ES2293313T3 - Derivados de 3,4-dihidro-1h-quinolin-2-ona como inhibidores de la recaptacion de norepinefrina. - Google Patents
Derivados de 3,4-dihidro-1h-quinolin-2-ona como inhibidores de la recaptacion de norepinefrina. Download PDFInfo
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Abstract
Un compuesto de fórmula (I) en la que -X- es -C(R4R5)-, -O- o -S-; n es 2 ó 3; R1 es H o alquilo C1-C4; R3 es H, halo, alquilo C1-C4, O(alquilo C1-C4), nitrilo, fenilo o fenilo sustituido con 1 ó 2 sustituyentes seleccionados entre alquilo C1-C4, O(alquilo C1-C4), S(alquilo C1-C4), halo, y fenilo opcionalmente sustituido con alquilo C1-C4, O(alquilo C1-C4), S(alquilo C1-C4), o halo; cada uno de R4 y R5 se selecciona independientemente entre H o alquilo C1-C4; Ar- se selecciona entre el grupo constituido por en las que R2a es H, halo, metilo o etilo; R2b es H, halo o metilo; R2c es H, halo, metilo, trifluorometilo, nitrilo o metoxi; R2d es H, halo, metilo o etilo; R2c es H, halo, metilo, trifluorometilo, nitrilo o metoxi; R2f es H, o fluoro; -Y- es -O-, -S- o -N(R6)-; y R6 es H o metilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Description
Derivados de
3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona
como inhibidores de la recaptación de norepinefrina.
Esta invención se refiere a nuevos compuestos de
quinolona, y a su uso en la inhibición selectiva de la recaptación
de norepinefrina.
La inhibición selectiva de la recaptación de
norepinefrina es un modo de acción relativamente nuevo para el
tratamiento de trastornos afectivos. La norepinefrina parece
desempeñar un papel importante en las alteraciones de la función
vegetativa asociadas con trastornos afectivos, de ansiedad y
cognitivos. El clorhidrato de atomoxetina es un inhibidor selectivo
de norepinefrina, y se comercializa para el tratamiento del
trastorno de hiperactividad con déficit de atención (ADHD). La
reboxetina es un inhibidor selectivo de la recaptación de
norepinefrina comercializado para el tratamiento de la depresión.
Varias
3-(\omega-aminoalquil)-1-fenil-2-indolinonas
y las 1-fenilindolinas correspondientes que se
sintetizaron y evaluaron farmacológicamente como posibles agentes
anti-depresivos se presentan en J. of Medicinal
Chemistry, vol. 15 (7), 1972, 762-770. El documento
US 5.552.429 informa de que la potencia de fluoxetina, venlafaxina,
milnacipran y duloxetina para aumentar la disponibilidad de
serotonina, norepinefrina y dopamina aumenta por administración
junto con un agonista del receptor de serotonina 1A. El documento
EP 0 919 236 describe el uso de un inhibidor de la captación de
norepinefrina para el tratamiento del trastorno desafiante
oposicional. El documento WO 01/27068 describe un grupo de derivados
de biaril éter con actividad como inhibidores de la recaptación de
serotonina, norepinefrina y dopamina que pueden usarse en el
tratamiento de trastornos del sistema nervioso central y otros
trastornos. El documento WO 02/094262 describe heteroariloxi
propanaminas 3-sustituidas y su uso en la inhibición
de la recaptación de serotonina y norepinefrina. El documento WO
02/40006 muestra el uso de inhibidores selectivos de la recaptación
de norepinefrina para tratar trastornos de ansiedad, especialmente
el trastorno obsesivo-compulsivo.
De acuerdo con la presente invención se
proporciona un compuesto de fórmula (I)
en la
que
-X- es -C(R^{4}R^{5})-, -O- o
-S-;
n es 2 ó 3;
R^{1} es H o alquilo
C_{1}-C_{4};
R^{3} es H, halo, alquilo
C_{1}-C_{4}, O(alquilo
C_{1}-C_{4}), nitrilo, fenilo o fenilo
sustituido;
cada uno de R^{4} y R^{5} se selecciona
independientemente entre H o alquilo
C_{1}-C_{4};
Ar- se selecciona entre el grupo constituido
por
en las
que
R^{2a} es H, halo, metilo o etilo;
R^{2b} es H, halo o metilo;
R^{2c} es H, halo, metilo, trifluorometilo,
nitrilo o metoxi;
R^{2d} es H, halo, metilo o etilo;
R^{2e} es H, halo, metilo, trifluorometilo,
nitrilo o metoxi;
R^{2f} es H o fluoro;
-Y- es -O-, -S- o -N(R^{6})-; y
R^{6} es H o metilo
y sales farmacéuticamente
aceptables del
mismo.
La expresión "alquilo
C_{1}-C_{4}", como se usa en este documento,
incluye grupos alquilo de cadena lineal y ramificada de 1, 2, 3 ó 4
átomos de carbono. De esta manera, la expresión "alquilo
C_{1}-C_{4}" incluye metilo, etilo,
n-propilo, isopropilo, n-butilo,
isobutilo, sec-butilo y terc-butilo.
Se prefieren los grupos alquilo C_{1}-C_{2}. Un
grupo alquilo C_{1}-C_{4} particularmente
preferido es metilo o etilo.
El término "halo" incluye F, Cl, Br y I, y
es preferiblemente F o Cl.
La expresión "fenilo sustituido" significa
fenilo sustituido con 1, 2, 3, 4 ó 5 sustituyentes, preferiblemente
con 1 ó 2, por ejemplo 1, sustituyente. Los sustituyentes adecuados
incluyen alquilo C_{1}-C_{4}, O(alquilo
C_{1}-C_{4}), S(alquilo
C_{1}-C_{4}), halo y fenilo opcionalmente
sustituido, por ejemplo, con alquilo
C_{1}-C_{4}, O(alquilo
C_{1}-C_{4}), S(alquilo
C_{1}-C_{4}) o halo.
Las expresiones "O(alquilo
C_{1}-C_{4})" o "S(alquilo
C_{1}-C_{4})" significan un grupo alquilo
C_{1}-C_{4} como se ha definido anteriormente
unido al punto de sustitución a través de un átomo de oxígeno o de
azufre. Un grupo O(alquilo C_{1}-C_{4})
o S(alquilo C_{1}-C_{4}) incluye, por
ejemplo, metoxi, etoxi, tiometilo o tioetilo.
La presente invención incluye las sales
farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula (I),
fórmula (Ia) o fórmula (II). Las sales adecuadas incluyen sales de
adición de ácidos, incluyendo las sales formadas con ácidos
inorgánicos, por ejemplo ácido clorhídrico, bromhídrico, nítrico,
sulfúrico o fosfórico, o con ácidos orgánicos, tales como ácido
orgánico carboxílico o ácido orgánico sulfónico, por ejemplo, ácido
acetoxibenzoico, cítrico, glicólico, mandélico-l,
mandélico-dl, mandélico-d, maleico,
mesotartárico monohidrato, hidroximaleico, fumárico, lactobiónico,
málico, metanosulfónico, napsílico, naftalenodisulfónico, naftoico,
oxálico, palmítico, fenilacético, propiónico, piridil hidroxi
pirúvico, salicílico, esteárico, succínico, sulfanílico,
tartárico-l, tartárico-dl,
tartárico-d, 2-hidroxietano
sulfónico, tolueno-p-sulfónico y xinafoico.
Además de las sales farmacéuticamente
aceptables, otras sales pueden servir como intermedios en la
purificación de compuestos o en la preparación de otras sales de
adición de ácidos, por ejemplo farmacéuticamente aceptables, o son
útiles para identificación, caracterización o purificación.
Se apreciará que compuestos de fórmula (I),
fórmula (Ia) y fórmula (II) poseen átomos de carbono asimétricos, y
que en la presente invención se prefieren estereoisómeros
individuales específicos.
Un grupo preferido de compuestos de acuerdo con
la presente invención se representa por la fórmula (Ia)
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\vskip1.000000\baselineskip
en la que -X-, n, R^{1}, R^{3}
y Ar tienen los valores como se han definido para la fórmula (I)
anterior.
Todos los compuestos de fórmulas (I) y (Ia) son
realizaciones de la presente invención, aunque se prefieren
compuestos en los que -X- es -C(R^{4}R^{5})-. Se
prefieren aún más los compuestos en los que X- es
-C(R^{4}R^{5})- y R^{4} y R^{5} son ambos H o R^{4}
y R^{5} son ambos el mismo alquilo
C_{1}-C_{4}.
Como se ha mencionado anteriormente, todos los
compuestos de fórmulas (I) y (Ia) anteriores son realizaciones de
la presente invención, aunque también se prefieren los compuestos en
los que Ar es (i). Preferiblemente Ar es (i) y R^{2c} es H. Se
prefieren aún más los compuestos en los que Ar es (i), R^{2c} es
H, y (a) R^{2a} es H o metilo, R^{2b} es H y R^{2f} es H o
(b) R^{2a} es H, R^{2b} es halo, preferiblemente fluoro o cloro
y R^{2f} es H o fluoro.
Otro grupo de compuestos preferidos de la
invención son compuestos en los que Ar es (ii) e -Y- es -S-. Más
preferiblemente Ar es 2-tiofenilo o
3-tiofenilo.
Otro grupo preferido de compuestos de acuerdo
con la presente invención se representa por la fórmula (II)
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\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
n es 2 ó 3;
R^{1} es H o alquilo
C_{1}-C_{4};
R^{3} es H, halo, fenilo o fenilo
sustituido;
R^{2a} es H, halo, metilo o etilo;
R^{2b} es H, halo o metilo; y sales
farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Se apreciará que todos los compuestos de
fórmulas (I), (Ia) y (II) son realizaciones de la presente
invención, aunque se prefieren ciertos compuestos.
Preferiblemente n es 3.
También preferiblemente R^{1} es H, metilo,
etilo o n-propilo.
Se prefiere también que R^{3} sea H o
halo.
Los compuestos de la presente invención pueden
prepararse usando los siguientes procedimientos. A continuación se
dan esquemas generales que resumen las rutas de síntesis usadas para
preparar productos racémicos. Todos los racematos activos se
separaron en enantiómeros individuales usando HPLC quiral y en la
mayoría de los casos los enantiómeros se convirtieron en sales
D-tartrato.
Los compuestos de fórmula (I) en la que Ar es
(i) y R^{2c} es H pueden prepararse como se muestra en el
procedimiento A a continuación.
\newpage
Procedimiento
A
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Esquema
1
\vskip1.000000\baselineskip
La
quinolin-2-ona (1) o sus
correspondientes derivados 4-oxo y
4-tio pueden N-arilarse usando
condiciones modificadas respecto a las presentadas por Buchwald (J.
Am. Chem. Soc, 123, 2001, pág. 7727). Por ejemplo, la
quinolin-2-ona (1) se hace
reaccionar con 3 equivalentes de Ar-Br, donde Ar es
(i) y R^{2c} es H, 0,2 equivalentes de transciclohexanodiamina,
0,2 equivalentes de yoduro de cobre (CuI) y 2,1 equivalentes de
carbonato potásico (K_{2}CO_{3}), en un disolvente orgánico tal
como 1,4-dioxano a una temperatura de 125ºC durante
toda la noche. La quinolin-2-ona
N-arilada (2) resultante puede alquilarse por
tratamiento con una base fuerte tal como hexametildisilazida de
litio (LiHMDS) a temperaturas de -78ºC en un disolvente orgánico
adecuado tal como tetrahidrofurano (THF), seguido de la adición de
un haluro de alquilo tal como yoduro de alquilo para dar el
derivado de quinolin-2-ona
3-alquilado-N-arilado
(3) correspondiente. Usando las mismas condiciones de alquilación
anteriores con un 1,2-dihaloetano, tal como
1-bromo-2-cloroetano,
o un 1,3-dihalopropano, tal como
1-bromo-3-cloropropano,
como agentes de alquilación, se proporciona (4) o (5) en las que n
es 2 ó 3 respectivamente. Estos análogos halo se eligieron como
precursores ideales para los productos amina deseados. Por ejemplo,
el tratamiento de (4) o (5) con metilamina acuosa, en presencia de
una cantidad catalítica de un yoduro adecuado, tal como yoduro
potásico (Kl), en etanol a 100ºC proporcionó los productos amina
racémicos (6) y (7) respectivamente, con rendimientos
moderados.
Los compuestos de fórmula (I) en la que Ar es
(i), R^{2c} es H y n es 3 pueden prepararse usando el
procedimiento alternativo B.
\newpage
Procedimiento
B
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
2
\vskip1.000000\baselineskip
Las
quinolin-2-onas (2) y (3) pueden
alquilarse usando el procedimiento de alquilación mencionado
anteriormente usando un haluro de alilo, por ejemplo bromuro de
alilo como agente de alquilación para dar las correspondientes
3-alil-N-ariladas-quinolin-2-onas
(11a-g). Dichos análogos de alilo podrían
convertirse después en los alcoholes primarios correspondientes
(12a-g) mediante un procedimiento de hidroboración
que implica un borano adecuado, tal como 9-BBN en
un disolvente adecuado tal como THF. El tratamiento oxidativo usando
por ejemplo condiciones de reacción tales como peróxido de
hidrógeno acuoso en un disolvente tal como etanol, en presencia de
una base adecuada tal como hidróxido sódico, dio rendimientos de
moderados a buenos de productos alcohol después de purificación por
cromatografía en columna. Los alcoholes se convirtieron limpiamente
en sus mesilatos, por reacción de un haluro de mesilo tal como
cloruro de mesilo en presencia de una base adecuada tal como
trietilamina en un disolvente adecuado tal como THF a una
temperatura adecuada tal como de 0ºC a la temperatura ambiente. Los
mesilatos resultantes se usan directamente en la etapa de aminación
descrita anteriormente en el procedimiento A para proporcionar
buenos rendimientos de las dianas racémicas finales
(13a-g).
Para preparar una serie de análogos
N-arilados se prepararon intermedios avanzados que
podían experimentar N-arilaciones con una serie de
haluros de arilo sustituidos, tales como bromuros o yoduros de
arilo, 2 y 3-halotiofenos, 2 y
3-halofuranos o 2 y 3-halopirroles
(Procedimiento C). La ruta sintética usada para preparar los
intermedios (19a-b) se muestra a continuación
(Esquema 3).
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\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Esquema pasa a página
siguiente)
\newpage
Procedimiento
C
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
3
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos de fórmula (I) en la que n es 3
pueden prepararse como se muestra en el procedimiento C. Este
procedimiento es particularmente adecuado para compuestos en los que
Ar es (i) y R^{2c} es H o Ar es (ii), en el que -Y- es -S-.
La
quinolin-2-ona (1) puede protegerse
usando un grupo protector de amida adecuado como los descritos en
T.W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", John
Wiley and Sons, Nueva York, N.Y., 1991, denominado en lo sucesivo
en este documento "Greene". Por ejemplo, la
quinolin-2-ona (1) puede protegerse
con un grupo 4-metoxibencilo. La reacción de
protección puede realizarse por ejemplo usando una base adecuada tal
como hidruro sódico en un disolvente adecuado, tal como
dimetilformamida, seguido de reacción con un haluro de
4-metoxibencilo, tal como cloruro de
4-metoxibencilo, para dar el derivado
N-protegido (14) correspondiente con un buen
rendimiento. Este intermedio puede convertirse directamente en el
análogo alilo (16a), en el que R^{1} = H, de la manera descrita
anteriormente o convertirse en el análogo de alquilo (15) que puede
alquilarse posteriormente con un haluro de alilo para dar el
análogo de alilo (16b), en el que R^{1} es alquilo
C_{1}-C_{4}. Usando la misma secuencia de
hidroboración, mesilación y aminación descrita en el Procedimiento B
se proporcionaron las dos aminas (18a-b). La
desprotección de quinolin-2-ona
protegida podría conseguirse usando cualquiera de las condiciones
de desprotección adecuadas como las mostradas en Greene. Por
ejemplo, el grupo 4-metoxibencilo podría escindirse
limpiamente usando ácido trifluoroacético y anisol a 65ºC. El
producto resultante podría protegerse selectivamente sobre la amina
secundaria con un grupo protector de nitrógeno adecuado como los
descritos en Greene. Por ejemplo, la amina secundaria puede
protegerse con un grupo Boc. La reacción puede realizarse con
anhídrido de Boc en un disolvente adecuado tal como THF para
proporcionar cantidades de multi gramos de (19a-b).
La reacción de (19a-b) con diversos bromuros de
arilo usando las condiciones de N-arilación
descritas anteriormente, desprotección usando condiciones de
desprotección adecuadas tales como las descritas en Greene dio una
serie de dianas racémicas finales (21a-q o
22a-b). Por ejemplo, para compuestos protegidos con
un grupo Boc pueden desprotegerse en presencia de ácido
trifluoroacético (TFA) en un disolvente orgánico adecuado tal como
diclorometano (DCM).
Los intermedios (19 a-b) en los
que R^{3} es un grupo halo, por ejemplo cloro o bromo, pueden
usarse para proporcionar compuestos de fórmula (I) en la que
R^{3} es un grupo fenilo, tal como el compuesto (24), por
acoplamiento de Suzuki, véase el esquema 4 a continuación.
\newpage
Procedimiento
D
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
4
\vskip1.000000\baselineskip
Los intermedios (19a-b), en los
que R^{3} es, por ejemplo, bromo pueden
N-protegerse con un grupo protector de amida
adecuado, por ejemplo 4-metoxibencilo como se
describe en el procedimiento C anterior y después acoplarse con
ácido fenilborónico en condiciones de Suzuki para proporcionar los
análogos de fenilo (23). La desprotección del grupo
4-metoxibencilo con TFA, seguido de protección de la
amina secundaria resultante con un grupo protector de nitrógeno
adecuado tal como Boc seguido de la posterior
N-arilación y desprotección de Boc usando la
metodología descrita anteriormente dio la diana final (24).
Se apreciará que los compuestos de fórmula (Ia)
en los que R^{3} es bromo o cloro pueden prepararse como se
muestra en los procedimientos A a D anteriores partiendo de las
haloquinolin-2-onas
correspondientes. Como alternativa, pueden prepararse a partir de
la quinolin-2-ona (1a)
correspondiente en la que R^{3} es hidrógeno como se ha
mencionado anteriormente incluyendo una etapa extra que comprende la
halogenación de un intermedio adecuado en alguna fase de la
síntesis. Por ejemplo, la
quinolin-2-ona (1a) en el
procedimiento B puede halogenarse usando
N-clorosuccinimida en un disolvente adecuado tal
como DMF a una temperatura adecuada tal como a la temperatura
ambiente para dar la
6-cloro-quinolin-2-ona
(1c) correspondiente en la que R^{3} es Cl.
Como alternativa, los intermedios (19
a-b) en los que R^{3} es H en el procedimiento C
pueden halogenarse en presencia de N-cloro y
N-bromosuccinimida en un disolvente adecuado tal
como DMF para dar las 6-cloro y
6-bromoquinolin-2-onas
(20a-c) correspondientes.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se apreciará que los procedimientos A a D
anteriores se refieren a procedimientos para la preparación de
compuestos de fórmula I en la que Ar es (i) y R^{2c} es
hidrógeno. Los compuestos de fórmula I en la que Ar es (i) y
R^{2c} puede ser distinto de hidrógeno, pueden prepararse usando
cualquiera de los procedimientos generales mencionados
anteriormente, partiendo de la
quinolin-2-ona
N-arilada (27) correspondiente. Un procedimiento
general para preparar dichos intermedios se ilustra en el Esquema 5.
Los ácidos
3-(2-bromofenil)-propiónicos (25)
disponibles en el mercado pueden convertirse en la amida (26) usando
condiciones convencionales de acoplamiento de amida y convertirse
en las quinolin-2-onas
N-ariladas (27) mediante una ciclación
intramolecular, catalizada con paladio de acuerdo con el
procedimiento de Buchwald y col (Tetrahedron, 1996, 52, pág.
7525).
\newpage
Esquema
5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La presente invención proporciona un
procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (I) que
comprende hacer reaccionar metilamina con un compuesto de
fórmula
en la que R^{1}, R^{3}, X, n y
Ar tienen los valores definidos para la fórmula I anterior y L es un
grupo saliente adecuado tal como por ejemplo cloruro, bromuro,
yoduro o mesilato. La reacción puede realizarse como se ha descrito
anteriormente, haciendo reaccionar un compuesto de fórmula (III) con
metilamina, por ejemplo en forma de metilamina acuosa,
opcionalmente en presencia de una cantidad catalítica de un yoduro
adecuado, tal como yoduro potásico (Kl), en etanol a 100ºC,
proporcionando los productos amina racémicos (6) y (7)
respectivamente, con rendimientos moderados. Una etapa opcional
adicional comprende la formación de una sal farmacéuticamente
aceptable del compuesto de fórmula
(1).
La presente invención proporciona otro
procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (I) que
comprende la N-desprotección de un compuesto de
fórmula
en la que R^{1}, R^{3}, X, n y
Ar tienen los valores definidos para la fórmula I anterior y P es un
grupo protector de nitrógeno adecuado tal como los descritos en
Greene, por ejemplo un grupo Boc. La reacción se realiza usando
condiciones de desprotección adecuadas tales como las descritas en
Greene de acuerdo con la naturaleza del grupo protector de
nitrógeno usado (P). Por ejemplo, para compuestos protegidos con un
grupo Boc, pueden desprotegerse en presencia de ácido
trifluoroacético (TFA) en un disolvente orgánico adecuado tal como
diclorometano (DCM). Una etapa opcional adicional comprende la
formación de una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de
fórmula
(I).
Los compuestos de la presente invención son
inhibidores de la recaptación de norepinefrina y son selectivos
sobre otros neurotransmisores, tales como dopamina o serotonina, es
decir, su afinidad de unión en el transportador de norepinefrina es
mayor que su afinidad por otros transportadores u otros receptores.
Además, son estables en ácido.
Por lo tanto, la presente invención proporciona
un compuesto de fórmula (I), fórmula (Ia) o fórmula (II), o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar en terapia; y un
compuesto de fórmula (I), fórmula (Ia) o fórmula (II), o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar como un inhibidor
selectivo de la recaptación de norepinefrina.
Además, la presente invención también
proporciona un compuesto de fórmula (I), fórmula (Ia) o fórmula
(II), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para inhibir
selectivamente la recaptación de norepinefrina; y un compuesto de
fórmula (I), fórmula (Ia) o fórmula (II), o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo, para tratar trastornos
asociados con disfunción de norepinefrina en mamíferos; y el uso de
un compuesto de fórmula (I), fórmula (Ia) o fórmula (II), o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo, en la preparación de un
medicamento para inhibir selectivamente la recaptación de
norepinefrina; y el uso de un compuesto de fórmula (I), fórmula
(Ia) o fórmula (II), o una sal farmacéuticamente aceptable del
mismo, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de
trastornos asociados con disfunción de norepinefrina en mamíferos,
incluyendo los trastornos mostrados en este documento.
Los trastornos asociados con disfunción de
norepinefrina en mamíferos, mencionados anteriormente en cualquiera
de los usos o los procedimientos de la presente invención, incluyen,
por ejemplo, afecciones del sistema nervioso tales como las
seleccionadas entre el grupo constituido por un trastorno adictivo y
síndrome de abstinencia, un trastorno de ajuste, un trastorno de
aprendizaje y mental relacionado con la edad, anorexia nerviosa,
apatía, un trastorno por déficit de atención (ADD) debido a
afecciones médicas generales, trastorno de hiperactividad con
déficit de atención (ADHD), trastorno bipolar, bulimia nerviosa,
síndrome de fatiga crónica, estrés crónico o agudo, trastorno de
conducta, trastorno ciclotímico, depresión, trastorno distímico,
fibromialgia y otros trastornos somatoformes, trastorno de ansiedad
generalizada, incontinencia, un trastorno de inhalación, un
trastorno de intoxicación, manía, dolores de cabeza de tipo migraña,
obesidad, trastornos obsesivos compulsivos y trastornos de espectro
relacionado, trastorno desafiante oposicional, trastorno de pánico,
neuropatía periférica, trastorno de estrés
post-traumático, trastorno disfórico premenstrual,
un trastorno psicótico, trastorno afectivo estacional, un trastorno
del sueño, fobia social, un trastorno del desarrollo específico,
inhibición selectiva de la recaptación de serotonina (SSRI),
síndrome de "pérdida de efecto" o "poop out", trastornos
TIC, trastornos cognitivos incluyendo deficiencia cognitiva
moderada (MCI), demencia de tipo Alzheimer (DAT), demencia vascular
y deficiencia cognitiva asociada con esquizofrenia (CIAS), estados
hipotensivos incluyendo hipotensión ortoestática, y dolor
incluyendo dolor crónico, dolor neuropático y dolor
antinociceptivo.
antinociceptivo.
Además de los compuestos de fórmula (I), fórmula
(Ia) y fórmula (II), y procesos para la preparación de dichos
compuestos, la presente invención proporciona adicionalmente
composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula
(I), fórmula (Ia) o fórmula (II), o una sal farmacéuticamente
aceptable del mismo, junto con un diluyente o vehículo
farmacéuticamente aceptable.
Los compuestos de la presente invención pueden
usarse como medicamentos en medicina humana o veterinaria. Los
compuestos pueden administrarse por diversas vías, por ejemplo, por
vía oral o rectal, tópica o parenteral, por ejemplo por inyección,
y normalmente se emplean en forma de una composición
farmacéutica.
Dichas composiciones pueden prepararse por
procedimientos bien conocidos en la técnica farmacéutica y
normalmente comprenden al menos un compuesto activo en asociación
con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable. En la
preparación de las composiciones de la presente invención, el
ingrediente activo normalmente se mezclará con un vehículo o se
diluirá en un vehículo, y/o quedará encerrado en un vehículo que
puede estar, por ejemplo, en forma de una cápsula, sello, papel u
otro recipiente. Cuando el vehículo sirve como diluyente, puede ser
un material sólido, semi-sólido, o líquido que actúa
como vehículo, excipiente o medio para el ingrediente activo. Por
lo tanto, la composición puede estar en forma de comprimidos,
pastillas, sellos, obleas, elixires, suspensiones, soluciones,
jarabes, aerosol (en forma de un sólido o en un medio líquido),
pomadas que contienen, por ejemplo, hasta 10% en peso del compuesto
activo, cápsulas de gelatina blandas y duras, supositorios,
soluciones y suspensiones para inyección y polvos envasados
estériles.
Algunos ejemplos de vehículos adecuados son
lactosa, dextrosa, aceites vegetales, alcoholes bencílicos, alquilen
glicoles, polietilenglicoles, triacetato de glicerol, gelatina,
carbohidratos tales como almidón y vaselina líquida, sacarosa
sorbitol, manitol, almidones, goma arábiga, fosfato cálcico,
alginatos, tragacanto, gelatina, jarabe, metil celulosa, metil- y
propil- hidrobenzoato, talco, estearato de magnesio y aceite
mineral. Los compuestos de fórmula (I) también pueden liofilizarse
y los liofilizados obtenidos se usan, por ejemplo, para la
producción de preparaciones para inyección. Las preparaciones
indicadas pueden esterilizarse y/o pueden contener auxiliares tales
como lubricantes, conservantes, estabilizantes y/o agentes
humectantes, emulsionantes, sales para afectar a la presión
osmótica, sustancias tampón, colorantes, aromatizantes y/o uno o más
compuestos activos adicionales, por ejemplo una o más vitaminas.
Las composiciones de la invención pueden formularse para
proporcionar, liberación rápida, sostenida o retardada del
ingrediente activo después de la administración al paciente
empleando procedimientos bien conocidos en la técnica.
Las composiciones se formulan preferiblemente en
una forma de dosificación unitaria, conteniendo cada dosificación
de aproximadamente 5 a aproximadamente 500 mg, más habitualmente de
aproximadamente 25 a aproximadamente 300 mg, del ingrediente
activo. La expresión "forma de dosificación unitaria" se
refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosis
unitarias para sujetos humanos y otros mamíferos, conteniendo cada
unidad una cantidad predeterminada de material activo calculado
para producir el efecto terapéutico deseado, en asociación con un
vehículo farmacéutico adecuado.
Los siguientes ejemplos ilustran realizaciones
particulares de los compuestos de la presente invención y
procedimientos para su preparación.
\vskip1.000000\baselineskip
Procedimiento
A
Una mezcla agitada de
3,4-Dihidro-1H-quinolin-2-ona
(1a) (1,47 g, 10 mmol), K_{2}CO_{3} (2,9 g, 21 mmol),
trans-ciclohexano-1,2-diamina
(240 \mul, 2 mmol) y bromobenceno (3,16 ml, 30 mmol) en
1,4-dioxano (10 ml) se calentó en una atmósfera de
nitrógeno a 125ºC durante 5 min para desoxigenar la mezcla de
reacción. Se añadió yoduro de cobre (I) (380 mg, 2 mmol) en una
porción y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante toda
la noche a 125ºC. Después de enfriar a ta, la mezcla de reacción se
vertió en acetato de etilo (100 ml) y se extrajo con agua. La capa
orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. El
tratamiento del residuo con éter (100 ml) y la refrigeración (baño
de hielo) dio el producto en forma de un sólido blanco después de
la filtración (1,77 g, 79%).
Ésta se preparó usando el procedimiento descrito
para (2a) usando
6-fluoro-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona
(1b) (617 mg, 3,7 mmol) y 4-bromotolueno (1,91 g,
11 mmol) para dar el producto en bruto, que se purificó usando
cromatografía automatizada (sílice) (gradiente del 0 al 60% de
acetato de etilo/ciclohexano) para proporcionar el producto en
forma de un sólido pardo claro (880 mg, 92%).
A una solución de (2a) (892 mg, 4 mmol) en THF
anhidro (40 ml) a -78ºC en una atmósfera de nitrógeno se le
añadió LiHMDS (4,4 ml, solución 1 M en hexanos, 4,4 mmol) gota a
gota durante 10 min. La mezcla de reacción se dejó a -78ºC durante
30 min y después se añadió gota a gota una solución de yoduro de
metilo (298 \mul, 4,8 mmol) en THF (1 ml). La mezcla de reacción
se calentó lentamente a ta, se inactivó con agua (2 ml) y se
extrajo con acetato de etilo (100 ml). La capa orgánica se separó,
se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. El residuo se purificó por
cromatografía en columna (sílice, gradiente 100% hexano a acetato de
etilo/hexano 3:10) dando el producto en forma de un aceite (667 mg,
70%).
Ésta se preparó de una manera similar a (3a) en
una escala de 1,5 mmol usando 1-yodoetano (125
\mul, 1,1 equiv.) como agente de alquilación. El producto en
bruto (378 mg) se usó directamente en la siguiente etapa.
A una solución de (2a) (892 mg, 4 mmol) en THF
anhidro (40 ml) a -78ºC en una atmósfera de nitrógeno se le
añadió LiHMDS (4,4 ml, solución 1 M en hexanos, 4,4 mmol) gota a
gota durante 10 min. La mezcla de reacción se dejó a -78ºC durante
30 min y después se añadió gota a gota una solución de
1-bromo-3-cloropropano
(405 \mul, 4,4 mmol) en THF (1 ml). La mezcla de reacción se
calentó lentamente a ta, se inactivó con agua (2 ml) y se extrajo
con acetato de etilo (100 ml). La capa orgánica se separó, se secó
sobre MgSO_{4} y se concentró. El producto en bruto (1,2 g) se
usó directamente en la siguiente etapa.
Ésta se preparó a partir de (2b) (300 mg, 1,17
mmol) usando el procedimiento descrito para (4a) usando
1-bromo-3-cloropropano
(140 \mul, 1,4 mmol) como agente de alquilación. El producto en
bruto (399 mg) se usó directamente en la siguiente etapa.
Esto se preparó a partir de (2a) (892 mg, 4,0
mmol) usando el procedimiento descrito para (4a) usando
1-bromo-2-cloroetano
(365 \mul, 4,4 mmol) como agente de alquilación. El producto en
bruto (1 g) se usó directamente en la siguiente etapa.
Esto se preparó a partir de (3a) (462 mg, 1,95
mmol) usando el procedimiento descrito para (4a) usando
1-bromo-3-cloropropano
(270 \mul, 2,7 mmol) como agente de alquilación. El producto en
bruto (650 mg) se usó directamente en la siguiente etapa.
Esto se preparó a partir de (3b) (378 mg, 1,5
mmol) usando el procedimiento descrito para (4a) usando
1-bromo-3-cloropropano
(179 \mul, 1,8 mmol) como agente de alquilación. El producto en
bruto (528 mg) se usó directamente en la siguiente etapa.
Una solución de (4a) (1,2 g, 4 mmol), yoduro
potásico (200 mg, 1,2 mmol) y metilamina acuosa al 40% (12 ml) en
etanol (30 ml) se calentó a reflujo a 100ºC en una atmósfera de
nitrógeno durante 3 h. La mezcla de reacción se enfrió, se vertió
en agua y se extrajo con acetato de etilo (100 ml). La capa orgánica
se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. El producto se
purificó por CLEM preparativa para dar 500 mg del racemato. El
racemato se separó en sus enantiómeros individuales usando HPLC
quiral. RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato e isómero) \delta
1,5-1,73 (m, 4H), 1,88-1,97 (m, 1H),
2,43 (s, 3H), 2,62 (t, J = 6,69 Hz, 2H), 2,70-2,79
(m, 1H), 2,84-2,92 (m, 1H), 3,15 (dd, J = 15,45,
5,28 Hz, 1H), 6,33 (d, J = 7,73 Hz, 1H), 6,95-7,06
(m, 2H), 7,19-7,22 (m, 3H),
7,38-7,43 (m, 1H), 7,47-7,52 (m,
2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 295 a Rt 4,0 min
(100%).
Ésta se preparó de una manera idéntica a (6a)
usando (4b) en bruto (399 mg) para dar el producto en bruto, que se
purificó por CLEM preparativa para dar el producto (35 mg). RMNH
(300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta 1,40-1,70
(m, 3H), 1,75-1,90 (m, 4H), 2,34 (s, 3H), 2,36 (s,
3H), 2,50-2,83 (m, 2H), 3,01-3,08
(m, 1H), 6,21-6,26 (m, 1H),
6,62-6,68 (m, 1H), 6,82-6,86 (m,
1H), 6,99 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,22 (d, J = 8,1 Hz, 2H). CLEM
(procedimiento de 12 minutos) [M+H]+= 327 a Rt 4,8 min (100%).
Ésta se preparó de una manera idéntica a (6a)
usando (4c) en bruto (1 g) para dar el racemato (80 mg). El
racemato se separó en sus enantiómeros individuales usando HPLC
quiral. RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato e isómero) \delta
ppm 1,64-1,76 (m, 1H), 1,79 (a, 1H),
2,03-2,18 (m, 1H), 2,44 (s, 3H), 2,71 -2,82 (m, 2H),
2,82-2,94 (m, 2H), 3,09-3,21 (m,
1H), 6,33 (dd, J = 7,91, 1,32 Hz, 1H), 6,94-7,07 (m,
2H), 7,18-7,24 (m, 3H), 7,37-7,44
(m, 1H), 7,47-7,54 (m, 2H). CLEM (procedimiento de
12 minutos) [M+H]+ = 281 a Rt 3,82 min (100%).
Ésta se preparó de una manera idéntica a (6a)
usando (5a) en bruto (650 mg) para dar el producto en bruto (198
mg), que se purificó por CLEM preparativa. El racemato purificado se
separó después en sus enantiómeros individuales usando HPLC quiral.
RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (isómero) \delta ppm 1,27 (s, 3H), 1,43
(a, 1H), 1,53-1,66 (m, 4H), 2,39 (s, 3H), 2,54 (t,
J = 6,12 Hz, 2H), 2,91 (d, J = 15,64 Hz, 1H), 2,98 (d, J = 15,64
Hz, 1H), 6,28 (dd, J = 7,91, 1,32 Hz, 1H), 6,97 (td, J = 7,21, 1,41
Hz, 1H), 7,03 (td, J= 7,68, 1,98 Hz, 1H), 7,14-7,22
(m, 3H), 7,36-7,44 (m, 1H),
7,46-7,53 (m, 2H). CLEM (procedimiento de 12
minutos) [M+H]^{+} = 309 a Rt 4,21 min (100%).
Ésta se preparó de una manera idéntica a (6a)
usando (5b) en bruto (528 mg) para dar el producto en bruto (105
mg), que se purificó por CLEM preparativa. El racemato purificado se
separó después en sus enantiómeros individuales usando HPLC quiral.
RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta 0,93 (t, J = 7,53 Hz,
3H), 1,56-1,75 (m, 6H), 1,91 (s a, 1H), 2,41 (s,
3H), 2,55-2,60 (m, 2H), 2,91 (d, J = 15,82, 1H),
3,02 (d, J = 15,82, 1H), 6,25-6,28 (m, 1H),
6,94-7,05 (m, 2H), 7,16-7,19 (m,
3H), 7,38-7,43 (m, 1H), 7,4-7,52 (m,
2H). RMNH (300 MHz, MeOD-d4) (isómero sal
D-tartrato) \delta 0,85 (t, J = 7,53 Hz, 3H),
1,45-1,75 (m, 6H), 2,57 (s, 2H),
2,83-2,89 (m, 2H), 3,01-3,06 (d, J =
16,01, 1H), 4,32 (s, 2H), 6,11 -6,14 (m, 1H),
6,89-6,97 (m, 2H), 7,09 (d, J = 7,16 Hz, 2H),
7,15-7,18 (m, 1H), 7,37 (t, J = 7,35 Hz, 1H), 7,46
(t, J = 7,35 Hz, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ =
323 a Rt 4,9 min (98%).
Procedimiento
B
Una mezcla agitada de
3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona
(1a) (4,41 g, 30 mmol), K_{2}CO_{3} (8,7 g, 63 mmol),
trans-ciclohexano-1,2-diamina
(720 \mul, 2 mmol) y 4-bromotolueno (15,4 g, 90
mmol) en 1,4-dioxano (30 ml) se calentó en una
atmósfera de nitrógeno a 125ºC durante 5 min para desoxigenar la
mezcla de reacción. Se añadió yoduro de cobre (I) (1,14 g, 2 mmol)
en una porción y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante
toda la noche a 125ºC. Después de enfriar a ta, la mezcla de
reacción se filtró a través de celite, se vertió en acetato de
etilo (100 ml) y se extrajo con agua. La capa orgánica se separó, se
secó sobre MgSO_{4} y se concentró. El tratamiento del residuo
con éter (200 ml) y la refrigeración (baño de hielo) dieron el
producto en forma de un sólido blanco después de la filtración (6,2
g, 87%).
Ésta se preparó a partir de (2a) (669 mg, 3
mmol) y 1-yodopropano (352 \mul, 1,2 equiv.) como
agente de alquilación. El producto en bruto (780 mg) se usó
directamente en la siguiente etapa.
Ésta se preparó a partir de (2c) (711 mg, 3
mmol) y 1-yodoetano (265 \mul, 1,2 equiv.) como
agente de alquilación. El producto en bruto (800 mg) se usó
directamente en la siguiente etapa.
Ésta se preparó a partir de (2c) (711 mg, 3
mmol) y 1-yodopropano (352 \mul, 1,2 equiv.) como
agente de alquilación. El producto en bruto (840 mg) se usó
directamente en la siguiente etapa.
Ésta se preparó a partir de (2c) (711 mg, 3
mmol) y 1-yodobutano (354 \mul, 1,1 equiv.) como
agente de alquilación. El producto en bruto (790 mg) se usó
directamente en la siguiente etapa.
Ésta se preparó a partir de (2c) (711 mg, 3
mmol) y 2-yodopropano (330 \mul, 1,1 equiv.) como
agente de alquilación. El producto en bruto (806 mg) se usó
directamente en la siguiente etapa.
A una solución de (3d) (800 mg, 2,7 mmol) en THF
anhidro (30 ml) a -78ºC en una atmósfera de nitrógeno se le añadió
LiHMDS (3 ml, solución 1 M en hexanos, 3 mmol) gota a gota durante
10 min. La mezcla de reacción se dejó a -78ºC durante 30 min y
después se añadió gota a gota una solución de bromuro de alilo (280
\mul, 3,2 mmol) en THF (1 ml). La mezcla de reacción se calentó
lentamente a ta, se inactivó con agua (2 ml) y se extrajo con
acetato de etilo (100 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre
MgSO_{4} y se concentró. El producto en bruto (920 mg) se usó
directamente en la siguiente etapa.
A una solución de (11b) (732 mg, 2,4 mmol) en
THF anhidro (25 ml) a 0ºC en una atmósfera de nitrógeno se le
añadió 9-BBN (12 ml, solución 0,5 M en THF, 6 mmol,
2,5 equiv.) gota a gota durante 10 min. La mezcla de reacción se
calentó a ta y se dejó agitar durante toda la noche. La solución
amarilla resultante se enfrió a 0ºC y después se inactivó
cuidadosamente con etanol (3 ml), seguido de NaOH ac. (1,8 ml,
solución 3 N). Finalmente, se añadió gota a gota H_{2}O ac. (1,8
ml, solución al 37%) manteniendo la temperatura interna de la mezcla
de reacción entre 5 y 10ºC. La mezcla de reacción se calentó a ta y
después se calentó a reflujo durante 90 min. La mezcla de reacción
se enfrió a ta, se vertió en acetato de etilo y agua y se extrajo.
La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se
concentró. El producto en bruto se purificó usando cromatografía
automatizada (sílice) (gradiente del 0 al 60% de acetato de
etilo/ciclohexano) para proporcionar (12b) en forma de un aceite
transparente (540 mg, 70%).
A una solución de (12b) (540 mg, 1,67 mmol) y
trietilamina (350 \mul, 2,5 mmol) en THF anhidro (20 ml) a 0ºC en
una atmósfera de nitrógeno se le añadió gota a gota una solución de
cloruro de metanosulfonilo (142 \mul, 1,8 mmol) en THF (1 ml). La
mezcla de reacción se calentó a ta y se agitó durante 3 h. La mezcla
de reacción se vertió en acetato de etilo y agua y se extrajo. La
capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró.
El mesilato en bruto (670 mg, 100%) se disolvió en etanol (10 ml) y
metilamina acuosa al 40% (5 ml) y se calentó a 65ºC en una
atmósfera de nitrógeno durante 2 h. La mezcla de reacción se enfrió,
se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo (100 ml). La
capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró.
El producto se purificó por SCX-2 para dar 384 mg
del racemato. El racemato se separó en sus enantiómeros
individuales usando HPLC quiral. Cada enantiómero se disolvió en
CH_{2}Cl_{2} (2 ml) y se trató con 1 equivalente de ácido
D-tartárico disuelto en un volumen mínimo de metanol
caliente. La solución resultante se concentró y el sólido se secó
al vacío para proporcionar la sal D-tartrato de la
amina. RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta 0,92 (t, J =
7,44 Hz, 3H), 1,49-1,75 (m, 6H), 1,81 (a, 1H), 2,40
(s, 6H), 2,57 (t, J = 6,59 Hz, 2H), 2,89 (d, J = 15,82 Hz, 1H), 3,00
(d, J = 15,82 Hz, 1H), 6,29 (d, J = 7,91 Hz, 1H),
6,92-7,08 (m, 4H), 7,16 (d, J = 7,16 Hz, 1H), 7,29
(d, J = 7,91 Hz, 2H). RMNH (300 MHz, MeOD-d4)
(isómero sal D-tartrato) 8 0,93 (t, J = 7,44 Hz,
3H), 1,54-1,84 (m, 6H), 2,42 (s, 3H), 2,66 (s, 3H),
2,91-3,00 (m, 3H), 3,11 (d, J = 15,83 Hz, 1H), 4,41
(s, 2H), 6,22-6,27 (m, 1H),
6,80-7,07 (m, 4H), 7,21 -7,27 (m, 1H), 7,36 (d, J =
7,91 Hz, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 337 a Rt
5,21 min (100%).
Ésta se preparó a partir de (3c) (780 mg, 2,9
mmol) usando la misma secuencia de síntesis descrita en el
procedimiento B (3d a 13b) para dar 233 mg del racemato. El
racemato se separó en sus enantiómeros individuales usando HPLC
quiral y cada enantiómero se convirtió en su sal
D-tartrato como se ha descrito para (13b). RMNH (300
MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta 0,88 (t, J = 7,16 Hz, 3H),
1,26-1,48 (m, 2H), 1,50-1,78 (m,
7H), 2,40 (s, 3H), 2,56 (t, J = 6,59 Hz, 2H), 2,92 (d, J = 15,83
Hz, 1H), 3,01 (d, J = 15,83 Hz, 1H), 6,25-6,28 (m,
1H), 6,94-7,05 (m, 2H), 7,16-7,19
(m, 3H), 7,37-7,42 (m, 1H),
7,47-7,52 (m, 2H). RMNH (300 MHz,
MeOD-d4) (isómero sal D-tartrato)
\delta 0,77-0,82 (t, J = 7,06 Hz, 3H),
1,24-1,35 (m, 2H), 1,44-1,51 (m,
2H), 1,69 (s a, 3H), 2,56 (s, 3H), 2,84-2,89 (m,
3H), 3,01-3,06 (d, J = 15,83 Hz, 1H),
3,20-3,22 (c, J = 1,55 Hz, 2H), 4,30 (s, 2H),
6,11-6,14 (dd, J = 7,72, 2,26 Hz, 1H),
6,89-6,97 (m, 2H), 7,07-7,10 (m,
2H), 7,14-7,17 (m, 1H), 7,34-7,39
(t, J = 7,35 Hz, 1H), 7,43-7,48 (t, J = 7,35 Hz,
2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]^{+} = 337 a
Rt 5,2 min (100%).
Ésta se preparó a partir de (3e) (840 mg, 2,6
mmol) usando la misma secuencia de síntesis descrita en el
procedimiento B (3d a 13b) para dar 393 mg del racemato. El
racemato se separó en sus enantiómeros individuales usando HPLC
quiral y cada enantiómero se convirtió en su sal
D-tartrato como se ha descrito para (13b). RMNH (300
MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta 0,88 (t, J = 7,16 Hz, 3H),
1,20-1,75 (m, 11H), 2,39 (s, 3H), 2,40 (s, 3H),
2,90 (d, J = 15,64 Hz, 1H), 2,99 (d, J = 15,64 Hz, 1H), 6,29 (d, J =
7,72 Hz, 1H), 6,93-7,07 (m, 4H),
7,14-7,16 (m, 1H), 7,25-7,31 (m,
2H). RMNH (300 MHz, MeOD-d4) (isómero sal
D-tartrato) \delta 0,91 (t, J = 7,06 Hz, 3H),
1,28-1,85 (m, 8H), 2,44 (s, 3H), 2,68 (s, 3H),
2,94-2,99 (m, 3H), 3,14 (d, J = 15,82 Hz, 1H), 4,41
(s, 2H), 6,25-6,28 (m, 1H),
7,02-7,07 (m, 4H), 7,25-7,28 (m,
1H), 7,38 (d, J = 7,91 Hz, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos)
[M+H]+ = 351 a Rt 5,6 min
(100%).
(100%).
Ésta se preparó a partir de (3f) (790 mg, 2,7
mmol) usando la misma secuencia de síntesis descrita en el
procedimiento B (3d a 13b) para dar 334 mg del racemato. El
racemato se separó en sus enantiómeros individuales usando HPLC
quiral y cada enantiómero se convirtió en su sal
D-tartrato como se ha descrito para (13b). RMNH (300
MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta 0,87 (t, J = 6,97 Hz, 3H),
1,20-1,40 (m, 4H), 1,55-1,74 (m,
6H), 2,40 (s, 3H), 2,40 (s, 3H), 2,55 (t, J = 6,78 Hz, 3H), 2,91
(d, J = 15,63 Hz, 1H), 2,99 (d, J = 15,63 Hz, 1H),
6,28-6,31 (m, 1H), 6,93-7,00 (m,
2H), 7,02-7,06 (m, 2H), 7,14-7,16
(m, 1H), 7,29 (d, J = 8,07 Hz, 2H). RMNH (300 MHz,
MeOD-d4) (isómero sal D-tartrato)
\delta 0,90 (t, J = 6,97 Hz, 3H), 1,20-1,85 (m,
10H), 2,44 (s, 3H), 2,68 (s, 3H), 2,94-2,99 (m,
3H), 3,14 (d, J = 15,82 Hz, 1H), 4,42 (s, 2H),
6,25-6,28 (m, 1H), 7,00-7,07 (m,
4H), 7,25-7,28 (m, 1H), 7,38 (d, J = 7,91 Hz, 2H).
CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 365 a Rt 5,9 min
(100%).
Ésta se preparó a partir de (3 g) (806 mg, 2,89
mmol) usando la misma secuencia de síntesis descrita en el
procedimiento B (3d a 13b) para dar 307 mg del racemato. RMNH (300
MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta ppm 0,92 (dd, J = 8,95, 6,88
Hz, 6H), 1,39-1,88 (m, 5H),
2,12-2,23 (m, 1H), 2,39 (s, 3H), 2,40 (s, 3H), 2,56
(t, J = 6,78 Hz, 2H), 2,94 (d, J = 15,92 Hz, 1H), 3,00 (d, J =
15,92 Hz, 1H), 6,28 (dd, J = 7,82, 1,04 Hz, 1H),
6,92-7,06 (m, 4H), 7,16 (dd, J = 6,97, 1,13 Hz, 1H),
7,29 (d, J = 7,91 Hz, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos)
[M+H]^{+} = 351 a Rt 5,55 min (100%).
Ésta se preparó a partir de (1c) usando la misma
secuencia de síntesis descrita en procedimiento B para dar 205 mg
del racemato. El racemato se separó en sus enantiómeros individuales
usando HPLC quiral y cada enantiómero se convirtió en su sal
D-tartrato como se ha descrito para (13b). RMNH (300
MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta ppm 0,91 (t, J = 7,44 Hz, 3H),
1,50-1,75 (m, 6H), 2,15 (a, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,41
(s, 3H), 2,55-2,64 (m, 2H), 2,85 (d, J = 16,01 Hz,
1H), 2,97 (d, J = 16,01 Hz, 1H), 6,23 (d, J = 8,85 Hz, 1H), 6,97
(dd, J = 8,67, 2,45 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 8,29 Hz, 2H), 7,14 (d, J
= 2,26 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 8,10 Hz, 2H). RMNH (300 MHz,
MeOD-d4) (isómero, sal D-tartrato)
\delta ppm 0,84 (t, J = 7,35 Hz, 3H), 1,40-1,75
(m, 6H), 2,32 (s, 3H), 2,57 (s, 3H), 2,80-2,92 (m,
3H), 3,01 (d, J = 16,20 Hz, 1H), 4,31 (s, 2H), 6,13 (d, J = 8,67 Hz,
1H), 6,92-6,98 (m, 3H), 7,19 (d, J = 2,26 Hz, 1H),
7,26 (d, J = 7,91 Hz, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos)
[M+H]^{+} = 371/373 a Rt 5,75 min (100%).
Ésta se preparó a partir de (1c) usando la misma
secuencia de síntesis descrita en el procedimiento B para dar 222
mg del racemato, que se purificó por CLEM preparativa. RMNH (300
MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta ppm 0,84 (t, J = 7,44 Hz, 3H),
1,40-1,70 (m, 6H), 2,35 (a, 4H),
2,49-2,56 (m, 2H), 2,80 (d, J = 16,01 Hz, 1H), 2,90
(d, J = 16,01 Hz, 1H), 6,14 (d, J = 8,67 Hz, 1H), 6,93 (dd, J =
8,67, 2,26 Hz, 1H), 7,04 (ddd, J = 9,04, 2,83, 2,45 Hz, 2H), 7,09
(d, J = 2,26 Hz, 1H), 7,36-7,43 (m, 2H). CLEM
(procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 391/393 a Rt 5,67 min
(92%).
Procedimiento
C
Un matraz sin estrechamiento en la boca de 5
litros equipado con un agitador de aire y una paleta, termómetro,
burbujeador de nitrógeno y un embudo de goteo de equalización de
presión se cargó con hidruro sódico (25,5 g, dispersión de aceite
al 60%, 0,637 mol) y éter de petróleo 40-60 (100
ml). La mezcla se agitó brevemente y después se dejó en reposo en
una atmósfera de nitrógeno. Después de decantar el líquido
sobrenadante, el recipiente se cargó con dimetilformamida (2
litros). La suspensión bien agitada se enfrió a
7-8ºC usando un baño de hielo externo. Después se
añadió gota a gota una solución de
3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona
(1a) (73,6 g, 0,5 mol) en dimetilformamida anhidra (500 ml) durante
25 min. La mezcla se agitó a 7-8ºC durante 30 min.
Después se añadió cloruro de 4-metoxibencilo (102 g,
0,65 mol, 1,3 equiv.) durante 10 min. La mezcla de reacción se dejó
en agitación durante 2 h. a <10ºC, después se dejó calentar hasta
temperatura ambiente y se agitó durante toda la noche. La mezcla de
reacción agitada se inactivó con hielo/agua (2,5 litros) y se enfrió
a 15ºC usando un baño de hielo externo. El sólido blanco se aisló
por filtración y se lavó con agua. Después de secar al vacío a 40ºC
durante toda la noche se obtuvo el producto (113,4 g, 85%).
A una solución de (14) (20 g, 75 mmol) en THF
anhidro (400 ml) a -78ºC en una atmósfera de nitrógeno se le
añadió LiHMDS (78,6 ml, solución 1 M en hexanos, 78,6 mmol) gota a
gota durante 10 min. La mezcla de reacción se dejó a -78ºC durante
30 min y después se añadió gota a gota una solución de yoduro de
metilo (5,13 ml, 83 mmol) en THF (5 ml). La mezcla de reacción se
calentó lentamente a ta, se inactivó con agua (50 ml) y se extrajo
con acetato de etilo (400 ml). La capa orgánica se separó, se secó
sobre MgSO_{4} y se concentró para dar el producto en forma de un
sólido amarillo (21 g, 100%) que se usó directamente en la siguiente
etapa.
A una solución de (15) (20,5 g, 73 mmol) en THF
anhidro (400 ml) a -78ºC en una atmósfera de nitrógeno se le
añadió gota a gota LiHMDS (80 ml, solución 1 M en hexanos, 80 mmol)
durante 10 min. La mezcla de reacción se dejó a -78ºC durante 30
min y después se añadió gota a gota una solución de bromuro de alilo
(7,6 ml, 87 mmol) en THF (5 ml). La mezcla de reacción se calentó
lentamente a ta, se inactivó con agua (100 ml) y se extrajo con
acetato de etilo (400 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre
MgSO_{4} y se concentró para dar el producto en forma de un
aceite naranja (23,9 g, 100%) que se usó directamente en la
siguiente etapa.
A una solución de (16b) (23,9 g, 74 mmol) en THF
anhidro (400 ml) a 0ºC en una atmósfera de nitrógeno se le añadió
gota a gota 9-BBN (370 ml, solución 0,5 M en THF,
185 mmol, 2,5 equiv.) durante 10 min. La mezcla de reacción se
calentó a ta y se dejó agitar durante toda la noche. La solución
amarilla resultante se enfrió a 0ºC y después se inactivó
cuidadosamente con etanol (95 ml), seguido de NaOH ac. (60 ml,
solución 3 N). Finalmente, se añadió gota a gota H_{2}O_{2} ac.
(60 ml, solución al 37%) manteniendo la temperatura interna de la
mezcla de reacción entre 5 y 10ºC. La mezcla de reacción se calentó
a ta y después se calentó a reflujo durante 90 min. La mezcla de
reacción se enfrió a ta, se vertió en acetato de etilo y agua y se
extrajo. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se
concentró. El producto en bruto se purificó usando cromatografía
automatizada (sílice) (gradiente de 0 a 80% de acetato de
etilo/ciclohexano) para proporcionar el producto en forma de un
aceite transparente (21,3 g, 84%).
A una solución de (17b) (18 g, 53 mmol) y
trietilamina (11,1 ml, 79 mmol) en THF anhidro (450 ml) a 0ºC en
una atmósfera de nitrógeno se le añadió gota a gota una solución de
cloruro de metanosulfonilo (4,52 ml, 58 mmol) en THF (50 ml). La
mezcla de reacción se calentó a ta y se agitó durante 3 h. La mezcla
de reacción se vertió en acetato de etilo y agua y se extrajo. La
capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró.
El mesilato en bruto (22 g, 99%) se disolvió en etanol (500 ml) y
metilamina acuosa al 40% (200 ml) y se calentó a 65ºC en una
atmósfera de nitrógeno durante 2 h. La mezcla de reacción se enfrió,
se concentró y después se extrajo con acetato de etilo (300 ml). La
capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre MgSO_{4}
y se concentró para dar el producto en bruto (17,8 g, 96%).
Una mezcla de (18b) (17,8 g, 50,5 mmol) y anisol
(5,5 ml, 50,5 mmol) en ácido trifluoroacético (250 ml) se calentó a
65ºC en una atmósfera de nitrógeno durante 2 h. La mezcla de
reacción se concentró al vacío y el residuo se disolvió en metanol
(10 ml). La solución de metanol se aplicó a una columna
SCX-2 (300 g, prelavada con metanol) y la columna
se lavó con metanol (aproximadamente 1 litro) hasta que la solución
se hizo incolora. El producto se eluyó con NH_{3} 2 N en metanol
(500 ml) y la solución básica se concentró para proporcionar
3-metil-3-(3-metilaminopropil)-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona
(9 g, 77%).A una solución de esta amina (8,6 g, 37 mmol) en THF
anhidro (350 ml) a 0ºC se le añadió gota a gota una solución de
dicarbonato de di-terc-butilo (8,34 g, 97%, 50,5 mmol) en
THF (20 ml). La mezcla de reacción se calentó a ta y se agitó
durante 3 h. La mezcla de reacción se vertió en acetato de etilo
(400 ml) y agua (200 ml) y se extrajo. La capa orgánica se separó,
se secó sobre MgSO_{4} y se concentró para dar el producto en
forma de un sólido amarillo (12,26 g, 100%). Este material se usó
sin purificación adicional.
Ésta se preparó a partir de (14) usando la misma
secuencia de síntesis descrita en el procedimiento C.
A una solución de (19a) (2,75 g, 8,6 mmol) en
DMF anhidra (25 ml) a 0ºC se le añadió gota a gota una solución de
N-clorosuccinimida (1,17 g, 8,7 mmol) en DMF anhidra
(3 ml). La mezcla de reacción se calentó a ta, se agitó durante
toda la noche y después se vertió en acetato de etilo (100 ml) y
agua (50 ml) y se extrajo. La capa orgánica se separó, se secó
sobre MgSO_{4} y se concentró para proporcionar el producto en
forma de un aceite amarillo (3 g, 98%) que se usó sin purificación
adicional.
Una mezcla agitada de (19a) (100 mg. 0,31 mmol),
K_{2}CO_{3} (92 mg, 0,66 mmol),
trans-ciclohexano-1,2-diamina
(8 \mul, 0,06 mmol) y 4-bromotolueno (162 mg,
0,94 mmol) en 1,4-dioxano (0,5 ml) se calentó en una
atmósfera de nitrógeno a 125ºC durante 5 min para desoxigenar la
mezcla de reacción. Se añadió yoduro de cobre (I) (12 mg, 0,06
mmol) en una porción y la mezcla de reacción se calentó a reflujo
durante toda la noche a 125ºC. Después de enfriar a ta, la mezcla
de reacción se vertió en acetato de etilo (100 ml) y se extrajo con
agua. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se
concentró. El producto en bruto se purificó usando cromatografía
automatizada (sílice) (gradiente de 0 a 80% de acetato de
etilo/ciclohexano) para proporcionar el producto protegido con Boc
(70 mg, 54%). A una solución de este material (70 mg, 0,17 mol) en
DCM (2 ml), se le añadió ácido trifluoroacético (197 \mul, 2,55
mmol, 15 equiv.). La mezcla de reacción se dejó en agitación a
temperatura ambiente durante 90 min, se concentró al vacío, se
vertió en acetato de etilo (50 ml) y NaHCO_{3} ac. (20 ml) y se
extrajo. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4}, se
concentró y el producto en bruto se purificó por
SCX-2 para proporcionar el racemato (40 mg, 75%). El
racemato se separó en sus enantiómeros individuales usando HPLC
quiral. RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta
1,49-1,77 (m, 3H), 1,86-1,96 (m,
1H), 2,34 (s a, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,43 (s, 3H),
2,61-2,66 (t, J = 6,88 Hz, 2H),
2,68-2,78 (m, 1H), 2,83-2,90 (m,
1H), 3,09-3,17 (m, 1H), 6,36 (dd, J = 7,7 Hz, 1,0
Hz, 1H), 6,94-7,03 (m, 2H), 7,08 (d, J = 8,2 Hz,
2H), 7,13-7,17 (m, 1H), 7,29 (d, J = 8,1 Hz, 2H);
RMNH (300 MHz, MeOD-d4) (isómero, sal
D-tartrato) \delta 1,64 (s a, 1H), 1,89 (s a,
3H), 2,41 (s, 3H), 2,70 (s, 3H), 2,75-2,87 (m, 1H),
2,91-3,06 (m, 3H), 3,20 (dd, J = 5,9, 15,26 Hz,
1H), 4,45 (s, 2H), 6,32-6,35 (m, 1H),
7,00-7,12 (m, 4H), 7,28-7,30 (m,
1H), 7,37 (d, J = 8,1 Hz, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos)
[M+H]+ = 309 a Rt 4,7 min (100%).
Ésta se preparó a partir de (20a) (132 mg, 0,29
mmol) usando los mismos procedimientos descritos para (21a) para
proporcionar el racemato (86 mg). RMNH (300 MHz, CDCl_{3})
(racemato e isómero) \delta 1,50-1,57 (m, 1H),
1,62-1,90 (m, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,41 (s, 3H),
2,63-2,82 (m, 5H), 3,00-3,07 (m,
1H), 6,22 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,92 (dd, J = 2,45, 8,66 Hz, 1H),
6,99 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,11 (d, J = 2,25 Hz, 1H), 7,23 (d, J =
8,1 Hz, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]^{+} =
343/345 a Rt 5,2 min (96%).
Ésta se preparó a partir de (19a) (200 mg, 0,63
mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para
(21a) para proporcionar el racemato (83 mg). RMNH (300 MHz,
CDCl_{3}) (racemato) \delta 1,60-1,70 (m, 1H),
1,92 (a, 3H), 2,64 (s a, 3H), 2,72-2,74 (m, 1H),
2,86-3,09 (m, 4H), 6,35 (dd, J = 7,72, 1,510 Hz,
1H), 6,94-7,23 (m, 6H), 7,43-7,51
(m, 1H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 313 a Rt 4,4
min (100%).
Ésta se preparó a partir de (19a) (122 mg, 0,38
mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para
(21a) para proporcionar el producto en bruto, que se purificó por
SCX-2 para dar el racemato (70 mg). RMNH (300 MHz,
CDCl_{3}) (racemato) \delta 1,49-1,73 (m, 3H),
1,89 (m, 2H), 2,43 (s, 3H), 2,62 (t, J = 6,79, 7,15 Hz, 2H),
2,68-2,78 (m, 1H), 2,83-2,93 (m,
1H), 3,14 (dd, J = 15,43,5,37 Hz, 1H), 6,34 (dd, J = 7,73,1,14 Hz,
1H), 6,96-7,09 (m, 2H), 7,14-7,21
(m, 3H), 7,45-7,48 (m, 2H). CLEM (procedimiento de
12 minutos) [M+H]^{+} = 329/331 a Rt 5,1 min (90%).
Ésta se preparó a partir de (19a) (150 mg, 0,47
mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para
(21a) para proporcionar el producto en bruto, que se purificó por
SCX-2 para dar el racemato (111 mg). RMNH (300 MHz,
CDCl_{3}) (racemato) \delta 1,49-1,75 (m, 3H),
1,83 (s a, 1H), 1,85-1,97 (m, 1H), 2,43 (s, 3H),
2,63 (t, J = 13,56, 6,59 Hz, 2H), 2,68-2,77 (m, 1H),
2,83-2,94 (m, 1H), 3,13 (dd, J = 15,45, 5,28 Hz,
1H), 6,36 (dd, J = 7,73, 0,93 Hz, 1H), 6,99-7,11 (m,
3H), 7,20-7,21 (m, 1H), 7,35 (d, J = 2,26 Hz, 1H),
7,57 (d, J= 8,48 Hz, 1H).CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ =
363/365 a Rt 5,4 min (92%).
Ésta se preparó a partir de (19a) (200 mg, 0,63
mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para
(21a) para proporcionar el producto en bruto, que se purificó por
SCX-2 para dar el racemato (138 mg). RMNH (300 MHz,
CDCl_{3}) (racemato) \delta 1,50-1,77 (m,
3H), 1,89-1,96 (m, 2H), 2,44 (s, 3H), 2,64 (t, J =
6,89 Hz, 2H), 2,69-2,78 (m, 1H),
2,84-2,93 (m, 1H,), 3,10-3,17 (m,
1H), 6,33-6,36 (m, 1H), 6,97-7,10
(m, 2H), 7,11-7,15 (m, 1H),
7,21-7,24 (m, 2H), 7,37-7,47 (m,
2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]^{+} =
329/331 a Rt 5,01 min (90%).
Ésta se preparó a partir de (19a) (200 mg, 0,63
mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para
(21a) para proporcionar el producto en bruto, que se purificó por
SCX-2 para dar el racemato (48 mg). RMNH (300 MHz,
CDCl_{3}) (racemato) \delta 1,26-1,28 (m, 1H),
1,92 (m, 2H), 2,63 (s a, 1H), 2,72 (m, 1H),
2,85-3,08 (m, 2H), 3,48-3,51 (m,
5H), 6,32-6,34 (d, J = 7,91 Hz, 1H), 7,01 -7,70 (m,
2H), 7,16-7,19 (d, J = 7,16 Hz, 5H), 9,46 (s a,
1H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 313 a Rt 4,5 min
(100%).
Ésta se preparó a partir de (19a) (148 mg, 0,46
mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para
(21a) para proporcionar el racemato (61 mg). RMNH (300 MHz,
CDCl_{3}) (racemato) 8 1,25-1,30 (m, 1H),
1,52-1,67(m, 1H), 1,69-1,80
(m, 2H), 1,87-1,98 (m, 1H), 2,46 (s, 3H),
2,67-2,92 (m, 9H), 3,11-3,16 (m,
1H), 6,34-6,37 (m, 1H), 6,94-7,06
(m, 2H), 7,09-7,11 (d, J = 8,1 Hz, 2H),
7,17-7,20 (d, J = 7,35 Hz, 1H),
7,30-7,33 (d, J = 8,28 Hz, 2H). CLEM (procedimiento
de 12 minutos) [M+H]^{+} = 323 a Rt 5,4 min (98%).
Ésta se preparó a partir de (19b) (806 mg, 2,89
mmol) usando los mismos procedimientos que los descritos para (21a)
para proporcionar el racemato. El racemato se separó en sus
enantiómeros individuales usando HPLC quiral. RMNH (300 MHz,
CDCl_{3}) (racemato e isómero) \delta 1,24 (s, 3H),
1,60-1,65 (m, 4H), 2,40 (s, 3H), 2,43 (s, 3H),
2,60-2,65 (m, 2H), 2,87 (d, J = 15,73 Hz, 1H), 2,98
(d, J = 15,73 Hz, 1H), 3,46 (a, 1H), 6,30 (dd, J = 7,91, 1,13 Hz,
1H), 6,90-7,05 (m, 2H), 7,05 (d, J = 8,29 Hz, 2H),
7,10-7,20 (m, 1H), 7,29 (d, J = 7,91 Hz, 2H). CLEM
(procedimiento de 12 minutos) [M+H] = 323 a Rt 5,06 min (100%).
Ésta se preparó a partir de (19b) (100 mg, 0,30
mmol) usando los mismos procedimientos que los descritos para (21a)
para proporcionar el racemato (97 mg). RMN 1H (300 MHz, CDCl_{3})
(racemato) \delta ppm 1,25 (s, 3H), 1,55-1,65 (m,
4H), 2,41 (s, 3H), 2,58 (m, 2H), 2,89 (d, J = 15,82 Hz, 1H), 2,98
(d, J = 15,82 Hz, 1H), 3,12 (a, 1H), 6,29 (dd, J = 7,91, 0,94 Hz,
1H), 6,95-7,10 (m, 2H), 7,14 (d, J = 8,67 Hz, 2H),
7,15 (m, 1H), 7,45 (d, J = 8,67 Hz, 2H). CLEM (procedimiento de 12
minutos) [M+H]+ = 343/345 a Rt 5,09 min (100%).
Ésta se preparó a partir de (19b) (100 mg, 0,30
mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para
(21a) para proporcionar el producto en bruto, que se purificó por
SCX-2 para dar el racemato (100 mg). RMNH (300 MHz,
CDCl_{3}) (racemato) \delta ppm 1,25 (s, 3H),
1,55-1,65 (m, 4H), 2,41 (s, 3H),
2,50-2,60 (m, 2H), 2,89 (d, J = 15,45 Hz, 1H), 2,90
(s, 1H), 2,98 (d, J = 15,45 Hz, 1H), 6,30 (dd, J = 7,91, 1,13 Hz,
1H), 6,90-7,10 (m, 4H), 7,18 (dd, J = 7,16, 1,32 Hz,
1H), 7,22-7,35 (m, 1H). CLEM (procedimiento de 12
minutos) [M+H]^{+} = 345 a Rt 4,85 min (97%).
Ésta se preparó a partir de (19b) (100 mg, 0,30
mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para
(21a) para proporcionar el producto en bruto, que se purificó por
SCX-2 para dar el racemato (90 mg). RMNH (300 MHz,
CDCl_{3}) (racemato) \delta ppm 1,26 (s, 3H),
1,50-1,70 (m, 4H), 1,75 (s, 1H), 2,38 (s, 3H), 2,39
(s, 3H), 2,50-2,60 (m, 2H), 2,89 (d, J = 15,64 Hz,
1H), 2,98 (d, J = 15,64 Hz, 1H), 6,30 (dd, J = 7,82,1,04 Hz, 1H),
6,90-7,07 (m, 4H), 7,18 (dd, J = 13,66, 7,63 Hz,
2H), 7,37 (t, J = 7,63 Hz, 1H). CLEM (procedimiento de 12 minutos)
[M+H]+ = 323 a Rt 5,09 min (98%).
Ésta se preparó a partir de (19b) (100 mg, 0,30
mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para
(21a) para proporcionar el producto en bruto, que se purificó por
SCX-2 para dar el racemato (95 mg). RMNH (300 MHz,
CDCl_{3}) (racemato) \delta ppm 1,26 (s, 3H),
1,50-1,65 (m, 4H), 2,40 (s, 3H),
2,50-2,60 (m, 2H), 2,82 (a, 1H), 2,89 (d, J = 15,82
Hz, 1H), 2,97 (d, J = 15,82 Hz, 1H), 6,34 (dd, J = 8,01,1,04 Hz,
1H), 6,74-6,83 (m, 2H), 6,83-6,92
(m, 1H), 6,97-7,13 (m, 2H), 7,19 (dd, J = 7,06, 1,22
Hz, 1H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]^{+} =
345 a Rt 4,87 min, (97%).
Ésta se preparó a partir de (20a) (285 mg, 0,8
mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para
(21a) para proporcionar el producto en bruto, que se purificó por
CLEM preparativa para dar el racemato (62 mg). RMNH (300 MHz,
CDCl_{3}) (racemato) \delta 1,49-1,76 (m, 3H),
1,86-1,95 (m, 1H), 2,33 (s a, 1H), 2,44 (s, 3H),
2,61 -2,95 (m, 4H), 3,09-3,16 (m, 1H),
6,24-6,27 (d, J = 8,67 Hz, 1H), 6,99 (dd, J = 8,67,
2,26 Hz, 1H), 7,17-7,19 (m, 3H),
7,39-7,44 (m, 1H), 7,47-7,52 (m,
2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 329/331 a Rt 5,04
min (93%).
Ésta se preparó a partir de (20a) (160 mg, 0,45
mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para
(21a) para proporcionar el producto en bruto, que se purificó por
CLEM preparativa para dar el racemato (52 mg). RMNH (300 MHz,
CDCl_{3}) (racemato) \delta 1,57-1,67 (m, 1H),
1,73-1,75 (m, 2H), 1,87-1,9 (m,
1H), 2,47 (s, 2H), 2,64 (s, 1H), 2,68-2,73 (m, 2H),
2,81-2,89 (m, 1H), 3,07-3,13 (m,
3H), 6,27 (d, J = 8,48 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 8,48 Hz, 1H), 7,14 (d,
J = 8,29 Hz, 2H), 7,19 (s, 1H), 7,47 (d, J = 8,29 Hz, 2H). CLEM
(procedimiento de 12 minutos) [M+H]^{+} = 363/365 a Rt 5,4
min (72%).
Ésta se preparó a partir de (20b) (490 mg, 1,34
mmol) usando los mismos procedimientos que los descritos para (21a)
para proporcionar el racemato (470 mg). El racemato se separó en sus
enantiómeros individuales usando HPLC quiral. RMNH (300 MHz,
CDCl_{3}) (racemato) \delta 1,25 (s, 3H),
1,50-1,65 (m, 4H), 2,39 (s, 3H), 2,40 (s, 3H),
2,50-2,60 (m, 3H), 2,86 (d, J = 16,01 Hz, 1H), 2,94
(d, J= 16,01 Hz, 1H), 6,24 (d, J = 8,67 Hz, 1H), 6,97 (dd, J =
8,76, 2,35 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 8,10 Hz, 2H), 7,14 (d, J = 2,26 Hz,
1H), 7,29 (d, J = 7,91 Hz, 2H); RMNH (300 MHz,
MeOD-d4) (isómero sal
hemi-D-tartrato) \delta 1,15 (s,
3H), 1,50-1,75 (m, 4H), 2,32 (s, 3H), 2,51 (s, 3H),
2,78 (a, 2H), 2,84 (d, J = 16,20 Hz, 1H), 2,98 (m, 1H),
3,15-3,25 (m, 2H), 4,22 (s, 1H), 6,14 (d, J = 8,85
Hz, 1H), 6,90-6,70 (m, 3H), 7,19 (d, J = 2,26 Hz,
1H), 7,25 (d, J = 7,91 Hz, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos)
[M+H]+ = 357/359 a Rt 5,43 min (100%).
Ésta se preparó a partir de (20b) (490 mg, 1,34
mmol) usando los mismos procedimientos que los descritos para (21a)
para proporcionar el racemato (425 mg). RMNH (300 MHz, CDCl_{3})
(racemato) \delta ppm 1,25 (s, 3H), 1,50-1,65 (m,
4H), 2,39 (s, 3H), 2,40 (a, 1H), 2,50-2,60 (m, 2H),
2,87 (d, J = 16,20 Hz, 1H), 2,95 (d, J = 16,20 Hz, 1H), 6,23 (d, J
= 8,85 Hz, 1H), 7,00 (dd, J = 8,57, 2,35 Hz, 1H),
7,05-7,20 (m, 3H), 7,40-7,50 (m,
2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 377/379 a Rt 5,26
min (94%).
Ésta se preparó a partir de (19b) (200 mg, 0,60
mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para
(21a) para proporcionar el producto en bruto, que se purificó por
SCX-2 para dar el racemato (125 mg). RMNH (300 MHz,
CDCl_{3}) (racemato) \delta ppm 1,25 (s, 3H),
1,50-1,65 (m, 4H), 2,39 (s, 3H),
2,50-2,60 (a, 2H), 2,88 (d, J = 16,20 Hz, 1H), 2,97
(d, J = 16,20 Hz, 1H), 3,17 (a, 1H), 6,58 (dd, J = 8,01, 0,85 Hz,
1H), 6,89 (dd, J = 3,58, 1,32 Hz, 1H), 6,95-7,15 (m,
3H), 7,16 (d, J = 7,16 Hz, 1H), 7,32 (dd, J = 5,65, 1,32 Hz, 1H).
CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+= 315 a Rt 4,35 min
(98%).
Ésta se preparó a partir de (19b) (200 mg, 0,60
mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para
(21a) para proporcionar el producto en bruto, que se purificó por
SCX-2-2 para dar el racemato (128
mg). RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,24 (s, 3H),
1,50-1,65 (m, 4H), 2,40 (s, 3H),
2,50-2,60 (m, 2H), 2,87 (d, J = 15,82 Hz, 1H), 2,96
(d, J = 15,82 Hz, 1H), 3,07 (a, 1H), 6,45 (dd, J= 8,10, 0,94 Hz,
1H), 6,92 (dd, J = 5,09, 1,32 Hz, 1H), 6,98 (td, J = 7,35, 1,13 Hz,
1H), 7,07 (td, J = 7,77, 1,60 Hz, 1H), 7,16 (d, J = 7,35 Hz, 1H),
7,22 (dd, J = 3,20, 1,32 Hz, 1H), 7,41 (dd, J = 5,09, 3,20 Hz, 1H).
CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 315 a Rt 4,29 min
(100%).
\newpage
Procedimiento
D
Etapa
(i)
A una solución de (20c) (2,7 g. 6,57 mmol) en
DMF (40 ml) se le añadió en porciones hidruro sódico (340 mg,
dispersión al 60% en aceite mineral, 8,55 mmol, 1,3 equiv.) a 0ºC.
La mezcla de reacción se dejó durante 30 min a esta temperatura y
después se añadió gota a gota cloruro de
4-metoxibencilo (1,16 ml, 8,55 mmol, 1,3 equiv.) en
DMF (1 ml) durante 10 min. La mezcla de reacción se calentó a ta
lentamente y después de 1 h se vertió en acetato de etilo (200 ml)
y se extrajo con agua (3 x 50 ml). La capa orgánica se separó, se
secó sobre MgSO_{4} y se concentró al vacío. El producto en bruto
se purificó usando cromatografía automatizada (sílice) (gradiente
de 0 a 80% de acetato de etilo/ciclohexano) para proporcionar el
precursor 6-bromo protegido con
4-metoxibencilo (2,2 g, 63%).
Etapa
(ii)
El producto de la Etapa (i) (100 mg, 0,23 mmol),
ácido fenilborónico (85 mg, 0,70 mmol, 3 equiv.), K_{2}CO_{3}
(138 mg, 1 mmol, 4,3 equiv.) y Pd(PPh_{3})_{4} (11
mg, 0,009 mmol, 0,04 equiv.) se suspendieron en etanol (1 ml) y
agua (0,6 ml). La mezcla de reacción se calentó a 80ºC durante toda
la noche, se enfrió a ta y se filtró a través de celite. El
filtrado se vertió en acetato de etilo (100 ml) y agua (50 ml) y se
extrajo. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se
concentró para proporcionar el producto (23) (120 mg, 98%) que se
usó sin purificación adicional.
Etapas (iii) y
(iv)
Una mezcla de (23) (120 mg, 0,23 mmol) y anisol
(25 \mul, 0,23 mmol) en ácido trifluoroacético (2,3 ml) se
calentó a 65ºC en una atmósfera de nitrógeno durante 4 h. La mezcla
de reacción se concentró al vacío y el residuo se disolvió en
metanol (2 ml). La solución de metanol se aplicó a una columna
SCX-2 (5 g) y la columna se lavó con metanol (50
ml). El producto se eluyó con Et_{3}N 2 N en metanol (50 ml) y la
solución básica se concentró para proporcionar
3-Metil-3-(3-metilamino-propil)-6-fenil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona
(72 mg, 100%). A una solución de esta amina (72 mg, 0,23 mmol) en
THF anhidro (2 ml) a 0ºC se le añadió dicarbonato de
di-terc-butilo (53 mg, 97%, 0,24 mmol) en una porción. La
mezcla de reacción se calentó a ta y se agitó durante 3 h. La
mezcla de reacción se vertió en acetato de etilo (25 ml) y agua (10
ml) y se extrajo. La capa orgánica se separó, se secó sobre
MgSO_{4} y se concentró para dar el precursor protegido con Boc
(95 mg, 100%). Este material se usó sin purificación adicional.
Ésta se preparó a partir del precursor protegido
con Boc anterior (95 mg, 0,23 mmol) usando el mismo procedimiento
en dos etapas descrito para el Procedimiento C (19a a 21a) para
proporcionar el producto en bruto, que se purificó por
SCX-2 para dar el racemato (53 mg). RMNH (300 MHz,
CDCl_{3}) (racemato) \delta 1,29 (s, 3H),
1,50-1,70 (m, 4H), 2,42 (s, 6H),
2,55-2,65 (m, 2H), 2,94 (d, J = 15,64 Hz, 1H), 3,04
(d, J = 15,64 Hz, 1H), 3,18 (a, 1H), 6,38 (d, J = 8,29 Hz, 1H),
7,09 (d, J = 8,10 Hz, 2H), 7,29 (m, 4H), 7,41 (m, 3H), 7,54 (m, 2H).
CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 399 a Rt 6,06 min
(100%).
El perfil farmacológico de los compuestos de la
presente invención puede demostrarse de la siguiente manera.
Se usan técnicas de clonación molecular
convencionales para generar líneas celulares estables que expresen
los transportadores de dopamina, norepinefrina y serotonina humanos.
Se usa la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) a fin de aislar
y amplificar cada uno de los tres ADNc de longitud completa a partir
de una biblioteca de ADNc apropiada. Se diseñan cebadores para PCR
usando los siguientes datos de secuencias publicados:
Transportador de dopamina humano: GenBank
M95167. Bibliografía: Vandenbergh DJ. Persico AM y Uhl GR. A. human
dopamine transporter cDNA predicts reduced glycosylation, displays a
novel repetitive element and provides
racially-dimorphic TaqI RFLPs. Molecular Brain
Research (1992) volumen 15, páginas 161-166.
\newpage
Transportador de norepinefrina humano: GenBank
M65105. Bibliografía: Pacholczyk T, Blakely, RD y Amara SG.
Expression cloning of a cocaine- and
antidepressant-sensitive human noradrenaline
transporter. Nature (1991) volumen 350, páginas
350-354.
Transportador de serotonina humano: GenBank
L05568. Bibliografía: Ramamoorthy S, Bauman AL, Moore KR, Han H,
Yang-Feng T, Chang AS, Ganapathy V y Blakely RD.
Antidepressant- and cocaine-sensitive human
serotonin transporter: Molecular cloning, expression, and
chromosomal localization. Proceedings of the National Academy of
Sciences of the USA (1993) volumen 90, páginas
2542-2546.
Los productos de PCR se clonan en un vector de
expresión de mamíferos (por ejemplo, pcDNA3.1 (Invitrogen)) usando
técnicas de ligación convencionales. Las construcciones se usan
después para transfectar de manera estable células HEK293 usando un
reactivo de lipofección disponible en el mercado
(Lipofectamine^{TM} - Invitrogen), y siguiendo el protocolo del
fabricante.
Se usa la capacidad de los compuestos para
competir con [^{3}H]-nisoxetina por sus sitios de
unión en membranas de norepinefrina humana clonada como una medida
de su capacidad para bloquear la captación de norepinefrina a
través de su transportador específico.
Se homogenizan pastas celulares procedentes de
la producción a gran escala de células HEK-293, que
expresan transportadores de noradrenalina humanos clonados, en 4
volúmenes de Tris.HCl 50 mM que contiene NaCl 300 mM y KCl 5 mM, a
pH 7,4. El homogeneizado se centrifuga dos veces (40.000 g, 10 min,
4ºC), resuspendiendo el sedimento en 4 volúmenes de tampón Tris.HCl
después de la primera centrifugación y en 8 volúmenes después de la
segunda centrifugación. Se centrifuga el homogeneizado en suspensión
(100 g, 10 min, 4ºC), se conserva el sobrenadante y se vuelve a
centrifugar (40.000 g, 20 minutos, 4ºC). El sedimento se resuspende
en tampón Tris.HCl que contiene los reactivos anteriores junto con
sacarosa a 10% p/v y fluoruro de fenilmetilsulfonilo 0,1 mM (PMSF).
La preparación de membrana se almacena en alícuotas (1 ml) a -80ºC
hasta que se necesite. La concentración de proteína de la
preparación de membrana se determina usando un kit de reactivo de
ensayo de proteína de ácido bicinconínico (BCA) (disponible en
Pierce).
Se prepara cada pocillo de una placa de
microtitulación de 96 pocillos para que contenga lo siguiente:
- 50 \mul
- Clorhidrato de [N-metil-^{3}H]-nisoxetina 2 nM (70-87 Ci/mmol, de NEN Life Science Products)
- 75 \mul
- Tampón de ensayo (Tris.HCl 50 mM a pH 7,4, que contiene NaCl 300 mM y KCl 5 mM)
- 25 \mul
- Compuesto de ensayo, tampón de ensayo (unión total) o desipramina HCl 10 \muM (unión no específica)
- 50 \mul
- Perlas SPA (Amersham Biosciences RPNQ0001) de poli(viniltolueno) revestidas con aglutinina de germen de trigo (WGA PVT) (10 mg/ml)
- 50 \mul
- Membrana (0,2 mg de proteína por ml)
Las placas de microtitulación se incuban a
temperatura ambiente durante 10 horas antes de leerlas en un
contador de centelleo Trilux. Los resultados se analizan usando un
programa automático de ajuste de curvas (Multicalc, Packard, Milton
Keynes, UK), para proporcionar valores de Ki para cada uno de los
compuestos de ensayo.
Se usa la capacidad de un compuesto de ensayo
para competir con [^{3}H]-citalopram por sus
sitios de unión en membranas de serotonina humana clonada como una
medida de su capacidad para bloquear la captación de serotonina a
través de su transportador específico (Ramamoorthy, S., Giovanetti,
E., Qian, Y., Blakely, R., (1998), J. Biol. Chem. 273, 2458).
La preparación de membrana es esencialmente
similar a la de la membrana que contiene el transportador de
norepinefrina descrito anteriormente. La preparación de membrana se
almacena en alícuotas (1 ml) a -70ºC hasta que se necesite. La
concentración de proteína de la preparación de membrana se determina
usando un kit de reactivo de ensayo de proteína BCA.
Se prepara cada pocillo de una placa de
microtitulación de 96 pocillos para que contenga lo siguiente:
- 50 \mul
- [^{3}H]-citalopram 2 nM (60-86 Ci/mmol, Amersham Biosciences)
- 75 \mul
- Tampón de ensayo (Tris.HCl 50 mM a pH 7,4, que contiene NaCl 150 mM y KCl 5 mM)
- 25 \mul
- Compuesto diluido, tampón de ensayo (unión total) o fluoxetina 100 \muM (unión no específica)
- 50 \mul
- Perlas SPA de WGA PVT (40 mg/ml)
- 50 \mul
- Preparación de membrana (0,4 mg de proteína por ml)
Las placas de microtitulación se incuban a
temperatura ambiente durante 10 horas antes de leerlas en un
contador de centelleo Trilux. Los resultados se analizan usando un
programa automático de ajuste de curvas (Multicalc, Packard, Milton
Keynes, UK) para proporcionar valores de Ki (nM) para cada uno de
los compuestos de ensayo.
Se usa la capacidad para competir con
[^{3}H]-WIN35,428 por sus sitios de unión en
membranas celulares humanas que contienen el transportador de
dopamina humano clonado, como una medida de su capacidad para
bloquear la captación de dopamina a través de su transportador
específico (Ramamoorthy y col., 1998 supra).
Es esencialmente la misma que para las membranas
que contienen el transportador de serotonina humano clonado como se
ha descrito anteriormente.
Se prepara cada pocillo de una placa de
microtitulación de 96 pocillos para que contenga lo siguiente:
- 50 \mul
- [^{3}H]-WIN35,428428 4 nM (84-87 Ci/mmol, de NEN Life Science Products)
- 75 \mul
- Tampón de ensayo (Tris.HCl 50 mM a pH 7,4, que contiene NaCl 150 mM y KCl 5 mM)
- 25 \mul
- Compuesto diluido, tampón de ensayo (unión total) o nomifensina 100 \muM (unión no específica)
- 50 \mul
- Perlas SPA de WGA PVT (10 mg/ml)
- 50 \mul
- Preparación de membrana (0,2 mg de proteína por ml)
Las placas de microtitulación se incuban a
temperatura ambiente durante 120 minutos antes de leerlas en un
contador de centelleo Trilux. Los resultados se analizan usando un
programa automático de ajuste de curvas (Multicalc, Packard, Milton
Keynes, UK) para proporcionar valores de Ki para cada uno de los
compuestos de ensayo.
Se determinó la estabilidad en ácido de un
compuesto según la presente invención como una solución en tampón a
6 diferentes valores de pH (HCl 0,1N, pH 2, pH 4, pH 6, pH 7 y pH 8)
a 40ºC durante un transcurso de tiempo de 72 horas. Se tomaron
muestras al comienzo del estudio y después de 3, 6 y 24 horas, y se
analizaron por electroforesis capilar. La muestra original usada en
este estudio contenía 0,8% del epímero no deseado como patrón
interno. Las muestras tomadas a los diferentes puntos de tiempo
durante el estudio no mostraron ningún cambio significativo en el
porcentaje del epímero no deseado. Esto confirma que el compuesto es
químicamente y configuracionalmente estable en condiciones
ácidas.
El citocromo P450 2D6 (CYP2D6) es una enzima de
mamíferos que está comúnmente asociada con el metabolismo de
aproximadamente el 30% de los compuestos farmacéuticos. Además, esta
enzima presenta polimorfismo genético, dando lugar a la presencia
de metabolizantes tanto normales como deficientes en la población.
Se desea una baja implicación de CYP2D6 en el metabolismo de
compuestos (es decir, siendo el compuesto un mal sustrato de
CYP2D6) a fin de reducir cualquier variabilidad de un sujeto a otro
en la farmacocinética del compuesto. Además, son deseables
compuestos con un bajo potencial inhibidor de CYP2D6, a fin de
evitar interacciones fármaco-fármaco entre fármacos
co-administrados que sean sustratos de CYP2D6.
Pueden analizarse compuestos como sustratos y como inhibidores de
esta enzima por medio de los siguientes ensayos.
Este ensayo determina el grado de implicación de
la enzima CYP2D6 en el metabolismo oxidativo total de un compuesto
en microsomas. Los compuestos preferidos de la presente invención
presentan menos de 75% de metabolismo total a través de la ruta de
CYP2D6.
Para este ensayo in vitro, se determina
el grado de metabolismo oxidativo en microsomas del hígado humano
(HLM) después de una incubación de 30 minutos en ausencia y
presencia de quinidina, un inhibidor químico específico de CYP2D6.
La diferencia en el grado de metabolismo en ausencia y presencia del
inhibidor indica la implicación de CYP2D6 en el metabolismo del
compuesto.
Los microsomas de hígado humano (mezcla de 20
donantes diferentes, de ambos sexos) se adquieren en Human Biologics
(Scottsdale, AZ, EE.UU.). La quinidina y la
\beta-NADPH (sal tetrasódica de
\beta-Nicotinamida Adenina Dinucleótido Fosfato,
forma reducida) se adquieren en Sigma (St. Louis, MO, EEUU). Todos
los demás reactivos y disolventes son de calidad analítica. Se
prepara una solución madre de la nueva entidad química (NCE) en una
mezcla de acetonitrilo/agua para alcanzar una concentración final de
acetonitrilo en la incubación por debajo del 0,5%.
La mezcla de incubación microsomal (volumen
total de 0,1 ml) contiene la NCE (4 \muM),
\beta-NADPH (1 mM), proteínas microsomales (0,5
mg/ml), y quinidina (0 ó 2 \muM) en tampón fosfato sódico 100 mM a
pH 7,4. La mezcla se incuba durante 30 minutos a 37ºC en un baño de
agua en agitación. La reacción se detiene por la adición de
acetonitrilo (75 \mul). Las muestras se agitan vorticialmente y
las proteínas desnaturalizadas se eliminan por centrifugación. Se
analiza la cantidad de NCE en el sobrenadante por cromatografía
liquida/espectrometría de masas (CL/EM) después de añadir un patrón
interno. Se toma también una muestra al comienzo de la incubación
(t=0), y se analiza de manera similar.
Se realiza el análisis de la NCE por
cromatografía liquida/espectrometría de masas. Se inyectan diez
\mul de muestras diluidas (dilución de 20 veces en la fase móvil)
en una columna Spherisorb CN, 5 \muM y 2,1 mm x 100 mm (Waters
corp. Milford, MA, EEUU). Se bombea la fase móvil, constituida por
una mezcla de Disolvente A/Disolvente B, 30/70 (v/v) (Alliance
2795, Waters corp. Milford, MA, EEUU), a través de la columna a un
caudal de 0,2 ml/minuto. El Disolvente A y el Disolvente B son una
mezcla de formiato de amonio 5 x 10^{-3} M a pH 4,5/metanol en
las proporciones 95/5 (v/v) y 10/90 (v/v), para el Disolvente A y el
Disolvente B, respectivamente. La NCE y el patrón interno se
cuantifican por monitorización de sus iones moleculares usando un
espectrómetro de masas ZMD o ZQ (Waters-Micromass
corp, Manchester, UK) que funciona en una ionización de
electronebulización positiva.
El grado de implicación de CYP2D6 (% de
implicación de CYP2D6) se calcula comparando el grado de metabolismo
en ausencia y en presencia de quinidina en la incubación.
El grado de metabolismo sin inhibidor (%) se
calcula como sigue:
\vskip1.000000\baselineskip
El grado de metabolismo con inhibidor (%) se
calcula como sigue:
\vskip1.000000\baselineskip
en la que la respuesta de NCE es el
área de NCE dividida por el área del patrón interno en el
cromatograma del análisis CL/EM, y el tiempo 0 y el tiempo 30 se
corresponden con los minutos 0 y 30 del tiempo de
incubación.
El porcentaje de implicación de CYP2D6 se
calcula como sigue:
\vskip1.000000\baselineskip
El ensayo de inhibidor de CYP2D6 evalúa el
potencial de un compuesto para inhibir CYP2D6. Esto se realiza por
medición de la inhibición de la actividad de la bufuralol
1'-hidroxilasa por el compuesto en comparación con
un control. La 1'-hidroxilación de bufuralol es una
reacción metabólica específica de CYP2D6. Los compuestos preferidos
de la presente invención presentan una CI_{50} mayor que 6 \muM
para la actividad de CYP2D6, siendo la CI_{50} la concentración
del compuesto que proporciona el 50% de inhibición de la actividad
de CYP2D6.
Los microsomas de hígado humano (mezcla de 20
donantes diferentes, de ambos sexos) se adquieren en Human Biologics
(Scottsdale, AZ). El \beta-NADPH se adquiere en
Sigma (St. Louis, MO). El bufuralol se adquiere en Ultrafine
(Manchester, UK). Todos los demás reactivos y disolventes son de
calidad analítica.
La mezcla de incubación microsomal (volumen
total de 0,1 ml) contiene bufuralol 10 \muM,
\beta-NADPH (2 mM), proteínas microsomales (0,5
mg/ml), y la nueva entidad química (NCE) (0, 5, y 25 \muM) en
tampón fosfato sódico 100 mM a pH 7,4. La mezcla se incuba en un
baño de agua en agitación a 37ºC durante 5 minutos. La reacción se
detiene por adición de metanol (75 \mul). Las muestras se agitan
vorticialmente y las proteínas desnaturalizadas se eliminan por
centrifugación. Se analiza el sobrenadante por cromatografía líquida
conectada a un detector de fluorescencia. Se monitoriza la
formación de 1'-hidroxibufuralol en muestras de
control (NCE 0 \muM) y en las muestras incubadas en presencia de
la NCE. La solución madre de NCE se prepara en una mezcla de
acetonitrilo/agua para alcanzar una concentración final de
acetonitrilo del 1,0% en la incubación a continuación.
La determinación de hidroxibufuralol en las
muestras se realiza por cromatografía líquida con detección
fluorimétrica como se describe a continuación. Se inyectan muestras
de veinticinco \mul en una columna Chromolith Performance
RP-18e (100 mm x 4,6 mm) (Merck KGAa, Darmstadt,
Alemania). La fase móvil, que consiste en una mezcla de disolvente
A y disolvente B cuyas proporciones cambiaron de acuerdo con el
siguiente gradiente lineal, se bombea a través de la columna a un
caudal de 1 ml/min:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El Disolvente A y Disolvente B consisten en una
mezcla de tampón dihidrogenofosfato potásico 0,02 M a pH 3/ metanol
en la proporción 90/10 (v/v) para el disolvente A y 10/90 (v/v) para
el disolvente B. El tiempo de ejecución es de 7,5 minutos. La
formación de 1'-hidroxibufuralol se controla por
detección fluorimétrica con extinción a \lambda 252 nm y emisión
a \lambda 302 nm.
La CI_{50} del NCE para CYP2D6 se calcula por
la medida del porcentaje de inhibición de la formación del
1'-hidroxibufuralol en presencia del NCE comparado
con muestras de control (no NCE) a una concentración conocida del
NCE.
\newpage
El porcentaje de inhibición de la formación del
1'-hidroxibufuralol se calcula de la siguiente
manera:
La CI_{50} se calcula a partir del porcentaje
de inhibición de la formación del
1'-hidroxibufuralol de la siguiente manera
(suponiendo inhibición competitiva):
La estimación de CI_{50} se supone válida si
la inhibición está comprendida entre el 20% y el 80% (Moody GC,
Griffin SJ, Mather AN, McGinnity DF, Riley RJ. 1999. Fully automated
analysis of activities catalyzed by the major human liver
cytochrome P450 (CYP) enzymes: assessment de human CYP inhibition
potential. Xenobiotica, 29(1): 53-75).
Claims (10)
1. Un compuesto de fórmula (I)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
-X- es -C(R^{4}R^{5})-, -O- o
-S-;
n es 2 ó 3;
R^{1} es H o alquilo
C_{1}-C_{4};
R^{3} es H, halo, alquilo
C_{1}-C_{4}, O(alquilo
C_{1}-C_{4}), nitrilo, fenilo o fenilo
sustituido con 1 ó 2 sustituyentes seleccionados entre alquilo
C_{1}-C_{4}, O(alquilo
C_{1}-C_{4}), S(alquilo
C_{1}-C_{4}), halo, y fenilo opcionalmente
sustituido con alquilo C_{1}-C_{4},
O(alquilo C_{1}-C_{4}), S(alquilo
C_{1}-C_{4}), o halo;
cada uno de R^{4} y R^{5} se selecciona
independientemente entre H o alquilo
C_{1}-C_{4};
Ar- se selecciona entre el grupo constituido
por
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en las
que
R^{2a} es H, halo, metilo o etilo;
R^{2b} es H, halo o metilo;
R^{2c} es H, halo, metilo, trifluorometilo,
nitrilo o metoxi;
R^{2d} es H, halo, metilo o etilo;
R^{2c} es H, halo, metilo, trifluorometilo,
nitrilo o metoxi;
R^{2f} es H, o fluoro;
-Y- es -O-, -S- o -N(R^{6})-; y
R^{6} es H o metilo;
o una sal farmacéuticamente
aceptable del
mismo.
2. Un compuesto según la reivindicación 1,
representado por la fórmula (Ia)
en la que -X-, n, R^{1}, R^{3}
y Ar tienen los valores como se han definido para la fórmula (I) en
la reivindicación
1.
3. Un compuesto según la reivindicación 1 ó 2,
en el que -X- es -C(R^{4}R^{5})-.
4. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 3, en el que Ar es (i).
5. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 3, en el que Ar es (ii) e -Y- es -S-.
6. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 3, representado por la fórmula (II)
en la que n, R^{1}, R^{2a} y
R^{2b} tienen los valores como se han definido para la fórmula (I)
en la reivindicación 1 y R^{3} es H, halo, fenilo o fenilo
sustituido con 1 ó 2 sustituyentes seleccionados entre alquilo
C_{1}-C_{4}, O(alquilo
C_{1}-C_{4}), S(alquilo
C_{1}-C_{4}), halo, y fenilo opcionalmente
sustituido con alquilo C_{1}-C_{4},
O(alquilo C_{1}-C_{4}), S(alquilo
C_{1}-C_{4}), o
halo.
7. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, en el que R^{3} es H o halo.
8. Una composición farmacéutica que comprende un
compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 o una
sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con un diluyente o
vehículo farmacéuticamente aceptable.
9. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 7 o una sal farmacéuticamente aceptable del
mismo, para uso en terapia.
10. Uso de un compuesto según una cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 7 o una sal farmacéuticamente aceptable
del mismo, para la preparación de un medicamento para tratar un
trastorno seleccionado entre el grupo constituido por un trastorno
por déficit de atención (ADD) debido a afecciones médicas generales,
trastorno de hiperactividad con déficit de atención (ADHD),
trastorno de conducta, depresión, trastorno desafiante oposicional,
y trastornos cognitivos incluyendo deficiencia cognitiva moderada
(MCI), demencia de tipo Alzheimer (DAT), demencia vascular y
deficiencia cognitiva asociada con esquizofrenia (CIAS).
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