ES2301576T3

ES2301576T3 - Preparacion de lectinas de muerdago ingeribles por via oral y procedimiento.

Info

Publication number: ES2301576T3
Application number: ES01996387T
Authority: ES
Inventors: Ian Pryme
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2000-11-14
Filing date: 2001-11-12
Publication date: 2008-07-01
Anticipated expiration: 2021-11-12
Also published as: KR20030066664A; US20040052869A1; DK1341811T3; NZ526202A; PT1341811E; DE60133036D1; KR100832614B1; WO2002040041A2; EP1341811A2; US7550159B2; CY1107965T1; EP1341811B9; WO2002040041A3; EP1341811B1; AU2120502A; DE60133036T2; JP2004513926A; ATE387209T1

Abstract

Composición de materia, constituida esencialmente por lectina I de muérdago (ML-I), lectina II de muérdago (ML-II) y lectina III de muérdago (ML-III), caracterizada porque dicha composición está exenta de compuestos que provocan náuseas e ingerible por vía oral por mamíferos.

Description

Preparación de lectinas de muérdago ingeribles por vía oral y procedimiento.

Campo técnico

La presente invención se refiere a preparaciones medicinalmente útiles derivadas del muérdago, a los procedimientos para la preparación de dichas preparaciones y a los procedimientos de tratamiento que utilizan dichas preparaciones. Más específicamente, la invención se refiere a una preparación ingerible por vía oral de lectinas de muérdago útiles en el tratamiento del cáncer y otras enfermedades.

Antecedentes de la técnica Lectinas e inmunomodulación

Las células citotóxicas del sistema inmunitario, los linfocitos T citolíticos (CTL), las células destructoras naturales (NK) y los macrófagos, pueden buscarse y por último lisan las células tumorales espontáneamente o con más frecuencia después de activación apropiada. La actividad citotóxica espontánea contra las células tumorales es principalmente un resultado de las células NK. Varias citocinas, solas o en combinación, se ha demostrado que aumentan la actividad antitumoral: IL-2, IL-7, IL-12 e IFN-\gamma provocan actividad citotóxica en las células NK y en los linfocitos T mientras que IFN-\gamma y TNF\alpha son potentes activadores de macrófagos y monocitos. La mayoría de los estudios que han demostrado estos efectos han sido confinados a sistemas in vitro aunque recientemente el efecto antitumoral de algunas de estas citocinas se ha demostrado también in vivo en animales y también en seres humanos. Los linfocitos cultivados en presencia de grandes cantidades de IL-2 se denominan células destructoras activadas por linfocina (LAK). Las células LAK se caracterizan por su capacidad para destruir células tumorales resistentes a NK sin la restricción del complejo de histocompatibilidad mayor (MHC). Aunque tanto las células NK como los linfocitos T son responsables de la actividad de LAK, las anteriores son responsables de mediar en la mayor parte de la actividad. Los macrófagos y monocitos son conocidos porque se acumulan alrededor de los tumores. Siguiendo la actividad estimulada por TNF\alpha e IFN-\gamma de estas células está previsto que una liberación local de citocinas se produzca a partir de estas células activadas directamente dentro del tumor. Esto, a su vez, es de esperar que produzca apoptosis y por último produzca la muerte de las células tumorales.

Además de las citocinas, se ha publicado que una variedad de mezclas de proteína producidas natural o sintéticamente ejercen propiedades inmunomoduladoras. Los extractos de muérdago disponibles en el mercado pertenecen a esta categoría de agentes. El análisis bioquímico ha demostrado que la capacidad de inmunomodulación es debida a la presencia de lectinas de muérdago (ML-I, ML-II y ML-III) en los extractos.

Extractos de muérdago y utilización en la terapia del cáncer

Se han utilizado extractos de muérdago en la terapia del cáncer durante más de 80 años, particularmente en clínicas en Austria, Suiza y Alemania. La utilización de estos extractos ha sido criticada duramente por médicos de la "escuela de medicina" tradicional debido a la falta de conocimiento en relación con la naturaleza existente de los componentes anticancerosos activos en el muérdago. Recientes trabajos han demostrado claramente actualmente que las lectinas purificadas (ML-I, ML-II, ML-III) presentes en los extractos de muérdago poseen propiedades tanto inmunomoduladoras como citotóxicas. Los argumentos que han sido planteados por los abogados de la "escuela de medicina", son de este modo en gran medida ya no válidos.

Los procedimientos de tratamiento que emplean extractos de muérdago conocidos adolecen, sin embargo, de varios inconvenientes. En primer lugar, los extractos disponibles en el mercado varían en gran medida desde el punto de vista de su composición, haciendo así no fiables tanto el estudio como los regímenes de tratamiento. Además, generalmente se cree que el muérdago es tóxico. El procedimiento más frecuente de tratar clínicamente a pacientes de cáncer con extractos de muérdago, por consiguiente, ha sido por inyección subcutánea. Los trabajos recientes, sin embargo, han demostrado que las glucoproteínas del suero se unen eficazmente y de este modo minimizan los efectos de las lectinas de muérdago inyectadas en los pacientes de cáncer. Esto sugiere que la vía subcutánea probablemente no sea muy eficaz. Por consiguiente, es deseable un procedimiento alternativo de administración.

Lectinas de la dieta y crecimiento tumoral

Se ha demostrado en una serie de publicaciones desde 1994 (véase las referencias), el crecimiento de tumores de linfoma intraperitoneales o subcutáneos no hodgkinianos en ratones NMRI pueden reducirse alimentando los animales con una dieta que contiene la lectina presente en la judía de riñón cruda (Phaseolus vulgaris), fitohemaglutinina (PHA) o lectina de muérdago (ML-I). Otras observaciones han demostrado que el desarrollo de un tumor plasmacitoma subcutáneo (MPC-11) en ratones Balb/c puede reducirse en gran medida alimentando con una dieta que incluía PHA. Las lectinas, que son resistentes al efecto proteolítico de las enzimas intestinales, conservan su actividad biológica en el canal alimenticio. Cuando se añaden a la dieta de animales experimentales se unen a la superficie de la mucosa intestinal y provocan un crecimiento hiperplásico dependiente de la dosis, completamente reversible del intestino delgado. Simultáneamente con el crecimiento del intestino estimulado PHA provoca una extensa absorción de aminoácidos y de otros nutrientes en el lumen intestinal. Antes del comienzo del crecimiento hiperplásico, se produce una extensa acumulación de poliaminas extracelulares en la mucosa intestinal. Las poliaminas son moléculas que desempeñan funciones principales en una serie de mecanismos importantes que controlan la proliferación celular y, de forma importante están implicadas en el crecimiento tumoral.

En los experimentos para estudiar la importancia de la sincronización de alimentación de ratones con la dieta que contiene PHA con respecto a cuando se inyectaron células tumorales, las dietas se cambiaron en días específicos. Se demostró que el número de células tumorales era significativamente inferior cuando la dieta a base de lactalbúmina (La) se sustituyó por una enriquecida con PHA el mismo día a medida que se inyectaban células tumorales. Recientes experimentos han demostrado que cuando se añadía PHA a la dieta de ratones con tumores NHL confirmados entonces el crecimiento adicional se retardaba en gran medida. Los datos preliminares han demostrado que el alimento PHA a ratas produce un aumento rápido en la producción de TNF\alpha. Se observó velocidad de recambio celular acelerada dentro del tumor NHL trasplantado como respuesta a la ingesta oral de ML-1 a medida que aumentaba el número de células apoptósicas con un aumento de áreas de células muertas irregulares serpiginosas, y las células no viables ocuparon un área aumentada al doble en los ratones alimentados con lectina. Las apoptosis fueron más numerosas en los tumores de ratones alimentados con ML-I y éstos fueron identificados por marcado en el extremo con muescas alrededor de las áreas de las células tumorales no viables, en el borde delantero del tumor y en el interior de agregados linfoides intensos. Los estudios morfológicos de las secciones tumorales presentaban una frecuencia reducida en gran medida de la vascularización tumoral lo que indica que ML-1 provoca la producción de factores antiangiógenos. Recientes experimentos realizados con ML-III han demostrado que la alimentación de lectina a ratones con tumores NHL confirmados fue sumamente eficaz en la reducción del crecimiento tumoral adicional.

Aunque se ha demostrado de este modo en los modelos animales que las lectinas de muérdago purificadas son bien toleradas cuando se administran por vía oral, las lectinas de muérdago purificadas son sumamente costosas y el tiempo que se emplea en producirlas, prepararlas es inferior al de las sustancias experimentales ideales como procedimiento de tratamiento. Por consiguiente, hay necesidad, de una preparación de lectinas de muérdago y del procedimiento de tratamiento relacionado que puedan administrarse por vía oral y que no sean costosas de producir.

Aunque generalmente se cree que el muérdago es tóxico, un estudio reciente que se refiere a los resultados de 1754 exposiciones ha demostrado que la ingestión accidental de la planta no está asociada a una profunda toxicidad. Existen, sin embargo, componentes presentes en los extractos de muérdago que provocan náuseas. Estos compuestos que provocan náuseas, incluyendo los alcaloides y las viscotoxinas, se han considerado erróneamente como esenciales a la eficacia medicinal de los extractos de muérdago. (Véase, por ejemplo, las patentes U.S. nº 5.637.563 y nº 5.547.674). como resultado, no se ha emprendido anteriormente ningún esfuerzo para producir una preparación de muérdago que pueda administrarse de manera satisfactoria por vía oral a seres humanos.

El documento WO 97/11967 A da a conocer un efecto antitumoral e inmunoestimulante de las preparaciones ML aplicadas por vía oral. El documento menciona también las reacciones desfavorables de las preparaciones de ML aplicadas por vía parenteral así como que no existen efectos antitumorales e inmunoestimulantes documentados de preparaciones ML aplicadas por vía oral.

Un procedimiento para producir lectinas de muérdago purificadas está descrito por R. Eifler, K. Pfüller, W. Göckeritz y U. Pfüller en "Lectins: Biology, Biochemistry and Clinical Biochemistry" vol. 9 (1993) págs. 141-151, que se incorpora a la presente memoria como referencia.

El solicitante ha reconocido que el procedimiento del complejo utilizado por Eifler et al. para aislar y purificar las tres lectinas de muérdago individuales (ML-I, II y III) no es adecuado para producir, sin embargo, una preparación de lectina terapéutica e ingerible por vía oral. El fundamento consiste en:

(i): El solicitante ha demostrado que cuando se añade ML-1 a la dieta de ratones el mismo día que la inyección de células tumorales, reduce la masa de los tumores de linfoma no hodgkiniano en relación con las referencias. Se observó una clara respuesta a la dosis. A la cantidad máxima de ML-1 ingerida se observó una extirpación total de tumores en el 25% de los animales. Además, el solicitante ha demostrado recientemente que cuando ML-III purificada se alimentaba en la dieta a ratones 5 días después de la inyección subcutánea de células de Krebs II (linfoma no Hodgkiniano), entonces se interrumpía el crecimiento del tumor confirmado. Dado que las tres lectinas presentan diferentes especificidades biológicas (p. ej., fijación de azúcar) entonces pueden actuar mucho mejor conjuntamente que si se suministran por separado. La purificación de cada una de las lectinas es contraproducente por consiguiente desde un punto de vista medicinal.

(ii): el procedimiento de purificación completo para las tres lectinas es consumidor de tiempo de forma considerable, y

(iii): la preparación de la lectina según la invención demostró de manera sorprendente y contraria a la creencia aceptada en la técnica, que podría tomarse por vía oral. Por lo tanto una pequeña combinación mediante otras proteínas no representaría ningún problema principal ya que otras proteínas distintas de las lectinas estarían sometidas a descomposición por las enzimas digestivas.

El solicitante ha modificado y mejorado por consiguiente el procedimiento de Eifler et al. con el fin de llegar a una preparación de lectina de muérdago que contiene las lectinas ML-I, ML-II y ML-III, posiblemente junto con cantidades insignificantes de impurezas, pero que excluye específicamente los compuestos que provocan náuseas si no presentes.

Exposición de la invención Objetivos y ventajas de la invención

La ventaja obvia de proporcionar lectinas de muérdago por vía oral consiste en que grandes cantidades de lectinas, mediante su fijación a la mucosa del intestino seguida de endocitosis, están en el curso debido presentados a los linfocitos de los parches de Peyers y de este modo son capaces de provocar una respuesta mayor a la citocina. Como se ha observado, una reducción mayor en el peso del bazo se produce después de la alimentación con PHA a ratones. Esto puede atribuirse a una mayor liberación de linfocitos en la circulación de la sangre como resultado de la liberación de citocina en los linfocitos de los parches de Peyers. Es muy improbable de dicha respuesta esté provocada por pequeñas cantidades de lectinas que son capaces de alcanzar el tejido linfático cuando se inyectan por vía subcutánea extractos de muérdago. Además, visto desde el punto de vista de los pacientes, es obvio que tomando la preparación de lectinas de muérdago por vía oral es mucho más aceptable y conveniente que por inyección.

Basándose en las observaciones del sistema del modelo animal, en trabajos no publicados y datos publicados, se proponen los siguientes efectos de inmunomodulación siguiendo la ingesta oral de la preparación de lectina de muérdago según la invención:

1.: Las ML se fijan fuertemente a la mucosa intestinal.

2.: Las ML se endocitosan eficazmente a través de la mucosa del intestino delgado.

3.: Fijación de las ML endocitosadas a linfocitos de los parches de Peyers.

4.: Estimulación de la liberación de citocina y activación de las células NK, etc.

5.: Producción y liberación de factores antiangiógenos.

6.: Efectos citotóxicos en las células tumorales.

7.: Vascularización tumoral reducida.

8.: Provocación de apoptosis que conduce a la muerte de la célula tumoral.

Además de los efectos de inmunomodulación de la ingesta oral, la preparación de lectina de muérdago también proporciona un efecto citotóxico directo en los tumores con los que entra en contacto directo. Las lectinas de muérdago individuales de la preparación comprenden dos cadenas, A y B. La cadena B se une a los receptores en la superficie de las células tumorales, produciendo endocitosis de la cadena A (interiorización de la cadena A en la célula tumoral). La cadena A presenta actividad de N-glucosidasa que produce la degradación específica del ARN ribosómico de 28S, produciendo además la inhibición de la síntesis de proteínas que conduce a la muerte celular.

Sumario de la invención Preparación de lectinas de muérdago y procedimiento

Según la presente invención, los compuestos que producen náuseas se eliminan del extracto de muérdago por cromatografía en columna de intercambio iónico, produciendo de este modo una preparación que consta esencialmente de lectinas ML-I, ML-II y ML-III. La preparación puede contener cantidades insignificantes de otros componentes que no provocan náuseas sin reducir la eficacia biológica/medicinal de la preparación.

Indicaciones médicas secundarias y procedimiento de utilización

Según la presente invención, la preparación de lectina de muérdago puede administrarse como una composición química en bruto, o puede utilizarse para producir un complemento nutritivo y/o una preparación farmacéutica que puede administrarse en dosis terapéuticamente eficaces para el tratamiento de cánceres así como enfermedades autoinmunes tales como la artritis, enfermedades reumáticas, asma y enfisema, y pacientes que padecen fatiga general. Tales dosis pueden estar en forma adecuada para administración oral, rectal, nasal, tópica, vaginal o en aerosol, o en una forma adecuada para inhalación o infusión para la vejiga.

Utilización junto con arginina

Como se expuso en los ejemplos, el solicitante ha descubierto que la eficacia de la preparación de lectina de muérdago aumenta cuando la preparación se administra junto con un régimen de arginina oral. La arginina puede generalmente describirse como un donante de NO. Se ha observado que la arginina aumenta la función endoteliana en los tumores, por lo que las paredes del recipiente en el tumor se cierran herméticamente y no son tan fácilmente permeables a la glucosa y a las proteínas. Esto a su vez disminuye la situación nutritiva para el tumor, que complementa un mecanismo similar de la preparación de lectina de muérdago. La arginina se ha observado también que presenta un efecto estimulante en el sistema inmunitario, cumpliendo de nuevo un efecto similar al de la preparación de lectina de muérdago.

Breve descripción de los dibujos

La Fig. 1 es una representación esquemática del procedimiento de producción de la preparación de lectina de muérdago según la invención.

La Fig. 2 es una electroforesis en gel de la preparación de lectina de muérdago.

La Fig. 3 es una electroforesis en gel de muestras de sangre de un paciente y una referencia.

Descripción detallada de la invención Preparación y procedimiento

En cuanto a la Fig. 1 se refiere, se utiliza el siguiente procedimiento para producir la preparación de lectina de muérdago:

Fuente de muérdago: Visci Alba Herba 4 mm de Norsk Medisinaldepot (o Viscum album generalmente).

1.: Muérdago pulverizado utilizando un procesador de alimentos.

2.: Material mezclado con ácido acético 0,2 M (cantidad de cinco veces en base p/p). Se agitó durante la noche a 4ºC.

3.: La planta agreste permanece eliminada por filtración mediante un paño tosco seguido de filtración a través de un papel de filtro de 240 mm para eliminar la turbidez.

4.: Cromatografía de intercambio catiónico realizada utilizando aproximadamente 5 g de intercambiador catiónico SP-Sephadex/1,0 litros de extracto de muérdago en bruto.

5.: Se lavó la columna con tampón de acetato 0,15 M (pH 4,0) hasta la absorción a 280 nm <0,05. Esta etapa elimina los componentes que no tienen capacidad de fijación al intercambiador catiónico.

6.: Las lectinas ML-I, II y III eluyeron colectivamente utilizando un tampón que contenía Tris-HCl 0,1 M, pH 8,0 y NaCl 0,5 M.

7.: Las fracciones con absorción a 280 nm >1,0 agrupadas y dializadas durante la noche (4ºC) contra 10 volúmenes de PBS (NaCl menos). La membrana de diálisis presenta un tamaño de corte de MW 10.000 con el fin de eliminar las moléculas de bajo MW.

8.: La preparación se hace alícuotas en fracciones de 1 ml y se congelan a -20ºC para almacenamiento.

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El procedimiento según la invención se diferencia del de Eifler et al. en varias maneras:

a): el periodo de agitación con ácido acético se prolongó con el fin de conseguir la extracción mínima de lectinas.

b): la filtración a través de un papel de filtro siguiendo la utilización inicial de paños bastos se encontró importante para producir un extracto exento de turbidez.

c): el extracto de ácido acético filtrado en papel se bombeó en la columna más bien que mezclarse con el intercambiador catiónico. Se descubrió que es más conveniente, especialmente cuando se manejan grandes volúmenes.

d): con el fin de conseguir una preparación concentrada, medicinalmente eficaz de lectinas de muérdago, solamente aquellas fracciones en las que las absorbancias a 280 nm era alta (>1,0) se seleccionaron para recoger y agrupar.

e): las fracciones agrupadas se dializaron frente a tampón exento de sales con el fin de eliminar los componentes de bajo MW y para reducir la concentración de NaCl ya que la preparación era para tomar por vía oral.

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Caracterización de la preparación de lectina de muérdago

1): El contenido de proteínas del producto dializado final, medido según el procedimiento de Bradford, fue de 250 \mug/ml.

2): La absorbancia de 1 ml del producto dializado final a 280 nm fue >3.

3): Las proteínas presentes en la preparación se controlaron realizando electroforesis en gel de SDS poliacrilamida, como se muestra en la Fig. 2. Las bandas mayores coincidieron con las proteínas dentro del intervalo entre 29 y 35 kDa como es de esperar para las subunidades de las lectinas de muérdago.

4): Actividad biológica confirmada utilizando el ensayo citotóxico en el que se ensayó la capacidad de ML para impedir el crecimiento de células CHO sembradas recientemente.

5): La estabilidad de la preparación según la invención se comprobó durante un periodo de cinco semanas. La preparación demostró ser estable a 4 grados C, temperatura ambiente, menos 20 grados C y menos 80 grados C. Puede congelarse y descongelarse rápidamente por lo menos cinco veces sin afectar su actividad biológica. Cuando se añade a 70 grados C o superior durante un mínimo de cinco minutos, sin embargo, entonces se pierde el 100% de actividad biológica. Esto ilustra que la manera tradicional de utilizar agua en ebullición para preparar té de muérdago hace biológicamente inútiles a las lectinas de muérdago.

Procedimiento de utilización

Según un aspecto de la invención, las dosis terapéuticamente eficaces de la preparación de lectina de muérdago se administran por vía oral a individuos que padecen de cáncer u otras enfermedades, tales como las enfermedades autoinmunes con el fin de provocar una respuesta inmunomoduladora. En una forma de realización preferida, la preparación se administra junto con un régimen diario de arginina oral.

Según otro aspecto de la invención, la preparación de lectina de muérdago se administra de tal manera que proporciona contacto directo entre la preparación y las células tumorales, con el fin de provocar una respuesta citotóxica directa.

Determinación de la dosis: Respuesta biológica a la preparación en voluntarios humanos: Anticuerpos contra ML

Se ha demostrado que cuando ML-1 purificada se presentaba por vía oral a ratas entonces los anticuerpos podrían ser detectados en la sangre en los últimos momentos (Lavelle et al. Immunology 2000, 99, 30-37), incorporada como referencia a la presente memoria.

Esto ha sido ahora adaptado, según la presente invención, para probar individuos humanos con el fin de determinar si o no una respuesta biológica a las lectinas de muérdago ha sido producida después de la absorción oral de la preparación de muérdago enriquecida. La inmunotransferencia se realiza utilizando suero sanguíneo como fuente potencial de antibióticos. Como puede observarse en la Fig. 3 el suero del sujeto A es negativo mientras que del sujeto B es positivo. El sujeto B ha tomado la preparación por vía oral durante varios meses mientras que el sujeto A (esposo de B) no. Este procedimiento se utiliza de este modo para controlar sujetos, de modo que podría determinarse la dosis apropiada de la preparación, es decir, el aporte por vía oral de suficiente lectina para favorecer una respuesta al antibiótico.

La dosis administrada originalmente fue de 1 ml tomada 3 veces a la semana, en un régimen de lunes, miércoles, viernes, durante un periodo de hasta seis semanas. Las dosis se toman en días alternos para permitir la desaturación de los receptores del intestino delgado. Se ha observado en el caso de los tumores del intestino grueso, donde el contacto directo entre la preparación y el propio tumor es también deseable, que la dosis puede necesitar que se aumente con el fin de saturar en primer lugar los receptores en el intestino delgado, de modo que las lectinas son capaces de alcanzar el punto tumoral.

Las dosis siguientes se ha demostrado ahora que proporcionan el mejor efecto clínico:

La preparación según la invención, proporcionada en ampollas de 1 ml, se mezcla (para facilidad de consumo) en 2 dl de agua u otra bebida fría y se toman tres veces a la semana de la manera siguiente: Lunes 1 ml; Miércoles 2 ml y Viernes 1 ml. La arginina se toma cada día por las mañanas y las tardes. La dosis apropiada de arginina depende del peso corporal. En la forma de realización preferida, se utiliza una dosis de entre 0,001 y 0,01 g de arginina por kilo de peso corporal. Para facilidad de consumo, la arginina se mezcla con 2 dl de agua u otra bebida.

Ejemplos de voluntarios humanos

Hasta la fecha, más de 150 pacientes con diferentes tipos de cáncer se ha apuntado en una prospección de un solo paciente. No se han aplicado ningún criterio de selección. Los pacientes incluyen aquellos con cáncer en el sistema digestivo, sistema nervioso, formas diferentes de cáncer ginecológico y cáncer de piel en etapas terminales.

Los pacientes han sido tratados por el personal de los departamentos oncológicos sin ninguna oferta de tratamiento adicional, o han estado en las fases terminales del tratamiento en el hospital. Todos los pacientes han estado en un estado escaso de salud. Era deseable investigar si o no las lectinas orales podrían ofrecerse como una forma positiva de tratamiento para este grupo de pacientes.

Se han tomado muestras de sangre periódicas y se han realizado diferentes formas de examen (CT, rayos X, ultrasonidos). La consulta terapéutica con los pacientes que proporcionan información necesaria ha sido central en el tratamiento.

Resumen de la experiencia hasta ahora con esta forma de tratamiento

A.: Para aproximadamente el 10% de los pacientes, se ha observado la disminución del tamaño del tumor (tanto en los tumores primarios como secundarios). Confirmado por CT, rayos X y ultrasonidos.

B.: Aproximadamente el 25% de los pacientes habían mostrado estancamiento del crecimiento tumoral con una reducción de los fenómenos secundarios tal como fluido en la cavidad peritoneal, hinchazón alrededor del tumor, etc.

C.: Otro 30% ha mostrado una interrupción del crecimiento tumoral con estabilización de su estado.

D.: Un 30% más de los pacientes ha experimentado una evolución mucho más lenta del crecimiento tumoral que la que es de esperar sin el tratamiento.

E.: Aproximadamente el 5% de los pacientes no ha presentado ninguna respuesta.

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En las pruebas iniciales en voluntarios humanos, varios individuos han experimentado signos claros de producción de \beta-endorfina. Esto se refleja porque el 100% de los pacientes han descrito un sentimiento de "falta de calor" agradable y en general notan un mejor estado general (sensación de "facilidad"). Además se ha descrito la función digestiva mejorada y se ha experimentado un mayor aumento en el nivel de dolor.

Ha habido una clara indicación de que los pacientes que toman la preparación han tenido un mayor nivel de tolerancia durante la quimioterapia y/o radioterapia que los que no recibieron la preparación.

Hasta el momento, no han existido informes de ninguna forma de efectos secundarios.

La preparación se ha utilizado además en el tratamiento de un número limitado de pacientes que padecen de la enfermedad autoinmune, tal como trastornos reumáticos. El tratamiento ha demostrado que tiene un marcado efecto para reducir la hinchazón de las articulaciones y disminuir el nivel de dolor, con una mejora general de la calidad de vida. El efecto general en los pacientes con trastornos reumáticos es similar al que experimentaron con pacientes de cánceres que están bajo tratamiento.

Casos individuales

Los siguientes son varios ejemplos indicadores de observaciones específicas:

A.: Un individuo (postrado en cama) que padece cáncer de próstata con metástasis en la columna vertebral se le pronosticó por este doctor en noviembre de 1998 un tiempo de supervivencia de unas pocas semanas. A los 2 meses de la ingesta oral de la preparación según la invención su salud había mejorado tan drásticamente que fue capaz de asistir a las celebraciones del 50 cumpleaños de su hijo.

B.: Una mujer de 23 años con intenso dolor abdominal, fue diagnosticada de padecer cáncer de estómago. Se le programó la intervención quirúrgica con el fin de extirparle el estómago. Comenzó el tratamiento con la preparación de lectina de muérdago. A los 5 días notó un dolor considerablemente menor. Diez días después (4 días antes de la operación) se le sometió a gastroscopia. El tumor del estómago (del tamaño de una ciruela) se redujo considerablemente de tamaño y se pospuso la operación. Dos meses después una nueva gastroscopia no presentó ningún signo del tumor y se le declaró libre del síntoma. Esto fue casi seguramente debido al efecto citotóxico directo de la preparación sobre las células tumorales.

C.: Un hombre de 55 años de edad, operado en 1972 con una gastrectomía de Bilroth II debido a úlcera. En el 2000 se le detectó adenocarcinoma de ventrículo con metástasis en el peritoneo. Inoperable. Se trató con quimioterapia paliativa. Ninguna respuesta al tratamiento, mal pronóstico. El tratamiento con la preparación según la invención, combinado después con arginina, estabilizó el estado de su salud. Después de un año de tratamiento, la CT del abdomen presentaba ausencia práctica de la ascitis, sin metástasis y sin el tumor original. Clínicamente este paciente está libre de cáncer detectable.

D.: Una mujer de 49 años de edad con cáncer de ovario con metástasis en el sistema linfático y peritoneo. Inoperable. Clínicamente adenocarcinoma. Comenzó el tratamiento inmediatamente con la preparación. Tres semanas después en el procedimiento por etapas, en el que se realizó una biopsia, ningún tumor o metástasis fue detectable. Como resultado, ningún tratamiento de quimioterapia o radiación se consideró necesario. Mejoría clínica hasta casi salud normal. Este paciente ha sido tratado con la preparación y arginina solo.

E.: Mujer de 55 años de edad diagnosticada con cáncer de mama en 1998. Tratada con operación, radiación y terapia hormonal, todavía desarrolló incluso metástasis en el pulmón y el esqueleto. Después de seis semanas de tratamiento con la preparación y arginina, las exploraciones por rayos X y ultrasonidos presentaban disminución del tumor y tamaño de la metástasis. Clínicamente más energía y ningún dolor. La utilización discontinua de analgésicos.

F.: Mujer de 34 años de edad. Cáncer de ovario seis años antes, desarrolló metástasis en la pelvis. Comenzó el tratamiento con la preparación de muérdago. En el procedimiento por etapas tres semanas después, redujo significativamente el tamaño del tumor. Comenzó el tratamiento con radiación, quimioterapia e hipotermia, simultáneo con el tratamiento con la preparación. Resultados: ningún tumor detectable o metástasis.

Mecanismos de actuación

Los datos del paciente observados son coherentes con las siguientes propiedades de lectinas de muérdago (ML), presentadas por vía oral que son "negativas" para el crecimiento tumoral:

I): Estimulación de hiperplasia intestinal que provoca una competencia por los factores nutritivos entre el tumor y el intestino.

II): Estimulación de la infiltración de linfocitos en el tumor.

III): Liberación local de citocinas de los macrófagos y linfocitos (p. ej. factor alfa de necrosis tumoral) en el tumor. Éstos son perjudiciales para el tumor y reducen el crecimiento.

IV): NKC (células destructoras naturales) activadas y éstas "atacan" a las células tumorales.

V): Apoptosis ("muerte celular natural") se produce en las células tumorales como resultado de II), III) y IV).

VI): Respuesta antiangiógena, que produce una notable reducción en el número de capilares sanguíneos en el tumor. Junto con I) suministro de nutriente al tumor reducido.

VII): Si el tumor se "expone" (p. ej., estómago, colon) entonces ML puede ejercer sus efectos citotóxicos es decir absorción de ML por las células tumorales produce la muerte celular por inhibición de la síntesis de proteínas.

Preparación farmacéutica

Aunque es posible que la preparación de lectina de muérdago según la invención que debe utilizarse para la terapia como composición química en bruto, puede ser ventajoso presentar las lectinas de muérdago en forma de una preparación farmacéutica.

Un aspecto adicional de la invención es por consiguiente una preparación farmacéutica que comprende la preparación de lectina de muérdago, o una sal farmacéuticamente aceptable o un derivado de la misma, junto con uno o más portadores farmacéuticamente aceptables y posiblemente otros ingredientes terapéuticos o profilácticos. Dichos portadores deben ser aceptables, para que sean compatibles con los demás ingredientes en la preparación y no pongan en situación de riesgo al paciente.

Las preparaciones farmacéuticas incluyen las que se adaptan para la administración oral, rectal, nasal, tópica o vaginal, así como la inhalación y la infusión por la vejiga.

La preparación de lectina de muérdago, junto con los aditivos, portadores o agentes diluyentes convencionales, puede utilizarse para preparar composiciones farmacéuticas, incluyendo las dosis individuales de las mismas, en forma de comprimidos, cápsulas rellenas, o fluidos tales como soluciones, mezclas, emulsiones, elixires o cápsulas rellenas con tales, todo para la ingesta oral, así como en forma de supositorios para administración rectal. Dichas composiciones farmacéuticas y dosis individuales de las mismas pueden comprender ingredientes o principios convencionales, y dichas formas de dosificación pueden contener cualquier concentración eficaz de los ingredientes activos según el intervalo de dosis diaria pretendido. Las preparaciones que contienen aproximadamente 0,25 mg de la preparación de lectina de muérdago por unidad de dosis individual son representativas de una concentración apropiada.

La preparación farmacéutica según la invención puede administrarse en un amplio intervalo de formas de dosificación. Los portadores utilizados para producir una preparación farmacéutica que contiene la preparación de lectina de muérdago pueden incluir tanto sustancias sólidas como líquidas. Las formas de dosificación sólidas pueden incluir polvos, comprimidos, píldoras, cápsulas, supositorios o gránulos dispersables. Un portador sólido puede ser una o más sustancias que funcionan como un agente diluyente, un aditivo aromatizante, disolvente, lubricante, agente de suspensión, aglutinante, conservante, sustancia disgregadora del comprimido o material de encapsulación.

En la forma en polvo, el portador es un sólido finamente pulverizado incluyendo la lactosa, la hidroxipropilmetilcelulosa y PVP, mezclado con una cantidad aproximada de preparación de lectina de muérdago finamente pulverizada.

Portadores apropiados para formas en polvo y en comprimido incluyen el carbonato de magnesio, estearato de magnesio, talco, azúcar, lactosa, pectina, dextrina, endurecedores, gelatinas, tragacanto, metilcelulosa y carboximetilcelulosa sódica. El término "preparación" significa que incluyen formas de dosificación en las que los ingredientes activos están dentro de un material de encapsulación asociados o no con un portador, incluyendo cápsulas o pastillas.

Los supositorios se producen mezclando una cera de bajo punto de fusión y distribuyendo la preparación de lectina de muérdago en ésta. La mezcla fundida y homogénea se vierte a continuación en moldes y se deja enfriar.

Las preparaciones apropiadas para la administración vaginal pueden presentarse como compresas, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o pulverizadores que incluyen, además del ingrediente activo, portadores adecuados conocidos en la técnica.

Las preparaciones en forma líquida incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones, por ejemplo soluciones acuosas o de propilenglicol, junto con agentes colorantes, aditivos aromatizantes, agentes de estabilización o agentes de dilución apropiados. También están incluidas las preparaciones en forma sólida que significa que se convierten en forma líquida brevemente antes del consumo. Estas formas pueden incluir, además los ingredientes activos, colorantes artificiales, aromatizantes, estabilizantes, tampones, edulcorantes naturales o artificiales, agentes dispersantes, espesantes, agentes disolventes y similares.

Para la administración tópica a la epidermis, la preparación de lectina de muérdago puede presentarse en forma de bálsamos, cremas, geles, lavados cutáneos o emplastes transdérmicos. Los bálsamos y cremas pueden formularse con una base acuosa o aceitosa mediante la adición de espesantes y/o geles adecuados. Pueden prepararse lavados cutáneos con una base acuosa u/o oleosa y pueden contener uno o más agentes emulsionantes, estabilizantes, agentes dispersantes, espesantes o fragancias.

Las preparaciones adecuadas para la administración tópica en la boca incluyen pastillas que comprenden ingredientes activos en una base aromatizada e inerte, tal como sacarosa y goma arábiga, así como enjuagues de boca que contienen los ingredientes activos en un portador líquido.

Las soluciones o mezclas pueden administrarse directamente a la cavidad nasal utilizando medios convencionales tales como gotas o pulverizadores. La preparación puede producirse en formas individuales o multidosis. Las formas multidosis incluirían un cuentagotas, pipeta o atomizador que administra un volumen predeterminado de la preparación.

La administración al aparato respiratorio puede conseguirse mediante la utilización de una preparación de aerosol en la que los ingredientes activos están colocados en un recipiente presurizado junto con un agente de administración adecuado, tal como CFC, triclorofluorometano, diclorofluorometano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. La dosis puede controlarse mediante un sistema con válvula apropiado.

La preparación farmacéutica se proporciona preferentemente en unidades de dosis individuales que contienen una cantidad adecuada de los ingredientes activos. Las dosis individuales pueden proporcionarse en un paquete, o posiblemente en forma de kit que incluye un dispositivo de medida.

* Todas las publicaciones y artículos identificados a continuación están incorporados específicamente como referencia en la memoria anterior* Referencias

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Claims

1. Composición de materia, constituida esencialmente por lectina I de muérdago (ML-I), lectina II de muérdago (ML-II) y lectina III de muérdago (ML-III), caracterizada porque dicha composición está exenta de compuestos que provocan náuseas e ingerible por vía oral por mamíferos.

2. Composición de materia según la reivindicación 1, caracterizada porque dichos compuestos que provocan náuseas se seleccionan de entre el grupo constituido por alcaloides y viscotoxinas.

3. Composición de materia según cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, caracterizada porque dichos mamíferos son seres humanos.

4. Composición de materia según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada porque el contenido en proteínas de dicha composición es \geq 250 \mug/ml.

5. Composición de materia según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque los pesos moleculares (MW) de cada una de las subunidades ML están comprendidos entre 29 y 35 kDa.

6. Composición de materia según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada porque la absorbancia de 1 ml de dicha composición es superior a 3,0 a 280 nm.

7. Procedimiento para producir una composición de materia ingerible por vía oral constituida esencialmente por lectina I de muérdago (ML-I), lectina II de muérdago (ML-II) y lectina III de muérdago (ML-III), exenta de compuestos que provocan náuseas, caracterizada porque comprende las etapas siguientes:

i): pulverizar un material de partida constituido por piezas adecuadas de Viscum album,

ii): mezclar el material pulverizado con cinco veces la cantidad de ácido acético 0,2 M referido en p/p para formar una solución y agitar dicha solución 12 horas a temperaturas comprendidas entre 1 y 8ºC,

iii): filtrar la solución a través de un paño vasto, seguido de un filtro de papel para eliminar la turbidez,

iv): realizar la cromatografía de intercambio catiónico del extracto en bruto de (iii) en aproximadamente 5 g de intercambiador catiónico SP-Sephadex/1,0 litro de extracto de muérdago en bruto,

v): lavar la columna con tampón de acetato 0,15 M (pH 4,0) hasta absorción a 280 nm < 0,5,

vi): eluir ML-I, ML-II y ML-III conjuntamente utilizando un tampón que contiene Tris-HCl 0,1 M (pH 8,0) y NaCl 0,5 M,

vii): agrupar las fracciones con absorbancia > 1,0 a 280 nm y dializar durante la noche (aproximadamente a 4ºC) frente a 10 volúmenes de PBS (menos NaCl) utilizando una membrana que tiene una amplitud de corte de P. M. de 10.000, y

viii): formar alícuotas del extracto final en porciones adecuadas.

8. Procedimiento según la reivindicación 7, caracterizado porque las alícuotas en la etapa viii) son de 1 ml.

9. Preparación farmacéutica, caracterizada porque comprende la composición de materia según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, junto con adyuvantes, diluyentes, cargas, vehículos y agentes conservantes farmacéuticamente aceptables.

10. Preparación farmacéutica según la reivindicación 9, caracterizada porque comprende una forma de dosificación adecuada para la administración oral.

11. Preparación farmacéutica según la reivindicación 9, caracterizada porque comprende una forma de dosificación adecuada para la administración rectal.

12. Preparación farmacéutica según la reivindicación 9, caracterizada porque comprende una forma de dosificación adecuada para la administración nasal.

13. Preparación farmacéutica según la reivindicación 9, caracterizada porque comprende una forma de dosificación adecuada para la administración vaginal.

14. Preparación farmacéutica según la reivindicación 9, caracterizada porque comprende una forma de dosificación adecuada para la administración tópica.

15. Preparación farmacéutica según la reivindicación 9, caracterizada porque comprende una forma de dosificación adecuada para la administración por inhalación.

16. Utilización de una composición de materia según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para producir una preparación farmacéutica destinada al tratamiento del cáncer y de enfermedades autoinmunes, tales como la artritis, enfermedades reumáticas, asma y enfisema y a sujetos que padecen fatiga generalizada, en mamíferos.

17. Utilización según la reivindicación 16, en el que el mamífero es un ser humano.

18. Utilización de una composición de materia según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para producir una preparación farmacéutica destinada al tratamiento de un paciente que necesita la misma, caracterizada porque se administra la composición de materia según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 a un paciente en dosis adecuadas, con o sin una sustancia complementaria administrada en dosis adecuadas para aumentar el efecto de la preparación.

19. Utilización de la composición de materia según la reivindicación 10, caracterizada porque se administra la composición de materia por vía oral.

20. Utilización de la composición de materia según la reivindicación 10, caracterizada porque se administra la composición de materia por vía rectal.

21. Utilización de la composición de materia según la reivindicación 10, caracterizada porque se administra la composición de materia por vía nasal.

22. Utilización de la composición de materia según la reivindicación 10, caracterizada porque se administra la composición de materia por vía vaginal.

23. Utilización de la composición de materia según la reivindicación 10, caracterizada porque se administra la composición de materia por vía tópica.

24. Utilización de la composición de materia según la reivindicación 10, caracterizada porque se administra la composición de materia por inhalación.

25. Utilización de la composición de materia según cualquiera de las reivindicaciones 18 a 22, caracterizada porque el paciente padece cáncer.

26. Utilización de la composición de materia según cualquiera de las reivindicaciones 18 a 22, caracterizada porque el paciente padece una enfermedad autoinmune o fatiga generalizada.

27. Utilización de la composición de materia según la reivindicación 26, caracterizado porque las enfermedades autoinmunes se seleccionan de entre el grupo constituido por artritis, enfermedades reumáticas, asma y enfisema.

28. Utilización de la composición de materia según cualquiera de las reivindicaciones 18 a 25, caracterizada porque dichas dosis adecuadas se administran en días no consecutivos.

29. Utilización de la composición de materia según la reivindicación 28, caracterizada porque dichas dosis adecuadas son 1 ml tres veces a la semana.

30. Utilización de la composición de materia según la reivindicación 28, caracterizada porque dichas dosis adecuadas son 1 ml dos días a la semana y 2 ml al día entre los días en los que se administra 1 ml.

31. Utilización de la composición de materia según cualquiera de las reivindicaciones 18 a 30, caracterizada porque la sustancia para aumentar el efecto de la preparación es la arginina.

32. Utilización de la composición de materia según la reivindicación 31, caracterizada porque la dosis para la arginina está comprendida entre 0,001 y 0,01 g de arginina por kg de peso corporal cada mañana y cada tarde.

33. Kit, caracterizado porque comprende un envase hermético que contiene la composición de materia según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, arginina y dispositivos para medir las dosis.