de desalinización y decoloración. La desalinización y la decoloración se realizaron con un intercambiador catiónico débilmente ácido en forma H^{+} (como por ejemplo Lewatit® CNP 80, de Bayer AG) y un intercambiador aniónico de basicidad media en forma OH (como por ejemplo Lewatit® MP 64, de Bayer AG). Las columnas estaban conectadas una tras otra, de tal manera, que la solución del producto pasaba primero por el intercambiador catiónico y luego por el intercambiador aniónico. Esta etapa se llevó a cabo a temperatura ambiente.

El producto de elución que contenía los FOS se concentró hasta 20% de materia seca y luego se secó por pulverización, obteniéndose 7,85 kg de producto.

La tabla 2 muestra la composición del producto tras la separación por cromatografía de gel.

TABLA 2 Composición de los fructooligosacáridos preparados

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El contenido de glucosa, fructosa y sacarosa sobre materia seca fue respectivamente de 3,4%, 2,3% y 6,5%.

Fructooligosacáridos hidrogenados

Agitando en 30 l de agua totalmente desmineralizada se disolvió 1 kg de inulina de cadena larga (como por ejemplo Inulin-HP de Orafti), con una longitud media de cadena de 25, y se calentó a 85ºC. Después de enfriar la solución a 54ºC y ajustar el pH a 5,3 mediante adición de NaOH 1 N se agregaron 2.000 unidades de endo-inulinasa (denominación del producto: "SP 168", de Novo). La mezcla se agitó lentamente durante 48 horas a 54ºC y a continuación se paró la reacción calentando durante 20 minutos a 95ºC.

Un análisis por HPLC demostró que el producto constaba de 83%, respecto a materia seca, de fructooligosacáridos homooligómeros con una distribución DP de 2-7. El resto era de fructooligosacáridos heterooligómeros y fructosa libre.

La solución evaporada hasta 40% de materia seca se hidrogenó durante 18 horas en un autoclave de laboratorio con hidrógeno a 150 bar y a 80ºC, en presencia de níquel Raney. La solución obtenida se filtró y se purificó por intercambio iónico.

La solución purificada se puede utilizar en forma líquida, pero también puede transformarse en una forma sólida mediante procedimientos conocidos de secado, como por ejemplo la pulverización.

Quitooligosacáridos

Durante 10 minutos a 20ºC se agitaron en un matraz de tres bocas (250 ml) 25 g de quitina (Primex), de tamaño de partícula \geq 0,12 mm, con 100 ml de HCl 12 M. Luego la quitina se sometió a una hidrólisis de 110 minutos a 40ºC. La mezcla reactiva se traspasó a un recipiente de vidrio de 400 ml para neutralizarla y se enfrió a 5ºC. La neutralización se llevó a cabo añadiendo lentamente solución helada de NaOH al 50% bajo agitación y controlando la temperatura (T < 25ºC). Luego las materias sólidas se separaron por centrifugación. El residuo se lavó tres veces con agua totalmente desmineralizada y los sobrenadantes reunidos se filtraron (0,45 \mum) y a continuación se desalinizaron.

La desalinización se realizó por electrodiálisis (BEL 2, de la firma Berghof).

Con una conductividad de 10 mS/cm y una tensión de 8 V la desalinización quedó ampliamente completada después de 44 horas (valor final: 0,28 mS/cm). Luego la solución de producto se concentró hasta 10% de materia seca y a continuación se liofilizó, obteniéndose 17,5 g de quitooligosacáridos. La tabla 3 muestra la composición del producto obtenido tras la separación por cromatografía de gel.

TABLA 3 Composición de los quitooligosacáridos preparados

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Quitosanoligosacáridos

Primero se preparó un quitosano completamente des-acetilado (A. Domard y M. Rinando, Int. I. Biol. Macromol., 5 (1983), 49-52).

En un matraz de tres bocas (1 litro) se disolvieron 12 g del quitosano desacetilado con 600 ml de HCl 12 M y se agitó durante 3 horas a 72ºC. La reacción se paró enfriando a 4ºC. A continuación, la solución se concentró hasta sequedad en el evaporador rotativo, se disolvió dos veces en 500 ml de agua y se evaporó de nuevo hasta sequedad. Luego se añadieron 300 ml de agua y el valor pH de la disolución resultante se ajustó a 3 añadiendo NaOH concentrado bajo agitación.

La desalinización se realizó por electrodiálisis (BEL 2, membranas: CMX y AMX, de la firma Berghof). Con una conductividad > 20 mS/cm y una tensión de 8 V la desalinización quedó ampliamente completada al cabo de 48 horas (valor final: 0,35 mS/cm). Después de concentrar y liofilizar se pudieron obtener 9 g de quitosanoligosacáridos. En la tabla 4 se indica la composición del producto tras la separación por cromatografía de gel (Fractogel HW40S, 2 columnas separadoras de 2,6 x 150 cm; eluyente: acetato amónico 0,25 M, pH 4,0).

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TABLA 4 Composición de los quitosanoligosacáridos preparados

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Hidrolizado de pectina

Se agitaron 6 kg de citropectina de alto grado de esterificación en 180 l de agua totalmente desmineralizada. Después de añadir 200 ml de una pectinilasa (como por ejemplo Rohapect PTE, de Röhm) se realizó una incubación de 2 horas a 45ºC y a un pH de 4,5. Luego se incorporaron otros 14 kg de citropectina de alto grado de esterificación y se ajustó de nuevo el pH a 4,5 con NaOH 1 N. Después de agregar 200 ml de endo-poligalacturonasa (por ejemplo Pectinase PL, de la firma Amano) se siguió incubando durante 17 horas más bajo agitación. Luego se inactivaron los enzimas calentando durante 10 minutos a 80ºC.

El residuo insoluble se eliminó por centrifugación y la solución transparente se concentró hasta 45% de materia seca y, dado el caso, se secó. La tabla 5 muestra la composición de del producto resultante.

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TABLA 5 Composición del hidrolizado de pectina preparado

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En una forma de ejecución preferida se trituraron cáscaras secas de naranja o bolitas de cítricos, hasta llegar a un tamaño de partícula de aprox. 1-5 mm. De ahí se agitaron 100 g en 400 ml de agua, con lo cual se hincharon las partículas. Luego se añadió ácido clorhídrico concentrado (8 g). La suspensión se calentó a 85ºC y se agitó a esta temperatura durante 1,5 horas. Tras enfriar a 45ºC se incrementó el valor del pH hasta 4,5 con NaOH. Después de agregar 0,3 ml de una pectinilasa (como por ejemplo Rohapect PTE, de la firma Röhm) se incubó durante 2 horas. Después se incorporaron 0,75 ml de una endopoligalacturonasa (como por ejemplo Pectinase PL, de la firma Amano) y se siguió incubando 3 horas más bajo agitación, sin variar las condiciones de reacción. Luego se inactivaron los enzimas calentando a 95ºC. La suspensión obtenida se concentró y se secó en un secador

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Ejemplo 2

(Controles)

Análisis de la estabilidad de los sacáridos en el estómago y en el intestino delgado Estabilidad en el estómago

La estabilidad de una sustancia durante el tránsito estomacal se puede determinar analizando los hidrolizados a un valor pH de 1,0 y 2,0, y comparándolos con sacarosa como control. Para el control se incubó durante 3 horas a 37ºC una solución de sacáridos al 1% a pH 1,0 (HCl 0,1 M) y a pH 2,0 (HCl 0,01 M). De las respectivas mezclas reactivas se tomaron muestras a los 60, 120 y 180 minutos y se analizaron según el método HPAEC. Los resultados figuran en la siguiente tabla 6 (indicación de los hidrolizados en %).

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TABLA 6

1

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De esta tabla se desprende que los sacáridos no se desdoblan, o solo en parte, y por tanto resisten el paso por el estómago, preferentemente inalteradas.

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Estabilidad frente a los enzimas pancreáticos

La secreción del páncreas contiene una gran cantidad de hidrolasas, entre ellas, también los enzimas que descomponen los hidratos de carbono, como la \alpha-amilasa, la cual desdobla los \alpha-1,4-glucanos (almidón, glucógeno), preferentemente en maltosa y maltooligosacáridos.

La estabilidad de los sacáridos frente a los enzimas pancreáticos se analizó del modo siguiente.

Los sacáridos investigados se disolvieron respectivamente en tampón de fosfato-Na 20 mM de pH 7,0 que contenía NaCl 6 mM (solución 1), resultando una solución al 1%. Como control se preparó una solución de almidón (almidón soluble según Zulkowski) al 1% en la solución 1. Asimismo se preparó una solución de pancreatina (de la firma Sigma) al 0,2% en la solución 1. A 3,0 ml de cada solución de muestra y a 3,0 ml del control se añadieron 0,1 ml de la solución de pancreatina anteriormente preparada. Tras una incubación de 210 minutos en el termomezclador (agitación por intervalos) a 37ºC, se terminó la reacción calentando durante 15 minutos a 95ºC. La muestra que contenía almidón se hidrolizó totalmente calentándola 3 horas a 95ºC en HCl 1 M. Luego se analizaron las muestras por HPAEC y se midió la glucosa formada. Los resultados se indican en la siguiente tabla 7.

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TABLA 7 Estabilidad de los sacáridos contra los enzimas pancreáticos

2

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La tabla 7 demuestra que los sacáridos empleados en la presente invención no son atacados por los enzimas pancreáticos.

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Disociabilidad por las \alpha-glucosidasas del intestino delgado

Los complejos enzimáticos de sacarasa/isomaltasa y glucoamilasa/maltasa que hay en el intestino delgado, procedentes de la mucosa, actúan in vivo para que los disacáridos maltosa y sacarosa y también en parte los maltooligosacáridos llegados al intestino delgado se desdoblen en monosacáridos y pasen como tales al torrente sanguíneo, a través de la pared intestinal.

La estabilidad de los sacáridos de la presente invención frente a estos enzimas se ensayó del modo siguiente.

Primero se aislaron los complejos enzimáticos sacarasa/isomaltasa (complejo SI) y glucoamilasa/maltasa (complejo GM) del intestino delgado del cerdo, siguiendo el método de H. Heymann (Disertación, Hannover, 1991).

Los sacáridos analizados se disolvieron en tampón de trietanolamina (TRA) 0,1 M, pH 7,0, obteniéndose una solución al 1%. Como control se prepararon disoluciones al 1% de maltosa y sacarosa empleando el mismo tampón TRA. Los enzimas anteriormente aislados de la mucosa también se disolvieron en tampón TRA.

A 1,2 ml de la solución de hidrato de carbono temperada a 37ºC se añadieron 0,7 U (unidades) del complejo enzimático sacarasa/isomaltasa o del complejo enzimático gluco-amilasa/maltasa a t = 0. Después de mezclar, cada preparación reactiva se incubó a 37ºC. Al cabo de 2 horas se paró toda reacción, calentando durante 15 minutos a 95ºC. Los monosacáridos formados y las sustancias de ensayo empleadas se determinaron cuantitativamente por HPAEC. Los resultados figuran en la tabla 8.

TABLA 8

3

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Los resultados indican que, en las condiciones elegidas, la sacarosa y la maltosa fueron casi totalmente hidrolizadas por el complejo enzimático SI. Además la maltosa también fue casi totalmente hidrolizada por el complejo enzimático GM. En cambio los sacáridos empleados según la presente invención para tratar infecciones intestinales bacterianas no fueron prácticamente desdoblados por ambos complejos enzimáticos o solo en muy pequeña medida.

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Ejemplo 3 Ensayo in vitro de la fermentación a SCFA (no conforme a la presente invención)

Se ensayó in vitro la fermentación de las sustancias galactomananoligosacáridos, dianhídrido de difructosa II (DFA II) y "palatinosa condensada" a ácidos grasos de cadena corta. Para ello se tomaron heces recientes de cinco cerdos y se reunieron a partes iguales formando una muestra mixta. Con esta muestra se preparó una suspensión al 10% en tampón anaeróbico de fosfato 50 mM, pH 7,0, mediante una amasadora marca Stomacher. Se introdujeron respectivamente 0,5 ml de dicha suspensión en 9,5 ml de un medio cuya composición está indicada en la tabla 9 y se incubaron en condiciones anaeróbicas durante 28 h a 37ºC en tubos Hungate.

TABLA 9 Composición del medio empleado para el análisis de la fermentación in vitro a SCFA

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En un ensayo de control se incubó el medio con suspensión de heces, pero sin adición de hidratos de carbono. Las siguientes tablas 10 hasta 13 muestran la velocidad de la fermentación de los hidratos de carbono analizados, el valor del pH al término de la fermentación in vitro y los ácidos grasos de cadena corta formados.

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TABLA 10

5

Valor del pH al término de la fermentación: 7,2

TABLA 11

6

Valor del pH al término de la fermentación: 6,6

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TABLA 12

7

Valor pH al término de la fermentación: 5,4

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TABLA 13

8

Valor pH al término de la fermentación: 5,7

Ejemplo 4 Tratamiento de las infecciones por Salmonellas en el cerdo

En un establecimiento de engorde de cerdos primero se identificaron los portadores de Salmonellas analizando los excrementos. De los animales hallados como portadores positivos se escogieron 75 con un peso de 65-75 kg, se dividieron en tres grupos de 25 y se alojaron en establos separados.

El primer grupo recibió pienso que contenía "palatinosa condensada" (no conforme a la presente invención), el segundo grupo pienso con ácido lactobiónico (conforme a la presente invención), y el tercer grupo pienso con fructooligosacáridos hidrogenados (no conforme a la presente invención). La dosificación de los hidratos de carbono tuvo lugar de modo que a través del pienso se aportaran respectivamente 0,5 g de hidrato de carbono por kg vivo y por día. Se tomaron diariamente muestras de excrementos y se analizó la presencia de Salmonellas. Además se comparó el aumento de peso de los animales de cada grupo con el de los animales del control (portadores de Salmonellas, con pienso sin aditivos).

Al cabo de un tiempo de tratamiento de 7 días, en el grupo que se había alimentado de pienso con "palatinosa condensada" solo se pudieron detectar dos portadores de Salmonellas. En el grupo alimentado de pienso con fructooligosacáridos hidrogenados solo se halló un portador de Salmonellas y en el grupo alimentado con ácido lactobiónico no se pudo hallar ninguno. En cuanto al incremento de peso no se encontraron diferencias apreciables entre el control y los grupos tratados.

Claims

1. Uso de al menos un hidrato de carbono no degradable por los enzimas del tracto digestivo, escogido del grupo formado por 1-O-\alpha-D-glucopiranosil-D-sorbita, 6-O-\alpha-D-glucopiranosil-D-sorbita, ácido lactobiónico y ácido maltobiónico y una mezcla de ellos, como principio activo para preparar un fármaco destinado al tratamiento de las infecciones intestinales causadas por un microorganismo del género Salmonella, E. coli o Shigella en un animal.

2. Uso según la reivindicación 1, en que dicho animal es un animal monogástrico.

3. Uso según la reivindicación 1 o 2, en que dicho animal monogástrico es un animal útil.

4. Uso según una de las reivindicaciones 1 a 3, en que el animal útil es un cerdo o un pollo.

5. Uso según una de las reivindicaciones 1 a 4, en que la 6-O-\alpha-D-glucopiranosil-D-sorbita está contenida en una mezcla que además lleva 1-O-\alpha-D-glucopiranosil-D-manita, de tal modo que ambos componentes se hallan en una relación cuantitativa de 1:99 hasta 99:1.

6. Uso según una de las reivindicaciones 1 a 4, en que la 1-O-\alpha-D-glucopiranosil-D-sorbita y la 6-O-\alpha-D-glucopiranosil-D-sorbita están contenidas en una mezcla que lleva asimismo 1-O-\alpha-D-glucopiranosil-D-manita.

7. Uso según una de las reivindicaciones 1 a 6, en que el principio activo se administra en un preparado farmacéutico.

8. Uso según la reivindicación 7, en que el principio activo se administra por vía oral.

9. Uso según la reivindicación 8, en que el principio activo se administra en forma de suspensión, tableta, píldora, cápsula, granulado o polvo.

10. Uso según una de las reivindicaciones 1 a 6, en que el hidrato de carbono administrado está contenido en un forraje, en un pienso dietético o en el agua potable.

11. Pienso que contiene como aditivo al menos un hidrato de carbono no degradable por los enzimas del tracto digestivo, escogido del grupo formado por ácido lactobiónico y ácido maltobiónico y una mezcla de ambos.

12. Pienso según la reivindicación 11, que es un pienso de tipo dietético.